ES2308251T3 - Compuestos de quinolina y sus usos. - Google Patents

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ES2308251T3 ES04782827T ES04782827T ES2308251T3 ES 2308251 T3 ES2308251 T3 ES 2308251T3 ES 04782827 T ES04782827 T ES 04782827T ES 04782827 T ES04782827 T ES 04782827T ES 2308251 T3 ES2308251 T3 ES 2308251T3
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Abstract

Un compuesto de acuerdo con la fórmula estructural (I): (Ver fórmula) y sales, hidratos, solvatos y N-óxidos de la misma, en la que: R 1 es un grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 ; R 2 , R 3 , R 5 , R 6 , R 7 y R 8 se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, un grupo electronegativo, -OR d , -SR d , haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR c -arilo, -NR c -heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF3, -CH2CF3, -CF2CF3, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 , arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno más de los mismos o diferentes grupos R 10 y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 ; R 9 se selecciona del grupo constituido por haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF3, -CH2CF3, -CF2CF3, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 y arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R 10 ; R 10 se selecciona del grupo constituido por R a , R b , R a sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R a o R b , -OR a sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R a o R b , -(CH2)m-R b , -(CHR a )m-R b , -O-(CH2)m-R b , -S-(CH 2) m-R b , -O-(CHR a ) m-R b ; cada R a se selecciona de forma independiente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), ciclohexilo, cicloalquilalquilo (C4-C11), arilo (C5-C10), fenilo, arilalquilo (C6-C16), bencilo; cada R b es un grupo adecuado seleccionado de forma independiente del grupo constituido por -OR d , haloalquiloxi (C1-C3), halógeno y -CF3; cada R c es de forma independiente un grupo protector, R a o R a sustituido opcionalmente con uno o más de los mismos o diferentes grupos R a o R b adecuados; cada R d es de forma independiente un grupo protector, R a o R a opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R a o R b adecuados; cada m es de forma independiente un número entero de 1 a 3; A es O, NH o CO; y B es CO, NH u O, con tal de que A y B no sean ambos O y que A y B no sean O y NH; y a condición de que: el compuesto no sea 6-fluoro-2-metil-4-quinolil-5-metil-3-fenilisooxazol-4-carboxilato.

Description

Compuestos de quinolina y sus usos.
1. Referencia cruzada a solicitud relacionada
Esta solicitud reivindica el beneficio según 35 U.S.C \NAK 119(e) de la solicitud de Nº de Serie 60/502.605, presentada el 12 de septiembre de 2003 y titulada "Quinoline Compounds and Their Uses" (Número de expediente del mandatario 33502/US).
2. Campo de la invención
La presente invención se refiere en general a compuestos de quinolina, composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, intermedios y usos de dichos compuestos y composiciones para la preparación de medicamentos para, entre otras cosas, inhibir la desgranulación de mastocitos y/o basófilos en una diversidad de contextos.
3. Antecedentes de la invención
El entrecruzamiento de un alergeno con una IgE unida a receptor activa una cascada de señalización en mastocitos y basófilos que da como resultado la liberación de mediadores químicos responsables de numerosos acontecimientos adversos. Por ejemplo, dicho entrecruzamiento conduce a la liberación de mediadores preformados de reacciones de hipersensibilidad anafilácticas de Tipo I (inmediatas), tales como histamina, desde los sitios de almacenamiento en gránulos mediante desgranulación. También conduce a la síntesis y liberación de otros mediadores, incluyendo leucotrienos, prostaglandinas y factores activadores de plaquetas (PAF), que desempeñan papeles importantes en las reacciones inflamatorias. Otros mediadores que se sintetizan y se liberan tras el entrecruzamiento de un alergeno incluyen citocinas y óxido nítrico.
Puesto que todos estos mediadores son responsables de, o desempeñan papeles importantes en la manifestación de numerosos acontecimientos adversos, sería muy deseable la disponibilidad de compuestos capaces de inhibir la cascada o cascadas de señalización responsables de su liberación y/o síntesis.
4. Sumario de la invención
En un aspecto, la presente invención proporciona nuevos compuestos de quinolina que, entre otras cosas, inhiben la desgranulación de mastocitos y/o basófilos. Los compuestos comprenden generalmente un "núcleo" de quinolina, que tiene la siguiente estructura y numeración convencional:
1
Los compuestos de la invención están sustituidos en el carbono C4 con un grupo de enlace "A-B". La porción quinolina puede estar sustituida además en una o más posiciones (C2, C3, C5, C6, C7 y/o C8). El grupo de enlace une la porción quinolina del compuesto a un isoxazol. El isoxazol también puede estar sustituido, preferiblemente con un metilo en el carbono C5 y, preferiblemente, con un sustituyente en el carbono C2 del isoxazol. Los sustituyentes en C2 y/o C5 de la cadena lateral del isoxazol, así como los sustituyentes opcionales en las otras posiciones del anillo de quinolina, pueden variar mucho en carácter y propiedades físico-químicas. Por ejemplo, el sustituyente o sustituyentes pueden ser un alquilo ramificado, de cadena lineal o cíclico, un heteroalquilo ramificado, de cadena lineal o cíclico, un arilo monocíclico o policíclico o un heteroarilo monocíclico o policíclico. Estos grupos sustituyentes pueden estar adicionalmente sustituidos, como se describirá en más detalle a continuación.
En otro aspecto, la presente invención proporciona profármacos de los compuestos de quinolina. Dichos profármacos pueden ser activos en su forma de profármaco, o pueden ser inactivos hasta que se convierten en condiciones fisiológicas u otras condiciones de uso en una forma farmacológica activa. En los profármacos de la invención se incluyen uno o más grupos funcionales de los compuestos de quinolina en pro-restos que se escinden de la molécula en las condiciones de uso, típicamente a modo de hidrólisis, escisión enzimática o algún otro mecanismo de escisión, para dar los grupos funcionales. Por ejemplo, pueden incluirse grupos amino primarios o secundarios en un pro-resto de amida que se escinde en condiciones de uso para generar el grupo amino primario o secundario. Por lo tanto, los profármacos de la invención incluyen tipos especiales de grupos protectores, denominados "progrupos", que enmascaran uno o más grupos funcionales de los compuestos de quinolina que se escinden en las condiciones de uso para dar un compuesto farmacológico activo de quinolina. Los grupos funcionales dentro de los compuestos de quinolina que pueden enmascararse con progrupos para la inclusión en un pro-resto incluyen, pero sin limitación, aminas (primarias y secundarias), hidroxilos, sulfanilos (tioles), carboxilos, carbonilos, fenoles, catecoles, dioles, alquinas, fosfatos, etc. Se conocen en la técnica multitud de progrupos adecuados para enmascarar dichos grupos funcionales para dar pro-restos que pueden escindirse en las condiciones deseadas de uso. Todos estos progrupos, solos en combinaciones, pueden incluirse en los profármacos de la invención. Los ejemplos específicos de pro-restos que dan grupos amina primaria o secundaria que pueden incluirse en los profármacos de la invención incluyen, pero sin limitación, amidas, carbamatos, iminas, ureas, fosfenilos, fosforilos y sulfenilos. Los ejemplos específicos de pro-restos que dan grupos sulfanilo que pueden incluirse en los profármacos de la invención incluyen, pero sin limitación, tioéteres, por ejemplo, derivados de S-metilo (monotio, ditio, aminotio acetales), silil tioéteres, tioésteres, tiocarbonatos, tiocarbamatos, disulfuros asimétricos, etc. Los ejemplos específicos de pro-restos que se escinden para dar grupos hidroxilo que pueden incluirse en los profármacos de la invención incluyen, pero sin limitación, sulfonatos, ésteres y carbonatos. Los ejemplos específicos de pro-restos que dan grupos carboxilo que pueden incluirse en los profármacos de la invención incluyen,
pero sin limitación, ésteres (incluyendo silil ésteres, ésteres de ácido oxámico y tioésteres), amidas e hidrazidas.
En una realización ilustrativa, los profármacos de la invención son compuestos de acuerdo con la fórmula estructural (I), en la que el grupo protector de R^{c} y R^{d} es un progrupo.
Los compuestos de quinolina de la invención son potentes inhibidores de la desgranulación de mastocitos y/o basófilos. Por lo tanto, en otro aspecto más, la presente invención proporciona usos de compuestos de quinolina para la preparación de medicamentos para regular y, en particular, inhibir, la desgranulación de mastocitos y/o basófilos. El compuesto o profármaco de quinolina de la invención puede estar en la forma de una sal, hidrato, solvato, N-óxido y/o composición de los mismos aceptable, eficaz para regular o inhibir la desgranulación de la célula. El método puede realizarse en contextos in vitro o en contextos in vivo como un enfoque terapéutico para el tratamiento o la prevención de enfermedades caracterizadas por, causadas por o asociadas con la desgranulación de mastocitos y/o basófilos.
Aunque, sin intención de ceñirse a teoría alguna de funcionamiento, se piensa que los compuestos de quinolina de la invención ejercen su efecto inhibidor bloqueando la cascada de señalización del receptor de IgE iniciada cuando la IgE unida a receptor de IgE se entrecruza con un antígeno. Por lo tanto, la presente invención también proporciona usos de compuestos de quinolina para la preparación de medicamentos para regular y, en particular, inhibir la cascada de señalización del receptor de IgE (también conocido como Fc\varepsilonR1) que conduce a la desgranulación de mastocitos y/o basófilos (desgranulación mediada por receptor de IgE). Los medicamentos se usan en la regulación de y, en particular, en la inhibición de procesos corriente abajo que resultan como una consecuencia de la activación de la cascada de señalización del receptor de IgE. Dichos procesos corriente abajo incluyen, pero sin limitación, desgranulación inducida por IgE, producción y/o liberación de citocinas y/o la producción y/o liberación de mediadores lipídicos tales como leucotrienos y prostaglandinas. Se usa una cantidad eficaz de un compuesto o profármaco de quinolina de la invención, o una sal, hidrato, disolvente, N-óxido y/o composición de los mismos aceptable para preparar un medicamento adecuado para contactar con un mastocito y/o basófilo para regular o inhibir la cascada de señalización del receptor de IgE y/o un proceso corriente abajo efectuado por la activación de esta cascada de señalización. El medicamento puede usarse en contextos in vitro o en contextos in vivo como un enfoque terapéutico para el tratamiento o la prevención de enfermedades caracterizadas por, causadas por o asociadas con la cascada de señalización del receptor de IgE, tal como enfermedades producidas por la liberación de mediadores químicos específicos de gránulos tras la desgranulación, la liberación y/o la síntesis de citocinas y/o la liberación y/o la síntesis de mediadores lipídicos tales como leucotrienos y prostaglandinas.
En otro aspecto más, la presente invención proporciona composiciones para usar en la preparación de medicamentos para tratar y/o prevenir enfermedades caracterizadas por, causadas por o asociadas con la liberación de mediadores químicos como una consecuencia de la activación de la cascada de señalización del receptor de IgE. Las composiciones pueden usarse para preparar medicamentos para usar en animales en contextos veterinarios o en seres humanos. Las composiciones son en general adecuadas para la administración a un sujeto animal o ser humano y comprenden una cantidad de un compuesto o profármaco de quinolina de la invención, o una sal, hidrato, solvato, N-óxido y/o composición de los mismos aceptable, eficaz para tratar o prevenir la enfermedad. Como se ha analizado anteriormente, la activación de la cascada de señalización del receptor de IgE conduce a la liberación y/o síntesis de una diversidad de sustancias químicas que son mediadores farmacológicos de una gran diversidad de enfermedades.
Por ejemplo, en mastocitos y basófilos, la activación de la cascada de señalización del receptor de IgE conduce a la liberación inmediata (es decir, en 1-3 min desde la activación del receptor de IgE) de mediadores preformados de reacciones de hipersensibilidad atópicas y/o de Tipo I (por ejemplo, histamina, proteasas, tales como triptasa, etc.) a través del proceso de desgranulación. Dichas reacciones de hipersensibilidad atópicas o de Tipo I incluyen, pero sin limitación, reacciones anafilácticas contra alergenos ambientales y otros (por ejemplo pólenes, venenos de insectos y/o animales, alimentos, fármacos, etc.), fiebre del heno, conjuntivitis alérgica, rinitis alérgica, asma alérgica, dermatitis atópica, eczema, urticaria y ciertos trastornos gastrointestinales.
La liberación inmediata de los mediadores preformados mediante la desgranulación se sigue de la liberación y/o síntesis de una diversidad de otros mediadores químicos, incluyendo, entre otras cosas, factor activador de plaquetas (PAF), prostaglandinas y leucotrienos (por ejemplo, LTC4) y la síntesis de novo y liberación de citocinas tales como TNF\alpha, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, etc. El primero de estos dos procesos se produce aproximadamente a los 3-30 min después de la activación del receptor de IgE; el último, aproximadamente de 30 min a 7 h después de la activación del receptor. Se piensa que estos mediadores de "fase tardía" son responsables en parte de los síntomas crónicos de las reacciones de hipersensibilidad atópicas y de Tipo I enumeradas anteriormente y, además, son mediadores químicos de la artritis reumatoide, inflamación y enfermedades inflamatorias (por ejemplo, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria del intestino idiopática, intestino irritable, colon irritable, etc.), cicatrización de mala calidad (por ejemplo, esclerodermia, fibrosis aumentada, queloides, cicatrices postquirúrgicas, fibrosis pulmonar, espasmos vasculares, migraña, lesión por reperfusión y post-infarto de miocardio), ciertas enfermedades autoinmunes (por ejemplo, lupus, diabetes insulinodependiente, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, etc.) y complejo o síndrome seco. Todas estas enfermedades pueden tratarse o prevenirse usando medicamentos preparados usando el compuesto de quinolina de la invención.
Las enfermedades adicionales que pueden tratarse o prevenirse usando medicamentos preparados usando los compuestos de quinolina de la invención incluyen enfermedades asociadas con una patología de basófilos y/o mastocitos. Los ejemplos de dichas enfermedades incluyen, pero sin limitación, enfermedades de la piel tales como esclerodermia, enfermedades cardiacas tales como post-infarto de miocardio, enfermedades pulmonares tales como cambios o remodelación de la musculatura pulmonar y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y enfermedades del intestino tales como el síndrome inflamatorio del intestino (colon irritable).
5. Breve descripción de las figuras
La Figura 1 proporciona una viñeta que ilustra la producción de IgE inducida por un alergeno y la liberación consiguiente de mediadores preformados y otros mediadores químicos de mastocitos;
La Figura 2 proporciona una viñeta que ilustra la cascada de transducción de señales de FC\varepsilonR1 (receptor de IgE) que conduce a la desgranulación de mastocitos y/o basófilos;
La Figura 3 proporciona una viñeta que ilustra los supuestos lugares de acción de compuestos que inhiben selectivamente corriente arriba la desgranulación mediada por receptor de IgE (inducida por IgE) y de compuestos que inhiben tanto la desgranulación inducida por IgE como la inducida por ionomicina; y
La Figura 4 representa una síntesis ejemplar de compuestos de la invención.
6. Descripción detallada de las realizaciones preferidas 6.1 Definiciones
Como se usan en la presente memoria, se pretende que los siguientes términos tengan los siguientes significados:
El término "alquilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un radical hidrocarburo monovalente saturado o insaturado, ramificado, de cadena lineal o cíclico que tiene el número indicado de átomos de carbono (es decir, C1-C6 significa de uno a seis átomos de carbono) que se obtiene por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un alcano, alqueno o alquino precursor. Los grupos alquilo típicos incluyen, pero sin limitación, metilo; etilos tales como etanilo, etenilo, etinilo; propilos tales como propan-1-ilo, propan-2-ilo, ciclopropan-1-ilo, prop-1-en-1-ilo, prop-1-en-2-ilo, prop-2-en-1-ilo, cicloprop-1-en-1-ilo; cicloprop-2-en-1-ilo, prop-1-in-1-ilo, prop-2-in-1-ilo, etc.; butilos tales como butan-1-ilo, butan-2-ilo, 2-metil-propan-1-ilo, 2-metil-propan-2-ilo, ciclobutan-1-ilo, but-1-en-1-ilo, but-1-en-2-ilo, 2-metil-prop-1-en-1-ilo, but-2-en-1-ilo, but-2-en-2-ilo, buta-1,3-dien-1-ilo, buta-1,3-dien-2-ilo, ciclobut-1-en-1-ilo, ciclobut-1-en-3-ilo, ciclobuta-1,3-dien-1-ilo, but-1-in-1-ilo, but-1-in-3-ilo, but-3-in-1-ilo, etc.; y similares. Cuando se desean niveles específicos de saturación se usa la nomenclatura "alcanilo", "alquenilo" y/o "alquinilo", como se define a continuación. En realizaciones preferidas, los grupos alquilo son alquilo (C1-C6).
El término "alcanilo", solo o como parte de otros sustituyentes, se refiere a un alquilo saturado ramificado, de cadena lineal o cíclico obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un alcano precursor. Los grupos alcanilo típicos incluyen, pero sin limitación, metanilo; etanilo; propanilos tales como propan-1-ilo, propan-2-il (isopropilo), ciclopropan-1-ilo, etc.; butanilos tales como butan-1-ilo, butan-2-ilo (sec-butilo), 2-metil-propan-1-ilo (isobutilo), 2-metil-propan-2-ilo (t-butilo), ciclobutan-1-ilo, etc.; y similares. En realizaciones preferidas, los grupos alcanilo son alcanilo (C1-C6).
El término "alquenilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un alquilo insaturado ramificado, de cadena lineal o cíclico que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un alqueno precursor. El grupo puede estar en la conformación cis o trans con respecto al doble o a los dobles enlaces. Los grupos alquenilo típicos incluyen, pero sin limitación, etenilo; propenilos tales como prop-1-en-1-ilo, prop-1-en-2-ilo, prop-2-en-1-ilo, prop-2-en-2-ilo, cicloprop-1-en-1-ilo; cicloprop-2-en-1-ilo; butenilos tales como but-1-en-1-ilo, but-1-en-2-ilo, 2-metil-prop-1-en-1-ilo, but-2-en-1-ilo, but-2-en-2-ilo, buta-1,3-dien-1-ilo, buta-1,3-dien-2-ilo, ciclobut-1-en-1-ilo, ciclobut-1-en-3-ilo, ciclobuta-1,3-dien-1-ilo, etc.; y similares. En realizaciones preferidas, el grupo alquenilo es alquenilo (C2-C6).
El término "alquinilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un alquilo insaturado ramificado, de cadena lineal o cíclico que tiene al menos un triple enlace carbono-carbono obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un alquino precursor. Los grupos alquinilo típicos incluyen, pero sin limitación, etinilo; propinilos tales como prop-1-in-1-ilo, prop-2-in-1-ilo, etc.; butinilos tales como but-1-in-1-ilo, but-1-in-3-ilo, but-3-in-1-ilo, etc.; y similares. En realizaciones preferidas, el grupo alquinilo es alquinilo (C2-C6).
El término "alquildiilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo hidrocarburo divalente saturado o insaturado, ramificado, de cadena lineal o cíclico, que tiene el número indicado de átomos de carbono (es decir, C1-C6 significa de uno a seis átomos de carbono) obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de cada uno de dos átomos de carbono diferentes de un alcano, alqueno o alquino precursor o por la eliminación de dos átomos de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un alcano, alqueno o alquino precursor. Los dos centros radicales monovalentes o cada valencia del centro radical divalente pueden formar enlaces con los mismos o con diferentes átomos. Los grupos alquildiilo típicos incluyen, pero sin limitación metandiilo; etildiilos tales como etan-1,1-diilo, etan-1,2-diilo, eten-1,1-diilo, eten-1,2-diilo; propildiilos tales como propan-1,1-diilo, propan-1,2-diilo, propan-2,2-diilo, propan-1,3-diilo, ciclopropan-1,1-diilo, ciclopropan-1,2-diilo, prop-1-en-1,1-diilo, prop-1-en-1,2-diilo, prop-2-en-1,2-diilo, prop-1-en-1,3-diilo, cicloprop-1-en-1,2-diilo, cicloprop-2-en-1,2-diilo, cicloprop-2-en-1,1-diilo, prop-1-in-1,3-diilo, etc.; butildiilos tales como butan-1,1-diilo, butan-1,2-diilo, butan-1,3-diilo, butan-1,4-diilo, butan-2,2-diilo, 2-metil-propan-1,1-diilo, 2-metil-propan-1,2-diilo, ciclobutan-1,1-diilo; ciclobutan-1,2-diilo, ciclobutan-1,3-diilo, but-1-en-1,1-diilo, but-1-en-1,2-diilo, but-1-en-1,3-diilo, but-1-en-1,4-diilo, 2-metil-prop-1-en-1,1-diilo, 2-metanilideno-propan-1,1-diilo, buta-1,3-dien-1,1-diilo, buta-1,3-dien-1,2-diilo, buta-1,3-dien-1,3-diilo, buta-1,3-dien-1,4-diilo, ciclobut-1-en-1,2-diilo, ciclobut-1-en-1,3-diilo, ciclobut-2-en-1,2-diilo, ciclobuta-1,3-dien-1,2-diilo, ciclobuta-1,3-dien-1,3-diilo, but-1-in-1,3-diilo, but-1-in-1,4-diilo, buta-1,3-diin-1,4-diilo, etc.; y similares. Cuando se desean niveles específicos de saturación se usa la nomenclatura alcanildiilo, alquenildiilo y/o alquinildiilo. Cuando se desea específicamente que las dos valencias estén en el mismo átomo de carbono, se usa la nomenclatura "alquilideno". En realizaciones preferidas, el grupo alquildiilo es alquildiilo (C1-C6). También se prefieren grupos alcanildiilo acíclicos saturados en los que los centros radicales están en los carbonos terminales, por ejemplo, metandiilo (metano); etan-1-2-diilo (etano); propan-1,3-diilo (propano); butan-1,4-diilo (butano); y similares (también denominados como alquilenos, definidos posteriormente).
El término "alquileno", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo alquildiilo saturado o insaturado de cadena lineal que tiene dos centros radicales monovalentes terminales obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de cada uno de los dos átomos de carbono terminales de un alcano, alqueno o alquino precursor de cadena lineal. La localización de un doble enlace o triple enlace, si está presente, en un alquileno particular se indica entre corchetes. Los grupos alquileno típicos incluyen, pero sin limitación, metano; etilenos tales como etano, eteno, etino; propilenos tales como propano, prop[1]eno, propa[1,2]dieno, prop[1]ino, etc.; butilenos tales como butano, but[1]eno, but[2]eno, buta[1,3]dieno, but[1]ino, but[2]ino, buta[1,3]diino, etc.; y similares. Cuando se desean niveles específicos de saturación se usa la nomenclatura alcano, alqueno y/o alquino. En realizaciones preferidas, el grupo alquileno es alquileno (C1-C6) o (C1-C3). También se prefieren grupos alcano saturados de cadena lineal, por ejemplo, metano, etano, propano, butano y similares.
Los términos "heteroalquilo", "heteroalcanilo", "heteroalquenilo", "heteroalquinilo", "heteroalquildiilo" y "heteroalquileno", solos o como parte de otro sustituyente, se refieren a grupos alquilo, alcanilo, alquenilo, alquinilo, alquildiilo y alquileno, respectivamente, en los que uno o más de los átomos de carbono se reemplazan de forma independiente con el mismo o con diferentes heteroátomos o grupos heteroatómicos. Los heteroátomos y/o grupos heteroatómicos típicos que pueden reemplazar los átomos de carbono incluyen, pero sin limitación, -O-, -S- -S-O-, -NR'-, -PH-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, -S(O) NR'-, -S(O)_{2}NR'-, y similares, incluyendo combinaciones de los mismos, en los que cada R' es de forma independiente un hidrógeno o alquilo (C1-C6).
Los términos "cicloalquilo" y "heterocicloalquilo", solos o como parte de otro sustituyente, se refieren a versiones cíclicas de grupos "alquilo" y "heteroalquilo", respectivamente. Para grupos heteroalquilo, un heteroátomo puede ocupar la posición que está unida al resto de la molécula. Los grupos cicloalquilo típicos incluyen, pero sin limitación, ciclopropilo; ciclobutilos tales como ciclobutanilo y ciclobutenilo; ciclopentilos tales como ciclopentanilo y ciclopentenilo; ciclohexilos tales como ciclohexanilo y ciclohexenilo; y similares. Los grupos heterocicloalquilo típicos incluyen, pero sin limitación, tetrahidrofuranilo (por ejemplo, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, etc.), piperidinilo (por ejemplo, piperidin-1-ilo, piperidin-2-ilo, etc.), morfolinilo (por ejemplo, morfolin-3-ilo, morfolin-4-ilo, etc.), piperazinilo (por ejemplo, piperazin-1-ilo, piperazin-2-ilo, etc.) y similares.
La expresión "puente heteroatómico acíclico" se refiere a un puente divalente en el que los átomos de la cadena principal son exclusivamente heteroátomos y/o grupos heteroatómicos. Los puentes heteroatómicos acíclicos típicos incluyen, pero sin limitación, -O-, -S- -S-O-, -NR'-, -PH-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, -S(O)NR'-, -S(O)_{2}NR'- y similares, incluyendo combinaciones de los mismos, en los que R' es de forma independiente un hidrógeno o alquilo (C1-C6).
La expresión "sistema de anillo aromático precursor" se refiere a un sistema de anillo cíclico o policíclico insaturado que tiene un sistema de electrones \pi conjugados. Se incluyen específicamente dentro de la definición de "sistema de anillo aromático precursor" sistemas de anillos fusionados en los que uno o más de los anillos son aromáticos y uno o más de los anillos son saturados o insaturados, tales como, por ejemplo, fluoreno, indano, indeno, fenaleno, tetrahidronaftaleno, etc. Los sistemas de anillos aromáticos precursores típicos incluyen, pero sin limitación, aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benceno, criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno, indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, tetrahidronaftaleno, trifenileno, trinaftaleno y similares, así como los diversos hidro isómeros de los mismos.
El término "arilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo hidrocarburo aromático monovalente que tiene el número indicado de átomos de carbono (es decir, C5-C15 significa de 5 a 15 átomos de carbono) obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un sistema de anillo aromático precursor. Los grupos arilo típicos incluyen, pero sin limitación, grupos derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benceno, criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno y similares, así como los diversos hidro isómeros de los mismos. En realizaciones preferidas, el grupo arilo es arilo (C5-C15), prefiriéndose aún más (C5-C10). Son arilos particularmente preferidos ciclopentadienilo, fenilo y naftilo.
El término "arilarilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo hidrocarburo monovalente obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de carbono de un sistema de anillo en el que dos o más sistemas de anillos aromáticos precursores idénticos o no idénticos se unen directamente entre sí por un enlace sencillo, en el que el número de dichas uniones directas de anillos es uno menos que el número de sistemas de anillos aromáticos precursores implicados. Los grupos arilarilo típicos incluyen, pero sin limitación, bifenilo, trifenilo, fenil-naftilo, binaftilo, bifenil-naftilo y similares. Cuando se especifica el número de átomos de carbono en un grupo arilarilo, el número se refiere a los átomos de carbono que comprenden cada anillo aromático precursor. Por ejemplo, un arilarilo (C5-C15) es un grupo arilarilo en el que cada anillo aromático comprende de 5 a 15 carbonos, por ejemplo, bifenilo, trifenilo, binaftilo, fenilnaftilo, etc. Preferiblemente, cada sistema de anillo aromático precursor de un grupo arilarilo es de forma independiente un aromático (C5-C15), más preferiblemente, un aromático (C5-C10). También se prefieren grupos arilarilo en los que todos los sistemas de anillos aromáticos precursores son idénticos, por ejemplo, bifenilo, trifenilo, binaftilo, trinaftilo, etc.
El término "biarilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo arilarilo que tiene dos sistemas aromáticos precursores idénticos unidos directamente entre sí por un enlace sencillo. Los grupos biarilo típicos incluyen, pero sin limitación, bifenilo, binaftilo, biantracilo y similares. Preferiblemente, los sistemas de anillos aromáticos son anillos aromáticos (C5-C15), más preferiblemente, anillos aromáticos (C5-C10). Un grupo biarilo particularmente preferido es bifenilo.
El término "arilalquilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo alquilo acíclico en el que uno de los átomos de hidrógeno unidos a un átomo de carbono, típicamente un átomo de carbono terminal o sp^{3}, se reemplaza con un grupo arilo. Los grupos arilalquilo típicos incluyen, pero sin limitación, bencilo, 2-feniletan-1-ilo, 2-fenileten-1-ilo, naftilmetilo, 2-naftiletan-1-ilo, 2-naftileten-1-ilo, naftobencilo, 2-naftofeniletan-1-ilo y similares. Cuando se desean restos alquilo específicos, se usa la nomenclatura arilalcanilo, arilalquenilo y/o arilalquinilo. En realizaciones preferidas, el grupo arilalquilo es arilalquilo (C6-C21), por ejemplo, el resto alcanilo, alquenilo o alquinilo del grupo arilalquilo es (C1-C6) y el resto arilo es (C5-C15). En realizaciones particularmente preferidas, el grupo arilalquilo es (C6-C13), por ejemplo, el resto alcanilo, alquenilo o alquinilo del grupo arilalquilo es (C1-C3) y el resto arilo es (C5-C10).
La expresión "sistema de anillo heteroaromático precursor" se refiere a un sistema de anillo aromático precursor en el que uno o más átomos de carbono se reemplazan de forma independiente con los mismos o con diferentes heteroátomos o grupos heteroatómicos. Los heteroátomos o grupos heteroatómicos típicos para reemplazar los átomos de carbono incluyen, pero sin limitación, N, NH, P, O, S, S(O), S(O)_{2}, Si, etc. Se incluyen específicamente dentro de la definición de "sistemas de anillos heteroaromáticos precursores" sistemas de anillos fusionados en los que uno o más de los anillos son aromáticos y uno o más de los anillos son saturados o insaturados, tales como, por ejemplo, benzodioxano, benzofurano, cromano, cromeno, indol, indolina, xanteno, etc. También se incluyen en la definición de "sistema de anillo heteroaromático precursor" los anillos reconocidos que incluyen sustituyentes tales como benzopirona. Los sistemas de anillos heteroaromáticos precursores típicos incluyen, pero sin limitación, acridina, benzimidazol, benzisoxazol, benzodioxano, benzodioxol, benzofurano, benzopirona, benzotiadiazol, benzotiazol, benzotriazol, benzoxaxina, benzoxazol, benzoxazolina, carbazol, \beta-carbolina, cromano, cromeno, cinnolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno y similares.
El término "heteroarilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo heteroatómico monovalente que tiene el número indicado de átomos del anillo (por ejemplo, "de 5-14 miembros" significa de 5 a 14 átomos del anillo) obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de un sistema de anillo heteroaromático precursor. Los grupos heteroarilo típicos incluyen, pero sin limitación, grupos derivados de acridina, benzimidazol, benzisoxazol, benzodioxano, benzodiaxol, benzofurano, benzopirona, benzotiadiazol, benzotiazol, benzotriazol, benzoxazina, benzoxazol, benzoxazolina, carbazol, \beta-carbolina, cromano, cromeno, cinnolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno y similares, así como los diversos hidro isómeros de los mismos. En realizaciones preferidas, el grupo heteroarilo es un heteroarilo de 5-14 miembros, siendo particularmente preferido un heteroarilo de 5-10 miembros.
El término "heteroarilo-heteroarilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo heteroatómico monovalente obtenido por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de un sistema de anillo en el que dos o más sistemas de anillos heteroaromáticos precursores idénticos o no idénticos se unen directamente entre sí por un enlace sencillo, en el que el número de dichas uniones directas de anillos es uno menos que el número de sistemas de anillos heteroaromáticos precursores implicados. Los grupos heteroarilo-heteroarilo típicos incluyen, pero sin limitación, bipiridilo, tripiridilo, piridilpurinilo, bipurinilo, etc. Cuando se especifica el número de átomos, el número se refiere al número de átomos que comprende cada sistema de anillo heteroaromático precursor. Por ejemplo, un heteroarilo-heteroarilo de 5-15 miembros es un grupo heteroarilo-heteroarilo en el que cada sistema de anillo heteroaromático precursor comprende de 5 a 15 átomos, por ejemplo, bipiridilo, tripuridilo, etc. Preferiblemente, cada sistema de anillo heteroaromático precursor es de forma independiente un heteroaromático de 5-15 miembros, más preferiblemente, un heteroaromático de 5-10 miembros. También se prefieren grupos heteroarilo-heteroarilo en los que todos los sistemas de anillos heteroaromáticos precursores son idénticos.
El término "biheteroarilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo heteroarilo-heteroarilo que tiene dos sistemas de anillos heteroaromáticos precursores idénticos unidos directamente entre sí por un enlace sencillo. Los grupos biheteroarilo típicos incluyen, pero sin limitación, bipiridilo, bipurinilo, biquinolinilo y similares. Preferiblemente, los sistemas de anillos heteroaromáticos son anillos heteroaromáticos de 5-15 miembros, más preferiblemente, anillos heteroaromáticos de 5-10 miembros.
El término "heteroarilalquilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo alquilo acíclico en el que uno de los átomos de hidrógeno unidos a un átomo de carbono, típicamente un átomo de carbono terminal o sp^{3}, se reemplaza con un grupo heteroarilo. Cuando se desean restos alquilo específicos, se usa la nomenclatura heteroarilalcanilo, heteroarilalquenilo y/o heteroarilalquinilo. En realizaciones preferidas, el grupo heteroarilalquilo es un heteroarilalquilo de 6-21 miembros, por ejemplo, el resto alcanilo, alquenilo o alquinilo del heteroarilalquilo es un alquilo (C1-C6) y el resto heteroarilo es un heteroarilo de 5-15 miembros. En realizaciones particularmente preferidas, el heteroarilalquilo es un heteroarilalquilo de 6-13 miembros, por ejemplo, el resto alcanilo, alquenilo o alquinilo es un alquilo (C1-C3) y el resto heteroarilo es un heteroarilo de 5-10 miembros.
Los términos "halógeno" o "halo", solos o como parte de otro sustituyente, a menos que se indique otra cosa se refieren a fluoro, cloro, bromo y yodo.
El término "haloalquilo", solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo alquilo en el que uno o más de los átomos de hidrógeno se reemplaza con un halógeno. Por lo tanto, el término "haloalquilo" pretende incluir monohaloalquilos, dihaloalquilos, trihaloalquilos, etc. hasta perhaloalquilos. Por ejemplo, la expresión "haloalquilo (C1-C2)" incluye 1-fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, 1-fluoroetilo, 1,1-difluoroetilo, 1,2-difluoroetilo, 1,1,1-trifluoroetilo, perfluoroetilo, etc.
Los grupos definidos anteriormente pueden incluir prefijos y/o sufijos que se usan comúnmente en la técnica para generar grupos sustituyentes adicionales bien conocidos. Como ejemplos, los términos "alquiloxi" o "alcoxi" se refieren a un grupo de la fórmula -OR'', "alquilamina" se refiere a un grupo de la fórmula -NHR'' y "dialquilamina" se refiere a un grupo de la fórmula -NR''R'', en las que cada R'' es de forma independiente un alquilo. Como otro ejemplo, los términos "haloalcoxi" o "haloalquiloxi" se refieren a un grupo de la fórmula -OR''', en la que R''' es un haloalquilo.
La expresión "grupo protector" se refiere a un grupo de átomos que, cuando están unidos a un grupo funcional reactivo en una molécula, enmascaran, reducen o previenen la reactividad del grupo funcional. Típicamente, un grupo protector puede eliminarse de forma selectiva según se desee durante el curso de una síntesis. Pueden encontrarse ejemplos de grupos protectores en Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3ª Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY y Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY. Los grupos protectores amino representativos incluyen, pero sin limitación, formilo, acetilo, trifluoroacetilo, bencilo, benciloxicarbonilo ("CBZ"), terc-butoxicarbonilo ("Boc"), trimetilsililo ("TMS"), 2-trimetilsilil-etanosulfonilo ("SES"), grupos tritilo y tritilo sustituidos, aliloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo ("FMOC"), nitroveratriloxicarbonilo ("NVOC") y similares. Los grupos protectores hidroxilo representativos incluyen, pero sin limitación, aquellos en los que el grupo hidroxilo está acilado (por ejemplo, ésteres de metilo y etilo, grupos acetato o propionato o ésteres de glicol) o alquilado, tales como éteres de bencilo y tritilo, así como éteres de alquilo, éteres de tetrahidropiranilo, éteres de trialquilsililo (por ejemplo, grupos TMS o TIPPS) y éteres de alilo.
El término "profármaco" se refiere a un derivado de un compuesto activo de quinolina (fármaco) que requiere una transformación en las condiciones de uso, tal como en el interior del cuerpo, para liberar el fármaco activo de quinolina. Los profármacos son frecuentemente, pero no necesariamente, farmacológicamente inactivos hasta que se convierten en el fármaco activo. Los profármacos se obtienen típicamente por enmascaramiento de un grupo funcional en el fármaco de quinolina que se piensa que es necesario en parte para la actividad con un progrupo (definido a continuación) para formar un pro-resto que experimenta una transformación, tal como una escisión, en las condiciones especificadas de uso para liberar el grupo funcional y, por lo tanto, el fármaco activo de quinolina. La escisión del pro-resto puede tener lugar espontáneamente, tal como a modo de una reacción de hidrólisis, o puede estar catalizada o inducida por otro agente, tal como por una enzima, por luz, por ácido o por un cambio de o una exposición a un parámetro físico o ambiental, tal como un cambio de temperatura. El agente puede ser endógeno en las condiciones de uso, tal como una enzima presente en las células a las que se administra el profármaco o las condiciones ácidas del estómago, o puede suministrarse exógenamente.
Se conocen bien en la técnica una gran diversidad de progrupos, así como los pro-restos resultantes, adecuados para enmascarar grupos funcionales en los compuestos activos de quinolinas para dar profármacos. Por ejemplo, un grupo funcional hidroxilo puede enmascararse como un pro-resto de sulfonato, éster o carbonato, que puede hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo hidroxilo. Un grupo funcional amino puede enmascararse como un pro-resto de amida, carbamato, imina, urea, fosfenilo, fosforilo o sulfenilo, que puede hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo amino. Un grupo carboxilo puede enmascararse como un pro-resto de éster (incluyendo ésteres de sililo y tioésteres), amida o hidrazida, que puede hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo carboxilo. Otros ejemplos específicos de progrupos adecuados y sus respectivos pro-restos serán evidentes para los especialistas en la técnica.
El término "progrupo" se refiere a un tipo de grupo protector que, cuando se usa para enmascarar un grupo funcional dentro de un fármaco activo de quinolina para formar un pro-resto, convierte el fármaco en un profármaco. Los profármacos están típicamente unidos al grupo funcional del fármaco mediante enlaces que pueden escindirse en condiciones especificadas de uso. Por lo tanto, un progrupo es esa porción de un pro-resto que se escinde para liberar el grupo funcional en las condiciones especificadas de uso. Como un ejemplo específico, un pro-resto amida de la fórmula -NH-C(O)CH_{3} comprende el progrupo -C(O)CH_{3}.
Las expresiones "Fc\varepsilonR1" o "receptor de IgE" se refieren al receptor de alta afinidad por la región Fc de la IgE que se encuentra en mastocitos y basófilos (así como en otras células) que ancla la IgE monomérica a la superficie celular. El Fc\varepsilonR1 o receptor de IgE comprende una cadena alfa, una beta y dos gamma.
Las expresiones "desgranulación inducida por IgE" o "desgranulación mediada por el receptor de IgE" se refieren a la desgranulación que se desarrolla a través de la cascada de transducción de señales del receptor de IgE iniciada por el entrecruzamiento de IgE unida a Fc\varepsilonR1. El entrecruzamiento puede inducirse por un alergeno específico de IgE u otro agente de unión multivalente, tal como un anticuerpo anti-IgE. Con respecto a la Figura 2, la cascada de señalización del receptor de IgE que conduce a la desgranulación puede dividirse en dos fases: corriente arriba y corriente abajo. La fase corriente arriba incluye todos los procesos que tienen lugar antes de la movilización de ión calcio (ilustrado como "Ca^{2+}" en la Figura 2). La fase corriente abajo incluye la movilización de ión calcio y todos los procesos corriente abajo de la misma. Los compuestos que inhiben la desgranulación inducida por IgE pueden actuar en cualquier punto de la cascada de transducción de señales del receptor de IgE. Los compuestos que inhiben selectivamente la desgranulación inducida por IgE corriente arriba actúan para inhibir esa porción de la cascada de señalización del receptor de IgE corriente arriba del punto en el que se induce la movilización de ión calcio. En ensayos basados en células, los compuestos que inhiben selectivamente la desgranulación inducida por IgE corriente arriba inhiben la desgranulación de mastocitos o basófilos que se activan o estimulan con un alergeno específico de IgE o un agente de unión (tal como un anticuerpo anti-IgE) pero no inhiben de forma apreciable la desgranulación de mastocitos o basófilos que se activan o estimulan con agentes de la desgranulación que evitan la ruta de señalización del receptor de IgE, tales como, por ejemplo, los ionóforos de calcio ionomicina y A23187.
Las expresiones "desgranulación inducida por ionóforos" o "desgranulación mediada por ionóforos" se refiere a la desgranulación de un mastocito o basófilo que se produce tras la exposición a un ionóforo de calcio, tal como, por ejemplo, ionomicina o A23187.
6.2 Los compuestos de quinolina
6.3 Los compuestos de la invención son generalmente compuestos de quinolina de acuerdo con la fórmula estructural (I):
2
y sales, hidratos, solvatos y N-óxidos de la misma, en la que:
R^{1} es un grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{7} y R^{8} se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, un grupo electronegativo, -OR^{d}, -SR^{d}, haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR^{c}-arilo, -NR^{c}-heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}, arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{9} se selecciona del grupo constituido por haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{10} se selecciona del grupo constituido por R^{a}, R^{b}, R^{a} sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R^{a} o R^{b}, -OR^{a} sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R^{a} o R^{b}, -(CH_{2})_{m}-R^{b}, -(CHR^{a})_{m}-R^{b}, -O-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
cada R^{a} se selecciona de forma independiente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), ciclohexilo, cicloalquilalquilo (C4-C11), arilo (C5-C10), fenilo, arilalquilo (C6-C16), bencilo;
cada R^{b} es un grupo adecuado seleccionado de forma independiente del grupo constituido por -OR^{d}, haloalquiloxi (C1-C3), halógeno y -CF_{3};
cada R^{c} es de forma independiente un grupo protector, R^{a} o R^{a} sustituido opcionalmente con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada R^{d} es de forma independiente un grupo protector, R^{a} o R^{a} opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada m es de forma independiente un número entero de 1 a 3;
A es O, NH o CO
B es CO, NH u O, con tal de que A y B no sean ambos O y que A y B no sean O y NH;
a condición de que:
el compuesto no sea 6-fluoro-2-metil-4-quinolil-5-metil-3-fenilisooxazol-4-carboxilato.
En una realización, R^{1} es un grupo metilo.
En otra realización, R^{1} es un grupo metilo y R^{9} es un grupo fenilo sustituido o no sustituido. Los sustituyentes adecuados en el grupo fenilo incluyen, por ejemplo, átomos de halógeno tales como fluoro, cloro y combinaciones de los mismos.
En otra realización más, R^{2} se selecciona de un átomo de hidrógeno, grupos fenilo, metilo, -CO_{2}Et, -CF_{3}, Cl, -NHCH_{3}, 3 
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En otra realización, R^{6} es un átomo de hidrógeno, F, -OCF_{3} o Br.
En otra realización más, R^{7} es un átomo de hidrógeno, Cl o CF_{3}.
En otro aspecto de la invención, R^{1} es un grupo metilo, R^{9} es un grupo fenilo sustituido o no sustituido, R^{2} es un átomo de hidrógeno, un grupo fenilo, metilo, -CO_{3}Et, -CF_{3}, Cl, -NHCH_{3}, o 4 400 o 5 R^{6} es un átomo de hidrógeno, F, -OCF_{3} o Br; y R^{7} es un átomo de hidrógeno, Cl o -CF_{3}.
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En otro aspecto, los compuestos de fórmula estructural (I) incluyen cualquier compuesto seleccionado de la Tabla 1 que inhiba la desgranulación de mastocitos y/o basófilos medida en un ensayo in vitro, opcionalmente sujeto a la condición de que el compuesto no sea un compuesto excluido por la definición descrita anteriormente. En una realización específica, dichos compuestos tienen una CI_{50} de aproximadamente 20 \muM o menos, medida en un ensayo de desgranulación in vitro, tal como uno de los ensayos de desgranulación descritos en la sección de Ejemplos.
En otra realización más, los compuestos de fórmulas estructurales (I) incluyen cualquier compuesto seleccionado de la Tabla 1 que inhiba la cascada del receptor de IgE con una CI_{50} de aproximadamente 20 \muM o menos, medida en un ensayo in vitro, tal como uno de los ensayos in vitro proporcionado en la sección de Ejemplos, opcionalmente sujeto a la condición de que el compuesto no sea un compuesto excluido por la definición descrita anteriormente.
Los especialistas en la técnica entenderán que los compuestos de quinolina descritos en la presente memoria pueden incluir grupos funcionales que pueden enmascararse con progrupos para generar profármacos. Dichos profármacos son habitualmente, pero no es necesario que sean, farmacológicamente inactivos hasta que se convierten en su forma farmacológica activa. De hecho, muchos de los compuestos activos de quinolina descritos en la Tabla 1, posteriormente, incluyen pro-restos que pueden hidrolizarse o escindirse de otro modo en condiciones de uso. Por ejemplo, los grupos éster comúnmente experimentan una hidrólisis catalizada por ácidos para dar el ácido carboxílico precursor cuando se exponen a las condiciones ácidas del estómago. Por lo tanto, cuando se administran a un sujeto por vía oral, las quinolinas que incluyen restos éster pueden considerarse profármacos de su correspondiente ácido carboxílico, independientemente de que la forma éster sea farmacológicamente activa. Con respecto a la Tabla 1, numerosas quinolinas de la invención que contienen éster son activas en su forma éster de "profármaco".
En los profármacos de la invención, cualquier resto funcional disponible pueden enmascararse con un progrupo para dar un profármaco. Los grupos funcionales dentro de los compuestos de quinolina que pueden enmascararse con progrupos para la inclusión en un pro-resto incluyen, pero sin limitación, aminas (primarias y secundarias), hidroxilos, sulfanilos (tioles), carboxilos, etc. Se conocen en la técnica múltiples progrupos adecuados para enmascarar dichos grupos funcionales para dar pro-restos que pueden escindirse en las condiciones deseadas de uso. Todos estos progrupos, solos o en combinaciones, pueden incluirse en los profármacos de la invención.
En una realización ilustrativa, los profármacos de la invención son compuestos de acuerdo con la fórmula estructural (I) en la que R^{c} y R^{d} pueden ser, además de las alternativas definidas anteriormente, un progrupo.
Los especialistas en la técnica entenderán que muchos de los compuestos y profármacos de la invención, así como las diversas especies de compuestos descritas y/o ilustradas específicamente en la presente memoria, pueden presentar el fenómeno del tautomerismo, isomerismo conformacional, isomerismo geométrico y/o isomerismo óptico. Por ejemplo, los compuestos y profármacos de la invención pueden incluir uno o más centros quirales y/o dobles enlaces y, como consecuencia, pueden existir como estereoisómeros, tales como isómeros de doble enlace (es decir, isómeros geométricos), enantiómeros y diastereómeros y mezclas de los mismos, tales como mezclas racémicas. Como otro ejemplo, los compuestos y profármacos de la invención pueden existir en diversas formas tautoméricas, incluyendo la forma enol, la forma ceto y mezclas de las mismas. Como los diversos nombres de compuestos, fórmulas y dibujos de compuestos dentro de la memoria descriptiva y de las reivindicaciones pueden representar sólo una de las formas tautoméricas, isoméricas conformacionales, isoméricas ópticas o isoméricas geométricas posibles, se entenderá que la invención incluye cualquier forma tautomérica, isomérica conformacional, isomérica óptica y/o isomérica geométrica de los compuestos o profármacos que tenga una o más de las utilidades descritas en la presente memoria, así como mezclas de estas diversas formas isoméricas diferentes.
Además, los especialistas entenderán que cuando las listas de sustituyentes alternativos incluyen miembros que, debido a requerimientos de valencia u otras razones no pueden usarse para sustituir un grupo en particular, se pretende que la lista se lea en el contexto para incluir los miembros de la lista que sean adecuados para sustituir el grupo en particular. Por ejemplo, los especialistas entenderán que aunque pueden usarse todas las alternativas enumeradas para R^{b} para sustituir un grupo alquilo, algunas de las alternativas, tal como =O, no pueden usarse para sustituir un grupo fenilo. Se entenderá que sólo se tienen por objeto las combinaciones de parejas grupo-sustituyente posibles.
Los compuestos y/o profármacos de la invención pueden identificarse por su estructura química o por su nombre químico. Cuando la estructura química y el nombre químico estén en conflicto, la estructura química es determinante de la identidad del compuesto específico.
Dependiendo de la naturaleza de los diversos sustituyentes, los compuestos y profármacos de quinolina de la invención pueden estar en la forma de sales. Dichas sales incluyen sales adecuadas para usos farmacéuticos ("sales farmacéuticamente aceptables"), sales adecuadas para usos veterinarios, etc. Dichas sales pueden obtenerse a partir de ácidos o bases, como es bien conocido en la técnica.
En una realización, la sal es una sal farmacéuticamente aceptable. Generalmente, son sales farmacéuticamente aceptables las sales que conservan sustancialmente una o más de las actividades farmacológicas deseadas del compuesto precursor y que son adecuadas para la administración a seres humanos. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos o ácidos orgánicos. Los ácidos inorgánicos adecuados para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen, a modo de ejemplo y sin limitación, ácidos hidrácidos (por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, etc.), ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares. Los ácidos orgánicos adecuados para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen, a modo de ejemplo y sin limitación, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácidos alquilsulfónicos (por ejemplo, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 1,2-etano-disulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, etc.), ácidos arilsulfónicos (por ejemplo, ácido bencenosulfónico, ácido 4-clorobencenosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido 4-toluenosulfónico, ácido canforsulfónico, etc.), ácido 4-metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-eno-1-carboxílico, ácido glucoheptónico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetilacético, ácido terc-butilacético, ácido lauril sulfúrico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucónico y similares.
Las sales farmacéuticamente aceptables también incluyen sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto precursor se reemplaza por un ión metálico (por ejemplo, un ión de metal alcalino, un ión de metal alcalinotérreo o un ión de aluminio) o se coordina con una base orgánica (por ejemplo, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, N-metilglucamina, morfolina, piperidina, dimetilamina, dietilamina, etc.).
Los compuestos de quinolina y de la invención, así como las sales de los mismos, también pueden estar en la forma de hidratos, solvatos y N-óxidos, como es bien conocido en la técnica.
6.4 Métodos de Síntesis
Los compuestos y profármacos de la invención pueden sintetizarse a través de una diversidad de rutas sintéticas diferentes usando materiales de partida disponibles en el mercado y/o materiales de partida preparados por métodos sintéticos convencionales. Se encuentran métodos ejemplares adecuados que pueden adaptarse de forma rutinaria para sintetizar los compuestos y profármacos de quinolina de la invención en el documento WO 94/24095, cuya descripción se incorpora en la presente memoria como referencia. Se proporcionan ejemplos específicos que describen la síntesis de numerosos compuestos y profármacos de la invención, así como intermedios para los mismos, en la sección de Ejemplos. Todos los compuestos de fórmulas estructurales (I) pueden prepararse mediante una adaptación de rutina de estos métodos.
Se describen una diversidad de rutas sintéticas ejemplares que pueden usarse para sintetizar los compuestos de quinolina de la invención en la Figura 4 y en los Esquemas 1 a 6, a continuación. Estos métodos pueden adaptarse de forma rutinaria para sintetizar los compuestos de quinolina de acuerdo con la fórmula (I).
6.5 Inhibición de la desgranulación de mastocitos inducida por IgE
Los compuestos activos de quinolina de la invención inhiben la cascada de señalización de IgE que conduce, entre otras cosas, a la desgranulación de mastocitos y/o basófilos. Tanto los mastocitos como los basófilos desempeñan un papel central en los trastornos inducidos por alergenos, incluyendo, por ejemplo, rinitis alérgica y asma. Con respecto a la Figura 1, tras la exposición a alergenos, que pueden ser, entre otras cosas, polen o parásitos, se sintetizan anticuerpos de IgE específicos de alergeno por células B activadas por IL-4 (o IL-13) y otros mensajeros para cambiar a síntesis de anticuerpos específicos de clase IgE. Estas IgE específicas de alergeno se unen al receptor Fc\varepsilon de alta afinidad (Fc\varepsilonR1 o receptor de IgE) presente en mastocitos y/o basófilos. Tras la unión del antígeno, las IgE unidas a Fc\varepsilonR1 se entrecruzan y se activa la ruta de transducción de señales del receptor de IgE que conduce la desgranulación de las células y a la consiguiente liberación y/o síntesis de un hospedador de mediadores químicos, incluyendo histamina, proteasas (por ejemplo, triptasa y quimasa), mediadores lipídicos tales como leucotrienos (por ejemplo, LTC4), factor activador de plaquetas (PAF) y prostaglandinas (por ejemplo, PGD2) y una serie de citocinas, incluyendo TNF-\alpha, IL-4, IL-13, IL-5, IL-6, IL-8, GMCSF, VEGF y TGF-\beta. La liberación y/o síntesis de estos mediadores de mastocitos y/o basófilos es responsable de las respuestas de fase temprana y tardía inducidas por alergenos y está directamente ligada a acontecimientos corriente abajo que conducen a un estado inflamatorio mantenido.
Los acontecimientos moleculares en la ruta de transducción de señales del receptor de IgE que conduce a la liberación de mediadores preformados a través de la desgranulación y a la liberación y/o síntesis de otros mediadores químicos son bien conocidos y se ilustran en la Figura 2. Con respecto a la Figura 2, el receptor de IgE (Fc\varepsilonR1) es un receptor heterotetramérico compuesto por una subunidad alfa de unión a IgE, una subunidad beta y dos subunidades gamma. El entrecruzamiento del receptor de IgE unido a IgE por agentes de unión multivalentes (incluyendo, por ejemplo, alergenos específicos de IgE o anticuerpos anti-IgE) induce la rápida asociación y activación de la quinasa relacionada con Src Lyn. Lyn fosforila motivos de activación basados en tirosina de inmunorreceptores (ITAMS) en las subunidades beta y gamma intracelulares, que conduce al reclutamiento de Lyn adicional hacia la subunidad beta y de quinasa Syk hacia las subunidades gamma. Estas quinasas asociadas a receptor que se activan por fosforilación intra e intermolecular fosforilan otros componentes de la ruta, tales como la quinasa Btk, LAT y la fosfolipasa C-gamma. La PLC-gamma activada inicia rutas que conducen a la activación de proteína quinasa C y a la movilización de Ca^{2+}, requiriéndose ambas para la desgranulación. El entrecruzamiento de Fc\varepsilonR1 también activa las tres clases principales de proteína quinasas activadas por mitógeno (MAP), es decir, ERK1/2, JNK1/2 y p38. La activación de estas rutas es importante en la regulación transcripcional de mediadores proinflamatorios tales como TNF-\alpha e IL-6, así como del mediador lipídico leucotrieno CA (LTC4).
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La capacidad de los compuestos de quinolina de la invención para inhibir la cascada de señalización del receptor de IgE puede determinarse o confirmarse de una forma sencilla en ensayos in vitro. Se proporcionan ensayos adecuados en la sección de Ejemplos. En un ensayo típico, se cultivan primero mastocitos o basófilos en presencia de IL-4, factor de células madre (SCF), IL-6 e IgE para aumentar la expresión del receptor de IgE, se exponen a un compuesto de ensayo de quinolina de la invención y se estimulan con anticuerpos anti-IgE (o, como alternativa, un alergeno específico de IgE). Después de la incubación puede cuantificarse la cantidad de un mediador químico u otro agente químico liberado y/o sintetizado como consecuencia de la activación de la cascada de señalización del receptor de IgE usando técnicas convencionales y compararse con la cantidad del mediador o agente liberado de células de control (es decir, células que se estimulan pero que no exponen al compuesto de ensayo). La concentración de compuesto de ensayo que produce una reducción del 50% en la cantidad del mediador o agente medido en comparación con las células de control es la CI_{50} del compuesto de ensayo. El origen de los mastocitos o basófilos usados en el ensayo dependerá, en parte, del uso deseado para los compuestos, y será evidente para los especialistas en la técnica. Por ejemplo, si los compuestos se usarán para preparar medicamentos para tratar o prevenir una enfermedad particular en seres humanos, una fuente conveniente de mastocitos o basófilos es un ser humano u otro animal que constituya un modelo clínico aprobado o conocido para la enfermedad en particular. Por lo tanto, dependiendo de la aplicación particular, los mastocitos o basófilos pueden obtenerse a partir de una gran diversidad de fuentes animales que varían desde, por ejemplo, mamíferos inferiores tales como ratones y ratas hasta perros, ovejas y otros mamíferos comúnmente empleados en ensayos clínicos, hasta mamíferos superiores tales como monos, chimpancés y simios, hasta seres humanos. Los ejemplos específicos de células adecuadas para llevar a cabo los ensayos in vitro incluyen, pero sin limitación, basófilos de roedores o humanos, líneas celulares de leucemia de basófilos de rata, mastocitos primarios de ratón (tales como mastocitos de ratón obtenidos de la médula ósea "BMMC") y mastocitos primarios humanos aislados de cordón umbilical ("CHMC") u otros tejidos tales como pulmón. Se conocen bien métodos para el aislamiento y cultivo de estos tipos celulares o se proporcionan en la sección de Ejemplos (véase, por ejemplo, Demo et al., 1999, Cytometry 36 (4): 340-348 y la solicitud en trámite junto con la presente de número de serie 10/053.355, presentada el 8 de noviembre de 2001, cuyas descripciones se incorporan en la presente memoria como referencia).
Como entenderán los especialistas, el mediador o agente cuantificado no es crítico. El único requerimiento es que sea un mediador o agente liberado y/o sintetizado como consecuencia del inicio o de la activación de la cascada de señalización del receptor de IgE. Con respecto a la Figura 1, la activación de de esta cascada de señalización conduce a numerosos acontecimientos corriente abajo. Por ejemplo, la activación de la cascada de señalización del receptor de IgE conduce a la liberación inmediata (es decir, en 1-3 minutos después de la activación del receptor) de una diversidad de mediadores químicos y agentes preformados mediante la desgranulación. Por lo tanto, en una realización, el mediador o agente cuantificado puede ser específico de gránulos (es decir, presente en gránulos pero no en el citoplasma celular en general). Los ejemplos de mediadores o agentes específicos de gránulos que pueden cuantificarse para determinar y/o confirmar la actividad de un compuesto de quinolina de la invención incluyen, pero sin limitación, enzimas específicas de gránulos, tales como hexosaminidasa y triptasa y componentes específicos de gránulos, tales como histamina y serotonina. Se conocen bien ensayos para cuantificar dichos factores y, en muchos casos, están disponibles en el mercado. Por ejemplo, la liberación de triptasa y/o hexosaminidasa pueden cuantificarse por incubación de las células con sustratos escindibles que emiten fluorescencia tras la escisión y cuantificación de la cantidad de fluorescencia producida usando técnicas convencionales. Dichos sustratos fluorogénicos escindibles están disponibles en el mercado. Por ejemplo, los sustratos fluorogénicos Z-Gly-Pro-Arg-AMC (Z = benciloxicarbonilo; AMC = 7-amino-4-metilcumarina; BIOMOL Research Laboratories, Inc., Plymouth Meeting, PA 19462, Nº de catálogo P-142) y Z-Ala-Lys-Arg-AMC (Enzyme Systems Products, una división de ICN Biomedicals, Inc., Livermore, CA 94550, Nº de catálogo AMC-246) pueden usarse para cuantificar la cantidad de triptasa liberada. El sustrato fluorogénico 4-metilumbeliferil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida (Sigma, St. Louis, MO, Nº de catálogo 69585) puede usarse para cuantificar la cantidad de hexosaminidasa liberada. La liberación de histamina puede cuantificarse usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) disponible en el mercado, tal como el ensayo de ELISA de histamina de Immunotech Nº IM2015 (Beckman-Coulter, Inc.). Se proporcionan métodos específicos de cuantificación de la liberación de triptasa, hexosaminidasa e histamina en la sección de Ejemplos. Cualquiera de estos ensayos puede usarse para determinar o confirmar la actividad de los compuestos de quinolina de la invención.
De nuevo, con respecto a la Figura 1, la desgranulación es sólo una de diversas respuestas iniciadas por la cascada de señalización del receptor de IgE. Además, la activación de esta ruta de señalización conduce a la síntesis de novo y a la liberación de citocinas y quimiocinas tales como IL-4, IL-5, IL-6, TNF-\alpha, IL-13 y MIP1-\alpha) y a la liberación de mediadores lipídicos tales como leucotrienos (por ejemplo, LTC4), factor activador de plaquetas (PAF) y prostaglandinas. Por consiguiente, los compuestos de quinolina de la invención también pueden evaluarse para determinar la actividad por cuantificación de la cantidad de uno o más de estos mediadores liberados y/o sintetizados por células activadas.
A diferencia de los componentes específicos de gránulos analizados anteriormente, estos mediadores de "fase tardía" no se liberan inmediatamente después de la activación de la cascada de señalización del receptor de IgE. Por consiguiente, cuando se cuantifican estos mediadores de fase tardía, debe tenerse cuidado para asegurar que el cultivo celular activado se incuba durante un tiempo suficiente para dar como resultado la síntesis (si es necesaria) y la liberación del mediador que se cuantifica. Generalmente, el PAF y mediadores lipídicos tales como leucotrieno C4 se liberan a los 3-30 min después de la activación del receptor de IgE. Las citocinas y otros mediadores de fase tardía se liberan aproximadamente a las 4-8 horas después de la activación del receptor de IgE. Serán evidentes para los especialistas en la técnica tiempos de incubación adecuados para un mediador específico. Se proporciona una orientación y ensayos específicos en la sección de Ejemplos.
La cantidad de un mediador de fase tardía en particular liberado puede cuantificarse usando cualquier técnica convencional. En una realización, la cantidad o cantidades pueden cuantificarse usando ensayos de ELISA. Están disponibles kit de ensayo de ELISA adecuados para cuantificar la cantidad de TNF\alpha, IL-4, IL-5, IL-6 y/o IL-13 liberados de, por ejemplo, Biosource International, Inc., Camarillo, CA 93012 (véanse, por ejemplo, los Nº de catálogo KHC3011, KHC0042, KHC0052, KHC0061 y KHC0132). Están disponibles kits de ensayo de ELISA adecuados para cuantificar la cantidad de leucotrieno C4 (LTC4) liberado de las células de Cayman Chemical Co., Ann Arbor, MI 48108 (véase, por ejemplo, el Nº de catálogo 520211).
Típicamente, los compuestos activos de quinolina de la invención presentarán CI_{50} con respecto a la desgranulación inducida por IgE o mediada por receptor de IgE y/o la liberación o síntesis de mediadores de aproximadamente 20 \muM o inferiores, medidas en un ensayo in vitro, tal como uno de los ensayos in vitro descritos anteriormente o en la sección de Ejemplos. Por supuesto, los especialistas entenderán que son particularmente útiles compuestos que presentan CI_{50} inferiores, por ejemplo, del orden de 10 \muM, 1 \muM, 100 nM, 10 nM, 1 nM o incluso inferiores. Los especialistas entenderán que diversos mediadores analizados anteriormente pueden inducir diferentes efectos adversos o presentar diferentes potencias con respecto al mismo efecto adverso. Por ejemplo, el mediador lipídico LCT4 es un potente vasoconstrictor -es aproximadamente 1000 veces más potente en la inducción de vasoconstricción que la histamina. Como otro ejemplo, además de mediar reacciones de hipersensibilidad atópicas o de Tipo I, las citocinas también pueden provocar remodelación tisular y proliferación celular. Por lo tanto, aunque los compuestos que inhiben la liberación y/o síntesis de uno cualquiera de los mediadores químicos analizados anteriormente son útiles, los especialistas entenderán que los compuestos que inhiben la liberación y/o síntesis de multitud, o incluso de todos los mediadores descritos anteriormente encuentran un uso particular, puesto que dichos compuestos son útiles para mejorar o evitar por completo multitud, o incluso todos los efectos adversos inducidos por los mediadores particulares. Por ejemplo, los compuestos que inhiben la liberación de los tres tipos de mediadores -específicos de gránulos, lipídicos y citocinas- son útiles para tratar o prevenir reacciones de hipersensibilidad de Tipo I inmediatas, así como los síntomas crónicos asociados con las mismas.
Pueden identificarse compuestos de la invención capaces de inhibir la liberación de más de un tipo de mediador (por ejemplo, específicos de gránulos o de fase tardía) por determinación de la CI_{50} con respecto a un mediador representativo de cada clase usando los diversos ensayos in vitro descritos anteriormente (u otros ensayos in vitro equivalentes). Los compuestos de la invención que son capaces de inhibir la liberación de más de un tipo de mediador presentarán típicamente una CI_{50} para cada tipo de mediador ensayado de menos de aproximadamente 20 \muM. Por ejemplo, un compuesto que presenta una CI_{50} de 1 \muM con respecto a la liberación de histamina (CI_{50}^{histamina}) y una CI_{50} de 1 nM con respecto a la síntesis y/o liberación de leucotrieno LTC4 (CI_{50}^{LTC4}) inhibe tanto la liberación de mediadores inmediatos (específicos de gránulos) como de fase tardía. Como otro ejemplo específico, un compuesto que presenta una CI_{50}^{triptasa} de 10 \muM, una CI_{50}^{LTC4} de 1 \muM y una CI_{50}^{IL-4} de 1 \muM inhibe la liberación de mediadores inmediatos (específicos de gránulos), lipídicos y citocinas. Aunque los ejemplos específicos anteriores utilizan las CI_{50} de un mediador representativo de cada clase, los especialistas entenderán que pueden obtenerse las CI_{50} de multitud, o incluso de todos los mediadores que comprenden una o más de las clases. La cantidad o cantidades y la identidad o identidades de mediadores para los que pueden determinarse los datos de CI_{50} para un compuesto y una aplicación en particular serán evidentes para los especialistas en la técnica.
Una clase particularmente útil de compuestos incluyen los compuestos de quinolina que inhiben la liberación de mediadores inmediatos específicos de gránulos y mediadores de fase tardía con CI_{50} aproximadamente equivalentes. Por aproximadamente equivalentes se entiende que las CI_{50} para cada tipo de mediador están dentro de aproximadamente un intervalo de 10 veces uno de otro. Otra clase particularmente útil de compuestos incluye los compuestos de quinolina que inhiben la liberación de mediadores específicos de gránulos, mediadores lipídicos y mediadores de citocinas con CI_{50} aproximadamente equivalentes. En una realización específica, dichos compuestos inhiben la liberación de los siguientes mediadores con CI_{50} aproximadamente equivalentes: histamina, triptasa, hexosaminidasa, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, TNF\alpha y LTC4. Dichos compuestos son particularmente útiles para, entre otras cosas, mejorar o evitar por completo tanto las respuestas de fase temprana como tardía asociadas con reacciones de hipersensibilidad de Tipo I atópicas o inmediatas.
De una forma ideal, la capacidad para inhibir la liberación de todos los tipos deseados de mediadores residirá en un solo compuesto. Sin embargo, también pueden identificarse mezclas de compuestos que logren el mismo resultado. Por ejemplo, puede usarse un primer compuesto que inhiba la liberación de mediadores específicos de gránulos en combinación con un segundo compuesto que inhiba la liberación y/o síntesis de mediadores de citocinas.
Además de la ruta de la desgranulación inducida por IgE (o mediada por receptor de IgE) analizada anteriormente, la desgranulación de mastocitos y/o basófilos puede inducirse por otros agentes. Por ejemplo, la ionomicina, un ionóforo de calcio que evita la maquinaria temprana de transducción de señales del receptor de IgE de la célula induce directamente un flujo de calcio que desencadena la desgranulación. De nuevo, con respecto a la Figura 2, la PLC\gamma activada inicia rutas que conducen a, entre otras cosas, la movilización de ión calcio y la posterior desgranulación. Como se ilustra, esta movilización de Ca^{2+} se desencadena tarde en la ruta de transducción de señales del receptor de IgE. Como se ha mencionado anteriormente, como se ilustra en la Figura 3, la ionomicina induce directamente la movilización de Ca^{2+} y un flujo de Ca^{2+} que conduce la desgranulación. Otros ionóforos que inducen la desgranulación de esta forma incluyen A23187. La capacidad de ionóforos inductores de la granulación, tales como ionomicina, de evitar las fases tempranas de la cascada de señalización del receptor de IgE puede usarse como una contraselección para identificar compuestos activos de la invención que ejerzan específicamente su actividad inhibidora de la desgranulación por bloqueo o inhibición de la cascada temprana de señalización del receptor de IgE que se inicia cuando el receptor de IgE se entrecruza con antígeno. Los compuestos que inhiben específicamente dicha desgranulación temprana mediada por receptor de IgE no sólo inhiben la desgranulación y posterior liberación rápida de histamina, triptasa y otros contenidos de gránulos, sino que también inhiben las rutas de activación proinflamatorias que provocan la liberación de TNF\alpha, IL-4, IL-13 y los mediadores lipídicos tales como LTC4. Por lo tanto, los compuestos que inhiben específicamente dicha desgranulación temprana mediada por receptor de IgE bloquean o inhiben no sólo las reacciones de hipersensibilidad atópicas o de Tipo I agudas, sino también las respuestas tardías que implican múltiples mediadores inflamatorios.
Son compuestos de la invención que inhiben específicamente la desgranulación temprana de mastocitos y/o basófilos mediada por receptor de IgE los compuestos que inhiben la desgranulación inducida por IgE (por ejemplo, que tienen una CI_{50} de menos de aproximadamente 20 \muM con respecto a la liberación de un mediador o componente específico de gránulos, medida en un ensayo in vitro con células estimuladas con un agente de unión a IgE), pero que no inhiben de forma apreciable la desgranulación inducida por ionóforos. En una realización, se considera que los compuestos no inhiben de forma apreciable la desgranulación inducida por ionóforos si presentan una CI_{50} de la desgranulación inducida por ionóforos de más de aproximadamente 20 \muM, medida en un ensayo in vitro. Por supuesto, son particularmente útiles compuestos activos que presentan CI_{50} incluso superiores de desgranulación inducida por ionóforos o que no inhiben en absoluto la desgranulación inducida por ionóforos. En otra realización, se considera que los compuestos no inhiben de forma apreciable la desgranulación inducida por ionóforos si presentan una diferencia mayor de 10 veces en sus CI_{50} de la desgranulación mediada por receptor de IgE y desgranulación inducida por ionóforos, medidas en un ensayo in vitro. Los ensayos adecuados para determinar la CI_{50} de la desgranulación inducida por ionóforos incluyen cualquiera de los ensayos de desgranulación descritos anteriormente, con la modificación de que las células se estimulan o se activan con un ionóforo de calcio inductor de la desgranulación, tal como ionomicina o A23187 (A. G. Scientific, San Diego, CA) en lugar de con anticuerpos anti-IgE o un alergeno específico de IgE. Se proporcionan ensayos específicos para evaluar la capacidad de un compuesto de quinolina de la invención en particular para inhibir la desgranulación inducida por ionóforos en la sección de Ejemplos.
Como entenderán los especialistas, los compuestos que presentan un alto grado de selectividad de desgranulación inducida por IgE encuentran un uso particular, tal como compuestos que se dirigen selectivamente hacia la cascada del receptor de IgE y no interfieren con otros mecanismos de desgranulación. Los compuestos que presentan un alto grado de selectividad son generalmente 10 veces o más selectivos para la desgranulación inducida por IgE sobre la desgranulación inducida por ionóforos, tal como la desgranulación inducida por ionomicina.
6.6. Usos y composiciones
Como se ha analizado anteriormente, los compuestos activos de la invención inhiben la cascada de señalización del receptor de IgE que conduce a la liberación y/o síntesis de mediadores químicos de mastocitos y/o basófilos, a través de la desgranulación o de otros procesos. Como también se analiza, muchos de los compuestos activos ejercen su actividad inhibidora actuando tempranamente en la ruta de transducción de señales del receptor de IgE. Como consecuencia de estas actividades, los compuestos activos de la invención pueden usarse en una diversidad de contextos in vitro, in vivo y ex vivo para regular o inhibir la liberación de mediadores químicos de mastocitos y/o basófilos. Por ejemplo, en una realización, los compuestos pueden usarse para preparar agentes para usar como controles o patrones en ensayos de selección in vitro o in vivo para identificar otros compuestos capaces de inhibir la desgranulación de mastocitos y/o basófilos. En otra realización, los compuestos activos pueden usarse para preparar medicamentos para regular o inhibir la cascada de señalización del receptor de IgE y/o la desgranulación de mastocitos y/o basófilos inducida por IgE, como un enfoque terapéutico para el tratamiento o la prevención de enfermedades caracterizadas por, causadas por y/o asociadas con la liberación o síntesis de mediadores químicos o con la desgranulación de mastocitos y/o basófilos inducida por IgE. Dichos tratamientos pueden administrarse a animales en contextos veterinarios o a seres humanos. Las enfermedades que se caracterizan por, están causadas por o se asocian con dicha liberación, síntesis o desgranulación de mediadores y que, por lo tanto, pueden tratarse o prevenirse con medicamentos preparados usando los compuestos activos incluyen, a modo de ejemplo y sin limitación, atopias o reacciones alérgicas o de hipersensibilidad anafilácticas, alergias (por ejemplo, conjuntivitis alérgica, rinitis alérgica, asma atópica, dermatitis atópica y alergias alimentarias), cicatrización de mala calidad, (por ejemplo, esclerodermia, fibrosis aumentada, queloides, cicatrices postquirúrgicas, fibrosis pulmonar, espasmos vasculares, migrañas, lesiones de reperfusión y post-infarto de miocardio), enfermedades asociadas con destrucción tisular (por ejemplo, EPOC, cardiobronquitis y post-infarto de miocardio), enfermedades asociadas con inflamación tisular (por ejemplo, intestino irritable, colon irritable y enfermedad inflamatoria del colon), inflamación, ciertas enfermedades autoinmunes (por ejemplo, lupus, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, etc.) y cicatrización.
Cuando se usan para tratar o prevenir dichas enfermedades, los compuestos activos pueden administrarse en solitario, como mezclas de uno o más compuestos activos o en mezcla o en combinación con otros agentes útiles para tratar dichas enfermedades y/o los síntomas asociados con dichas enfermedades. Los compuestos activos también pueden administrarse en mezcla o combinación con agentes útiles para tratar otras enfermedades o males, tales como esteroides, estabilizantes de membrana, inhibidores de 5LO, inhibidores de la síntesis y de receptores de leucotrienos, inhibidores del cambio de isotipo de IgE o de la síntesis de IgE, \beta-agonistas, inhibidores de la triptasa y antihistamínicos, por nombrar algunos. Los compuestos activos pueden administrarse como tales en la forma de profármacos o como composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto activo o profármaco.
Pueden fabricarse composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos activos de la invención (o profármacos de los mismos) por medio de procesos de mezcla, disolución, granulación, levigación para fabricación de grageas, emulsión, encapsulación, inmovilización o liofilización convencionales. Las composiciones pueden formularse de una forma convencional usando uno más vehículos, diluyentes, excipientes o coadyuvantes fisiológicamente aceptables que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden usarse farmacéuticamente.
El compuesto activo o profármaco puede formularse en las composiciones farmacéuticas como tal o en la forma de un hidrato, solvato, N-óxido o sal farmacéuticamente aceptable, como se ha descrito anteriormente. Típicamente, dichas sales son más solubles en soluciones acuosas que los ácidos y bases libres correspondientes, pero también pueden formarse sales que tengan una solubilidad inferior que los ácidos y bases libres correspondientes.
Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden adoptar una forma adecuada para prácticamente cualquier modo de administración, incluyendo, por ejemplo, la administración por vía tópica, ocular, oral, bucal, sistémica, nasal, por inyección, transdérmica, rectal, vaginal, etc., o una forma adecuada para la administración por inhalación o insuflación.
Para la administración por vía tópica, el compuesto o compuestos activos o el profármaco o profármacos pueden formularse como soluciones, geles, pomadas, cremas, suspensiones, etc., como se conocen bien en la técnica.
Las formulaciones sistémicas incluyen las diseñadas para la administración por inyección, por ejemplo, por inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intratecal o intraperitoneal, así como las diseñadas para la administración por vía transdérmica, oral transmucosa o pulmonar.
Las preparaciones inyectables útiles incluyen suspensiones, soluciones o emulsiones estériles del compuesto o compuestos activos en vehículos acuosos u oleosos. Las composiciones también pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en recipientes multidosis y pueden contener conservantes añadidos.
Como alternativa, la formulación inyectable puede proporcionarse en forma de polvo para su reconstitución con un vehículo adecuado, incluyendo, pero sin limitación, agua estéril sin pirógenos, tampón, solución de dextrosa, etc., antes del uso. Con este fin, el compuesto o los compuestos activos pueden secarse por cualquier procedimiento conocido en la técnica, tal como liofilización, y reconstituirse antes del uso.
Para la administración por vía transmucosa se usan en la formulación penetrantes apropiados para la barrera que se va a permear. Dichos penetrantes se conocen en la técnica.
Para la administración por vía oral, las composiciones farmacéuticas pueden adaptar la forma de, por ejemplo, pastillas, comprimidos o cápsulas preparadas por medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); cargas (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o hidrógeno fosfato de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); disgregantes (por ejemplo, almidón de patata o almidón glicolato sódico); agentes humectantes (por ejemplo, lauril sulfato sódico). Los comprimidos pueden recubrirse por métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, azúcares o recubrimientos entéricos.
Las preparaciones líquidas para la administración por vía oral pueden adoptar la forma de, por ejemplo, elixires, soluciones, jarabes o suspensiones o pueden presentarse como un producto seco para su reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso. Dichas preparaciones líquidas pueden prepararse por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o goma arábiga); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados); y conservantes (por ejemplo, metil o propil-p-hidroxibenzoatos o ácido sórbico). Las preparaciones también pueden contener sales tamponadas, conservantes, aromatizantes, colorantes y agentes edulcorantes según sea apropiado.
Las preparaciones para la administración por vía oral pueden formularse convenientemente para proporcionar una liberación controlada del compuesto activo o profármaco, como es bien conocido.
Para la administración por vía bucal, las composiciones pueden adoptar la forma de comprimidos o pastillas formuladas de una forma convencional.
Para las vías de administración rectal y vaginal, el compuesto o compuestos activos pueden formularse como soluciones (para enemas de retención), supositorios o pomadas que contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.
Para la administración por vía nasal o la administración por inhalación o insuflación, el compuesto o compuestos activos o el profármaco o profármacos pueden administrarse convenientemente en la forma de una pulverización en aerosol a partir de envases presurizados o de un nebulizador con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, fluorocarburos, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida. Las cápsulas y cartuchos para usar en un inhalador o insuflador (por ejemplo, cápsulas y cartuchos compuestos por gelatina) pueden formularse para que contengan una mezcla en polvo del compuesto y una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidón.
Un ejemplo específico de una formulación de suspensión acuosa adecuada para la administración por vía nasal usando dispositivos de pulverización nasal disponibles en el mercado incluye los siguientes ingredientes: compuesto activo o profármaco (0,5-20 mg/ml); cloruro de benzalconio (0,1-0,2 mg/ml); polisorbato 80 (TWEEN® 80; 0,5-5 mg/ml), carboximetilcelulosa sódica o celulosa microcristalina (1-15 mg/ml); feniletanol (1-4 mg/ml); y dextrosa (20-50 mg/ml). El pH de la suspensión final puede ajustarse a un intervalo de aproximadamente pH 5 a pH 7, siendo típico un pH aproximadamente pH 5,5.
Para la administración por vía ocular, el compuesto o compuestos activos o el profármaco o profármacos pueden formularse como una solución, emulsión, suspensión, etc., adecuada para la administración en el ojo. Se conocen en la técnica una diversidad de vehículos adecuados para administrar compuestos en el ojo. Se describen ejemplos específicos no limitantes en la Patente de Estados Unidos Nº 6.261.547; Patente de Estados Unidos Nº 6.197.934; Patente de Estados Unidos Nº 6.056.950; Patente de Estados Unidos Nº 5.800.807; Patente de Estados Unidos Nº 5.776.445; Patente de Estados Unidos Nº 5.698.219; Patente de Estados Unidos Nº 5.521.222; Patente de Estados Unidos Nº 5.403.841; Patente de Estados Unidos Nº 5.077.033; Patente de Estados Unidos Nº 4.882.150; y Patente de Estados Unidos Nº 4.738.851.
Para una administración prolongada, el compuesto o compuestos activos o el profármaco o profármacos pueden formularse como una preparación de liberación prolongada para la administración por implantación o inyección intramuscular. El ingrediente activo puede formularse con materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados poco solubles, por ejemplo, una sal poco soluble. Como alternativa, pueden usarse los sistemas de administración transdérmica fabricados como un disco adhesivo o parche con la liberación lentamente del compuesto o compuestos activos para su absorción percutánea. Con este fin, pueden usarse potenciadores de la permeación para facilitar la penetración transdérmica del compuesto o compuestos activos. Se describen parches transdérmicos adecuados en, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.407.713; Patente de Estados Unidos Nº 5.352.456; Patente de Estados Unidos Nº 5.332.213; Patente de Estados Unidos Nº 5.336.168; Patente de Estados Unidos Nº 5.290.561; Patente de Estados Unidos Nº 5.254.346; Patente de Estados Unidos Nº 5.164.189, Patente de Estados Unidos Nº 5,163.899; Patente de Estados Unidos Nº 5.088.977; Patente de Estados Unidos Nº 5.087.240; Patente de Estados Unidos Nº 5.008.110; y Patente de Estados Unidos Nº 4.921.475.
Como alternativa, pueden emplearse otros sistemas de administración farmacéuticos. Liposomas y emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos de administración que pueden usarse para administrar el compuesto o compuestos activos o el profármaco o profármacos. También pueden emplearse ciertos disolventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido (DMSO), aunque habitualmente a costa de una mayor toxicidad.
Las composiciones farmacéuticas pueden presentarse, si se desea, en un envase o dispositivo dispensador que puede contener una o más formas de dosificación unitaria que contienen el compuesto o compuestos activos. El envase puede comprender, por ejemplo, una lámina metálica o de plástico tal como un envase tipo blíster. El envase o dispositivo dispensador puede acompañarse de instrucciones para la administración.
6.7. Dosificaciones eficaces
El compuesto o compuestos activos o el profármaco o profármacos de la invención, o composiciones de los mismos, se usarán en general para preparar un medicamento en una cantidad eficaz para conseguir el resultado deseado, por ejemplo, en una cantidad eficaz para tratar o prevenir enfermedad en particular que se trate. El compuesto o compuestos pueden usarse para preparar un medicamento que se va a administrar terapéuticamente para conseguir un beneficio terapéutico o profilácticamente para conseguir un beneficio profiláctico. Por beneficio terapéutico se entiende la erradicación o mejoría del trastorno subyacente que se trate y/o la erradicación o mejoría de uno o más de los síntomas asociados con el trastorno subyacente, de tal modo que el paciente describa una mejora en su sensación o estado, a pesar de que el paciente todavía puede estar afectado por el trastorno subyacente. Por ejemplo, la administración de un compuesto a un paciente que padece una alergia proporciona un beneficio terapéutico no sólo cuando la respuesta alérgica subyacente se erradica o mejora, sino también cuando el paciente describe una disminución en la gravedad o en la duración de los síntomas asociados con la alergia después de la exposición al alergeno. Como otro ejemplo, el beneficio terapéutico en el contexto del asma incluye una mejora en la respiración después del comienzo de un ataque asmático o una reducción en la frecuencia o gravedad de los episodios asmáticos. El beneficio terapéutico también incluye la detención o ralentización de la evolución de la enfermedad, independientemente de que se realice o no una mejora.
Para la administración profiláctica, el compuesto puede usarse para preparar un medicamento que se va a administrar a un paciente con riesgo de desarrollar una de las enfermedades descritas anteriormente. Por ejemplo, si se desconoce si un paciente es alérgico a un fármaco en particular, el compuesto puede administrarse antes de la administración del fármaco para evitar o mejorar una respuesta alérgica al fármaco. Como alternativa, puede aplicarse una administración profiláctica para evitar el comienzo de los síntomas en un paciente diagnosticado con el trastorno subyacente. Por ejemplo, puede administrarse un compuesto a un paciente alérgico antes de la exposición esperada al alergeno. También pueden administrarse profilácticamente compuestos a individuos sanos que se exponen de forma repetida a agentes conocidos de una de las enfermedades descritas anteriormente, para prevenir el comienzo del trastorno. Por ejemplo, puede administrarse un compuesto a un individuo sano que se expone de forma repetida a un alergeno que se sabe que induce alergias, tal como látex, en un esfuerzo por prevenir que el individuo desarrolle una alergia. Como alternativa, puede administrarse un compuesto a un paciente que padezca asma antes de que tome parte en actividades que desencadenen ataques de asma para disminuir la gravedad de, o evitar por completo un episodio asmático.
La cantidad de compuesto administrada dependerá de una diversidad de factores, incluyendo, por ejemplo, la indicación particular que se trate, el modo de administración, si el beneficio deseado es profiláctico o terapéutico, la gravedad de la indicación que se trate y la edad y el peso del paciente, la biodisponibilidad del compuesto activo en particular, etc. La determinación de una dosificación eficaz está bien dentro de las capacidades de los especialistas en la técnica.
Inicialmente pueden estimarse dosificaciones eficaces a partir de ensayos in vitro. Por ejemplo, puede formularse una dosificación inicial para el uso en animales para conseguir una concentración de compuesto activo en sangre circulante o en suero que esté a o por encima de una CI_{50} del compuesto particular, medida en un ensayo in vitro, tal como el CHMC o BMMC in vitro y otros ensayos in vitro descritos en la sección de Ejemplos. El cálculo de las dosificaciones para conseguir dichas concentraciones en sangre circulante o suero teniendo en cuenta la biodisponibilidad del compuesto particular está bien dentro de las capacidades de los especialistas. Como orientación, se remite al lector a Fingl y Woodbury, "General Principles", en: Goodman and Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Capítulo 1, págs. 1-46, última edición, Pagamonon Press, y a la bibliografía citada en la presente memoria.
También pueden estimarse dosificaciones iniciales a partir de datos in vivo, tales como modelos animales. Se conocen bien en la técnica modelos animales útiles para ensayar la eficacia de compuestos para tratar o prevenir las diversas enfermedades descritas anteriormente. Se describen modelos animales adecuados de reacciones de hipersensibilidad o alérgicas en Foster, 1995, Allergy 50 (Supl. 21): 6-9, discusión 34-38 y Tumas et al., 2001, J: Allergy Clin. Immunol. 107 (6): 1025-1033. Se describen modelos animales adecuados de rinitis alérgica en Szelenyi et al., 2000, Arzneimittelforschung 50 (11): 1037-42; Kawaguchi et al., 1994, Clin. Exp. Allergy 24 (3): 238-244 y Sugimoto et al., 2000, Immunopharmacology 48 (1): 1-7. Se describen modelos animales adecuados de conjuntivitis alérgica en Carreras et al., 1993, Br. J. Ophthalmol. 77 (8): 509-514; Saiga et al., 1992, Ophthalmic Res. 24 (1): 45-50; y Kunert et al., 2001, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 42 (11): 2483-2489. Se describen modelos animales adecuados de mastocitosis sistémica en O'Keefe et al., 1987, J. Vet. Intern. Med. 1 (2): 75-80 y Bean-Knudsen et al., 1989, Vet. Pathol. 26 (1): 90-92. Se describen modelos animales adecuados del síndrome de hiper-IgE en Claman et al., 1990, Clin. Immunol. Immunopathol. 56 (1): 46-53. Se describen modelos animales adecuados de linfoma de células B en Hough et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 13853-13858 y Hakim et al., 1996, J. Immunol. 157 (12): 5503-5511. Se describen modelos animales adecuados de trastornos atópicos tales como dermatitis atópica, eccema atópico y asma atópica en Chan et. al., 2001, J. lnvest. Dermatol. 117 (4): 977-983 y Suto et al., 1999, Int. Arch. Allergy Immunol. 120 (Supl. 1): 70-75. Los especialistas pueden adaptar de forma rutinaria dicha información para determinar las dosificaciones adecuadas para la administración en seres humanos. Se describen modelos animales adecuados adicionales en la sección de Ejemplos.
Las cantidades de dosificación estarán típicamente en el intervalo de aproximadamente 0,0001 ó 0,001 ó 0,01 mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día, pero pueden ser superiores e inferiores dependiendo de, entre otros factores, la actividad del compuesto, su biodisponibilidad, el modo de administración y diversos factores analizados anteriormente. La cantidad y el intervalo de dosificación pueden ajustarse individualmente para proporcionar niveles plasmáticos del compuesto o compuestos que sean suficientes para mantener un efecto terapéutico o profiláctico. En los casos de administración local o de captación selectiva, tal como una administración local tópica, la concentración local eficaz de compuesto o compuestos activos puede no estar relacionada con la concentración plasmática. Los especialistas serán capaces de optimizar las dosificaciones locales eficaces sin una experimentación excesiva.
Los medicamentos preparados usando el compuesto o compuestos pueden administrarse una vez al día, unas pocas o varias veces al día o incluso múltiples veces al día dependiendo de, entre otras cosas, la indicación que se trate y el juicio del médico que los prescriba.
Preferiblemente, los medicamentos preparados usando el compuesto o compuestos proporcionarán un beneficio terapéutico o profiláctico sin causar una toxicidad importante. La toxicidad del compuesto o compuestos puede determinarse usando procedimientos farmacéuticos convencionales. La relación de dosis entre el efecto tóxico y el terapéutico (o profiláctico) es el índice terapéutico. Se prefiere un compuesto o compuestos que presenten índices terapéuticos elevados.
Habiéndose descrito la invención, se presentan los siguientes ejemplos a modo de ilustración y sin limitación.
7. Ejemplos 7.1 Síntesis de materiales de partida e intermedios
Los Esquemas 1 a 3 proporcionan métodos para sintetizar intermedios útiles para la preparación de los compuestos de quinolina de la presente invención. Los Esquemas 1 a 3 son ejemplos representativos de cómo pueden prepararse dichos compuestos. Un especialista en la técnica puede preparar compuestos que tengan diversos sustituyentes colgantes en la porción de quinolina de la molécula, así como en la porción de isoxazol de la molécula, en la que los sustituyentes son como se han definido anteriormente.
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7.1.1. Síntesis de cloruros de acilo de isoxazol 
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Esquema 1
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6 
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Se prepararon cloruros de acilo de isoxazol a partir de ácidos carboxílicos de isoxazol y PCl_{5}, como se muestra en el Esquema 1.
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7.1.2 Síntesis de cloruros de acilo de quinolina 
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Esquema 2
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7 
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Se prepararon cloruros de acilo de quinolina a partir de ácidos carboxílicos de quinolina y PCl_{5} como se muestra en el Esquema 2.
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7.1.3 Síntesis de aminoquinolinas 
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Esquema 3
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8 
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Pueden convertirse 4-hidroxiquinolinas en 4-aminoquinolinas usando un procedimiento de dos etapas. El tratamiento de 4-hidroxiquinolinas con POCl_{3} dio 4-cloroquinolinas, y el tratamiento posterior con cloruro de amonio produjo las 4-aminoquinolinas deseadas, como se muestra en el Esquema 3.
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7.2 Síntesis de compuestos de la invención ligados a éster 
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Esquema 4
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9 
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Se acoplaron cloruros de acilo de isoxazol y 4-hidroxiquinolinas en condiciones convencionales para dar compuestos ligados a éster, como se muestra en el Esquema 4.
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7.3 Síntesis de compuestos de la invención ligados a amida 
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Esquema 5
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10 
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En condiciones similares a las usadas para preparar compuestos de la invención ligados a éster, se acoplaron cloruros de acilo de isoxazol y 4-aminoquinolinas para producir compuestos ligados a amidas, como se muestra en el Esquema 5.
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7.4 Síntesis de compuestos de la invención ligados a amida inversa 
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Esquema 6
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11 
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En condiciones similares a las usadas para preparar compuestos de la invención ligados a amida o ligados a éster, se acoplaron aminas de isoxazol y 4-acilquinolinas para producir compuestos ligados a amida inversa, como se muestra en el Esquema 6.
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7.5 Reacciones de SNAr con compuestos de quinolina 
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Esquema 7
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12 
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Pueden convertirse compuestos de 2-cloroquinolina en análogos 2-amino sustituidos usando aminas, anilinas e indoles, como se muestra en el Esquema 7.
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7.6 Ejemplos preparativos
7.6.1 Ejemplo 9. Éster 2-metil-4-quinolinilo del ácido 5-metil-3-fenil-4-isoxazolcarboxílico (Compuesto 9) 
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13
Se calentó a reflujo una solución de ácido 5-metil-3-fenilisoxazol-4-carboxílico (1 g) y PCl_{5} (1 g) en diclorometano (20 ml) durante una hora. Después, se eliminaron el diclorometano y el POCl_{3} a presión reducida para dar cloruro de 5-metil-3-fenilisoxazol-4-carbonilo.
Se disolvieron cloruro de 5-metil-3-fenilisoxazol-4-carbonilo (100 mg) y 4-hidroxi-2-metilquinolina (250 mg) en diclorometano (10 ml) y piridina (0,2 ml). La solución de reacción se calentó a 70ºC durante una noche y después se diluyó con acetato de etilo (60 ml). La solución orgánica se lavó con agua (60 ml), se secó, se evaporó y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOAc/hexanos = 1/2) para dar el éster 2-metil-4-quinolinilo del ácido 5-metil-3-fenil-4-isoxazolcarboxílico (100 mg). ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 2,74 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 7,29 (s, 1H), 7,33-7,46 (m, 5H), 7,64-7,71 (m, 3H), 8,01 (td, J = 0,9 y 8,4 Hz, 1H); EMCL: tiempo de retención: 23,10 min; pureza: 100%; EM (m/e): 345,02 (MH^{+}).
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7.6.2 Ejemplo 35. 5-metil-3-fenil-N-(7-trifluorometil-4-quinolinil)-4-isoxazolcarboxamida (Compuesto 35) 
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Se calentó a reflujo una solución de 4-hidroxi-7-trifluorometilquinolina (1 g) en diclorometano (10 ml) y POCl_{3} (1 ml) durante media hora. Después, la reacción se interrumpió con agua (80 ml) y bicarbonato sódico a pH 7. La solución acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 60 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron y se evaporaron para dar 4-cloro-7-trifluorometilquinolina. EMCL: tiempo de retención: 31,51 min; pureza: 100%; EM (m/e): 232 (MH^{+}).
Se calentó una solución de 4-cloro-7-trifluorometilquinolina (1 g) y cloruro de amonio (1 g) en metanol (10 ml) a 70ºC durante una noche. Después, el sólido se eliminó por filtración y se lavó con metanol. El filtrado se evaporó para dar 4-amino-7-trifluorometilquinolina. EMCL: tiempo de retención: 14,81 min; pureza: 82,25%; EM (m/e): 228,11 (M+16).
Se disolvieron cloruro de 5-metil-3-fenilisoxazol-4-carbonilo (100 mg) y 4-amino-7-trifluorometilquinolina (250 mg) en diclorometano (5 ml) y piridina (0,3 ml). La solución de reacción se calentó a 70ºC durante una noche y después se diluyó con acetato de etilo (60 ml). La solución orgánica se lavó con agua (60 ml), se secó, se evaporó y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOAc/hexanos = 1/6) para dar 5-metil-3-fenil-N-(7-trifluorometil-4-quinolinil)-4-isoxazolcarboxamida (100 mg) como un sólido blanco. ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 2,91 (s, 3H), 7,33-7,69 (m, 9H), 8,39 (s, 1H, NH), 8,99 (d, J = 5,1 Hz, 1H); ^{19}F RMN (282 MHz, CDCl_{3}): \delta- 63,26; EMCL: tiempo de retención: 34,04 min; pureza: 98,90%; EM (m/e): 398,77 (MH^{+}).
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7.6.3 Ejemplo 47. 6-fluoro-2-metil-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida (Compuesto 47) 
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15 
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Se calentó a reflujo una solución de ácido 6-fluoro-2-metilquinolina-4-carboxílico (500 mg) y PCl_{5} (500 mg) en diclorometano (10 ml) durante media hora. Después se eliminó el diclorometano y el POCl_{3} a presión reducida para dar cloruro de 6-fluoro-2-metilquinolina-4-carbonilo.
Se disolvieron cloruro de 6-fluoro-2-metilquinolina-4-carbonilo (100 mg) y 4-amino-5-metil-3-fenilisoxazol (200 mg) en diclorometano (10 ml) y piridina (0,3 ml). La solución de reacción se calentó a 70ºC durante una noche y después se diluyó con acetato de etilo (60 ml). La solución orgánica se lavó con agua (60 ml), se secó, se evaporó y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOAc/hexanos = 1/1) para dar 6-fluoro-2-metil-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida (100 mg) como un sólido blanco. ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 2,58 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 7,14 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,49 (m, 4H), 7,67 (m, 2H), 7,82 (dd, J = 2,7 y 9,9 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 5,7 y 9,3 Hz, 1H); ^{19}F RMN (282 MHz, CDCl_{3}): \delta - 111,63; EMCL: tiempo de retención: 21,32 min; pureza: 99,44%; EM (m/e): 362,06 (MH^{+}).
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7.6.4 Ejemplo 71. 6-bromo-2-(3-hidroxifenil)amino-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida (Compuesto 71) 
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Se disolvieron cloruro de 6-bromo-2-cloroquinolina-4-carbonilo (500 mg) y 4-amino-5-metil-3-fenilisoxazol (400 mg) y diclorometano (15 ml) y piridina (1 ml). La solución de reacción se calentó a 70ºC durante una noche. Se recogió el precipitado blanco por filtración, se lavó con acetato de etilo y se secó para dar 6-bromo-2-cloro-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida (520 mg) como un sólido blanco. ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 2,52 (s, 3H), 7,52 (m, 3H), 7,72 (m, 2H), 8,02 (m, 4H), 10,58 (s, 1H); EMCL: tiempo de retención: 32,23 min; pureza: 100%; EM (m/e): 441,82 (MH^{+}).
La solución de 6-bromo-2-cloro-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida (50 mg) y 3-aminofenol (50 mg) en etanol (2 ml) y trietilamina (0,1 ml) se calentó en microondas a 170ºC durante una hora. La mezcla de reacción se diluyó después con acetato de etilo (60 ml). La solución orgánica se lavó con agua (60 ml), solución acuosa de HCl 1 N (2 x 60 ml), se separó, se secó, se evaporó y se recristalizó con acetato de etilo y hexanos para dar 6-bromo-2-cloro-(3-hidroxifenil)amino-N-(5-metil-3-fenilisoxazol-4-il)-4-quinolinacarboxamida (50 mg) como un sólido amarillo. ^{1}H RMN (acetona-d_{6}): \delta 2,53 (s, 3H), 6,72 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,26 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,51 (m, 4H), 7,60 (s, 1H), 7,78 (m, 3H), 7,87 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,70 (a, 1H), 9,77 (a, 1H); EMCL: tiempo de retención: 25,49 min; pureza: 100%; EM (m/e): 514,91 (M^{+}).
Los compuestos que se enumeran en la Tabla 1 se prepararon mediante los métodos descritos anteriormente. Los compuestos se caracterizaron por sus propiedades físicas, enumeradas de la forma siguiente:
Compuesto 1: EMCL: tiempo de retención: 26,57 min; pureza: 95,33%; EM (m/e): 343,99 (M+H+).
Compuesto 3: EMCL: tiempo de retención: 21,13 min; pureza: 100%; EM (m/e): 344,07 (M+H+).
Compuesto 5: EMCL: tiempo de retención: 23,74 min; pureza: 100%; EM (m/e): 330,97 (M+H+).
Compuesto 7: EMCL: tiempo de retención: 32,14 min; pureza: 98,20%; EM (m/e): 364,78 (M+H+).
Compuesto 9: EMCL: tiempo de retención: 23,10 min; pureza: 100%; EM (m/e): 345,02 (M+H+).
Compuesto 11: EMCL: tiempo de retención: 25,31 min; pureza: 95,61%; EM (m/e): 362,96 (M+H+).
Compuesto 13: EMCL: tiempo de retención: 35,11 min; pureza: 99,43%; EM (m/e): 398,93 (M+H+).
Compuesto 15: EMCL: tiempo de retención: 35,07 min; pureza: 95,72%; EM (m/e): 399,29 (M+H+).
Compuesto 17: EMCL: tiempo de retención: 37,50 min; pureza: 100%.
Compuesto 19: EMCL: tiempo de retención: 32,61 min; pureza: 98,35%; EM (m/e): 402,97 (M+H+).
Compuesto 21: EMCL: tiempo de retención: 19,66 min; pureza: 100%; EM (m/e): 301,06 (M+H+).
Compuesto 23: EMCL: tiempo de retención: 26,70 min; pureza: 100%; EM (m/e): 414,95 (M+H+).
Compuesto 25: EMCL: tiempo de retención: 26,23 min; pureza: 95,76%; EM (m/e): 396,90 (M+H+).
Compuesto 27: EMCL: tiempo de retención: 21,45 min; pureza: 81,35%; EM (m/e): 482,76 (M+H+).
Compuesto 29: EMCL: tiempo de retención: 20,65 min; pureza: 89,06%; EM (m/e): 420,31 (M+H+).
Compuesto 31: EMCL: tiempo de retención: 21,63 min; pureza: 84,95%; EM (m/e): 534,82 (M+H+).
Compuesto 33: EMCL: tiempo de retención: 21,81 min; pureza: 73,31%; EM (m/e): 516,62 (M+H+).
Compuesto 35: EMCL: tiempo de retención: 34,04 min; pureza: 98,90%; EM (m/e): 398,69 (M+H+).
Compuesto 37: EMCL: tiempo de retención: 30,73 min; pureza: 100%; EM (m/e): 336,92 (M+H+).
Compuesto 39: EMCL: tiempo de retención: 35,51 min; pureza: 99,91%; EM (m/e): 450,66 (M+H+).
Compuesto 41: EMCL: tiempo de retención: 35,15 min; pureza: 96,21%; EM (m/e): 432,84 (M+H+).
Compuesto 43: EMCL: tiempo de retención: 32,23 min; pureza: 100%; EM (m/e): 441,82 (M+H+).
Compuesto 45: EMCL: tiempo de retención: 27,89 min; pureza: 96,80%; EM (m/e): 381,79 (M+H+).
Compuesto 47: EMCL: tiempo de retención: 21,32 min; pureza: 99,44%; EM (m/e): 362,06 (M+H+).
Compuesto 49: EMCL: tiempo de retención: 15,36 min; pureza: 93,52%; EM (m/e): 300,10 (M+H+).
Compuesto 51: EMCL: tiempo de retención: 32,68 min; pureza: 96,80%; EM (m/e): 414,98 (M+H+).
Compuesto 53: EMCL: tiempo de retención: 34,06 min; pureza: 100%; EM (m/e): 449,26 (M+H+).
Compuesto 57: EMCL: tiempo de retención: 34,39 min; pureza: 98,83%; EM (m/e): 466,83 (M+H+).
Compuesto 61: EMCL: tiempo de retención: 31,35 min; pureza: 100%; EM (m/e): 406,04 (M+H+).
Compuesto 63: EMCL: tiempo de retención: 20,11 min; pureza: 100%; EM (m/e): 330,04 (M+H+).
Compuesto 65: EMCL: tiempo de retención: 25,41 min; pureza: 100%; EM (m/e): 537,86 (M+H+).
Compuesto 67: EMCL: tiempo de retención: 21,22 min; pureza: 96,94%; EM (m/e): 436,84 (M+H+).
Compuesto 69: EMCL: tiempo de retención: 21,57 min; pureza: 100%; EM (m/e): 493,85 (M+H+).
Compuesto 71: EMCL: tiempo de retención: 25,49 min; pureza: 100%; EM (m/e): 514,91 (M+H+).
Compuesto 73: EMCL: tiempo de retención: 27,10 min; pureza: 100%; EM (m/e): 556,91 (M+H+).
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7.7 Los compuestos de quinolina de la invención inhiben la desgranulación inducida por IgE en ensayos celulares
La capacidad de los compuestos de quinolina de la invención para inhibir la desgranulación inducida por IgE se demostró en una diversidad de ensayos celulares con mastocitos humanos cultivados (CHMC) y puede medirse mediante células obtenidas de médula ósea de ratón (BMMC). Se midió la inhibición de la desgranulación tanto a baja como a alta densidad celular mediante la cuantificación de la liberación de los factores específicos de gránulos triptasa, histamina y hexosaminidasa. La inhibición de la liberación y/o síntesis de mediadores lipídicos se evaluó por medición de la liberación de leucotrieno LTC4 y la inhibición de la liberación y/o síntesis de citocinas se controló mediante la cuantificación de TNF-\alpha, IL-6 e IL-13. Se cuantificó la triptasa y la hexosamidasa usando sustratos fluorogénicos, como se describe en sus ejemplos respectivos. Se cuantificó la histamina, TNF-\alpha, IL-6, IL-13 y LTC4 usando los siguientes kits de ELISA comerciales: histamina (Immunotech nº 2015, Beckman Coulter), TNF\alpha (Biosource nº KHC3011), IL-6 (Biosource nº KMC0061), IL-13 (Biosource nº KHC0132) y LTC4 (Cayman Chemical nº 520211). Los protocolos de los diversos ensayos se proporcionan a continuación.
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7.7.1 Cultivo de mastocitos y basófilos
Se cultivaron mastocitos y basófilos humanos a partir de células progenitoras CD34 negativas como se describe a continuación (véanse también los métodos descritos en la solicitud de Estados Unidos en trámite junto con la presente de Nº de Serie 10/053.355, presentada el 8 de noviembre de 2001, cuya descripción se incorpora en la presente memoria como referencia).
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7.7.1.1 Preparación de medio completo STEMPRO-34
Para preparar medio completo STEMPRO-34 ("CM"), se añadieron 250 ml de medio sin suero STEMPRO-34^{TM} ("SFM"; GibcoBRL, Nº de catálogo 10640) a un matraz de filtración. Para esto se añadieron 13 ml de suplemento de nutrientes STEMPRO-34 ("NS"; GibcoBRL, Nº de catálogo 10641) (preparado como se describe en más detalle a continuación). El recipiente de NS se aclaró con aproximadamente 10 ml de SFM y el aclarado se añadió al matraz de filtración. Después de la adición de 5 ml de L-glutamina (200 mM; Mediatech, Nº de catálogo MT 25-005-CI) y 5 ml de penicilina/estreptomicina 100X ("pen-strep"; HyClone, Nº de catálogo SV30010), el volumen se llevó a 500 ml con SFM y se filtró la solución.
El aspecto más variable de la preparación del CM es el método por el que se descongela y se mezcla el NS antes de la adición al SFM. El NS debería descongelarse en un baño de agua a 37ºC y removerse, ni agitarse vorticialmente ni agitarse, hasta que esté completamente en solución. Mientras se remueve, obsérvese si todavía hay lípidos que no estén en solución. Si existen lípidos y el NS no es de aspecto uniforme, devuélvalo al baño de agua y repita el proceso de removido hasta que tenga un aspecto uniforme. A veces este componente se solubiliza inmediatamente, a veces después de unos cuantos ciclos de remover y a veces no se solubiliza. Si después de unas cuantas horas el NS todavía no está en solución, se desecha y se descongela una unidad fresca. No debe usarse un NS que no tenga un aspecto uniforme después de la descongelación.
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7.7.1.2 Expansión de células CD34+
Se expandió una población de partida de células CD34 positivas (CD34+) de un número relativamente pequeño (1-5 x 10^{6} células) hasta un número relativamente grande de células progenitoras CD34 negativas (aproximadamente 2-4 x 10^{9} células) usando los medios de cultivo y los métodos descritos a continuación. Las células CD34+ (a partir de un único donante) se obtuvieron de Allcells (Berkeley, CA). Debido a que existen un grado de variación en la calidad y el número de células CD34+ que típicamente suministra Allcells, las células recién adquiridas se transfirieron a un tubo cónico de 15 ml y se llevaron a 10 ml en CM antes del uso.
El día 0 se realizó un recuento celular de las células viables (fase brillante) y las células se centrifugaron a 1200 rpm para sedimentarlas. Las células se resuspendieron a una densidad de 275.000 células/ml con CM que contenía factor de células madre humano recombinante 200 ng/ml ("SCF"; Peprotech, Nº de catálogo 300-07) y ligando flt-3 humano 20 ng/ml (Peprotech, Nº de catálogo 300-19) ("medio CM/SCF/flt-3"). Aproximadamente el día 4 ó 5, se comprobó la densidad del cultivo por realización de un recuento celular y el cultivo se diluyó hasta una densidad de 275.000 células/ml con medio CM/SCF/flt-3 recién preparado. Aproximadamente el día 7, el cultivo se transfirió a un tubo estéril y se realizó un recuento celular. Las células se centrifugaron a 1200 rpm y se resuspendieron hasta una densidad de 275.000 células/ml con medio CM/SCF/flt-3 recién preparado.
Este ciclo se repitió, comenzando desde el día 0, un total de 3-5 veces durante el periodo de expansión.
Cuando el cultivo sea grande y se esté manteniendo en múltiples matraces y vaya a resuspenderse, el contenido de todos los matraces se combina en un único recipiente antes de realizar un recuento celular. Esto asegura que se consigue un recuento celular preciso y proporciona un grado de uniformidad de tratamiento para la población completa. Cada matraz se examina por separado para detectar contaminación bajo el microscopio antes de combinarlos, para evitar la contaminación de la población completa.
Entre los días 17-24, el cultivo puede comenzar a envejecer (es decir, mueren aproximadamente el 5-10% del número total de células) y dejar de expandirse tan rápidamente como antes. Entonces, las células se controlan diariamente durante este tiempo, ya que el malogro completo del cultivo puede tener lugar en un tiempo tan corto como de 24 horas. Una vez que ha comenzado el envejecimiento, las células se cuentan, se precipitan por centrifugación a 850 rpm durante 15 minutos y se resuspenden a una densidad de 350.000 células/ml en medio CM/SCF/flt-3 para inducir una o dos divisiones más del cultivo. Las células se controlan diariamente para evitar el malogro del cultivo.
Cuando es evidente una muerte celular superior al 15% en el cultivo de células progenitoras y algunos residuos están presentes en el cultivo, las células progenitoras CD34 negativas están listas para diferenciarse.
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7.7.1.3 Diferenciación de células progenitoras CD34 negativas en mastocitos de la mucosa
Se realiza una segunda fase para convertir las células progenitoras CD34 negativas expandidas en mastocitos diferenciados de la mucosa. Estos mastocitos de la mucosa humanos cultivados ("CHMC") proceden de células CD34+ aisladas de la sangre de cordón umbilical y tratadas para formar una población proliferada de células progenitoras CD34 negativas, como se ha descrito anteriormente. Para producir las células progenitoras CD34 negativas, el ciclo de resuspensión para el cultivo era el mismo que se ha descrito anteriormente, excepto por que el cultivo se sembró a una densidad de 425.000 células/ml y se añadió un 15% de medio adicional aproximadamente el día cuatro o cinco sin realizar un recuento celular. Además, la composición de citocinas del medio se modificó de tal modo que contenía SCF (200 ng/ml) e IL-6 humana recombinante (200 ng/ml; Peprotech, Nº de catálogo 200-06 reconstituida hasta 100 \mug/ml en ácido acético estéril 10 mM) ("medio CM/SCF/IL-6").
Las Fases I y II en conjunto abarcan aproximadamente 5 semanas. Cierta muerte y residuos son evidentes en el cultivo durante las semanas 1-3 y existe un periodo durante las semanas 2-5 durante el que un pequeño porcentaje del cultivo deja de estar en suspensión, sino que en su lugar se une a la superficie del recipiente de cultivo.
Como durante la Fase I, cuando el cultivo se va a resuspender el día siete de cada ciclo, el contenido de todos los matraces se combina en un solo recipiente antes de realizar un recuento celular para asegurar una uniformidad de la población completa. Cada matraz se examina por separado para detectar contaminación bajo el microscopio antes de combinarlos, para evitar la contaminación de la población completa.
Cuando los matraces se combinan, aproximadamente el 75% del volumen se transfiere al recipiente común, dejando aproximadamente 10 ml más o menos en el matraz. El matraz que contiene el volumen restante se golpeó bruscamente lateralmente para desprender las células unidas. Se repitieron los golpes en un ángulo recto con respecto a los primeros golpes para desprender completamente las células.
El matraz se inclinó a un ángulo de 45 grados durante varios minutos antes de transferir el volumen restante al recipiente de recuento. Las células se centrifugaron a 950 rpm durante 15 min antes de sembrarlas en 35-50 ml por matraz (a una densidad de 425.000 células/ml).
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7.7.1.4 Diferenciación de células progenitoras CD34 negativas en mastocitos de tipo de tejido conectivo
Se preparó como anteriormente una población proliferada de células progenitoras CD34 negativas y se trató para formar un fenotipo positivo para triptasa/quimasa (tejido conectivo). Los métodos se realizaron como se ha descrito anteriormente para mastocitos de la mucosa, pero con la sustitución de IL-6 por IL-4 en el medio de cultivo. Las células obtenidas son típicas de mastocitos de tejido conectivo.
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7.7.1.5 Diferenciación de células progenitoras CD34 negativas en basófilos
Se preparó una población proliferada de células progenitoras CD34 negativas, como se describe en la Sección 7.7.1.3, anteriormente, y se usaron para formar una población proliferada de basófilos. Las células CD34 negativas se trataron como se ha descrito para mastocitos de la mucosa pero sin la sustitución de de IL-6 por IL-3 (a 20-50 ng/ml) en el medio de cultivo.
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7.7.2 Activación de IgE a baja densidad de células CHMC: ensayos de triptasa y LTC4
Para duplicar placas de fondo en U de 96 pocillos (Costar 3799) se añaden 65 \mul de diluciones de compuesto o muestras de control que se han preparado en MT [NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, CaCl_{2} 1,8 mM, MgCl_{2} 1,0 mM, glucosa 5,6 mM, Hepes 20 mM (pH 7,4), albúmina de suero bovino al 0,1%, (Sigma A4503)] que contenía MeOH al 2% y DMSO al 1%. Las células CHMC se sedimentan (980 rpm, 10 min) y se resuspenden en MT precalentado. Se añaden 65 \mul de células a cada placa de 96 pocillos. Dependiendo de la actividad de desgranulación para cada donante de CHMC en particular se cargan 1000-1500 células/pocillo. Se mezcla cuatro veces seguidas de una incubación de 1 hora a 37ºC. Durante la 1 h de incubación se prepara una solución de anti-IgE 6X [anti-IgE humana de conejo (1 mg/ml, Bethyl Laboratories A80-109A) diluido 1:167 en tampón MT]. Las células se estimulan añadiendo 25 \mul de solución de anti-IgE 6X a las placas apropiadas. Se añaden 25 \mul de MT a pocillos de control no estimulados. Se mezcla dos veces después de la adición de la anti-IgE. Se incuban a 37ºC durante 30 minutos. Durante los 30 minutos de incubación, se diluye la solución madre de sustrato de triptasa 20 mM [(Z-Ala-Lys-Arg-AMC2TFA; Enzyme Systems Products, Nº AMC-246)] 1:2000 en tampón de ensayo de triptasa [Hepes 0,1 M (pH 7,5), glicerol al 10% p/v, heparina 10 \muM (Sigma H-4898), NaN_{3} al 0,01%]. Las placas se centrifugan a 1000 rpm durante 10 min para sedimentar las células. Se transfieren 25 \mul de sobrenadante a una placa de fondo oscuro 96 pocillos y se añaden 100 \mul de solución de sustrato de triptasa recién diluida a cada pocillo. Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 30 min. Se lee la densidad óptica de las placas a 355 nm/460 nm en un lector de placas espectrofotométrico.
También se cuantifica el leucotrieno C4 (LTC4) usando un kit de ELISA en muestras de sobrenadante apropiadamente diluidas (determinado empíricamente para cada población celular donante de tal modo que la medición de la muestra esté dentro de la curva patrón) siguiendo las instrucciones del proveedor.
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7.7.3 Activación de IgE a alta densidad de células CHMC: ensayos de desgranulación (triptasa, histamina), leucotrieno (LTC4) y citocina (TNFalfa, IL-13)
Se sensibilizan mastocitos humanos cultivados (CHMC) durante 5 días con IL-4 (20 ng/ml), SCF (200 ng/ml), IL-6 (200 ng/ml) e IgE humana (CP 1035K de Cortx Biochem, 100-500 ng/ml dependiendo de la generación) en medio CM. Después de la sensibilización, las células se cuentan, se sedimentan (1000 rpm, 5-10 minutos) y se resuspenden a 1-2 x 10^{6} células/ml en tampón MT. Se añaden 100 \mul de suspensión celular a cada pocillo y 100 \mul de diluciones de compuesto. La concentración final de vehículo es de DMSO al 0,5%. Se incuban a 37ºC (CO_{2} al 5%) durante 1 hora. Después de 1 hora de tratamiento con compuesto, las células se estimulan con anti-IgE 6X. Se mezclan los pocillos con las células y las placas se dejan incubar a 37ºC (CO_{2} al 5%) durante una hora. Después de 1 hora de incubación las células se sedimentan (10 minutos, 1000 rpm) y se recogen 200 \mul por pocillo del sobrenadante, teniendo cuidado de no agitar el sedimento. La placa de sobrenadante se coloca en hielo. Durante la etapa de 7 horas (véase a continuación) se realiza el ensayo de triptasa sobre el sobrenadante que se ha diluido 1:500. El sedimento celular se resuspende en 240 \mul de medio CM que contiene DMSO al 0,5% y una concentración correspondiente de compuesto. Las células CHMC se incuban durante 7 horas a 37ºC (CO_{2} al 5%). Después de la incubación, las células se sedimentan (1000 RPM, 10 minutos) y se recogen 225 \mul por pocillo y se colocan a -80ºC hasta que los ELISAS estén listos para realizarse. Los ELISAS se realizan en muestras apropiadamente diluidas (determinado empíricamente para cada población celular donante, de tal modo que la medición de la muestra esté dentro de la curva patrón) siguiendo las instrucciones del proveedor.
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7.7.4 Activación de IgE a alta densidad de células BMMC: ensayos de desgranulación (hexosiminidasa, histamina), leucotrieno (LTC4), y citocina (TNFalfa, IL-6) 7.7.4.1 Preparación de medio acondicionado con WEHI
Se obtuvo medio acondicionado con WEHI por cultivo de células WEHI-3B mielomonocíticas murinas (Colección Americana Cultivos Tipo, Rockville, MD) en medio de Eagle modificado por Iscove (Mediatech, Hernandon, VA) suplementado con suero bovino fetal inactivado por calor al 10% (FBS; JRH Biosciences, Kansas City, MO), 2-mercaptoetanol 50 \muM (Sigma, St. Louis, MO) y penicilina-estreptomicina 100 IU/ml (Mediatech) en un incubador humidificado de CO_{2} al 5%/aire al 95% a 37ºC. Se sembró una suspensión celular inicial a 200.000 células/ml y después se dividió 1:4 cada 3-4 días durante un periodo de dos semanas. Se recogieron los sobrenadantes sin células, se dividieron alícuotas y se guardaron a -80ºC hasta que fueron necesarios.
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7.7.4.2 Preparación de medio BMMC
El medio BMMC consiste en medio acondicionado con WEHI al 20%, FBS inactivado por calor al 10% (JHR Biosciences), HEPES 25 mM a pH 7,4 (Sigma), L-glutamina 2 mM (Mediatech), aminoácidos no esenciales 0,1 mM (Mediatech), piruvato sódico 1 mM (Mediatech) 2-mercaptoetanol 50 \muM (Sigma) y penicilina-estreptomicina 100 IU/ml (Mediatech) en medio RPMI 1640 (Mediatech). Para preparar los medios BMMC, todos los componentes se añadieron a una unidad de filtración de 1 l estéril y se filtraron a través de un filtro de 0,2 \mum antes del uso.
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7.7.4.3 Protocolo
Se sensibilizan durante una noche mastocitos obtenidos de médula ósea (BMMC) con SCF murino (20 ng/ml) y anti-DNP monoclonal (10 ng/ml, Clon SPE-7, Sigma Nº D-8406) en medios BMMC a una densidad celular de 666 x 10^{3} células/ml. Después de la sensibilización, las células se cuentan, se sedimentan (1000 rpm, 5-10 minutos) y se resuspenden a 1-3 x 10^{6} células/ml en tampón MT. Se añaden 100 \mul de suspensión celular a cada pocillo y 100 \mul de diluciones de compuesto. La concentración final de vehículo es de DMSO al 0,5%. Se incuba a 37ºC (CO_{2} al 5%) durante 1 hora. Después de 1 hora de tratamiento con compuesto, las células se estimulan con estímulo 6X (60 ng/ml de DNP-BSA). Los pocillos se mezclan con las células y las placas se dejan incubar a 37ºC (CO_{2} al 5%) durante una hora. Después de una incubación de 1 hora, se sedimentan las células (10 minutos, 1000 RPM) y se recogen 200 \mul por pocillo del sobrenadante, teniendo cuidado de no agitar el sedimento, y se transfieren a un tubo limpio o placa de 96 pocillos. La placa de sobrenadante se coloca en hielo. Durante la etapa de 4-5 horas (véase a continuación) se realiza el ensayo de hexosiminidasa. El sedimento celular se resuspende en 240 \mul de medio condicionado con WEI que contiene DMSO al 0,5% y la concentración de compuesto correspondiente. Las células BMMC se incuban durante 4-5 horas a 37ºC (CO_{2} al 5%). Después de la incubación, las células se sedimentan (1000 RPM, 10 minutos) y se recogen 225 \mul por pocillo y se colocan a -80ºC hasta que los ELISAS están listos para realizarse. Pueden realizarse ELISAS en muestras apropiadamente diluidas (determinado empíricamente para cada población celular donante, de tal modo que la medición de la muestra esté dentro de la curva patrón) siguiendo las instrucciones del proveedor.
Ensayo de hexosaminidasa: en una placa de ensayo de 96 pocillos negro oscuro se añaden 50 \mul de sustrato de hexosaminidasa (4-metilumbeliferil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida; 2 mM) en cada pocillo. Se añaden 50 \mul de sobrenadante de células BMMC (véase anteriormente) al sustrato de hexosaminidasa, se colocan a 37ºC durante 30 minutos y se lee la placa a los 5, 10, 15 y 30 minutos en un espectrofotómetro.
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7.7.5 Activación de basófilos por IgE o ácaros del polvo: ensayo de liberación de histamina
El ensayo de activación de basófilos se llevó a cabo usando sangre completa periférica humana de donantes alérgicos a ácaros del polvo eliminando la mayoría de los glóbulos rojos (RBC) por sedimentación con dextrano. Se mezcló sangre periférica humana 1:1 con dextrano al 3% en T500 y se dejó que se sedimentaran los RBC durante 20-25 min. La fracción superior se diluyó con 3 volúmenes de D-PBS y las células se precipitaron por centrifugación durante 10 min a 1500 rpm a temperatura ambiente. El sobrenadante se retiró por aspiración y las células se lavaron en un volumen equivalente de tampón MT. Por último, las células se resuspendieron en tampón MT que contenía DMSO al 0,5% en el volumen sanguíneo original. Se mezclaron 80 \mul de células con 20 \mul de compuesto en presencia de DMSO al 0,5% por triplicado en una placa de cultivo tisular de 96 pocillos de fondo en V. Puede ensayarse un intervalo de dosis de 8 concentraciones de compuesto dando como resultado una curva de respuesta a la dosis de 10 puntos incluyendo una respuesta máxima (estimuladas) y mínima (no estimuladas). Las células se incubaron con compuesto durante 1 hora a 37ºC, CO_{2} al 5%, después de lo que se añadieron 20 \mul de estímulo 6x [anti-IgE 1 \mug/ml (Bethyl Laboratories), ácaro del polvo doméstico 667 ua/ml (Antigen Laboratories)]. Las células se estimularon durante 30 minutos a 37ºC, CO_{2} al 5%. La placa se centrifugó durante 10 min a 1500 rpm a temperatura ambiente y se recogieron 80 \mul de sobrenadante para el análisis del contenido de histamina usando el kit de ELISA de histamina suministrado por Inmunotech. El ELISA puede realizarse de acuerdo con las instrucciones del proveedor.
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7.7.6 Resultados
Los resultados de los ensayos de CHMC a baja densidad (Sección 7.7.2) y de iono en CHMC (Sección 7.8.1) se proporcionan en la Tabla 1. En la Tabla 1, un valor de "+" indica una CI_{50} de 10 \muM o menos en el ensayo especificado; Un valor de "-" indica una CI_{50} de más de 10 \muM en el ensayo especificado. La mayoría de los compuestos ensayados tenían CI_{50} de menos de 10 \muM, presentando muchos CI_{50} en el intervalo submicromolar.
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7.8 Los compuestos de quinolina de la invención inhiben selectivamente la cascada del receptor de IgE corriente arriba
Para confirmar que muchos de los compuestos de quinolina de la invención ejercen su actividad inhibidora bloqueando o inhibiendo la cascada temprana de transducción de señales deL receptor de IgE, muchos de los compuestos se evaluaron en ensayos celulares para desgranulación inducida por ionomicina, como se describe a continuación.
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7.8.1 Activación con ionomicina a baja densidad de células CHMC: ensayo de triptasa
Se llevaron a cabo ensayos para la desgranulación de mastocitos inducida por ionomicina como se describe para los ensayos de activación de IgE a baja densidad de CHMC (Sección 7.7.2., anteriormente) con la excepción de que durante la incubación de 1 hora, se preparó una solución de ionomicina 6x [ionomicina 5 mM (Sigma I-0634) en MeOH (solución madre) diluida 1:416,7 en tampón MT (2 \muM final)] y las células se estimularon añadiendo 25 \mul de la solución de ionomicina 6X a las placas apropiadas.
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7.8.2 Activación con ionomicina de basófilos: ensayo de liberación de histamina
Se llevaron a cabo ensayos para la desgranulación de basófilos inducida por ionomicina como se describe para el ensayo de activación de basófilos por IgE o ácaros de polvo (Sección 7.7.5, anteriormente), con la excepción de que después de la incubación con compuesto, la célula se estimularon con 20 \mul de ionomicina 2 \muM.
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7.8.3 Resultados
Los resultados de los ensayos de desgranulación inducida por ionomicina, expuestos como valores de CI_{50} (en \muM), se proporcionan en la Tabla 1, anteriormente. De los compuestos activos ensayados (es decir, los que inhiben la desgranulación inducida por IgE), la gran mayoría inhiben la desgranulación inducida por ionomicina, confirmando que estos compuestos activos inhiben selectivamente la cascada tardía (o corriente abajo) de transducción de señales del receptor de IgE.
Estos resultados se confirmaron para determinados compuestos por medición del flujo de ión calcio inducido por anti-IgE e inducido por ionomicina en células CHMC.
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7.9. El efecto inhibidor de los compuestos de quinolina de la invención es inmediato
Para evaluar la inmediatez de su efecto inhibidor, ciertas quinolinas de la invención pueden añadirse simultáneamente con activador de anticuerpo anti-IgE en los ensayos celulares descritos anteriormente. Todos los compuestos pueden ensayarse para determinar si bloquean la desgranulación inducida por IgE de células CHMC en el mismo grado que cuando los compuestos se preincuban con células CHMC durante 10 ó 30 min antes del entrecruzamiento del receptor.
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7.10 Cinética de la actividad farmacológica in vitro
Pueden ensayarse compuestos de la invención en experimentos de eliminación. En los experimentos, pueden activarse inmediatamente células CHMC con anticuerpo anti-IgE en presencia de compuesto 1,25 \muM (tiempo cero) o el compuesto puede eliminarse seguido de la activación con anticuerpo anti-IgE a los 30, 60 ó 120 minutos.
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7.11 Toxicidad: células T y B
La capacidad de los compuestos de la invención para ejercer su actividad inhibidora sin ser tóxicos para las células del sistema inmune puede demostrarse en ensayos celulares con células B y T. Los protocolos para los ensayos se proporcionan a continuación.
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7.11.1 Toxicidad en Jurkat (células T)
Se diluyen células Jurkat hasta 2 x 10^{5} células/ml en medio RPMI completo (con suero bovino fetal inactivado por calor al 10%) y se incuban a 37ºC, CO_{2} al 5%, durante 18 horas. Se añaden 65 \mul de células a 7,7 x 10^{5} células/ml en una placa de fondo en V de 96 pocillos (tratada con TC, Costar) que contiene 65 \mul de compuesto 2X (la concentración final de vehículo es DMSO al 0,5%, MeOH al 1,5%). Se mezcla, las placas se incuban durante 18-24 h a 37ºC, CO_{2} al 5%. La toxicidad puede evaluarse mediante análisis citométrico de flujo de la dispersión de luz celular.
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7.11.2 Toxicidad en BJAB (células B)
La línea de células B BJAB se cultivó en fase logarítmica en RPMI1640 + suero bovino fetal inactivado por calor al 10%, L-glutamina 1x, penicilina 1x, estreptavidina 1x y beta-mercaptoetanol 1x a 37ºC, CO_{2} al 5%. Primero, se recogieron BJAB, se centrifugaron y se resuspendieron en medio cultivo hasta una concentración de 7,7 x 10^{5} células/ml. Pueden mezclarse 65 \mul de células con 65 \mul de compuesto, por duplicado y en presencia de DMSO al 0,1% en una placa de cultivo tisular de 96 pocillos con fondo en V. Las células pueden incubarse con compuesto a diversas diluciones a 37ºC, CO_{2} al 5%. La toxicidad puede evaluarse mediante análisis citométrico de flujo de la dispersión de luz celular.
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7.11.3 Toxicidad: ensayo Glo de título de células
Se siembran 50 \mul de células (1 x 10^{6}/ml) en cada pocillo que contiene 50 \mul de compuesto. La concentración final de vehículo debería ser de DMSO al 0,5%, MeOH al 1,5%. Las placas se agitan durante 1 minuto para mezclar las células y el compuesto. Las placas se incuban a 37ºC (CO_{2} al 5%) durante 18 horas. Al día siguiente, se recogen 50 \mul de células de cada pocillo, se añaden a 50 \mul de reactivo Glo de titulación de células (Invitrogen). Las placas se agitan durante 1 minuto. Se leen en un luminómetro.
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7.12 Los compuestos pueden ser eficaces para el tratamiento de alergias
La eficacia in vivo de los compuestos de quinolina de la invención y para las alergias puede evaluarse en el modelo de ratón de anafilaxis cutánea pasiva (PCA). Este modelo proporciona una medición directa de la desgranulación inducida por IgE de mastocitos tisulares. En este modelo, animales sensibilizados con IgE se exponen a una exposición con alergeno y el cambio en la permeabilidad de la vasculatura dérmica que resulta de la liberación de histamina de mastocitos se mide por el cambio en la cantidad de filtración de colorante en el tejido circundante. La inhibición de la liberación de mediador por compuestos que modulen la desgranulación de mastocitos se mide fácilmente por extracción del colorante a partir del tejido.
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7.12.1 Protocolo de estudio y resultado
En el ensayo de PCA se sensibilizan de forma pasiva ratones mediante una inyección intradérmica con anticuerpos de IgE anti-dinitrofenol (DNP) (día -1). A tiempos predeterminados (de 5 a 60 minutos antes de la exposición) los animales se tratan con el agente de ensayo (día 0). El efecto modulador del agente sobre la desgranulación de mastocitos cutáneos se mide después de la inyección intravenosa de DNP conjugado con albúmina de suero humano (HSA-DNP) junto con colorante azul de Evans. El entrecruzamiento resultante del receptor de IgE y el posterior aumento inducido por la desgranulación de mastocitos en la permeabilidad vascular se determinan por medición de la cantidad de extravasación de colorante en el tejido. El colorante se extrae del tejido mediante formamida y la absorbancia de este extracto se lee a 620 nm. El efecto inhibidor del tratamiento farmacológico se expone como el porcentaje de inhibición en comparación con el tratamiento con vehículo, es decir, el porcentaje de reducción en la A_{620}.
Se han ensayado dos compuestos como controles positivos: el antagonista de histamina difenhidramina y el antagonista de serotonina ciproheptadina. Ambos mediadores (de histamina y serotonina) se liberan tras la desgranulación mediada por IgE de los mastocitos de ratón. Esto es al contrario que en mastocitos humanos, que no contienen serotonina. La curva de respuesta a la dosis con difenhidramina muestra una inhibición de la respuesta de PCA de hasta el 86% con la dosis mayor (50 mg/kg, i.p. tiempo de pretratamiento de 30 minutos). Sin embargo, esta elevada dosis no se toleró bien por los animales. Por esta razón se usó ciproheptadina como control positivo. La ciproheptadina inhibía la respuesta de PCA en el 61% +/- 4% (8 mg/kg, i.p., tiempo de pretratamiento de 30 minutos, n = 23
experimentos).
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7.12.2 Protocolo de estudio
En el modelo de oveja de asma alérgica, pueden administrarse aerosoles de artículos de ensayo a ovejas a través de un tubo endotraqueal, seguido de una exposición a un aerosol con antígeno extraído del nematodo Ascaris suum, al que las ovejas son alérgicas de forma natural. La exposición al alergeno conduce a una broncoconstricción directa [respuesta asmática temprana (EAR) y respuesta asmática tardía (LAR)] y a una hipersensibilidad persistente inespecífica de las vías aéreas (AHR). Estas tres características son similares a las observadas en humanos asmáticos alérgicos. La actividad del agente de ensayo puede determinarse por los cambios en la resistencia pulmonar (R_{L}), que se calculan a partir de mediciones de la presión transpulmonar, el flujo y el volumen respiratorio. Los datos de control históricos obtenidos a partir de la misma oveja después de un tratamiento con solución salina y exposición a alergeno muestran un marcado aumento de la R_{L} durante la EAR que persiste durante aproximadamente 2-3 horas después de la exposición al antígeno. La LAR es un aumento menos pronunciado en la R_{L} que comienza desde las 5-6 horas después de la exposición al antígeno y se resuelve a las 8 horas post-exposición. Veinticuatro horas después de la exposición se mide la respuesta a una dosis de carbacol para determinar la AHR, que se expresa como la dosis de carbacol necesaria para aumentar la R_{L} en un 400% sobre las medidas basales. Esta medición se denomina como la concentración de provocación de carbacol que produce un aumento del 400% en la R_{L} sobre las medidas basales (PC_{400}). Los datos pueden compararse con los datos de control históricos para el mismo individuo cuando se administra un aerosol de control con solución salina y se expone a Ascaris suum.
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7.13 Toxicidad y farmacocinética
La no toxicidad de las quinolinas puede demostrarse usando modelos animales convencionales, como se describe a continuación.
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7.13.1 Estudio de tolerancia a la administración subcutánea de una dosis repetida de 7 días de ratón
En este estudio, pueden tratarse ratones hembra BALB/c® mediante administración subcutánea con vehículo o formulación de artículo de ensayo una vez al día durante 7 días, para determinar la tolerancia a la administración subcutánea de un compuesto en particular. El estudio consiste en cuatro grupos toxicológicos, de la forma siguiente: a ratones en dos grupos separados tratados con fármaco (de nueve ratones cada uno) se les puede administrar 30 mg/ml de un compuesto en una suspensión de CMC (tampón fosfato 50 mM a pH 7 con carboxilmetilcelulosa al 0,1% (p/v)) o una solución de PEG 400 al 67% (PEG 400 al 67%/citrato 50 mM al 33%) a dosis de 200 mg/kg/día y ratones en dos grupos separados de control con vehículo (de seis ratones cada uno) reciben cloruro sódico al 0,9% o solución de PEG 400 al 67%. El volumen de dosis administrado debería ser de 6,7 ml/kg/día para los cuatro grupos de ratones. Seis ratones en cada uno de los grupos tratados con fármaco sirven como animales satélite de toxicocinética (3 por grupo por punto de tiempo) para la evaluación toxicocinética de los niveles de precursores y metabolitos principales (MM) a las 24 horas después de la primera y de la séptima dosis. Puede recogerse piel del lugar de aplicación de la dosis y evaluarse para determinar cambios microscópicos.
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7.13.2 Estudio de toxicología oral de una dosis repetida de 14 días en ratones
En este estudio de toxicología y toxicocinética de dosis variable pueden tratarse mediante una sonda oral ratones BALB/c con vehículo sólo o con una formulación de artículo de ensayo una vez al día durante 14 días. El estudio consiste en cuatro grupos de toxicología de cinco ratones por sexo y cuatro grupos satélite de toxicocinética que reciben el mismo régimen de tratamiento en paralelo. Los ratones de control con vehículo reciben 6,7 mg/kg/día o 16,7 ml/kg/día de una formulación de PEG 400 al 67% y citrato 50 mM al 33% (v/v). Los animales que pueden tratarse con un artículo de ensayo reciben una dosis baja de 200 mg/kg/día (6,7 ml/kg/día) o una dosis alta de 500 mg/kg/día (16,7 ml/kg/día) del compuesto de ensayo, usando una solución de 30 mg/ml.
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7.13.3 Estudio de toxicidad de una dosis repetida durante 14 días en rata
En este estudio de toxicología y toxicocinética de dosis variable, pueden tratarse ratas Sprague Dawley mediante una sonda oral con vehículo sólo o con una formulación de artículo de ensayo una vez al día durante 14 días. El estudio consiste en cuatro grupos de toxicología de cinco ratas por sexo y dos grupos de satélite de toxicocinética. Cinco ratas por sexo recibieron 6,7 mg/kg/día (control de bajo volumen) o 16,7 ml/kg/día (control de alto volumen) de una formulación de vehículo de PEG 400 al 67% y citrato 50 mM al 33% (v/v). Cinco ratas macho pueden recibir la dosis baja de 200 mg/kg/día de compuesto de ensayo (6,7 ml/kg/) y cinco ratas por sexo pueden recibir la dosis elevada de 500 mg/kg/día de compuesto de ensayo (16,7 ml/kg/día) usando una solución de 30 mg/ml.
Aunque la invención anterior se ha descrito con bastantes detalles para facilitar su entendimiento, será evidente que pueden realizarse determinados cambios y modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Por consiguiente, las realizaciones descritas deben considerarse como ilustrativas y no restrictivas y la invención no está limitada a los detalles que se proporcionan en la presente memoria, sino que puede modificarse dentro del alcance y de los equivalentes de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (27)

1. Un compuesto de acuerdo con la fórmula estructural (I):
25
y sales, hidratos, solvatos y N-óxidos de la misma, en la que:
R^{1} es un grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{2}, R^{3}, R^{5}, R^{6}, R^{7} y R^{8} se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, un grupo electronegativo, -OR^{d},
-SR^{d}, haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR^{c}-arilo, -NR^{c}-heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}, arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{9} se selecciona del grupo constituido por haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{10} se selecciona del grupo constituido por R^{a}, R^{b}, R^{a} sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R^{a} o R^{b}, -OR^{a} sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R^{a} o R^{b}, -(CH_{2})_{m}-R^{b}, -(CHR^{a})_{m}-R^{b}, -O-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
cada R^{a} se selecciona de forma independiente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), ciclohexilo, cicloalquilalquilo (C4-C11), arilo (C5-C10), fenilo, arilalquilo (C6-C16), bencilo;
cada R^{b} es un grupo adecuado seleccionado de forma independiente del grupo constituido por -OR^{d}, haloalquiloxi (C1-C3), halógeno y -CF_{3};
cada R^{c} es de forma independiente un grupo protector, R^{a} o R^{a} sustituido opcionalmente con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada R^{d} es de forma independiente un grupo protector, R^{a} o R^{a} opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada m es de forma independiente un número entero de 1 a 3;
A es O, NH o CO; y
B es CO, NH u O, con tal de que A y B no sean ambos O y que A y B no sean O y NH; y
a condición de que:
el compuesto no sea 6-fluoro-2-metil-4-quinolil-5-metil-3-fenilisooxazol-4-carboxilato.
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2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{1} es un grupo metilo.
3. El compuesto de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, en el que R^{9} es un grupo fenilo sustituido o no sustituido.
4. El compuesto de la reivindicación 3, en el que R^{9} es un grupo fenilo sustituido.
5. El compuesto de la reivindicación 4, en el que el R^{9} se selecciona del grupo constituido por 2-clorofenilo y 2-cloro-6-fluorofenilo.
6. El compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en el que R^{2} se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, fenilo, metilo, -CO_{2}Et, -CF_{3}, Cl, -NHCH_{3}, 26 260
7. El compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en el que R^{6} se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, F, -OCF_{3} y Br.
8. El compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en el que R^{7} se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, Cl y -CF_{3}.
9. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{1} es un grupo metilo, R^{9} es un grupo fenilo sustituido o no sustituido, R^{2} se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, fenilo, metilo, -CO_{2}Et, -CF_{3}, Cl, -NHCH_{3}
27 R^{6} se selecciona de hidrógeno, F, -OCF_{3} y Br; y R^{7} se selecciona del grupo constituido por hidrógeno, Cl y -CF_{3}.
10. El compuesto de la reivindicación 1, que se selecciona de cualquiera de los compuestos de 1 a 73 siguientes, en los que R^{1} es metilo y A, B, R^{2}, R^{3}, R^{5}, R^{6}, R^{7}, R^{8} y R^{9} se seleccionan de las siguientes combinaciones de sustituyentes:
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28
29 
\newpage
11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula estructural II y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable:
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30 
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y sales, hidratos, solvatos y N-óxidos de la misma, en la que:
R^{1} es un grupo alquilo opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{2}, R^{3}, R^{5}, R^{6}, R^{7} y R^{8} se seleccionan del grupo constituido por hidrógeno, un grupo electronegativo, -OR^{d}-,
-SR^{d}-, haloalquiloxi (C1-C3), perhaloalquiloxi (C1-C3), -NR^{c}-arilo, -NR^{c}-heteroarilo, halógeno, haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10}, arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y heteroarilo de 5-10 miembros opcionalmente sustituido con una o más de los mismos o diferentes grupos R^{10};
R^{9} se selecciona del grupo constituido por haloalquilo (C1-C3), perhaloalquilo (C1-C3), -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CF_{3}, alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10} y arilo (C5-C10) opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{10},
R^{10} se selecciona del grupo constituido por R^{a}, R^{b}, R^{a} sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R^{a} o R^{b}, -OR^{a} sustituido con uno o más de los mismos o diferentes R^{a} o R^{b}, -(CH_{2})_{m}-R^{b}, -(CHR^{a})_{m}-R^{b}, -O-(CH_{2})_{m}-R^{b},
-S-(CH_{2})_{m}-R^{b}, -O-(CHR^{a})_{m}-R^{b};
cada R^{a} se selecciona de forma independiente del grupo constituido por hidrógeno, alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), ciclohexilo, cicloalquilalquilo (C4-C11), arilo (C5-C10), fenilo, arilalquilo (C6-C16), bencilo;
cada R^{b} es un grupo adecuado seleccionado de forma independiente del grupo constituido por -OR^{d}, haloalquiloxi (C1-C3), halógeno y -CF_{3};
cada R^{c} es de forma independiente un grupo protector, R^{a} o R^{a} sustituido opcionalmente con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada R^{d} es de forma independiente un grupo protector, R^{a} o R^{a} opcionalmente sustituido con uno o más de los mismos o diferentes grupos R^{a} o R^{b} adecuados;
cada m es de forma independiente un número entero de 1 a 3;
A es O, NH o CO; y
B es CO, NH u O, con tal de que A y B no sean ambos O y que A y B no sean O y NH;
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12. La composición farmacéutica de la reivindicación 11, en la que el compuesto es un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2-10.
13. La composición farmacéutica de la reivindicación 11, en la que el compuesto está en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable.
14. La composición farmacéutica de la reivindicación 13, en la que la sal es una sal clorhidrato, una sal de sulfato de hidrógeno, una sal sulfato o una sal fosfato.
15. Un compuesto o composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para el uso como un medicamento.
16. Un uso de un compuesto o composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, para la preparación de un medicamento que inhiba la desgranulación de mastocitos o basófilos, según se mide en un ensayo in vitro.
17. Un uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el compuesto tiene una CI_{50} de aproximadamente 20 \muM o menos.
18. Un uso de un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-10, con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para la preparación de una composición farmacéutica que inhiba la desgranulación de mastocitos o basófilos, según se mide en un ensayo in vitro.
19. Un uso de un compuesto o composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para la preparación de un medicamento para la inhibición de la desgranulación de mastocitos o basófilos.
20. Un uso de acuerdo con la reivindicación 19, en el que el mastocito o basófilo es un mastocito o basófilo humano.
21. Un uso de un compuesto o composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-14 para la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad en un animal caracterizada por, causada por o asociada con la desgranulación de mastocitos o basófilos.
22. Un uso de acuerdo con la reivindicación 21, en el que el animal es un ser humano.
23. Un uso de acuerdo con la reivindicación 21 o la reivindicación 22, en el que la enfermedad se selecciona del grupo constituido por enfermedades alérgicas, cicatrización de mala calidad, enfermedades asociadas con destrucción tisular, enfermedades asociadas con inflamación tisular, inflamación y cicatrización.
24. Un uso de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la enfermedad alérgica se selecciona del grupo constituido por conjuntivitis, rinitis, asma, dermatitis atópica y alergias alimentarias.
25. Un uso de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la cicatrización de mala calidad se selecciona de grupo constituido por esclerodermia, fibrosis aumentada, queloides, cicatrices postquirúrgicas, fibrosis pulmonar, espasmos vasculares, migraña, lesión por reperfusión y post-infarto de miocardio.
26. Un uso de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la enfermedad asociada con destrucción tisular se selecciona del grupo constituido por EPOC, cardiobronquitis y post-infarto de miocardio.
27. Un uso de acuerdo con la reivindicación 23, en el que la enfermedad asociada con inflamación tisular se selecciona del grupo constituido por intestino irritable, colon irritable y enfermedad inflamatoria del colon.
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