ES2316381T3 - Constructos de anticuerpo de fvv con sitios de union para un receptor cd16 y una proteina de superficie cd30. - Google Patents
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Abstract
Constructo de anticuerpo de F v, que presenta dominios variables, pero no dominios constantes, comprendiendo los dominios variables sitios de unión para un receptor CD16 y una proteína de superficie CD30.
Description
Constructos de anticuerpo de F_{v} con sitios
de unión para un receptor CD16 y una proteína de superficie
CD30.
La presente invención se refiere a constructos
de anticuerpo de F_{v}, que pueden inducir una regresión de la
enfermedad de Hodgkin, a ADN que codifican para tales constructos de
anticuerpo de F_{v} así como a un procedimiento para la
producción de los constructos de anticuerpo de F_{v} y a su
uso.
Los anticuerpos naturales presentan cuatro
dominios variables, dos dominios V_{H} y dos V_{L}. Los dominios
variables sirven como sitios de unión para un antígeno, estando
formado un sitio de unión por un dominio V_{H} y uno V_{L}. Los
anticuerpos naturales presentan dos sitios de unión iguales, es
decir, reconocen un antígeno y por tanto se denominan también
monoespecíficos. Los anticuerpos sintéticos pueden presentar también
dos sitios de unión distintos, es decir, reconocen entonces dos
antígenos y se denominan de manera correspondiente biespecíficos.
Un ejemplo de tales anticuerpos es aquél que reconoce al receptor
FcyIIIA (CD16) de células citolíticas naturales (células NK) y la
proteína de superficie CD30 de células de la enfermedad de Hodgkin.
Con este anticuerpo (biAcm HRS-3/A9) pueden
activarse células NK y dirigirse frente a las células de la
enfermedad de Hodgkin, mediante lo cual se induce una regresión de
la enfermedad de Hodgkin (véase el documento DE 43 37 197C así como
Hartmann, F. et al., Blood 89 (1997), 2042). Por otro lado se
ha mostrado que biAcm HRS-3/A9 sólo puede
purificarse o producirse difícilmente. Además se ha mostrado que
biAcm HRS-3/A9 provoca reacciones inmunitarias
indeseadas en muchos
pacientes.
pacientes.
Un constructo de anticuerpo de F_{v}
biespecífico (diacuerpo), que sólo contiene dominios variables con
sitios de unión para CD19 y CD3 se describe en Kipriyanov S. et
al. (International Journal of Cancer tomo 77 (1998), nº 5,
páginas 763-772).
Por consiguiente, la presente invención se basa
en el objetivo de proporcionar un anticuerpo, con el que puede
inducirse una regresión de la enfermedad de Hodgkin, evitándose las
desventajas citadas anteriormente.
Según la invención esto se consigue mediante los
objetos en las reivindicaciones de patente.
La presente invención se basa en los
conocimientos del solicitante, de que un constructo de anticuerpo de
F_{v}, que presenta sitios de unión para un receptor CD16 y una
proteína de superficie CD30, puede inducir una regresión de la
enfermedad de Hodgkin, siendo la lisis de las células tumorales más
fuerte que con biAcm HRS-3/A9. Además se ha
reconocido que puede producirse un constructo de anticuerpo de
F_{v} de este tipo en grandes cantidades y mayor pureza. Además,
el constructo de anticuerpo de F_{v} se caracteriza porque no
contiene ninguna parte que pueda conducir a reacciones inmunitarias
indeseadas en los pacientes.
Según la invención se utilizan los conocimientos
del solicitante, para proporcionar un constructo de anticuerpo de
F_{v}, que presenta sitios de unión para un receptor CD16 y una
proteína de superficie CD30.
La expresión "constructo de anticuerpo de
F_{v}" indica un constructo de anticuerpo, que presenta
dominios variables, pero no dominios constantes. Como dominios
variables existen especialmente sitios de unión para un receptor
CD16 y una proteína de superficie CD30.
La expresión "sitio de unión" indica un
dominio V_{H} y uno V_{L}, por medio de los que el constructo
de anticuerpo de F_{v} puede unirse a un receptor CD16 o a una
proteína de superficie CD30.
La expresión "receptor CD16" comprende un
receptor CD16 de cualquier tipo y procedencia. Por ejemplo, el
receptor CD16 puede proceder de células NK, macrófagos o monocitos
activados. El receptor CD16 puede encontrarse también en forma de
tipo natural o modificada, comprendiendo la última forma también un
fragmento de un receptor CD16, al que puede unirse un anticuerpo
dirigido frente a un receptor CD16.
La expresión "receptor CD30" comprende un
receptor CD30 de cualquier tipo y procedencia. Por ejemplo, el
receptor CD30 puede proceder de células de la enfermedad de Hodgkin
o de Reed-Sternberg. El receptor CD30 puede existir
también en forma de tipo natural o modificada, comprendiendo la
última forma también un fragmento de un receptor CD30, al que puede
unirse un anticuerpo dirigido frente a un receptor CD30.
Un constructo de anticuerpo de F_{v} según la
invención presenta uno o varios sitios de unión para un receptor
CD16 y uno o varios sitios de unión para una proteína de superficie
CD30. Preferiblemente, el constructo de anticuerpo de F_{v}
presenta uno o dos sitios de unión para un receptor CD16 y uno o dos
sitios de unión para una proteína de superficie CD30.
Un constructo de anticuerpo de F_{v} según la
invención puede producirse mediante distintos procedimientos. Por
ejemplo, puede producirse un constructo de anticuerpo de F_{v},
que presenta un sitio de unión para un receptor CD16 y un sitio de
unión para una proteína de superficie CD30, por ejemplo de modo que
se expresa un primer constructo de anticuerpo de F_{v} de cadena
sencilla, que presenta un dominio V_{H} de un anticuerpo
anti-CD16 y un dominio V_{L} de un anticuerpo
anti-CD30, junto con un segundo constructo de
anticuerpo de F_{v} de cadena sencilla, que presenta un dominio
V_{L} de un anticuerpo anti-CD16 y un dominio de
V_{H} de un anticuerpo anti-CD30, mediante lo
cual entran en contacto ambos entre sí y se forma el constructo de
anticuerpo de F_{v} según la invención. De manera complementaria
se remite a los ejemplos 1-3.
Además puede producirse un constructo de
anticuerpo de F_{v}, que presenta de dos a cuatro sitios de unión
para un receptor CD16 y dos sitios de unión para una proteína de
superficie CD30, por ejemplo de modo que se expresa un constructo
de anticuerpo de F_{v} de cadena sencilla, que comprende los
elementos (a) y (b):
- (a)
- un dominio V_{H} de un anticuerpo anti-CD16 y un dominio V_{L} de un anticuerpo anti-CD30, estando unidos entre sí los dominios a través de un ligador 1 peptídico, que puede comprender cualquier aminoácido, especialmente glicina (G), serina (S) y prolina (P) y preferiblemente de 0-10 aminoácidos,
- (b)
- un dominio V_{H} de un anticuerpo anti-CD30 y un domino V_{L} de un anticuerpo anti-CD16, estando unidos entre sí los dominios a través del ligador 1 peptídico citado anteriormente,
estando unidos entre sí los
elementos (a) y (b) a través de un ligador 2 peptídico, que puede
comprender cualquier aminoácido, especialmente glicina, serina y
prolina y preferiblemente de 3-10 aminoácidos y muy
especialmente la secuencia de aminoácidos GGPGS. De manera
complementaria se remite a la solicitud de patente 198 19 846.9 del
solicitante.
Otro objeto de la presente invención es un ácido
nucleico, especialmente un ADN, que codifica para un constructo de
anticuerpo de F_{v} citado anteriormente. Además, un objeto de la
presente invención son vectores de expresión que contienen un ADN
de este tipo. Se prefiere el vector de expresión
pKID16-30 de la figura 1. Éste se depositó en la
DSMZ (Deutsche Sammlung für Mikroorganismen und Zellen,
Colección Alemana de Microorganismos y Células) el 29 de julio de
1999 bajo DSM 12960. Además, un objeto de la presente invención son
células que contienen un vector de expresión citado
anteriormente.
Otro objeto de la presente invención es un kit,
que comprende:
- (a)
- un constructo de anticuerpo de F_{v} según la invención, y/o
- (b)
- un vector de expresión según la invención, así como
- (c)
- sustancias auxiliares habituales, tales como tampones, disolventes, vehículos, controles y marcadores.
De los componentes individuales pueden existir
uno o varios representantes.
La presente invención proporciona un constructo
de anticuerpo de F_{v}, que presenta sitios de unión para un
receptor CD16 y una proteína de superficie CD30. Este constructo de
anticuerpo de F_{v} puede producirse en grandes cantidades y
mayor pureza. Además, no presenta ninguna parte que pueda conducir a
reacciones inmunitarias indeseadas en los pacientes. Especialmente,
el constructo de anticuerpo de F_{v} se caracteriza porque puede
activar células NK y puede dirigirse frente a células que expresan
proteínas de superficie CD30, especialmente células tumorales, muy
especialmente células de la enfermedad de Hodgkin o de
Reed-Sternberg, mediante lo cual se lisan estas
células. Por consiguiente, la presente invención es adecuada para
proceder contra enfermedades, en las que desempeñan un papel las
células que expresan proteínas de superficie CD30. Tales
enfermedades son por ejemplo enfermedades tumorales, especialmente
enfermedad de Hodgkin.
La figura 1 muestra el vector de expresión según
la invención pKID16-30. Éste codifica para dos
constructos de anticuerpo de F_{v} de cadena sencilla, de los que
uno presenta el dominio V_{H} de un anticuerpo
anti-CD16 y el dominio V_{L} de un anticuerpo
anti-CD30 y el otro presenta el dominio V_{H} de
un anticuerpo anti-CD30 y el dominio V_{L} de un
anticuerpo anti-CD16. Tras la expresión de los
constructos de anticuerpo de F_{v} de cadena sencilla entran en
contacto éstos entre sí, mediante lo cual se obtiene un constructo
de anticuerpo de F_{v} según la invención.
La figura 2 muestra un análisis de FACS de la
unión de un constructo de anticuerpo de F_{v} según la invención
a células de la enfermedad de Hodgkin CD30^{+} L540CY y
granulocitos CD16^{+}. Las células tumorales y los granulocitos
se incubaron en cada caso con 20 \mug del constructo de anticuerpo
de F_{v} según la invención. La unión del constructo de
anticuerpo de F_{v} se determinó con el anticuerpo 9E10
anti-c-myc e IgG de cabra
anti-ratón conjugada con fluoresceína. Como control
negativo se incubaron las células solas con 9E10 e IgG de cabra
anti-ratón conjugada con
fluoresceína.
fluoresceína.
La figura 3 muestra la actividad citolítica de
células NK (efectoras) contenidas en linfocitos de sangre periférica
(células PBL) frente a células de la enfermedad de Hodgkin
CD30^{+} L540CY (células diana) en el caso de diferentes
relaciones de células efectoras-diana en una prueba
de JAM de 5 h. Se administró un constructo de anticuerpo de F_{v}
según la invención (\bullet) con una concentración de 1 \mug/ml.
Como control se usó biAcm HRS-3/A9
(\blacktriangle) (con una concentración de 4 \mug/ml). Como
control negativo se usaron el constructo de anticuerpo de F_{v}
según la invención sin células NK (o) y células NK solas
(\gamma).
La figura 4 muestra el tratamiento de ratones
SCID, que portan xenotrasplante de la enfermedad de Hodgkin, con un
constructo de anticuerpo de F_{v} según la invención. Los ratones
se trataron en el día 0 por vía i.v. con 100 \mug de un
constructo de anticuerpo de F_{v} según la invención junto con
células PBL que contenían células NK (\bullet) o sin aquéllas
(\circ), con 200 \mul de PBS (*), con 1 x 10^{7} células PBL
(\gamma), o con una mezcla de 100 \mug de Acm
HRS-3 y A9 junto con células PBL (\lozenge). Los
diámetros tumorales se midieron dos veces por semana y el volumen
tumoral se calculó con la siguiente fórmula: Volumen = d^{2} x
Dx\pi/6, siendo d el menor diámetro tumoral y D el mayor diámetro
tumoral.
Se sometió el ADNc de los dominios V_{H} y
V_{L} de un anticuerpo anti-CD16 Acm A9 a una PCR.
Para ello se usaron los siguientes cebadores:
VH5',
5-CAGCCGGCCATGGCGCAGGTC(G)CAGCTGCAGC(G)AG-3
(NcoI);
VH3',
5-CCAGGGGCCAGTGGATAGACAAGCTTGGGTGTTGTTTT-3
(HindIII):
VL5',
5-AGAGACGCGTACAGGCTGTTGTGACTCAGG-3
(MluI);
VL3',
5-GACTGCGGCCGCAGACTTGGGCTGGCC-3
(NotI).
Se realizó la PCR tal como sigue: un ciclo; 5
min. a 94ºC, 3 min. a 58ºC y 2 min. a 72ºC, seguido de 30 ciclos;
80 s a 94ºC, 80 s a 58ºC y 2 min. a 72ºC o por último 10 min. en el
último ciclo. Se purificaron en gel los productos de PCR y se
insertaron en el vector pCR-Script SK(+)
(Stratagene) para la secuenciación. Para la expresión se insertó el
dominio V_{H} a través de NcoI/HindIII y el dominio V_{L} a
través de MluI/NotI en el vector pHOG21.
Se sometieron los dominios V_{H} y V_{L} de
un fragmento scF_{v} anti-CD30 a una PCR. Para
ello se usaron los siguientes cebadores:
5-ATGACCATGATTACGCCAAGC-3
5-AGACAAGCTTGGGTTGTTTTGGCTGAGGAGACGG-3
(HindIII);
5-GGCGGATATCGAGCTCACTCAGTCTCC-3
(EcoRV)
5-TATAGCGGCCGCAGCATCAGCCCGTTTGATTTCC-3
(NotI).
Se insertaron los dominios V_{H} y V_{L} del
fragmento scF_{v} anti-CD30 o del fragmento
scF_{v} anti-CD16 en el vector de expresión pKID,
mediante lo cual se obtuvo el vector de expresión según la invención
pKID 16-30. Éste codifica para los constructos de
anticuerpo de F_{v} de cadena sencilla V_{H}
16-V_{L} 30 y V_{H} 30-V_{L}
16.
\vskip1.000000\baselineskip
Se cultivaron células de X11 Blue de E.
coli (Stratagene, La Jolla, CA), que se habían transformado con
el plásmido de expresión pKID16-30, durante la noche
en medio 2YT con ampicilina 100 \mug/ml y glucosa 100 mM a 37ºC.
Se cultivaron diluciones de 1:20 de los cultivos durante la noche
como cultivos en matraz en medio 2YT a 38ºC con agitación con 280
rpm. En el caso de un valor de DO_{600} de 0,8 se sedimentaron las
bacterias mediante centrifugación de 10 minutos con 1500 g a 20ºC y
se resuspendieron en el mismo volumen de un medio 2YT fresco, que
contenía ampicilina 100 \mug/ml y sacarosa 0,4 M. Se añadió IPTG
con una concentración final de 0,1 M y se continuó el crecimiento a
21ºC (20-22ºC) durante 18-20 h. Se
aisló el constructo de anticuerpo de F_{v} tal como se describe
en Kipriyanov, S.M. et al., Protein Engineering 10, (1997),
445. A continuación se concentró mediante una precipitación con
sulfato de amonio (saturación al 70% de concentración final). Se
obtuvo el precipitado de proteína mediante centrifugación (30000 g,
4ºC, 45 min.) y se disolvió en el 10% del volumen inicial de
Tris-HCl 50 mM, NaCl 1 M, pH 7,0. Se realizó una
cromatografía de afinidad por metal inmovilizado (IMAC) tal como se
describe en Kipriyanov, S.M. et al., J. Immunol. Methods 200,
(1997), 69. Se dializó el constructo de anticuerpo de F_{v}
purificado frente a una solución salina tamponada con fosfato.
\vskip1.000000\baselineskip
Para detectar la unión de un constructo de
anticuerpo de F_{v} según la invención a granulocitos CD16^{+}
y células de la enfermedad de Hodgkin CD30^{+} L540CY se realizó
un análisis en FACScan (Beckton Dickinson). Para ello se lavaron
1x10^{6} células dos veces en PBS-N helado (PBS,
NaN_{3} al 0,05%) y se incubaron sobre hielo con 100 \mul del
constructo de anticuerpo de F_{v} del ejemplo 2 durante 45 min. Se
sedimentaron las células durante 5 min. con 1200 rpm a 4ºC y se
lavaron con 2 ml de PBS-N. Se resuspendieron las
células en 100 \mul de PBS-N, que contenía 10
\mug/ml del anticuerpo 9E10 unido al c-myc (ICI
Chemikalien) y se incubaron sobre hielo durante 30 min. Se
sedimentaron las células y se lavaron tal como anteriormente.
Después se resuspendieron las células con IgG de cabra
anti-ratón marcada con fluoresceína (Gibco BRL;
diluida 1:100 en PBS-N) y se incubaron sobre hielo
durante 30 min. Tras otro lavado con PBS-N, las
células estaban listas para el análisis con PBS-N,
que contenía yoduro de propidio 1 \mug/ml (Sigma). Se determinó la
fluorescencia de fondo, incubándose las células con el anticuerpo
9E10 e IgG de cabra anti-ratón marcada con
fluoresceína en condiciones iguales.
Se mostró que el constructo de anticuerpo de
F_{v} según la invención reconoce tanto a los granulocitos
CD16^{+} como a las células de la enfermedad de Hodgkin CD30^{+}
L540CY y se une a los mismos.
Para detectar la actividad de un constructo de
anticuerpo de F_{v} según la invención para activar células NK,
para lisar células de la enfermedad de Hodgkin CD30^{+} L540CY, se
realizó una prueba de citotoxicidad de manera correspondiente a la
prueba de JAM descrita en Matzinger, P., J. Immunol. Meth. 145
(1991), 185. En la prueba de citotoxicidad se evalúa la
fragmentación del ADN. Se marcaron las células con [^{3}H]
timidina hasta una concentración final de 2,5-5
\muCi/ml durante 4-6 h. Se sedimentaron las
células, se lavaron una vez con medio de cultivo y se colocaron a
10^{4} células/cavidad de una placa de 96 pocillos. Tras la
adición de células efectoras (células de sangre periférica
"células PBL" que contenían células NK) en distintas diluciones
se incubó la placa de 96 pocillos en una atmósfera humedecida con
CO_{2} al 7,5% durante 4 h. Se aspiraron las células y el medio
sobre filtros de fibra de vidrio. Tras lavar y secar los filtros se
pasaron a bolsas de plástico, que contenían un líquido de centelleo
y se contaron usando un contador de centelleo líquido (LKB). La
radioactividad medida se refiere al ADN intacto, dado que el ADN de
células destruidas está descompuesto en fragmentos pequeños, que no
se retienen por los filtros. Para la determinación de la
citotoxicidad, es decir la destrucción de las células, se usó la
fórmula convencional para la prueba de JAM: % de destrucción
específica = (S-E)/S 100, en la que E = ADN obtenido
de manera experimental en presencia de células efectoras (en cpm) y
S = ADN obtenido en ausencia de células efectoras (espontáneo).
Se mostró que un constructo de anticuerpo de
F_{v} según la invención puede activar células NK, para lisar
células de la enfermedad de Hodgkin CD30^{+} L540CY, siendo la
lisis más fuerte que en el caso del uso de biAcm
HRS-3/A9.
Se establecieron linfomas de Hodgkin de
CD30^{+} L540CY en ratones SCID, tal como se describe en Hombach,
A. et al., Int. J. Cancer 55, (1993), 830; Renner, C. et
al., J. Hematotherapy 4, (1995), 447. Para ello se inyectaron
1,5x10^{7} células tumorales en 200 \mul de PBS por vía
subcutánea en el costado derecho de los ratones. Se determinó el
desarrollo tumoral, es decir el diámetro tumoral dos veces por
semana. Se dividieron los ratones con tumores de
4-6 mm de diámetro en distintos grupos y recibieron
un constructo de anticuerpo de F_{v} según la invención en 200
\mul de PBS junto con linfocitos de sangre periférica (células
PBL) que contenían células NK. Se determinaron el volumen tumoral y
su desarrollo (véase la leyenda de la figura 4).
Se mostró que un constructo de anticuerpo de
F_{v} según la invención puede activar células NK no sólo in
vitro, sino también in vivo, para lisar células de la
enfermedad de Hodgkin CD30^{+} L540CY.
<110> Deutsches Krebsforschungszentrum
(Centro alemán de investigación del cáncer)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Constructos de anticuerpo de
F_{v}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> K 2839
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\vskip0.400000\baselineskip
<140> Desconocido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> Documento DE 199 37 264.0
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
06-08-1999
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 4570
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial: Vector de expresión que codifica para dos constructos
de anticuerpo de F_{v} de cadena sencilla
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (217)..(1002)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CDS
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<222> (1102)..(1920)
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<400> 1
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<210> 2
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<211> 262
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<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial: Vector de expresión que codifica para dos constructos
de anticuerpo de F_{v} de cadena sencilla
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<400> 2
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<210> 3
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<211> 273
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Descripción de la secuencia
artificial: Vector de expresión que codifica para dos constructos
de anticuerpo de F_{v} de cadena sencilla
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
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\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
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<211> 35
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<212> ADN
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Descripción de la secuencia
artificial: Cebador
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<400> 4
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\hskip-.1em\dddseqskipcagccggcca tggcgcaggt cgcagctgca gcgag
\hfill35
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<210> 5
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<211> 38
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<212> ADN
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Descripción de la secuencia
artificial: Cebador
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<400> 5
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\hfill38
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<212> ADN
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Descripción de la secuencia
artificial: Cebador
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<400> 6
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\hfill30
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<212> ADN
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Descripción de la secuencia
artificial: Cebador
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<400> 7
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\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgactgcggcc gcagacttgg gctggcc
\hfill27
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<210> 8
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<211> 21
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<212> ADN
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Descripción de la secuencia
artificial: Cebador
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<400> 8
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\hskip-.1em\dddseqskipatgaccatga ttacgccaag c
\hfill21
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<210> 9
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<211> 36
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<212> ADN
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<220>
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<223> Descripción de la secuencia
artificial: Cebador
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<400> 9
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\hskip-.1em\dddseqskipagacaagctt gggtgttgtt ttggctgagg agacgg
\hfill36
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<210> 10
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<211> 27
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<223> Descripción de la secuencia
artificial: Cebador
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<400> 10
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\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggcggatatc gagctcactc agtctcc
\hfill27
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<210> 11
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<211> 34
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<212> ADN
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Descripción de la secuencia
artificial: Cebador
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<400> 11
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\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptatagcggcc gcagcatcag cccgtttgat ttcc
\hfill34
Claims (14)
1. Constructo de anticuerpo de F_{v}, que
presenta dominios variables, pero no dominios constantes,
comprendiendo los dominios variables sitios de unión para un
receptor CD16 y una proteína de superficie CD30.
2. Constructo de anticuerpo de F_{v} según la
reivindicación 1, procediendo el receptor CD16 de células NK.
3. Constructo de anticuerpo de F_{v} según la
reivindicación 1 ó 2, procediendo la proteína de superficie CD30 de
células de la enfermedad de Hodgkin o de
Reed-Sternberg.
4. Constructo de anticuerpo de F_{v} según una
de las reivindicaciones 1-3, existiendo en cada caso
un sitio de unión.
5. Constructo de anticuerpo de F_{v} según la
reivindicación 4, codificado por el vector de expresión
pKID16-30 (DSM 12960).
6. Constructo de anticuerpo de F_{v} según una
de las reivindicaciones 1-3, existiendo en cada caso
dos sitios de unión.
7. Vector de expresión, que codifica para el
constructo de anticuerpo de F_{v} según una de las
reivindicaciones 1-6.
8. Vector de expresión según la reivindicación
7, concretamente pKID16-30 (DSM 12960).
9. Transformante, que contiene el vector de
expresión según la reivindicación 7 u 8.
10. Procedimiento para la producción del
constructo de anticuerpo de F_{v} según una de las
reivindicaciones 1-6, que comprende el cultivo del
transformante según la reivindicación 9 en condiciones
adecuadas.
11. Kit, que comprende:
- (a)
- un constructo de anticuerpo de F_{v} según una de las reivindicaciones 1-6, y/o
- (b)
- un vector de expresión según la reivindicación 7 u 8, así como
- (c)
- sustancias auxiliares habituales, tales como tampones, disolventes, vehículos, controles y marcadores,
pudiendo existir uno o varios
representantes de los componentes
individuales.
12. Constructo de anticuerpo de F_{v} según
una de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso como fármaco.
13. Uso del constructo de anticuerpo de F_{v}
según una de las reivindicaciones 1 a 6, para la producción de un
medicamento para la lisis de células que expresan proteínas de
superficie CD30.
14. Uso según la reivindicación 13, siendo el
medicamento para el tratamiento de enfermedades tumorales,
especialmente de tumores de la enfermedad de Hodgkin o de Reed.
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