ES2305355T3 - Peptidomimeticos fijados a una matriz con actividad antimicrobiana. - Google Patents
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Abstract
Compuestos de fórmula general: (Ver fórmula) en los que (Ver fórmula) es un grupo que presenta una de las fórmulas D Pro-L Pro y L Pro-D Pro R 8 es H; Cl; F; CF3; NO2; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; aril-alquilo inferior; -(CH2)o (CHR 61 )s OR 55 ; -(CH2)o(CHR 61 )sSR 56 ; -(CH2)o(CHR 61 )NR 33 R 34 ; -(CH2)o (CHR 61 )sSOCONR 33 R 75 ; -(CH2)o(CHR 61 )s NR 20 CONR 33 R 82 ; -(CH2)o(CHR 61 )sCOOR 57 ; -(CH2)o(CHR 61 )sCONR 58 R 59 ; -(CH2)o(CHR 61 )sPO(OR 60 )2; -(CH2)o(CHR 61 )sSO2R 62 ; o -(CH2)o(CHR 61 )sSCOR 64 ; R 20 es H; alquilo; alquenilo; o aril-alquilo inferior; R 33 es H; alquilo, alquenilo; -(CH2)m(CHR 61 )sOR 55 ; -(CH2)m(CHR 61 )sNR 34 R 63 ; -(CH2)m(CHR 61 )sOCON R 75 R 82 ; -(CH2)m(CHR 61 )sNR 20 CONR 78 R 82 ; -(CH2)O(CHR 61 )s,COR 64 ; -(CH2)O(CHR 61 )s -CONR 58 R 59 , -(CH2)O(CHR 61 )sPO(OR 60 )2; -(CH2)o(CHR 61 )sSO2R 62 ; o -(CH2)o(CHR 61 )sC6H4R 8 ; R 34 es H; alquilo inferior; arilo, o aril-alquilo inferior; R 33 y R 34 conjuntamente pueden formar: -(CH2)2 - 6-; -(CH2)2O(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; o -(CH2)2NR 57 (CH2)2-; R 37 es H; F; Br; Cl; NO2; CF3; alquilo inferior; -(CH2)p(CHR 61 )sOR 55 ; -(CH2)p(CHR 61 )sNR 33 R 34 ; -(CH2)p (CHR 61 )sOCONR 33 R 75 ; -(CH2)p(CHR 61 )sNR 20 CONR 33 R 12 ; -(CH2)o (CHR 61 )sCOOR 17 ; -(CH2)o(CHR 61 )s CONR 58 R 59 ; -(CH2)o(CHR 61 )sPO(OR 60 )2; -(CH2)o(CHR 61 )sSO2R 62 ; o -(CH2)o(CHR 61 )sC6H4R 8 ; R 50 es H; alquilo inferior; o aril-alquilo inferior; R 55 es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; aril-alquilo inferior; -(CH2)m(CHR 61 )sOR 57 ; -(CH2)m(CHR 61 )s NR 34 R 63 ; -(CH2)m(CHR 61 )sOCONR 75 R 82 ; -(CH2)m(CHR 61 )sNR 20 CONR 78 R 82 ; -(CH2)O(CHR 61 )s -COR 64 ; -(CH2)O(CHR 61 )COOR 57 ; o -(CH2)O(CHR 61 )sCONR 58 R 59 ; R 56 es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; aril-alquilo inferior; -(CH2)m(CHR 61 )sOR 57 ; -(CH2)m(CHR 61 )s NR 34 R 63 ; -(CH2)m(CHR 61 )sOCONR 75 R 82 ; -(CH2)m(CHR 61 )sNR 20 CONR 78 R 82 ; -(CH2)o(CHR 61 )s -COR 64 ; o -(CH2)o(CHR 61 )sCONR 58 R 59 ; R 57 es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo alquilo inferior; o heteroarilo alquilo inferior; R 58 es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; o heteroaril-alquilo inferior; R 59 es...
Description
Peptidomiméticos fijados a una matriz con
actividad antimicrobiana.
La presente invención da a conocer
peptidomiméticos con estructura de horquilla \beta fijados sobre
una matriz, los cuales incorporan una cadena fijada sobre matriz de
12 residuos de \alpha-aminoácido que, dependiendo
de sus posiciones en la cadena, son Gly o Pro, o de determinados
tipos, tal como se definen a continuación, siendo, como mínimo, uno
de estos residuos del tipo de las glicinas
N-sustituidas. Estos peptidomiméticos con
estructura de horquilla \beta fijados sobre una matriz presentan
una actividad antimicrobiana de amplio espectro. Además, la
presente invención da a conocer eficientes procedimientos de
síntesis mediante los cuales se pueden preparar estos compuestos,
si se desea, en formato de librería paralela. Estos peptidomiméticos
con estructura de horquilla \beta exhiben una eficacia, una
biodisponibilidad y una vida media mejoradas y, lo que es más
importante, un balance significativamente mejorado entre la
actividad antibacteriana, por un lado, y la hemólisis de glóbulos
rojos por el otro.
El creciente problema de la resistencia
microbiana a los antibióticos establecidos ha estimulado un vivo
interés en el desarrollo de agentes antimicrobianos novedosos con
nuevos modos de acción (H. Breithaupt, Nat. Biotechnol. 1999, 17,
1165-1169). Una clase emergente de antibióticos se
basa en péptidos catiónicos de procedencia natural (T. Ganz, R. I.
Lehrer, Mol. Medicine Today 1999, 5, 292-297; R. M.
Epand, H. J. Vogel, Biochim. Biophys. Acta 1999, 1462,
11-28). Estos péptidos incluyen péptidos con puentes
disulfuro con estructura de horquilla \beta y de hoja \beta
(tal como las protegrinas [V. N. M.; O. V. Shamova, H. A.
Komeva, R. I. Lehrer, FEBS Lett. 1993, 327,
231-236], las taquiplesinas [T. Nakamura, H.
Furunaka, T. Miyata, F. Tokunaga, T. Muta, S. Iwanaga, M. Niwa, T.
Takao, Y. Shimonishi, Y.J. Biol. Chem. 1988, 263,
16709-16713], y las defensinas [R. 1.
Lehrer, A. K. Lichtenstein, T. Ganz, Annu. Rev. Immunol. 1993, 11,
105-128], péptidos anfipáticos
\alpha-helicoidales (por ejemplo,
cecropinas, dermaseptinas, magaininas y
melitinas [A. Tossi, L. Sandri, A. Giangaspero, Biopolymers
2000, 55, 4-30]), así como otros péptidos lineales y
en estructura de bucle. Aunque todavía no se conocen plenamente los
mecanismos de acción de los péptidos catiónicos antimicrobianos, su
lugar principal de interacción es la membrana celular microbiana
(H. W. Huang, Biochemistry 2000, 39, 8347-8352).
Tras la exposición a estos agentes, la membrana celular sufre
permeabilización, a la que sigue una rápida muerte celular. Sin
embargo, actualmente no se pueden detallar mecanismos más complejos
de acción, por ejemplo, que incluyen la señalización mediada por
receptores (M. Wu, E. Maier, R. Benz, R. E. Hancock, Biochemistry
1999, 38, 7235-7242).
Las actividades antimicrobianas de muchos de
estos péptidos catiónicos habitualmente se correlacionan con sus
estructuras secundarias preferentes, observadas en solución acuosa o
en entornos similares a la membrana (N. Sitaram, R. Nagaraj,
Biochim. Biophys. Acta 1999, 1462, 29-54). Estudios
estructurales por espectroscopia de resonancia magnética nuclear
(RMN) han puesto de manifiesto que los péptidos catiónicos tales
como la protegrina 1 (A. Aumelas, M. Mangoni, C. Roumestand,
L. Chiche, E. Despaux, G. Grassy, B. Calas, A. Chavanieu, A. Eur.
J. Biochem. 1996, 237, 575-583; R. L. Fahrner, T.
Dieckmann, S. S. L. Harwig, R. I. Lehrer, D. Eisenberg, J. Feigon,
J. Chem. Biol. 1996, 3, 543-550) y la
taquiplesinas I (K. Kawano, T. Yoneya, T. Miyata, K.
Yoshikawa, F. Tokunaga, Y. Terada, S. J. Iwanaga, S. J. Biol. Chem.
1990, 265, 15365-15367) adoptan conformaciones de
horquilla \beta bien definidas, debido al efecto de constricción
de dos puentes disulfuro. En análogos a la protegrina con
ausencia de uno o de los dos enlaces disulfuro, la estabilidad de la
conformación en horquilla \beta disminuye, y la actividad
antimicrobiana se reduce (J. Chen, T. J. Falla, H. J. Liu, M. A.
Hurst, C. A. Fujii, D. A. Mosca, J. R. Embree D. J. Loury, P. A.
Radel, C. C. Chang, L. Gu, J. C. Fiddes, Biopolymers 2000, 55,
88-98; S. L. Harwig, A. Waring, H. J. Yang, Y. Cho,
L. Tan, R. I. Lehrer, R. J. Eur. J. Biochem. 1996, 240,
352-357; M. E. Mangoni, A. Aumelas, P. Charnet, C.
Roumestand, L. Chiche, E. Despaux, G. Grassy, B. Calas, A.
Chavanieu, FEBS Lett. 1996, 383, 93-98; H. Tamamura,
T. Murakami, S. Noriuchi, K. Sugihara, A. Otaka, W. Takada, T.
Ibuka, M. Waki, N. Tamamoto, N. Fujii, Chem. Pharm. Bull. 1995, 43,
853-858). Se han obtenido observaciones similares
en análogos de la taquiplesinas I (H. Tamamura, R. Ikoma, M.
Niwa, S. Funakoshi, T. Murakami, N. Fujii, Chem. Pharm. Bull. 1993,
41, 978-980) y en miméticos en bucle de horquilla
de la defensina de conejo NP-2 (S.
Thennarasu, R. Nagaraj, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1999, 254,
281-283). Estos resultados ponen de manifiesto que
la estructura de horquilla \beta juega un papel importante en la
actividad antimicrobiana y la estabilidad de estos péptidos de tipo
protegrina. En el caso de los péptidos catiónicos que
prefieren estructuras \alpha-helicoidales, la
estructura anfifílica de la hélice parece jugar un papel clave en
la determinación de la actividad antimicrobiana (A. Tossi, L.
Sandri, A. Giangaspero, A. Biopolymers 2000, 55,
4-30). La gramicidina S es un péptido de esqueleto
cíclico con una estructura en horquilla \beta bien definida (S.
E. Hull, R. Karlsson, P. Main, M. M. Woolfson, E. J. Dodson, Nature
1978, 275, 206-275) que exhibe una potente
actividad antimicrobiana contra bacterias
Gram-positivas y Gram-negativas (L.
H. Kondejewski, S. W. Farmer, D. S. Wishart, R. E. Hancock, R. S.
Hodges, Int. J. Peptide Prot. Res. 1996, 47,
460-466). Sin embargo, la elevada actividad
hemolítica de la gramicidina S ha impedido su utilización
generalizada como antibiótico. Recientes estudios estructurales por
RMN han indicado que la elevada actividad hemolítica se
correlaciona aparentemente con la naturaleza altamente anfipática de
esta molécula cíclica de tipo horquilla \beta, pero que es
posible disociar las actividades antimicrobianas y hemolítica
modulando la conformación y la anfifilia (L. H. Kondejewski, M.
Jelokhani-Niaraki, S. W. Farmer, B. Lix, M. Kay, B.
D. Sykes, R. E. Hancock, R. S. Hodges, J. Biol. Chem. 1999, 274,
13181-13192; C. McInnes L. H. Kondejewski, R. S.
Hodges, B. D. Sykes, J. Biol. Chem. 2000, 275,
14287-14294).
Recientemente se ha dado a conocer un nuevo
péptido cíclico antimicrobiano RTD-1 a partir de
leucocitos de primates (Y.-Q. Tang, J. Yuan, G. Ösapay, K. Ösapay,
D. Tran, C. J. Miller, A. J. Oellette, M. E. Selsted, Science 1999,
286, 498-502). Este péptido contiene tres puentes
disulfuro que constriñen el esqueleto cíclico del péptido en una
geometría de horquilla. La disociación de los tres enlaces disulfuro
provoca una pérdida significativa de la actividad antimicrobiana.
También se han dado a conocer análogos de protegrinas (J. P.
Tam, C. Wu, J.-L. Yang, Eur. J. Biochem. 2000, 267,
3289-3300) y taquiplesinas (J.-P. Tam, Y.-A.
Lu, J.-L. Yang, Biochemistry 2000, 39, 7159-7169; N.
Sitaram, R. Nagaraij, Biochem. Biophys. Res. Comm. 2000, 267,
783-790) que contienen un esqueleto cíclico del
péptido, así como múltiples puentes disulfuro a efectos de reforzar
una estructura anfifílica en horquilla. En estos casos, la
eliminación de todas las limitaciones por cistina no siempre
provoca una gran pérdida de la actividad antimicrobiana, pero modula
la selectividad membranolítica (J. P. Tam, C. Wu, J.-L. Yang, Eur.
J. Biochem. 2000, 267, 3289-3300). Un aspecto clave
en el diseño de nuevos péptidos antimicrobianos catiónicos es la
selectividad. Las protegrinas y taquiplesinas de
procedencia natural ejercen una actividad hemolítica significativa
contra los glóbulos rojos humanos. Este es también el caso para
análogos de protegrina tales como IB367 (J. Chen, T. J.
Falla, H. J. Liu, M. A. Hurst, C. A. Fujii, D. A. Mosca, J. R.
Embree, D. J. Loury, P. A. Radel, C. C. Chang, L. Gu, J. C. Fiddes,
Biopolymers 2000, 55, 88-98; C. Chang, L. Gu, J.
Chen, US-Pat: 5,916,872, 1999). Esta elevada
actividad hemolítica esencialmente imposibilita su utilización
in vivo, y representa una seria desventaja en aplicaciones
clínicas. Además, la actividad antibiótica de los análogos
frecuentemente disminuye significativamente a medida que aumenta la
concentración salina, de tal modo que en condiciones in vivo
(aproximadamente 100-150 mM NaCl) la actividad
antimicrobiana se puede ver gravemente reducida. Antes de que se
pueda considerar el uso intravenoso, la toxicidad general, la
actividad de enlace de proteínas en el suero sanguíneo y la
estabilidad de proteasa son serios problemas que deben ser tratados
adecuadamente.
La protegrina I exhibe una actividad
potente y similar contra bacterias Gram-positivas y
Gram-negativas, así como contra hongos tanto en
ensayos con baja concentración salina como en ensayos con alta
concentración salina. Esta amplia actividad antimicrobiana,
combinada con un modo rápido de acción y su capacidad de eliminar
bacterias resistentes a otras clases de antibióticos las hacen
objetivos atractivos para el desarrollo de antibióticos
clínicamente útiles. La actividad contra bacterias
Gram-positivas es típicamente mayor que contra
bacterias Gram-negativas. Sin embargo, la
protegrina 1 también exhibe una elevada actividad hemolítica
contra los glóbulos rojos humanos, y en consecuencia, una baja
selectividad con respecto a las células microbianas. Experimentos
CD orientados (W. T. Heller, A. J. Waring, R. I. Lehrer, H. W.
Huang, Biochemistry 1998, 37, 17331-17338) indican
que la protegrina 1 puede existir en dos estados diferentes
cuando interactúa con las membranas, y que estos estados se ven muy
influenciados por la composición lipídica. Algunos estudios de
análogos cíclicos de protegrina (J.-P. Tam, C. Wu, J.-L.
Yang, Eur. J. Biochem. 2000, 267, 3289-3300) han
revelado que un aumento de la rigidez conformacional, a consecuencia
de la ciclación del esqueleto y de múltiples puentes disulfuro,
puede conferir una selectividad membranolítica que disocia la
actividad antimicrobiana de la actividad hemolítica, por lo menos
en la serie de compuestos estudiados.
La protegrina 1 es un péptido lineal con
18 residuos, con un terminal carboxilo amidado y dos puentes
disulfuro. La taquiplesinas I contiene 17 residuos, presenta
también un terminal carboxilo amidado y contiene dos puentes
disulfuro. Los análogos de protegrina y taquiplesinas
de esqueleto cíclico recientemente descritos contienen típicamente
18 residuos y hasta tres puentes disulfuro (J. P. Tam, C. Wu, J.-L.
Yang, Eur. J. Biochem. 2000, 267, 3289-3300; J. P.
Tam, Y.-A. Lu, J.-L. Yang, Biochemistry 2000, 39,
7159-7169; N. Sitaram, R. Nagaraij, Biochem.
Biophys. Res. Comm. 2000, 267, 783-790).
La catelicidina, un péptido catiónico
lineal de tipo helicoidal con 37 residuos, y sus análogos, se están
investigando actualmente como agentes terapéuticos por inhalación
frente a la enfermedad pulmonar fibrosis quística (CF) (L.
Saiman, S. Tabibi, T. D. Starner, P. San Gabriel, P. L. Winokur, H.
P. Jia, P. B. McGray, Jr., B. F. Tack, Antimicrob. Agents y
Chemother. 2001, 45, 2838-2844; R. E. W. Hancock, R.
Lehrer, Trends Biotechnol. 1998, 16, 82-88). Más
del 80% de los pacientes de CF sufren una infección crónica por
Pseudomonas aeruginosa (C. A. Demko, P. J. Biard, P. B.
Davies, J. Clin. Epidemiol. 1995, 48, 1041-1049; E.
M. Kerem, R. Gold, H. Levinson, J. Pediatr. 1990, 116,
714-719).
En los compuestos descritos a continuación se
introduce una nueva estrategia a efectos de estabilizar las
conformaciones en horquilla \beta en miméticos de péptidos
catiónicos de esqueleto cíclico que exhiben actividad
antimicrobiana. Esto implica transplantar la secuencia de horquilla
catiónica e hidrofóbica a una matriz, cuya función consiste en
forzar al esqueleto peptídico en bucle a adoptar una geometría en
horquilla. La rigidez de la horquilla se puede ver afectada
adicionalmente introduciendo un puente disulfuro. Los péptidos
miméticos en horquilla enlazados con una matriz han sido descritos
en la bibliografía (D, Obrecht, M. Altorfer, J. A. Robinson, Adv.
Med Chem. 1999, 4, 1-68; J. A. Robinson, Syn. Lett.
2000, 4, 429-441), pero hasta el momento no se
habían evaluado dichas moléculas para el desarrollo de péptidos
antimicrobianos. Sin embargo, ahora se ha establecido la capacidad
de generar peptidomiméticos con estructura de horquilla \beta
utilizando métodos sintéticos combinatorios y paralelos (L. Jiang,
K. Moehle, B. Dhanapal, D. Obrecht, J. A. Robinson, Helv. Chim.
Acta. 2000, 83, 3097-3112). Además, la incorporación
de determinados elementos de estructura peptoide en miméticos de
horquilla enlazados a una matriz no ha sido evaluada anteriormente
para el desarrollo de péptidos antimicrobianos.
Estos procedimientos permiten la síntesis y el
cribado de grandes librerías de miméticos de horquilla, lo que a su
vez facilita considerablemente los estudios de actividad
estructural, y en consecuencia el descubrimiento de nuevas
moléculas con una potente actividad antimicrobiana y una baja
actividad hemolítica con respecto a los glóbulos rojos humanos.
Además, la presente estrategia permite sintetizar peptidomiméticos
con estructura de horquilla \beta con nuevas selectividades
frente a diferentes tipos de patógenos, por ejemplo frente a
diversas cepas de pseudomonas resistentes a múltiples
fármacos. Los peptidomiméticos de horquilla \beta obtenidos
mediante el enfoque descrito en el presente documento pueden ser
utilizados, entre otras aplicaciones, como antibióticos de amplio
espectro.
Los peptidomiméticos con estructura de horquilla
\beta según la presente invención son compuestos de fórmula
general:
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
\vskip1.000000\baselineskip
es un grupo que presenta una de las
fórmulas ^{D}Pro-^{L}Pro y
^{L}Pro-^{D}Pro
- R^{20} es H; alquilo; alquenilo; o aril-alquilo inferior;
- R^{33} es H; alquilo, alquenilo; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OR^{55}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}NR^{34}R^{63}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OCONR^{75} R^{82}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{78}R^{82}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s},COR^{64}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}-CONR^{58}R^{59}, -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}PO(OR^{60})_{2}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}SO_{2}R^{62}; o -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}C_{6}H_{4}R^{8};
- R^{34} es H; alquilo inferior; arilo, o aril-alquilo inferior;
- R^{33} y R^{34} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{37} es H; F; Br; Cl; NO_{2}; CF_{3}; alquilo inferior; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}OR^{55}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}NR^{33}R^{34}; -(CH_{2})_{p} (CHR^{61})_{s}OCONR^{33}R^{75}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{33}R^{82}; -(CH_{2})_{o} (CHR^{61})_{s}COOR^{57}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s} CONR^{58}R^{59}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}PO(OR^{60})_{2}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}SO_{2}R^{62}; o -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}C_{6}H_{4}R^{8};
- R^{50} es H; alquilo inferior; o aril-alquilo inferior;
- R^{55} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; aril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OR^{57}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s} NR^{34}R^{63}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OCONR^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{78}R^{82}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}-COR^{64}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})COOR^{57}; o -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}CONR^{58}R^{59};
- R^{56} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; aril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OR^{57}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s} NR^{34}R^{63}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OCONR^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{78}R^{82}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}-COR^{64}; o -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}CONR^{58}R^{59};
- R^{57} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo alquilo inferior; o heteroarilo alquilo inferior;
- R^{58} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; o heteroaril-alquilo inferior;
- R^{59} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; o heteroaril-alquilo inferior; o
- R^{58} y R^{59} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{60} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; o aril-alquilo inferior;
- R^{61} es alquilo; alquenilo; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{m}OR^{55}; -(CH_{2})_{m}NR^{33}R^{34}; -(CH_{2})_{m}OCONR^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{m}NR^{20}CONR^{78}R^{82}; -(CH_{2})_{o}COOR^{37}; -(CH_{2})_{o}NR^{58}R^{59}; o -(CH_{2})_{o}PO(COR^{60})_{2};
- R^{62} es alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo, heteroarilo; o aril-alquilo inferior;
- R^{63} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo, heteroarilo; aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; -COR^{64}; -COOR^{57}; -CONR^{58}R^{59}; -SO_{2}R^{62}; o -PO(OR^{61})_{2}; o
- R^{34} y R^{63} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{64} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}OR^{65}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}SR^{66}; o -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}NR^{34}R^{63}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s} OCONR^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{78}R^{82};
- R^{65} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo, aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; -COR^{57}; -COOR^{57}; o -CONR^{58}R^{59};
- R^{66} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; o -CONR^{58}R^{59};
- m es 2-4; o es 0-4; p es 1-4; q es 0-2; r es 1 ó 2; s es 0 ó 1;
- \quad
- Z es una cadena de 12 residuos \alpha-aminácido, contándose las posiciones de dichos residuos aminoácido en dicha cadena empezando por el aminoácido N-terminal, siendo dicho los residuos aminoácidos, dependiendo de su posición en las cadenas, Gly, o Pro, o uno de entre los tipos
- C:
- -NR^{20}CH(R^{72})CO-;
- D:
- -NR^{20}CH(R^{73})CO-;
- E:
- -NR^{20}CH(R^{74})CO-;
- F:
- -NR^{20}CH(R^{84})CO-; y
- H:
- -NR^{20}-CH(CO-)-(CH_{2})_{4-7}-CH(CO-)-NR^{20}-; -NR^{20}-CH(CO-)-(CH^{2})_{p}SS(CH_{2})_{p}-CH(CO-)-NR^{20}-; -NR^{20}-CH(CO-)-(-(CH_{2})_{p}NR^{20}CO(CH_{2})_{p}-CH(CO-)-NR^{20}-; y -NR^{20}-CH(CO-)-(-(CH_{2})_{p}NR^{20}CONR^{20}(CH_{2})_{p}-CH(CO-)-NR^{20}-;
- I:
- -NR^{86}CH_{2}CO-;
- K:
- -NR^{87}CH_{2}CO-;
- R^{72} es H, alquilo inferior; alquenilo inferior; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}OR^{85}; o -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}SR^{85};
- R^{73} es -(CH_{2})_{o}R^{77}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{o}R^{77}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{o}R^{77}; o -(CH_{2})_{r}NR^{20}(CH_{2})_{o}R^{77};
- R^{74} es -(CH_{2})_{p}NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}NR^{77}R^{80}; -(CH_{2})_{p}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p} C(=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}N=C(NR^{78}R^{80})NR^{79}R^{80};-(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}N R^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{77}R^{80}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p} C_{6}H_{4}C(=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}N=C(NR^{78}R^{80})NR^{79}R^{80}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{m}NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{m}NR^{77}R^{80}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p} C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C(=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{m}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{m}N=C(NR^{78}R^{80})NR^{79}R^{80}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}CNR^{78}N^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r} O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{m}NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{m}NR^{77}R^{80}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p} C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C(=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r} S(CH_{2})_{m}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{m}N=C(NR^{78}R^{80})NR^{79}R^{80}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}CNR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C (=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}COR^{64}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}CO R^{77}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}CONR^{78}R^{79}; o -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}CONR^{78}R^{79};
- R^{75} es alquilo inferior; alquenilo inferior; o aril-alquilo inferior; o
- R^{33} y R^{75} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-; o
- R^{75} y R^{82} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
\newpage
- R^{77} es R^{88}; o un grupo heteroarilo que presenta una de las fórmulas
- R^{78} es H; alquilo inferior; arilo; o aril-alquilo inferior;
- R^{78} y R^{82} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{79} es H; alquilo inferior; arilo; o aril-alquilo inferior,; o
- R^{78} y R^{79}, conjuntamente, pueden ser -(CH_{2})_{2-7}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{80} es H; o alquilo inferior;
- R^{81} es H; alquilo inferior; o aril-alquilo inferior;
- R^{82} es H; alquilo inferior; arilo; heteroarilo; o aril-alquilo inferior,;
- R^{33} y R^{82} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{83} es H; alquilo inferior; arilo; o -NR^{78}R^{79};
- R^{84} es -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OR^{78}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}SR^{78}; -(CH_{2})_{p}CONR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}CONR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}CONR^{78}R^{79}; o -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}CONR^{78}R^{79};
- R^{85} es alquilo inferior; o alquenilo inferior;
- R^{86} es R^{74}; -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}NR^{78}R^{79}; -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}-C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; X es -O-, -NR^{20}-, -S-, -OCOO-, u es 1-3, t es 1-6, v es 1-3;
- R^{87} es R^{84}; -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}OR^{78}, -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}-CONR^{78}R^{79}, -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}-NR^{80}CON R^{78}R^{79}, -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v} SR^{78}; X es -O-, -NR^{20}-, -S-, -OCOO-, u es 1-3, t es 1-6, v es 1-3;
- R^{88} es fenilo, p-hidroxifenilo, 2-naftilo, 1-naftilo, 4-clorofenilo, 3-clorofenilo, 2-clorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 4-fluorofenilo, 3-fluorofenilo, 2-fluorofenilo, p-benziloxifenilo, p-bifenilo o p-benzoilfenilo,
- \quad
- con la condición de que, en dicha cadena Z de 12 residuos de \alpha-aminoácido, los residuos aminoácido de las posiciones 1 a 12 sean:
- -
- P1: de tipo C o de tipo D o de tipo E o de tipo F, o el residuo es Pro;
- -
- P2: de tipo E o de tipo D;
- -
- P3: de tipo C, o el residuo es Pro;
- -
- P4: de tipo E o de tipo F o de tipo I o de tipo K;
- -
- P5: de tipo E o de tipo D o o de tipo C o de tipo I o de tipo K o de tipo F, o el residuo es Gly o Pro;
- -
- P6: de tipo E o de tipo F, o de tipo I o de tipo K o de tipo D, o el residuo es Gly;
- -
- P7: de tipo E o de tipo F o de tipo I o de tipo C;
- -
- P8: de tipo D o de tipo C, o el residuo es Pro;
- -
- P9: de tipo E o de tipo D o de tipo F;
- -
- P10: de tipo D o de tipo C o el residuo es Pro;
- -
- P11: de tipo E o de tipo D o de tipo C; y
- -
- P12: de tipo C o de tipo D o de tipo E o de tipo F, o el residuo es Pro; o
- -
- P4 y P9 y/o P2 y P11, conjuntamente, pueden formar un grupo de tipo H; y en P6 y P7 también son posibles los isómeros D;
con la condición adicional de que
dicha cadena de 12 residuos de \alpha-aminoácido
contiene, como mínimo, un residuo de tipo I o de tipo
K;
y sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos.
De acuerdo con la presente invención, estos
peptidomiméticos de horquilla \beta se pueden preparar mediante
un procedimiento que comprende
- (a)
- acoplar un soporte sólido apropiadamente funcionalizado con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra en posición 5, 6 ó 7, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (b)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (c)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra una posición más cerca del residuo aminoácido N-terminal, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (d)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (e)
- repetir las etapas (c) y (d) hasta que el residuo aminoácido N-terminal se ha introducido;
- (f)
- acoplar el producto obtenido de este modo con
- (fa)
- un derivado apropiadamente N-protegido de ^{L}Pro o ^{D}Pro
- (fb)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo; y
- (fc)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido de ^{D}Pro y, respectivamente, ^{L}Pro;
- (g)
- eliminar el grupo protector de N el producto obtenido en la etapa (fc);
- (h)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra en posición 12, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (i)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (j)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra una posición más allá de la posición 12, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (k)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (l)
- repetir las etapas (j) y (k) hasta que todos los residuos aminoácido se han introducido;
- (m)
- si se desea, desproteger selectivamente uno o varios grupos funcionales protegidos presentes en la molécula y sustituir apropiadamente el grupo o grupos reactivos liberados de este modo;
- (o)
- separar el producto obtenido de este modo del soporte sólido;
- (p)
- ciclar el producto disociado del soporte sólido;
\global\parskip0.900000\baselineskip
- (q)
- se desea, formar uno o dos enlaces entre hebras entre las cadenas laterales de residuos aminoácido apropiados en posiciones opuestas de la región de la hebra \beta;
- (r)
- eliminar todos los grupos protectores presentes en los grupos funcionales de todos los miembros de la cadena de residuos aminoácido y, si se desea, cualquier grupo o grupos que puedan estar adicionalmente presentes en la molécula;
- (s)
- si se desea, guanidinizar todos los grupos amino de cadena lateral presentes en la cadena de residuos aminoácido; y
- (t)
- si se desea, convertir el producto obtenido de este modo en una sal farmacéuticamente aceptable, o convertir una sal farmacéuticamente aceptable, o inaceptable, obtenida de este modo, en el correspondiente compuesto libre de fórmula I, o en otra sal diferente farmacéuticamente aceptable.
Alternativamente, los peptidomiméticos según la
presente invención se pueden preparar mediante un procedimiento que
comprende
- (a')
- acoplar un soporte sólido apropiadamente funcionalizado
- (a'a)
- acoplar dicho soporte sólido apropiadamente funcionalizado con un derivado apropiadamente N-protegido de ^{L}Pro o ^{D}Pro
- (a'b)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo; y
- (a'c)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido de ^{D}Pro y, respectivamente, ^{L}Pro;
- (b')
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido en la etapa (a'c);
- (c')
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra una posición más cerca del residuo aminoácido N-terminal, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (d')
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (e')
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra una posición más allá de la posición 12, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (f)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (g')
- repetir las etapas (e') y (f) hasta que todos los residuos aminoácido se han introducido;
- (h')
- si se desea, desproteger selectivamente uno o varios grupos funcionales protegidos presentes en la molécula y sustituir apropiadamente el grupo o grupos reactivos liberados de este modo;
- (i')
- separar el producto obtenido de este modo del soporte sólido;
- (j')
- ciclar el producto disociado del soporte sólido;
- (k')
- se desea, formar uno o dos enlaces entre hebras entre las cadenas laterales de residuos aminoácido apropiados en posiciones opuestas de la región de la hebra \beta;
- (l')
- eliminar todos los grupos protectores presentes en los grupos funcionales de todos los miembros de la cadena de residuos aminoácido y, si se desea, cualquier grupo o grupos que puedan estar adicionalmente presentes en la molécula;
- (m')
- si se desea, guanidinizar todos los grupos amino de cadena lateral presentes en la cadena de residuos aminoácido; y
- (n')
- si se desea, convertir el producto obtenido de este modo en una sal farmacéuticamente aceptable, o convertir una sal farmacéuticamente aceptable, o inaceptable, obtenida de este modo, en el correspondiente compuesto libre de fórmula I, o en otra sal diferente farmacéuticamente aceptable.
La introducción de un residuo aminoácido de tipo
I o K se puede llevar a cabo alternativamente por acoplamiento con
un agente de acetilación que contiene un grupo saliente, tal como
ácido bromoacético, cloroacético o yodoacético, seguido del
desplazamiento nucleofílico con una amina de fórmula
H_{2}NR^{86} y, respectivamente, H_{2}NR^{87} que, si es
necesario, está apropiadamente protegida.
Los peptidomiméticos según la presente invención
también pueden ser enantiómeros de los compuestos de fórmula I.
Estos enantiómeros se pueden preparar mediante una modificación de
los procedimientos descritos anteriormente en los que se utilizan
enantiómeros de todos los materiales de partida quirales.
Tal como se utiliza en la presente descripción,
el término "alquilo", individualmente o en combinaciones,
designa radicales hidrocarburo saturados, de cadena lineal o
ramificada con hasta 24, preferentemente hasta 12 átomos de
carbono. De manera similar, el término "alquenilo" designa
radicales hidrocarburo de cadena lineal o ramificada con hasta 24,
preferentemente hasta 12 átomos de carbono, que contienen, como
mínimo, uno o, dependiendo de la longitud de la cadena, hasta
cuatro enlaces dobles olefínicos. El término "inferior" designa
radicales y compuestos con hasta 6 átomos de carbono. Así, por
ejemplo, el término "alquilo inferior" designa radicales
hidrocarburo saturados de cadena lineal o ramificada con hasta 6
átomos de carbono, tales como metilo, etilo,
n-propilo, isopropilo, n-butilo,
sec-butilo, isobutilo, ter-butilo y
similares.
El término "arilo" designa radicales
hidrocarburo aromáticos carbocíclicos que contienen uno o dos
anillos de seis miembros, tales como fenilo o naftilo, que pueden
estar sustituidos por hasta tres sustituyentes tales como Br, Cl,
F, CF_{3}, NO_{2}, OH, NH_{2}, alquilo inferior o alquenilo
inferior. El término "heteroarilo" designa radicales
heterocíclicos aromáticos que contienen uno o dos anillos de cinco
y/o seis miembros, conteniendo por lo menos uno de ellos hasta tres
heteroátomos seleccionados entre el grupo que consiste en O, S y N,
y estando opcionalmente sustituido o sustituidos dicho anillo o
anillos; ejemplos representativos de dichos radicales heteroarilo
opcionalmente sustituidos se han indicado anteriormente en relación
con la definición de R^{77}.
Las matrices constituyen bloques constructivos
que presentan un terminal N y un terminal C orientados en el
espacio de tal modo que la distancia entre los dos grupos puede
estar dentro del intervalo 4,0-5,5 A. Una cadena
peptídica Z esta enlazada al terminal C y al terminal N de la matriz
a través de sus correspondientes terminales N y C, de tal modo que
la matriz y la cadena forman una estructura cíclica tal como la
representada en la fórmula I. En un caso como el representado, en
el que la distancia entre los terminales N y C de la matriz está
comprendida dentro del intervalo 4,0-5,5 A, la
matriz induce la red de enlaces H necesaria para la formación de
una conformación en horquilla \beta en la cadena peptídica Z. De
este modo, matriz y cadena peptídica forman un mimético de
horquilla \beta.
La conformación en horquilla \beta es
altamente relevante para la actividad antibiótica de los miméticos
de horquilla \beta según la presente invención. Las propiedades
estabilizadoras de la conformación en horquilla \beta de las
matrices (a) a (p) juegan un papel clave no sólo para la actividad
antibiótica, sino también para el proceso de síntesis definido
anteriormente, ya que la incorporación de las matrices cerca de la
mitad de los precursores peptídicos lineales protegidos o al
principio de los mismos aumenta los rendimientos de ciclación.
La cadena peptídica Z de los miméticos de
horquilla \beta descritos en el presente documento se definen
generalmente en términos de residuos aminoácido pertenecientes a uno
de los siguientes grupos:
- Grupo C:
- -NR^{20}CH(R^{72})CO-; "hidrofóbico: tamaño pequeño a mediano"
- Grupo D:
- -NR^{20}CH(R^{73})CO-; "hidrofóbico: grande, aromático o heteroaromático"
- Grupo E:
- -NR^{20}CH(R^{74})CO-; "polar-catiónico" y "derivado de urea"
- Grupo F:
- -NR^{20}CH(R^{84})CO-; "polar no cargado"
- Grupo H:
- -NR^{20}-CH(CO-)-(CH_{2})_{4-7}-CH(CO-)-NR^{20}-; -NR^{20}-CH(CO-)-(CH^{2})_{p}SS(CH_{2})_{p}-CH(CO-)-NR^{20}-; -N R^{20}-CH(CO-)-(-(CH_{2})_{p}NR^{20}CO(CH_{2})_{p}CH(CO-)-NR^{20}-; y -NR^{20}-CH(CO-)-(-(CH_{2})_{p}NR^{20}CONR^{20}(CH_{2})_{p}CH(CO-)-NR^{20}-; "enlace entre hebras"
- Grupo I:
- -NR^{86}CH_{2}CO-; "polar-catiónico"
- Grupo K:
- -NR^{87}CH_{2}CO-; "polar no cargado"
Además, Pro también puede ser un residuo
aminoácido de la cadena Z, con la excepción de las posiciones en
las que son posibles los enlaces entre hebras (H).
El grupo C comprende residuos aminoácido con
grupos de cadena lateral hidrofóbicos de tamaño pequeño a mediano
según la definición general del sustituyente R^{72}. Residuo
hidrofóbico se refiere a una cadena lateral de aminoácidos que no
está cargada a pH fisiológico y es repelida por una solución acuosa.
Además, habitualmente estas cadenas laterales no contienen grupos
donadores de enlace de hidrógeno, tales como (aunque sin limitarse
a los mismos) amidas primarias y secundarias, aminas primarias y
secundarias y las correspondientes sales protonadas de las mismas,
tioles, alcoholes, fosfonatos, fosfatos, ureas o tioureas. Sin
embargo, pueden contener grupos aceptores de enlace de hidrógeno,
tales como éteres, tioéteres, ésteres, amidas terciarias, fosfonatos
y fosfatos de alquilo o arilo, o aminas terciarias. Los aminoácidos
de tamaño pequeño a mediano genéticamente codificados incluyen
alanina, isoleucina, leucina, metionina y valina.
El grupo D comprende residuos aminoácido con
grupos de cadena lateral aromáticos y heteroaromáticos según la
definición general para el sustituyente R^{73}. Residuo aminoácido
aromático se refiere a un aminoácido hidrofóbico que presenta una
cadena lateral que contiene, como mínimo, un anillo que presenta un
sistema conjugado electrón \pi (grupo aromático). Además, puede
contener grupos donadores de enlace de hidrógeno tales como (aunque
sin limitarse a los mismos) amidas primarias y secundarias, aminas
primarias y secundarias y las correspondientes sales protonadas de
las mismas, tioles, alcoholes, fosfonatos, fosfatos, ureas o
tioureas, y grupos aceptores de enlace de hidrógeno, tales como
(aunque sin limitarse a los mismos) éteres, tioéteres, ésteres,
amidas terciarias, fosfonatos y fosfatos de alquilo o arilo, o
aminas terciarias. Los aminoácidos aromáticos genéticamente
codificados incluyen fenilalanina y tirosina.
Residuo aminoácido heteroaromático se refiere a
un aminoácido hidrofóbico que presenta una cadena lateral que
contiene, como mínimo, un anillo que presenta un sistema conjugado
\pi que incorpora, como mínimo, un heteroátomo tal como (aunque
sin limitarse a los mismos) O, S y N, según la definición general
para el sustituyente R^{77}. Además, estos residuos pueden
contener grupos donadores de enlace de hidrógeno, tales como (aunque
sin limitarse a los mismos) amidas primarias y secundarias, aminas
primarias y secundarias y las correspondientes sales protonadas de
las mismas, tioles, alcoholes, fosfonatos, fosfatos, ureas o
tioureas, y grupos aceptores de enlace de hidrógeno tales como
(aunque sin limitarse a los mismos) éteres, tioéteres, ésteres,
amidas terciarias, fosfonatos y fosfatos de alquilo o arilo, o
aminas terciarias. Los aminoácidos heteroaromáticos genéticamente
codificados incluyen triptófano e
histidina.
histidina.
El grupo E comprende aminoácidos que contienen
cadenas laterales con residuos polar-catiónicos,
derivados de acilamino y urea, según la definición general para el
sustituyente R^{74}. Polar-catiónico se refiere a
una cadena lateral básica que está protonada a pH fisiológico. Los
aminoácidos polar-catiónicos genéticamente
codificados incluyen arginina, lisina e histidina. La citrulina es
un ejemplo de residuo aminoácido derivado de la urea.
El grupo F comprende aminoácidos que contienen
cadenas laterales con residuos polares no cargados según la
definición general para sustituyente R^{84}. Residuo polar no
cargado se refiere a una cadena lateral hidrofílica que no está
cargada a pH fisiológico, pero que no es repelida por soluciones
acuosas. Estas cadenas laterales contienen típicamente grupos
donadores de enlace de hidrógeno, tales como (aunque sin limitarse a
los mismos) amidas primarias y secundarias, aminas primarias y
secundarias y las correspondientes sales protonadas de las mismas,
tioles, alcoholes, fosfonatos, fosfatos, ureas o tioureas. Estos
grupos pueden formar redes de enlaces de hidrógeno con moléculas de
agua. Además pueden contener también grupos aceptores de enlace de
hidrógeno tales como (aunque sin limitarse a los mismos) éteres,
tioéteres, ésteres, amidas terciarias, fosfonatos y fosfatos de
alquilo o arilo, o aminas terciarias. Los aminoácidos polares no
cargados genéticamente codificados incluyen asparagina, cisteína,
glutamina, serina y treonina.
El grupo H comprende cadenas laterales
preferentemente de (L)-aminoácidos en posiciones
opuestas de la región de la hebra \beta que pueden formar un
enlace entre hebras. El enlace más ampliamente conocido es el puente
disulfuro, formado por cisteínas y homocisteínas situadas en
posiciones opuestas de la hebra \beta. Se conocen diversos
métodos para formar enlaces disulfuro, incluyendo los descritos por:
J. P. Tam y otros, Synthesis 1979, 955-957; Stewart
y otros, Solid Phase Peptide Synthesis, 2ª Ed., Pierce Chemical
Company, III., 1984; Ahmed y otros, J. Biol. Chem. 1975, 250,
8477-8482; y Pennington y otros, Peptides, pág.
164-166, Giralt y Andreu, Eds., ESCOM Leiden, The
Netherlands, 1990. Del modo más ventajoso, para el alcance de la
presente invención, los enlaces disulfuro se pueden preparar
utilizando grupos protectores acetamidometil (Acm) para la
cisteína. Un enlace entre hebras bien establecido consiste en
enlazar ornitinas y lisinas, respectivamente, con residuos de ácido
glutámico y ácido aspártico situados en posiciones opuestas de la
hebra \beta mediante la formación de un enlace amida. Los grupos
protectores preferentes para los grupos amino de cadena lateral de
ornitina y lisina son aliloxicarbonilo (Alloc) y alilésteres para el
ácido aspártico y glutámico. Finalmente, los enlaces entre hebras
también se pueden establecer enlazando los grupos amino de lisina y
ornitina situados en posiciones opuestas de la hebra \beta con
reactivos tales como N,N-carbonilimidazola, a
efectos de formar ureas cíclicas.
El grupo I comprende glicina con el grupo amino
sustituido por cadenas que contienen residuos
polar-catiónicos según la definición general para
el sustituyente R^{86}. Polar-catiónico se refiere
a una cadena lateral básica que está protonada a pH
fisiológico.
El grupo K comprende glicina con el grupo amino
sustituido por cadenas que contienen residuos polares no cargados
según la definición general para el sustituyente R^{87}. Residuo
polar no cargado se refiere a una cadena lateral hidrofílica que no
está cargada a pH fisiológico, pero que no es repelida por
soluciones acuosas. Estas cadenas laterales contienen típicamente
grupos donadores de enlace de hidrógeno, tales como (aunque sin
limitarse a los mismos) amidas primarias y secundarias, tioles,
alcoholes o ureas. Estos grupos pueden formar redes de enlaces de
hidrógeno con moléculas de agua. Además, también pueden contener
grupos aceptores de enlace de hidrógeno, tales como (aunque sin
limitarse a los mismos) éteres, tioéteres, ésteres o grupos amino
terciarios.
Tal como se ha mencionado anteriormente, las
posiciones para los enlaces entre hebras son las posiciones P4 y P9
y/o P2 y P11 tomados conjuntamente.
Se conoce que estos enlaces entre hebras
estabilizan las conformaciones en horquilla \beta y, de este modo,
constituyen un importante elemento estructural para el diseño de
los miméticos de horquilla \beta.
Los residuos aminoácido preferentes (distintos
de los de tipo I y K) en la cadena Z son los derivados de los
\alpha-aminoácidos naturales. A continuación se da
una lista de aminoácidos que son adecuados, o cuyos residuos son
adecuados, para los propósitos de la presente invención,
correspondiéndose las abreviaciones con la práctica habitual
adoptada generalmente:
Otros \alpha-aminoácidos
adecuados, o cuyos residuos son adecuados, para los propósitos de la
presente invención incluyen:
\newpage
\global\parskip1.000000\baselineskip
\newpage
Los residuos particularmente preferentes para el
grupo C son:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\global\parskip0.870000\baselineskip
Los residuos particularmente preferentes para el
grupo D son:
Los residuos particularmente preferentes para el
grupo E son:
\newpage
\global\parskip1.000000\baselineskip
Los residuos particularmente preferentes para el
grupo F son:
Los residuos particularmente preferentes para el
grupo I son:
Los residuos particularmente preferentes para el
grupo K son:
Generalmente, la cadena peptídica Z dentro de
los miméticos de horquilla \beta según la invención comprende 12
residuos aminoácido. Las posiciones P1 a P2 de cada residuo
aminoácido en la cadena Z se definen inequívocamente como sigue: P1
representa el primer aminoácido en la cadena Z que está acoplado por
su terminal N al terminal C de la matriz, y P12 representa el
último aminoácido de la cadena Z que está acoplado por su terminal C
al terminal N de la matriz. Cada una de las posiciones P1 a P12
contiene preferentemente un residuo aminoácido perteneciente a uno
de los tipos anteriores C, D, E, F o I, tal como sigue:
- -
- P1: de tipo C o de tipo D o de tipo E o de tipo F,
- -
- P2: de tipo D o de tipo E;
- -
- P3: de tipo C;
- -
- P4: de tipo E o de tipo I o de tipo F;
\global\parskip0.960000\baselineskip
- -
- P5: de tipo E o de tipo I o de tipo F;
- -
- P6: de tipo E o de tipo I o de tipo D;
- -
- P7: de tipo E o de tipo I o de tipo C;
- -
- P8: de tipo D;
- -
- P9: de tipo E;
- -
- P10: de tipo D o de tipo C,
- -
- P11: de tipo E o de tipo D; o de tipo C y
- -
- P12: de tipo C o de tipo D o de tipo E o de tipo F;
- -
- siendo también posibles en P6 y P7 los isómeros D;
con la condición de que, como
mínimo, uno de los residuos aminoácido sea del tipo
I.
Más preferentemente, los residuos aminoácido de
las posiciones 1-12 son:
- -
- P1: Leu; Thr; o Arg;
- -
- P2: Arg; o Trp;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys; hArg; (BA)G; o Gln;
- -
- P5: Lys; Gln; hArg; o (PeA)G;
- -
- P6: Arg, Trp, hArg; (EGU)G;
- -
- (EA)G; (PrA)G; (PeA)G o (BA)G;
- -
- P7: Arg; (PeA)G; o Val
- -
- P8: Trp; o Bip;
- -
- P9: Lys; Arg; o hArg;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Arg; o Tyr; y
- -
- P12: Val; o Arg
con la condición de
que
- -
- el residuo aminoácido en P4 sea (BA)G; y/o
- -
- el residuo aminoácido en P5 sea (PeA)G; y/o
- -
- el residuo aminoácido en P6 sea (EGU)G o
- (EA)G o (PrA)G o (PeA)G o (BA)G; y/o
- -
- el residuo aminoácido en P7 sea (PeA)G.
Los \beta-peptidomiméticos
particularmente preferentes según la invención incluyen los
descritos en los ejemplos 1 a 12.
El procedimiento según la invención se puede
llevar a cabo ventajosamente como síntesis en hileras paralelas a
efectos de obtener librerías de peptidomiméticos de horquilla
\beta fijados sobre matrices que presentan la fórmula general I
anterior. Esta síntesis en paralelo permite obtener hileras de
diversos compuestos (habitualmente 24 a 192, típicamente 96) de
fórmula general I con grandes rendimientos y purezas definidas,
minimizando la formación de subproductos diméricos y poliméricos.
La selección adecuada del soporte sólido funcionalizado (es decir,
un soporte sólido más la molécula de enlace), las matrices y el
lugar de ciclación juega un papel clave.
\global\parskip1.000000\baselineskip
El soporte sólido funcionalizado se deriva
convenientemente de poliestireno entrecruzado preferentemente con
1-5% de divinilbenceno; poliestireno recubierto con
espaciadores de polietilenglicol (Tentagel^{R}); y resinas de
poliacrilamida (véase también Obrecht, D.; Villalgordo, J.-M,
"Solid-Supported Combinatorial and Parallel
Synthesis of Small-Molecular-Weight
Compound Libraries" ("Síntesis combinatoria y paralela sobre
soporte sólido de librerías de compuestos de bajo peso
molecular"), Tetrahedron Organic
\hbox{Chemistry Series,
Vol. 17, Pergamon, Elsevier Science, 1998).}
El soporte sólido se funcionaliza mediante un
enlace, es decir, una molécula espaciadora bifuncional que contiene
en un extremo un grupo de anclaje para la fijación al soporte sólido
y en el otro extremo un grupo funcional selectivamente disociable
utilizado para las subsiguientes transformaciones químicas y
procedimientos de disociación. Para los propósitos de la presente
invención, el enlace se debe seleccionar de tal modo que finalmente
libere el grupo carboxilo bajo condiciones levemente ácidas que no
afecten a los grupos protectores presentes en todos los grupos
funcionales de las cadenas laterales de los diversos aminoácidos.
Los enlaces adecuados para los propósitos de la presente invención
forman ésteres lábiles en medio ácido con el grupo carboxilo de los
aminoácidos, habitualmente ésteres lábiles en medio ácido de
bencilo, benzhidrilo y tritilo; ejemplos de estructuras de enlace
de este tipo incluyen
2-metoxi-4-hidroximetilfenoxi
(enlace Sasrin^{R}),
4-(2,4-dimetoxifenil-hidroximetil)-fenoxi
(enlace Rink), ácido
4-(4-hidroximetil-3-metoxifenoxi)butírico
(enlace HMPB), tritilo y 2-clorotritilo.
Preferentemente, el soporte se deriva de
poliestireno entrecruzado, del modo más preferente con
1-5% de divinilbenceno y funcionalizado mediante el
enlace 2-clorotritilo.
Cuando se lleva a cabo como síntesis de hileras
paralelas, el procedimiento según la invención se puede llevar a
cabo ventajosamente tal como se describe a continuación, pero para
los expertos en la materia será inmediatamente evidente que este
procedimiento deberá ser modificado en el caso de que se desee
sintetizar un único compuesto que presente la fórmula anterior
I.
En cierto número de recipientes de reacción
(habitualmente de 24 a 192, típicamente 96) igual al número total
de compuestos que se desee sintetizar mediante el método paralelo,
se cargan de 25 a 1.000 mg, preferentemente 100 mg, del soporte
sólido apropiadamente funcionalizado, preferentemente poliestireno
entrecruzado de 1 a 3% o resina de tentagel.
El disolvente utilizado debe ser capaz de
hinchar la resina e incluye, aunque sin limitarse a los mismos,
diclorometano (DCM), dimetilformamida (DMF),
N-metilpirrolidona (NMP), dioxano, tolueno,
tetrahidrofurano (THF), etanol (EtOH), trifluoroetanol (TFE),
alcohol isopropílico y similares. Las mezclas de disolventes que
contienen, por lo menos como un componente, un disolvente polar (por
ejemplo, 20% TFE/DCM, 35% THF/NMP) son beneficiosas para asegurar
la alta reactividad y la solvatación de las cadenas peptídicas
enlazadas a la resina (Fields, G. B., Fields, C. G., J. Am. Chem.
Soc. 1991, 113, 4202-4207).
Con el desarrollo de diversos enlaces que
liberan el grupo carboxílico C-terminal bajo
condiciones levemente ácidas, sin afectar a los grupos lábiles en
medio ácido que protegen los grupos funcionales en la cadena o
cadenas laterales, se han obtenido considerables progresos en la
síntesis de fragmentos peptídicos protegidos. El enlace derivado de
2-metoxi-4-hidroxibencilalcohol
(enlace Sasrin^{R}, Mergler y otros, Tetrahedron Lett. 1988, 29
4005-4008) es disociable con ácido trifluoroacético
diluido (0,5-1% TFA en DCM), y es estable a las
condiciones de desprotección del Fmoc durante la síntesis de los
péptidos, siendo compatibles con este esquema de protección los
grupos protectores adicionales basados en Boc/tBu. Otros enlaces
adecuados para el procedimiento según la invención incluyen el
superácido lábil
4-(2,4-dimetoxifenil-hidroximetil)-fenoxi
(enlace Rink, Rink, H. Tetrahedron Lett. 1987, 28,
3787-3790), requiriendo la eliminación del péptido
un 10% de ácido acético en DCM o un 0,2% de ácido trifluoroacético
en DCM; el enlace derivado de ácido
4-(4-hidroximetil-3-metoxifenoxi)butírico
(enlace HMPB, Flörsheimer & Riniker, Peptides 1991,1990 131),
que también se disocia con un 1% de TFA/DCM a efectos de obtener un
fragmento peptídico que contiene todos los grupos protectores de
cadena lateral lábiles en medio ácido; y, además, el enlace cloruro
de 2-clorotritilo (Barlos y otros, Tetrahedron Lett.
1989, 30, 3943-3946), que permite la separación del
péptido utilizando una mezcla de ácido acético
glacial/trifluoroetanol/DCM (1:2:7) durante 30 min.
Son, por ejemplo, grupos protectores adecuados
para los aminoácidos y, respectivamente, para sus residuos:
- -
- para el grupo amino (tal como está presente, por ejemplo, también en la cadena lateral de lisina)
- Cbz
- benciloxicarbonilo
- Boc
- ter-butiloxicarbonilo
- Fmoc
- 9-fluorenilmetoxicarbonilo
- Alloc
- aliloxicarbonilo
- Teoc
- trimetilsililetoxicarbonilo
- Tcc
- tricloroetoxicarbonilo
- Nps
- o-nitrofenilsulfonilo
- Trt
- trifenilmetilo o tritilo;
- -
- para el grupo carboxilo (tal como está presente, por ejemplo, también en la cadena lateral de ácido aspártico y glutámico) por conversión en ésteres con los componentes alcohol
- tBu
- ter-butilo
- Bn
- bencilo
- Me
- metilo
- Ph
- fenilo
- Pac
- fenacilo
- \quad
- alilo
- Tse
- trimetilsililetilo
- Tce
- tricloroetilo;
- -
- para el grupo guanidino (tal como está presente, por ejemplo, en la cadena lateral de arginina)
- Pmc
- 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo
- Ts
- tosilo (es decir, p-toluensulfonilo)
- Cbz
- benciloxicarbonilo
- Pbf
- pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonilo
- -
- para el grupo hidroxi (tal como está presente, por ejemplo, en la cadena lateral de treonina y serina)
- TBu
- ter-butilo
- Bn
- bencilo
- Trt
- tritilo
- -
- y para el grupo mercapto (tal como está presente, por ejemplo, en la cadena lateral de cisteína)
- Acm
- acetamidometilo
- tBu
- ter-butilo
- Bn
- bencilo
- Trt
- tritilo
- Mtr
- 4-metoxitritilo.
Los derivados aminoácido protegidos por
9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc) se utilizan
preferentemente como los bloques constructivos para la construcción
de los miméticos de bucle de horquilla \beta fijados sobre matriz
de fórmula I. Para la desprotección, es decir, la separación por
disociación del grupo Fmoc, se puede utilizar 20% piperidina en DMF
o 2% DBU/2% piperidina en DMF.
Los derivados de glicina
N-sustituidos (tipos I y K) utilizados como bloques
constructivos para la construcción de los miméticos de bucle de
horquilla \beta fijados sobre matriz de fórmula I se derivan de
los derivados aminoácido protegidos por
9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc), o preferentemente
se construyen en dos etapas a partir de precursores de glicina que
contienen un grupo saliente, tal como ácido bromoacético,
cloroacético o yodoacético, y de bloques constructivos de amina
primaria adecuados NH_{2}-R^{86} o
NH_{2}-R^{87}, según la definición de R^{86}
o R^{87}. La primera etapa de síntesis consiste en la fijación del
agente de acetilación que contiene el grupo saliente, tal como
ácido bromoacético, al intermediario enlazado a la resina, a través
de la formación de un enlace amida. La segunda etapa de reacción (el
desplazamiento nucleofílico) se lleva a cabo utilizando los bloques
constructivos de amina primaria, estando dichos residuos, si es
necesario, adecuadamente protegidos con grupos tales como los
descritos anteriormente para las cadenas laterales de los
aminoácidos.
Para la incorporación de los derivados de
glicina N-sustituidos como bloques constructivos en
los miméticos de bucle de horquilla \beta fijados sobre matriz,
se utiliza el procedimiento general de síntesis para montar los
miméticos de horquilla, tal como se describe en el presente
documento.
La cantidad del reactivo, es decir, el derivado
aminoácido precursor de glicina que contiene un grupo saliente, es
habitualmente de 1 a 20 equivalentes en base a la carga de
miliequivalentes por gramo (meq/g) del soporte sólido
funcionalizado (típicamente de 0,1 a 2,85 meq/g para resinas de
poliestireno) pesada originalmente en el tubo de reacción. Si se
requiere, se pueden utilizar equivalentes adicionales de reactivos a
efectos de llevar la reacción a compleción en un tiempo razonable.
Los tubos de reacción, junto con el bloque portante y el colector,
se reinsertan en el bloque contenedor y el aparato. Se inicia el
flujo de gas a través del colector a efectos de proporcionar un
entorno controlado, por ejemplo, nitrógeno, argón, aire y similares.
El flujo de gas también se puede calentar o enfriar antes de
hacerlo pasar a través del colector. El calentamiento o
enfriamiento de los pocillos de reacción se alcanza calentando el
bloque de reacción o enfriando externamente con isopropanol/hielo
seco y similares a efectos de desencadenar las reacciones sintéticas
deseadas. La agitación se alcanza por vibración o agitación
magnética (dentro del tubo de reacción). Las estaciones de trabajo
preferentes (aunque sin limitarse a las mismas) son la estación
Labsource's Combi-chem, ABI 433A y el sintetizador
MultiSyn Tech's-Syro.
La formación del enlace amida requiere la
activación del grupo \alpha-carboxilo para la
etapa de acilación. Cuando la desactivación se lleva a cabo
mediante las carbodiimidas de uso habitual, tal como
diciclohexilcarbodiimida (DCC, Sheehan & Hess, J. Am. Chem.
Soc. 1955, 77, 1067-1068) o diisopropilcarbodiimida
(DIC, Sarantakis y otros, Biochem. Biophys. Res. Commun. 1976, 73,
336-342), la diciclohexilurea resultante es
insoluble y, respectivamente, la diisopropilurea es soluble en los
disolventes utilizados habitualmente. En una variación del método
carbodiimida, se incluye como aditivo a la mezcla de acoplamiento
1-hidroxibenzotriazola (HOBt, König & Geiger,
Chem. Ber 1970, 103, 788-798). La HOBt impide la
deshidratación, inhibe la racemización de los aminoácidos activados
y actúa como catalizador para mejorar las lentas reacciones de
acoplamiento. Algunos reactivos de fosfonio han sido utilizados
como reactivos de acoplamiento directo, tal como hexafluorofosfato
de
benzotriazol-1-il-oxi-tris-(dimetilamino)-fosfonio
(BOP) (Castro y otros, Tetrahedron Lett. 1975, 14,
1219-1222; Synthesis, 1976,
751-752), o hexafluorofosfato de
benzotriazol-1-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio
(Py-BOP, Coste y otros, Tetrahedron Lett. 1990, 31,
205-208), o terafluoroborato de
2-(1H-benzotriazol-1-il-)1,1,3,3-tetrametiluronio
(TBTU), o hexafluorofosfato de
2-(1H-benzotriazol-1-il-)1,1,3,3-tetrametiluronio
(HBTU, Knorr y otros, Tetrahedron Lett. 1989, 30,
1927-1930); estos reactivos de fosfonio también son
adecuados para la formación in situ de ésteres de HOBt con
los derivados aminoácido protegidos. Más recientemente, también se
han utilizado como reactivos de acoplamiento difenoxifosforilo azida
(DPPA) o tetrafluoroborato de
o-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(TATU) o hexafluorofosfato de
o-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(HATU)/7-aza-1-hidroxi
benzotriazola (HOAt, Carpino y otros, Tetrahedron Lett. 1994, 35,
2279-2281).
Debido al hecho de que son esenciales reacciones
de acoplamiento cuasi cuantitativas, es deseable tener una
evidencia experimental de la compleción de las reacciones. El ensayo
de ninhidrina (Kaiser y otros, Anal. Biochemistry 1970, 34, 595),
en el que una respuesta colorimétrica positiva a una alícuota de
péptido enlazado a resina indica cualitativamente la presencia de
la amina primaria, se puede llevar a cabo fácil y rápidamente
después de cada etapa de acoplamiento. La química del Fmoc permite
la detección espectrofotométrica del cromóforo de Fmoc cuando se
libera con la base (Meienhofer y otros, Int. J. Peptide Protein Res.
1979, 13, 35-42).
La reacción de desplazamiento nucleofílico que
substituye el grupo saliente del precursor de glicina se lleva a
cabo preferentemente en DMF. La cantidad típica de bloque
constructivo de amina primaria utilizada para la reacción de
desplazamiento nucleofílico está comprendida entre 1 y 12 eq, en
base a la carga de miliequivalentes por gramo (meq/g) del soporte
sólido funcionalizado. La prueba experimental de la compleción de la
acetilación y de la subsiguiente reacción de desplazamiento
nucleofílico del procedimiento en dos etapas para sintetizar
derivados de glicina N-sustituidos utilizados como
bloques constructivos habitualmente no se controla (R.N.
Zuckermann, J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 10646-10647
y referencias citadas).
El intermediario enlazado a resina dentro de
cada tubo de reacción se lava del exceso de reactivos retenidos, de
disolventes y de subproductos mediante exposición repetitiva a un
disolvente o disolventes puros mediante uno de los dos métodos
siguientes:
- 1)
- los pocillos de reacción se llenan con disolvente (preferentemente 5 ml), los tubos de reacción, junto con el bloque portante y el colector, se sumergen y se agitan durante 5 a 300 minutos, preferentemente 15 minutos, y se drenan por gravedad seguido de la aplicación de gas a presión a través de la entrada del colector (manteniendo cerrada la salida) a efectos de expeler el disolvente;
- 2)
- el colector se extrae del bloque portante, se suministran alícuotas de disolvente (preferentemente 5 ml) a través de la parte superior de los tubos de reacción y se drenan por gravedad a través de un filtro hasta un recipiente receptor, tal como un tubo de ensayo o un vial.
Los dos procedimientos de lavado anteriores se
repiten hasta aproximadamente 50 veces (preferentemente,
aproximadamente 10 veces), controlando la eficiencia de la
eliminación de reactivo, disolvente y subproducto mediante métodos
tales como TLC, GC o inspección de las aguas de lavado.
El procedimiento descrito anteriormente de hacer
reaccionar el compuesto enlazado a resina con reactivos dentro de
los pocillos de reacción seguido de la eliminación de los reactivos
en exceso, los subproductos y los disolventes, se repite con cada
transformación sucesiva hasta obtener el péptido lineal final
enlazado a resina completamente protegido.
Antes de separar este péptido lineal
completamente protegido del soporte sólido, es posible, si se desea,
desproteger selectivamente uno o varios grupos funcionales
protegidos presentes en la molécula y sustituir de este modo
apropiadamente el grupo o grupos reactivos liberados. A este efecto,
el grupo o grupos funcionales en cuestión se deben proteger
inicialmente mediante un grupo protector que se puede eliminar
selectivamente sin afectar al resto de grupos protectores
presentes. El Alloc (aliloxicarbonilo) es un ejemplo de un grupo
protector de este tipo para amino, el cual puede ser eliminado
selectivamente, por ejemplo, mediante Pd^{0} y fenilsilano en
CH_{2}Cl_{2}, sin afectar al resto de grupos protectores, tal
como el Fmoc, presentes en la molécula. A continuación, el grupo
reactivo liberado de este modo puede ser tratado con un agente
adecuado para introducir el sustituyente deseado. Así, por ejemplo,
un grupo amino se puede acilar mediante un agente acilante
correspondiente al sustituyente acilo que se desea introducir.
La separación del péptido lineal completamente
protegido del soporte sólido se alcanza por inmersión de los tubos
de reacción, junto con el bloque portante y el colector, en pocillos
de reacción que contienen una solución de reactivos de disociación
(preferentemente entre 3 y 5 ml). Se llevan a cabo el flujo de gas,
el control de temperatura, la agitación y el control de la reacción
tal como se ha descrito anteriormente, y tal como se desea a
efectos de llevar a cabo la reacción de separación. Los tubos de
reacción, junto con el bloque portante y el colector, se desmontan
del bloque receptor y se elevan por encima del nivel de la solución,
aunque por debajo de la boca superior de los pocillos de reacción,
y se aplica gas a presión a través de la entrada del colector
(manteniendo cerrada la salida) a efectos de expeler eficazmente la
solución de producto final hacia los pocillos receptores. A
continuación, se lava la resina restante en los tubos de reacción de
2 a 5 veces, tal como anteriormente, con 3 a 5 ml de un disolvente
apropiado a efectos de extraer (extracción por lavado) tanta
cantidad del producto separado como sea posible. Las soluciones de
producto obtenidas de este modo se combinan, procurando evitar la
mezcla cruzada. A continuación, las soluciones/extractos
individuales se manipulan del modo necesario a efectos de aislar
los compuestos finales. Las manipulaciones típicas incluyen, aunque
sin limitarse a las mismas, evaporación, concentración, extracción
líquido/líquido, acidificación, basificación, neutralización o
reacciones adicionales en solución.
Las soluciones que contienen péptidos lineales
completamente protegidos que han sido disociados del soporte sólido
y neutralizados con una base, se evaporan. A continuación, se lleva
a cabo la ciclación en solución utilizando disolventes tales como
DCM, DMF, dioxano, THF y similares. Para la ciclación se pueden
utilizar diversos reactivos de acoplamiento, mencionadas
anteriormente. La duración de la ciclación es aproximadamente de
6-48 horas, preferentemente de aproximadamente 24
horas. Se realizó un seguimiento del progreso de la reacción, por
ejemplo, por RP-HPLC (cromatografía líquida de alta
resolución en fase inversa). A continuación, el disolvente se
elimina por evaporación, el derivado peptídico cíclico completamente
protegido se disuelve en un disolvente no miscible con agua, tal
como DCM, y la solución se extrae con agua o una mezcla de
disolventes miscibles en agua, a efectos de eliminar cualquier
exceso del reactivo de acoplamiento.
Antes de eliminar los grupos protectores del
péptido cíclico completamente protegido, es posible, si se desea,
formar un enlace entre hebras entre cadenas laterales de los
residuos aminoácidos apropiados, en posiciones opuestas de la
región de la hebra \beta.
Los enlaces entre hebras y su formación se han
descrito anteriormente en relación con las explicaciones referentes
a los grupos de tipo H, y pueden ser, por ejemplo, puentes disulfuro
formados por cisteínas y homocisteínas en posiciones opuestas de la
hebra \beta, o residuos de ácido glutámico y aspártico enlazándose
con ornitinas y, respectivamente, lisinas, localizadas en
posiciones opuestas de la hebra \beta, mediante formación de un
enlace amida. La formación de dichos enlaces entre hebras se puede
llevar a cabo mediante procedimientos bien conocidos en la
técnica.
El derivado peptídico completamente protegido de
tipo I se trata con 95% TFA, 2,5% H_{2}O, 2,5% TIS u otra
combinación de limpiadores para llevar a cabo la disociación de los
grupos protectores. El tiempo de reacción de la disociación es
habitualmente de 30 minutos a 12 horas, preferentemente de
aproximadamente 2 horas.
Tras la desprotección es posible, si se desea,
convertir cualquier grupo o grupos amino presentes en la molécula
en grupos guanidina utilizando los reactivos de guanidinación
adecuados (K. Feichinger y otros, J. Org. Chem. 1998, 63,
3804-2805). Los reactivos de guanidinación adecuados
incluyen, sin limitarse a los mismos,
N,N-di-Boc-trifluorometansulfonilguanidina.
Esta guanidinación convierte, por ejemplo, todos los residuos
(EA)G en residuos (EGU)G y, simultáneamente todos los
residuos Lys en residuos hArg.
Finalmente, la mayor parte del disolvente (tal
como TFA) que habitualmente todavía está presente se evapora y el
producto se precipita con éter/hexano (1:1) u otros disolventes
adecuados para ello. Tras la eliminación cuidadosa del disolvente,
el derivado peptídico cíclico obtenido como producto final se puede
aislar. En función de su pureza, este derivado peptídico puede ser
utilizado directamente en ensayos biológicos, o se debe purificar
adicionalmente, por ejemplo, mediante HPLC preparativa.
Tal como se ha mencionado anteriormente, a
continuación es posible, si se desea, convertir un compuesto de
fórmula I obtenido de este modo en una sal farmacéuticamente
aceptable, o convertir una sal farmacéuticamente aceptable, o
inaceptable, obtenida de este modo en el correspondiente compuesto
libre de fórmula I, o en una sal diferente farmacéuticamente
aceptable. Cualquiera de estas operaciones se pueden llevar a cabo
mediante métodos bien conocidos en la técnica.
Los materiales de partida de fórmulas
H_{2}NR^{86} y H_{2}NR^{87} son conocidos o pueden
prepararse mediante métodos bien conocidos en la técnica.
Los peptidomiméticos de horquilla \beta según
la invención se pueden utilizar en un amplio abanico de aplicaciones
a efectos de inhibir el crecimiento de microorganismos o de
eliminarlos.
Por ejemplo, se pueden utilizar como
desinfectantes o como conservantes para materiales tales como
alimentos, cosméticos, medicamentos y otros materiales que
contienen nutrientes. Los peptidomiméticos de horquilla \beta
según la invención también se pueden utilizar para tratar o prevenir
enfermedades relacionadas con infecciones microbianas en plantas y
animales.
Para su uso como desinfectantes o conservantes,
los peptidomiméticos de horquilla \beta se pueden añadir al
material deseado individualmente, como mezclas de diversos
peptidomiméticos de horquilla \beta, o en combinación con otros
agentes antimicrobianos. Los peptidomiméticos de horquilla \beta
pueden ser administrados como tales o se pueden aplicar en forma de
formulación apropiada junto con portadores, diluyentes o excipientes
bien conocidos en la técnica.
Cuando se utilizan para tratar o prevenir
infecciones o enfermedades relacionadas con dichas infecciones,
particularmente infecciones relacionadas con enfermedades
respiratorias tales como la fibrosis quística, los peptidomiméticos
de horquilla \beta pueden ser administrados individualmente, como
mezclas de diversos peptidomiméticos de horquilla \beta, en
combinación con otros agentes antimicrobianos o antibióticos, o en
combinación con agentes antivirales (por ejemplo,
anti-HIV) o anticancerígenos, o en combinación con
otros agentes farmacéuticamente activos. Los peptidomiméticos de
horquilla \beta se pueden administrar como tales o como
composiciones farmacéuticas.
Se pueden preparar composiciones farmacéuticas
que comprenden los peptidomiméticos de horquilla \beta según la
invención mediante procedimientos convencionales de mezclado,
disolución, granulación, preparación de comprimidos recubiertos,
levigado, emulsificación, encapsulación, atrapamiento o
liofilización. Las composiciones farmacéuticas se pueden formular
del modo convencional utilizando uno o más portadores, diluyentes,
excipientes fisiológicamente aceptables o sustancias auxiliares que
facilitan el procesamiento de los peptidomiméticos de horquilla
\beta activos hasta obtener preparaciones que pueden ser usadas
farmacéuticamente. La formulación adecuada depende del método de
administración escogido.
Para su administración tópica, los
peptidomiméticos de horquilla \beta según la invención se pueden
formular como soluciones, geles, pomadas, cremas, suspensiones,
etc., tal como se conocen en la técnica.
Las formulaciones sistémicas incluyen las
diseñadas para su administración mediante inyección, por ejemplo,
inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intratecal o
intraperitoneal, así como las diseñadas para su administración
transdérmica, transmucósica, oral o pulmonar.
Para las inyecciones, los peptidomiméticos de
horquilla \beta según la invención se pueden formular en
soluciones adecuadas, preferentemente en amortiguadores
fisiológicamente compatibles tales como la solución de Hink, la
solución de Ringer o amortiguador de solución salina fisiológica. La
solución puede contener agentes de formulación tales como agentes
de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente,
los peptidomiméticos de horquilla \beta según la invención se
pueden presentar en forma de polvos para su combinación con un
vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril sin pirógenos, antes de
su utilización.
Para la administración transmucósica, se
utilizan en la formulación penetrantes apropiados para que la
barrera pueda ser permeada, tal como se conoce en la técnica.
Para la administración oral, los compuestos se
pueden formular fácilmente combinando los peptidomiméticos de
horquilla \beta activos según la invención con portadores
farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Estos
portadores permiten que los peptidomiméticos de horquilla \beta
según la invención se formulen como comprimidos, píldoras, grageas,
cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones acuosas,
suspensiones, etc., para la ingestión oral de los mismos por parte
del paciente que debe ser tratado. Para las formulaciones orales
tales como, por ejemplo, polvos, cápsulas y comprimidos, los
excipientes adecuados incluyen sustancias de relleno tales como
azúcares, tal como lactosa, sucrosa, manitol y sorbitol;
preparaciones celulósicas, tales como almidón de maíz, almidón de
trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, tragacanto,
metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de
sodio, y/o polivinilpirrolidona (PVP); agentes de granulación; y
agentes aglutinantes. Si se desea, se pueden añadir agentes
desintegrantes, tales como polivinilpirrolidonas entrecruzadas,
agar, o ácido algínico o una sal del mismo, tal como alginato de
sodio. Si se desea, las formas de dosificación sólidas se pueden
recubrir con azúcar o con recubrimiento entérico mediante técnicas
estándar.
Para las preparaciones orales líquidas tales
como, por ejemplo, suspensiones, elixires y soluciones, los
portadores, excipientes o diluyentes adecuados incluyen agua,
glicoles, aceites, alcoholes, etc. Además se pueden añadir agentes
aromatizantes, conservantes, colorantes y similares.
Para la administración bucal, la composición
puede adoptar forma de comprimidos, pastillas, etc. formulados del
modo habitual.
Para la administración por inhalación, los
peptidomiméticos de horquilla \beta según la invención se
suministran convenientemente en forma de pulverizador de aerosol en
recipientes a presión o un nebulizador, utilizando un propulsor
adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano,
dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de aerosol a
presión, la unidad de dosificación se puede determinar disponiendo
una válvula a efectos de suministrar una cantidad medida. Se pueden
formular cápsulas y cartuchos, por ejemplo, de gelatina, para su
utilización en un inhalador o insuflador, que contienen una mezcla
en polvos de los peptidomiméticos de horquilla \beta según la
invención y una base de polvos adecuada, tal como lactosa o
almidón.
Los compuestos también se pueden formular como
composiciones rectales o vaginales, tales como supositorios, junto
con las bases de supositorio adecuadas, tales como mantequilla de
coco u otros glicéridos.
Además de las formulaciones descritas
anteriormente, los peptidomiméticos de horquilla \beta según la
invención también se pueden formular como preparaciones depot.
Estas formulaciones de acción prolongada pueden ser administradas
por implantación (por ejemplo, subcutáneamente o
intramuscularmente), o por inyección intramuscular. Para la
obtención de estas preparaciones de depósito, los peptidomiméticos
de horquilla \beta según la invención se pueden formular con
materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, en
forma de emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio
iónico, o como sales moderadamente solubles.
Además, se pueden utilizar otros sistemas
farmacéuticos de administración, tales como liposomas y emulsiones,
bien conocidos en la técnica. También se pueden utilizar algunos
disolventes orgánicos, tal como dimetilsulfóxido. Adicionalmente,
los peptidomiméticos de horquilla \beta según la invención se
pueden suministrar utilizando un sistema de liberación controlada,
tal como matrices semipermeables de polímeros sólidos que contienen
el agente terapéutico. Se han establecido diversos materiales de
liberación controlada y son bien conocidos por los expertos en la
materia. Las cápsulas de liberación controlada, en función de su
naturaleza química, pueden liberar los compuestos durante un
período comprendido entre algunas semanas y más de 100 días. En
función de la naturaleza química y la estabilidad biológica del
agente terapéutico, se pueden utilizar estrategias adicionales para
la estabilización proteínica.
Dado que los peptidomiméticos de horquilla
\beta según la invención pueden contener residuos cargados, se
pueden incluir en cualquiera de las formulaciones descritas
anteriormente como bases libres o como sales farmacéuticamente
aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables tienden a ser más
solubles en disolventes acuosos y otros disolventes próticos de las
bases libres correspondientes.
Los peptidomiméticos de horquilla \beta según
la invención, con las composiciones de los mismos, se utilizan
generalmente en una cantidad eficaz para alcanzar el propósito que
se pretende. Se debe entender que la cantidad utilizada dependerá
de la aplicación particular.
Por ejemplo, para su utilización como
desinfectante o conservante, una cantidad eficaz desde el punto de
vista antimicrobiano de un peptidomimético de horquilla \beta
según la invención, o de una composición del mismo, se aplica o se
añade al material que se debe desinfectar o conservar. La expresión
cantidad eficaz desde el punto de vista antimicrobiano se refiere a
una cantidad de un peptidomimético de horquilla \beta según la
invención o de una composición del mismo que inhibe el crecimiento
de una población microbiana diana o resulta letal para la misma.
Mientras que la cantidad eficaz desde el punto de vista
antimicrobiano dependerá de la aplicación particular, para su
utilización como desinfectantes o conservantes, los peptidomiméticos
de horquilla \beta según la invención, o las composiciones de los
mismos, habitualmente se añaden o se aplican al material que se
debe desinfectar o conservar en cantidades relativamente pequeñas.
Típicamente, los peptidomiméticos de horquilla \beta según la
invención comprenden menos de aproximadamente 5% en peso de una
solución desinfectante o material que se debe desinfectar,
preferentemente menos de 1% en peso, y más preferentemente menos de
0,1% en peso. El experto en la materia será capaz de determinar las
cantidades eficaces desde el punto de vista antimicrobiano de
peptidomiméticos de horquilla \beta particulares según la
invención para las aplicaciones particulares sin una
experimentación excesiva, por ejemplo, mediante los ensayos in
vitro descritos en los ejemplos.
Para su utilización para tratar o prevenir
infecciones microbianas o enfermedades relacionadas con dichas
infecciones, los peptidomiméticos de horquilla \beta según la
invención, o las composiciones de los mismos, se administran o se
aplican en una cantidad terapéuticamente eficaz. La expresión
cantidad terapéuticamente eficaz se refiere a una cantidad eficaz
en la mejora de los síntomas de infecciones microbianas o
enfermedades relacionadas con las mismas, o en su mejora,
tratamiento o prevención. La determinación de una cantidad
terapéuticamente eficaz entra dentro de las capacidades de los
expertos en la materia, particularmente a la vista de la descripción
detallada que se expone en el presente documento.
Tal como en el caso de los desinfectantes y
conservantes, para la administración tópica para tratar o prevenir
infecciones bacterianas se puede determinar una dosis
terapéuticamente eficaz utilizando, por ejemplo, los ensayos in
vitro expuestos en los ejemplos. El tratamiento se puede aplicar
mientras la infección es visible, o incluso cuando no lo es. El
experto en la materia será capaz de determinar cantidades
terapéuticamente eficaces para tratar infecciones tópicas sin
excesiva experimentación.
Para la administración sistémica, se puede
estimar inicialmente una dosis terapéuticamente eficaz a partir de
los ensayos in vitro. Por ejemplo, se puede formular una
dosis en modelos animales a efectos de alcanzar un intervalo de
concentración de peptidomiméticos de horquilla \beta circulante
que incluía el IC_{50} determinado en el cultivo celular (es
decir, la concentración de un compuesto de ensayo letal para el 50%
de un cultivo celular), el MIC determinado en el cultivo celular (es
decir, la concentración de un compuesto de ensayo letal para el
100% de un cultivo celular). Dicha información puede ser utilizada
para determinar con mayor precisión las dosis útiles en
humanos.
Las dosificaciones iniciales también se pueden
determinar a partir de los datos in vivo, por ejemplo, de
modelos animales, utilizando técnicas bien conocidas en la técnica.
El experto en la materia puede optimizar fácilmente la
administración a humanos en base a los datos en animales.
Las dosificaciones para aplicaciones como
agentes antimicrobianos se pueden ajustar individualmente a efectos
de proporcionar niveles en plasma de los peptidomiméticos de
horquilla \beta según la invención suficientes para mantener el
efecto terapéutico. Los niveles en suero terapéuticamente eficaces
se pueden alcanzar administrando múltiples dosis diariamente.
En los casos de administración local o de toma
selectiva, la concentración local eficaz de los peptidomiméticos de
horquilla \beta según la invención puede no estar relacionada con
la concentración en plasma. El experto en la materia será capaz de
optimizar las dosificaciones locales terapéuticamente eficaces sin
excesiva experimentación.
Evidentemente, la cantidad de peptidomiméticos
de horquilla \beta administrada dependerá del sujeto que se
somete a tratamiento, de su peso, de la gravedad de la infección,
del modo de administración y de la consideración del médico
responsable.
La terapia antimicrobiana se puede repetir
intermitentemente mientras se pueden detectar las infecciones, o
incluso cuando las mismas no se pueden detectar. La terapia se puede
administrar individualmente o en combinación con otros fármacos,
tales como, por ejemplo, antibióticos u otros agentes
antimicrobianos.
Habitualmente, una dosificación terapéuticamente
eficaz de los peptidomiméticos de horquilla \beta descritos en el
presente documento proporcionará beneficios terapéuticos sin
provocar ninguna toxicidad sustancial.
La hemólisis de glóbulos rojos se utiliza
frecuentemente para la evaluación de la toxicidad de compuestos
relacionados, tales como protegrina o taquiplesinas.
Los valores se indican como el % en lisis de glóbulos rojos
observado a una concentración de 100 \mug/ml. Los valores típicos
determinados para péptidos catiónicos, tales como protegrina
y taquiplesinas, son de 30-40%, con valores
promedio de MIC de 1-5 \mug/ml para un amplio
espectro de patógenos. Normalmente, los peptidomiméticos de
horquilla \beta según la invención mostrarán hemólisis en un
intervalo de 0,5-10%, frecuentemente en un intervalo
de 1-5%, para niveles de actividad comparables a
los mencionados anteriormente para protegrina y
taquiplesinas. De este modo, los compuestos preferentes
exhiben valores bajos de MIC y % bajos de hemólisis de glóbulos
rojos observados a una concentración de 100 \mug/ml.
La toxicidad de los peptidomiméticos de
horquilla \beta según la invención se puede determinar mediante
procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o
animales de experimentación, por ejemplo, determinando la LD_{50}
(dosis letal para el 50% de la población) o la LD_{100} (dosis
letal para el 100% de la población). La relación de dosis entre los
efectos tóxico y terapéutico es el índice terapéutico. Los
compuestos que exhiben elevados índices terapéuticos son
preferentes. Los datos obtenidos a partir de estos ensayos de
cultivo celular y estudios en animales se pueden utilizar para
formular un intervalo de dosificación que no sea tóxico para su
utilización en humanos. La dosificación de los peptidomiméticos de
horquilla \beta según la invención está comprendida
preferentemente en un intervalo de concentraciones circulantes que
incluyen la dosis eficaz con poca o nula toxicidad. La dosificación
puede variar dentro de dicho intervalo en función de la forma de
dosificación y de la ruta de administración utilizadas. La
formulación exacta, la ruta de administración y la dosis pueden ser
seleccionadas por el médico en particular a la lista del estado del
paciente (véase, por ejemplo, Fingl y otros, 1975, In: The
Pharmacological Basis of Therapeutics, cap.1, pág. 1).
Los siguientes ejemplos ilustran la invención
con mayor detalle, pero no pretenden limitar su alcance en ningún
sentido. En dichos ejemplos se utilizan las siguientes
abreviaciones:
- HBTU:
- hexafluorofosfato de 1-benzotriazol-1-il-tetrametiluronio (Knorr y otros, Tetrahedron Lett. 1989, 30, 1927-1930)
- HOBt:
- 1-hidroxibenzotriazola
- DIEA:
- diisopropiletilamina
- HOAT:
- 7-aza-1-hidroxibenzotriazola
- HATU:
- hexafluorofosfato de o-(7-aza-benzotriazola-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (Carpino y otros, Tetrahedron Left. 1994, 35, 2279-2281)
Se introdujeron en un matraz seco 1,0 gramos de
resina de cloruro de 2-clorotritilo (Barlos y otros,
Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3943-3946) (1,08
mmol/g, 1,08 mmol). La resina se suspendió en CH_{2}Cl_{2} (10
ml) y se dejó hinchar a temperatura ambiente bajo agitación
constante. Dicha resina se trató dos veces con 0,18 g (1,2 eq) de
ácido bromoacético y 0,738 ml (4 eq) de diisopropiletilamina (DIEA)
en CH_{2}Cl_{2} (10 ml), y se agitó la mezcla a 25ºC durante 2
h. La resina se lavó abundantemente (CH_{2}Cl_{2}/MeOH/DIEA :
17/2/1; CH_{2}Cl_{2}, DMF; CH_{2}Cl_{2}; Et_{2}O, 3 veces
cada
uno).
uno).
A continuación se llevó a cabo la sustitución
nucleofílica del bromo con una amina protegida por Boc. Las aminas
protegidas por Boc utilizadas fueron
Boc-NH-CH_{2}-CH_{2}-NH_{2},
Boc-NH-CH_{2}-CH_{2}-CH_{2}-NH_{2}
y
Boc-NH-CH_{2}-CH_{2}-CH_{2}-CH_{2}-NH_{2}.
La amina protegida por Boc, disuelta (3 eq) en DMSO:
CH_{2}Cl_{2} 1:1 v/v 5 ml, se añadió a la resina. Dicha resina
se lavó con CH_{2}Cl_{2}, DMF, CH_{2}Cl_{2} 5 ml, 3
veces.
La resina se dejó secar durante una noche.
Se prepararon las siguientes resinas
precargadas:
(EA)G-O-clorotritiloresina;
(BA)G-O-clorotritiloresina;
(PrA)G-O-clorotritiloresina.
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis se llevó a cabo utilizando un
sintetizador Syro-peptide (Multisyntech) o un ABI
433A con 24 a 96 recipientes de reacción. En cada recipiente se
introdujeron 60 mg de peso de la resina antes de cargar la resina
anterior. Se programaron y se llevaron a cabo los siguientes ciclos
de reacción:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Para introducir un bloque constructivo de
glicina N-sustituida en posiciones específicas
dentro de la cadena, se llevaron a cabo las siguientes etapas
5b.1-5b.3 en lugar de la etapa 5a:
- -
- 5b.1: 11 equiv. BrCH_{2}COOH/DMF + 13 equiv. DIC, 90 min;
- -
- 5b.2: DMF, lavado 4 x 2 min;
- -
- 5b.3: 20 equiv. bloque constructivo de amina con residuo protegido/DMF, 120 min.
Además, si se había introducido un bloque
constructivo de glicina N-sustituida en el ciclo
previo, la etapa 5a se modificó del modo siguiente: HBTU y HOBt
fueron sustituidos por 3,5 eq de HATU, y se utilizaron 7 eq
de
DIEA.
DIEA.
\vskip1.000000\baselineskip
Después de la finalización de la síntesis, la
resina se suspendió en 1 ml (0,39 mmol) de 1% TFA en
CH_{2}Cl_{2} (v/v) durante 3 minutos, se filtró, y el filtrado
se neutralizó con 1 ml (1,17 mmol, 3eq) de 20% DIEA en
CH_{2}Cl_{2} (v/v). Este procedimiento se repitió dos veces
para asegurar la compleción de la disociación. El filtrado se
evaporó a sequedad y una muestra del producto se desprotegió
completamente para ser analizada por HPLC de fase inversa (columna
C_{18}) a efectos de controlar la eficacia de la síntesis del
péptido lineal.
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvieron 100 mg del péptido lineal
completamente protegido en DMF (9 ml, conc. 10 mg/ml). A
continuación se añadieron 41,8 mg (0,110 mmol, 3 eq) de HATU, 14,9
mg (0,110 mmol, 3 eq) de HOAt y 1 ml (0,584 mmol) de 10% DIEA en
DMF (v/v) y la mezcla se agitó con vórtice a 20ºC durante 16 horas y
a continuación se concentró bajo alto vacío. El residuo se extrajo
en CH_{2}Cl_{2} y H_{2}O/CH_{3}CN (90/10; v/v). La fase
CH_{2}Cl_{2} se evaporó para obtener el péptido cíclico
completamente protegido.
\vskip1.000000\baselineskip
El péptido cíclico obtenido se disolvió en 1 ml
de la mezcla de disociación que contenía 95% de ácido
trifluoroacético (TFA), 2,5% de agua y 2,5% de triisopropilsilano
(TIS). La mezcla se dejó reposar a 20ºC durante 2,5 horas y a
continuación se concentró bajo vacío. El residuo se disolvió en una
solución de H_{2}O/ácido acético (75/25: v/v) y la mezcla se
extrajo con diisopropiléter.
La fase acuosa se secó bajo vacío y a
continuación el producto se purificó mediante HPLC preparativa de
fase inversa.
\vskip1.000000\baselineskip
Se disolvieron 8 mg del péptido cíclico
desprotegido y
N,N-di-Boc-trifluorometansulfonilguanidina
(270 mg, 15 eq) en agua y dioxano (3 ml, 1:5; v/v). Se añadió
trietilamina (190 \mul, 15 eq) y la solución se agitó a
temperatura ambiente durante 72 h. La solución se concentró bajo
vacío a efectos de eliminar el dioxano. Se añadieron agua (1 ml) y
CH_{2}Cl_{2} (1 ml). La fase de CH_{2}Cl_{2} extraída se
reconcentró. El residuo se redisolvió en una mezcla de TFA y
CH_{2}Cl_{2} (1:1,2 ml) durante 1 h a temperatura ambiente. A
continuación se trituró la solución con dietiléter, se extrajo la
capa orgánica y se secó el residuo in vacuo.
\vskip1.000000\baselineskip
Tras la liofilización, los productos se
obtuvieron como polvos blancos y se analizaron por
ESI-MS. Los datos analíticos, que comprenden los
tiempos de retención de HPLC y ESI-MS, se muestran
en la tabla 1.
Se determinaron los tiempos de retención de HPLC
analítica (RT, en minutos) utilizando una columna VYDAC 218TP104
(longitud 25 cm) con gradiente A (50% CH_{3}CN + 0,1% TFA y 50%
H_{2}O + 0,1% TFA a 100% CH_{3}CN + 0,1% TFA y 0% H_{2}O +
0,1% TFA en 25 minutos) o gradiente B utilizando los disolventes A
(H_{2}O + 0,02% TFA) y B (CH_{3}CN) 0 min: 92% A, 8% B; 8 min:
62% A, 38% B; 9-12 min: 0% A, 100% B.
La purificación se llevó a cabo utilizando HPLC
preparativa de fase inversa con gradiente C:
10% CH_{3}CN + 0,1% TFA y 90% H_{2}O + 0,1%
TFA a 60% CH_{3}CN + 0,1% TFA y 40% H_{2}O + 0,1% TFA en 20
minutos.
En la tabla 1 se muestran los ejemplos 1 y
3-6. Los péptidos se sintetizaron empezando por el
aminoácido de la posición P6, fijado a la resina. Las resinas
iniciales fueron
(EA)G-O-clorotritiloresina;
(BA)G-O-clorotritiloresina;
y
(PrA)G-O-clorotritiloresina,
que se prepararon tal como se ha descrito anteriormente. Los
péptidos lineales se sintetizaron sobre un soporte sólido de
acuerdo con el procedimiento anterior y en la siguiente secuencia:
P7-P8-P9-P10-P11-P12-^{D}Pro-Pro-P1-P2-P3-P4-P5-P6-resina,
se disoció, se cicló, se desprotegió y se purificó tal como se ha
indicado.
Los tiempos de retención de HPLC (minutos) se
determinaron utilizando el gradiente A.
En la tabla 1 también se muestra el ejemplo 2.
El péptido se sintetizó empezando con un precursor del aminoácido
de la posición P6, fijado a la resina. La resina inicial fue
(EA)G-O clorotritiloresina, que se preparó
tal como se ha descrito anteriormente. El péptido lineal se
sintetizó sobre un soporte sólido de acuerdo con el procedimiento
anterior y con la siguiente secuencia:
P7-P8-P9-P10-P11-P12-^{D}Pro-Pro-P1-P2-P3-P4-P5-precursor
de P6-resina, introduciéndose Lys en las posiciones
P9, P4 y P5. A continuación el péptido protegido se disoció, se
cicló, se desprotegió, se guanidinó y se purificó tal como se ha
indicado, transformando dicha guanidinación (EA)G en
(EGU)G y Lys en
hArg.
hArg.
Los tiempos de retención de HPLC (minutos) se
determinaron utilizando el gradiente A.
En la tabla 1 también se muestran los ejemplos
7-12.
Se introdujeron en un matraz seco 0,5 g de
resina de cloruro de 2-clorotritilo (Barlos y otros,
Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3943-3946) (0,83
mmol/g, 0,415 mmol). La resina se suspendió en CH_{2}Cl_{2} (2,5
ml) y se dejó hinchar a temperatura ambiente bajo agitación
constante durante 30 min. La resina se trató con 0,415 mmol (1 eq)
del primer residuo aminoácido adecuadamente protegido (véase a
continuación) y 284 \mul (4 eq) diisopropiletilamina (DIEA) en
CH_{2}Cl_{2} (2,5 ml), y la mezcla se agitó a 25ºC durante 4
horas. El color de la resina cambió a púrpura y la solución
permaneció amarillenta. La resina se agitó
(CH_{2}Cl_{2}/MeOH/DIEA : 17/2/1), 30 ml durante 30 min; a
continuación se lavó en el orden siguiente con CH_{2}Cl_{2}
(1x), DMF (1x), CH_{2}Cl_{2} (1x), MeOH (1x),
CH_{2}Cl_{2}(1x), MeOH (1x), CH_{2}Cl_{2} (2x),
Et_{2}O (2x) y se secó bajo vacío durante 6 horas. La carga fue
típicamente de 0,6-0,7 mmol/g.
Se preparó la siguiente resina precargada:
Fmoc-ProO-clorotritiloresina.
Los péptidos se sintetizaron empezando por el
aminoácido Pro, fijado a la resina. La resina inicial fue
Fmoc-ProO-clorotritiloresina, que
se preparó tal como se ha descrito anteriormente. Los péptidos
lineales se sintetizaron sobre un soporte sólido de acuerdo con el
procedimiento anterior y en la secuencia siguiente:
Resina-Pro-^{D}Pro-P12-P11-P10-P9-P8-P7-P6-P5-P4-P3-P2-P1,
se disociaron, se ciclaron, se desprotegieron y se purificaron tal
como se ha indicado. Los tiempos de retención de HPLC (minutos) se
determinaron utilizando el gradiente B tal como se ha descrito
anteriormente. La incorporación de (PeA)G en las posiciones
relevantes de los ejemplos 7-12 se llevó a cabo
utilizando ácido bromoacético y
Boc-NH-CH_{2}-CH_{2}-CH_{2}-CH_{2}-CH_{2}-NH_{2}.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
Los péptidos liofilizados se pesaron en una
Microbalance (Mettler MT5) y se disolvieron en agua estéril que
contenía 0,01% de ácido acético.
Las actividades antimicrobianas de los péptidos
se determinaron mediante el método de microdilución de caldo
estándar NCCLS (véase referencia 1, a continuación), examinándose en
placas estériles de 96 pocillos (placas de microtitulación de
poliestireno de Nunclon) en un volumen total de 100 \mul. Se
prepararon inóculos de los microorganismos con 0,5 Mcfarland
estándar y a continuación se diluyeron en caldo de
Mueller-Hinton (MH) para obtener aproximadamente
10^{6} unidades formadoras de colonias(CFU)/ml para las
bacterias. Se añadieron alícuotas (50 \mul) de los inóculos a 50
\mul de caldo MH que contenía el péptido en diluciones dobles en
serie. Los microorganismos utilizados fueron Escherichia coli
(ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)
(ATCC 27853), Pseudomonas putida (ATCC 27853),
Staphylococcus aureus (ATCC 29213 y ATCC 25923). Las
actividades antimicrobianas de los péptidos se expresaron como la
concentración inhibidora mínima (MIC) en \mug/ml para la que no
se observaba crecimiento visible después de 18-20
horas de incubación de las placas de microtitulación a 37ºC.
Se analizó en los péptidos la actividad
hemolítica contra glóbulos rojos humanos (hRBC). Se lavaron hRBC
frescos tres veces con solución salina amortiguada con fosfato
(PBS) mediante centrifugación durante 10 minutos a 2.000 x g. Se
incubaron péptidos a una concentración de 100 \mug/ml con 20% v/v
hRBC durante 1 hora a 37ºC. La concentración final de eritrocitos
fue de aproximadamente 0,9 x 10^{9}/ml. Se determinó un valor de
0% resp. 100% de lisis celular por incubación de los hRBC en
presencia de sólo PBS y resp. 0,1% Triton X-100 en
H_{2}O. Las muestras se centrifugaron y el sobrenadante se diluyó
20 veces en amortiguador de PBS, y se midió la densidad óptica (OD)
de la muestra a 540 nM. El valor de 100% de lisis
(OD_{540}H_{2}O) dio una OD de aproximadamente
1,6-2,0. Se calculó el porcentaje de hemólisis del
modo siguiente: (OD_{540}péptido/OD_{540}H_{2}O) x 100%.
Los resultados de los experimentos descritos
anteriormente se indican en la tabla 2, a continuación.
1. National Committee for Clinical Laboratory
Standards. 1993. Methods for dilution antimicrobial
susceptibility tests for bacteria that grow aerobically (Métodos de
ensayo de susceptibilidad antimicrobiana de dilución para bacterias
de crecimiento aeróbico), 3ª ed. Estándar aprobado
M7-A3. National Committee for Clinical laboratory
standards, Villanova, Pa, EE.UU.
2. Mossman T. J Immunol Met
1983, 65, 55-63.
3. Berridge M V, Tan AS.
Archives of Biochemistry & Biophysics 1993, 303,
474-482.
Claims (28)
1. Compuestos de fórmula general:
en los
que
- \quad
- es un grupo que presenta una de las fórmulas ^{D}Pro-^{L}Pro y ^{L}Pro-^{D}Pro
- R^{8} es H; Cl; F; CF_{3}; NO_{2}; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; aril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{o} (CHR^{61})_{s} OR^{55}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}SR^{56}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})NR^{33}R^{34}; -(CH_{2})_{o} (CHR^{61})_{s}SOCONR^{33}R^{75}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s} NR^{20}CONR^{33}R^{82}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}COOR^{57}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}CONR^{58}R^{59}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}PO(OR^{60})_{2}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}SO_{2}R^{62}; o -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}SCOR^{64};
- R^{20} es H; alquilo; alquenilo; o aril-alquilo inferior;
- R^{33} es H; alquilo, alquenilo; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OR^{55}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}NR^{34}R^{63}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OCON R^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{78}R^{82}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s},COR^{64}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}-CONR^{58}R^{59}, -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}PO(OR^{60})_{2}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}SO_{2}R^{62}; o -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}C_{6}H_{4}R^{8};
- R^{34} es H; alquilo inferior; arilo, o aril-alquilo inferior;
- R^{33} y R^{34} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{37} es H; F; Br; Cl; NO_{2}; CF_{3}; alquilo inferior; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}OR^{55}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}NR^{33}R^{34}; -(CH_{2})_{p} (CHR^{61})_{s}OCONR^{33}R^{75}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{33}R^{12}; -(CH_{2})_{o} (CHR^{61})_{s}COOR^{17}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s} CONR^{58}R^{59}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}PO(OR^{60})_{2}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}SO_{2}R^{62}; o -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}C_{6}H_{4}R^{8};
- R^{50} es H; alquilo inferior; o aril-alquilo inferior;
- R^{55} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; aril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OR^{57}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s} NR^{34}R^{63}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OCONR^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{78}R^{82}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}-COR^{64}; -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})COOR^{57}; o -(CH_{2})_{O}(CHR^{61})_{s}CONR^{58}R^{59};
- R^{56} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; aril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OR^{57}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s} NR^{34}R^{63}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OCONR^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{78}R^{82}; -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}-COR^{64}; o -(CH_{2})_{o}(CHR^{61})_{s}CONR^{58}R^{59};
- R^{57} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo alquilo inferior; o heteroarilo alquilo inferior;
- R^{58} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; o heteroaril-alquilo inferior;
- R^{59} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; o heteroaril-alquilo inferior; o
- R^{58} y R^{59} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{60} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; o aril-alquilo inferior;
- R^{61} es alquilo; alquenilo; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{m}OR^{55}; -(CH_{2})_{m}NR^{33}R^{34}; -(CH_{2})_{m}OCONR^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{m}NR^{20}CONR^{78}R^{82}; -(CH_{2})_{o}COOR^{37}; -(CH_{2})_{o}NR^{58}R^{59}; o -(CH_{2})_{o}PO(COR^{60})_{2};
- R^{62} es alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo, heteroarilo; o aril-alquilo inferior;
- R^{63} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo, heteroarilo; aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; -COR^{64}; -COOR^{57}; -CONR^{58}R^{59}; -SO_{2}R^{62}; o -PO(OR^{61})_{2}; o
- R^{34} y R^{63} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{17}(CH_{2})_{2}-;
- R^{64} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; heteroarilo; aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}OR^{65}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}SR^{66}; o -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}NR^{34}R^{63}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s} OCONR^{75}R^{82}; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}NR^{20}CONR^{78}R^{82};
- R^{65} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo, aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; -COR^{57}; -COOR^{57}; o -CONR^{58}R^{59};
- R^{66} es H; alquilo inferior; alquenilo inferior; arilo; aril-alquilo inferior; heteroaril-alquilo inferior; o -CONR^{58}R^{59};
- m es 2-4; o es 0-4; p es 1-4; q es 0-2; r es 1 o 2; s es 0 o 1;
- \quad
- Z es una cadena de 12 residuos \alpha-aminácido, contándose las posiciones de dichos residuos aminoácido en dicha cadena empezando por el aminoácido N-terminal, siendo dichos residuos aminoácidos, dependiendo de su posición en las cadenas, Gly o Pro o uno de entre los tipos
- C:
- -NR^{20}CH(R^{72})CO-;
- D:
- -NR^{20}CH(R^{73})CO-;
- E:
- -NR^{20}CH(R^{74})CO-;
- F:
- -NR^{20}CH(R^{84})CO-; y
- H:
- -NR^{20}-CH(CO-)-(CH_{2})_{4-7}-CH(CO-)-NR^{20}-; -NR^{20}-CH(CO-)-(CH^{2})_{p}SS(CH_{2})_{p}-CH(CO-)-NR^{20}-; -NR^{20}-CH(CO-)-(-(CH_{2})_{p}NR^{20}CO(CH_{2})_{p}CH(CO-)-NR^{20}-; y -NR^{20}-CH(CO-)-(-(CH_{2})_{p}NR^{20}CONR^{20}(CH_{2})_{p} CH(CO-)-NR^{20}-;
- I:
- -NR^{86}CH_{2}CO-;
- K:
- -NR^{87}CH_{2}CO-;
- R^{72} es H, alquilo inferior; alquenilo inferior; -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}OR^{85}; o -(CH_{2})_{p}(CHR^{61})_{s}SR^{85};
- R^{73} es -(CH_{2})_{o}R^{77}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{o}R^{77}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{o}R^{77}; o -(CH_{2})_{r}NR^{20}(CH_{2})_{o}R^{77};
- R^{74} es -(CH_{2})_{p}NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}NR^{77}R^{80}; -(CH_{2})_{p}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C (=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}N=C(NR^{78}R^{80})NR^{79}R^{80};-(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{78} R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{77}R^{80}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NR^{80})NR^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C (=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}N=C(NR^{78}R^{80})NR^{79}R^{80}; -(CH_{2})_{r} O(CH_{2})_{m}NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{m}NR^{77}R^{80}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C(=NO R^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C(=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{m}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O (CH_{2})_{m}N=C(NR^{78}R^{80})NR^{79}R^{80}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}CNR^{78}N^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}O(CH_{2})_{p} C_{6}H_{4}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{m}NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{m}NR^{77}R^{80};-(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C(=NNR^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{m} NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{m}N=C(NR^{78}R^{80})NR^{79}R^{80}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}CNR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r} S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}(=NOR^{50})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}C(=NN R^{78}R^{79})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{r}S(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}COR^{64}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}COR^{77}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}CONR^{78}R^{79}; o -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}CONR^{78}R^{79};
- R^{75} es alquilo inferior; alquenilo inferior; o aril-alquilo inferior; o
- R^{33} y R^{75} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-; o
- R^{75} y R^{82} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{77} es R^{88}; o un grupo heteroarilo que presenta una de las fórmulas
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- R^{78} es H; alquilo inferior; arilo; o aril-alquilo inferior;
- R^{78} y R^{82} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{79} es H; alquilo inferior; arilo; o aril-alquilo inferior,; o
- R^{78} y R^{79}, conjuntamente, pueden ser -(CH_{2})_{2-7}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{80} es H; o alquilo inferior;
- R^{81} es H; alquilo inferior; o aril-alquilo inferior;
- R^{82} es H; alquilo inferior; arilo; heteroarilo; o aril-alquilo inferior,;
- R^{33} y R^{82} conjuntamente pueden formar: -(CH_{2})_{2-6}-; -(CH_{2})_{2}O(CH_{2})_{2}-; -(CH_{2})_{2}S(CH_{2})_{2}-; o -(CH_{2})_{2}NR^{57}(CH_{2})_{2}-;
- R^{83} es H; alquilo inferior; arilo; o -NR^{78}R^{79};
- R^{84} es -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}OR^{78}; -(CH_{2})_{m}(CHR^{61})_{s}SR^{78}; -(CH_{2})_{p}CONR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}NR^{80}CONR^{78}R^{79}; -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}CONR^{78}R^{79}; o -(CH_{2})_{p}C_{6}H_{4}NR^{80}CONR^{78}R^{79};
- R^{85} es alquilo inferior; o alquenilo inferior;
- R^{86} es R^{74}; -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}NR^{78}R^{79}; -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}-C(=NR^{80})NR^{78}R^{79}; X es -O-, -NR^{20}-, -S-, -OCOO-, u es 1-3, t es 1-6, v es 1-3;
- R^{87} es R^{84}; -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}OR^{78}, -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}-CONR^{78}R^{79}, -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v}-NR^{80}CONR^{78} R^{79}, -[(CH_{2})_{u}-X]_{t}-(CH_{2})_{v} SR^{78}; X es -O-, -NR^{20}-, -S-, -OCOO-, u es 1-3, t es 1-6, v es 1-3;
- R^{88} es fenilo, p-hidroxifenilo, 2-naftilo, 1-naftilo, 4-clorofenilo, 3-clorofenilo, 2-clorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 4-fluorofenilo, 3-fluorofenilo, 2-fluorofenilo, p-benziloxifenilo, p-bifenilo o p-benzoilfenilo,
- \quad
- con la condición de que, en dicha cadena Z de 12 residuos de \alpha-aminoácido, los residuos aminoácido de las posiciones 1 a 12 sean:
- -
- P1: de tipo C o de tipo D o de tipo E o de tipo F, o el residuo es Pro;
- -
- P2: de tipo E o de tipo D;
- -
- P3: de tipo C, o el residuo es Pro;
- -
- P4: de tipo E o de tipo F o de tipo I o de tipo K;
- -
- P5: de tipo E o de tipo D o o de tipo C o de tipo I o de tipo K o de tipo F, o el residuo es Gly o Pro;
- -
- P6: de tipo E o de tipo F, o de tipo I o de tipo K o de tipo D, o el residuo es Gly;
- -
- P7: de tipo E o de tipo F o de tipo I o de tipo C;
- -
- P8: de tipo D o de tipo C, o el residuo es Pro;
- -
- P9: de tipo E o de tipo D o de tipo F;
- -
- P10: de tipo D o de tipo C o el residuo es Pro;
- -
- P11: de tipo E o de tipo D o de tipo C; y
- -
- P12: de tipo C o de tipo D o de tipo E o de tipo F, o el residuo es Pro; o
- -
- P4 y P9 y/o P2 y P11, conjuntamente, pueden formar un grupo de tipo H; y en P6 y P7 también son posibles los isómeros D;
- \quad
- con la condición adicional de que dicha cadena de 12 residuos de \alpha-aminoácido contiene, como mínimo, un residuo de tipo I o de tipo K;
y sales farmacéuticamente
aceptables de los
mismos.
2. Compuestos, según la reivindicación 1, en los
que los residuos de \alpha-aminoácido de las
posiciones 1 a 12 de la cadena Z son:
- -
- P1: de tipo C o de tipo D o de tipo E o de tipo F,
- -
- P2: de tipo D o de tipo E;
- -
- P3: de tipo C;
- -
- P4: de tipo E o de tipo I o de tipo F;
- -
- P5: de tipo E o de tipo I o de tipo F;
- -
- P6: de tipo E o de tipo I o de tipo D;
- -
- P7: de tipo E o de tipo I o de tipo C;
- -
- P8: de tipo D;
- -
- P9: de tipo E;
- -
- P10: de tipo D o de tipo C,
- -
- P11: de tipo E o de tipo D; o de tipo C y
- -
- P12: de tipo C o de tipo D o de tipo E o de tipo F;
- -
- siendo también posibles en P6 y P7 los isómeros D;
- \quad
- con la condición de que, como mínimo, uno de los residuos aminoácido sea del tipo I.
3. Compuestos, según la reivindicación 2, en los
que los residuos de \alpha-aminoácido de la
posición 1 a 12 de la cadena Z son:
- -
- P1: Leu; Thr; o Arg;
- -
- P2: Arg; o Trp;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys; hArg; (BA)G; o Gln;
- -
- P5: Lys; Gln; hArg; o (PeA)G;
- -
- P6: Arg, Trp, hArg; (EGU)G;
- -
- (EA)G; (PrA)G; (PeA)G o (BA)G;
- -
- P7: Arg; (PeA)G; o Val
- -
- P8: Trp; o Bip;
- -
- P9: Lys; Arg; o hArg;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Arg; o Tyr; y
- -
- P12: Val; o Arg
con la condición de
que
- -
- el residuo aminoácido en P4 sea (BA)G; y/o
- -
- el residuo aminoácido en P5 sea (PeA)G; y/o
- -
- el residuo aminoácido en P6 sea (EGU)G o
- (EA)G o (PrA)G o (PeA)G o (BA)G; y/o
- -
- el residuo aminoácido en P7 sea (PeA)G.
4. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Leu;
- -
- P2: Arg;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys;
- -
- P5: Lys;
- -
- P6: (EA)G;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Arg; y
- -
- P12: Val
5. Compuesto de fórmula Ia, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Leu;
- -
- P2: Arg;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: hArg;
- -
- P5: hArg;
- -
- P6: (EGU)G;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: hArg;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Arg; y
- -
- P12: Val
6. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Leu;
- -
- P2: Arg;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys;
- -
- P5: Lys;
- -
- P6: (PrA)G;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Arg; y
- -
- P12: Val
7. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Leu;
- -
- P2: Arg;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys;
- -
- P5: Lys;
- -
- P6: (BA)G;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Bip;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Arg; y
- -
- P12: Val
8. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Leu;
- -
- P2: Arg;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: (BA)G;
- -
- P5: Lys;
- -
- P6: (BA)G;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Bip;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Arg; y
- -
- P12: Val
9. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Leu;
- -
- P2: Arg;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys;
- -
- P5: Lys;
- -
- P6: (PrA)G;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Bip;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Arg; y
- -
- P12: Val
10. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Arg;
- -
- P2: Trp;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys;
- -
- P5: Lys;
- -
- P6: Arg;
- -
- P7: (PeA)G;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Tyr; y
- -
- P12: Val
11. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Arg;
- -
- P2: Trp;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Gln;
- -
- P5: (PeA)G;
- -
- P6: Arg;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Tyr; y
- -
- P12: Arg
12. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Arg;
- -
- P2: Trp;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys;
\global\parskip0.960000\baselineskip
- -
- P5: (PeA)G;
- -
- P6: Arg;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Tyr; y
- -
- P12: Val
13. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Thr;
- -
- P2: Trp;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys;
- -
- P5: (PeA)G;
- -
- P6: Arg;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Tyr; y
- -
- P12: Arg
14. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Arg;
- -
- P2: Trp;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Gln;
- -
- P5: Lys;
- -
- P6: Arg;
- -
- P7: (PeA)G;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Tyr; y
- -
- P12: Arg
\global\parskip1.000000\baselineskip
15. Compuesto de fórmula I, según la
reivindicación 1, en el que la matriz es
^{D}Pro-^{L}Pro y los residuos aminoácido en la
posición 1-12 son:
- -
- P1: Thr;
- -
- P2: Trp;
- -
- P3: Leu;
- -
- P4: Lys;
- -
- P5: (PeA)G;
- -
- P6: Arg;
- -
- P7: Arg;
- -
- P8: Trp;
- -
- P9: Lys;
- -
- P10: Tyr;
- -
- P11: Tyr; y
- -
- P12: Arg
16. Enantiómeros de los compuestos de fórmula I,
tal como se definen en la reivindicación 1.
17. Compuestos, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 16, para su utilización como sustancias
terapéuticamente activas.
18. Compuestos, según la reivindicación 17, que
presentan actividad antibacteriana.
19. Composición farmacéutica que contiene un
compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, y un
portador farmacéuticamente inerte.
20. Composiciones, según la reivindicación 19,
en una forma adecuada para su administración oral, tópica,
transdérmica, como inyección, bucal, transmucósica, pulmonar o
inhalatoria.
21. Composiciones, según la reivindicación 18 ó
19, en forma de comprimidos, grageas, cápsulas, soluciones,
líquidos, geles, parches, cremas, pomadas, jarabes, suspensiones
acuosas, suspensiones, pulverizadores, nebulizadores o
supositorios.
22. Utilización de compuestos, según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 16, para la preparación de un
medicamento para tratar o prevenir infecciones o enfermedades
relacionadas con dichas infecciones, siendo dicha enfermedad
particularmente la fibrosis quística.
23. Utilización de compuestos, según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 16, como desinfectantes o conservantes
para alimentos, cosméticos, medicamentos y otros materiales que
contienen nutrientes.
24. Procedimiento para la preparación de
compuestos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15,
comprendiendo dicho procedimiento:
- (a)
- acoplar un soporte sólido apropiadamente funcionalizado con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra en la posición 5, 6 ó 7, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (b)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (c)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra una posición más cerca del residuo aminoácido N-terminal, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (d)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (e)
- repetir las etapas (c) y (d) hasta que el residuo aminoácido N-terminal se ha introducido;
- (f)
- acoplar el producto obtenido de este modo con
- (fa)
- un derivado apropiadamente N-protegido de ^{L}Pro o ^{D}Pro
- (fb)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo; y
- (fc)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido de ^{D}Pro y, respectivamente, ^{L}Pro;
- (g)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido en la etapa (fc);
- (h)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra en posición 12, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (i)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (j)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra una posición más allá de la posición 12, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (k)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (l)
- repetir las etapas (j) y (k) hasta que todos los residuos aminoácido se han introducido;
- (m)
- si se desea, desproteger selectivamente uno o varios grupos funcionales protegidos presentes en la molécula y sustituir apropiadamente el grupo o grupos reactivos liberados de este modo;
- (o)
- separar el producto obtenido de este modo del soporte sólido;
- (p)
- ciclar el producto disociado del soporte sólido;
- (q)
- si se desea, formar uno o dos enlaces entre hebras entre las cadenas laterales de residuos aminoácido apropiados en posiciones opuestas de la región de la hebra \beta;
- (r)
- eliminar todos los grupos protectores presentes en los grupos funcionales de todos los miembros de la cadena de residuos aminoácido y, si se desea, cualquier grupo o grupos que puedan estar adicionalmente presentes en la molécula;
- (s)
- si se desea, guanidinizar todos los grupos amino de cadena lateral presentes en la cadena de residuos aminoácido; y
- (t)
- si se desea, convertir el producto obtenido de este modo en una sal farmacéuticamente aceptable, o convertir una sal farmacéuticamente aceptable, o inaceptable, obtenida de este modo, en el correspondiente compuesto libre de fórmula I, o en otra sal diferente farmacéuticamente aceptable.
25. Procedimiento para la preparación de
compuestos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15,
comprendiendo dicho procedimiento:
- (a')
- acoplar un soporte sólido apropiadamente funcionalizado
- (a'a)
- acoplar dicho soporte sólido apropiadamente funcionalizado con un derivado apropiadamente N-protegido de ^{L}Pro o ^{D}Pro
- (a'b)
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo; y
- (a'c)
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido de ^{D}Pro y, respectivamente, ^{L}Pro;
- (b')
- eliminar el grupo protector de N el producto obtenido en la etapa (a'c);
- (c')
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra una posición más cerca del residuo aminoácido N-terminal, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (d')
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (e')
- acoplar el producto obtenido de este modo con un derivado apropiadamente N-protegido del aminoácido que, en el producto final deseado, se encuentra una posición más allá de la posición 12, estando igualmente apropiadamente protegidos todos los grupos funcionales que pueden estar presentes en dicho derivado N-protegido de aminoácido;
- (f')
- eliminar el grupo protector de N del producto obtenido de este modo;
- (g')
- repetir las etapas (e') y (f) hasta que todos los residuos aminoácido se han introducido;
- (h')
- si se desea, desproteger selectivamente uno o varios grupos funcionales protegidos presentes en la molécula y sustituir apropiadamente el grupo o grupos reactivos liberados de este modo;
- (i')
- separar el producto obtenido de este modo del soporte sólido;
- (j')
- ciclar el producto disociado del soporte sólido;
- (k')
- si se desea, formar uno o dos enlaces entre hebras entre las cadenas laterales de residuos aminoácido apropiados en posiciones opuestas de la región de la hebra \beta;
- (l')
- eliminar todos los grupos protectores presentes en los grupos funcionales de todos los miembros de la cadena de residuos aminoácido y, si se desea, cualquier grupo o grupos que puedan estar adicionalmente presentes en la molécula;
- (m')
- si se desea, guanidinizar todos los grupos amino de cadena lateral presentes en la cadena de residuos aminoácido; y
- (n')
- si se desea, convertir el producto obtenido de este modo en una sal farmacéuticamente aceptable, o convertir una sal farmacéuticamente aceptable, o inaceptable, obtenida de este modo, en el correspondiente compuesto libre de fórmula I, o en otra sal diferente farmacéuticamente aceptable.
26. Procedimiento, según la reivindicación 24 ó
25, pero en el que se introduce un residuo aminoácido de tipo I o K
por acoplamiento con un agente de acetilación que contiene un grupo
saliente, seguida del desplazamiento nucleofílico con una amina de
fórmula H_{2}NR^{86} y, respectivamente, H_{2}NR^{87} que,
si es necesario, está apropiadamente protegida.
27. Procedimiento, según la reivindicación 26,
en el que dicho agente de acetilación que contiene un grupo
saliente es ácido bromoacético, cloroacético o yodoacético.
28. Modificación de los procedimientos según
cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, para la preparación de
compuestos según la reivindicación 16, en la que se utilizan
enantiómeros de todos los materiales de partida quirales.
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