ES2307063T3 - Procedimiento para la preparacion de una composicion que comprende compuestos poliinsaturados. - Google Patents

Abstract

Un procedimiento para la preparación de una composición que comprende ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga de la serie omega-3 y/o omega-6 y/o sus derivados farmacéutica y/o dietéticamente aceptables, seleccionados de ésteres alquílicos C1-C3 y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica, con un análisis cuantitativo superior a 50% en peso, en el que los compuestos poliinsaturados de partida se concentran en primer lugar hasta una pureza por cromatografía de gases, que corresponde al análisis cuantitativo que se requiere para la composición final, y luego se disuelven en disolventes apróticos y/o apolares y/o poco polares, antes de purificarse por contacto con derivados de silicio.

Description

Procedimiento para la preparación de una composición que comprende compuestos poliinsaturados.

La presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de una composición que comprende compuestos insaturados, en particular compuestos poliinsaturados, que comprende concentrar y purificar los compuestos.

Es conocido que los compuestos insaturados, en particular los poliinsaturados, son poco estables y se deterioran fácilmente, entre otros, por agentes atmosféricos, debido a su propia reactividad y la capacidad de oxidación de los dobles enlaces, con la posterior producción de subproductos de oxidación polares y la inducción de polimerización.

Entre los compuestos insaturados más inestables comprendidos en la composición obtenida por el procedimiento de la invención, pueden mencionarse los aceites naturales y no naturales, de origen tanto animal como vegetal, así como los productos de su modificación química, como aceites de pescado y semillas (triglicéridos), los ácidos grasos y sus sales obtenidas por hidrólisis, sus ésteres alquílicos obtenidos por síntesis o por transesterificación, así como cualquiera de sus derivados.

En particular, puede mencionarse la familia de los compuestos que proceden de los ácidos grasos poliinsaturados de la serie \omega-3, tales como, por ejemplo, el ácido \alpha-linolénico (ALA, C18:4 \omega-3, todo cis), el ácido eicosapentaenoico (EPA, C20:5 \omega-3, todo cis), y el ácido docosahexaenoico (DHA, C22:6 \omega-3, todo cis), y de los ácidos grasos poliinsaturados de la serie \omega-6, así como sus derivados farmacéutica y dietéticamente aceptables, típicamente sus sales y ésteres alquílicos C_{1}-C_{3}.

Entre dichos derivados, el éster etílico del EPA y/o el éster etílico del DHA, sólo o en mezcla, o incluso en presencia de otros ésteres etílicos de compuestos de la serie \omega-3 cuantitativamente secundarios, son de particular interés para su uso en el campo farmacéutico y como integradores dietéticos.

Los aceites naturales que contienen ácidos grasos en forma de glicéridos se someten usualmente a tratamientos habituales, como extracción, blanqueo, desodorización, etc. Los compuestos poliinsaturados, como por ejemplo, los ácidos mencionados anteriormente, estando mezclados con altas cantidades de componentes saturados y monoinsaturados, se aíslan usualmente de los glicéridos mediante hidrólisis o mediante transesterificación, y se concentran, por ejemplo, por complejación de los constituyentes menos insaturados con urea o por otras técnicas, se modifican químicamente hasta derivados, si se solicita, y luego se purifican por destilación: sin embargo, todas estas etapas dañan mucho y al mismo tiempo la estructura del compuesto poliinsaturado, y conducen a la formación de altas cantidades de subproductos con estructura polar, que se suman a las otras impurezas preexistentes de aceites naturales, o que proceden de los agentes contaminantes ambientales.

Entre los factores de inestabilidad, pueden mencionarse los agentes atmosféricos, esencialmente el oxígeno del aire, así como otros agentes oxidantes, catalizadores de oxidación, tales como cobre y hierro; exposición a la luz solar, agentes hidrolíticos, y similares. En realidad, también muchos agentes químicos y físicos, usados en las etapas de extracción de tales compuestos insaturados de las fuentes naturales, así como en las etapas de concentración y también en las etapas de purificación, pueden inducir algo de degradación, formando de este modo productos de oxidación y de polimerización. El efecto del calentamiento es también particularmente peligroso, de modo que también la destilación -aunque permitiendo desechar las fracciones de bajo punto de ebullición y alto punto de ebullición de la matriz oleosa- induce por sí misma una alta degradación y formación de residuos poliméricos.

Para limitar parcialmente tales problemas, al menos en las etapas finales de la producción, se lleva a cabo una destilación molecular, la cual es sin embargo desventajosa debido a los costes de la instalación y de gestión, y a su productividad limitada. En las etapas de comercialización, también se adopta el almacenamiento en recipientes herméticamente cerrados, protegidos del aire y de la luz solar, y en gas inerte. La adición de antioxidantes, como por ejemplo tocoferol, también es usual.

Los derivados polares de degradación están presentes por lo tanto en las materias primas, o se forman en las etapas de extracción, concentración, y purificación, así como durante cualquier etapa adicional de manipulación química o genérica. Entre tales derivados polares de degradación, teniendo la mayor parte de ellos una estructura compleja y no completamente elucidada, se pueden mencionar los derivados hidroxi sobre el doble enlace, los epóxidos y peróxidos, considerándose los últimos como potencialmente peligrosos para la salud, en vista de sus actividades aterógenas y mutágenas (véase por ejemplo, Carroll KK, Cancer Res. 1975; 35, 3374). Otros subproductos del procedimiento están representados por varios oligómeros y polímeros con estructuras complejas, que proceden de dichos productos de oxidación del doble enlace a través de diferentes mecanismos que implican reacciones intermoleculares. Estos productos de polimerización representan los subproductos más abundantes, y pueden alcanzar cantidades de 20-30% o más.

Las impurezas completamente ajenas, de origen ambiental, pero siempre presentes, particularmente en los aceites de pescado y en todos sus derivados de transformación, están representadas por varias toxinas, como la aflatoxina, hidrocarburos como benzopireno, pesticidas como DDT, agentes industriales como PCB y dioxinas (McEwen FL, Stephenson GR, The use and significance of pesticides in the environment, capítulo 15, New York, Wiley 1979, 260-348), iones metálicos y compuestos organometálicos, como mercurio y metilmercurio (Bolger PM, Schwetz BA, N. Engl. J. Med. 2002; 347, 1375), y muchos otros contaminantes marinos, todos claramente nocivos para la salud si se ingieren como alimento y/o como fármaco. Otros derivados polares pueden estar constituidos por ácidos que proceden de la hidrólisis de triglicéridos o ésteres, etc.

Para evitar la presencia de muchas sustancias ajenas y subproductos en aceites vegetales y animales, usados tradicionalmente con fines alimentarios, la práctica química obligó durante décadas al control de parámetros definidos, como índice de acidez, índice de peróxidos, índice de yodo, la búsqueda de metales pesados, como mercurio y plomo, y de pesticidas, índice de anisidina, etc.

Después del desarrollo reciente de los derivados de ácidos grasos poliinsaturados, más fácilmente oxidados y degradados, como productos farmacéuticos, ahora se considera apropiado llevar a cabo un análisis cromatográfico, que determina no sólo la denominada "pureza por cromatografía de gases", que es verdaderamente un análisis cuantitativo aparente (tanto por ciento del área del pico de cada componente frente al área total del cromatograma), sino también su "análisis cuantitativo verdadero" (análisis cuantitativo absoluto), determinado frente a un patrón puro: de este modo se controla el área absoluta del pico del derivado del ensayo, garantizando esta técnica, en otras palabras, que no se retienen cantidades sustanciales de impurezas en la columna cromatográfica que escapen al control instrumental.

La reciente Farmacopea Europea de 2000 (E. P. 2000), en su monografía "Omega-3 acid ethyl esters", una mezcla de ésteres etílicos de ácidos poliinsaturados \omega-3, representados típicamente por EPA y DHA, prescribe el control directo de los subproductos de oxidación y polimerización (definió "oligómeros" como un conjunto, que no son detectables por la vía cromatográfica de gases), por medio de una cromatografía de exclusión específica en fase líquida (cromatografía de permeabilidad en gel GPC, bien conocida en la técnica). Se hará referencia en lo sucesivo a tales procedimientos cromatográficos específicos, llevados a cabo como se describe en la E.P. 2000.

Volviendo a las sustancias insaturadas objeto del procedimiento de la invención, sólo pueden encontrarse y extraerse de productos naturales unas pocas de ellas ya en concentraciones altas, como el ácido oleico (monoinsaturado) del aceite de oliva; muchas otras se encuentran en concentraciones de bajas a medias, como el ácido araquidónico (poliinsaturado, \omega-6) en el aceite de borraja, y como EPA y DHA (poliinsaturados, \omega-3) en aceite de pescado, en los cuales pueden estar presentes hasta un máximo de 10-20%, como está bien documentado en la bibliografía.

La elaboración de los aceites extraídos (triglicéridos) se lleva a cabo usualmente por hidrólisis hasta ácidos, o por transesterificación hasta ésteres; los ácidos y ésteres pueden usarse como tales o experimentar modificaciones químicas conforme a métodos conocidos en la técnica, para proporcionar un amplio intervalo de derivados. Frecuentemente, más a menudo durante las primeras etapas de la elaboración, las sustancias poliinsaturadas de menor concentración se concentran parcialmente, por ejemplo mediante la formación de complejos con urea, y luego fraccionando/retirando los componentes saturados y monoinsaturados, por medio de procedimientos ya bien conocidos para el experto durante muchas décadas (véase Swern D, Techniques of Separation - Urea Mixtures, en "Fatty Acids", parte 3, Ed. KS Markley, Interscience, New York, 1963; páginas 2309-2358), o incluso por medio de destilación.

Una concentración adicional y una purificación final se llevan usualmente a cabo por destilación a vacío, que resulta complicarse por importantes efectos pirolíticos sobre las estructuras insaturadas inestables, o por destilación molecular, que limita verdaderamente, y a pesar de todo no elimina la degradación térmica y, sin embargo, implica unos costes caros de instalación y de gestión, y una limitada capacidad de producción.

El fraccionamiento con urea y la destilación molecular son las técnicas, indicadas en la monografía mencionada anteriormente, para composiciones basadas en éster etílico del EPA, éster etílico del DHA, y otros componentes secundarios de la serie \omega-3. Otras técnicas de purificación usadas ocasionalmente, implican la extracción y purificación con fluidos supercríticos, cromatografía a contracorriente de Craig, y cromatografía líquida de alta presión (HPLC).

La bibliografía de patentes más relevante describe lo que ya se ha mencionado, como que la destilación es la fase final y esencial para la concentración y/o purificación en casi todos los casos.

Por ejemplo, el documento de patente de EE.UU. 4.377.526, describe un procedimiento para la purificación de EPA y sus ésteres, que implica el tratamiento con urea, seguido de una destilación fraccionada. Se obtienen tantos por ciento de EPA superiores a 70%, mientras que el DHA está presente en 3-5%.

Los documentos de patente de EE.UU. 4.554.107 y 4.623.488, describen un método basado en la técnica de destilación molecular: se obtiene un aceite de pescado, enriquecido en EPA y DHA, con un rendimiento bastante bajo (30%), debido a las drásticas condiciones experimentales.

El documento de patente de EE.UU. 5.130.061 se refiere a un procedimiento para obtener EPA y DHA como ésteres etílicos, a partir de aceites de pescado en bruto, por medio de transesterificación con etanol y un catalizador ácido (H_{2}SO_{4}), cromatografía en gel de sílice y destilación molecular. La destilación es la etapa esencial del procedimiento, para retirar las impurezas de los ésteres etílicos de EPA y DHA (concentración de 35-40%, ejemplo 3), y para aumentar su concentración desde 40-50% hasta 80-90% (ejemplos 4-8), y la concentración del éster etílico de DHA hasta 90-96% (ejemplos 9-10).

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También, el documento de patente EP-B-0409903 reivindica un procedimiento, mediante el cual aceites de origen animal y/o vegetal experimentan una hidrólisis alcalina, y los ácidos obtenidos experimentan una o más etapas de destilación molecular. La patente indica algunos procedimientos de la técnica anterior, basados en el uso de urea para la precipitación y eliminación selectiva de ácidos menos insaturados (documentos de patente WO 87/03899, JP 57-187397), o en la extracción con fluidos supercríticos (documentos de patente JP 60-214757, JP 60-115698).

Se informa de más procedimientos de tipo cromatográfico en las siguientes patentes: JP 61-291540 usa una resina absorbente compuesta de un polímero poroso no polar (copolímero de estireno-divinilbenceno), y una fase móvil, que contiene un disolvente polar hidrófilo, preferiblemente metanol, modificada adecuadamente, para fraccionar el ácido poliinsaturado requerido o su éster.

El documento de patente JP 61-037752 usa un procedimiento cromatográfico sobre un copolímero, que contiene monómeros aromáticos monovinílicos y polivinílicos.

El documento de patente JP 58-109444 usa columnas cromatográficas, compuestas de un vehículo fabricado de gel de sílice o polímeros sintéticos (sustituidos preferiblemente con un radical de octadecilo), adecuadas para una cromatografía de reparto en fase inversa, y fases móviles polares, que incluyen agua, alcoholes y otros disolventes.

Finalmente, el documento de patente IT 1235879 reivindica un procedimiento, para obtener una composición particular de EPA, DHA y otros componentes secundarios de la serie \omega-3, ya presentes en el aceite de pescado natural, según el cual se usan en orden libre las técnicas conocidas de transesterificación, concentración -preferiblemente mediante un tratamiento con urea- y destilación molecular.

El documento de patente WO 00/71650 describe un procedimiento que pretende obtener un producto insípido e incoloro a partir de ácidos grasos insaturados, principalmente \omega-3 y \omega-6, a partir de aceite natural, sin el uso de disolventes. El material de partida puede concentrarse previamente, por ejemplo con urea, y luego se trata con derivados de aluminio.

El documento de patente de EE.UU. 5.855.944 se refiere a la estabilización de aceites marinos con respecto a la oxidación atmosférica. El material de partida se trata con sílice, y luego se somete a vapor con vacío suave, a una temperatura entre 140ºC y aproximadamente 210ºC. Finalmente, el aceite se trata con una combinación de lecitina, palmitato de ascorbilo, y tocoferol, en proporciones peculiares.

En vista de la técnica anterior, se cree que nunca se ha tenido en consideración la pureza absoluta real de los productos obtenidos, con la excepción de algunos datos de cromatografía de gases ocasionales.

Por esta razón, se cree que es razonable pensar que los autores se refirieron a la pureza simple o aparente por cromatografía de gases, de modo que -presumiblemente de manera inconsciente- tales procedimientos condujeron a una calidad más lejana que la supuesta, y a productos altamente contaminados con impurezas y agentes contaminantes, y sobre todo, con los productos polares de degradación mencionados anteriormente (oxidación/polimerización), que no son detectables por medio de cromatografía de gases, sino sólo por medio de cromatografía líquida de exclusión, de los que se informa brevemente como "oligómeros", según la E.P. 2000.

Se ha encontrado ahora sorprendentemente un procedimiento para la preparación de una composición que comprende compuestos poliinsaturados, con un análisis cuantitativo superior a 50% en peso -considerado como el análisis cuantitativo absoluto, conforme a lo que se ha ilustrado anteriormente-, en el que los compuestos poliinsaturados de partida se concentran en primer lugar hasta una pureza por cromatografía de gases, que corresponde al análisis cuantitativo requerido para los compuestos poliinsaturados finales, y luego se disuelven en disolventes apróticos y/o apolares y/o poco polares, antes de purificarse por contacto con derivados de silicio.

El procedimiento de la invención permite obtener ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga de la serie \omega-3 y/o \omega-6 y/o sus derivados farmacéutica y/o dietéticamente aceptables, seleccionados de ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica, con un análisis cuantitativo superior a 50% en peso, concentrando en primer lugar los compuestos poliinsaturados de partida hasta una pureza por cromatografía de gases, que corresponde al análisis cuantitativo requerido para los compuestos poliinsaturados finales, y luego disolviendo en disolventes apróticos y/o apolares y/o poco polares, antes de purificarse por contacto con derivados de silicio.

El procedimiento de la invención no requiere ninguna manipulación adicional para aumentar ni la concentración ni la pureza de los compuestos insaturados, probablemente debido a la alta capacidad de unión de los subproductos polares del procedimiento, de los productos de polimerización, y de las otras impurezas/contaminantes con los derivados de silicio mencionados anteriormente.

Se prefiere que la composición tenga un contenido de impurezas oligoméricas inferior a 30% en peso, en particular inferior a 15% en peso.

En la presente memoria descriptiva, la expresión "impurezas oligoméricas", significa que comprende también otras impurezas ajenas no detectables por medio de la cromatografía de gases.

En particular, los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga contienen también compuestos monoinsaturados y/o saturados.

Conforme a una realización preferida, los compuestos poliinsaturados de cadena larga -comprendidos en la composición con un análisis cuantitativo superior a 50% en peso-, se seleccionan del grupo que consiste en ácido eicosapentaenoico (EPA, C20:5 \omega-3, todo cis) y/o ácido docosahexaenoico (DHA, C22:6 \omega-3, todo cis) y/o sus derivados farmacéutica y/o dietéticamente aceptables, seleccionados de ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica, mientras que los compuestos poliinsaturados de cadena larga -comprendidos en la composición con un análisis cuantitativo inferior a 50% en peso-, se seleccionan del grupo que consiste en ácidos C18:3 \omega-3 y/o C18:4 \omega-3 y/o C20:4 \omega-3 y/o C21:5 \omega-3 y/o C22:5 \omega-3, y/o sus derivados farmacéutica y/o dietéticamente aceptables, seleccionados de ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica.

Los ésteres etílicos se prefieren entre los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} de los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga de la serie \omega-3 y/o \omega-6 anteriores. A modo de ejemplo, pueden mencionarse las sales de los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga de la serie \omega-3 y/o \omega-6 con una base orgánica, las sales con sodio, sales de lisina, arginina, colina, y similares.

Conforme a otra realización preferida, los EPA y/o DHA, y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica, se concentran hasta una pureza por cromatografía de gases superior a 75%, en particular superior a 80%, más preferiblemente superior a 85%, y lo más preferiblemente superior a 90% en peso.

También podrían estar presentes cantidades variables de ésteres etílicos de componentes \omega-3 secundarios, como se describe en la monografía mencionada anteriormente de la E.P. 2000, así como ésteres etílicos monoinsaturados y saturados \omega-6, usualmente en cantidades incluso más limitadas, en la composición obtenida llevando a cabo el procedimiento de la invención.

En particular, tal composición tiene un contenido de impurezas oligoméricas (así como los otros subproductos del procedimiento) inferior a 2%, más preferiblemente inferior a 1,5%, lo más preferiblemente inferior a 1% en peso, conforme a las especificaciones analíticas requeridas por cada producto comercial.

Las impurezas ajenas, por ejemplo, las que proceden de contaminantes ambientales, tales como metales pesados, usualmente determinadas en concentraciones de "partes por millón" (ppm), estarán siempre conformes con las especificaciones analíticas, en particular, las de la E.P. 2000. Una composición típica, obtenida por el procedimiento de la invención, que tenga un índice de yodo superior a 320, tendrá, por ejemplo, un índice de acidez no superior a 2, un índice de peróxidos no superior a 20, un índice de anisidina no superior a 20; así como metales pesados no superiores a 10 ppm, Hg y Pb no superiores a 1 ppm, y pesticidas no superiores a 2 ppm.

El cociente entre EPA y DHA y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica, está preferiblemente entre 2:1 y 1:2, más preferiblemente entre 1,5:1 y 0,9:1.

El EPA y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica son de al menos 40% en peso, y varían usualmente entre 40 y 60% en peso, mientras que el DHA y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica varían usualmente entre 25 y 50% en peso, y son preferiblemente de al menos 34% en peso.

Conforme a una realización más preferida, el análisis cuantitativo de los ésteres etílicos de EPA y DHA es de al menos 80% en peso, siendo el análisis cuantitativo del éster etílico de EPA de al menos 40%, y siendo el análisis cuantitativo del éster etílico de DHA de al menos 34% en peso; siendo el análisis cuantitativo total de los ésteres etílicos de los ácidos \omega-3 de al menos 90% en peso. El análisis cuantitativo de éster etílico de EPA y DHA es preferiblemente superior a 85% en peso.

Una realización todavía más preferida del procedimiento de la invención proporciona que el contenido de los ácidos \omega-3 C20, C21, y C22 secundarios (o también C18) y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica, puede ser superior a 1%, preferiblemente superior a 3% en peso, como se describe en el documento de patente IT 1235879, o puede ser en total (C18:3 \omega-3, C18:4 \omega-3, C20:4 \omega-3, C21:5 \omega-3, C22:5 \omega-3) de aproximadamente 10%, como se informa en la E.P. 2000 mencionada anteriormente.

Al llevar a cabo el procedimiento de la invención, los compuestos poliinsaturados de partida pueden concentrarse por complejación fraccionada en una o dos etapas con urea; siendo además los compuestos poliinsaturados concentrados resultantes disueltos preferiblemente en disolventes apróticos y/o apolares y/o poco polares, antes de ser purificados, seleccionándose el disolvente, en particular, del grupo que consiste en n-alcanos, iso-alcanos, o cicloalcanos. Entre los disolventes preferidos, puede mencionarse un alcano C_{5}-C_{8}, tal como n-hexano o ciclohexano.

Conforme a una realización preferida, la purificación se lleva a cabo poniendo en contacto los compuestos poliinsaturados concentrados con los derivados de silicio en discontinuo, con agitación; alternativamente, la purificación se lleva a cabo por percolación de los compuestos poliinsaturados concentrados a través de los derivados de silicio.

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La purificación se lleva a cabo preferiblemente a 10-40ºC, en particular a 20-25ºC, durante un tiempo entre 5 minutos y 24 horas, en particular durante 0,1-4 horas; además, la purificación se lleva a cabo ventajosamente en la oscuridad, y en ausencia de oxígeno.

Los derivados de silicio preferidos para llevar a cabo el procedimiento de la invención tienen, típicamente, cualquier granulometría, porosidad, calidad, resistencia, y son de cualquier tipo; se prefiere el gel de sílice; también pueden mencionarse sus derivados útiles como adsorbentes, sobre la base de interacciones bipolares tales como, por ejemplo, el silicato de tales derivados; en particular, los derivados de silicio son Florisil® y/o Chromosorbs®.

Conforme a otra realización preferida, el procedimiento de la invención comprende, después de la purificación, la concentración de los compuestos insaturados a una temperatura inferior al punto de ebullición del disolvente, y a una presión inferior a 26,7 kPa (200 mm de Hg), y luego una evaporación hasta sequedad a vacío o con flujo de gas inerte.

También se prefiere incluir la composición obtenida por el procedimiento de la invención en un vehículo y/o excipiente y/o diluyente farmacéutica y/o dietéticamente aceptable; estando la composición preferiblemente en forma de cápsulas de gelatina blanda.

La composición obtenida llevando a cabo el procedimiento de la invención, puede usarse para la preparación de una formulación farmacéutica para la prevención y/o tratamiento y/o profilaxis de factores múltiples de riesgo para enfermedades cardiovasculares, tales como hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, e hipertensión, y de enfermedades cardiovasculares, tales como arritmia y fibrilación atrial y/o ventricular, descompensación e insuficiencia cardiaca, para la prevención primaria y secundaria de muerte súbita de origen cardíaco y prevención secundaria de reinfarto; para el tratamiento de cualquier otra patología ya conocida como sensible a las composiciones de EPA y/o DHA o sus derivados, tal como enfermedades autoinmunitarias, colitis ulcerosa, patología tumoral, enfermedades del sistema nervioso, envejecimiento celular, infarto cerebral, enfermedades isquémicas, psoriasis.

Como es conocido, la composición puede usarse para preparar formulaciones farmacéuticas y/o dietéticas adecuadas para uso tópico, parenteral, u oral, preferiblemente fabricadas de cápsulas de gelatina blanda, y contienen 250-1500, preferiblemente 300-1000 mg de la composición obtenida llevando a cabo el procedimiento de la invención.

Puede obtenerse cualquier otra composición conocida que comprenda compuestos poliinsaturados con un análisis cuantitativo superior a 50%, en los límites especificados anteriormente, por el procedimiento de la invención, lo que conduce a compuestos que pueden usarse para todos los usos farmacéuticos y parafarmacéuticos (dietéticos, etc.), como se describe en la técnica anterior.

Conforme a la invención, las materias primas tienen que mostrar un contenido mínimo, medido como pureza por cromatografía de gases, superior a 50% y, en general, igual al análisis cuantitativo requerido para el compuesto final. Será fácilmente posible para un experto medio en la técnica preparar tales materias primas por medio de métodos conocidos en la bibliografía. Por ejemplo, se obtendrá fácilmente una composición de ésteres etílicos de EPA y DHA por medio de una transesterificación directa, con etanol y un catalizador, preferiblemente uno alcalino, de los triglicéridos de ciertos aceites de pescado (aceites de sardina, caballa, bacalao, salmón, etc.; que tienen, por ejemplo, un contenido de aproximadamente 12-18% en peso de EPA y de aproximadamente 8-12% en peso de DHA), conforme a métodos conocidos (Lehman LW, Gauglitz EJ Jr., Journal Am. Oil Chem. Soc., 41, 533, 1964).

Partiendo de tales composiciones con un contenido total de 20-30% en peso de ésteres etílicos de EPA y DHA, sería fácil para un experto medio en la técnica obtener composiciones con una concentración superior, por ejemplo, superior a 50% en peso, conforme a métodos conocidos en la técnica (por ejemplo, Abu-Nasr AM et al., Journal Am. Oil Chem. Soc., 31, 16, 1954), por ejemplo, por complejación con urea, seguido de aislamiento y descarga de componentes saturados y monoinsaturados, o por otros métodos.

En el caso mencionado anteriormente, modificando las cantidades de urea y otros parámetros experimentales, es posible llegar a composiciones de ésteres etílicos de EPA y DHA, incluso superiores a 50%, o incluso de 75, 80, 85, 90%; siendo útiles todas estas composiciones como materias primas para los fines del procedimiento de la invención que, como se ha mencionado anteriormente, puede llevarse a cabo incluso en sólo una etapa. En todo caso, las composiciones con una concentración total de ésteres etílicos de EPA y DHA de 50% en peso, disponibles ya en el mercado, pueden, a su vez, concentrarse hasta 75, 80, 85, 90% en peso o más (particularmente, cuando están incluidos los componentes \omega-3 secundarios), cuando se solicita, por medio de complejación con urea, perdiendo ésteres saturados y monoinsaturados, y enriquecimiento de ésteres poliinsaturados en una etapa adicional de preparación.

Merece la pena hacer notar que las concentraciones descritas anteriormente representan los "análisis cuantitativos aparentes" de las composiciones, las cuales en realidad -si se obtienen conforme a los procedimientos de la bibliografía, particularmente por concentración mediante complejación con urea, y si no se someten a una etapa meticulosa adicional de purificación-, están siempre contaminadas indudablemente con cantidades sustanciales de "oligómeros", como se han definido anteriormente, y con otras impurezas. Como se ha mencionado anteriormente, la presencia de oligómeros puede variar ocasionalmente entre 1 y 30%, dependiendo del procedimiento experimentado, y de la exactitud del trabajo: sólo su presencia, así como un análisis cuantitativo aparente superior a 50%, implican su uso como compuestos insaturados de partida tanto en las etapas de purificación como de concentración del procedimiento de la invención. Los oligómeros en un intervalo relativamente bajo, entre 1 y 2%, pueden por lo tanto caracterizar tanto los compuestos insaturados de partida como los finales, dependiendo de las especificaciones deseadas.

En el caso mencionado anteriormente de composiciones basadas, por ejemplo, en ésteres etílicos de EPA y DHA, el material de partida anterior puede disolverse en 3-50 volúmenes, usualmente 5-20 volúmenes, de un disolvente aprótico y/o apolar y/o poco polar, como se ha mencionado anteriormente.

Conforme al procedimiento de la invención, los compuestos poliinsaturados se ponen luego preferiblemente en contacto y/o son percolados sobre sustratos inorgánicos, como derivados de silicio, induciendo de este modo una unión químico-física con los subproductos polares contenidos, así como su aislamiento y retirada.

En otras palabras, la capacidad de los derivados polares de compuestos insaturados, particularmente los derivados polares de oxidación, y principalmente de tipo oligomérico y polimérico, de interactuar y unirse (enlazarse) con sustratos inorgánicos -representados típicamente por derivados de silicio-, permite obtener una composición que inesperadamente no tiene subproductos nocivos.

El procedimiento de la invención considera por lo tanto representar un sustituto ventajoso de los procedimientos usuales de destilación, acoplado o no a procedimientos cromatográficos.

También es posible adoptar un denominado "procedimiento discontinuo", en este caso, preferiblemente con agitación lenta, o más preferiblemente, por percolación a través del derivado de silicio, con un caudal que depende de los volúmenes implicados, lo que de todas formas no es crítico generalmente para el procedimiento.

El procedimiento de la invención no puede definirse como un "procedimiento cromatográfico", porque no se solicita ni fraccionamiento ni descarga de material ajeno, ya que la unión de subproductos polares y/o oligoméricos y/o ajenos es fuertemente selectiva y específica. En el procedimiento de la invención, la disolución que se pone en contacto con el derivado de silicio puede recogerse como una disolución única, quedando la composición por cromatografía de gases sustancialmente inalterada, de manera diferente a los procedimientos de destilación. Esta disolución se evapora luego preferiblemente a sequedad, a una temperatura inferior al punto de ebullición del disolvente, y a una presión inferior a 26,7 kPa (200 mm de Hg), conforme a los métodos conocidos por un experto medio en la técnica, y se elimina definitivamente cualquier disolvente residual, mezclando la masa oleosa por medio de vacío o gas inerte, hasta un contenido inferior al proporcionado en las especificaciones adoptadas o fijadas por el uso comercial o por las farmacopeas.

La composición obtenida de este modo tiene entonces la pureza absoluta como se solicita, no necesita ninguna purificación adicional, y puede usarse como tal para todas las indicaciones y formulaciones farmacéuticas y parafarmacéuticas conocidas en la técnica anterior.

La composición obtenida conforme al procedimiento de la invención, en particular la composición de ésteres etílicos de EPA y DHA, por lo tanto se ajusta a los productos comerciales obtenidos por destilación molecular, y a los productos ya conocidos para uso farmacéutico, parafarmacéutico, dietético, alimentario, etc., como por ejemplo, los descritos en los documentos de patente EP-B-0292846, EP-B-0409903, IT 1235879, EP-B-1152755, ya mencionados parcialmente, así como en la monografía mencionada de la E.P. 2000. Por lo tanto, podría usarse -por ejemplo- en el tratamiento o la prevención de factores múltiples de riesgo para enfermedades cardiovasculares, como se describe en el documento de patente IT 1235879, en la prevención secundaria de episodios cardiovasculares, mortalidad y muerte súbita en pacientes que ya han sufrido infarto, como se describe en el documento de patente EP-B-1152755, en la prevención y tratamiento de otras patologías cardiacas, como descompensación e insuficiencia cardiaca, como se informa en el documento de patente EP-A-1365841, así como en la prevención cardiaca primaria, en el tratamiento de arritmia y fibrilación atrial y/o ventricular, y en todas las otras indicaciones terapéuticas y no terapéuticas conocidas, (dietéticas, alimentarias, etc.).

Los siguientes ejemplos ilustran la invención sin limitarla.

Ejemplo 1

Se disolvieron 15 g de urea en 150 ml de etanol, a 70ºC y en nitrógeno. Se añadieron con agitación y lejos de la luz 10 g de una composición de ésteres etílicos de EPA y DHA -obtenidos por transesterificación con etanol y NaOH, seguido de una complejación con urea en EtOH/EtOH de 95º, conforme a la descripción del documento de patente EP-B-0255824-, con una pureza de 54,2%, y un análisis cuantitativo de 51,0% (CG). La mezcla se mantuvo con agitación durante 15 min, y se dejó enfriar. Después de una noche, el precipitado se retiró por filtración, y la disolución se concentró hasta un volumen pequeño mediante destilación con una presión de 6,7 kPa (50 mm de Hg). El residuo se trató con una disolución de cloruro sódico, y se extrajo con n-hexano. La fase orgánica, secada con sulfato sódico y evaporada a sequedad, condujo a una composición de ésteres etílicos de EPA y DHA, de pureza de 85,6%, y análisis cuantitativo de 77,3% (CG).

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Ejemplo 2

Se disolvieron 5 g de la composición de los ésteres etílicos de EPA y DHA, obtenidos como en el ejemplo 1, en 65 ml de hexano, y se percolaron en 6,5 g de gel de sílice. La disolución obtenida se evaporó a sequedad, a 60ºC y con una presión de 6,7 kPa (50 mm de Hg), y se elaboró en atmósfera inerte lejos de la luz. Se obtuvo una composición de ésteres etílicos de EPA y DHA, con un análisis cuantitativo de 85,4% (46,6% de EPA, 38,8% de DHA, CG), índice de acidez < 1, índice de peróxidos < 2, metales pesados, Hg, Pb < 1 ppm.

Ejemplo 3

Se trataron 5 g de la composición de los ésteres etílicos de EPA y DHA, de análisis cuantitativo de 76,5% (CG), como en el ejemplo 2, mediante un procedimiento en discontinuo y con agitación ligera.

Al final, se obtuvo una composición de los ésteres etílicos de EPA y DHA, de análisis cuantitativo de 82,3% (CG), de análisis cuantitativo total de 91,6% de ésteres etílicos \omega-3, conforme a las especificaciones de la E.P. 2000.

Ejemplo 4

Se trataron 5 g de la composición usada en el ejemplo 1, como en el procedimiento del ejemplo 3, obteniendo finalmente una composición con un análisis cuantitativo de 53,8% (CG).

Claims (34)

1. Un procedimiento para la preparación de una composición que comprende ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga de la serie \omega-3 y/o \omega-6 y/o sus derivados farmacéutica y/o dietéticamente aceptables, seleccionados de ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica, con un análisis cuantitativo superior a 50% en peso, en el que los compuestos poliinsaturados de partida se concentran en primer lugar hasta una pureza por cromatografía de gases, que corresponde al análisis cuantitativo que se requiere para la composición final, y luego se disuelven en disolventes apróticos y/o apolares y/o poco polares, antes de purificarse por contacto con derivados de silicio.

2. Un procedimiento conforme a la reivindicación 1, en el que los compuestos poliinsaturados de partida tienen un contenido de impurezas oligoméricas inferior a 30% en peso.

3. Un procedimiento conforme a la reivindicación 1 ó 2, en el que los compuestos poliinsaturados de partida tienen un contenido de impurezas oligoméricas inferior a 15% en peso.

4. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que los compuestos poliinsaturados de cadena larga contienen compuestos monoinsaturados y/o saturados.

5. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que los compuestos poliinsaturados de cadena larga -comprendidos en la composición con un análisis cuantitativo superior a 50% en peso-, se seleccionan del grupo que consiste en ácido eicosapentaenoico (EPA, C20:5 \omega-3, todo cis) y/o ácido docosahexaenoico (DHA, C22:6 \omega-3, todo cis) y/o sus derivados farmacéutica y/o dietéticamente aceptables, seleccionados de ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica, mientras que los compuestos poliinsaturados de cadena larga -comprendidos en la composición con un análisis cuantitativo inferior a 50% en peso-, se seleccionan del grupo que consiste en ácidos C18:3 \omega-3 y/o C18:4 \omega-3 y/o C20:4 \omega-3 y/o C21:5 \omega-3 y/o C22:5 \omega-3, y/o sus derivados farmacéutica y/o dietéticamente aceptables seleccionados de ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica.

6. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} son ésteres etílicos.

7. Un procedimiento conforme a la reivindicación 5 ó 6, en el que el EPA y/o DHA, y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica se concentran hasta una pureza por cromatografía de gases superior a 75% en peso.

8. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en el que el EPA y/o DHA, y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica se concentran hasta una pureza por cromatografía de gases superior a 80% en peso.

9. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en el que el EPA y/o DHA, y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica se concentran hasta una pureza por cromatografía de gases superior a 85% en peso.

10. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 5-9, en el que el EPA y/o DHA, y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica se concentran hasta una pureza por cromatografía de gases superior a 90% en peso.

11. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 2-10, en el que la composición tiene un contenido de impurezas oligoméricas inferior a 2% en peso.

12. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 2-11, en el que la composición tiene un contenido de impurezas oligoméricas inferior a 1,5% en peso.

13. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 2-12, en el que la composición tiene un contenido de impurezas oligoméricas inferior a 1% en peso.

14. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 5-13, en el que el cociente entre EPA y DHA, y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica está entre 2:1 y 1:2.

15. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 5-14, en el que el cociente entre EPA y DHA, y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica está entre 1,5:1 y 0,9:1.

16. Un procedimiento conforme a las reivindicaciones 6-15, en el que el análisis cuantitativo de los ésteres etílicos de EPA y DHA es de al menos 80% en peso, siendo el análisis cuantitativo del éster etílico de EPA de al menos 40% en peso, y siendo el análisis cuantitativo del éster etílico de DHA de al menos 34% en peso; siendo el análisis cuantitativo total de los ésteres etílicos de los ácidos \omega-3 de al menos 90% en peso.

17. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 6-16, en el que el análisis cuantitativo de los ésteres de EPA y DHA es superior a 85% en peso.

18. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 5-17, en el que el contenido de los ácidos C20, C21 y C22 \omega-3 y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica es superior a 1% en peso.

19. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 5-18, en el que el contenido de los ácidos C20, C21 y C22 \omega-3 y/o los ésteres alquílicos C_{1}-C_{3} y/o sus sales con una base inorgánica u orgánica es superior a 3% en peso.

20. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que los compuestos poliinsaturados de partida se concentran mediante una complejación fraccionada en una etapa con urea.

21. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1-19, en el que los compuestos poliinsaturados de partida se concentran mediante una complejación fraccionada en dos etapas con urea.

22. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que el disolvente se selecciona del grupo que consiste en n-alcano, iso-alcano, o cicloalcano.

23. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que el disolvente es un alcano C_{5}-C_{8}.

24. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que el disolvente es n-hexano o ciclohexano.

25. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que la purificación se lleva a cabo poniendo en contacto los compuestos poliinsaturados concentrados con los derivados de silicio en discontinuo, con agitación.

26. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1-24, en el que la purificación se lleva a cabo por percolación de los compuestos poliinsaturados concentrados a través de los derivados de silicio.

27. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que la purificación se lleva a cabo a 10-40ºC, durante un tiempo entre 5 minutos y 24 horas.

28. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que la purificación se lleva a cabo a 20-25ºC, durante 0,1-4 horas.

29. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que la purificación se lleva a cabo en la oscuridad, y en ausencia de oxígeno.

30. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que los derivados de silicio se seleccionan del grupo que consiste en gel de sílice; el silicato.

31. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que los derivados de silicio son Florisil® y/o Chromosorbs®.

32. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, que comprende, después de la purificación, la concentración de los compuestos poliinsaturados a una temperatura inferior al punto de ebullición del disolvente, y a una presión inferior a 26,7 kPa (200 mm de Hg), y luego una evaporación hasta sequedad a vacío, o con flujo de gas inerte.

33. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, que comprende incluir la composición en un vehículo y/o excipiente y/o diluyente farmacéutica y/o dietéticamente aceptable.

34. Un procedimiento conforme a cualquiera de las reivindicaciones previas, en el que la composición está en forma de cápsulas de gelatina blanda.