ES2308978T3 - Composicion farmaceutica de eritropoyetina. - Google Patents

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Jaya Natarajan
Marilyn Sanders
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Abstract

Una formulación farmacéutica de eritropoyetina que comprende: (a) un agente tamponante del pH; (b) una cantidad estabilizante de albúmina sérica humana; (c) una cantidad estabilizante de un aminoácido; (d) una cantidad antimicrobiana de cresol; y (e) una cantidad farmacéutica de eritropoyetina.

Description

Composición farmacéutica de eritropoyetina.
Campo de la invención
La presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas acuosas estables conservadas de eritropoyetina que contienen una cantidad antimicriobiana de cresol y una cantidad de un aminoácido.
Antecedentes de la invención
La eritropoyetina (EPO) es una hormona glicoproteica secretada por los riñones en respuesta a una hipoxia tisular, que estimula la producción de glóbulos rojos en la médula ósea (1). El gen para la EPO se ha clonado y expresado en células de ovario de hámster chino (2, 3). Esta eritropoyetina humana recombinante (epoetina alfa, rhEPO) tiene una secuencia de aminoácidos idéntica a la de la eritropoyetina urinaria humana y las dos son indistinguibles en base a ensayos inmunológicos y funcionales, aunque existen diferentes con respecto a la glicosilación proteica que afectan a la eficacia in vivo (4, 5).
En ensayos clínicos hasta la fecha, se ha evaluado la rhEPO en sujetos normales, así como en pacientes con diversas afecciones anémicas (6, 7). La EPO induce una respuesta hematológica enérgica en voluntarios humanos normales, siempre que estén disponibles reservas adecuadas de hierro para soportar la síntesis de hemoglobina aumentada (8). La mayoría de los ensayos han investigado la seguridad y eficacia de la rhEPO en el tratamiento de la insuficiencia renal crónica mantenida con diálisis y en los que todavía no están con diálisis de mantenimiento. Otras indicaciones autorizadas en los Estados Unidos incluyen la anemia secundaria al tratamiento con quimioterapia en el cáncer y la anemia asociada con el tratamiento con zidovudina de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana. En todo el mundo, se ha usado EPO para tratar la anemia asociada con artritis reumatoide, premadurez, mielofibrosis, anemia falciforme, transplante de médula ósea, lesiones térmicas, \beta-talasemia, como un facilitador de la donación de sangre autóloga prequirúrgica y el uso como un adyuvante prequirúrgico (6, 7).
Aunque generalmente la rhEPO se tolera bien, se han observado erupciones cutáneas y urticaria ocasionales, que sugieren una hipersensibilidad alérgica a algunos componentes de la formulación de Epoetina alfa, probablemente a la albúmina sérica humana (HSA). Además, a pesar del análisis de la sangre, existe un riesgo de infección con un agente transmisible cuando un agente farmacéutico se formula usando productos sanguíneos humanos. Por lo tanto, son necesarias formulaciones farmacéuticas de rhEPO que sean estables y estén libres de productos sanguíneos humanos, tales como albúmina.
La patente de Estados Unidos 4.992.419 describe formulaciones liofilizadas de eritropoyetina que contienen de 5 a 50 g/l de urea, de 1 a 50 g/l de aminoácidos, de 0,05 a 5 g/l de tensioactivos y sin albúmina sérica humana. Se describen formulaciones acuosas, pero demuestran una estabilidad limitada en comparación con formulaciones que contienen albúmina sérica humana y, por lo tanto, no son prácticas comercialmente. Por lo tanto, el usuario final, ya sea un médico o un paciente, debe reconstituir la formulación inmediatamente antes de la administración. No se prefieren formulaciones liofilizadas en una formulación clínica de eritropoyetina debido a que el proceso de reconstitución requiere tiempo, posee el riesgo de una manipulación inapropiada de la formulación proteica, o puede reconstituirse inadecuadamente y, habitualmente, se requieren ciertos aditivos tales como estabilizantes para conservar una actividad suficiente del fármaco. Por lo tanto, generalmente se prefieren formulaciones acuosas de eritropoyetina.
La patente de Estados Unidos 5.376.632 describe formulaciones acuosas, liofilizadas o secadas por pulverización, o eritropoyetina que contiene ciclodextrinas \beta o \gamma, y que no contienen otros estabilizantes adicionales tales como albúmina sérica humana, albúmina sérica bovina, lecitina, metilcelulosa, polietilenglicol, agentes reductores que contiene azufre, urea, aminoácidos y tensioactivos (col. 4 líneas 51-54).
La patente de Estados Unidos 5.661.125 describe formulaciones acuosas de eritropoyetina que contienen conservantes antimicrobianos tales como alcohol bencílico, parabenos, fenoles y mezclas de los mismos. Las formulaciones sin albúmina sérica humana se prepararon y examinaron para determinar la estabilidad con respecto a las formulaciones correspondientes que contienen albúmina sérica humana. Los resultados indicaban una precipitación significativa de la eritropoyetina en formulaciones de cresol sin HSA (0,5%) y clorocresol (0,3%), incluso a 0ºC (col. 8, líneas 1-29), haciendo que estas formulaciones sean por lo tanto clínicamente poco prácticas. Además, se describe que las formulaciones de EPO que contienen cresol, usado en el intervalo del 0,2-0,5%, tienen una estabilidad acelerada escasa y una descomposición más rápida de la EPO (col. 6 líneas 21-25). Las formulaciones multidosis conservadas actualmente disponibles en el mercado contienen alcohol bencílico al 1%.
Las formulaciones de rhEPO disponibles en el mercado están preparadas en tampón citrato a concentraciones de 1000 UI/0,5 ml, 2000 UI/ml, 5000 UI/ml y 10.000 UI/ml (10 K) para la inyección tanto por vía intravenosa (iv) como subcutánea (sc). Está clínicamente documentado que estas formulaciones causan comúnmente molestias al paciente asociadas con la administración s. c. de las formulaciones tamponadas con citrato (9, 10). Como el uso clínico predominante de la rhEPO cambió de i. v. a s. c., se hizo pronto evidente que la tolerancia local de la presente formulación no era óptima. Ni la adaptación del fármaco a temperatura ambiente antes de la inyección ni evitar volúmenes excesivos de 1 ml era suficiente para prevenir el dolor en el lugar de inyección. Como no se descubrió que la albúmina humana, que se usó como un estabilizante de la formulación, ni la baja osmolaridad de la solución fueran inductores del dolor, se sugirió como candidato el tampón citrato de la rhEPO. Está disponible en el mercado una formulación sin conservante de dosis única de 40.000 UI/ml que contiene fosfato sódico en lugar de tampón citrato. Existe la necesidad de formulaciones de dosis menores estables que contengan tampón fosfato en lugar del tampón citrato menos preferible.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas de eritropoyetina que comprenden: (a) un agente tamponante del pH; (b) una cantidad estabilizante de albúmina sérica humana; (c) una cantidad estabilizante de un aminoácido; (d) una cantidad antimicrobiana de cresol; y (e) una cantidad farmacéutica de eritropoyetina. Las formulaciones preferidas comprenden combinaciones de albúmina humana y glicina como agentes estabilizantes. Las formulaciones particularmente preferidas comprenden combinaciones de albúmina sérica humana y glicina como agentes estabilizantes en un sistema de tampón fosfato con m-cresol usado a una concentración de aproximadamente el 0,3%.
Las formulaciones de la presente invención presentan propiedades farmacocinéticas similares a las de los productos farmacéuticos actuales, tales como niveles de absorción, disposición y concentración en suero similares a los de las formulaciones farmacéuticas actualmente comercializadas de eritropoyetina humana recombinante. Además, las formulaciones de la presente invención presentan molestias menos intensas en el paciente tras la administración y presentan una duración más corta de las molestias en el lugar de inyección. Por lo tanto, la presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas conservadas de eritropoyetina que pueden usarse como eritropoyetina y pueden formularse para reducir las molestias en el paciente.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1 - Perfiles de concentración media de eritropoyetina en suero con respecto al tiempo (no corregidos por los niveles basales de eritropoyetina) para sujetos que reciben una sola dosis s. c. de 150 UI/kg de rhEPO con y sin conservante de m-cresol al 0,3%. Las concentraciones de eritropoyetina en suero se determinaron por radioinmunoensayo (RIA).
Figura 2 - Perfiles de la concentración media de eritropoyetina en suero con respecto al tiempo (no corregidos por los niveles basales de eritropoyetina) para sujetos que reciben una sola dosis s. c. de 150 UI/kg de rhEPO con tampón citrato y fosfato.
Las concentraciones de eritropoyetina en suero se determinaron por radioinmunoensayo (RIA).
Descripción detallada
La presente invención proporciona formulaciones acuosas conservadas con cresol de eritropoyetina estabilizada con una combinación de albúmina sérica humana y un aminoácido. Por consiguiente, la presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas de eritropoyetina que comprenden:
(a)
un agente tamponante del pH;
(b)
una cantidad estabilizante de albúmina sérica humana;
(c)
una cantidad estabilizante de un aminoácido;
(d)
una cantidad antimicrobiana de cresol; y
(e)
una cantidad farmacéutica de eritropoyetina.
Un objetivo de estas formulaciones era minimizar las molestias del paciente clínicamente documentadas asociadas con la administración por vía subcutánea de las formulaciones tamponadas con citrato. Por lo tanto, se prefieren particularmente sistemas de tampón fosfato en todas las formulaciones de la presente invención.
La cantidad de agente tamponante útil en las composiciones farmacéuticas de la presente invención depende enormemente del tampón en particular que se use y del pH deseado de la formulación. El intervalo de pH preferido para las soluciones está entre aproximadamente 5-8, prefiriéndose más de aproximadamente 6-7,5 y, siendo más preferido un pH de aproximadamente 6,9. Por encima de estos valores de pH, la cantidad de tampones variará generalmente de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 30 mM. Se prefiere el uso de un sistema tampón de fosfato sódico dibásico y fosfato sódico monobásico. Otros sistemas tampón adecuados para mantener el intervalo de pH deseado de aproximadamente 5 a aproximadamente 8 incluyen, pero sin limitación, citrato sódico/ácido cítrico, acetato sódico/ácido acético y cualquier otro agente tamponante del pH farmacéuticamente aceptable conocido en la técnica.
Puede añadirse un agente de ajuste del pH tal como, pero sin limitación, ácido clorhídrico, ácido cítrico, hidróxido sódico o una sal de cualquiera de estos, en particular, puede usarse citrato sódico para este fin.
\newpage
El agente de tonicidad útil en las formulaciones de la presente invención es cualquier agente capaz de hacer que las formulaciones de la presente invención sean isoosmóticas con la sangre humana. Se conocen bien en la técnica agentes de tonicidad adecuados típicos e incluyen, pero sin limitación, cloruro sódico, manitol, glicina, glucosa y sorbitol. Se prefiere el uso de cloruro sódico como un agente de tonicidad en las formulaciones de la presente invención.
Se usan aminoácidos, incluyendo, pero sin limitación, glicina, L-isoleucina, L-leucina, L-2-fenilalanina, L-ácido glutámico y L-treonina, en las cantidades de 0,1 g/l a 50 g/l y, preferiblemente, en las cantidades de 0,25 g/l a 20 g/l. No se prefiere L-alanina ni L-arginina en las formulaciones de la presente invención porque su inclusión provoca cambios conformacionales en la estructura de la EPO. La glicina es el aminoácido preferido y se usa preferiblemente en la cantidad de 0,25 g/l a 20 g/l, y, particularmente, de 0,5 g/l en formulaciones que contienen polisorbato 80 y carecen de albúmina sérica humana. La glicina es el aminoácido preferido y se usa preferiblemente en la cantidad de 0,5 g/l a 50 g/l y, particularmente, de 2,0 g/l en formulaciones que contienen albúmina sérica humana y conservadas con cresol. En las formulaciones de la presente invención, es adecuado para el uso cualquier aminoácido en la forma isomérica L o D, con la excepción de la L-arginina y la L-alanina.
Las composiciones particularmente preferidas se seleccionan del grupo constituido por las enumeradas en la 
\hbox{Tabla A.}
1
La eritropoyetina está presente en las composiciones en cantidades terapéuticamente eficaces. El término "eritropoyetina" debe incluir a aquellas proteínas que tienen la actividad biológica de la eritropoyetina humana, así como a análogos de la eritropoyetina, isoformas de la eritropoyetina, miméticos de la eritropoyetina, fragmentos de eritropoyetina, proteínas híbridas de eritropoyetina, oligómeros y multímeros de proteínas de fusión de las anteriores, homólogos de las anteriores, variantes de patrón de glicosilación de las anteriores y muteínas de las anteriores, independientemente de la actividad biológica de las mismas e independientemente además del método de síntesis o fabricación de las mismas incluyendo, pero sin limitación, métodos recombinantes, ya se produzcan a partir de ADNc o de ADN genómico, sintéticos, transgénicos y activados por genes. Los ejemplos específicos de eritropoyetina incluyen, Epoetina alfa (EPREX®, ERYPO®), nueva proteína estimulante de la eritropoyesis (NESP) (un análogo hiperglicosilado de la eritropoyetina humana recombinante (Epoetina) descrito en la solicitud de patente europea EP640619), análogo de eritropoyetina humana - proteínas de fusión de albúmina sérica humana descritas en la solicitud internacional de patente WO9966054, mutantes de eritropoyetina descritos en la solicitud internacional de patente WO9938890, eritropoyetina omega, que puede producirse a partir de un fragmento de restricción de Apa I del gen de la eritropoyetina humana descrito en la patente de Estados Unidos 5.688.679, eritropoyetina humana glicosilada modificada, descrita en la solicitud internacional de patente WO9911781, análogos de eritropoyetina conjugados con PEG, descritos en el documento WO9805363 o en la patente de Estados Unidos 5.643.575. Se describen ejemplos específicos de líneas celulares modificadas para la expresión de eritropoyetina humana endógena en las solicitudes internacionales de patente WO9905268 y WO9412650.
El efecto de la eritropoyetina puede controlarse por medición del hematocrito, siendo el intervalo de hematocrito diana del 30-33%. Pueden realizarse ajustes de la dosis por control del hematocrito. Los viales de un solo uso de eritropoyetina contienen 2.000, 3.000, 4.000, 10.000 o 40.000 unidades de eritropoyetina (1 UI se corresponde con aproximadamente 8,4 nanogramos de eritropoyetina recombinante). Puesto que las formulaciones de la presente invención están conservadas y proporcionan el beneficio de ser multidosis, las formulaciones contendrán preferiblemente un múltiplo de muchas veces el número de unidades de eritropoyetina presentes en un vial de un solo uso. Se incluyen dentro de la presente invención composiciones que contienen 1.000-100.000 unidades o más de eritropoyetina por vial. En general, se contempla que una cantidad eficaz será de aproximadamente 1 a 500 UI/kg de peso corporal y, más preferiblemente, de 50 a 300 UI/kg de peso corporal, especialmente para eritropoyetina administrada s. c. La cantidad eficaz dependerá además de la especie y del tamaño del sujeto que se trate, de la afección o enfermedad particular que se trate y de su gravedad y de la vía de administración. En cualquier caso, la dosis a usar deberá no ser tóxica para el hospedador.
Sorprendentemente, se descubrió que la eritropoyetina podía formularse como una formulación acuosa estable conservada que contenía <0,5% de cresol y contenía albúmina sérica humana y un aminoácido como agentes estabilizantes. El intervalo preferido de cresol es del 0,2%-0,5%, siendo más preferido el 0,3%. La glicina es el estabilizante aminoacídico preferido. La presente invención proporciona formulaciones tamponadas con fosfato y conservadas con cresol desarrolladas a concentraciones de 10.000 UI/2,5 ml, 25.000 UI/2,5 ml y 40.000 UI/2,0 ml (40 K). La formulación de dosis unitaria superior reduce el número de inyecciones subcutáneas y mejora la conformidad del
paciente.
Los datos del ejemplo 1 de la presente invención indican que el uso de citrato o fosfato como el tampón y la inclusión de m-cresol en la formulación no habían causado una disminución en las características de absorción y disposición, así como en los perfiles de seguridad de la eritropoyetina. Por lo tanto, puede concluirse que la nueva formulación tamponada con fosfato de eritropoyetina multidosis conservada es comparable a las formulaciones de un solo uso actualmente comercializadas, y que la eritropoyetina multidosis puede usarse en todas las indicaciones actualmente autorizadas para la eritropoyetina.
Siendo farmacocinéticamente comparable a las formulaciones de EPREX de un solo uso, se espera por lo tanto que la nueva formulación sea también clínicamente comparable. Además, la eritropoyetina multidosis tamponada con fosfato tiene un beneficio potencial adicional sobre los viales de eritropoyetina de un solo uso; uno económico. El uso de eritropoyetina para el tratamiento de la anemia o para el predepósito de sangre autóloga requiere administraciones repetidas de la hormona una vez cada 4 semanas, una vez cada 2 semanas, una vez por semana, dos veces por semana o tres veces por semana. Estando diseñada para un solo uso, cualquier porción no usada de la eritropoyetina de un solo uso debe desecharse; sin embargo, mediante el uso de la cantidad apropiada de la eritropoyetina multidosis conservada, se minimizará la cantidad de eritropoyetina que se desechará. Además, la propiedad bactericida de las formulaciones conservadas de la presente invención la hacen más adecuada para la potencial autoadministración y para el tratamiento de múltiples pacientes en entornos institucionales, lo que se traduce en ahorros significativos en los costes de la atención sanitaria. Los viales de eritropoyetina multidosis también proporcionarán una comodidad adicional en la administración de fármacos por minimización del número de viales y ampollas de un solo uso que el paciente o los profesionales sanitarios tienen que utilizar a volúmenes de dosificación elevados. Las concentraciones superiores (25,000 UI/2,5 ml y 40.000 UI/2,0 ml) de la eritropoyetina multidosis también pueden minimizar los volúmenes de inyección, especialmente para las indicaciones que requieren dosis superiores. La eritropoyetina multidosis también puede permitir que se use un único vial para una administración de dosis. Por ejemplo, la dosificación recomendada para el programa de donación de sangre autóloga es de 600 UI/kg dos veces por semana (7). Para un paciente de 70 kg, el régimen de dosificación recomendado será de aproximadamente 40 K dos veces por semana. En tal caso, puede usarse un solo vial de 40 K para una sola administración de fármaco.
\newpage
Los siguientes ejemplos ilustran la presente invención sin limitar, no obstante, la misma a los mismos.
Ejemplo 1
Se seleccionó la concentración de 10.000 UI de la formulación en el estudio ilustrado en el Ejemplo 1 porque esta concentración proporciona un volumen de inyección sc razonable, así como el máximo recomendado, de aproximadamente 1 ml. Mediante la minimización del volumen de inyección, las concentraciones superiores de la eritropoyetina multidosis permiten potencialmente la reducción del número de lugares de inyección sc, que es una clara ventaja en la mejora de la conformidad del paciente.
Objetivo: Comparar la seguridad y la farmacocinética de eritropoyetina humana recombinante administrada por vía subcutánea (epoetina alfa, rhEPO) formulada en un tampón fosfato y que contiene conservante de m-cresol al 0,3% (10.000 UI/ml) con la formulación de rhEPO tamponada con citrato disponible en el mercado (sin conservante).
Pacientes y métodos Pacientes
Se admitieron y completaron este estudio dieciocho voluntarios sanos de edades que variaban entre los 20-38 años de edad (edad media de 26,9 años) y pesaban entre 60,8-87,4 kg (peso medio de 72,3 kg). La edad media de los sujetos del Grupo I (28,1 años) era ligeramente superior a la de los sujetos del Grupo II (25,8 años), aunque no se esperaba que esta diferencia afectara a los resultados del estudio. Los sujetos admitidos en este estudio no tenían valores de laboratorio anormales clínicamente significativos para hematología o química sérica. Tenían un análisis de toxicología en orina, análisis de VIH y antígeno de superficie de hepatitis B negativos. No tenían indicios de lo siguiente: hipertensión (por ejemplo, presión sanguínea diastólica \geq95 mm Hg); antecedentes de ninguna enfermedad hematológica primaria; antecedentes de enfermedad hepática, renal, cardiovascular, gastrointestinal, genitourinaria, metabólica o neurológica significativa; antecedentes de anemia o trastorno convulsivo; una sensibilidad conocida a productos derivados de mamíferos o a albúmina sérica humana; ser consumidores habituales y empedernidos de bebidas que contienen cafeína; participación en cualquier otro ensayo clínico o haber recibido una transfusión sanguínea o haber donado en los 30 días anteriores a su admisión en el estudio; haberse expuesto a rhEPO en los tres meses anteriores a su admisión en el estudio; haber tenido una enfermedad en los siete días anteriores a su admisión en el estudio; ni tener anomalías significativas en el examen físico o en las evaluaciones clínicas de laboratorio previas al estudio en los 14 días anteriores a su admisión en el estudio. Todos los sujetos podían evaluarse para determinar la seguridad y todas las extracciones de sangre para el análisis farmacocinético se extrajeron según lo programado. Todos los estudios se realizaron con autorización del comité ético institucional y con el consentimiento del paciente.
Diseño del estudio
Este era un estudio de Fase 1 de entrecruzamiento de dos periodos, aleatorizado, de etiqueta descubierta y un solo centro en voluntarios masculinos sanos. Dieciocho sujetos se asignaron aleatoriamente a uno de dos grupos de secuencia de tratamiento (nueve sujetos/grupo). Se administró rhEPO durante dos periodos de dosificación separados como una inyección s. c. embolada en la parte superior del muslo. Cada periodo de dosificación estaba separado por un periodo de eliminación de 14 días. Los sujetos se confinaron en el centro de estudio desde al menos 12 horas antes hasta 72 horas después de la dosificación para cada uno de los dos periodos de dosificación, pero no entre los periodos de dosificación. El régimen de dosificación se resume en la Tabla 1.
TABLA 1 Régimen de dosificación y diseño del estudio
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Se usaron dos formulaciones de EPO en este estudio. La epoetina alfa (comercializada como EPREX®) contiene rhEPO 10.000 UI/ml en tampón citrato. La formulación de rhEPO con conservante contiene rhEPO 25.000 UI/2,5 ml en tampón fosfato con conservante de m-cresol.
Recogida de muestras de sangre
Se extrajo sangre en serie por punción venosa directa antes y después de la administración de EPO. Se obtuvieron muestras de sangre venosa (5 ml) para la determinación de las concentraciones de eritropoyetina en suero a \sim30, 20 y 10 minutos antes de la dosificación (3 muestras de medidas basales) y a aproximadamente los siguientes tiempos después de la dosificación: 30 minutos y a 1, 2, 5, 8, 12, 15, 18, 24, 30, 36, 48, 60 y 72 horas. Cada muestra de suero se dividió en dos alícuotas. Todas las muestras de suero se conservaron a -20ºC. Las muestras de suero se enviaron en nieve carbónica. Se realizaron ensayos clínicos de laboratorio en ayunas (hematología, química sérica y análisis de orina) inmediatamente antes de la dosis inicial el día 1, la mañana del día 4, inmediatamente antes de la dosificación el día 16 y la mañana del día 19.
Métodos bioanalíticos
Se usó un procedimiento de kit de radioinmunoensayo (RIA) (Diagnostic Systems Laboratory [DSL], Webster TX) para la determinación de las concentraciones de eritropoyetina en suero. El RIA disponible en el mercado es un método competitivo de doble anticuerpo que usa un antisuero policlonal de conejo contra la eritropoyetina urinaria humana como el anticuerpo primario y una eritropoyetina urinaria humana marcada con ^{125}I como el indicador. La epoetina alfa se sustituyó por la eritropoyetina urinaria proporcionada en el kit de DSL en los patrones y en las muestras de control de calidad. Las concentraciones patrón usadas en el ensayo fueron de 7,8, 15,6, 31,3, 50, 62,5, 100 y 125 mUI/ml. La sensibilidad, definida como el valor de retroajuste medio para el patrón más bajo que proporciona una precisión aceptable, era de 8,6 mUI/ml y el intervalo de ensayo se prolongó hasta 2.000 mUI/ml a través de diluciones de control de calidad.
Determinaciones de la seguridad
Se registraron las constantes vitales inmediatamente antes de cada dosificación (Días 1 y 16) y a las 6, 24, 48 y 72 horas después de cada dosificación. Las determinaciones de la seguridad se basaron en la incidencia y el tipo de acontecimientos adversos y en los cambios en los ensayos clínicos de laboratorio desde las medidas basales. Además, se evaluaron los cambios desde el estudio previo en las mediciones de las constantes vitales, incluyendo la presión sanguínea y los resultados del examen físico.
Análisis de datos
Los valores de concentración en suero posteriores a la dosis se corrigieron por las concentraciones de eritropoyetina basal previas a la dosis restando de cada uno de los valores posteriores a la dosis la concentración media de eritropoyetina basal determinada a partir del cálculo de la media de los niveles de eritropoyetina de las tres muestras recogidas a los 30, 20 y 10 minutos anteriores a la dosificación. No se incluyeron las concentraciones de eritropoyetina en suero previas a la dosis en el cálculo del valor medio si eran inferiores al nivel de cuantificación del ensayo. Se determinaron los parámetros farmacocinéticos a partir de los datos de concentración en suero corregidos por las concentraciones de eritropoyetina basal.
Se calcularon los parámetros farmacocinéticos mediante métodos independientes de modelo en un sistema informático Digital Equipment Corporation VAX 8600 usando el programa informático BIOAVL versión 8.0 (Scientific Computer Systems, RWJPRI). Se determinaron los siguientes parámetros farmacocinéticos: concentración sérica máxima (C_{máx}); tiempo hasta la concentración sérica máxima (t_{máx}); área bajo la curva de concentración-tiempo (AUC) desde el tiempo cero hasta el tiempo de la última extracción de muestra sangre (AUC_{0-72}) calculada con el uso de la regla del trapezoide lineal; y vida media de eliminación terminal (t_{1/2}), calculada a partir de 0,693/constante de velocidad de eliminación. La constante de la velocidad de eliminación se estimó por regresión lineal de puntos de datos consecutivos en la región lineal terminal de la representación logarítmica lineal de la concentración con respecto al tiempo. La media, la desviación típica (DT) y el coeficiente de variación (CV) de los parámetros farmacocinéticos se calcularon para cada tratamiento. Se calculó la relación de las medias de los parámetros (formulación conservada/formulación no conservada).
Resultados Resultados de seguridad
La incidencia de acontecimientos adversos se distribuyó homogéneamente por todos los grupos de tratamiento (39%, rhEPO sin conservante; 33%, rhEPO con conservante). No se produjeron cambios clínicamente significativos de los ensayos clínicos de laboratorio o presiones sanguíneas de las medidas basales previas al estudio y no se produjeron cambios importantes en los resultados del examen físico y las mediciones de las constantes vitales previas al estudio. Es de interés que la bilirrubina total media disminuyó hasta casi la mitad del valor de las medidas basales el día 4 después de la terapia. Sin embargo, la magnitud de esta disminución fue similar en ambos grupos de tratamiento y los niveles de bilirrubina total media permanecieron dentro del intervalo normal. No se observaron cambios similares en otros ensayos de la función del hígado (fosfatasa alcalina, SGOT, SGPT, SDH). Por lo tanto, los perfiles de seguridad para los dos grupos de tratamiento parecían similares.
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Resultados de farmacocinética
Los perfiles de concentración media de eritropoyetina en suero con respecto al tiempo (no corregidos por los niveles de eritropoyetina basal) en los 18 sujetos después de recibir una dosis de 150 UI/kg s. c. de rhEPO con y sin conservante de m-cresol eran comparables en cada punto de tiempo medido (Figura 1). Todos los sujetos tenían concentraciones de eritropoyetina basal predosis dentro del intervalo fisiológico normal (de <8,6 a 22 mUI/ml).
Se determinaron los parámetros farmacocinéticos a partir de los datos en suero corregidos por las concentraciones medias de eritropoyetina basal predosis (Tabla 2). La C_{máx} variaba desde un valor inferior de 85 mUI/ml a un valor superior de 558 mUI/ml (media de 198 \pm 123 mUI/ml) para la rhEPO con conservante y de 61 mUI/ml a un valor superior de 601 mUI/ml (media de 226 \pm 138 mUI/ml) para la rhEPO sin conservante. Es digno de mención que dos sujetos tenían valores de C_{máx} excepcionalmente elevados (es decir, Sujeto 111 para la rhEPO con conservante [558 mUI/ml] y Sujeto 118 para la rhEPO sin conservante [601 mUI/ml] en comparación con los otros 16 sujetos (es decir, <400 mUI/ml). Cuando la C_{máx} se calculó sin estos dos valores, los valores medios de C_{máx} para las formulaciones de rhEPO con y sin conservante eran más comparables (177 \pm 89 y 196 \pm 102 mUI/ml, respectivamente).
Para la formulación de rhEPO con conservante, la AUC_{(0-72 \ h)} de eritropoyetina media era de 5.754 \pm 2.284 mUI\cdoth/ml, que variaba de 2.973 a 11.185 mUI\cdoth/ml. De forma similar, la formulación de rhEPO sin conservante tenía una eritropoyetina media de AUC_{(0-72 \ h)} de 6.521 \pm 2.769 mUI\cdoth/ml, que variaba de 3.096 a 14.235 mUI\cdoth/ml (Tabla 2). Es digno de mención que dos sujetos tenían valores excepcionalmente de elevados de AUC_{(0-72 \ h)} (es decir, el Sujeto 111 para la rhEPO con conservante [11.185 mUI\cdoth/ml] y el Sujeto 118 para la rhEPO sin conservante [14.235 mUI\cdoth/ml] en comparación con los otros 16 sujetos (es decir, <10.000 mUI/ml). Cuando se calculó la AUC_{(0-72 \ h)} sin estos dos valores, los valores medios de AUC_{(0-72 \ h)} para las formulaciones de rhEPO con y sin conservante eran más comparables (5.460 \pm 1960 y 6.000 \pm 2.100 mUI/ml, respectivamente).
El t_{máx} medio era similar para la rhEPO con y sin conservante (12 \pm 5 y 13 \pm 5 h, respectivamente). El intervalo para el t_{máx} era similar para ambas formulaciones de rhEPO (8-24 h). Los valores de vida media terminal eran similares para la rhEPO con y sin conservante (20,2 \pm 8,1 y 19,8 \pm 6,6 h, respectivamente).
Los valores de vida media terminal observados en ambas partes de este estudio (-20 h) eran similares a los posteriores a la inyección sc descritos en la bibliografía (11, 12). Estos valores de vida media, sin embargo, eran más largos que los observados previamente después de la administración iv (-5 h) (11-14). Estos valores de vida media más largos no eran inesperados si la velocidad de absorción desde el lugar de inyección, en lugar de la velocidad de eliminación, es la etapa limitante de la velocidad.
TABLA 2 Parámetros farmacocinéticos medios \pm DT (% CV) después de una sola dosis s. c. de 150 UI/kg de rhEPO con y sin conservante de m-cresol al 0,3% Parámetro rhEPO con m-cresol al 0,3% rhEPO sin m-cresol al 0,3%
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Aunque el presente estudio se realizó en sujetos masculinos sanos, pueden preverse características de absorción y perfiles de seguridad similares en otras poblaciones de pacientes; tales como pacientes masculinos o femeninos con cáncer o insuficiencia renal crónica, pacientes pediátricos con insuficiencia renal, pacientes en programas de predepósito de sangre autóloga o pacientes que tienen prevista una cirugía programada.
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En conclusión, las dosis únicas administradas por vía subcutánea de rhEPO (150 UI/kg) con o sin conservante de m-cresol al 0,3% eran seguras y se toleraban bien por los sujetos masculinos sanos. En base a una incidencia comparativa de acontecimientos adversos, valores clínicos de laboratorio, constantes vitales y resultados del examen físico, los perfiles de seguridad de la rhEPO formulada con y sin conservante eran equivalentes. Las concentraciones múltiples propuestas de la nueva EPREX multidosis proporcionan potencialmente una utilidad clínica mayor en pacientes y profesionales sanitarios.
Ejemplo 2
Estudio de farmacocinética, seguridad y tolerancia de dos formulaciones después de dosis subcutáneas únicas de eritropoyetina humana recombinante en sujetos sanos
Objetivo: Comparar la farmacocinética, tolerancia y seguridad de dosis únicas administradas por vía subcutánea de dos formulaciones de eritropoyetina humana recombinante (epoetina alfa, rhEPO) tamponada con fosfato o con citrato y evaluar la significación del componente de tampón en la inducción de dolor.
Pacientes y métodos Pacientes
Se admitieron y completaron este estudio dieciocho voluntarios sanos de edades que variaban entre los 18-40 años de edad (edad media de 27 años) y pesaban entre 62,6-82,2 kg (peso medio de 70,1 kg). Los sujetos admitidos en este estudio no tenían valores de laboratorio anormales clínicamente significativos para hematología o química sérica; tenían un análisis de toxicología en orina, análisis de VIH y antígeno de superficie de hepatitis B negativos. Los sujetos no tenían indicios de hipertensión (por ejemplo, presión sanguínea diastólica \geq95 mm Hg); no tenían antecedentes de ninguna enfermedad hematológica primaria; antecedentes de enfermedad hepática, renal, cardiovascular, gastrointestinal, genitourinaria, metabólica o neurológica significativa; no tenían antecedentes de anemia o trastorno convulsivo; una sensibilidad conocida a productos derivados de mamíferos o a albúmina sérica humana; no tenían antecedentes de abuso de alcohol o drogas durante los últimos dos años; los sujetos no eran consumidores habituales y empedernidos de bebidas que contienen cafeína; los sujetos no habían participado en ningún otro ensayo clínico o ni habían recibido una transfusión sanguínea o donado en los 30 días anteriores a su admisión en el estudio; los sujetos no se habían expuesto a rhEPO en los tres meses anteriores a su admisión en el estudio; los sujetos no habían tenido enfermedades en los siete días anteriores a su admisión en el estudio; y los sujetos no tenían anomalías significativas en el examen físico o en las evaluaciones clínicas de laboratorio previas al estudio en los 14 días anteriores a su admisión en el estudio. Todos los sujetos podían evaluarse para determinar la seguridad y todas las extracciones de sangre para el análisis farmacocinético se extrajeron según lo programado. Todos los estudios se realizaron con autorización del comité ético institucional y con el consentimiento del paciente.
Diseño del estudio
Este era un estudio de Fase 1 de entrecruzamiento de dos periodos, aleatorizado, de etiqueta descubierta y un solo centro en voluntarios masculinos sanos. Dieciocho sujetos se asignaron aleatoriamente a uno de dos grupos de secuencia de tratamiento (nueve sujetos/grupo). Se administró rhEPO durante dos periodos de dosificación separados como una inyección s. c. embolada en la parte superior del muslo. Cada periodo de dosificación estaba separado por un periodo de eliminación de 14 días. Los sujetos se confinaron en el centro de estudio desde al menos 12 horas antes hasta 72 horas después de la dosificación para cada uno de los dos periodos de dosificación. El régimen de dosificación se resume en la Tabla 3.
TABLA 3 Régimen de dosificación y diseño del estudio
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Se usaron dos formulaciones de EPO en este estudio. La epoetina alfa (comercializada como EPREX® 10.000 UI/ml) preparada en tampón citrato y una nueva formulación de rhEPO (10.000 UI/ml) preparada en tampón fosfato. Ambas formulaciones se fabricaron por Ortho Biologics Division of Ortho McNeil Janssen Pharmaceuticals, Inc. (Manti, Puerto Rico).
Recogida de muestras de sangre
Se extrajo sangre en serie por punción venosa directa antes y después de la administración de EPO; no se empleó un fiador de heparina. Se obtuvieron muestras de sangre venosa (5 ml) para la determinación de las concentraciones de eritropoyetina en suero a \sim30, 20 y 10 minutos antes de la dosificación (3 muestras de medidas basales) y a aproximadamente los siguientes tiempos después de la dosificación: 30 minutos y a 1, 2, 5, 8, 12, 15, 18, 24, 30, 36, 48, 60 y 72 horas. Cada muestra de suero se dividió en dos alícuotas. Todas las muestras de suero se conservaron a -20ºC.
Las muestras de suero se enviaron en nieve carbónica. Se realizaron ensayos clínicos de laboratorio en ayunas (hematología, química sérica y análisis de orina) inmediatamente antes de la dosis inicial el día 1, la mañana del día 2, inmediatamente antes de la dosificación el día 16 y la mañana del día 17.
Métodos bioanalíticos
Se realizaron análisis de muestras para determinar los niveles de eritropoyetina en suero en RWJPRI. Se usó un procedimiento de kit de radioinmunoensayo (RIA) (Diagnostic Systems Laboratory [DSL], Webster TX) para la determinación de las concentraciones de eritropoyetina en suero. El RIA disponible en el mercado es un método competitivo de doble anticuerpo que usa un antisuero policlonal de conejo contra la eritropoyetina urinaria humana como el anticuerpo primario y eritropoyetina urinaria humana marcada con ^{125}I como el indicador. El kit de DSL se modificó por sustitución de la epoetina alfa por eritropoyetina urinaria en los patrones y las muestras de control de calidad. Las concentraciones patrón usadas en el ensayo fueron de 7,8, 15,6, 31,25, 50, 62,5, 100 y 125 mUI/ml. La sensibilidad, definida como el valor de retroajuste medio para el patrón más bajo que proporciona una precisión aceptable, era de 8,6 mUI/ml y el intervalo de ensayo se prolongó hasta 2.000 mUI/ml a través de diluciones de control de calidad.
Determinaciones de la seguridad
Se registraron las constantes vitales inmediatamente antes de cada dosificación (Días 1 y 16) y a las 6, 24, 48 y 72 horas después de cada dosificación. Las determinaciones de la seguridad se basaron en la incidencia y el tipo de acontecimientos adversos y en los cambios en los ensayos clínicos de laboratorio desde las medidas basales. Además, se evaluaron los cambios desde el estudio previo en las mediciones de las constantes vitales, incluyendo la presión sanguínea y los resultados del examen físico.
Determinaciones de la tolerancia
Ensayos para evaluar la tolerancia en el lugar de inyección se administraron 45 minutos después de cada inyección en los días de dosificación. Había dos escalas de dolor: una escala analógica visual (VAS) que consistía en una línea horizontal de 10 cm sin gradaciones, y una escala descriptiva verbal (VDS), que consistía en cinco cuadros colocados verticalmente con descripciones adyacentes. Los puntos finales de la escala VAS variaban de "sin dolor" a "el peor dolor que puedo imaginar" y los de la escala VDS variaban de "sin dolor" a "dolor muy intenso". Además, se preguntó a los sujetos sobre la duración del dolor.
Análisis de datos
Los valores de concentración en suero posteriores a la dosis se corrigieron por las concentraciones de eritropoyetina basal previas a la dosis restando de cada uno de los valores posteriores a la dosis la concentración media de eritropoyetina basal determinada a partir del cálculo de la media de los niveles de eritropoyetina de las tres muestras recogidas a los 30, 20 y 10 minutos anteriores a la dosificación. No se incluyeron las concentraciones de eritropoyetina en suero previas a la dosis en el cálculo del valor medio si eran inferiores al nivel de cuantificación del ensayo. Se determinaron los parámetros farmacocinéticos a partir de los datos de concentración en suero corregidos por las concentraciones de eritropoyetina basal.
Se calcularon los parámetros farmacocinéticos mediante métodos independientes de modelo en un sistema informático Digital Equipment Corporation VAX 8600 usando el programa informático BIOAVL versión 8.0 (Scientific Computer Systems, RWJPRI). Se determinaron los siguientes parámetros farmacocinéticos: concentración sérica máxima (C_{máx}); tiempo hasta la concentración sérica máxima (t_{máx}); área bajo la curva de concentración-tiempo (AUC) desde el tiempo cero hasta el tiempo de la última extracción de muestra sangre (AUC_{0-72}) calculada con el uso de la regla del trapezoide lineal; y vida media de eliminación terminal (t_{1/2}), calculada a partir de 0,693/constante de velocidad de eliminación. La constante de la velocidad de eliminación se estimó por regresión lineal de puntos de datos consecutivos en la región lineal terminal de la representación logarítmica lineal de la concentración con respecto al tiempo. Se usaron un mínimo de tres puntos de datos en la regresión. Para estas regresiones con coeficientes de determinación (r^{2}) <0,95, no se describieron los valores t correspondientes. La media, la desviación típica (DT) y el coeficiente de variación de los parámetros farmacocinéticos se calcularon para cada tratamiento. Se calculó la relación de los parámetros farmacocinéticos medios (fosfato/citrato).
Se llevaron a cabo análisis estadísticos tanto de los parámetros de biodisponibilidad sin procesar como de los transformados logarítmicamente. El análisis de modelos de varianza se ajustó para los datos con uno de los parámetros de biodisponibilidad de interés (AUC, C_{máx} -tanto sin procesar como transformados logarítmicamente) como la variable dependiente, y los efectos debidos al grupo de secuencia de tratamiento, los sujetos incluidos dentro de los grupos de secuencia, el tratamiento y el periodo como predictores. El ensayo para el efecto del grupo de secuencia de tratamiento se llevó a cabo a un nivel de significación del 10%, usando el cuadrado medio debido a los sujetos incluidos dentro de los grupos de secuencia como el término de error. Los efectos del periodo y del tratamiento se ensayaron a un nivel de significación del 5% usando el término de error residual. El cuadrado medio del error del modelo anterior se usó para estimar la variabilidad intrasujeto. Usando la variabilidad intrasujeto estimada, se construyeron los intervalos de confianza al 90% para la relación de los parámetros de biodisponibilidad media de rhEPO con tampón fosfato con respecto a rhEPO con tampón citrato.
Se realizaron análisis estadísticos sobre los tres parámetros de tolerancia. Antes de que pudiera realizarse el ensayo estadístico, las puntuaciones VAS y los valores de duración del dolor se transformaron para una normalización. Los tres parámetros se analizaron por medio de métodos de ensayo de entrecruzamiento. Los análisis de entrecruzamiento para los valores de VAS y duración del dolor transformados se realizaron usando Proc elm dentro de SAS®. El diseño del estudio se especificó con un periodo de eliminación de 14 días para eliminar la posibilidad de transmisión entre periodos de dosificación. Por lo tanto, los cálculos se basaron en el modelo de entrecruzamiento convencional sin efecto de transmisión. Los resultados del dolor evaluados con la VDS se analizaron por medio del ensayo de suma de los rangos de Wilcoxon-Mann-Whitney, de acuerdo con los métodos en los ensayos de entrecruzamiento descritos por Koch et al. En resumen, este procesamiento consiste en clasificar las diferencias de periodo para todos los pacientes en el ensayo y después usar el ensayo de Wilcoxon-Mann-Whitney para las diferencias entre los dos grupos de secuencia.
Resultados Resultados de seguridad
Se describieron seis acontecimientos clínicos adversos (AE) por seis sujetos durante los dos periodos de dosificación: dos AE se describieron en dos sujetos (11%) después de recibir la formulación tamponada con citrato y cuatro AE se describieron en cuatro sujetos (22%) después de recibir la formulación tamponada con fosfato del fármaco. Los dos AE descritos después de la inyección de la formulación tamponada con citrato fueron ambos dentro del sistema respiratorio (es decir, faringitis y sinusitis). Los cuatro AE descritos después de la inyección de la formulación tamponada con fosfato incluían: espasmos musculares, cefalea, dolor en las piernas y dermatitis. Todos los AE de ambos grupos se clasificaron como leves y eran de naturaleza transitoria.
Se observó una disminución en las concentraciones de bilirrubina total en suero en todos los sujetos el día después de ambas inyecciones para ambas formulaciones. La bilirrubina total media disminuyó hasta casi la mitad del valor de las medidas basales previas a la dosis durante los dos días de observación. Sin embargo, la magnitud de esta disminución era similar en ambos grupos de tratamiento y los niveles de bilirrubina total media permanecieron dentro del intervalo normal. Esta disminución parecía ser transitoria, puesto que los dos valores de medidas basales predosis (con una separación de 16 días) eran muy comparables. No se observaron cambios similares en otros ensayos de la función hepática (fosfatasa alcalina, SGOT, SGPT, SDH).
Excepto por la disminución inesperada en la bilirrubina sérica total, no se produjeron cambios clínicamente significativos en los primeros dos días después de la administración del fármaco en el examen físico, los ensayos clínicos de laboratorio, las presiones sanguíneas y las mediciones de las constantes vitales. Por lo tanto, los perfiles de seguridad para los dos grupos de tratamiento parecían similares.
Resultados de tolerancia
Dos pacientes que recibieron la formulación tamponada con citrato carecían de registros de dolor, uno durante cada periodo. El valor de VAS medio de las 18 inyecciones de fosfato era de 21,5 \pm 27,5 mm en comparación con 34,3 \pm 28,6 mm de las 16 inyecciones de citrato (p = 0,0692). Mientras que la sensación del dolor después de la solución de fosfato era independiente del periodo de las inyecciones, el dolor después de la formulación de citrato se percibió como más intenso durante el periodo I que durante el periodo II (39,3 \pm 31,7 mm frente a 29,4 \pm 26,3).
La diferencia entre las dos formulaciones en la intensidad de VDS era estadísticamente significativa (p = 0,0339). Trece sujetos (72%) tenían o ningún dolor o dolor leve y cinco sujetos (28%) tenían un dolor moderado/intenso/muy intenso después de la formulación tamponada con fosfato. Los registros correspondientes después de la formulación tamponada con citrato se realizaron en 8 (44%) y 10 (56%) de los sujetos, respectivamente. Además, la sensación de dolor VDS se percibió como ligeramente más intensa cuando la secuencia era de citrato/fosfato.
La duración del dolor era significativamente superior (p = 0,0057) después de la formulación tamponada con citrato (1,5 \pm 2,0 minutos) que después de la formulación tamponada con fosfato (0,4 \pm 0,5 minutos). Aunque la diferencia ya era evidente durante el periodo I (media de 0,8 frente a 0,3 minutos) se hizo muy evidente durante el periodo II (media de 2,2 frente a 0,5 minutos), es decir, cuando los sujetos que recibían citrato ya habían experimentado con la solución de fosfato. Es digno de mención, que ambas formulaciones de fármaco carecían de un registro durante el periodo I. El presente estudio ha documentado que la formulación de EPREX® convencional (con citrato) causa significativamente más dolor en el lugar de inyección que la formulación que usa fosfato como el tampón. La sensación de dolor inducida por citrato era más intensa cuando la secuencia de ensayo era de citrato/fosfato en oposición a fosfato/citrato, indicando que una experiencia en las medidas basales modificaría la percepción del dolor. También con respecto a la duración del dolor, la diferencia entre las dos formulaciones era significativamente superior (p = 0,0057), sin embargo, en este escenario, el dolor inducido por citrato se percibía como mucho más duradero cuando la secuencia era de fosfato/citrato.
Resultados farmacocinéticos
Los perfiles de concentración media de eritropoyetina en suero con respecto al tiempo (no corregidos por los niveles de eritropoyetina basal) en los 18 sujetos después de recibir una dosis de 150 UI/kg s. c. de rhEPO tamponada en citrato o fosfato eran similares (Figura 2). Todos los sujetos tenían concentraciones de eritropoyetina basal predosis dentro del intervalo fisiológico normal (de <8,6 a 18 mUI/ml).
Se determinaron los parámetros farmacocinéticos a partir de los datos en suero corregidos por las concentraciones medias de eritropoyetina basal predosis (Tabla 4). La C_{máx} variaba desde un valor inferior de 74 mUI/ml a un valor superior de 583 mUI/ml (media de 260 \pm 169 mUI/ml) para la rhEPO con tampón citrato y de 64 mUI/ml a un valor superior de 642 mUI/ml (media de 245 \pm 167 mUI/ml) para la rhEPO con tampón fosfato. Unos cuantos sujetos en cada grupo tenían valores de C_{máx} excepcionalmente elevados. No había una diferencia estadísticamente significativa (p > 0,05) en la C_{máx} entre las dos formulaciones. Para la formulación de rhEPO con tampón citrato, la AUC_{(0-72 \ h)} de eritropoyetina media era de 7.992 \pm 3.319 mUI\cdoth/ml, que variaba de 3.215 a 13.077 mUI\cdoth/ml. De forma similar, la formulación de rhEPO con tampón fosfato tenía una AUC_{(0-72 \ h)} de eritropoyetina media de 8.059 \pm 4.021 mUI\cdoth/ml, que variaba de 3.445 a 17.996 mUI\cdoth/ml (Tabla 4). No había diferencias estadísticamente significativas (p > 0,05) en la AUC_{(0-72 \ h)} entre las dos formulaciones. El t_{máx} medio era similar para la rhEPO con tampón citrato y fosfato (14 \pm 5 y 17 \pm 10 h, respectivamente). El intervalo para el t_{máx} era similar para ambas formulaciones de rhEPO (8-24 h). Los valores de vida media terminal eran similares para la rhEPO con tampón citrato y fosfato (13,4 \pm 10,8 y 19,7 \pm 14,9 h, respectivamente).
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TABLA 4 Parámetros farmacocinéticos medios \pm DT (% CV) después de una sola dosis s.c. de 150 UI/kg de rhEPO con tampón citrato y fosfato
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Claims (8)

1. Una formulación farmacéutica de eritropoyetina que comprende:
(a)
un agente tamponante del pH;
(b)
una cantidad estabilizante de albúmina sérica humana;
(c)
una cantidad estabilizante de un aminoácido;
(d)
una cantidad antimicrobiana de cresol; y
(e)
una cantidad farmacéutica de eritropoyetina.
2. La formulación de la reivindicación 1, en la que el conservante de cresol es meta-cresol y en la que el m-cresol está en el intervalo del 0,2% al 0,5%.
3. La formulación de la reivindicación 2, en la que el conservante de meta-cresol es aproximadamente el 0,3%.
4. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la cantidad estabilizante de albúmina es de aproximadamente 0,25 g/l.
5. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la formulación es acuosa.
6. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que el agente tamponante del pH está en un intervalo de 10 mM a 30 mM.
7. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que el agente tamponante del pH proporciona un intervalo de pH de 5 a 8, preferiblemente de 6 a 7,5, más preferiblemente de aproximadamente 6,9.
8. La formulación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que el agente tamponante del pH es fosfato sódico monobásico/fosfato sódico dibásico, citrato sódico/ácido cítrico o acetato sódico/ácido acético.
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