ES2311471T3 - Cepa de lactobacillus delbrueckii y su uso para el cribado de plasmidos. - Google Patents
Cepa de lactobacillus delbrueckii y su uso para el cribado de plasmidos. Download PDFInfo
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Abstract
Cepa de Lb. delbrueckii ssp. bulgaricus llamada VI104, depositada el 17 de septiembre de 1999, con el número I-2316 ante el CNCM. Procedimiento de cribado de plásmidos capaces de transformar bacterias de la especie Lb. delbrueckii, caracterizado porque se lleva a cabo la electroporación de la cepa VI104 según la reivindicación 1, en presencia del plásmido que se va a ensayar, y la detección de las bacterias transformadas que comprenden dicho plásmido.
Description
Cepa de Lactobacillus delbrueckii y su
uso para el cribado de plásmidos.
La presente invención se refiere a la
introducción de plásmidos en Lactobacillus delbrueckii.
La transformación de bacterias lácticas para
permitir que expresen genes de interés, en particular con el fin de
mejorar las propiedades de estas bacterias en el marco de su uso
agroalimentario, o de conferirles la capacidad de producir
sustancias con interés terapéutico, ha sido objeto de muchas
investigaciones.
Sin embargo, los resultados obtenidos varían
mucho según la especie bacteriana implicada. De hecho, algunas
especies se denominan "refractarias" a la transformación, lo
cual limita considerablemente las posibilidades de introducción y
expresión de ADN extraño. Entre las bacterias lácticas refractarias
a la transformación se menciona la especie Lactobacillus
delbrueckii, que comprende en particular las subespecies Lb.
delbrueckii ssp. bulgaricus, Lb. delbrueckii ssp.
lactis, y Lb. delbrueckii ssp. delbrueckii.
Hasta ahora, los ensayos de transferencia de
genes en Lb. delbrueckii han dado pocos resultados; sólo se
han identificado algunos plásmidos capaces de establecerse en esta
especie. Langella y Chopin, [FEMS Microbiol. Lett., 51,
149-52, (1989)] han descrito la introducción por
conjugación de ADN extraño (plásmido conjugativo pIP501 de
Streptococcus agalactiae) en Lb. delbruckii ssp.
bulgaricus; la patente PCT WO 93/18164 describe la
introducción en Lb. delbruckii ssp. bulgaricus de
plásmidos que comprenden el sistema de replicación del replicón
mutante pVE6002 (CNCM 1-1179) denominado también
pG+host, derivado termosensible (Ts) del plásmido pWVO1; la
solicitud EP 0603416 a nombre de MEIJI MILK PRODUCTS CO LTD describe
el uso del plásmido conjugativo pAM\beta1 para integrar un gen
heterólogo en el cromosoma de Lb. delbruckii. Boizet y col.
[Appl. Environ. Microbiol., 54, 3014-3018
(1984)], han descrito la introducción de ADN de bacteriófagos por
transfección de protoplastos de Lb. delbrueckii ssp.
bulgaricus. En el caso de la transformación por ADN
plasmídico desnudo, Zink y col. (FEMS Microbiology Letters.,
78, 207-212, (1991)) publican la primera
transformación por electroporación de una cepa de Lb.
Delbruckii ssp. Lactis (cepa WS97); sin embargo, después
se verá que esta cepa es una cepa de LB. Casei (Klein y col.
System. Appl. Microbiol. 18, 493-503,
(1995); Tannock y col. (Plasmid., 31, 60-71,
(1994)) describen la obtención de transformantes de Lb.
Delbruckii 100-14 después de electroporación de
esta cepa con ayuda del plásmido pGT633 que resulta de Lb.
reuteri; la frecuencia de transformación observada es de 20
transformantes por \mug de ADN plasmídico; Klein y col.
(System. Appl. Microbiol. 18,493-503, (1995))
publican la transformación por electroporación de la cepa DSM7290
de Lb. Delbruckii ssp. Lactis por el vector plásmido
pCU1882 derivado de un plásmido de Lb. Curvatus; la
frecuencia de transformación descrita es de 10 por \mug de ADN
plasmídico; la patente EP 529088, a nombre de MEIJI MILK PRODUCTS CO
LTD describe un plásmido llamado pBUL1, originario de la cepa
M-878 de Lb. delbrueckii ssp.
bulgaricus y sus derivados, que se pueden usar para
transformar Lb. delbrueckii; la patente JP
5-176777 describe la obtención de transformantes de
Lb. delbrueckii por electroporación usando plásmidos
derivados de pBUL1, o del plásmido pSYE originario de
Lactococcus lactis; la electroporación se realiza después de
una etapa intermedia de cultivo de Lb. delbrueckii a 42ºC
durante 2 a 3 horas en un medio LCMG cuyo pH inicial está
comprendido entre 5 y 5,5 y que contiene ácido fórmico (5 a 5,5
mg/ml). A esta etapa le siguen lavados y un tratamiento térmico a
temperaturas que varían de 0 a 50ºC, durante 10 minutos a 24 horas.
Sasaki y col. [Electrotransformation of Lactobacillus
delbrueckii subsp. bulgaricus; FEMS Microbiol.
Rev. 12, 8 (1993)], publican la transformación de la cepa
ATCC11842 y de una cepa derivada de M-878 de Lb.
delbrueckii ssp. bulgaricus según el procedimiento
descrito en la patente JP 5-176777; la frecuencia de
transformación en estas condiciones es de 1 a 10 transformantes por
\mug de ADN plasmídico. Ésta aumenta hasta 6 x 10^{4}
transformantes por \mug de ADN plasmídico cuando se usa un
subclón de M-878 (llamado en lo sucesivo
T-11), deficiente en un sistema de restricción. La
transformación de esta cepa (T-11) con un plásmido
derivado de PSYE1 que lleva un gen de
\alpha-amilasa también se ha descrito por Satoh y
col. [Appl. Environ. Microbiol., 63,
4593-4596, (1997)].
La identificación de otros plásmidos que se
puedan usar para transformar Lb. delbrueckii está dificultada
por el carácter "refractario" de esta especie; de hecho,
incluso en los casos de plásmidos que pueden transformar Lb.
delbrueckii que se han mencionado antes, la tasa de
transformación en general es pequeña y la reproducibilidad de los
resultados es irregular.
Por lo tanto, para ensayar la capacidad de otros
plásmidos para mantenerse en forma libre o integrada en Lb.
delbrueckii es conveniente disponer de una cepa transformable y
de un procedimiento de preparación de células competentes que
permitan limitar los fracasos debidos al carácter refractario de
Lb. delbrueckii.
Por lo tanto, la presente invención se ha fijado
como objetivo la obtención de cepas de Lb. delbrueckii que
se puedan transformar más fácilmente, con el fin de usarlas como
huéspedes que permitan la replicación y la expresión de ADN
extraño, así como modelos para ensayar plásmidos con el objeto de
usarlos después para transformar otras cepas de Lb.
delbrueckii, en particular cepas industriales.
Actualmente se conoce una sola cepa de Lb.
bulgaricus que permite tasas de transformación elevadas usando
ADN plasmídico cuya preparación no se ha hecho a partir de Lb.
delbrueckii; se trata de la cepa mutante T-11
mencionada antes, que es deficiente en un sistema de
restricción/modificación. No obstante, dicha cepa no constituye un
buen modelo para ensayar los plásmidos destinados a ser introducidos
en cepas que tienen un sistema de restricción/modificación
intacto.
Los autores de la invención han conseguido
obtener, a partir de una cepa representativa de Lb.
delbrueckii ssp. bulgaricus, la cepa ATCC11842, una cepa
mutante cuyos sistemas de restricción/modificación parecen
similares a los de la cepa salvaje ATCC11842 y que se puede
transformar mucho más fácilmente y de forma más reproducible que
esta. El uso de esta cepa mutante les ha permitido identificar
plásmidos que se pueden usar potencialmente para transformar Lb.
delbrueckii.
La presente invención tiene como objeto la cepa
de Lb. delbrueckii ssp. bulgaricus, denominada en lo
sucesivo VI104, depositada según el Tratado de Budapest el 17 de
septiembre de 1999, con el número I-2316, ante la
CNCM (Colección nacional de cultivos de microorganismos), 25 rue du
Docteur Roux, en Paris.
La presente invención tiene también como objeto
un procedimiento de cribado de plásmidos capaces de transformar
bacterias de la especie Lb. delbrueckii, caracterizados
porque se lleva a cabo la electroporación de la cepa VI104 en
presencia de un plásmido que se va a ensayar, y la detección de las
bacterias transformadas.
En las bacterias transformadas, el plásmido
puede estar presente en forma libre, en el caso de un plásmido
replicativo, o en forma integrada en el caso de un plásmido
integrativo.
Ventajosamente, las copias de dicho plásmido se
pueden recuperar a partir de dichas bacterias transformadas con el
fin de usarlos para transformar VI104 u otras cepas de Lb.
delbrueckii, en particular cepas cuyos sistemas de restricción
son barreras para la transformación.
La electroporación de la cepa VI104 se puede
hacer de acuerdo con las técnicas conocidas de la técnica anterior
para la electroporación de Lb. delbrueckii, por ejemplo la
descrita en la patente JP 5-176777. Sin embargo,
los autores de la invención han observado que se obtiene un
rendimiento de transformación mejor si se suprime la etapa
intermedia de cultivo puesto en práctica en este procedimiento, y si
la electroporación se realiza en los cultivos al principio de la
fase estacionaria y después de un tratamiento térmico a 45ºC entre
10 y 30 min.
La presente invención se entenderá mejor con
ayuda del siguiente complemento de la descripción, que se refiere a
ejemplos no limitantes de uso de la cepa VI104 para la selección de
plásmidos que se puedan usar para transformar otras cepas de Lb.
delbrueckii.
Ejemplo
1
La siguiente tabla I muestra que las cepas
ATCC11842 y VI104 restringen de forma equivalente 3 fagos (C5h2,
C5, 11) propagados en las cepas CNRZ448 o CNRZ327.
Por otra parte, no se observa ninguna
restricción por parte de ATCC11842 o VI104 para los fagos propagados
por estas cepas. Estos resultados indican que los sistemas de
restricción y modificación puestos en juego en estos experimentos
son comparables a los de las cepas ATCC11842 o VI104.
Ejemplo
2
Las bacterias VI104 se cultivan en medio MRS,
glicina al 0,1% (DIFCO) hasta el inicio de la fase estacionaria.
Después se centrifugan y se lavan en tampón de electroporación
(sacarosa 0,4 M, MgCl_{2} 1 mM, KH_{2}PO_{4} 5 mM, pH 6,0) y
se suspenden en este mismo tampón con una concentración
correspondiente a una DO_{600} de aproximadamente 50. La
suspensión se incuba 20 min a 45ºC y después se enfría sobre hielo.
Se mezcla una parte alícuota de 80 \mul de la suspensión con el
ADN plasmídico (\sim1,5 \mug) y la mezcla se transfiere a una
cuba de electroporación de 0,2 cm. La electroporación se realiza a 1
kV, 800 \Omega y 25 \muF.
Inmediatamente después de la electroporación, la
mezcla se diluye en 2 ml de medio de expresión (sacarosa 0,2 M,
leche desnatada en polvo al 5%, extracto de levadura al 0,1%,
casaminoácidos al 1%, MgCl_{2} 25 mM). Después de incubar durante
3 h a 37ºC en este medio, las células se exponen en placas de medio
selectivo (MRS agar con eritromicina 10 \mug/ml o cloranfenicol
10 \mug/ml según el marcador de selección que lleve el plásmido
que se va a ensayar); las placas se incuban en jarra de anaerobiosis
a 37ºC durante 48 h, y se seleccionan las colonias resistentes a la
eritromicina o al cloranfenicol para confirmar la presencia de ADN
plasmídico.
Ejemplo
3
La transformación de VI104 por diferentes tipos
de plásmidos se ha realizado según el protocolo descrito en el
ejemplo 2 anterior. La presencia de formas plasmídicas libres en los
transformantes se ha establecido por extracción del ADN total
[Fouet y Sonenshein, J. Bacteriol., 172,
835-44, (1990)], electroforesis y opcionalmente
hibridación Southern con una sonda plasmídica. Se analiza en
paralelo ADN representativo del usado para la transformación y
permite confirmar la identidad de tamaño de los plásmidos.
Los resultados se ilustran en las figuras 1 a
4:
La Figura 1 muestra los resultados del análisis
electroforético del ADN total de los transformantes de L.
bulgaricus VI104. El ADN total se ha preparado a partir de los
transformantes de pJK650 (A), pLEM415 (B) y pGT633 (C). En cada
caso, los pocillos 1 y 2 corresponden, respectivamente, al ADN
plasmídico representativo del usado en la transformación y al ADN
total de un transformante.
La Figura 2 muestra los resultados del análisis
de ADN total de un transformante de L. bugaricus VI104 por
pULP8. Los pocillos 1 y 2 corresponden, respectivamente, al análisis
electroforético del ADN plasmídico que representa el usado en la
transformación y al ADN total de un transformante. Los pocillos 4 y
5 corresponden, respectivamente, a la hibridación de una sonda
pULP8 contra el ADN plasmídico representativo del usado en la
transformación y contra el ADN total de un transformante después de
digestiones por la enzima EcoRI.
La Figura 3 muestra los resultados de
hibridación del ADN total de los transformantes de L.
bugaricus VI104 por pULP1882. El ADN total se ha preparado a
partir de los transformantes de pCU1882. Los pocillos 1 y 3
contienen el ADN plasmídico representativo del usado en la
transformación y los pocillos 2 y 4 contienen el ADN total de un
transformante. El ADN está en la forma nativa en los pocillos 1 y 2,
y digerido por la enzima SalI en los pocillos 3 y 4. La
sonda usada es pCU1882.
La Figura 4 son los resultados de la hibridación
del ADN total de dos transformantes de L. bulgaricus VI104
por pNZ12. Los pocillos 1 y 4 contienen el ADN plasmídico
representativo del usado en la transformación y los pocillos 2, 3,
5 y 6 contienen el ADN total de los transformantes. El ADN está en
forma nativa en los pocillos 1 a 3, y digerido por la enzima
NcoI en los pocillos 4 a 6. La sonda usada es pNZ12.
El plásmido pJK650 (8,96 kb, Klein y col.,
System. Appl. Microbiol. 18, 493-503, 1995)
es un derivado del plásmido pWS58 aislado de una cepa de Lb.
delbrueckii ssp. lactis. Este plásmido que lleva el gen
de resistencia a la eritromicina de pE194 [Horinouchi y Weisblum,
J. Bacteriol., 150, 804-814, (1982)]
transforma la cepa VI104. La presencia de formas libres del plásmido
en los transformantes indica que este plásmido es replicativo en
VI104 (Figura 1A).
Se han ensayado en diferentes plásmidos
derivados de replicones de "círculo rodante" su capacidad para
transformarse y mantenerse en VI104.
No se ha observado ningún transformante con los
siguientes plásmidos:
- pE194, plásmido Ery^{R} de forma natural
originario de S. aureus [Horinouchi y Weisblum, 1982,
publicación citada antes].
Por el contrario, se han obtenido transformantes
con los siguientes plásmidos:
- pLEM7 [Fons y col., Plasmid, 37,
199-203, (1997)] Ery^{R} de forma natural y su
derivado pLEM415 (Fig. 1B).
- pULP8 (6,6 kb) [Bringel y col.,
Plasmid, 22, 193-202, (1989)], Ery^{R}
derivado (gen de pVA891, [Macrina y col., Gene,
25,145-50, (1983)] del plásmido pLPl de
Lactobacillus plantarum [Bouia y col., Plasmid,
22,185-192, (1989)], dan transformantes con VI104.
El análisis de los transformantes de pULP8 (Fig. 2) ha permitido
visualizar formas libres por hibridación con una sonda radiactiva
específica de pULP8.
- El plásmido pCU1882 (6,7 kb), Cm^{R}
derivado (gen de pC194) de pLC2 de L. curvatus LTH683 [Klein
y col., 1993, publicación citada antes] ha conducido a la obtención
de transformantes Cm^{R} en VI104.
El análisis de los transformantes ha permitido
visualizar las formas libres por hibridación con una sonda
radiactiva específica de pCU1882 (Fig. 3).
El plásmido pGT633 (9,8 kb), aislado de
Lactobacillus reuteri, es Ery^{R} de forma natural [Tannock
y col., Plasmid., 31, 60-71, (1994)]. El
análisis de los transformantes ha permitido la detección de
moléculas libres (Fig. 1C).
- pNZ12 y pNZ121, Cm^{R} derivados (gen
Cm^{R} de pC194) del plásmido pSH71 de L. lactis [De Vos,
FEMS Microbiol. Rev., 46, 281-295, (1987)]
transforman VI104. El análisis de los transformantes de cada
plásmido permite la detección de moléculas libres. La figura 4
ilustra los resultados del análisis para pNZ12.
Langella y Chopin PIN [1989, publicación citada
antes] han demostrado que el plásmido conjugativo pIP501 (30 kb,
originario de Streptococcus agalactiae) se replica con un
número de copias muy bajo en L. bulgaricus (CNRZ431). Debido
al gran tamaño de este plásmido no se puede considerar su uso para
la electrotransformación de VI104. Los autores de la invención han
ensayado derivados de pIP501 no conjugativos y de tamaño menor que
pGB305\Delta (Ery^{R}, [Le Chatelier y col., Plasmid, 29,
50-56, (1995)]). Este plásmido transforma VI104 y
se vuelve a encontrar en forma libre detectable por análisis del ADN
total.
- plL253 (Ery^{R}) es un derivado no
conjugativo de pAM\beta1 [Simon y Chopin, Biochimie, 70,
559-566, (1988)]. Se han obtenido varios
transformantes con VI104. La extracción del ADN plasmídico permite
descubrir plásmido libre con número de copias bajo.
El plásmido pMCl contiene el sitio de unión de
attP (que solapa con el gen tRNA^{ser}) y el gen de la
integrasa (int) del bacteriófago mv4 de L. delbrueckii
[Dupont y col., J. Bacteriol., 177, 586-595,
(1995)]. Este vector se integra en el gen tRNA^{ser} de una
gran variedad de bacterias lácticas tales como L. plantarum, L.
casei, L. lactis, E. faecalis y Streptococcus pneumonia
[Auvray y col., J. Bacteriol., 179,
1837-1845, (1997)]. Con VI104 se obtienen
integrantes; el análisis estructural de su ADN cromosómico muestra
que pMC1 se integra de forma específica.
Estos resultados muestran que varios tipos de
plásmidos replicativos (plásmidos de origen homólogo, plásmidos de
origen heterólogo de replicación de círculo rodante, plásmidos de
origen heterólogo de replicación theta), así como un vector
integrativo, pueden transformar VI104.
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Ejemplo
4
Los plásmidos pJK650, pGB305\Delta y pLEM415,
que transforman VI104, se han usado también para transformar la
cepa ATCC11842 de L. delbrueckii ssp. bulgaricus y la
cepa CNRZ327 de L. delbrueckii ssp. lactis, según el
protocolo descrito antes en el ejemplo 2.
En estas condiciones, se obtienen transformantes
de pJK650 y de pGB305\Delta con las cepas ATCC11842 y CNRZ327, y
se obtienen transformantes de pLEM415 con la cepa CNRZ327.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta lista de referencias citadas por el autor
de la solicitud es sólo para la conveniencia del lector y no forma
parte del documento de patente europea. Aunque se ha tenido mucho
cuidado al recopilar las referencias, no se pueden excluir errores
u omisiones y la OEP rechaza cualquier responsabilidad en este
aspecto.
- WO 9318164 A
- EP 0603416 A
- EP 529088 A
- JP 5176777 A
- LANGELLA; CHOPIN, FEMS
Microbiol. Lett., 1989, vol. 51,
149-52
- BOIZET y col., Appl. Environ.
Microbiol., 1984, vol. 54, 3014-3018
- ZINK y col., FEMS Microbiology
Letters, 1991, vol. 78, 207-212
- KLEIN y col., System. Appl.
Microbiol., 1995, vol. 18, 493-503
- TANNOCK y col., Plasmid,
1994, vol. 31, 60-71
- SASAKI y col., Electrotransformation of
Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. FEMS
Microbiol. Rev., 1993, vol. 12, 8
- SATOH y col., Appl. Environ.
Microbiol., 1997, vol. 63, 4593-4596
- FOUET; SONENSHEIN, J.
Bacteriol., 1990, vol. 172, 835-44
- HORINOUCHI; WEISBLUM, J.
Bacteriol., 1982, vol. 150, 804-814
- FONS y col., Plasmid,
1997, vol. 37, 199-203
- BRINGEL y col., Plasmid,
1989, vol. 22, 193-202
- MACRINA y col., Gene,
1983, vol. 25, 145-50
- BOUIA y col., Plasmid,
1989, vol. 22, 185-192
- DE VOS, FEMS Microbiol. Rev.,
1987, vol. 46, 281-295
- LE CHATELIER y col., Plasmid,
1995, vol. 29, 50-56
- SIMON; CHOPIN, Biochimie,
1988, vol. 70, 559-566
- DUPONT y col. J. Bacteriol.,
1995, vol. 177, 586-595
- AUVRAY y col., J. Bacteriol.,
1997, vol. 179, 1837-1845
Claims (3)
1. Cepa de Lb. delbrueckii ssp.
bulgaricus llamada VI104, depositada el 17 de septiembre de
1999, con el número I-2316 ante el CNCM.
2. Procedimiento de cribado de plásmidos capaces
de transformar bacterias de la especie Lb. delbrueckii,
caracterizado porque se lleva a cabo la electroporación de la
cepa VI104 según la reivindicación 1, en presencia del plásmido que
se va a ensayar, y la detección de las bacterias transformadas que
comprenden dicho plásmido.
3. Procedimiento según la reivindicación 2,
caracterizado porque comprende además la recuperación de
copias de dicho plásmido a partir de dichas bacterias.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9911683 | 1999-09-17 | ||
| FR9911683A FR2798669B1 (fr) | 1999-09-17 | 1999-09-17 | Souche de lactobacillus delbrueckii et son utilisation pour le criblage de plasmides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2311471T3 true ES2311471T3 (es) | 2009-02-16 |
Family
ID=9549995
Family Applications (1)
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