ES2315430T3 - Inhibidores de nf-kb. - Google Patents

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ES2315430T3 ES02800491T ES02800491T ES2315430T3 ES 2315430 T3 ES2315430 T3 ES 2315430T3 ES 02800491 T ES02800491 T ES 02800491T ES 02800491 T ES02800491 T ES 02800491T ES 2315430 T3 ES2315430 T3 ES 2315430T3
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Abstract

Un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) dada a continuación: (I) a continuación: (Ver fórmula) R 1 es CONH 2 o SO 2NH 2; R 2 es NR 5R 6; R 3 es H, o halógeno; R 4 es arilo o heteroarilo; R 5 es H o alquilo; con la condición de que cuando R 1 es CONH 2, R 2 se seleccione entre el grupo constituido por H, CO-alquilo, SO 2alquilo, CONH2, CONH-alquilo, CONH-arilo, CONH-heteroarilo, CSNH2, CSNH-alquilo, CSNH-arilo, CSNHheteroarilo, SO2NH2, SO2NH-alquilo, SO2NH-arilo y SO2NH-heteroarilo; Cuando R1 es SO2NH2, R6 es CONH2; y cuando R1 es CONH2, R2 no es NHCONH2; y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solvatos del mismo.

Description

Inhibidores de NF-\kappaB.
Campo de la invención
Esta invención se refiere en general a un procedimiento de inhibir la activación patológica del factor de transcripción NF-\kappaB (factor nuclear \kappaB) usando compuestos de aminotiofeno. Dichos procedimientos son particularmente útiles para tratar enfermedades en las que está implicada la activación de NF-\kappaB. Más específicamente, estos procedimientos pueden usarse para inhibir la fosforilación de I\kappaB (proteína inhibidora \kappaB) por IKK-\beta (I\kappaB quinasa \beta) que impide la posterior degradación y activación de dímeros de NF-\kappaB. Dichos procedimientos son útiles en el tratamiento de una diversidad de enfermedades asociadas con la activación de NF-\kappaB incluyendo trastornos inflamatorios y de la reparación tisular; particularmente, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis; osteoporosis y enfermedades fibróticas; dermatosis incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones de la piel inducidas por radiación ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer incluyendo enfermedad de Hodkins, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de distrés respiratorio del adulto, ataxia telangiectasia.
Antecedentes de la invención
Recientes avances en la compresión científica de los mediadores implicados en enfermedades inflamatorias agudas y crónicas y cáncer han conducido a nuevas estrategias en la búsqueda de agentes terapéuticos eficaces. Las estrategias tradicionales incluyen la intervención dirigida directa, tal como el uso de anticuerpos específicos, antagonistas de receptores o inhibidores de enzimas. Recientes avances en la elucidación de los mecanismos reguladores implicados en la transcripción y traducción de una diversidad de mediadores han conducido a un interés aumentado en las estrategias terapéuticas dirigidas al nivel de la transcripción génica.
El factor nuclear \kappaB (NF-\kappaB) pertenece a una familia de complejos de factores de transcripción diméricos estrechamente relacionados compuestos por diversas combinaciones de la familia ReI/NF-\kappaB de polipéptidos. La familia está constituida por cinco productos génicos individuales en mamíferos, ReIA (p65), NF-\kappaB1 (p50/p105), NF-\kappaB2 (p49/p100), c-ReI y ReIB, pudiendo todos formar heterodímeros u homodímeros. Estas proteínas comparten un "dominio de homología ReI" de 300 aminoácidos altamente homólogo que contiene los dominios de unión a ADN y de dimerización. En el extremo C-terminal del dominio de homología ReI existe una secuencia de translocación nuclear importante en el transporte de NF-\kappaB desde el citoplasma hasta el núcleo. Además, p65 y cReI poseen potentes dominios de transactivación en sus extremos C-terminales.
La actividad de NF-\kappaB está regulada por su interacción con un miembro de la familia de proteínas inhibidoras I\kappaB. Esta interacción bloquea eficazmente la secuencia de localización nuclear sobre las proteínas NF-\kappaB, impidiendo de este modo la migración del dímero al núcleo. Una amplia diversidad de estímulos activan NF-\kappaB a través de lo que son probablemente múltiples rutas de transducción de señales. Se incluyen productos bacterianos (LPS), algunos virus (VIH-1, HTLV-1), citoquinas inflamatorias (TNF\alpha, IL-1), estrés ambiental y oxidativo y agentes que dañan el ADN. Sin embargo, es aparentemente común a todos los estímulos la fosforilación y posterior degradación de I\kappaB. I\kappaB se fosforila en dos serinas N-terminales mediante las I\kappaB quinasas recientemente identificadas (IKK-\alpha e IKK-\beta). Los estudios de mutagénesis dirigida indican que estas fosforilaciones son críticas para la posterior activación de NF-\kappaB por el hecho de que una vez que se fosforila la proteína, se marca para su degradación a través de la ruta de la ubiquitina-proteasoma. Libres de I\kappaB, los complejos NF-\kappaB activos son capaces de translocarse al núcleo donde se unen de una forma selectiva a secuencias potenciadoras específicas de genes preferidas. Se incluyen en los genes regulados por NF-\kappaB varias citoquinas y quimioquinas, moléculas de adhesión celular, proteínas de fase aguda, proteínas inmunoreguladoras, enzimas metabolizantes de eicosanoides y genes antiapoptóticos.
Se sabe bien que NF-\kappaB desempeña un papel clave en la expresión regulada de un gran número de mediadores proinflamatorios incluyendo citoquinas tales como TNF, IL-1\beta, IL-6 e IL-8, moléculas de adhesión celular tales como ICAM y VCAM y óxido nítrico sintasa inducible (iNOS). Se sabe que dichos mediadores desempeñan un papel en el reclutamiento de leucocitos en sitios de inflamación y, en el caso, de iNOS puede conducir a destrucción de órganos en algunas enfermedades inflamatorias y autoinmunes.
La importancia de NF-\kappaB en trastornos inflamatorios se refuerza adicionalmente por estudios de inflamación de las vías respiratorias incluyendo asma, en los que se ha demostrado que se activa NF-\kappaB. Esta activación puede subyacer a la producción de citoquinas aumentada y a la infiltración de leucocitos característica de estos trastornos. Además, se sabe que los esteroides inhalados reducen la hipersensibilidad de las vías respiratorias y suprimen la respuesta inflamatoria en vías respiratorias asmáticas. A la luz de descubrimientos recientes con respecto a la inhibición de NF-\kappaB por glucocorticoides, se puede especular que estos efectos estén mediados a través de una inhibición de NF-\kappaB.
Pruebas adicionales para un papel de NF-\kappaB en trastornos inflamatorios vienen del estudio de la membrana sinovial reumatoide. Aunque NF-\kappaB está presente normalmente como un complejo citoplasmático inactivo, recientes estudios inmunohistoquímicos han indicado que NF-\kappaB está presente en los núcleos y, por lo tanto, activo en las células que comprenden la membrana sinovial reumatoide. Además, se ha demostrado que NF-\kappaB está activado en células sinoviales humanas en respuesta a la estimulación con TNF-\alpha o IL-1\beta. Dicha distribución puede ser el mecanismo subyacente para la producción aumentada de citoquinas y eicosanoides característica de este tejido. Véase Roshak, A. K., y col., J. Biol. Chem., 271, 31496-31501 (1996). La expresión de IKK-\beta se ha demostrado en sinoviocitos de pacientes con artritis reumatoide y estudios de transferencia génica han demostrado el papel central de IKK-\beta en la producción de mediadores inflamatorios estimulada en estas células. Véase Aupperele y col. J. Immunology 1999. 163: 427-433 y Aupperle y col. J. Immunology 2001; 166: 2705-11. Más recientemente, la administración intraarticular de una construcción adenoviral de IKK-\beta de tipo silvestre demostró que provocaba hinchazón de las patas mientras que la administración intraarticular de IKK-\beta dominante negativa inhibía la artritis inducida por adyuvante en rata. Véase Tak y col. Arthritis and Rheumatism 2001; 44: 1897-1907.
Las proteínas NF-\kappaB/ReI e I\kappaB también es probable que desempeñen un papel clave en la transformación neoplásica y la metástasis. Miembros de la familia se asocian con transformación celular in vitro e in vivo como resultado de la sobreexpresión, amplificación de genes, reorganizaciones de genes o translocaciones. Además, la reorganización y/o amplificación de los genes que codifican estas proteínas se observa en el 20-25% de ciertos tumores linfoides humanos. Además, NF-\kappaB se activa por ras oncogénico, el defecto más común en tumores humanos, y el bloqueo de la activación de NF-\kappaB inhibe la transformación celular mediada por ras. Además, se ha descrito un papel para NF-\kappaB en la regulación de la apoptosis, reforzando el papel de este factor de transcripción en la regulación de la proliferación de células tumorales. El TNF, la radiación ionizante y los agentes que dañan el ADN han demostrado todos activar NF-\kappaB que, a su vez, conduce a la expresión sobrerregulada de varias proteínas antiapoptóticas. Por el contrario, la inhibición de NF-\kappaB ha demostrado potenciar la destrucción apoptótica por estos agentes en varios tipos de células tumorales. Como esto representa probablemente un mecanismo fundamental de resistencia de células tumorales a quimioterapia, pueden ser útiles inhibidores de la activación de NF-\kappaB como agentes quimioterápicos como agentes individuales o terapia adjunta. Informes recientes han implicado a NF-\kappaB como un inhibidor de la diferenciación de células esqueléticas, así como un regulador del desgaste muscular inducido por citoquinas (Guttridge y col. Science; 2000; 289:
2363-2365) confirmando adicionalmente el potencial de inhibidores de NF-\kappaB como nuevas terapias para el cáncer.
Se describen varios inhibidores de NF-\kappaB en C. Wahl, y col. J. Clin. Invest. 101 (5), 1163-1174 (1998), R. W. Sullivan, y col. J. Med. Chem. 41, 413-419 (1998), J. W. Pierce, y col. J. Biol. Chem. 272, 21096-21103 (1997).
Se sabe que el producto natural marino himenialdisina inhibe NF-\kappaB. Roshak, A., y col., JPET, 283, 955-961 (1997). Breton, J. J y Chabot-Fletcher, M. C., JPET, 282, 459-466 (1997).
Además, se han presentado solicitudes de patente sobre inhibidores de indol y bencimidazol del complejo IKK, véanse los documentos DE 19928424 y WO200130774 y los productos naturales estaurosporina, quercetina, K252a y K252b han demostrado ser inhibidores de IRK-\beta, véase Peet, G. W. and Li, J. J. Biol. Chem., 274, 32655-32661 (1999) y Wisniewski, D., y col., Analytical Biochem. 274, 220-228 (1999).
La patente de Estados Unidos Nº 3.963.750 describe la preparación de ciertos aminotiofenos.
Sumario de la invención
La presente invención implica nuevos compuestos y nuevos procedimientos de inhibir la activación del factor de transcripción NF-\kappaB usando los presente compuestos.
Un objeto de la presente invención es proporcionar un procedimiento para tratar enfermedades que pueden modificarse terapéuticamente por alteración de la actividad del factor de transcripción NF-\kappaB.
Por consiguiente, en el primer aspecto, esta invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula I.
En otro aspecto, esta invención proporciona un procedimiento de tratar enfermedades en las que la enfermedad patológica puede modificarse terapéuticamente por inhibición de la fosforilación y posterior degradación de I\kappaB por IKK-\beta.
En otro aspecto más, esta invención proporciona un procedimiento de tratar enfermedades en las que la enfermedad patológica puede modificarse terapéuticamente por inhibición de la activación patológica de NF-\kappaB.
En un aspecto particular, esta invención proporciona procedimientos para tratar una diversidad de enfermedades asociadas con la activación de NF-\kappaB incluyendo trastornos inflamatorios y de reparación tisular, particularmente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas, dermatosis incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones de la piel inducidas por radiación ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodkins, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de distrés respiratorio del adulto y ataxia telangiectasia.
Descripción detallada de la invención
Los compuestos de la presente invención se seleccionan entre la Fórmula (I) que se muestra a continuación:
1
en la que:
\quad
R_{1} es CONH_{2} o SO_{2}NH_{2};
\quad
R_{2} es NR_{5}R_{6}
\quad
R_{3} es H, o halógeno;
\quad
R_{4} es arilo o heteroarilo;
\quad
R_{5} es H o alquilo;
\quad
con la condición de que cuando R_{1} es CONH_{2}, R_{6} se seleccione entre el grupo constituido por H, CO-alquilo, SO_{2}-alquilo, CONH_{2}, CONH-alquilo, CONH-arilo, CONH-heteroarilo, CSNH_{2}, CSNH-alquilo, CSNH-arilo, CSNH-heteroarilo, SO_{2}NH_{2}, SO_{2}NH-alquilo, SO_{2}NH-arilo y SO_{2}NH-heteroarilo;
\quad
Cuando R_{1} es SO_{2}NH_{2}, R_{6} es CONH_{2}; y cuando R_{1} es CONH_{2}, R_{2} no es NHCONH_{2};
\quad
y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solvatos de los mismos.
Los compuestos preferidos útiles en la presente invención incluyen: amida del ácido 3-acetilamino-5-(4-cloro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico; amida del ácido 3-acetilamino-5-(4-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico; amida del ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico; amida del ácido 5-(3-cloro-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico; amida del ácido 5-(4-trifluorometil-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico; y amida del ácido 5-fenil-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico.
Esta invención proporciona procedimientos para tratar una diversidad de enfermedades asociadas con la activación de NF-\kappaB incluyendo trastornos inflamatorios y de la reparación tisular; particularmente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas; dermatosis incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones de la piel inducidas por radiación ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodkins, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de distrés respiratorio del adulto y ataxia telangiectasia.
Definiciones
La presente invención incluye todos los hidratos, solvatos, complejos y profármacos de los compuestos de esta invención. Los profármacos son cualquier compuesto unido covalentemente, que libera el fármaco parental activo de acuerdo con las Fórmulas I y II in vivo. Si un centro quiral u otra forma de un centro isomérico está presente en un compuesto de la presente invención, todas las formas de dicho isómero o isómeros, incluyendo enantiómeros y diastereómeros, pretenden incluirse en este documento. Los compuestos de la invención que contienen un centro quiral pueden usarse como una mezcla racémica, una mezcla enantioméricamente enriquecida, o la mezcla racémica puede separarse usando técnicas bien conocidas y el enantiómero individual puede usarse solo. En los casos en los que los compuestos tienen dobles enlaces carbono-carbono insaturados, tanto los isómeros cis (Z) como trans (E) están dentro del alcance de esta invención. En los casos en los que los compuestos pueden existir en formas tautoméricas, tales como tautómeros ceto-enol, se contempla que cada forma tautomérica se incluye dentro de esta invención tanto si existe en equilibrio como si lo hace predominantemente en una forma.
El significado de cualquier sustituyente en cualquier caso en la Fórmula I o en cualquier subfórmula de la misma es independiente de su significado, o del significado de cualquier otro sustituyente, en cualquier otro caso, a menos que se especifique lo contrario.
Como se usa en este documento, "alquilo" se refiere a un grupo de hidrocarburo opcionalmente sustituido unido por enlaces carbono-carbono sencillos y que tiene 1-6 átomos de carbono unidos juntos. El grupo de hidrocarburo alquilo puede ser lineal, ramificado o cíclico, saturado o insaturado. Los sustituyentes sobre alquilo opcionalmente sustituido se seleccionan entre el grupo constituido por arilo, OH, O-alquilo, CO, halógeno, CF_{3} y OCF_{3}.
Como se usa en este documento, "arilo" se refiere a un grupo aromático opcionalmente sustituido con al menos un anillo que tiene un sistema de electrones pi conjugados, que contiene hasta dos sistemas de anillos conjugados o condensados. Arilo incluye arilo carbocíclico y grupos biarilo, pudiendo estar todos ellos opcionalmente sustituidos. Los sustituyentes se seleccionan entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-4}, NH_{2}, OCF_{3}, CF_{3}, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO_{2}-alquilo y NO_{2}.
Como se usa en este documento, "heteroarilo" se refiere a un grupo aromático opcionalmente sustituido con al menos un anillo que tiene un sistema de electrones pi conjugados, que contiene hasta dos sistemas de anillos conjugados o condensados y 1-3 heteroátomos seleccionados entre O, S y N. Heteroarilo incluye grupos heteroarilarilo carbocíclico, aril-heteroarilo y biheteroarilarilo, pudiendo estar todos ellos opcionalmente sustituidos. Los arilos preferidos incluyen fenilo y naftilo. Los arilos más preferidos incluyen fenilo. Los sustituyentes preferidos se seleccionan entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-4}, NH_{2}, OCF_{3}, CF_{3}, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO_{2}-alquilo y NO_{2}. Los ejemplos de anillos heteroarilo incluyen pirrol, furano, tiofeno, indol, isoindol, benzofurano, isobenzofurano, benzotiofeno, piridina, quinolina, isoquinolina, quinolizina, pirazol, imidazol, isoxazol, oxazol, isotiazol, tiazol, piridazina, pirimidina y pirazina.
Como se usa en este documento, "halógeno" se refiere a incluyen F, Cl, Br e I.
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Procedimientos de preparación
La preparación general de los análogos de amida aminotiofeno carboxílicos se muestra en los Esquemas I y II. La síntesis comenzó con el éster aminotiofeno carboxílico disponible en el mercado 1. La protección del grupo amino con dicarbonato de di-terc-butilo [(Boc)_{2}O] y la hidrólisis del éster proporcionaron el ácido 3. El ácido resultante se activó con 1,1'-carbonildiimidazol, seguido de reacción con hidróxido de amonio y tratamiento con ácido trifluoroacético (TFA) y después se formó la amida aminotiofeno carboxílica 5. El compuesto 5 se transformó fácilmente en la acetamida 6, sulfonil amida 7a y metil urea 7b.
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Esquema I
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Esquema II
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La preparación general de ureidotiofeno sulfonamidas se describe en el Esquema III. La síntesis comenzó con la terc-butil sulfonamida 8. La desprotonación con n-BuLi seguido de reacción con 4-metil-bencenosulfonil azida y borohidruro sódico produjo el amino-tiofeno 9. El tratamiento con HCl y la reticulación de Suzuki con ácido 4-fluorofenilborónico proporcionaron la amino-tiofeno sulfonamida 11. Después, la amina primaria se convirtió en la urea 12.
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Esquema III
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Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la presente invención pero no limitarla de ninguna manera.
En general, los espectros de resonancia magnética nuclear se registraron a 400 MHz usando un espectrómetro Bruker AC 400. CDCl_{3} es deuteriocloroformo, DMSO-d_{6} es hexadeuteriodimetilsulfóxido y CD_{3}OD es tetradeuteriometanol. Los desplazamientos químicos se indican en partes por millón (\delta) campo abajo a partir del patrón interno tetrametilsilano. Las abreviaturas para los datos de RMN son las siguientes: s = singlete, d = doblete, t = triplete, c = cuadruplete, m = multiplete, dd = doblete de dobletes, dt = doblete de tripletes, ap. = aparente, a = ancho. J indica la constante de acoplamiento de RMN medida en Hertzios. Los espectros de masas se recogieron en un instrumento MDS SCIEX (CL-EM) usando la técnica de ionización por electronebulización (EN). Todas las temperaturas se indican en grados centígrados. Se usaron placas de capa fina F-254 de Analtech Silica Gel GF y E. Merck Silica Gel 60 para la cromatografía de capa fina. La cromatografía ultrarrápida se realizó sobre gel de sílice E. Merck Kieselgel 60 (malla 230-400).
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Ejemplo 1 Preparación de amida del ácido 3-acetilamino-5-(4-cloro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico 1a) Éster metílico del ácido 3-terc-butoxicarbonilamino-5-(4-cloro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico
A una solución de 3-amino-5-(4-clorofenil)tiofeno-2-carboxilato de metilo (1 g, 3,73 mmol) en THF (20 ml) se le añadieron 4-(dimetilamino)piridina (45 mg, 0,373 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (1,22 g, 5,6 mmol). Después de agitar durante 24 h a temperatura ambiente, la solución se diluyó con una solución de salmuera (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml, 3 x). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de etilo, 4:1) proporcionó después el compuesto del título 1a en forma de un sólido de color blanco.
1b) Ácido 3-terc-butoxicarbonilamino-5-(4-cloro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico
Una solución de 1a (1,37 g, 3,73 mmol) en etanol (20 ml) se mezcló con KOH (627 mg, 11,2 mmol) en agua (20 ml). La mezcla resultante se calentó a 60ºC durante 1 h, se diluyó con HCl (50 ml, 1 N) y se extrajo con acetato de etilo (60 ml, 3 x). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron, produciendo el compuesto 1b en forma de un sólido de color amarillo.
1c) Éster terc-butílico del ácido [2-carbamoil-5-(4-cloro-fenil)-tiofeno-3-il]-carbámico
A una solución de 1b (1,3 g, 3,7 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió 1,1'-carbonildiimidazol (1,2 g, 7,4 mmol). La solución resultante se agitó durante 1 h y se mezcló con hidróxido de amonio (al 37%, 5 ml). La mezcla se diluyó con una solución de salmuera (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de etilo, 4:1) proporcionó después el compuesto 1c en forma de un sólido de color amarillo.
1d) Amida del ácido 3-amino-5-(4-cloro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico
A una solución de 1c (250 mg, 0,71 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) se le añadió TFA (1 ml). La solución resultante se agitó durante 1 h, después se mezcló con una solución saturada de NaHCO_{3} (60 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml, 3 x). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de etilo, 1:1) proporcionó después el compuesto 1d en forma de un sólido de color amarillo: EM (EN) 253 (M+H)^{+}.
1e) Amida del ácido 3-acetilamino-5-(4-cloro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico
Una solución de 1d (20 mg, 0,079 mmol) en THF (10 ml) se trató con cloruro de acetilo (11,2 \mul, 0,158 mmol) durante 1 h. La solución resultante se diluyó con agua (0,1 ml) y DMSO (2 ml). La mezcla se concentró. Después, la separación por HPLC de fase inversa proporcionó el compuesto del título en forma de un sólido de color blanco: EM (EN) 295 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}SOCD_{3}) \delta 11,08 (s, 1 H), 8,27 (s, 1 H), 7,69 (s a, 2 H), 7,68 (d, 2 H, J = 8,8 Hz), 7,54 (d, 2 H, J = 8,8 Hz), 2,14 (s, 3 H).
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Ejemplo 2 Preparación de amida del ácido 3-acetilamino-5-(4-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico 2a) Amida del ácido 3-amino-5-(4-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico
El compuesto se preparó a partir de 3-amino-5-(4-fluorofenil)-tiofeno-2-carboxilato de metilo siguiendo el procedimiento del ejemplo 1a-1d. El compuesto es un sólido de color amarillo: EM (EN) 237 (M+H)^{+}.
2b) Amida del ácido 3-acetilamino-5-(4-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico
El compuesto del título se preparó a partir de 2a siguiendo el procedimiento del ejemplo 1e. El compuesto es un sólido de color blanco: EM (EN) 279 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}SOCD_{3}) \delta 11,09 (s, 1 H), 8,22 (s, 1 H), 7,72-7,69 (m, 4 H), 7,35-7,30 (m, 2 H), 2,14 (s, 3 H).
Ejemplo 3 Preparación de amida del ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico 3a)terc-Butilamida del ácido 3-amino-5-cloro-tiofeno-2-sulfónico
A una solución de terc-butilamida del ácido 5-cloro-tiofeno-2-sulfónico (310 mg, 1,22 mmol) en THF (10 ml) a -78ºC se le añadió gota a gota n-BuLi (1,6 M en hexano, 1,7 ml, 2,7 mmol). La solución resultante se calentó a -30ºC y se mantuvo a -20ºC - \sim30ºC durante 10 min. Se mezcló con una solución de 4-metilbencenosulfonil azida (361 mg, 1,83 mmol) en THF (2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h antes de diluirse con una solución de salmuera (30 ml) y lavarse con tolueno (20 ml). La fase orgánica se separó y se mezcló con NaBH_{4} (500 mg, 13,2 mmol) y H_{2}O (5 ml). La mezcla se agitó durante 2 h a temperatura ambiente, después se diluyó con una solución de salmuera (50 ml) y se lavó con acetato de etilo (50 ml, 3 x). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de etilo, 4:1) proporcionó después 3a (250 mg) en forma de un aceite de color amarillo.
3b) Amida del ácido 3-amino-5-cloro-tiofeno-2-sulfónico
Una solución de 3a (250 mg, 0,93 mmol) en una solución concentrada de HCl (10 ml) se calentó a 55ºC durante 2 h. Después, la retirada de todos los disolventes produjo 3b (198 mg) en forma de un sólido de color amarillo.
3c) Amida del ácido 3-amino-5-(4-fluoro-fenil)-tiofeno-2-sulfónico
A una solución de 3b (104 mg, 0,5 mmol) en 1,4-dioxano/agua (40 ml, 3:1) se le añadieron ácido 4-fluorofenilborónico (140 mg, 1 mmol), Na_{2}CO_{3} (212 mg, 2 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4} (Pd al 9%, 59 mg, 0,05 mmol). La mezcla resultante se calentó a 110ºC durante 3 h, se diluyó con una solución de salmuera (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml, 3 x). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de etilo, 1:1) proporcionó después 3c (45 mg, 33%) en forma de un sólido de color amarillo: EM (EN) 273 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, MeOD) \delta 7,52 (m, 2 H), 7,04 (m, 2 H), 6,72 (s, 1 H).
3d) Amida del ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico
A la mezcla de 3c (30 mg, 0,11 mol) en CH_{2}Cl_{2} (10 ml) se le añadió isocianato de clorosulfonilo (14 \mul, 0,165 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y después se mezcló con agua (0,5 ml). La separación usando a HPLC de fase inversa produjo 3d (20 mg, 58%) en forma de un sólido de color blanco: EM (EN) 316 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,02 (s, 1 H), 7,69 (m, 2 H), 7,20 (m, 2 H).
Ejemplo 4 Preparación de amida del ácido 5-(3-cloro-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico 4a) Amida del ácido 3-amino-5-(3-cloro-fenil)-tiofeno-2-sulfónico
El compuesto del título se preparó a partir de ácido 3-clorobencenoborónico y 3b siguiendo el procedimiento del ejemplo 3c. Este compuesto es un sólido de color blanco: EM (EN) 289 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,62 (s, 1 H), 7,53 (m, 1 H), 7,40 (m, 2 H), 6,92 (s, 1 H).
4b) Amida del ácido 5-(3-cloro-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico
El compuesto del título se preparó a partir de 4a siguiendo el procedimiento del ejemplo 3d. Este compuesto es un sólido de color blanco: EM (EN) 332 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}SOCD_{3}) \delta 8,28 (s, 1 H), 8,14 (s, 1 H), 7,72 (s, 2 H), 7,69 (s, 1 H), 7,60 (m, 1 H), 7,49 (m, 2 H), 6,72 (s, 2 H).
Ejemplo 5 Preparación de amida del ácido 5-(4-trifluorometil-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico 5a) Amida del ácido 3-amino-5-(4-trifluorometil-fenil)-tiofeno-2-sulfónico
El compuesto del título se preparó a partir de ácido 4-trifluorometilbencenoborónico y 3b siguiendo el procedimiento del ejemplo 3c. Este compuesto es un sólido de color blanco: EM (EN) 323 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,80 (d, 2 H, J = 8,2 Hz), 7,72 (d, 2 H, J = 8,2 Hz), 7,02 (s, 1 H).
5b) Amida del ácido 5-(4-trifluorometil-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico
El compuesto del título se preparó a partir de 5a siguiendo el procedimiento del ejemplo 3d. Este compuesto es un sólido de color blanco: EM (EN) 366 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,20 (s, 1 H), 7,85 (d, 2 H, J = 8,2 Hz), 7,75 (d, 2 H, J = 8,2 Hz).
Ejemplo 6 Preparación de amida del ácido 5-fenil-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico 6a) Amida del ácido 3-amino-5-fenil-tiofeno-2-sulfónico
El compuesto del título se preparó a partir de ácido fenilborónico y 3b siguiendo el procedimiento del ejemplo 3c. Este compuesto es un sólido de color blanco: EM (EN) 255 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,61 (m, 2 H), 7,42-7,37 (m, 3 H), 6,89 (s, 1 H).
6b) Amida del ácido 5-fenil-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico
El compuesto del título se preparó a partir de 6a siguiendo el procedimiento del ejemplo 3d. Este compuesto es un sólido de color blanco: EM (EN) 298 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}SOCD_{3}) \delta 8,30 (s, 1 H), 8,10 (s, 1 H), 7,68-7,39 (m, 8 H), 6,65 (s, 1 H).
Esta invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la Fórmula I y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Por consiguiente, los compuestos de Fórmula I pueden usarse en la fabricación de un medicamento. Pueden formularse composiciones farmacéuticas de los compuestos de Fórmula I preparadas como se ha descrito anteriormente en este documento como soluciones o polvos liofilizados para administración parenteral. Los polvos pueden reconstituirse por adición de un diluyente adecuado u otro vehículo farmacéuticamente aceptable antes del uso. La formulación líquida puede ser una solución tamponada, isotónica, acuosa. Los ejemplos de diluyentes adecuados son solución salina isotónica normal, dextrosa al 5% convencional en agua o solución de acetato de sodio o amonio tamponada. Dicha formulación es especialmente adecuada para administración parenteral, pero también puede usarse para administración oral o contenerse en un inhalador de dosis medida o nebulizador para insuflación. Puede ser deseable añadir excipientes tales como polivinilpirrolidona, gelatina, hidroxicelulosa, goma arábiga, polietilenglicol, manitol, cloruro de sodio o citrato de sodio.
Como alternativa, estos compuestos pueden encapsularse, conformarse en comprimidos o prepararse en una emulsión o jarabe para administración oral. Pueden añadirse vehículos sólidos o líquidos farmacéuticamente aceptables para mejorar o estabilizar la composición, o para facilitar la preparación de la composición. Los vehículos sólidos incluyen almidón, lactosa, sulfato de calcio dihidrato, alabastro, estearato de magnesio o ácido esteárico, talco, pectina, goma arábiga, agar o gelatina. Los vehículos líquidos incluyen jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, solución salina y agua. El vehículo también puede incluir un material de liberación sostenida tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o con una cera. La cantidad de vehículo sólido varía pero, preferiblemente, estará entre aproximadamente 20 mg a aproximadamente 1 g por unidad de dosificación. Las preparaciones farmacéuticas se preparan siguiendo las técnicas convencionales de la farmacia que implican molienda, mezcla, granulación y compresión cuando sea necesario para formas de comprimidos; o molienda, mezcla y rellenado para formas de cápsulas de gelatina dura. Cuando se usa un vehículo líquido, la preparación será en forma de un jarabe, elixir, emulsión o una suspensión acuosa o no acuosa. Dicha formulación líquida puede administrarse directamente p. o. o rellena en el interior de una cápsula de gelatina blanda.
Para administración rectal, los compuestos de esta invención también pueden combinarse en excipientes tales como manteca de cacao, glicerina, gelatina o polietilenglicoles y moldearse en un supositorio.
Los procedimientos de la presente invención incluyen administración tópica inhalada e intracolónica de los compuestos de Fórmula I. Mediante administración tópica se entiende administración no sistémica incluyendo la aplicación de un compuesto de la invención por vía externa en la epidermis, en la cavidad bucal e instilación de dicho compuesto en el oído, ojo y nariz, en la que el compuesto no entra significativamente en el torrente sanguíneo. Mediante administración sistémica se entiende administración oral, intravenosa, intraperitoneal e intramuscular. La cantidad de un compuesto de la invención (en lo sucesivo denominado el ingrediente activo) necesaria para un efecto terapéutico o profiláctico tras la administración tópica variará, por supuesto, con el compuesto seleccionado, la naturaleza y gravedad de la afección que se trate y el animal que se someta al tratamiento y, en última instancia, es a discreción del médico.
Aunque es posible para un ingrediente activo administrarlo en solitario como el químico sin procesar, es preferible presentarlo como una formulación farmacéutica. El ingrediente activo puede comprender, para administración tópica, del 0,01 al 5,0% en peso de la formulación.
Las formulaciones tópicas de la presente invención, tanto para uso veterinario como médico humano comprende un ingrediente activo junto con uno o más vehículos aceptables para el mismo y, opcionalmente, cualquier otro ingrediente terapéutico. El vehículo debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial para el destinatario de la misma.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semilíquidas adecuadas para penetración a través de la piel en el sitio donde se requiere el tratamiento tales como: linimentos, lociones, cremas, pomadas o pastas y gotas adecuadas para administración en el ojo, oído o nariz.
Las gotas de acuerdo con la presente invención pueden comprender soluciones o suspensiones acuosas u oleosas estériles y pueden prepararse por disolución del ingrediente activo en una solución acuosa adecuada de un agente bactericida y/o fungicida y/o cualquier otro conservante adecuado y, preferiblemente, incluyendo un agente tensioactivo. La solución resultante puede aclararse después por filtración, transferirse a un recipiente adecuado que después se cierra herméticamente y se esteriliza por autoclavado o se mantiene a 90-100ºC durante media hora. Como alternativa, la solución puede esterilizarse por filtración y transferirse al recipiente mediante una técnica aséptica. Los ejemplos de agentes bactericidas y fungicidas adecuados para su inclusión en las gotas son nitrato o acetato fenilmercúrico (0,002%), cloruro de benzalconio (0,01%) y acetato de clorhexidina (0,01%). Los disolventes adecuados para la preparación de una solución oleosa incluyen glicerol, alcohol diluido y propilenglicol.
Las lociones de acuerdo con la presente invención incluyen las adecuadas para aplicación en la piel o en el ojo. Una loción ocular puede comprender una solución acuosa estéril que contiene opcionalmente un bactericida y puede prepararse por procedimientos similares a los de para la preparación de gotas. Las lociones o linimentos para aplicación en la piel también pueden incluir un agente para secado acelerado y para refrigerar la piel, tal como un alcohol o acetona y/o un humectante tal como glicerol o un aceite tal como aceite de ricino o aceite de cacahuete.
Son cremas, pomadas o pastas de acuerdo con la presente invención formulaciones semisólidas del ingrediente activo para aplicación externa. Pueden prepararse por mezcla del ingrediente activo en forma de polvo o finamente dividida, solo o en solución o suspensión en un fluido acuoso o no acuoso, con la ayuda de maquinaria adecuada, con una base grasa o no grasa. La base puede comprender hidrocarburos tales como parafina dura, blanda o líquida, glicerol, cera de abeja, un jabón metálico, un mucílago, un aceite de origen natural tal como aceite de almendra, maíz, cacahuete, ricino u oliva, grasa de lana o sus derivados o un ácido graso tal como ácido esteárico u oleico junto con un alcohol tal como propilenglicol o macrogoles. La formulación puede incorporar cualquier agente tensioactivo adecuado tal como un agente tensioactivo aniónico, catiónico o no iónico tal como ésteres de sorbitán o derivados de polioxietileno de los mismos. También pueden incluirse agentes de suspensión tales como gomas naturales, derivados de celulosa o en materiales orgánicos tales como sílices silíceas y otros ingredientes tales como lanolina.
Utilidad de la presente invención
Los compuestos de Fórmula I son útiles como inhibidores de la fosforilación de I\kappaB por IKK-beta quinasa y, como tales, son inhibidores de la activación de NF-\kappaB. El presente procedimiento utiliza composiciones y formulaciones de dichos compuestos, incluyendo composiciones farmacéuticas y formulaciones de dichos compuestos.
La presente invención proporciona particularmente procedimientos de tratamiento de enfermedades asociadas con una activación de NF-\kappaB inapropiada, comprendiendo los procedimientos la administración a un animal, particularmente un mamífero, más particularmente un ser humano que lo necesite, uno o más compuestos de Fórmula I. La presente invención proporciona particularmente procedimientos para tratar trastornos inflamatorios y de la reparación tisular, particularmente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas; dermatosis incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones de la piel inducidas por radiación ultravioleta (UV), enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer incluyendo enfermedad de Hodkins, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de distrés respiratorio del adulto, ataxia telangiectasia. Para terapia aguda, es útil la administración parenteral de una o más compuestos de Fórmula I. Es más eficaz una infusión intravenosa del compuesto en dextrosa al 5% en agua o solución salina normal o una formulación similar con excipientes adecuados, aunque también es útil una inyección embolada intramuscular. Típicamente, la dosis parenteral será de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg; preferiblemente entre 0,1 y 20 mg/kg de una forma para mantener la concentración de fármaco en el plasma a una concentración eficaz para inhibir IKK-beta y, por lo tanto, la activación de NF-\kappaB. Los compuestos se administran de una a cuatro veces al día a un nivel para conseguir una dosis diaria total de aproximadamente 0,4 a aproximadamente 80 mg/kg/día. La cantidad exacta de un compuesto usado en el presente procedimiento que es terapéuticamente eficaz y la vía por la que se administra mejor dicho compuesto se determinan fácilmente por un especialista en la técnica por comparación del nivel sanguíneo de la gente con respeto a la concentración necesaria para tener un efecto terapéutico.
Los compuestos de Fórmulas I también pueden administrarse por vía oral al paciente, de una forma tal que la concentración del fármaco sea suficiente para inhibir IKK-beta y, por lo tanto, la activación de NF-\kappaB o para conseguir cualquier otra indicación terapéutica, como se describe en este documento. Típicamente, una composición farmacéutica que contiene el compuesto se administra una dosis oral de entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 50 mg/kg de una forma que concuerda con la afección del paciente. Preferiblemente, la dosis oral será de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 20 mg/kg.
Los compuestos de Fórmulas I también pueden administrarse por vía tópica al paciente, de una forma tal que la concentración de fármaco sea suficiente para inhibir IKK-beta y, por lo tanto, la activación de NF-\kappaB o para conseguir cualquier otra indicación terapéutica como se describe en este documento. Típicamente, una composición farmacéutica que contiene el compuesto se administra en una formulación tópica de entre aproximadamente el 0,01% y aproximadamente el 5% p/p.
No se esperan efectos toxicológicos inaceptables cuando los compuestos de la presente invención se administran de acuerdo con la presente invención.
La capacidad de los compuestos descritos en este documento para inhibir la activación de NF-\kappaB se evidencia claramente por su capacidad para inhibir la fosforilación del fragmento N-terminal de I\kappaB-\alpha por IKK-\beta (véase la Tabla 1 para ejemplos). Estos compuestos también bloquean la degradación de I\kappaB-\alpha y la translocación nuclear de NF-\kappaB en monocitos humanos y otras células de mamífero tras la activación de las células con un estímulo proinflamatorio (por ejemplo, TNF-\alpha, LPS, etc.). Además, estos compuestos inhiben la producción de mediadores proinflamatorios a partir de monocitos humanos estimulados con LPS y fibroblastos sinoviales primarios humanos estimulados. La utilidad de los presentes inhibidores de NF-\kappaB en la terapia de enfermedades se basa en la importancia de la activación de NF-\kappaB en una diversidad de enfermedades.
NF-\kappaB desempeña un papel clave en la expresión regulada de un gran número de mediadores proinflamatorios incluyendo citoquinas tales como TNF, IL-1\beta, IL-6 e IL-8 (Mukaida y col., 1990; Liberman and Baltimore, 1990; Matsusaka y col., 1993), moléculas de adhesión celular, tales como ICAM y VCAM (Marui y col., 1993; Kawai y col., 1995; Ledebur and Parks, 1995) y óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) (Xie y col., 1994; Adcock y col., (1994) (Las citas bibliográficas completas están al final de esta sección). Se sabe que dichos mediadores desempeñan un papel en el reclutamiento de leucocitos en los sitios de inflamación y, en el caso de iNOS, pueden conducir a la destrucción de órganos en algunas enfermedades inflamatorias y autoinmunes (McCartney Francis y col., 1993; Kleemann y col., 1993).
Se obtienen pruebas de un papel importante de NF-\kappaB en trastornos inflamatorios en estudios de pacientes asmáticos. Biopsias bronquiales obtenidas de asmáticos atópicos leves muestran aumentos significativos en el número de células en la tinción de la submucosa para NF-\kappaB activado, NF-\kappaB total y citoquinas reguladas por NF-\kappaB tales como GM-CSF y TNF\alpha en comparación con biopsias de controles no atópicos normales (Wilson y col., 1998). Además, el porcentaje de vasos que expresan inmunorreactividad a NF-\kappaB se aumenta, como lo está la inmunorreactividad de IL-8 en el epitelio de las muestras de biopsia (Wilson y col., 1998). Como tal, se predice que la inhibición de la producción de IL-8 a través de la inhibición de NF-\kappaB, como se ha demostrado por estos compuestos, será beneficiosa en la inflamación de las vías respiratorias.
Estudios recientes sugieren que NF-\kappaB también puede desempeñar un papel crítico en la patogénesis de la enfermedad inflamatoria del intestino (IBD). Se observa NF-\kappaB activado en muestras de biopsia de colon de pacientes con enfermedad de Chron y colitis ulcerosa (Ardite y col., 1998; Rogler y col., 1998; Schreiber y col., 1998). La activación es evidente en la mucosa inflamada pero no en la mucosa no inflamada (Ardite y col., 1998; Rogler y col., 1998) y se asocia con una expresión de ARNm de IL-8 aumentada en los mismos sitios (Ardite y col., 1998). Además, el tratamiento con corticosteroides inhibe enormemente la activación de NF-\kappaB intestinal y reduce la inflamación del colon (Ardite y col., 1998; Schreiber y col., 1998). De nuevo, se predice que la inhibición de la producción de IL-8 a través de la inhibición de NF-\kappaB, como se ha demostrado por estos compuestos, será beneficiosa en la enfermedad inflamatoria del intestino.
Los modelos animales de inflamación gastrointestinal proporcionan confirmaciones adicionales para NF-\kappaB como un regulador clave de la inflamación del colon. Se observa una actividad de NF-\kappaB aumentada en los macrófagos de la lámina propia en la colitis inducida por ácido 2,4,6-trinitrobencenosulfónico (TNBS) en ratones en los que p65 es un componente principal de los complejos activados (Neurath y col., 1996; Neurath y Pettersson, 1997). La administración local de p65 antisentido anula los signos de colitis establecida en los animales tratados sin signos de toxicidad (Neurath y col., 1996; Neurath y Pettersson, 1997). Como tal, se predice que inhibidores moleculares pequeños de NF-\kappaB serán útiles en el tratamiento de la IBD.
Pruebas adicionales de un papel de NF-\kappaB en trastornos inflamatorios vienen de estudios de la membrana sinovial reumatoide. Aunque NF-\kappaB está presente normalmente como un complejo citoplasmático inactivo, recientes estudios inmunohistoquímicos han indicado que NF-\kappaB está presente en los núcleos y, por lo tanto, activo, en las células que comprenden la membrana sinovial reumatoide humana (Handel y col., 1995; Marok y col., 1996; Sioud y col., 1998) y en modelos animales de la enfermedad (Tsao y col., 1997). La tinción se asocia con sinoviocitos de tipo A y endotelio vascular (Marok y col., 1996). Además, se observa activación constitutiva de NF-\kappaB en sinoviocitos cultivados (Roshak y col., 1996; Miyazawa y col., 1998) y en cultivos de células sinoviales estimuladas con IL-1\beta o TNF\alpha (Roshak y col., 1996; Fujisawa y col., 1996; Roshak y col., 1997). Por lo tanto, la activación de NF-\kappaB puede subyacer a la producción de citoquinas aumentada y a la infiltración de leucocitos aún características de la membrana sinovial inflamada. Se predice que la capacidad de estos compuestos para inhibir NF-\kappaB y, por lo tanto, inhibir la producción de mediadores proinflamatorios (por ejemplo, citoquinas y prostanoides) por estas células será beneficiosa en la artritis reumatoide.
Ensayos biológicos
Los compuestos de esta invención pueden ensayarse en uno o varios ensayos biológicos para determinar la concentración de compuesto que es necesaria para tener un efecto farmacológico dado.
La actividad de NF-\kappaB también puede medirse en un ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA) para evaluar la presencia de proteína NF-\kappaB en el núcleo. Las células de interés se cultivan a una densidad de 1 x 10^{6}/ml. Las células se recogen por centrifugación, se lavan en PBS sin Ca^{2+} y Mg^{2+} y se resuspenden en PBS con Ca^{2+} y Mg^{2+} a 1 x 10^{7} células/ml. Para examinar el efecto del compuesto sobre la activación de NF-\kappaB, las suspensiones celulares se tratan con diversas concentraciones de fármaco o vehículo (DMSO, 0,1%) durante 30 min a 37ºC antes de la estimulación con TNF- \alpha (5,0 ng/ml) durante 15 min adicionales. Se preparan extractos celulares y nucleares de la forma siguiente. En resumen, al final del periodo de incubación las células (1 x 10^{7} células) se lavan 2x en PBS sin Ca^{2+} y Mg^{2+}. Los sedimentos celulares resultantes se resuspenden en 20 \mul de Tampón A (Hepes 10 mM (pH 7,9), KCl 10 mM, MgCl_{2} 1,5 mM, ditiotreitol 0,5 mM (DTT) y NP-40 al 0,1%) y se incuban en hielo durante 10 min. Los núcleos se sedimentan por microcentrifugación a 3.500 rpm durante 10 min a 4ºC. El sobrenadante resultante se recoge como el extracto celular y el sedimento nuclear se resuspende en 15 \mul de Tampón C (Hepes 20 mM (pH 7,9), NaCl 0,42 M, MgCl_{2} 1,5 mM, glicerol al 25%, EDTA 0,2 mM, DTT 0,5 mM y fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,5 mM (PMSF)). Las suspensiones se mezclan suavemente durante 20 min a 4ºC y después se microcentrifugan a 14.000 rpm durante 10 min a 4ºC. El sobrenadante se recoge, se diluye hasta 60 \mul con Tampón D (Hepes 20 mM (pH 7,9), KCl 50 mM, glicerol al 20%, EDTA 0,2 mM, DTT 0,5 mM y PMSF 0,5 mM). Todas las muestras se almacenan a -80ºC hasta el análisis. La concentración de proteína de los extractos se determina de acuerdo con el procedimiento de Bradford (Bradford, 1976) con reactivos de BioRad.
El efecto de los compuestos sobre la activación del factor de transcripción se evalúa en un ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA) usando extractos nucleares de células tratadas como se ha descrito anteriormente. Los oligonucleótidos de consenso de NF-\kappaB bicatenarios (5'-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3') se marcan con T_{4} polinucleótido quinasa y [g^{-32}P]ATP. La mezcla de unión (25 \mul) contiene Hepes-NaOH 10 mM (pH 7,9), Tris-HCl 4 mM (pH 7,9), KCl 60 mM, EDTA 1 mM, ditiotreitol 1 mM, glicerol al 10%, albúmina de suero bovino 0,3 mg/ml y 1 \mug de poli(dl-dC)\bulletpoli(dl-dC). Las mezclas de unión (10 mg de proteína de extracto nuclear) se incuban durante 20 min a temperatura ambiente con 0,5 ng de oligonucleótido marcado con ^{32}P (50.000-100.000 cpm) en presencia o ausencia de competidor sin marcar, después de lo cual la mezcla se carga en un gel de poliacrilamida al 4% preparado en Tris borato/EDTA 1X y se somete a electroforesis a 200 V durante 2 h. Después de la electroforesis los geles se secan y se exponen a una película para detección de la reacción de unión.
El efecto de los compuestos sobre la fosforilación de I\kappaB puede controlarse en una transferencia de Western. Se someten los extractos celulares a electroforesis en gel de dodecilsulfato sódico-poliacrilamida (SDS-PAGE) en geles al 10% (BioRad, Hercules, CA) y las proteínas se transfieren a láminas de nitrocelulosa (Hybond^{tm}-ECL, Amersham Corp., Arlington Heights, IL). Se realizan ensayos de inmunotransferencia usando un anticuerpo policlonal de conejo dirigido contra I\kappaB\alpha o I\kappaB\kappa seguido de un anticuerpo secundario de burro anti-conejo conjugado con peroxidada (Amersham Corp., Arlington Heights, IL). Se detectan las bandas inmunorreactivas usando el sistema de ensayo Enhanced Chemiluminescence (ECL) (Amersham Corp., Arlington Heights, IL).
Se realizaron ensayos para I\kappaB quinasas de la forma siguiente: se expresó IKK-\alpha como una proteína marcada con hexahistidina en células de insecto infectadas con baculovirus y se purificó sobre una columna de afinidad de Ni-NTA. Se ensayó la actividad quinasa usando 50 ng de proteína purificada en tampón de ensayo (Hepes 20 mM, pH 7,7, MgCl_{2} 2 mM, MnCl_{2} 1 mM, \beta-glicerofosfato 10 mM, NaF 10 mM, PNPP 10 mM, Na_{3}VO_{4} 0,3 mM, benzamidina 1 mM, PMSF 2 \muM, aprotinina 10 \mug/ml, leupeptina 1 \mug/ml, pepstatina 1 \mug/ml, DTT 1 mM) que contenía diversas concentraciones de compuesto o vehículo DMSO y ATP como se indica (Pharmacia Biotech Inc., Piscataway, NJ). La reacción se comenzó mediante la adición de 200 ng I\kappaB-GST (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA) en un volumen total de 50 \mul. Se dejó que se desarrollara la reacción durante 1 h a 30ºC después de la cual se terminó la reacción por la adición de EDTA a una concentración final de 20 mM. Se determinó la actividad quinasa por inmunoensayo de fluorescencia de lantánido potenciada por disociación (Wallac Oy, Turku, Finlandia) usando un anticuerpo de fosfo-I\kappaB-\alpha (Ser32) (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA) y un anti-IgG de conejo marcado con Eu^{3+} (Wallac Oy, Turku, Finlandia). Las placas se leyeron en un contador multimarcador VICTOR 1420 (Wallac) usando un protocolo de europio convencional (excitación 340 nm, emisión 615 nm; fluorescencia medida durante 400 \mus después de un retraso de 400 \mus). Los datos se expresan como unidades de fluorescencia (cps).
Se expresó IKK-\beta como una proteína marcada con GST y se evaluó su actividad en un ensayo de proximidad por escintilación de 96 pocillos (SPA). En resumen, se diluyó IKK-\beta en tampón de ensayo como se ha descrito anteriormente (20 nM finales) con diversas concentraciones de compuesto o vehículo DMSO, ATP 240 nM y [\gamma^{-33}P]-ATP 200 nCi (10 mCi/ml, 2000 Ci/mmol; NEN Life Science Products, Boston, MA). La reacción se comenzó con la adición de un péptido biotinilado que comprendía los aminoácidos 15-46 de I\kappaB\alpha (American Peptide) a una concentración final de 2,4 \muM en un volumen total de 50 \mul. La muestra se incubó durante una hora a 30ºC seguida de la adición de 150 \mul de tampón de parada (PBS sin Ca^{2+}, Mg^{2+}, Triton X-100 al 0,1% (v/v) EDTA 10 mM) que contenía 0,2 mg de perlas de SPA PVT recubiertas con estreptavidina (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). La muestra se mezcló, se incubó durante 10 min a temperatura ambiente, se centrifugó (1.000 x g, 2 minutos) y se midió en un Hewlett-Packard TopCount.
El efecto de los inhibidores de IKK-\beta sobre la producción de mediadores de fibroblastos sinoviales primarios se evaluó de la forma siguiente: se obtuvieron cultivos primarios de RSF humanos mediante digestión enzimática de la membrana sinovial obtenida de pacientes adultos con artritis reumatoide como se ha descrito anteriormente (Roshak y col., 1996b). Las células se cultivaron en medio esencial mínimo de Earl (EMEM) que contenía suero bovino fetal al 10% (FBS), penicilina 100 unidades/ml y estreptomicina 100 \mug/ml (GIBCO, Grand Island, NY) a 37ºC y CO_{2} al 5%. Se usaron cultivos a los pases 4 a 9 para obtener una población de fibroblastos de tipo B más uniforme. Para algunos estudios, se sembraron en placas fibroblastos a 5 x 10^{4} células/ml en placas de 24 pocillos de 16 mm (diámetro) (Costar, Cambridge, MA). Las células (confluencia del 70-80%) se expusieron a IL-1\beta (1 ng/ml) (Genzyme, Cambridge, MA) durante el tiempo designado. Se añadieron fármacos en vehículo de DMSO (1%) a los cultivos celulares 15 minutos antes de la adición de IL-1. Se realizaron los estudios 3-4 veces usando células sinoviales de diferentes donantes. Se prepararon extractos celulares de RSF a partir de células tratadas como se ha descrito anteriormente. En resumen, se extirparon RSF humanos mediante tripsina/EDTA, se lavaron y se recogieron por centrifugación. Se prepararon extractos celulares como se ha descrito anteriormente (Dignam y col., 1983; Osborn, y col., 1989). En resumen, al final del periodo de incubación las células (1 x 10^{7} células) se lavaron 2x en PBS sin Ca^{2+} y Mg^{2+}. Los sedimentos celulares resultantes se resuspendieron en 20 \mul de Tampón A (Hepes 10 mM (pH 7,9), KCl 10 mM, MgCl_{2} 1,5 mM, 0,5 mM.
El efecto de la inhibición de IKK-\beta sobre la producción de eicosanoides y citoquinas estimulada por monocitos humanos se evaluó de la forma siguiente: se aislaron monocitos a partir de sangre completa heparinizada mediante centrifugación en gradiente doble como se ha descrito anteriormente. Después, se adhirieron PBMC enriquecidas en monocitos aisladas a placas de cultivo de 24 pocillos a 2 x 10^{6} células/ml en RPMI 1640 con FBS al 10% (Hyclone, Logan, Utah) durante 2 h para enriquecer adicionalmente la población de monocitos. Los medios se retiraron después, las células se lavaron una vez con RPMI 1640 y se añadió 1 ml de RPMI 1640 con FBS al 10% a los pocillos. Se añadieron los compuestos de ensayo a los pocillos con una concentración de vehículo final de DMSO al 0,05%. Se activaron los monocitos mediante la adición de endotoxina 200 ng/ml (LPS, E. coli serotipo 026:B6) (Sigma, St. Louis, MO) y se incubó durante 24 horas. Se analizaron los sobrenadantes sin células mediante ELISA para TNF-\alpha (EIA desarrollado a SB), PGE_{2} (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) e IL-8 e IL-6 (Biosource International, Camarillo, CA). Se determinó la viabilidad de las células mediante exclusión de tripán azul.
El efecto de los inhibidores de IKK-\beta sobre la inflamación inducida por éster de forbol se evaluó de la forma siguiente: la respuesta inflamatoria inducida mediante la aplicación cutánea de éster de forbol (PMA) en los pabellones auditivos externos de ratones Balb/c ha demostrado ser un modelo útil para examinar la infiltración celular inflamatoria multifactorial y la alteración inflamatoria de la epidermis. La lesión inflamatoria intensa está dominada por infiltración de neutrófilos que puede cuantificarse fácilmente por medición de la concentración tisular de mieloperoxidasa, una enzima granular azurófila presente en neutrófilos. Además, la intensidad global de la respuesta inflamatoria puede medirse por determinación del grosor de la oreja. Se administró tratamiento farmacológico o vehículo seguido de PMA (4 \mug/oreja) a ratones Balb/c (n = 6/grupo). Los ratones se sacrificaron 4 h después, se determinó el grosor de la oreja y se controló la activación de NF-\kappaB mediante análisis de western o EMSA de I\kappaB\alpha.
Se evaluó el efecto de inhibidores de IKK-\beta sobre edema de patas inducido por carragenina en ratas de la forma siguiente: se alojaron ratas Lewis macho (Charles River-Raleigh, NC) y se les dejó acceso libre a alimento y agua, y pesaban entre 200-275 g, para cada experimento. Se administró compuesto o vehículo (tragacanto al 0,5% (p. o.) o DMSI al 10%, DMA al 5%, Cremophor al 30% (i. p.)) de 30 minutos a 1 hora antes de la inyección de carragenina. Se indujo el edema mediante inyección de carragenina al 1% en dH2O estéril (0,05 ml/pata) en la superficie plantar de la almohadilla plantar derecha. Se midió el grosor de la pata antes de la administración del compuesto o vehículo y de nuevo a las 3 horas para determinar cambios en el volumen de la pata. Las ratas se eutanasiaron mediante inhalación de CO_{2} y se extirpó la pata trasera derecha, se congeló inmediatamente en nitrógeno líquido y se almacenó a -80ºC para análisis.
Todas las publicaciones, incluyendo, pero sin limitación, las patentes y solicitudes de patente citadas en esta memoria descriptiva se incorporan en este documento por referencia como si estuviera indicado específicamente e individualmente que cada publicación individual se incorpora por referencia en este documento como si se expusiera completamente.
La descripción anterior desvela completamente cómo preparar y usar la presente invención. Sin embargo, esta invención no se limita a las realizaciones particulares descritas anteriormente en este documento, sino que incluye todas las modificaciones de la misma dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas y sus equivalentes. Los especialistas en la técnica reconocerán a través de una experimentación de rutina que pueden realizarse diversos cambios y modificaciones sin alejarse del alcance de esta invención.

Claims (12)

1. Un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) dada a continuación:
(I) a continuación:
5
\quad
R_{1} es CONH_{2} o SO_{2}NH_{2;}
\quad
R_{2} es NR_{5}R_{6;}
\quad
R_{3} es H, o halógeno;
\quad
R_{4} es arilo o heteroarilo;
\quad
R_{5} es H o alquilo;
\quad
con la condición de que cuando R_{1} es CONH_{2}, R_{2} se seleccione entre el grupo constituido por H, CO-alquilo, SO_{2}-alquilo, CONH_{2}, CONH-alquilo, CONH-arilo, CONH-heteroarilo, CSNH_{2}, CSNH-alquilo, CSNH-arilo, CSNH-heteroarilo, SO_{2}NH_{2}, SO_{2}NH-alquilo, SO_{2}NH-arilo y SO_{2}NH-heteroarilo;
\quad
Cuando R_{1} es SO_{2}NH_{2}, R_{6} es CONH_{2}; y
\quad
cuando R_{1} es CONH_{2}, R_{2} no es NHCONH_{2};
y sales farmacéuticamente aceptables, hidratos y solvatos del mismo.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el que el compuesto se selecciona entre el grupo constituido por:
Amida del ácido 3-acetilamino-5-(4-cloro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico;
Amida del ácido 3-acetilamino-5-(4-fluoro-fenil)-tiofeno-2-carboxílico;
Amida del ácido 5-(4-fluoro-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico;
Amida del ácido 5-(3-cloro-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico;
Amida del ácido 5-(4-trifluorometil-fenil)-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico;
y
Amida del ácido 5-fenil-3-ureido-tiofeno-2-sulfónico.
\vskip1.000000\baselineskip
3. El uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad que se caracteriza por una activación patológica de NF-\kappaB.
4. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la enfermedad es un trastorno inflamatorio o de la reparación tisular.
5. El uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que la enfermedad se selecciona del grupo constituido por trastornos inflamatorios y de reparación tisular, particularmente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas, dermatosis incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones de la piel inducidas por radiación ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer incluyendo enfermedad de Hodkins, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de distrés respiratorio del adulto y ataxia telangiectasia.
6. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la enfermedad se selecciona del grupo constituido por enfermedades autoinmunes; rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, osteoartritis, osteoporosis y ataxia telangiectasia.
7. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la enfermedad autoinmune es lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica o espondilitis anquilosante, diabetes.
8. El uso de acuerdo con una cualquiera de la reivindicación 3, en el que la enfermedad es cáncer y/o caquexia.
9. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la enfermedad es una inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA).
10. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la enfermedad es síndrome de distrés respiratorio del adulto.
11. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que existe una inhibición doble de NF-\kappaB y quinasa de control.
12. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la Fórmula (I), como se define en la reivindicación 1, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
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Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0003154D0 (en) * 2000-02-12 2000-04-05 Astrazeneca Uk Ltd Novel compounds
US6881741B2 (en) * 2001-06-11 2005-04-19 Virochem Pharma Inc. Compounds and methods for the treatment or prevention of Flavivirus infections
SE0102616D0 (sv) * 2001-07-25 2001-07-25 Astrazeneca Ab Novel compounds
AR039280A1 (es) 2002-04-11 2005-02-16 Smithkline Beecham Corp Compuesto de aminotiofeno y su uso para preparar una composicion farmaceutica
US7375131B2 (en) * 2002-06-06 2008-05-20 Smithklinebeecham Corp. NF-κB inhibitors
SE0202279D0 (sv) * 2002-07-19 2002-07-19 Astrazeneca Ab Novel comppounds
SE0202280D0 (sv) * 2002-07-19 2002-07-19 Astrazeneca Ab Novel compounds
WO2004041285A1 (en) 2002-10-31 2004-05-21 Amgen Inc. Antiinflammation agents
AU2003300832A1 (en) * 2002-12-06 2004-06-30 Smithkline Beecham Corporation NF-KappaB INHIBITORS
KR101058696B1 (ko) * 2002-12-10 2011-08-22 바이로켐 파마 인코포레이티드 후라비바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 화합물과방법
SE0300092D0 (sv) * 2003-01-15 2003-01-15 Astrazeneca Ab Novel compounds
SE0300091D0 (sv) * 2003-01-15 2003-01-15 Astrazeneca Ab Novel compounds
DE602004017478D1 (de) 2003-08-15 2008-12-11 Astrazeneca Ab Substituierte thiophene und deren verwendungen
JP4557984B2 (ja) * 2003-12-05 2010-10-06 ベーリンガー インゲルハイム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｉｋｋインヒビターとしての置換３−アミノ−チエノ−［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド化合物
ATE501138T1 (de) * 2004-01-05 2011-03-15 Astrazeneca Ab Thiophenderivate als chk-1-inhibitoren
GB0402809D0 (en) * 2004-02-09 2004-03-10 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
EP1764367A1 (en) * 2004-04-12 2007-03-21 Sankyo Company, Limited Thienopyridine derivatives
HRP20100678T1 (hr) 2005-03-29 2011-02-28 Icos Corporation Derivati heteroariluree korisni kao inhibitori chk1
WO2006119646A1 (en) * 2005-05-13 2006-11-16 Virochem Pharma Inc. Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
EP1989203A2 (en) 2006-02-16 2008-11-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Alpha carbolines and uses thereof
JP5290186B2 (ja) * 2006-11-15 2013-09-18 ヴァイロケム ファーマ インコーポレイテッド フラビウイルス感染症の治療または予防用のチオフェン類似体
US11969501B2 (en) 2008-04-21 2024-04-30 Dompé Farmaceutici S.P.A. Auris formulations for treating otic diseases and conditions
EP2278999B1 (en) 2008-04-21 2025-01-29 Dompé farmaceutici S.p.A. Auris formulations for treating otic diseases and conditions
JP2010006717A (ja) * 2008-06-24 2010-01-14 Kyorin Pharmaceut Co Ltd ジヒドロチエノ［２，３−ｅ］インダゾール化合物
EP2366699B1 (en) 2008-10-02 2013-08-07 Asahi Kasei Pharma Corporation 8-substituted isoquinoline derivative and use thereof
US20100136096A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-03 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Systems for modulating inflammation
US20100135983A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-03 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Anti-inflammatory compositions and methods
US20100137246A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-03 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Anti-inflammatory compositions and methods
US20100136094A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-03 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Systems for modulating inflammation
US20100137787A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-03 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Delivery devices for modulating inflammation
US20100136095A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-03 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Systems for modulating inflammation
US20100135984A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-03 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Anti-inflammatory compositions and methods
WO2011077502A1 (ja) * 2009-12-21 2011-06-30 杏林製薬株式会社 ジヒドロチエノ［２，３－ｅ］インダゾール化合物
EP2520292A1 (en) 2011-05-06 2012-11-07 Helmholtz-Zentrum für Infektionsforschung GmbH Use of spirangiens for the treatment or prevention of IL-8 or IL-6 mediated disorders
US20150167097A1 (en) 2012-09-20 2015-06-18 Emory University CLASSIFIERS OF NF-kB PATHWAY ACTIVATION, DEVICES, AND METHODS OF USE THEREOF
AU2017290256A1 (en) 2016-06-29 2019-01-17 Otonomy, Inc. Triglyceride otic formulations and uses thereof
WO2019012159A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 Protea Biopharma N.V. METHODS AND MEANS FOR DIAGNOSING AND / OR TREATING A FATIGUE-ASSOCIATED DISEASE
WO2019043642A1 (en) * 2017-08-31 2019-03-07 Ahammune Biosciences Private Limited NOVEL THIOPHEN COMPOUNDS, PROCESS FOR THE SYNTHESIS AND USE THEREOF
CN115161289B (zh) * 2022-03-14 2023-12-05 东南大学 一种用于炎症性疾病治疗的重组腺相关病毒及其构建方法和应用

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1468012A (en) * 1973-08-09 1977-03-23 Beecham Group Ltd 2-amino-3-carboxy-thiophene derivatives
DE4039734A1 (de) * 1990-12-13 1992-06-17 Basf Ag Substituierte 2-aminothiophene enthaltende herbizide mittel
US6274590B1 (en) * 1993-01-15 2001-08-14 G. D. Searle & Co. Method of treating skin related conditions
DE19642451A1 (de) * 1996-10-15 1998-04-16 Merck Patent Gmbh Aminothiophencarbonsäureamide
CZ302691B6 (cs) * 1998-07-08 2011-09-07 Sanofi - Aventis Deutschland GmbH N-Arylamidová sloucenina, zpusob její prípravy, farmaceutický prostredek tuto slouceninu obsahující, tato sloucenina pro použití jako aktivátor a pro použití k terapii nebo profylaxi
GB0003154D0 (en) * 2000-02-12 2000-04-05 Astrazeneca Uk Ltd Novel compounds
US6414013B1 (en) * 2000-06-19 2002-07-02 Pharmacia & Upjohn S.P.A. Thiophene compounds, process for preparing the same, and pharmaceutical compositions containing the same background of the invention
EP1324759A4 (en) 2000-10-12 2004-05-12 Smithkline Beecham Corp NF - G (K) B INHIBITORS
US6713638B2 (en) * 2001-05-18 2004-03-30 Joel M. Linden 2-amino-3-aroyl-4,5 alkylthiophenes: agonist allosteric enhancers at human A1 adenosine receptors
US6881741B2 (en) * 2001-06-11 2005-04-19 Virochem Pharma Inc. Compounds and methods for the treatment or prevention of Flavivirus infections
SE0102617D0 (sv) * 2001-07-25 2001-07-25 Astrazeneca Ab Novel compounds
US6835745B2 (en) * 2002-01-15 2004-12-28 Wyeth Phenyl substituted thiophenes as estrogenic agents
US7084178B2 (en) * 2003-11-26 2006-08-01 Bristol-Myers Squibb Company Antiamyloid phenylsulfonamides: N-cycloalkylcarboxamides derivatives

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Publication number Publication date
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