ES2318041T3 - Derivados de arilsulfonamida como inhibidores de c-jun quinasas (jnk) n-terminales. - Google Patents

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Jean-Pierre Gotteland
Russell J. Thomas
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Serono Laboratories UK Ltd
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Abstract

Un derivado de sulfonamida de acuerdo con la fórmula I así como sus isómeros geométricos, sus formas ópticamente activas como enantiómeros, diastereoisómeros y mezclas de estos, así como sales del mismo, en donde: Ar 1 es un grupo arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; X es O o S; Ar 2 es un grupo arileno o heteroarileno sustituido o no sustituido; R 1 y R 2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y un grupo alquilo C1-C6; R a , R a '', R b , R b'' se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C 1-C 6; R 3 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C10, alquenilo C2-C10, alquinilo C2-C10, arilo o heteroarilo, cicloalquilo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O, S, aril-alquilo (C1-C10) y heteroaril-alquilo (C1-C10); R 4 se selecciona del grupo que consiste en H y -C(H)R 5 R 6 ; R 5 y R 6 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C1-C10, alquenilo C2-C10, alquinilo C2-C10, arilo o heteroarilo, cicloalquilo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O, S, aril-alquilo (C 1-C 10) y heteroaril-alquilo (C 1-C 10); m es un número entero de 1 a 5; n es un número entero de 0 a 2; y p es un número entero de 1 a 10; con la condición de que el compuesto de acuerdo con la fórmula I no sea: N-[[5-[[[3-[[4-[(3-aminopropil)amino]butil]amino]-propil]amino]sulfonil]-2-tienil]metil]-benzamida, ni N-[[5-[[[3-[[4-[(3-aminopropil)amino]butil]amino]-propil]amino]sulfonil]-2-tienil]metil]-4-cloro-benzamida, ni N,N''-[1,4-butanodiilbis(imino-3,1-propanodiiliminosulfonil-5,2-tiofenodiilmetilen)]-bis[4-cloro-]benzamida.

Description

Derivados de arilsulfonamida como inhibidores de c-Jun quinasas (JNK) N-terminales.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos derivados de sulfonamida así como a métodos para su preparación. La presente invención se refiere además a derivados de sulfonamida para el uso como compuestos farmacéuticamente activos, así como a formulaciones farmacéuticas que contienen tales derivados de sulfonamida. En particular, la presente invención se refiere a derivados de sulfonamida útiles en el tratamiento y/o la prevención de trastornos relacionados con la apoptosis y enfermedades inflamatorias. Por otra parte, la presente invención se refiere a derivados de sulfonamida que presentan una actividad moduladora, principalmente inhibidora, de la función o las rutas de c-Jun quinasas N-terminales (JNKs, por sus siglas en inglés), respectivamente.
Antecedentes de la invención
Las células de mamífero responden a algunos estímulos extracelulares activando cascadas de señalización que están mediadas por diversas proteína quinasas activadas por mitógenos (MAPKs, por sus siglas en inglés). A pesar de las diferencias en su respuesta a estímulos aguas arriba, las cascadas de MAP quinasas se organizan de un modo similar, consistiendo en MAP quinasa quinasa quinasas (MAPKKK o MEKK), MAP quinasa quinasas (MAPKK o MKK) y MAP quinasas (MAPK). Las MAP quinasas son una amplia familia de quinasas que incluye c-Jun quinasas N-terminales (JNKs), también conocidas como "proteína quinasas activadas por estrés" (SAPKs, por sus siglas en inglés), así como quinasas reguladas por señales extracelulares (ERKs, por sus siglas en inglés) y MAP quinasas p38. Cada una de estas tres subfamilias de MAP quinasas está implicada en al menos tres rutas diferentes pero paralelas que transportan la información puesta en marcha por estímulos externos. La ruta de señalización de JNK es activada por la exposición de las células a estrés ambiental - tal como toxinas químicas, radiación, hipoxia y choque osmótico -así como por el tratamiento de las células con factores de crecimiento o citoquinas proinflamatorias- tales como factor de necrosis tumoral alfa (TNF-\alpha) o interleuquina-1 beta (IL-1\beta).
Dos MAP quinasa quinasas (conocidas como MKKs o MAPKKs), es decir MKK4 (también conocida como JNKK1) y MKK7, activan JNK mediante una fosforilación doble de residuos de treonina y tirosina específicos situados dentro de un motivo Thr-Pro-Tyr durante el ciclo de activación de la enzima, en respuesta a citoquinas y señales de estrés. Incluso más aguas arriba en la cascada de señalización, se sabe que la MKK4 es también activada por una MAP quinasa quinasa quinasa, MEKK1, a través de fosforilación en los residuos de serina y treonina.
Una vez activada, la JNK se une a la región N-terminal de dianas de factores de transcripción y fosforila los dominios de activación de la transcripción dando como resultado la regulación al alza de la expresión de diversos productos génicos, lo que puede conducir a apoptosis, respuestas inflamatorias o procesos oncogénicos (1-5).
Algunos factores de transcripción que se sabe que son sustratos de JNK son las proteínas Jun (c-jun, JunB y JunD), los factores de transcripción relacionados ATF2 y ATFa, factores de transcripción de Ets tales como Elk-1 y Sap-1, el supresor tumoral p53 y una proteína del dominio de muerte celular (DENN, por sus siglas en inglés).
Tres enzimas JNK distintas se han identificado como productos de los genes JNK1, JNK2 y JNK3 y a continuación se han identificado diez isoformas diferentes (3, 6, 7). JNK1 y -2 se expresan ubicuamente en tejidos humanos, mientras que JNK3 se expresa selectivamente en el corazón, el pulmón y los testículos (7, 8, 9, 10). Cada isoforma se une a los sustratos con diferentes afinidades, sugiriendo, in vivo, una regulación específica para el sustrato de las rutas de señalización por las diferentes isoformas de JNK.
La activación de la ruta de JNK ha sido documentada en un número de procesos patológicos, proporcionando así una razón de ser para dirigirse a esta ruta para el descubrimiento de fármacos. Además, los sistemas de genética molecular han validado el papel patógeno de esta ruta en varias enfermedades.
Por ejemplo, las enfermedades autoinmunes e inflamatorias derivan de la activación inapropiada del sistema inmunitario. Las células inmunitarias activadas expresan muchos genes que codifican moléculas inflamatorias, incluyendo citoquinas, factores de crecimiento, receptores de la superficie celular, moléculas de adhesión celular y enzimas degradativas. Se sabe que muchos de estos genes son regulados por la ruta de JNK, a través de la activación de los factores de transcripción c-Jun y ATF-2.
La inhibición de la activación de JNK en macrófagos estimulados con lipopolisacáridos bacterianos modula eficazmente la producción de la citoquina proinflamatoria clave, TNF-\alpha (11).
La inhibición de la activación de JNK disminuye la activación de factores de transcripción responsables de la expresión inducible de metaloproteinasas de matriz (MMPs, por sus siglas en inglés) (12), que se sabe que son responsables de la promoción de la erosión de los cartílagos y huesos en la artritis reumatoide y de la destrucción tisular generalizada en otras enfermedades autoinmunes.
\newpage
\global\parskip0.900000\baselineskip
La cascada de JNK también es activada en células T por la estimulación antigénica y la coestimulación de receptor de CD28 (13) y regula la producción del promotor de IL-2 (14). La activación inapropiada de linfocitos T inicia y perpetúa muchas enfermedades autoinmunes, incluyendo asma, síndrome del intestino irritable y esclerosis múltiple.
En neuronas vulnerables al daño por enfermedad de Alzheimer y en neuronas CA1 de pacientes con hipoxia aguda (15), la proteína JNK3 se expresa altamente. También se encontró que el gen JNK3 se expresaba en las regiones dañadas de los cerebros de pacientes con enfermedad de Alzheimer (16). Además, se encontró que las neuronas de ratones JNK3 KO eran resistentes a la apoptosis neuronal inducida por ácido caínico en comparación con neuronas de ratones silvestres (8).
Basándose en estos hallazgos, se cree que la ruta de señalización de JNK, y especialmente la de JNK2 y JNK3, está implicada en enfermedades neurodegenerativas conducidas por apoptosis tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la epilepsia y las apoplejías, la enfermedad de Huntington, las lesiones cerebrales traumáticas, así como los ataques isquémicos y hemorrágicos.
Las enfermedades cardiovasculares, tales como la aterosclerosis y la restenosis, resultan de una regulación defectuosa del crecimiento de la pared de los vasos sanguíneos. La ruta de JNK es activada por estímulos aterogénicos y regula la producción local de citoquinas y factores de crecimiento en células vasculares (17, 18) induciendo el gen proaterosclerótico (19).
La isquemia sola o acoplada con reperfusión en el corazón, el hígado, el riñón o el cerebro da como resultado muerte celular y formación de cicatrices, lo que finalmente puede conducir a fallo cardíaco congestivo, trastornos hepáticos, fallo renal o disfunción cerebral. La ruta de JNK es activada por isquemia y reperfusión en el corazón (20), conduciendo a la activación de genes sensibles a JNK y a daño tisular mediado por leucocitos. La activación de JNK también se observa en el riñón (21) o el hígado (22) después de isquemia y reperfusión. Ha resultado que la regulación a la baja de JNKs mejora la función renal y el resultado a largo plazo durante el fallo renal nefrítico e isquémico (23).
El cáncer se caracteriza por crecimiento descontrolado, proliferación y migración de células. En el cáncer de pulmón temprano, la expresión de c-jun está alterada y puede mediar en la señalización de factores de crecimiento en el cáncer de pulmón de células no pequeñas (24). Además de regular la producción y la actividad de c-jun, la activación de JNK puede regular la fosforilación de p53, y así puede modular la progresión del ciclo celular (25). Por otra parte, el papel de la activación de JNK en la tumorigénesis mediada por HTLV-1 (virus de leucemia huma de células T tipo 1, por sus siglas en inglés) (26) sugiere el uso potencial de inhibidores de JNK en el tratamiento del cáncer (27). La inhibición selectiva de la activación de JNK por una proteína inhibidora de JNK presente en la naturaleza, llamada proteína que interactúa con JNK 1 (JIP1, por sus siglas en inglés), bloquea la transformación celular (28). Así, los inhibidores de JNK pueden bloquear la transformación y el crecimiento de células tumorales.
Se han propuesto varias moléculas pequeñas como moduladores de la ruta de JNK.
Los derivados de ariloxindol de la fórmula (A) (documento WO 00/35909; documento WO 00/35906; documento WO 00/35921) y la fórmula (B) (documento WO 00/64872) genéricas, respectivamente, se han desarrollado para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, inflamación y tumores sólidos para la fórmula (A) y para el tratamiento de una amplia gama de trastornos, incluyendo enfermedades neurodegenerativas, enfermedades inflamatorias y autoinmunes, trastornos cardiovasculares y óseos, para la fórmula (B).
1
Se ha dado cuenta de que los derivados de pirazoloantronas de fórmula (C) inhiben JNK para el tratamiento de enfermedades degenerativas neurológicas, trastornos inflamatorios y autoinmunes, así como patologías cardiovasculares (documento WO 01/12609).
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2
Se dio cuenta de que los derivados de tetrahidropirimidina de fórmula (D) eran inhibidores de JNK útiles en el tratamiento de una amplia gama de enfermedades, incluyendo enfermedades neurodegenerativas, trastornos inflamatorios y autoinmunes y patologías cardíacas y óseas destructivas (documento WO 00/75118).
3
Se ha propuesto que otros compuestos heterocíclicos de fórmula (E) inhiben proteína quinasas y especialmente c-jun quinasas N-terminales (documento WO 01/12621) para tratar "estados mediados por JNK", incluyendo enfermedades neurodegenerativas, trastornos inflamatorios y autoinmunes, trastornos óseos destructivos y enfermedades cardiovasculares e infecciosas.
4
Derivados de benzazoles tales como los representados por la fórmula (F) (documento WO 01/47920) se han descrito como moduladores de la ruta de JNK y especialmente como inhibidores selectivos de JNK2 y/o JNK3 para el tratamiento de trastornos neuronales, enfermedades autoinmunes, cánceres y enfermedades cardiovasculares.
5
También se han desarrollado varios derivados de sulfonamida de fórmula (G) (documento WO 01/23378), derivados de sulfonilaminoácido de fórmula (H) (documentos WO 01/23379, EP 1088815) y derivados de sulfonilhidrazida de fórmula (J) (documento WO 01/23382), para inhibir JNKs, especialmente JNK2 y JNK3, para tratar enfermedades neurodegenerativas, trastornos autoinmunes, cánceres y enfermedades cardiovasculares.
6
7
El documento WO 0/172685 describe análogos de poliamina citotóxicos, tales como el compuesto análogo 1278 de fórmula (K), N,N'-[1,4-butanodiilbis(imino-3,1-propanodiilimino-sulfonil-5,2-tiofenodiilmetilen)]bis[4-cloro-]ben-
zamida, como agentes farmacéuticos útiles para tratar enfermedades en las que se desea inhibir el crecimiento y/o la proliferación celular, por ejemplo cáncer y lesión posangioplástica.
8
La gran importancia de la ruta de la JNK en algunas enfermedades ampliamente extendidas subraya la necesidad de desarrollar inhibidores, preferentemente selectivos, de JNKs, incluyendo inhibidores de JNK3.
Sumario de la invención
Un objetivo de la presente invención es proporcionar moléculas que sean adecuadas para el tratamiento de una variedad de enfermedades, en particular de trastornos relacionados con el sistema autoinmune o neuronal, cáncer, estados isquémicos y enfermedades cardiovasculares.
Notablemente, un objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos químicos que sean capaces de modular, preferiblemente regular a la baja o inhibir, la ruta de la JNK (Jun quinasa) a fin de que sean útiles en un método para tratar enfermedades que implican la ruta de JNK.
Por otra parte, un objetivo de la presente invención es proporcionar métodos para preparar dichos compuestos químicos. Además, un objetivo de la presente invención es proporcionar una nueva categoría de formulaciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades, en particular las mediadas por la función de JNK.
Finalmente, un objetivo de la presente invención es proporcionar un método para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades que están provocadas por trastornos del sistema autoinmune y/o neuronal.
En un primer aspecto, la invención proporciona compuestos de fórmula I:
9
en la que
\bullet
Ar^{1} se selecciona de grupos arilo o heteroarilo sustituidos o no sustituidos;
\bullet
Ar^{2} se selecciona de grupos arileno o heteroarileno sustituidos o no sustituidos;
\bullet
X es O o S, preferiblemente O;
\bullet
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y un grupo alquilo C_{1}-C_{6};
\bullet
R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}' se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
\bullet
R^{3} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{10}, alquenilo C_{2}-C_{10}, alquinilo C_{2}-C_{10}, arilo o heteroarilo, cicloalquilo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O, S, aril-alquilo(C_{1}-C_{10}) y heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{10});
\bullet
R^{4} se selecciona del grupo que consiste en H y -C(H)R^{5}R^{6};
\bullet
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{10}, alquenilo C_{2}-C_{10}, alquinilo C_{2}-C_{10}, arilo o heteroarilo, cicloalquilo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O, S, aril-alquilo(C_{1}-C_{10}) y heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{10});
\bullet
m es un número entero de 1 a 5, preferiblemente entre 1-3 y lo más preferiblemente 1;
\bullet
n es un número entero de 0 a 2, preferiblemente 0 ó 1; y
\bullet
p es un número entero de 1 a 10, preferiblemente 1 a 6;
con la condición de que el compuesto de acuerdo con la fórmula I no sea:
\quad
N-[[5-[[[3-[[4-[(3-aminopropil)amino]butil]amino]propil]amino]-sulfonil]-2-tienil]metil]-benzamida; ni
\quad
N-[[5-[[[3-[[4-[(3-aminopropil)amino]butil]amino]propil]amino]-sulfonil]-2-tienil]metil]-4-cloro]benzamida; ni
\quad
N,N'-[1,4-butanodiilbis(imino-3,1-propanodiiliminosulfonil-5,2-tiofenodiilmetilen)]bis[4-cloro]benzamida.
\vskip1.000000\baselineskip
En un segundo aspecto, la invención proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula I sin condición para el tratamiento de una enfermedad.
En un tercer aspecto, la invención proporciona un compuesto de fórmula I, sin condición, para la preparación de una composición farmacéutica.
En un cuarto aspecto, la invención proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula I sin condición para la modulación de la ruta de la JNK.
En un quinto aspecto, la invención proporciona un método de síntesis de un compuesto de acuerdo con la fórmula I con condición.
Descripción detallada de la invención
Los siguientes párrafos proporcionan definiciones de diversos restos y términos químicos, y están destinados a aplicarse uniformemente a lo largo de la memoria descriptiva y las reivindicaciones a no ser que una definición expresamente indicada de otro modo proporcione una definición diferente.
"Alquilo C_{1}-C_{6}" se refiere a grupos alquilo monovalentes ramificados o no ramificados que tienen 1 a 6 átomos de carbono. Esta expresión se ejemplifica por grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-hexilo y similares.
"Cicloalquilo C_{3}-C_{6}" se refiere a anillos carbocíclicos saturados o parcialmente insaturados que tienen 3 a 6 átomos de carbono. Ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclohexenilo y similares.
"Heterocicloalquilo C_{3}-C_{6}" se refiere a anillos saturados o parcialmente insaturados que tienen 3 a 5 átomos y que contienen al menos un heteroátomo seleccionado de N, S y O. Ejemplos incluyen pirrolidinilo, piperazinilo, morfolinilo y similares.
"Arilo" se refiere a grupos carbocíclicos aromáticos insaturados de 6 a 14 átomos de carbono que tienen un anillo sencillo (por ejemplo fenilo) o múltiples anillos condensados (por ejemplo naftilo). Ejemplos incluyen fenilo, naftilo, fenantrenilo y similares.
"Aril-alquilo(C_{1}-C_{6})" se refiere a grupos alquilo C_{1}-C_{6}, según se define anteriormente, que tienen un sustituyente arilo, incluyendo bencilo, fenetilo y similares.
"Heteroarilo" se refiere a un grupo heteroaromático monocíclico o a un grupo heteroaromático de anillos condensados bicíclico o tricíclico. Ejemplos particulares de grupos heteroaromáticos incluyen piridilo, pirrolilo, furilo, tienilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirazolilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, 1,3,4-triazinilo, 1,2,3-triazinilo, benzofurilo, [2,3-dihidro]benzofurilo, isobenzofurilo, benzotienilo, benzotriazolilo, isobenzotienilo, indolilo, isoindolilo, 3H-indolilo, bencimidazolilo, imidazo[1,2-a] piridilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinolizinilo, quinazolinilo, ftalazinilo, quinoxalinilo, cinolinilo, naftiridinilo, pirido[3,4-b]piridilo, pirido[3,2-b]piridilo, pirido[4,3-b]piridilo, quinolilo, isoquinolilo, tetrazolilo, 5,6,7,8-tetrahidroquinolilo, 5,6,7,8-tetrahidroisoquinolilo, purinilo, pteridinilo, carbazolilo, xantenilo o benzoquinolilo opcionalmente sustituidos.
"Heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})" se refiere a grupos alquilo C_{1}-C_{6} que tienen un sustituyente heteroarilo, incluyendo 2-furilmetilo, 2-tienilmetilo, 2-(1H-indol-3-il)etilo y similares.
"Alquenilo C_{2}-C_{6}" se refiere a grupos alquenilo que tienen preferiblemente 2 a 6 átomos de carbono y que tienen al menos 1 ó 2 sitios de insaturación alquenílica. Ejemplos incluyen etenilo (-CH=CH_{2}), n-2-propenilo (alilo, -CH_{2}CH=CH_{2}) y similares.
"Alquinilo" se refiere a grupos alquinilo que tienen de 2 a 6 átomos de carbono y que tienen al menos 1-2 sitios de insaturación alquinílica. Ejemplos incluyen etinilo (-C\equivCH), propargilo (-CH_{2}C\equivCH) y similares.
"Acilo" se refiere a un grupo -C(O)R donde R incluye "alquilo C_{1}-C_{6}", "arilo", "heteroarilo", "aril-alquilo(C_{1}-C_{6})" o "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})".
"Aciloxi" se refiere a un grupo -C(O)R donde R incluye "alquilo C_{1}-C_{6}", "arilo", "heteroarilo", "aril-alquilo(C_{1}-C_{6})" o "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})".
"Alcoxi" se refiere a un grupo -O-R, en el que R incluye "alquilo C_{1}-C_{6}", "arilo", "heteroarilo", "aril-alquilo(C_{1}-C_{6})" o "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})". Los grupos alcoxi preferidos incluyen, a modo de ejemplo, metoxi, etoxi, fenoxi y similares.
"Alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo -C(O)OR en el que R incluye H, "alquilo C_{1}-C_{6}" o "arilo" o "heteroarilo" o "aril-alquilo(C_{1}-C_{6})" o "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})".
"Aminocarbonilo" se refiere a un grupo -C(O)NRR' en el que cada R, R' es independientemente hidrógeno o "alquilo C_{1}-C_{6}" o "arilo" o "heteroarilo" o "aril-alquilo(C_{1}-C_{6})" o "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})".
"Acilamino" se refiere a un grupo -NR(CO)R' en el que cada R, R' es independientemente hidrógeno o "alquilo C_{1}-C_{6}" o "arilo" o "heteroarilo" o "aril-alquilo(C_{1}-C_{6})" o "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})".
"Halógeno" designa átomos de fluoro, cloro, bromo y yodo.
"Sulfonilo" se refiere a un grupo "-SO_{2}-R" en el que R se selecciona de H, "arilo", "heteroarilo", "alquilo C_{1}-C_{6}", "alquilo C_{1}-C_{6}" que puede estar sustituido con halógenos, por ejemplo un grupo -SO_{2}-CF_{3}, "aril-alquilo(C_{1}-C_{6})" o "heteroaril- alquilo(C_{1}-C_{6})".
"Sulfoxi" se refiere a un grupo "-S(O)-R" en el que R se selecciona de H, "alquilo C_{1}-C_{6}", "alquilo C_{1}-C_{6}" que puede estar sustituido con halógenos, por ejemplo un grupo -SO-CF_{3}, "arilo", "heteroarilo", "aril-(C_{1}-C_{6})" o "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})".
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"Tioalcoxi" se refiere a grupos -S-R en los que R incluye "alquilo C_{1}-C_{6}" o "arilo" o "heteroarilo" o "aril-alquilo(C_{1}-C_{6)}" o "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})". Ejemplos incluyen tiometoxi, tioetoxi y similares.
"Sustituido o sin sustituir": A no ser que esté restringido de otro modo por la definición del sustituyente individual, los grupos indicados anteriormente, como los grupos "alquilo", "alquenilo", "alquinilo", "arilo" y "heteroarilo", etc. pueden estar sustituidos opcionalmente con 1 a 5 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en "alquilo C_{1}-C_{6}", "aril-alquilo(C_{1}-C_{6})", "heteroaril-alquilo(C_{1}-C_{6})", "alquenilo C_{2}-C_{6}", "alquinilo C_{2}-C_{6}", grupos amino primarios, secundarios o terciarios o restos amonio cuaternario, "acilo", "aciloxi", "acilamino", "aminocarbonilo", "alcoxicarbonilo", "arilo", "heteroarilo", carboxilo, ciano, halógeno, hidroxi, mercapto, nitro, sulfoxi, sulfonilo, alcoxi, tioalcoxi, trihalometilo y similares. Alternativamente, dicha sustitución también podría comprender situaciones en las que sustituyentes adyacentes han experimentando cierre de anillo, principalmente cuando están implicados sustituyentes funcionales vecinos, formando así, por ejemplo, lactamas, lactonas, anhídridos cíclicos, pero también acetales, tioacetales, aminales formados por cierre de anillo, por ejemplo, en un esfuerzo por obtener un grupo protector.
"Sales o complejos farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales o complejos de los compuestos de fórmula I identificados más adelante que retienen la actividad biológica deseada. Ejemplos de tales sales incluyen, pero no se restringen a, sales por adición de ácidos formadas con ácidos inorgánicos (p. ej. ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico y similares) y sales formadas con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido pamoico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácido naftalenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico y ácido poligalacturónico. Dichos compuestos también puede administrarse como sales cuaternarias farmacéuticamente aceptables conocidas por un experto en la técnica, que incluyen específicamente las sales de amonio cuaternario de la fórmula -NR,R',R''^{+} Z^{-}, en la que R, R', R'' es independientemente hidrógeno, alquilo o bencilo, y Z es un ion conjugado, incluyendo cloruro, bromuro, yoduro, alcóxido, toluenosulfonato, metilsulfonato, sulfonato, fosfato o carboxilato (tal como benzoato, succinato, acetato, glicolato, maleato, malato, fumarato, citrato, tartrato, ascorbato, cinamoato, mandeloato y difenilacetato).
"Derivado farmacéuticamente activo" designa cualquier compuesto que, tras la administración al receptor, es capaz de proporcionar directa o indirectamente la actividad dada a conocer en la presente memoria.
"Exceso enantiómero" (ee) se refiere a los productos que se obtienen mediante una síntesis que comprende una etapa enantioselectiva, con lo que se obtiene un excedente de un enantiómero del orden de al menos 52% de ee. En ausencia de una síntesis enantiómera, se obtienen habitualmente productos racémicos que sin embargo también tienen la actividad indicada de la invención como inhibidores de JNKs.
La presente invención también incluye los isómeros geométricos, las formas ópticamente activas, los enantiómeros, los diastereisómeros de compuestos de acuerdo con la fórmula I, mezclas de estos, así como sus racematos y también sales farmacéuticamente aceptables.
Ar^{1} y Ar^{2} preferidos en compuestos de acuerdo con la fórmula I son aquellos que se seleccionan independientemente del grupo que consiste en fenilo, tienilo, furanilo, piridilo, alquilo C_{1}-C_{6} opcionalmente sustituido o no sustituido, preferiblemente trihalometilo, alcoxi C_{1}-C_{6} sustituido o no sustituido, alquenilo C_{2}-C_{6} sustituido o no sustituido, alquinilo C_{2}-C_{6} sustituido o no sustituido, amino, acilamino, aminocarbonilo, alcoxi(C_{1}-C_{6})-carbonilo, arilo, carboxilo, ciano, halo, hidroxi, nitro, sulfonilo, sulfoxi, aciloxi y tioalcoxi C_{1}-C_{6}. Lo más preferiblemente, Ar^{1} es un grupo tienilo o fenilo no sustituido o sustituido.
Una realización particularmente preferida de la presente invención es un derivado de sulfonamida de acuerdo con la fórmula I, en la que Ar^{1} es halogenofenilo, hidroxifenilo, alcoxifenilo, X es O, R^{1} es hidrógeno, m es 1, n es 0 ó 1, p es 1 ó 2, Ar^{2} es un grupo tienileno o fenileno, preferiblemente un grupo tienileno, y R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}' son hidrógeno, R^{3} es H, alquilo inferior o arilo.
Otro grupo preferido de compuestos de la presente invención incluye aquellos compuestos de fórmula I en la que Ar^{1} es halogenofenilo, hidroxifenilo, alcoxifenilo, X es O, R^{1} es hidrógeno, m es 1, n es 0, 1 ó 2, Ar^{2} es un grupo tienileno o fenileno, preferiblemente un grupo tienileno, y R^{3} es H, alquilo inferior o arilo.
En un grupo preferido adicional de compuestos de acuerdo con la fórmula I, Ar^{1} es 4-clorofenilo, X es O, R^{1} es hidrógeno, m es 1, n es 0, 1 ó 2, Ar^{2} es un grupo tienileno o fenileno, preferiblemente un grupo tienileno, y R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}' son hidrógeno, R^{3} es H, alquilo inferior o arilo y R^{4} es H o alquilo C_{1}-C_{10} o aril-alquilo(C_{1}-C_{10}), preferiblemente un grupo hexilo o bencilo.
Dichos grupos arilo o heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos por halógeno, hidroxi, nitro, sulfonilo (por ejemplo grupos trifluorometilsulfonilo), alquilo C_{1}-C_{6} o fluoroalquilo C_{1}-C_{6}.
Se cree que los compuestos de fórmula I con condición son nuevos y forman un aspecto de la invención.
Los compuestos de fórmula I sin condición pueden usarse para el tratamiento de una enfermedad.
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Específicamente, los compuestos de fórmula I son adecuados para el uso en el tratamiento de trastornos del sistema inmunitario y neuronal de mamíferos, particularmente de seres humanos.
Tales trastornos del sistema neuronal incluyen, por ejemplo, enfermedades neurodegenerativas, por ejemplo enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedades retinales, lesión de la médula espinal, esclerosis múltiple, trauma de cabeza, epilepsia y ataques, apoplejías cerebrales isquémicas y hemorrágicas.
Trastornos del sistema inmunitario incluyen, por ejemplo, asma, rechazo de trasplantes, procesos inflamatorios tales como enfermedad inflamatoria del intestino (IBD, por sus siglas en inglés), trastornos erosivos de cartílagos y huesos, artritis reumatoide, choque séptico.
Los compuestos de acuerdo con la fórmula I son adecuados para el uso en el tratamiento de cánceres, tales como cánceres mamarios, colorrectales, pancreáticos, prostáticos, testiculares, ováricos, pulmonares, hepáticos y renales.
En otra realización, los compuestos de acuerdo con la fórmula I pueden usarse para tratar enfermedades cardiovasculares, incluyendo aterosclerosis, restenosis, apoplejía, isquemia, por ejemplo isquemia cerebral e infarto de miocardio.
En otra realización, los compuestos de acuerdo con la fórmula I pueden usarse para tratar diversos estados isquémicos, incluyendo fallos cardíacos y renales, trastornos hepáticos y lesiones por reperfusión cerebral.
Preferiblemente, los compuestos de acuerdo con la fórmula I, solos o en la forma de una composición farmacéutica, son útiles para la modulación de la ruta de JNK, más específicamente para el tratamiento o la prevención de trastornos asociados con la expresión o la actividad de JNK, principalmente de JNK-2 y -3. Habitualmente, dicha modulación implica preferiblemente la inhibición de las rutas de JNK, principalmente de la JNK-2 y/o -3. Tal expresión o actividad anormal de JNK puede ponerse en marcha mediante numerosos estímulos (por ejemplo estrés, choque séptico, estrés oxidativo, citoquinas) y puede provocar una cascada de procesos, que conduce a, por ejemplo, apoptosis descontrolada, respuestas inflamatorias o procesos oncogénicos. Estos fenómenos están implicados habitualmente en diversos trastornos, incluyendo los trastornos y estados patológicos enumerados anteriormente. De ahí que los compuestos de acuerdo con la invención puedan usarse para el tratamiento de trastornos modulando la función o las rutas de señalización de JNK. La modulación de la función o las rutas de JNK puede implicar su activación, pero preferiblemente implica la regulación a la baja hasta la inhibición de las rutas de JNK, principalmente de JNK1 y/o -2 y/o JNK3. Los compuestos de la invención pueden emplearse solos o en combinación con agentes farmacéuticos adicionales, por ejemplo con un modulador de JNK adicional.
Cuando se emplean como productos farmacéuticos, los derivados de sulfonamida de la presente invención se administran típicamente en la forma de una composición farmacéutica. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula I y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable también están dentro del alcance de la presente invención. Un especialista en la técnica posee el conocimiento de una gran diversidad de estos portadores, diluyentes o excipientes adecuados para formular una composición farmacéutica.
Los compuestos de acuerdo con la fórmula I, junto con un adyuvante, portador, diluyente o excipiente empleado de manera convencional, pueden formularse como composiciones farmacéuticas y dosificaciones unitarias, y en tal forma pueden emplearse como sólidos, tales como comprimidos o cápsulas cargadas, o líquidos, tales como soluciones, suspensiones, emulsiones, elixires o cápsulas cargadas con los mismos, todos ellos para uso oral, o en forma de soluciones inyectables estériles para uso parenteral (incluyendo subcutáneo). Dichas composiciones farmacéuticas y formas de dosificación unitarias de las mismas pueden comprender ingredientes en proporciones convencionales, con o sin compuestos o principios activos adicionales, y dichas formas de dosificación unitaria pueden contener cualquier cantidad
eficaz adecuada del ingrediente activo compatible con el intervalo de dosificación diario que se pretende emplear.
Cuando se emplean como productos farmacéuticos, los derivados de sulfonamida de esta invención se administran típicamente en forma de una composición farmacéutica. Dichas composiciones pueden prepararse de manera bien conocida en la técnica farmacéutica y comprenden al menos un compuesto activo. Generalmente, los compuestos de esta invención se administran en una cantidad farmacéuticamente eficaz. La cantidad del compuesto administrada realmente será determinada típicamente por un médico a la vista de las circunstancias relevantes, incluyendo la afección a tratar, la vía de administración elegida, el compuesto real administrado, la edad, peso y respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente y similares.
Las composiciones farmacéuticas de estas invenciones pueden administrarse por una variedad de vías, incluyendo oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Dependiendo de la vía de administración deseada, los compuestos se formulan preferiblemente en forma de composiciones inyectables u orales. Las composiciones para administración oral pueden tomar la forma de disoluciones o suspensiones líquidas a granel o polvos a granel. Sin embargo, más habitualmente, las composiciones se presentan en formas de dosificación unitarias para facilitar una dosificación exacta. El término "formas de dosificación unitarias" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un excipiente farmacéutico adecuado. Formas de dosificación unitaria típicas incluyen ampollas o jeringuillas precargadas premedidas de las composiciones líquidas o píldoras, comprimidos, cápsulas o similares en el caso de composiciones sólidas. En tales composiciones, el compuesto de sulfonamida es normalmente un componente minoritario (de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50% en peso o preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 40% en peso), siendo el resto diversos vehículos o portadores y adyuvantes de procesamiento para formar la forma de dosificación deseada.
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Las formas líquidas adecuadas para administración oral pueden incluir un vehículo acuoso o no acuoso con tampones, agentes de suspensión y dispensación, colorantes, aromas y similares. Las formas sólidas pueden incluir, por ejemplo, cualquiera de los siguientes ingredientes o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidón o lactosa, un agente disgregante tal como ácido algínico, Primogel o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato de magnesio; un deslizante tal como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente aromatizante tal como menta piperita, salicilato de metilo o aroma de naranja.
Las composiciones inyectables están basadas típicamente en solución salina estéril inyectable, solución salina tamponada con fosfato u otros vehículos inyectables conocidos en la técnica. Como se ha mencionado anteriormente, el compuesto de sulfonamida de fórmula I en tales composiciones es típicamente un componente minoritario, que varía frecuentemente entre 0,05 y 10% en peso, siendo el resto es el portador inyectable y similares.
Los componentes descritos anteriormente para composiciones administrables por vía oral o inyectables son meramente representativos. Materiales así como técnicas de procesamiento y similares adicionales se indican en la Parte 8 de (29).
Los compuestos de esta invención pueden administrarse también en formas de liberación sostenida o a partir de sistemas de suministro de fármacos de liberación sostenida. Una descripción de materiales de liberación sostenida representativos también puede encontrarse en los materiales incorporados en (29).
Otro objeto adicional de la presente invención es un procedimiento para preparar los derivados de sulfonamida de acuerdo con la fórmula I. Las sulfonamidas de esta invención pueden prepararse a partir de materiales de partida fácilmente disponibles usando los siguientes métodos y procedimientos generales. Se apreciará que, aunque se den las condiciones experimentales (es decir, temperaturas de reacción, tiempo, moles de reactivos, disolventes, etc.) típicas o preferidas, también pueden usarse otras condiciones experimentales, a menos que se indique otra cosa. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los reactivos o disolventes particulares usados, aunque estas condiciones pueden determinarse por un especialista en la técnica mediante procedimientos de optimización convencionales.
Síntesis de compuestos de la invención
Los nuevos derivados de sulfonamida pueden prepararse a partir de materiales de partida fácilmente disponibles. Se describirán tres ejemplos de rutas sintéticas para las sulfonamidas de fórmula I.
Las siguientes abreviaturas se refieren respectivamente las siguientes definiciones:
AMEBA:
(4-formil-3-metoxifenoximetil)poliestireno
Boc:
Terc-butiloxicarbonilo
DCE:
Dicloroetano
DCM:
Diclorometano
DMA:
Dimetilacetamida
DMF:
Dimetilformamida
DMSO:
Dimetilsulfóxido
EDTA:
Ácido etilendiaminotetraacético
Fmoc:
Fluorenilmetiloxicarbonilo
NMP:
N-metilpirrolidona
TFA:
Ácido trifluoroacético
THF:
Tetrahidrofurano
TLC:
Cromatografía en capa fina
TMOF:
Ortoformiato de trimetilo
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Protocolo I
Una ruta preferida comienza con compuestos de fórmula II en la que R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}', R^{2}, R^{3}, n y p son como se definen para la fórmula I y P es un grupo protector de amina.
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Las diaminas monoprotegidas de fórmula II bien son compuestos conocidos, bien están disponibles comercialmente o bien pueden prepararse a partir de compuestos conocidos mediante procedimientos convencionales. Ejemplos típicos de compuestos de fórmula II comprenden etilendiamina, propilendiamina, (n- o t-)-butilendiamina, 1-aminopiperidina, aminometilpiperidina.
En la fórmula II, grupos protectores de amina P típicos son los siguientes restos: carbobenzoxi (Cbz), fluorenilmetiloxicarbonilo (fmoc), aliloxicarbonilo, (2S)-2-([[1-(3,5-dimetoxifenil)-1-metiletoxi]-carbonilo], bencilo, 1,1,1-trifenilmetilo, lo más preferiblemente terc-butiloxicarbonilo (Boc). Otros grupos protectores de amina serán conocidos por los químicos sintéticos (30).
Generalmente, tales diaminas monoprotegidas se hacen reaccionar con cloruros de sulfonilo de fórmula III en presencia de una base como eliminador de acuerdo con el esquema I para conducir a sulfonamidas que tienen la estructura presentada en la fórmula IV.
Esquema I
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La reacción anterior puede efectuarse en presencia de una base no nucleófila tal como trietilamina, diisopropiletilamina, carbonato potásico y similares, en un disolvente aprótico tal como N,N-dimetilformamida, dimetilsulfóxido, N-metilpirrolidona, acetonitrilo, cloroformo, dicloroetano o diclorometano, a una temperatura de aproximadamente 0 a aproximadamente 100ºC, preferiblemente 20-60ºC.
Los cloruros de sulfonilo de fórmula III usados para la preparación de las sulfonamidas de fórmula IV pueden prepararse usando métodos de sulfonilación convencionales usando preferiblemente ácido clorosulfónico como reactivo de sulfonación. Típicamente, la reacción de sulfonilación se realiza tratando la carboxamida de fórmula V con aproximadamente 5 a aproximadamente 10 equivalentes molares del reactivo de sulfonación en un disolvente inerte, tal como diclorometano, a una temperatura que varía de aproximadamente -70ºC a aproximadamente 50ºC.
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Preferiblemente, la adición de ácido clorosulfónico tiene lugar a -70ºC y conduce a la formación del ácido sulfónico intermedio. Incrementar la temperatura hasta 20ºC permite la formación del cloruro de sulfonilo de fórmula III. En los casos en los que se obtiene una mezcla de compuestos de sulfonato, el cloruro de sulfonilo de fórmula III puede aislarse mediante técnicas apropiadas tales como cromatografía de desarrollo rápido o cristalización.
Las carboxamidas de fórmula V (X=O) pueden prepararse mediante métodos conocidos por un operario experto, por ejemplo mediante la reacción de una amina (por ejemplo tien-2-ilmetilamina, tien-2-iletilamina, furan-2-ilmetilamina o piridil-2-ilmetilamina) con un haluro de aroílo (por ejemplo cloruro de 4-clorobenzoílo, cloruro de piridinilbenzoílo). Las tiocarboxamidas de fórmula V (X=S) pueden obtenerse mediante métodos conocidos por un operario experto, por ejemplo mediante el tratamiento de una carboxamida de fórmula V con reactivo de Lawesson (31).
Los compuestos de sulfonamida de fórmula IV también puede obtenerse partiendo de diaminas monoprotegidas de fórmula II, usando metodologías en fase sólida, por ejemplo usando reactivos unidos a polímeros, tales como trietilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, piperidina unidas a polímeros. Típicamente, el cloruro de sulfonilo de fórmula III se usa en de 1 a 5 equivalentes en exceso de la diamina monoprotegida correspondiente de fórmula II. Finalmente, el exceso restante de cloruro de sulfonilo se atrapa usando aminas primarias unidas a polímero tales como aminometilpoliestireno o trisamina. La sulfonamida pura se obtiene al filtrar las resinas.
La retirada subsiguiente del grupo protector P, en la fórmula IV, usando métodos de desprotección conocidos en la técnica (30), conduce a las aminas primarias o secundarias de fórmula VI o a la sal amónica correspondiente, dependiendo del protocolo de desprotección aplicado.
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La sal amónica de la amina de fórmula VI puede neutralizarse en presencia de una base tal como trietilamina, diisopropiletilamina o N-metilmorfolina. La alquilación del resto amínico de fórmula VI hasta una amina de fórmula I se alcanza a través de la aminación reductiva de un aldehído o una cetona: la amina de fórmula VI se hace reaccionar con el aldehído o la cetona deseados de fórmula VII en la que R^{5} y R^{6} son como se definen para la fórmula I.
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Ejemplos típicos de cetonas y aldehídos de fórmula VII son aldehídos/cetonas C_{1}-C_{10} y cetonas del tipo Ph-C(O)-alquilo(C_{1}-C_{6}).
Dependiendo de si la amina de fórmula VI es una amina primaria o secundaria, se preforma una imina o un ion iminio correspondiente que puede aislarse o reducirse in situ. En el caso de aminas primarias como material de partida, la imina intermedia puede aislarse para evitar una alquilación adicional. El producto intermedio de imina se reduce con un agente reductor adecuado tal como borohidruro sódico, cianoborohidruro sódico, hidrógeno en presencia de Pd. Un agente reductor preferido es el triacetoxiborohidruro sódico. La reducción de iminas está favorecida cuando la imina está protonada, de modo que el pH puede ajustarse durante la reducción, por ejemplo mediante adición de ácido acético. La aminación reductiva se analiza en (32).
Las sulfonamidas de fórmula I también pueden obtenerse a partir de aminas de fórmula VI o sus sales amónicas usando reactivos unidos a polímeros. Puede usarse base unida a polímero, tal como trietilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, piperidina unidas a polímero, para neutralizar la sal amónica de la amina VI. Para la aminación reductiva, el aldehído o la cetona de fórmula VII apropiado puede usarse en 0,9 equivalentes. Agentes reductores unidos a polímeros, tales como borohidruro sódico, cianoborohidruro sódico, triacetoxiborohidruro sódico unidos a polímero, se usan para reducir la imina intermedia hasta una amina de fórmula I. La amina de fórmula VI en exceso puede atraparse usando resina de AMEBA-aldehído. Las sulfonamidas de fórmula I pueden obtenerse a continuación al filtrar las resinas.
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Protocolo II
Otra ruta preferida comienza con compuestos de fórmula VIII en la que R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}', R^{2}, R^{3}, n y p son como se definen para la fórmula I, y P es un grupo protector de amina.
Las diaminas monoprotegidas de fórmula VIII bien son compuestos conocidos, bien están disponibles comercialmente o bien pueden prepararse a partir de compuestos conocidos mediante procedimientos convencionales.
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En la formula VIII, los grupos protectores de amina, P, típicos pueden seleccionarse de los siguientes restos: carbobenzoxi (Cbz), fluorenilmetiloxicarbonilo (fmoc), aliloxicarbonilo, (2S)-2-([[1-(3,5-dimetoxifenil)-1-metiletoxi]-carbonilo], bencilo, 1,1,1-trifenilmetilo, lo más preferiblemente terc-butiloxicarbonilo (Boc). Otros grupos protectores de amina serán conocidos por los químicos sintéticos (30).
La alquilación de la amina de fórmula VIII se alcanza a través de la reacción con un aldehído o una cetona de fórmula VII a través de aminación reductiva, conduciendo a una amina de fórmula IX como sigue:
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Esquema II
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La amina de fórmula VIII se hace reaccionar con el aldehído o la cetona de fórmula VII apropiados, si es necesario en presencia de una base no nucleófila tal como trietilamina, diisopropiletilamina o N-metilmorfolina, para asegurar que algo de la amina está desprotonado, en un disolvente polar tal como DCE, THF, TMOF, DMF, DMA, DCM, metanol, NMP. El derivado de imina intermedio puede reducirse in situ o aislarse al evaporar el disolvente, y reducirse en una reacción separada. En el caso de aminas primarias como material de partida, la imina intermedia puede aislarse para evitar una alquilación adicional. La reducción de iminas está favorecida cuando la imina está protonada, de modo que el pH puede ajustarse durante la reducción, por ejemplo mediante adición de ácido acético. La reducción del derivado de imina se realiza con un agente reductor adecuado tal como borohidruro sódico, cianoborohidruro sódico, hidrógeno en presencia de Pd, lo más preferiblemente triacetoxiborohidruro sódico. Disolvente preferidos son DCE, THF, TMOF, DMF, DMA, DCM, metanol, NMP.
Las aminas de fórmula IX también pueden obtenerse a través de síntesis en fase sólida usando reactivos unidos a polímeros. Agentes reductores unidos a polímeros, tales como borohidruro sódico, cianoborohidruro sódico, triacetoxiborohidruro sódico unidos a polímero, se usan para reducir la imina hasta la amina correspondiente de fórmula IX. El exceso de amina VIII puede retirarse usando resina de AMEBA-aldehído. Las aminas de fórmula VIII pueden obtenerse a continuación al filtrar las resinas.
La retirada subsiguiente del grupo protector P en la fórmula IX, usando métodos de desprotección conocidos para un operario experto, según se menciona anteriormente, conduce a la amina X correspondiente.
17
La amina X puede obtenerse como la sal amónica correspondiente, dependiendo de la técnica de desprotección aplicada usada.
Finalmente, tales aminas o sales amónicas se hacen reaccionar con cloruros de sulfonilo de fórmula III en presencia de una base como eliminador para obtener las sulfonamidas mostradas en la fórmula I.
La reacción se efectúa generalmente en presencia de una base no nucleófila tal como trietilamina, diisopropiletilamina, carbonato potásico y similares, en un disolvente aprótico tal como N,N-dimetilformamida, dimetilsulfóxido, N-metilpirrolidona, acetonitrilo, cloroformo, dicloroetano o diclorometano, a una temperatura de aproximadamente 0 a aproximadamente 100ºC, preferiblemente 20-60ºC. En el caso de sales amónicas de fórmula X, la reacción debe realizarse en exceso de base eliminadora.
La sulfonamida I también puede sintetizarse a través de una ruta de síntesis en fase sólida usando reactivos unidos a polímeros, tales como trietilamina, diisopropiletilamina, metilmorfolina, piperidina y carbonato unidos a polímeros. Típicamente, el cloruro de sulfonilo III se usa en 1 a 1,5 equivalentes en exceso de la amina VIII correspondiente. Finalmente, el exceso restante de cloruro de sulfonilo se atrapa usando aminas primarias unidas a polímero tales como aminometilpoliestireno o trisamina. La sulfonamida I pura se obtiene al filtrar las resinas.
En el caso de compuestos de fórmula I en la que R^{4} es H, el modo de síntesis podría seguir el protocolo I y el procedimiento se detendría una vez que se formara el compuesto VI. Los compuestos de fórmula VI representan entonces un subgrupo de los compuestos de fórmula I.
Para la formación de compuestos de fórmula I en la que R^{3} es un resto aromático, debe usarse el Protocolo III.
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Protocolo III
Un cloruro de sulfonilo de fórmula III se hace reaccionar con un aminoalcohol de fórmula XI para obtener un alcohol de fórmula XII. La reacción se efectúa en un disolvente polar tal como DMF o THF. Cualquier exceso de amina se extrae en un fase acuosa ácida.
Después de la evaporación del disolvente, el alcohol de fórmula XII se somete a oxidación con un agente oxidante, por ejemplo N-óxido de piridina, para dar un aldehído de fórmula XIII.
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El aldehído de fórmula XIII se somete a una aminación reductiva tal como ya se ha descrito en el Protocolo I o II. En este caso, un aldehído de fórmula XIII se hace reaccionar con una amina aromática de fórmula XIV en un disolvente polar tal como DCE, THF, TMOF, DMF, DMA, DCM, metanol, NMP, para conducir a una amina de fórmula I. La imina intermedia puede reducirse in situ o aislarse al evaporar el disolvente, y reducirse en una reacción separada. La formación de la imina puede favorecerse ajustando el pH hasta de suavemente ácido a neutro, por ejemplo mediante la adición de ácido acético o, si es necesario, una pequeña cantidad de base. La reducción del derivado de imina se realiza con un agente reductor adecuado tal como borohidruro sódico, cianoborohidruro sódico, hidrógeno en presencia de Pd, lo más preferiblemente triacetoxiborohidruro sódico. Disolventes preferidos son DCE, THF, TMOF, DMF, DMA, DCM, metanol, NMP.
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Esquema III
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Si los métodos sintéticos generales indicados anteriormente no son aplicables para obtener ciertos compuestos de fórmula I, deben usarse métodos de preparación adecuados conocidos por una persona experta en la técnica.
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Ejemplos
La invención se ilustrará por medio de los siguientes ejemplos que no pretenden limitar el alcance de la invención.
Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse de acuerdo con las diferentes rutas sintéticas proporcionadas anteriormente. Los siguientes ejemplos ilustran métodos preferidos para sintetizar los compuestos de acuerdo con la fórmula I y determinar sus actividades.
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Ejemplo I Cloruro de 5-({[1-(4-clorofenil)-metanoil]-amino}-metil)-tiofeno-2-sulfonilo (1b) (compuesto de fórmula III) a) 4-Cloro-N-tiofen-2-ilmetilbenzamida (1a)
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Una solución de cloruro de 4-clorobenzoílo (0,114 mol) en 50 ml de CH_{2}Cl_{2} seco se añadió durante 30 min a una solución agitada de 2-aminometiltiofeno (0,137 mol) e ^{i}Pr_{2}NEt (0,25 mol) en CH_{2}Cl_{2} (200 ml) a 0ºC. Se formó un sólido blanco y la reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se diluyó con 200 ml de CH_{2}Cl_{2}, se lavó dos veces con HCl acuoso (0,1 N) y se secó sobre MgSO_{4}. La evaporación del disolvente proporcionaba 28 g (98%) de la benzamida del epígrafe (1a) como un sólido blanco: p.f. 153-54ºC, ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,9 (d, J = 8,67 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,67 Hz, 2H), 7,44 (dd, J = 3,77, 1,13 Hz,1H), 7,22 (d, J = 5,27 Hz,1H), 7,16 (dd, J = 3,39, 5,27 Hz, 1H), 6,62 (d an, 1H), 4,98 (d, J = 5,65 Hz, 2H).
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b) Cloruro de 5-{[1-(4-clorofenil)-metanoil]-amino}-metil)-tiofeno-2-sulfonilo (1b)
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Ácido clorosulfónico (20,1 ml, 198 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (80 ml) se añadió gota a gota a una solución del compuesto (la) anterior (10 g, 40 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (500 ml) a -80ºC. Se dejó que la mezcla alcanzara temperatura ambiente en 5 h. La mezcla de reacción se vertió sobre hielo y se extrajo rápidamente con CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y el disolvente se evaporó hasta sequedad, lo que daba 8,8 g (63%) del cloruro de sulfonilo (lb) deseado; pf 133-35ºC, ^{1}H NMR (DMSO-d6) \delta 9,21 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,67 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 8,67 Hz,2H), 6,91 (d, J = 3,39 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 3,39 Hz,1H), 4,53 (d, J = 3,77 Hz, 2H).
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Ejemplo II 4-Cloro-N-{5-[1-(4-trifluorometilbencil)-piperidin-3-ilsulfamoil]tiofen-2-ilmetil}-benzamida (2) (No forma parte de la invención)
La síntesis del compuesto (2) anterior es una síntesis en 3 etapas (véase el esquema I).
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Protocolo I
Etapa 1
N-sulfonilación (compuesto de fórmula IV)
La diamina monoprotegida (+/-)-3-amino-l-N-Boc-piperidina (compuesto de fórmula II) (0,4g, 2 mmol, 1 eq), cloruro de 5-(4-clorobenzamidometil)tiofeno-2-sulfonilo (1b) (compuesto de fórmula III) (0,99 g, 2,4 mmol, 1,2 eq) y resina de piperidina (2 g, 1,5 eq, carga de 1,5 mmol/g) se someten a turbulencia en THF (50 ml) en un agitador orbital durante la noche. Se añade aminometilpoliestireno (1,82 g, 1 eq, carga de 1,1 mmol/g) al matraz y el contenido se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Las resinas se filtran y se lavan con 50 ml adicionales de THF. Los filtrados se combinan y el disolvente se evapora bajo presión reducida para dar cuantitativamente la sulfonamida correspondiente (fórmula IV). No se requiere purificación adicional en esta fase.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida procedente de la Etapa 1 se carga en un matraz de fondo redondo y se disuelve en TFA al 50%/DCM (50 ml). El matraz se somete a turbulencia en un agitador orbital hasta que se confirma la terminación por TLC.
El disolvente se evapora bajo presión reducida para dar sal amónica de TFA.
La sal disuelta en metanol (50 ml) y resina de carbonato (2,67 g, 2 eq, carga de 1,5 mmol/g) se añaden y el contenido se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
La resina se filtra y se lava con 50 ml adicionales de metanol. Los filtrados se combinan y el disolvente se evapora bajo presión reducida para dar cuantitativamente la amina libre. No se requiere purificación en esta fase.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
Un matraz de fondo redondo se carga con la amina libre procedente de la Etapa 2 (0,41 g, 1 mmol, 1 eq), el aldehído 4-(trifluorometil)-benzaldehído (0,16 g, 0,9 mmol, 0,9 eq) y ácido acético glacial (60 \mul, 1 mmol, 1 eq). Se añade metanol (30 ml) y el matraz se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Se añade resina de borohidruro (0,67 g, 2 eq, carga de 2,5 mmol/g) al matraz y el contenido se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Se añade resina de AMEBA (aldehído)(0,46 g, 0.5 eq, carga de 0,9 mmol/g) al matraz y el contenido se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Las resinas se separan por filtración y se lavan con 30 ml adicionales de metanol y los filtrados se combinan y el disolvente se evapora bajo presión reducida para dar el producto en bruto.
El producto en bruto se purifica mediante HPLC preparativa usando acetonitrilo y agua como eluyentes para obtener la 4-cloro-N-{5-[1-(4-trifluorometilbencil)-piperidin-3-ilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (2) pura.
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Ejemplo III 4-Cloro-N-{[5-{2,2-dimetil-3-(4-trifluorometil-bencilamino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (3)
La síntesis del compuesto (3) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Etapa 1
N-sulfonilación (compuesto de fórmula IV)
En este caso, la diamina monoprotegida usada es la 1-Boc-amino-2,2-dimetil-1,3-propanodiamina.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida obtenida a través de la etapa 1 anterior se desprotege de N-Boc para dar la amina libre correspondiente.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
La amina libre obtenida a través de la etapa 2 anterior se hace reaccionar en este caso con 4-(trifluorometil)-benzaldehído. El producto final después de la purificación es 4-cloro-N-{5-[2,2-dimetil-3-(4-trifluorometilbencilamino)-propil-sulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (3).
\newpage
Ejemplo IV 4-Cloro-N-(5-{3-[metil-(4-trifluorometil-bencil)-amino]-propilsulfamoil}-tiofen-2-ilmetil)-benzamida (4)
La síntesis del compuesto (4) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Etapa 1
N-sulfonilación (compuesto de fórmula IV)
En este caso, la diamina monoprotegida es el éster terc-butílico de ácido N-(3-aminopropil)-metilcarbámico.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida obtenida a través de la etapa 1 anterior se desprotege de N-Boc para dar la amina libre correspondiente.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
La amina libre obtenida a través de la etapa 2 anterior se hace reaccionar en este caso con 4-(trifluorometil)-benzaldehído. El producto final después de la purificación es 4-cloro-N-({3-[metil-(4-trifluorometilbencil)-amino]-propil-sulfamoil}-tiofen-2-ilmetil)-benzamida (4).
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Ejemplo V 4-Cloro-N-{5-[(hexilmetilamino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (5)
La síntesis del compuesto (5) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Etapa 1
N-sulfonilación (compuesto de fórmula IV)
En este caso, la monoBoc-diamina es el éster terc-butílico de ácido N-(3-aminopropil)-N-metilcarbámico.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida obtenida a través de la etapa 1 anterior se desprotege de N-Boc para dar la amina libre correspondiente.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
La amina libre obtenida a través de la etapa 2 anterior se hace reaccionar en este caso con 1-hexanal. El producto final después de la purificación es 4-cloro-N-({5-[3-(hexilmetilamino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (5).
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Ejemplo VI 4-Cloro-N-{5-[2-(4-trifluorometilbencil-amino)-ciclohexilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (6): (No forma parte de la invención)
La síntesis del compuesto (6) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Etapa 1
N-sulfonilación (compuesto de fórmula IV)
En este caso, la diamina monoprotegida es el 1-Boc-amino-2-aminociclohexano.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida obtenida a través de la etapa 1 anterior se desprotege de N-Boc para dar la amina libre correspondiente.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
La amina libre obtenida a través de la etapa 2 anterior se hace reaccionar en este caso con 4-(trifluorometil)-benzaldehído. El producto final después de la purificación es la 4-cloro-N-{5-[2-(4-trifluorometilbencilamino)-ciclohexilsulfa-moil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (6).
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Ejemplo VII 4-Cloro-N-5-(2-hexilaminoetilsulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]-benzamida (7)
La síntesis del compuesto (7) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Etapa 1
Sulfonilación (compuesto de fórmula IV)
En este caso, la diamina monoprotegida es la 1-Boc-aminoetilendiamina.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida obtenida a través de la etapa 1 anterior se desprotege de N-Boc para dar la amina libre correspondiente.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
La amina libre obtenida a través de la etapa 2 anterior se hace reaccionar en este caso con 1-hexanal. El producto final después de la purificación es 4-cloro-N-[5-(2-hexilamino-etilsulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]-benzamida (7).
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Ejemplo VIII 4-Cloro-N-{5-[1-(4-trifluorometilbencil)-piperidin-4-ilsulfamoil]tiofen-2-ilmetil}-benzamida (8): (No forma parte de la invención)
La síntesis del compuesto (8) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Etapa 1
Formación de sulfonamida (compuesto de fórmula IV)
En este caso, la diamina monoprotegida es la 4-amino-1-Boc-piperidina.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida obtenida a través de la etapa 1 anterior se desprotege de N-Boc para dar la amina libre correspondiente.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
La amina libre obtenida a través de la etapa 2 anterior se hace reaccionar en este caso con 4-(trifluorometil)-benzaldehído. El producto final después de la purificación es 4-cloro-N-{5-[1-(4-trifluorometilbencil)-piperidin-4-ilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (8).
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Ejemplo IX 4-Cloro-N-[5-(3-hexilamino-2,2-dimetilpropil-sulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]-benzamida (9)
La síntesis del compuesto (9) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Etapa 1
Sulfonilación (compuesto de fórmula IV)
En este caso, la diamina monoprotegida usada es la 1-Boc-amino-2,2-dimetil-1,3-propanodiamina.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida obtenida a través de la etapa 1 anterior se desprotege de N-Boc para dar la amina libre correspondiente.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
La amina libre obtenida a través de la etapa 2 anterior se hace reaccionar en este caso con 1-hexanal. El producto final después de la purificación es 4-cloro-N-[5-(3-hexilamino-2,2-dimetilpropilsulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]-benzamida (9).
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Ejemplo X 4-Cloro-N-{{5-[3-(4-trifluorometilbencilamino)-bencilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (10): (No forma parte de la invención)
La síntesis del compuesto (10) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Etapa 1
Sulfonilación (compuesto de fórmula IV)
En este caso, la diamina monoprotegida usada es 3-(aminometil)-1-N-Boc-anilina.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula VI)
La sulfonamida obtenida a través de la etapa 1 anterior se desprotege de N-Boc para dar la amina libre correspondiente.
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
La amina libre obtenida a través de la etapa 2 anterior se hace reaccionar en este caso con 4-(trifluorometil)-benzaldehído. El producto final después de la purificación es 4-cloro-N-{5-[3-(4-trifluorometil-bencilamino)-bencilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (10).
Los siguientes compuestos se prepararon de un modo paralelo de acuerdo con el procedimiento genérico (Protocolo I) descrito anteriormente.
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La siguiente tabla proporciona datos de HPLC y datos de espectroscopía de masas de los ejemplos mencio-
nados. ^{1}, ^{2}.
30
31 
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Ejemplo XI 4-Cloro-N-5-[3-(4-trifluorometil-bencilamino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (11)
La síntesis del compuesto (11) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo I):
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Protocolo II
Etapa 1
Aminación reductiva (compuesto de fórmula IX)
Un matraz de fondo redondo se carga con la diamina monoprotegida (compuesto de fórmula VIII), éster terc-butílico de ácido N-(3-aminopropil)-N-metilcarbámico, (1 mmol, 1 eq), un aldehído de fórmula VII, 4-(trifluorometil)-benzaldehído (0,9 mmol, 0,9 eq) y ácido acético glacial (60 \mul, 1 mmol, 1 eq). Se añade metanol (30 ml) y el matraz se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Se añade resina de borohidruro (0,67 g, 2 eq, carga de 2,5 mmol/g) al matraz y el contenido se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Se añade resina de AMEBA (aldehído)(0,46 g, 0,5 eq, carga de 0,9 mmol/g) al matraz y el contenido se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Las resinas se filtran y se lavan con 30 ml adicionales de metanol, los filtrados se combinan y el disolvente se evapora bajo presión reducida para dar el producto. La amina alquilada 3-Boc-aminometilpiperidina (compuesto de fórmula IX) resultante se usa sin purificación para otras reacciones.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula X)
La monoalquildiamina monoprotegida obtenida en la Etapa 1 se carga en un matraz de fondo redondo de 100 ml y se disuelve en TFA al 50%/DCM (50 ml). El matraz se somete a turbulencia en un agitador orbital hasta que la reacción se completa según se verifica mediante TLC.
El disolvente se evapora bajo presión reducida para dar la sal amónica de TFA.
La sal se disuelve en metanol (50 ml), se añade resina de carbonato (2,67 g, 2 eq, carga de 1,5 mmol/g) al matraz y el contenido se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
La resina se filtra y se lava con 50 ml adicionales de metanol. Los filtrados combinados se evaporan bajo presión reducida para dar la monoalquildiamina (fórmula X) libre. No se requiere purificación en esta fase.
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Etapa 3
N-sulfonilación (compuesto de fórmula I)
Un matraz de fondo redondo se carga con la monoalquildiamina obtenida de la Etapa 2 (0,25 g, mmol, 1 eq), cloruro de 5-(4-clorobenzamidometil)tiofeno-2-sulfonilo, (1b) (0,42 g, 1,2 mmol, 1,2 eq) y resina de piperidina (1 g, 1,5 eq, carga de 1,5 mmol/g) en THF (50ml). El matraz se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Se añade aminometilpoliestireno (0,91 g, 1 eq, carga de 1,1 mmol/g) al matraz y el contenido se somete a turbulencia en un agitador orbital durante la noche.
Las resinas se separan por filtración y se lavan con 50 ml adicionales de THF. Los filtrados se combinan y el disolvente se evapora bajo presión reducida para dar producto en bruto. El producto en bruto se purifica mediante HPLC preparativa usando acetonitrilo y agua como eluyentes, conduciendo al compuesto (11), 4-cloro-N-{5-[3-(4-trifluorometil-bencilamino)-propilsul-famoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida.
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Ejemplo XII 4-Cloro-N-(5-{[1-(4-trifluorometil-bencil)-piperidin-3-ilmetil]-sulfamoil}-tiofen-2-ilmetil)-benzamida (12): (No forma parte de la invención)
La síntesis del compuesto (12) anterior es una síntesis en 3 etapas y consiste en el protocolo detallado anteriormente (véase el esquema II):
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Etapa 1
Aminación reductiva (compuesto de fórmula IX)
La diamina monoprotegida usada es 3-Boc-aminometilpiperidina y el aldehído es 4-(trifluorometil)-benzaldehído.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula X)
La monoalquildiamina monoprotegida obtenida en la Etapa 1 se desprotege para obtener la correspondiente amina libre.
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Etapa 3
N-sulfonilación (compuesto de fórmula I)
La amina libre procedente de la etapa 2 se hace reaccionar con el compuesto (1b) para dar el compuesto (12), 4-cloro-N-(5-{[1-(4-trifluorometil-bencil)-piperidin-3-ilmetil]-sulfamoil-tiofen-2-ilmetil)-benzamida.
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Ejemplo XIII 4-Cloro-N-(5-{metil-[3-(4-trifluorometil-bencilamino)-propilsulfamoil}-tiofen-2-ilmetil)-benzamida (13)
La síntesis del compuesto (12) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo II):
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Etapa 1
Aminación reductiva (compuesto de fórmula IX)
La diamina monoprotegida usada es 1-Boc-amino-1,3-propanodiamina y el aldehído es 4-(trifluorometil)-benzaldehído.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula X)
La monoalquildiamina monoprotegida obtenida en la Etapa 1 se desprotege para obtener la correspondiente amina libre.
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Etapa 3
N-sulfonilación (compuesto de fórmula I)
La amina libre procedente de la etapa 2 se hace reaccionar con el compuesto (lb) para dar 4-cloro-N-({metil-[3-(4-trifluorometil-bencilamino)-propil]-sulfamoil}-tiofen-2-ilmetil)-benzamida (13).
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Ejemplo XIV 4-cloro-N-5-[3-hexilamino-propil)-metil-sulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (14)
La síntesis del compuesto (14) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo II):
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Etapa 1
Aminación reductiva (compuesto de fórmula IX)
La diamina monoprotegida usada es éster terc-butílico de ácido N-(3-aminopropil)-N-metilcarbámico y el aldehído es 1-hexanal.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula X)
La monoalquildiamina monoprotegida obtenida en la Etapa 1 se desprotege para obtener la correspondiente amina libre.
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Etapa 3
N-sulfonilación (compuesto de fórmula I)
La amina libre resultante procedente de la etapa 2 se hace reaccionar con el compuesto (1b) para dar cloro-N-{5-[(3-hexilaminopropil)-metilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (14).
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Ejemplo XV 4-Cloro-N-(5-{[1-(4-trifluorometilbencil)-pirrolidin-2-ilmetil]-sulfamoil}-tiofen-2-ilmetil)-benzamida (15): (No forma parte de la invención)
La síntesis del compuesto (15) anterior es una síntesis en 3 etapas y sigue el protocolo detallado anteriormente (Protocolo II):
36 
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Etapa 1
Aminación reductiva (compuesto de fórmula IX)
La diamina monoprotegida usada es 2-(N-terc-butoxicarbonilaminometil)-pirrolidina y el aldehído es 4-(trifluoro-
metil)-benzaldehído.
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Etapa 2
Retirada de la protección con N-Boc (compuesto de fórmula X)
La monoalquildiamina monoprotegida obtenida en la Etapa 1 se desprotege para obtener la correspondiente amina libre.
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Etapa 3
N-sulfonilación (compuesto de fórmula I)
La amina libre resultante procedente de la etapa 2 se hace reaccionar con el compuesto (1b) para dar 4-cloro-N-(5-{[1-(4-trifluorometilbencil)-pirrolidin-2-ilmetil]-sulfamoiltiofen-2-ilmetil)-benzamida (15).
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Los siguientes compuestos se prepararon de acuerdo con el procedimiento genérico (protocolo II) descrito anteriormente.
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(Tabla pasa a página siguiente)
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La siguiente tabla proporciona datos de HPLC y datos de espectroscopía de masas de los ejemplos mencio-
nados. ^{1}, ^{2}.
37 
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Ejemplo XVI 4-Cloro-N-5-[2,2-dimetil-3-(3-trifluorometanosulfonil-fenilamino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida (16)
La síntesis del compuesto (16) anterior es una síntesis en 3 etapas y consiste en el siguiente protocolo (véase el esquema III):
38 
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Etapa 1
Sulfonilación de un aminoalcohol (compuesto de fórmula XII)
A una solución agitada de 2 equivalentes de 3-amino-2,2-dimetilpropan-1-ol (1,0 g, 10 mmol) en DMF en presencia 2 equivalentes de DIEA (1,7 ml, 10 mmol) se añade una solución de cloruro de sulfonilo (1b) (1,75 g, 5 mmol, 1 equivalente) en DMF. La mezcla de reacción se agita durante 12 h a temperatura ambiente. Se añade DCM y cualquier exceso de amina se extrae en una solución de HCl 0,1 N. La fase orgánica se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}. Se obtiene 4-cloro-N-[5-(3-hidroxi-2,2-dimetil-propilsulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]-benzamida (compuesto de fórmula XII) después de la evaporación del disolvente. El análisis por LC-MS y el análisis por NMR mostraban que el compuesto era suficientemente puro para llevar a cabo la etapa siguiente.
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Etapa 2
Oxidación del alcohol (compuesto de fórmula XIII)
El compuesto de XII (954 mg, 2,3 mmol, 1,0 eq.) obtenido de la etapa 1 se disolvió en 5 ml de DMSO y se añadió a la mezcla Et_{3}N (3,0 eq.). A continuación, complejo de trióxido de azufre-piridina (3,0 eq) disuelto en 10 ml de DMSO se añadió adicionalmente a la mezcla de reacción, que se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 h (hasta la desaparición completa del alcohol mediante TLC). Se añadió HCl (1 M) y el producto se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con HCl (1 M) y a continuación salmuera y se secó con MgSO_{4}. El disolvente se evaporó a continuación. El aldehído, 4-cloro-N-[5-(2,2-dimetil-3-oxo-propilsulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]-benzamida (compuesto de fórmula XIII), se purificó a continuación mediante cromatografía en columna usando acetato de etilo/DCM (1/1).
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Etapa 3
Aminación reductiva (compuesto de fórmula I)
Una solución de 4-cloro-N-[5-(2,2-dimetil-3-oxo-propilsulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]-benzamida (fórmula XIII) obtenida de la etapa 2 (0,41 g, 1 mmol, 1 eq.) y ((trifluorometil)sulfonil)-anilina (0,22 g, 1 mmol, 1 eq.) (fórmula XIV) en tetracloroetileno se calienta a 110ºC en presencia de tamices moleculares de 4 \ring{A} durante 36 h. Se deja que la mezcla de reacción se enfríe hasta temperatura ambiente y se añade cianoborohidruro sódico (0,12 g, 2 mmol, 2 eq.). La reacción se agita durante 12 h adicionales a temperatura ambiente. La fase orgánica se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}. Los disolventes se evaporan hasta sequedad. El producto en bruto se purifica mediante HPLC preparativa usando un gradiente de acetonitrilo/agua para dar el compuesto (16), 4-cloro-N-{5-[2,2-dimetil-3-(3-trifluorometanosulfonilfenilamino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida, puro.
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La siguiente tabla proporciona datos de HPLC y datos de espectroscopía de masas de los ejemplos mencio-
nados. ^{1}, ^{2}.
39 
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Ejemplo XVII Preparación de una formulación farmacéutica
Los siguientes ejemplos de formulación ilustran composiciones farmacéuticas representativas de acuerdo con la presente invención, que no esta restringida a los mismos.
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Formulación 1
Comprimidos
Un compuesto de sulfonamida de fórmula I se mezcla como un polvo seco con un aglutinante de gelatina seco en una relación en peso aproximada de 1:2. Se añade una cantidad minoritaria de estearato de magnesio como lubricante. La mezcla se forma en comprimidos de 240-270 mg (80-90 mg de compuesto de sulfonamida activo por comprimido) en una prensa de comprimidos.
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Formulación 2
Cápsulas
Un compuesto de sulfonamida de fórmula I se mezcla como un polvo seco con un diluyente de almidón en una relación en peso aproximada de 1:1. La mezcla se carga en cápsulas de 250 mg (125 mg de compuesto de sulfonamida activo por cápsula).
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Formulación 3
Líquido
Un compuesto de sulfonamida de fórmula I (1250 mg), sacarosa (1,75 g) y goma de xantano (4 mg) se combinan, se hacen pasar a través de un tamiz de EE.UU. de malla Nº 10 y a continuación se mezclan con una solución preparada previamente de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa sódica (11:89, 50 mg) en agua. Se diluyen benzoato sódico (10 mg), aromatizante y colorante y se añaden con agitación. Después, se añade suficiente agua para producir un volumen total de 5 ml.
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Formulación 4
Comprimidos
Un compuesto de sulfonamida de fórmula I se mezcla como un polvo seco con un aglutinante de gelatina seco en una relación en peso aproximada de 1:2. Se añade una cantidad minoritaria de estearato de magnesio como lubricante. La mezcla se forma en comprimidos de 450-900 mg (150-300 mg de compuesto de sulfonamida activo) en una prensa de comprimidos.
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Formulación 5
Inyección
Un compuesto de sulfonamida de fórmula I se disuelve en un medio acuoso inyectable de solución salina estéril tamponada hasta alcanzar una concentración de aproximadamente 5 mg/ml.
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Ejemplo XVIII Ensayos biológicos Resultados Biológicos
Las actividades de los compuestos de acuerdo con la fórmula I pueden determinarse usando los siguientes ensayos biológicos in vitro e in vivo.
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Ensayos in vitro de JNK-2 y -3
La fosforilación de c-jun por JNK2 o JNK3 puede seguirse controlando la incorporación de ^{33}P en c-jun siguiendo el procedimiento posterior. La actividad inhibidora de los compuestos de acuerdo con la fórmula I, para la fosforilación de c-jun a través de JNK, se determina calculando la actividad de fosforilación en presencia o ausencia de compuestos de acuerdo con la fórmula I.
Los ensayos de JNK-3 y/o -2 se realizan en placas de MTT de 96 pocillos: incubación de 0,5 \mug de recombinante, GST-JNK3 o GST-JNK2 preactivadas, con 1 \mug de recombinante, GST-c-Jun biotinilada y ^{33}\gamma-ATP 2 \muM (2 nCi/\mul), en presencia o ausencia de compuestos de acuerdo con la fórmula I y en un volumen de reacción de 50 \mul que contiene Tris-HCl 50 mM, pH 8.0; MgCl_{2} 10 mM; ditiotreitol 1 mM y Na_{3}VO_{4} 100 \muM. La incubación se realiza durante 120 min. a TA y se detiene al añadir 200 \mul de una solución que contiene 250 \mug de cuentas de SPA revestidas con estreptavidina (Amersham, Inc.)*, EDTA 5 mM, Triton X-100 al 0,1% y ATP 50 \muM, en solución salina tamponada con fosfato.
Después de la incubación durante 60 minutos a TA, las cuentas se sedimentan mediante centrifugación a 1500 x g durante 5 minutos, se resuspenden en 200 \mul de PBS que contiene EDTA 5 mM, Triton X-100 al 0,1% y ATP 50 \muM y la radiactividad se mide en un contador de centelleo \beta, después de la sedimentación de las cuentas como se describe anteriormente. Reemplazando GST-c-Jun biotinilada por GST-_{1}ATF_{2} biotinilada o proteína básica de mielina biotinilada, este ensayo puede usarse para medir la activación de MAP quinasas p38 y ERK preactivadas, respectivamente.
Los compuestos de acuerdo con la fórmula I probados presentan una inhibición (IC_{50}) con respecto a JNK3 de menos de 10 \muM, preferiblemente menos de 1 \muM y más preferiblemente menos de 0,25 \muM. Por ejemplo, los compuestos (13) y (14) presentan una inhibición (IC_{50}) con respecto a JNK3 de 188 nM y 184 nM, respectivamente.
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Ensayo de Liberación de Il-2
La activación de la ruta de JNK pone en marcha la producción de citoquinas inflamatorias tales como IL-2. La JNK puede ser activada por estímulos externos tales como PMA e ionomicina y la producción de IL-2 puede medirse a través de una prueba de ELISA de IL-2. Las medidas comparativas con y sin los compuestos de la invención de acuerdo con el siguiente protocolo miden la capacidad de los compuestos para prevenir la liberación de IL-2 mediada por estrés.
Células de Jurkat, una línea celular de leucemia de células T humana (American Type Culture Collection Nº TIB 152) se cultivaron en medio RPMI 1640 (Gibco, BRL) complementado con 10% de suero de ternero fetal (FCS) activado térmicamente, glutamina y Penstrep. La suspensión de células en el medio se diluye para dar 2.10^{6} células/ml. Las células se cultivaron en placa (2.10^{5} células/pocillo) en una placa de 96 pocillos que contenía diferentes concentraciones de un compuesto de acuerdo con la fórmula I (concentración final de compuestos, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 \muM). Esta mezcla se incuba 30 minutos a 37ºC en una atmósfera de CO_{2} humidificada. Las células se trataron a continuación con 10 \mul de PMA (miristato-13 acetato-12 de forbol) + ionomicina (concentración final de 0,1 \muM y 1 \muM) en todos los pocillos excepto el control negativo. En los pocillos sin compuestos, se añaden 10 \mul de RPMI-DMSO al 2% (= 0,1% final). Las células se incuban 24 horas a 37ºC y a continuación el sobrenadante se recoge (congélese a -20ºC si no se usa el mismo día) antes de realizar la prueba de ELISA de IL-2 en el sobrenadante.
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Ensayo ELISA de IL-2
La liberación de IL-2 en el medio por células de Jurkat estimuladas con (PMA + ionomicina), en presencia o ausencia de compuestos de prueba, puede ensayarse mediante ELISA siguiendo el procedimiento descrito posteriormente.
Se usan anticuerpo anti-(IL-2 humana) monoclonal (MAB602) (captura), anticuerpo anti-(IL-2 humana) biotinilado (BAF202) (detección) e IL-2 humana recombinante (202-IL-010) (patrón) de R & D Systems.
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Preparación de la placa
100 \mul de anticuerpo de captura diluidos en PBS a 5 \mug/ml (PBS-Tween 0,05%) se transfieren a una placa de ELISA de 96 pocillos y se incuban durante la noche a temperatura ambiente.
Cada pocillo se aspira y se lava 3 veces con tampón de lavado (PBS-Tween 0,05%). Después del último lavado, la placa se humedece.
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Procedimiento de ensayo
1.
Se añaden 100 \mul de muestra o patrón (2000, 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25 pg/ml) y se incuban 2 horas a temperatura ambiente.
2.
Lavado 3 veces
3.
Se añaden 100 \mul de anti-(IL-2 humana) biotinilado a 12,5 ng/ml y se incuban 2 horas a temperatura ambiente.
4.
Lavado 3 veces
5.
Se añaden 100 \mul de estreptavidina-HRP (Zymed Nº 43-4323) a 1:10'000 y se incuban 30 minutos a temperatura ambiente.
6.
Lavado 3 veces
7.
Se añaden 100 \mul de solución de sustrato (ácido cítrico/Na_{2}HPO_{4} (1:1) + H_{2}O_{2} 1:2000 + OPD) y se incuban 20-30 minutos a temperatura ambiente.
8.
Se añaden a cada pocillo 50 \mul solución de terminación (H_{2}SO_{4} 20%).
9.
La densidad óptica se mide usando una placa de microvaloración graduada a 450 nm con corrección a 570 nm.
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Ensayo de Informador de C-Jun
La fosforilación del factor de transcripción, c-jun, por JNK en la ruta de transducción de señales de MAP quinasas puede seguirse a través de un sistema informador trans tal como el PathDetect® disponible comercialmente (33).
La inhibición de la fosforilación por compuestos de acuerdo con la fórmula I puede determinarse a continuación.
Un sistema informador trans permite seguir, a través de la actividad de la luciferasa, el estado de activación de una proteína activadora trans de fusión. La proteína activadora trans consiste en el dominio de activación del factor de transcripción de interés (c-jun) fusionado con al menos un activador de transcripción de levadura, dominio de unión a DNA de GAL4 (dbd, por sus siglas en inglés). El dbd de GAL4 tiene la ventaja de que no pueden unirse a él factores de transcripción de mamífero conocidos y por lo tanto el ruido de fondo del ensayo es muy bajo.
En el presente caso, se usaron líneas celulares de informador de luciferasa de Hela-c-Jun (HLR-c-Jun) que expresan constitutivamente GAL4-cJun.
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El gen de MEKK-1 se insertó. MEKK-1 es una MAPKKK que pone en marcha la activación de JNK. La expresión de MEKK-1 silvestre es suficiente para la activación de JNK (34).
Una vez que la JNK se activa, puede inducir la fosforilación del dominio de c-jun de la proteína activadora trans de fusión (GAL4dbd-cJun) que forma un dímero. El dímero es capaz entonces de unirse a una GAL4 aguas arriba de la secuencia activadora (GAL4 UAS, por sus siglas en inglés) del informador que activa la expresión de luciferasa.
La expresión de luciferasa se detecta mediante luminiscencia usando un ensayo simple tal como el sistema de ensayo de informador Dual-Luciferase® (35) en que se usa Renilla como un informador de control.
La inhibición de JNK se observa como una disminución en la expresión de luciferasa y se detecta por una disminución de la luminiscencia.
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Cultivo celular
Células HLR-c-Jun se cultivan en DMEM alto en Glc complementado con FCS (Sigma) al 10%, glutamina 2 mM (Gibco), P/S, 100 \mug/ml de higromicina b y 250 \mug/ml de G418.
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Preparación del cultivo celular Bancos de Células
Las células se almacenan congeladas en criotubos bajo nitrógeno líquido, como volúmenes de 1,8 ml de suspensión celular en medio de cultivo que contiene 10% de dimetilsulfóxido.
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Descongelación del cultivo celular
Cuando es necesario, los viales congelados se descongelan rápidamente a 37ºC en un baño de agua sometiendo suavemente a turbulencia hasta la descongelación semicompleta. A continuación, la suspensión celular se añade a 10 ml de medio de cultivo y a continuación se centrifuga durante 5 minutos a 1200 rpm. El sobrenadante se retira y la pella celular se reconstituye en el medio. Los matraces se incuban a 37ºC en una atmósfera de CO_{2} al 5%.
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"Pasada" celular
Las células se subcultivan en serie (se someten a "pasadas") cuando se han obtenido monocapas confluentes al 80%.
El medio de cada matraz se retira y la monocapa se lava con 10-15 ml de solución tamponadora de fosfato (PBS).
Se añade solución de tripsina-EDTA a la monocapa celular, se incuba a 37ºC y se golpea suavemente a intervalos para hacer caer las células. La separación y la desagregación completas de la monocapa celular se confirman mediante examen microscópico. Las células se resuspenden a continuación en 10 ml de medio completo y se centrifugan durante 5 minutos a 1200 rpm.
Los sobrenadantes se descartan, las células se resuspenden en medio de cultivo y se diluyen 1/5 en matraces de 175 cm^{2}.
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Día 0 mañana
Preparación de células para transfecciones
Las células de cultivos casi confluentes se separan y se desagregan mediante tratamiento con tripsima según se describe anteriormente.
Las células se resuspenden en medio de cultivo y se cuentan.
Las suspensiones celulares se diluyen con medio para dar aproximadamente 3.5x10^{6} células/ml y 1 ml de suspensión celular se puso sobre 2 cápsulas de cultivo de 10 cm que contenían 9 ml de medio de cultivo.
Las placas se incuban a 37ºC en una atmósfera humidificada de CO_{2} al 5% en aire.
\newpage
Día 0 tarde
Transfecciones
Control:
0,2 \mug de pTK Renilla, 5,8 \mug de pBluescript KS, 500 \mul de OPTIMEM (GIBCO), 18 \mul de Fugene 6.
Inducido:
0,1 \mug de pMEKK1, 0,2 \mug de pTK Renilla, 5,7 \mug de pBluescript KS, 500 \mul de OPTIMEM (GIBCO), 18 \mul de Fugene 6 30 minutos TA.
La mezcla de transfección se añade a las células cultivadas en placa. Las placas se incuban durante la noche a 37ºC en una atmósfera humidificada de CO_{2} al 5% en aire.
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Día 1
Se prepara una placa de 96 pocillos (100 \mul de medio de cultivo por pocillo).
Control negativo (vehículo): 2 \mul de DMSO se añaden a los 100 \mul (por triplicado).
2 \mul de diluciones de reserva de compuesto de acuerdo con la fórmula I (3, 1 y 0,1 mM en DMSO al 100%) se añaden a los 100 \mul (por triplicado).
Las células transfectadas se tripsinizan y se resuspenden en 12 ml de medio de cultivo.
100 \mul de la dilución se añaden a cada uno de los 96 pocillos de la placa.
La placa se incuba durante la noche a 37ºC en una atmósfera humidificada de CO_{2} al 5% en aire.
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Día 2
Procedimiento de prueba: Sistema de ensayo de informador Dual-Luciferase® (35)
El medio se retira de la placa y las células se lavan dos veces con 100 \mul de PBS. Se aplica reactivo de lisis (tampón de lisis pasiva, PLB, por sus siglas en inglés). A cada pocillo de cultivo se aportan 5 \mul de 1X PLB. Las placas de cultivo se ponen sobre una plataforma giratoria o un agitador orbital con giro/agitación suaves para asegurar la cobertura completa de la monocapa celular con 1X PLB. Las placas de cultivo se hacen girar a temperatura ambiente durante 15 minutos. 20 \mul del lisado se transfieren a una placa opaca de 96 pocillos. Se registra la lectura del luminómetro.
- 50 \mul de reactivo de ensayo de luciferasa II se inyectan y las lecturas se registran a los 5 y 10 minutos.
50 \mul de reactivo Stop & Glo ® se inyectan y las lecturas se registran a los 5 y 10 minutos.
A continuación, se mide la luminiscencia relativa: RLU Luciferasa/RLU Renilla.
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Choque Endotóxico Inducido por LPS en Ratones
Las endotoxinas son los constituyentes lipopolisacáridos (LPS) de la membrana externa de bacterias Gram negativas. Se ha demostrado que la respuesta a LPS implica la activación de diferentes poblaciones celulares y conduce a la expresión de diversas citoquinas inflamatorias que incluyen el factor de necrosis tumoral alfa (TNF\alpha) y el interferón gamma (IFN-\gamma).
Como se sabe que el LPS estimula la activación de diversas rutas de MAP quinasas, incluyendo JNK (36), puede probarse la capacidad de los inhibidores de JNK después de que la ruta de señalización de JNK se haya accionado por una inducción con LPS.
La actividad como inhibidores de JNK de los compuestos de fórmula I puede determinarse después de una inducción con LPS usando el siguiente protocolo:
LPS (S. abortus-Galanos Lab.) se inyecta (200 \mug/kg, i.v.) a ratones C57BL/6 macho para inducir choque endotóxico. Los compuestos de acuerdo con la fórmula I (0,1, 1, 10 mg/kg) o NaCl (200 uM) se inyectan intravenosamente (10 ml/kg) 15 min antes de la inducción con LPS. Se obtuvo sangre heparinizada del seno orbital en diferentes puntos temporales después de la inducción con LPS, y la sangre se centrifugó a 9.000 rpm durante 10 min a 4ºC para recoger el sobrenadante. La medida de la producción de citoquinas tales como TNF\alpha e IFN\gamma por el ratón se realiza con un estuche de ELISA tal como Duoset® DY410 para TNF\alpha y DY 485 para IFN\gamma. Pueden usarse otros ensayos ELISA tales como los descritos en (37).
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Isquemia Global en Jerbos
La oclusión de la carótida bilateral del jerbo es un modelo animal bien descrito de apoplejía iquémica aguda e implica técnicas quirúrgicas relativamente sencillas.
La degeneración neuronal en el hipocampo se desarrolla durante varios días y a menudo se denomina muerte neuronal retardada. Además, la neurodegeneración observada histológica-mente es obvia y se cuantifica fácilmente (37). Por otra parte, la histopatología observada en el jerbo es similar a la observada en la región CA1 del hipocampo del cerebro humano después de un ataque cardíaco. Las observaciones conductuales, tales como pruebas de memoria, podrían realizarse incluso en el caso de los jerbos. Este tipo de pruebas para la apreciación del grado de recuperación no es fácilmente manejable en otros modelos tales como en la rata, cuyas capacidades de aprendizaje son mucho más escasas (39).
El efecto de los compuestos de acuerdo con la fórmula I para proteger puede determinarse usando el modelo de isquemia global en el jerbo y un protocolo tal:
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-1- Método
* Cirugía
-
Anestesia con isoflurano (0,5-4%).
-
Las arterias carótidas comunes (izquierda y derecha) se liberan de tejido.
-
Oclusión de las arterias usando micropinzas Bulldog durante 5 min.
-
Retirada de las pinzas (reperfusión)
-
Estabulación de los animales bajo una lámpara calentadora hasta que se despiertan.
-
Estabulación de los animales en el animalario en jaulas individuales.
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* Sacrificio de los animales
-
7 días después de la isquemia (Decapitación o sobredosis de pentobarbital).
-
Muestreo del cerebro.
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* Parámetros histológicos
-
Congelación del cerebro en isopentano (-20ºC)
-
Corte en rodajas del hipocampo usando un criomicrotomo (20 \mum).
-
Tinción con el método del violeta de cresilo
-
Evaluación de las lesiones (en los subcampos CA1/CA2 del hipocampo) mediante una puntuación de Gerhard & Boast modificada (40).
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-2- Tratamiento
- Administración del compuesto de acuerdo con la fórmula I o el vehículo: 15 min, 24 horas y 48 horas después de la reperfusión (5-10 min después de la recuperación de la anestesia).
- Protocolo estándar
50 animales: 5 grupos de 8 (grupo A: control, grupos B-D: artículo de prueba en 3 dosis y grupo E: compuesto de referencia (ácido orótico 3x300 mg/kg, ip).
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Bibliografía
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Claims (26)

1. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con la fórmula I
40
así como sus isómeros geométricos, sus formas ópticamente activas como enantiómeros, diastereoisómeros y mezclas de estos, así como sales del mismo, en donde:
\quad
Ar^{1} es un grupo arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
\quad
X es O o S;
\quad
Ar^{2} es un grupo arileno o heteroarileno sustituido o no sustituido;
\quad
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y un grupo alquilo C_{1}-C_{6};
\quad
R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}' se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
\quad
R^{3} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{10}, alquenilo C_{2}-C_{10}, alquinilo C_{2}-C_{10}, arilo o heteroarilo, cicloalquilo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O, S, aril-alquilo (C_{1}-C_{10}) y heteroaril-alquilo (C_{1}-C_{10});
\quad
R^{4} se selecciona del grupo que consiste en H y -C(H)R^{5}R^{6};
\quad
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{10}, alquenilo C_{2}-C_{10}, alquinilo C_{2}-C_{10}, arilo o heteroarilo, cicloalquilo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O, S, aril-alquilo (C_{1}-C_{10}) y heteroaril-alquilo (C_{1}-C_{10});
\quad
m es un número entero de 1 a 5;
\quad
n es un número entero de 0 a 2; y
\quad
p es un número entero de 1 a 10;
\quad
con la condición de que el compuesto de acuerdo con la fórmula I no sea:
\quad
N-[[5-[[[3-[[4-[(3-aminopropil)amino]butil]amino]-propil]amino]sulfonil]-2-tienil]metil]-benzamida, ni
\quad
N-[[5-[[[3-[[4-[(3-aminopropil)amino]butil]amino]-propil]amino]sulfonil]-2-tienil]metil]-4-cloro-benzamida, ni
\quad
N,N'-[1,4-butanodiilbis(imino-3,1-propanodiiliminosulfonil-5,2-tiofenodiilmetilen)]-bis[4-cloro-]benzamida.
2. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Ar^{1} se selecciona del grupo que consiste en fenilo, tienilo, furanilo, piridilo, opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{6}, amino, acilamino, aminocarbonilo, alcoxi(C_{1}-C_{6})-carbonilo, arilo, carboxilo, ciano, halógeno, hidroxi, nitro, sulfonilo y tioalcoxi C_{1}-C_{6}.
3. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que Ar^{1} es un fenilo no sustituido o sustituido.
4. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Ar^{2} se selecciona del grupo que consiste en fenileno, tienileno, piridileno opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquenilo C_{2}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{6}, amino, acilamino, aminocarbonilo, alcoxi(C_{1}-C_{6})-carbonilo, arilo, carboxilo, ciano, halógeno, hidroxi, nitro, sulfonilo y tioalcoxi C_{1}-C_{6}.
5. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que Ar^{2} es un grupo tienileno o fenileno no sustituido o sustituido.
6. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que Ar^{1} se selecciona de un grupo seleccionado de halogenofenilo, nitrofenilo, hidroxifenilo, alcoxifenilo, 3,4-dihidroxifenilo, X es O, R^{1} es hidrógeno, m es 1 y Ar^{2} es tienileno o fenileno.
7. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que:
\quad
Ar^{1} es 4-clorofenilo, X es O, R^{1} y R^{2} son ambos hidrógeno; m es 1; n es 0, 1 ó 2;
\quad
Ar^{2} es un grupo tienileno o fenileno; R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}' son hidrógeno, R^{3} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} o arilo; R^{4} se selecciona de un grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{10}, aril-alquilo(C_{1}-C_{10}), CH_{2}-cicloalquilo(C_{3}-C_{8}), CH_{2}-heterocicloalquilo(C_{3}-C_{8}), CH_{2}-arilo y un grupo CH_{2}-heteroarilo.
8. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que:
\quad
Ar^{1} es un 4-clorofenilo, X es O, R^{1} y R^{2} son hidrógeno, m es 1; n es 0, 1 ó 2; Ar^{2} es un grupo tienileno o fenileno; R^{3} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6} o arilo; R^{4} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{10}, aril-alquilo(C_{1}-C_{10}), CH_{2}-cicloalquilo(C_{3}-C_{8}), CH_{2}-heterocicloalquilo(C_{3}-C_{8}), arilo y un grupo CH_{2}-heteroarilo.
9. Un derivado de sulfonamida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, seleccionado del siguiente grupo:
4-cloro-N-5-[2,2-dimetil-3-(4-trifluorometil-bencilamino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida;
4-cloro-N-(5-{3-[metil-(4-trifluorometil-bencil)amino]-propilsulfamoil}-tiofen-2-ilmetil)-benzamida;
4-cloro-N-{5-[3-(hexil-metil-amino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida;
4-cloro-N-[5-(2-hexilamino-etilsulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]benzamida;
4-cloro-N-[5-(3-hexilamino-2,2-dimetil-propilsulfamoil)-tiofen-2-ilmetil]-benzamida;
4-cloro-N-{5-[3-(4-trifluorometil-bencilamino)-bencil-sulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida;
4-cloro-N-(5-{metil-[3-(4-trifluorometil-bencilamino)-propil]-sulfamoil}-tiofen-2-ilmetil)-benzamida;
4-cloro-N-{5-[(3-hexilamino-propil)-metil-sulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida; y
4-cloro-N-{5-[2,2-dimetil-3-(3-trifluorometanosulfonil-fenilamino)-propilsulfamoil]-tiofen-2-ilmetil}-benzamida.
10. Una sulfonamida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para uso como un medicamento.
11. Uso de un derivado de sulfonamida de acuerdo con la fórmula I
\vskip1.000000\baselineskip
41
en la que
\quad
Ar^{1} es un grupo arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido;
\quad
X es O o S, preferiblemente O;
\quad
Ar^{2} es un grupo arileno o heteroarileno sustituido o no sustituido;
\quad
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y un grupo alquilo C_{1}-C_{6};
\quad
R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}' se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C_{1}-C_{6};
\quad
R^{3} se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{10}, alquenilo C_{2}-C_{10}, alquinilo C_{2}-C_{10}, arilo o heteroarilo, cicloalquilo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O, S, aril-alquilo (C_{1}-C_{10}) y heteroaril-alquilo (C_{1}-C_{10});
\quad
R^{4} se selecciona del grupo que consiste en H y -C(H)R^{5}R^{6};
\quad
R^{5} y R^{6} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C_{1}-C_{10}, alquenilo C_{2}-C_{10}, alquinilo C_{2}-C_{10}, arilo o heteroarilo, cicloalquilo de 3-8 miembros que contiene opcionalmente 1-3 heteroátomos seleccionados de N, O, S, aril-alquilo (C_{1}-C_{10}) y heteroaril-alquilo (C_{1}-C_{10});
\quad
m es un número entero de 1 a 5;
\quad
n es un número entero de 0 a 2; y
\quad
p es un número entero de 1 a 10;
así como isómeros, formas ópticamente activas como enantiómeros, diastereoisómeros y mezclas de éstos, así como sales del mismo, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno neuronal seleccionado de epilepsia, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedades retinales, lesión de la médula espinal, esclerosis múltiple, trauma e isquemia de cabeza, una enfermedad cardiovascular incluyendo apoplejía, arterosclerosis, infarto de miocardio, lesión por reperfusión de miocardio y un estado isquémico incluyendo lesiones por reperfusión cardíaca, renal y cerebral, y fallo renal.
12. Uso de un derivado de sulfonamida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno neuronal seleccionado de epilepsia, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedades retinales, lesión de la médula espinal, esclerosis múltiple, trauma e isquemia de cabeza, una enfermedad autoinmune seleccionada de enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), artritis reumatoide, asma, choque séptico, rechazo de trasplantes, un cáncer seleccionado de cáncer mamario, colorrectal, pancreático, ovárico, prostático, testicular, hepático, renal y pulmonar, una enfermedad cardiovascular incluyendo apoplejía, arteroscle-rosis, infarto de miocardio, lesión por reperfusión de miocardio y un estado isquémico incluyendo lesiones por reperfusión cardíaca, renal y cerebral, y fallo renal.
13. Uso de un derivado de sulfonamida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 sin condición, para la modulación de la ruta de JNK.
14. Uso de acuerdo con la reivindicación 13, para el tratamiento o la prevención de trastornos asociados con la expresión o la actividad anormal de JNK.
15. Uso de acuerdo con la reivindicación 14, para el tratamiento o la prevención de trastornos asociados con la expresión o la actividad anormal de JNK2 y/o JNK3.
16. Una composición farmacéutica que comprende al menos un derivado de sulfonamida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y uno de sus portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
17. Un procedimiento para la preparación de un derivado de sulfonamida de acuerdo con las reivindicaciones 1-9, en el que R^{4} no es H, que comprende la etapa de aminar reductivamente un grupo carbonilo de la fórmula VII, en la que R^{5} y R^{6} se definen anteriormente, con un compuesto de fórmula VI, en la que Ar^{1}, X, R^{1}, Ar^{2}, R^{2}, R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}', R^{3}, m, n y p se definen anteriormente.
42
18. Un procedimiento para la preparación de un derivado de sulfonamida de acuerdo con las reivindicaciones 1-9, en el que R^{4} es H, que comprende la etapa de desprotección de un compuesto de fórmula IV.
\vskip1.000000\baselineskip
43
19. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 17, en el que el compuesto de fórmula VI es el resultado de la etapa de desprotección de un compuesto de fórmula IV según se define anteriormente.
20. Un procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 18 ó 19, en el que el compuesto de fórmula IV resulta de hacer reaccionar un compuesto de fórmula II con un compuesto de fórmula III.
\vskip1.000000\baselineskip
44
21. Procedimiento para la preparación de un derivado de sulfonamida de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, que comprende la etapa de N-sulfonilación de un compuesto de fórmula X con un cloruro de sulfonilo de fórmula III, en las que Ar^{1}, X, R^{1}, Ar^{2}, R^{2}, R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}', R^{3}, R^{4}, m, n y p se definen anteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
45
22. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 21, en el que el compuesto de fórmula X es el resultado de la etapa de desprotección de un compuesto de fórmula IX.
\vskip1.000000\baselineskip
46
en la que P es un grupo protector.
23. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 22, en el que el compuesto de fórmula IX resulta de aminar reductivamente un compuesto de fórmula VII con un compuesto de fórmula VIII.
\vskip1.000000\baselineskip
47
en la que P es un grupo protector.
24. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula I de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, que comprende la etapa de aminar reductivamente un grupo carbonilo de la fórmula XIII, en la que Ar^{1}, X, R^{1}, Ar^{2}, R^{2}, R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}', m, n y p se definen anteriormente con una amina de fórmula XIV en la que R^{3} y R^{4} se definen anteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
48
25. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 24, en el que el compuesto de fórmula XIII es el resultado de la oxidación de un compuesto de fórmula XII, en la que Ar^{1}, X, R^{1}, Ar^{2}, R^{2}, R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}', m, n y p se definen anteriormente.
49
26. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 25, en el que el compuesto de fórmula XII es el resultado de la sulfonación de un compuesto de fórmula XI en la que R^{2}, R^{a}, R^{a}', R^{b}, R^{b}', n y p se definen anteriormente mediante un compuesto de fórmula III.
50
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