ES2322366T3 - Medio para identificacion de microorganismos. - Google Patents
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Abstract
Un medio para la detección y/o identificación de una levadura Candida, comprendiendo el medio: un cromógeno que comprende una hexosaminida; carbohidrato en el intervalo 1-5 g/litro y un alcohol, que no es un carbohidrato, que comprende entre 1 y 5 átomos de carbono; siendo el medio tal que el crecimiento de la levadura Candida en condiciones apropiadas da como resultado la hidrólisis del cromógeno para generar un cromóforo de un color derivado que es un color diferente del generado por hidrólisis del cromógeno en un medio estándar que carece esencialmente de un alcohol pero por lo demás es idéntico al medio de la invención.
Description
Medio para identificación de
microorganismos.
La presente invención se refiere a un medio para
el crecimiento y/o la identificación de
micro-organismos, y a un método de identificación
de un microorganismo que utiliza el medio.
La detección e identificación de microorganismos
es muy importante en varios campos, tales como el diagnóstico de
enfermedades infecciosas, el seguimiento de las fuentes de brotes de
enfermedad o contaminación, la detección y el seguimiento de la
propagación de la resistencia a los antibióticos, etc.
En los últimos años se han encontrado muchos
métodos de detección e identificación de microorganismos que
emplean técnicas sofisticadas, tales como PCR y análogas. Éstas son
frecuentemente rápidas y extremadamente sensibles. Sin embargo,
existe todavía necesidad de métodos más tradicionales que impliquen
el cultivo de organismos en medios (especialmente medios sólidos).
Estos métodos tradicionales tienen la gran ventaja de que dan como
resultado el aislamiento de los organismos de interés en forma
viable, que puede subcultivarse luego en otros medios y/o
analizarse ulteriormente.
Es bien conocida la inclusión en tales medios de
compuestos que pueden permitir o promover el crecimiento de ciertos
microorganismos al tiempo que impiden o inhiben el crecimiento de
otros microorganismos. Se dice que tales medios son
"selectivos". Por ejemplo, ciertos antibióticos pueden
incorporarse en medios que permiten el crecimiento de
microorganismos que son suficientemente resistentes al o a los
antibióticos empleados.
Es también bien conocida la inclusión en medios
(que pueden ser o no selectivos) de sustancias que permiten la
distinción entre diferentes microorganismos (posiblemente muy afines
entre sí). Tales medios pueden describirse como "medios
diferenciales".
Un medio diferencial de este tipo se describe en
la Patente U.S. No. 5.716.799 (Rambach). El medio descrito en dicho
documento comprende: al menos un cromógeno que es un sustrato para
una enzima del microorganismo particular a identificar, junto con
un carbohidrato a concentración alta (10-30
g/litro). El medio es tal que, en presencia del microorganismo de
interés, el cromógeno se hidroliza para liberar un cromóforo con un
"color derivado" que es diferente del color básico del
cromóforo en un medio "estándar". (Un medio "estándar" se
define en dicho documento como "cualquier medio de identificación
ordinario en el cual el carbohidrato tiene una función simple de
fuente de carbono, a concentraciones muy bajas o incluso
nulas").
Así pues, la doctrina del documento US 5.716.799
es que una característica esencial de la invención descrita en el
mismo es que el medio contiene una alta concentración (a saber
10-30 g/litro) de carbohidrato. Un medio de acuerdo
con US 5.716.799 está disponible comercialmente de
Becton-Dickinson, EE.UU., y se conoce como
CHROMagar^{TM} Candida.
El medio descrito en el documento US 5.716.799
es útil para la discriminación entre diferentes levaduras del
género Candida. En particular, hay una significación clínica
ligada a la capacidad de distinguir entre Candida albicans y
otras especies de Candida. C. albicans es un patógeno
humano frecuente, pero pueden estar presentes también otras
especies de Candida. Asimismo, diferentes especies de
Candida tienen susceptibilidades diferentes de terapia
antifúngica, por lo que es importante determinar si un organismo
del género Candida es C. albicans o cualquier otra
especie de Candida.
El documento US 5.534.415 (Orenga) describe
también un medio de identificación, específicamente un medio para
la detección selectiva de C. albicans. El medio descrito en
dicho lugar comprende un sustrato cromógeno o fluorógeno
susceptible de ser hidrolizado por una enzima hexosaminidasa
"asociada" con C. albicans, y al menos un compuesto
"activador" que contiene hexosamina (diferente del sustrato)
presente a aproximadamente 1 g/litro. Un medio de acuerdo con el
documento US 5.534.415 está disponible comercialmente (de
bioMérieux, Francia) y se conoce como Candida ID. La
hidrólisis del cromógeno en el medio no da lugar a un color derivado
(es decir, el cromóforo tiene el mismo color en el medio
Candida ID que en un medio estándar).
Willinger et al. (2001, J. Clin.
Microbiol. 39, 3793-3795) realizaron una prueba para
comparar la eficiencia de CHROMagar^{TM} Candida y
Candida ID, utilizando aproximadamente 600 especímenes
clínicos. En las placas de CHROMagar^{TM} Candida, las
colonias de C. albicans eran verdes, mientras que otras
colonias de otras especies de Candida eran de color rosado,
violeta o blancas. En las placas de Candida ID, las colonias
de C. albicans aparecían de color azul, mientras que otras
especies de Candida tenían color rosado o blanco.
Willinger et al. encontraron que, para
aproximadamente el 50% de los especímenes, la identificación de
C. albicans era más rápida en las placas de Candida ID
que en placas de CHROMagar^{TM} Candida, apareciendo el
color azul en las placas de Candida ID típicamente al cabo de
24 horas de incubación a 35ºC, mientras que el color verde de las
colonias de C. albicans en las placas de CHROMagar^{TM}
Candida no se apreciaba a menudo hasta después de
aproximadamente 48 horas de incubación. Esto era de esperar, dado
que el medio Candida ID contiene un activador de hexosamina
que, según se supone, acelera la inducción de la enzima
hexosaminidasa que actúa sobre el cromógeno, en tanto que el medio
CHROMagar^{TM} Candida no contiene cantidad alguna de
dicho activador. Sin embargo, encontraron también que
"Candida ID" no es tan satisfactorio como
CHROMagar^{TM} Candida en la detección de especímenes
polifúngicos.
Adicionalmente, CHROMagar^{TM} Candida
es superior a Candida ID en términos de su capacidad para
permitir la diferenciación entre especies distintas de
Candida. El medio Candida ID es muy eficaz para
distinguir entre C. albicans y otras especies de
Candida pero no puede, por ejemplo, permitir una
diferenciación eficiente entre C. tropicalis y otras
especies distintas de albicans. En contraste,
CHROMagar^{TM} Candida permite la identificación de varias
especies de Candida, con inclusión de C. tropicalis,
dado que varias especies proporcionan cambios de color
"derivados" diferentes en el medio. El medio Candida ID
no proporciona un cromóforo de color "derivado" que sea
diferente del obtenido con un medio básico.
La presente invención se refiere a medios para
microorganismos, especialmente medios diferenciales y, en
particular, un medio que permite la discriminación entre diferentes
especies de Candida.
El contenido de todas las publicaciones
mencionadas en esta memoria descriptiva se incorpora específicamente
en la misma por referencia.
En un primer aspecto, la invención proporciona
un medio para la detección y/o identificación de una levadura
Candida, especialmente C. albicans, comprendiendo el
medio: un cromógeno; carbohidrato en el intervalo de
1-5 g/litro; y un alcohol; siendo el medio tal que
el crecimiento de la levadura Candida en condiciones
apropiadas da como resultado la hidrólisis del cromógeno para
generar un cromóforo de un color derivado que es un color diferente
del generado por hidrólisis del cromógeno en un medio estándar.
Para los propósitos presentes, un "color
derivado" significa cualquier color (generado por hidrólisis del
cromógeno en un medio de acuerdo con la invención) cuya longitud de
onda dominante difiere de la longitud de onda dominante del
cromóforo generado por hidrólisis del cromógeno en un "medio
estándar". De nuevo, para los propósitos de la presente memoria
descriptiva, un "medio estándar" puede definirse como un medio
que carece esencialmente de un alcohol pero que por lo demás está
de acuerdo con la invención. En particular, el color derivado se
produce preferiblemente por hidrólisis del cromógeno como resultado
del crecimiento y/o la presencia de C. albicans en/sobre el
medio, de tal modo que la presencia de C. albicans puede
determinarse por la aparición en el medio del cromóforo que exhibe
color derivado.
La longitud dominante del cromóforo puede
determinarse por referencia a la luz diurna, como se de define por
la CIE, utilizando cualquier técnica convencional para medir el
color de un objeto (v.g. con un espectrocolorímetro).
En la mayoría de los casos, la diferencia de
color entre el color derivado del cromóforo y el color normal del
cromóforo será fácilmente evidente a simple vista para un observador
humano.
El medio es especialmente útil en la detección
y/o identificación de C. albicans y C. tropicalis, y
en particular para permitir la diferenciación entre C.
albicans y otras especies de Candida. El medio es
preferiblemente un medio sólido. Convenientemente, el medio puede
solidificarse por inclusión de agar a una concentración apropiada
(v.g. 10-20 g/litro).
En un segundo aspecto, la invención proporciona
un método para detectar y/o identificar una levadura Candida
en una muestra (especialmente donde la muestra puede contener otros
microorganismos, tales como levaduras y, en particular, una
pluralidad de otras levaduras del género Candida). El método
implica el uso del medio del primer aspecto de la invención.
Más específicamente, el método de la invención
comprende los pasos de: poner en contacto la muestra con el medio
del primer aspecto de la invención arriba definido, en condiciones
apropiadas, para permitir el crecimiento de la levadura
Candida; y detectar la presencia de un cromóforo que tiene un
color indicativo de la presencia de la levadura Candida. El
método de la invención es especialmente útil para, pero no se limita
esencialmente a, distinguir C. albicans de otras especies de
Candida.
El autor de la invención ha encontrado
sorprendentemente que, en oposición a la doctrina del documento US
5.716.799, es posible discriminar entre especies de Candida
utilizando un medio que no contiene una concentración
elevada de carbohidrato.
El carbohidrato utilizado en el medio de la
presente invención puede, en principio, ser cualquier carbohidrato
que sea susceptible de ser utilizado como fuente de carbono por
Candida. El contenido de carbohidrato comprende
preferiblemente al menos algunos azúcares, especialmente mono- o
disacáridos. En particular, son especialmente convenientes
monosacáridos pentosas o hexosas. El azúcar más preferido es
glucosa. El contenido de carbohidrato puede comprender adicional o
alternativamente sacáridos más complejos con un mayor grado de
polimerización. Una fuente conveniente de carbohidratos es el
extracto de malta, que está disponible fácilmente en el comercio.
En una realización, el medio comprende a la vez glucosa y extracto
de malta en una cantidad tal que la concentración total de
carbohidrato (glucosa más extracto de malta y aquellos carbohidratos
(en su caso) presentes en las peptonas) en el medio está
comprendida en el intervalo de 1-5 g/litro.
El carbohidrato se incorpora preferiblemente en
el medio a una concentración comprendida en el intervalo de
2-4 g/litro.
El alcohol está presente preferiblemente en el
medio a una concentración que no ejerce un efecto inhibidor
significativo sobre el crecimiento de las levaduras Candida.
Una concentración adecuada para la mayoría de los alcoholes está
comprendida en el intervalo de 1-10 ml/litro,
preferiblemente 2-8, y más preferiblemente
5-7 ml/litro.
En particular, el alcohol empleado en el medio y
el método de la invención es un alcohol que no es un carbohidrato.
Las personas expertas en la técnica conocen que los carbohidratos
son "polihidroxi-aldehídos, es decir,
H-[CHOH]_{n}-CHO o
polihidroxi-cetonas, es decir
H-[CHOH]_{n}-CO-[CHOH]_{m}-H
con tres o más átomos de carbono" o "sustancias derivadas de
monosacáridos por reducción del grupo carbonilo por oxidación de uno
o más grupos terminales a ácidos carboxílicos o por reemplazamiento
de uno o más grupos hidroxilo por un átomo de hidrógeno, un grupo
amino, un grupo tiol o grupos heteroaromáticos similares" (Unión
Internacional de Química Pura y Aplicada [IUPAC], definición de
carbohidratos].
Así, por ejemplo, en la presente invención el
alcohol puede ser un mono-alcohol, o un
di-alcohol sin un grupo aldehído o ceto.
El alcohol puede ser un compuesto aromático,
alicíclico, o alifático (de cadena lineal o ramificada), aunque
generalmente se prefieren compuestos alifáticos.
De modo más especial, el alcohol comprende
preferiblemente entre 1 y 5 átomos de carbono, preferiblemente
2-4 átomos de carbono. El etanol
(99,7-100% v/v) es actualmente el alcohol preferido,
aunque es también adecuado alcohol desnaturalizado industrial
("IMS"), que comprende una mezcla de aproximadamente 85% etanol
y aproximadamente 10% metanol, y está disponible comercialmente a
un coste inferior al del etanol puro.
El medio de la invención comprende al menos un
cromógeno, aunque pueden utilizarse dos o más cromógenos si se
desea. El cromógeno es un compuesto que, en presencia de enzimas
específicas de especie y en condiciones adecuadas, se hidroliza
para liberar un cromóforo que tiene un color apreciablemente
diferente del color del cromóforo generado por cultivo de la misma
levadura en un medio estándar que contiene el mismo cromógeno.
El cromógeno comprende preferiblemente una
hexosaminida, muy preferiblemente una glucosaminida, y típicamente
corresponde a la fórmula general X-GluNAc (donde Glu
es glucosa, NAc es un grupo N-acetilo y X es un
cromóforo). Muchos cromógenos adecuados son conocidos por los
expertos en la técnica. Un cromógeno preferido es
5-bromo-4-cloro-3-indolil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida.
Otros cromógenos que pueden utilizarse adicional o alternativamente
incluyen
5-bromo-6-cloro-3-indolil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida,
X-Gal-NAc, en donde Gal es
galactosa, NAc es un grupo N-acetilo, y X es un
cromóforo), sal de p-toluidina de
5-bromo-6-cloro-3-indolil-fosfato,
sal de p-toluidina de
5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato,
y
6-cloro-3-indoxilfosfato.
El medio comprenderá por regla general
componentes adicionales que están presentes en un medio de levadura
convencional típico, tales como agar, extracto de levadura, cloruro
de sodio y uno o más antibióticos (v.g., cloranfenicol) para
suprimir el crecimiento bacteriano.
En una realización preferida, el medio puede
contener también uno o más de los siguientes: ácido málico (a
aproximadamente 0,1 g/litro); peptonas (a aproximadamente 2,5
g/litro); y un tampón (v.g. KH_{2}PO_{4}, a aproximadamente 2,0
g/litro).
El método de la invención implica poner en
contacto una muestra a testar con un medio de acuerdo con el primer
aspecto de la invención, e incubar el medio en condiciones que
permiten el crecimiento de organismos Candida, si están
presentes. Típicamente, la muestra comprenderá una suspensión de
células de levadura y otro material y puede ser, por ejemplo, una
muestra clínica obtenida de un paciente. La muestra se extenderá
normalmente sobre la superficie de un medio sólido, contenido en
una cápsula Petri u otro recipiente adecuado. El medio al que se ha
aplicado la muestra debe incubarse luego a una temperatura apropiada
y durante un periodo de tiempo suficiente para permitir el
crecimiento de cualesquiera células de levadura en la muestra en una
proporción suficiente para causar la hidrólisis del cromógeno.
Típicamente, la temperatura de incubación está comprendida en el
intervalo de 10-37ºC, más preferiblemente
20-35ºC, y muy preferiblemente
25-30ºC. El periodo de incubación depende, al menos
en parte, de la temperatura de incubación, pero para una temperatura
de incubación comprendida en el intervalo de
25-30ºC es usualmente adecuada una incubación de
24-48 horas de duración. Si no se aprecia un
resultado después de 24 horas, las placas pueden simplemente
devolverse a la incubadora y reinspeccionarse al cabo de, p.ej., 36
ó 48
horas.
horas.
Típicamente, para un medio de acuerdo con
realizaciones preferidas de la invención, el color del cromóforo
será verde o verde/azul en presencia de C. albicans, púrpura
o azul en presencia de C. tropicalis y rosado en presencia
de C. krusei, donde el cromógeno es
5-bromo-4-cloro-3-indoxil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida.
Los colores verde y verde/azul son colores derivados; el color
normal del cromóforo en un medio estándar es púrpura o azul. Estas
diferencias de color son fácilmente evidentes a simple vista. Si se
desea, pueden proveerse también cultivos de control de cepas
conocidas de C. albicans y/o C. tropicalis, por
ejemplo, para proporcionar una comparación con el cultivo de
test.
Para evitar dudas, se indica expresamente que
cualquier característica de la invención descrita en esta memoria
como "preferida", "preferible", "ventajosa",
"deseable" o términos análogos puede emplearse en la invención
en forma aislada o en combinación con cualquier otra característica
o características así descritas, en la medida en que lo permita el
contexto.
La invención se describirá a continuación por
medio de ejemplos ilustrativos.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
Se preparó una formulación de medio de levadura
básico, de acuerdo con la tabla siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Se prepararon diversos medios de test (de
acuerdo con la invención) o medios comparativos (fuera del alcance
de la invención) complementando la formulación básica como
sigue:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El pH final de las formulaciones
A-C y E-H se ajustó a 6,0 con NaOH o
HCl según fuera apropiado. Se encontró que el medio disponible
comercialmente CHROMagar^{TM} Candida (formulación
"D") tenía un pH de 6,03. Se encontró que el pH de las
formulaciones I-K era aproximadamente 5,8 y no se
ajustó.
\newpage
Las formulaciones de los diversos medios se
testaron en cuanto a su aptitud para dar lugar a un cambio de color
derivado con varias cepas de levadura Candida, que o bien
estaban disponibles dentro de la colección de cultivos de levadura
Oxoid (OYC) o eran aislados clínicos. La tabla siguiente muestra las
cepas de levadura testadas (en este o en el ejemplo
subsiguiente):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Todas las cepas sin un equivalente NCPF o ATCC
están disponibles a solicitud de Oxoid Limited.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Las diversas cepas se cultivaron en placas de
agar de Dextrosa Sabouraud. El cultivo de las placas se utilizó
luego para preparar suspensiones en solución salina, ajustándose
cada suspensión a una turbidez de 1 unidad McFarland. Se aplicaron
luego cultivos puros de estas suspensiones en bandas sobre las
diversas formulaciones de agar y se incubaron a 30ºC durante hasta
48 horas. Los resultados se muestran a continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Por los resultados, está claro que únicamente
las placas de agar que comprendían la combinación de alcoholes y
concentración baja de carbohidratos eran capaces de proporcionar un
cambio de color derivado para C. albicans. Otras fuentes de
carbono, tales como succinato (formulación G), citrato (formulación
H) o acetato de etilo (formulación I) eran ineficaces.
La formulación más eficaz de acuerdo con la
invención, en términos de proporcionar un cambio de color derivado
claro para C. albicans, era la formulación J, que comprendía
6 ml/l de etanol y 4 g/l de carbohidrato. De acuerdo con ello,
etanol (y, en menor proporción, IMS) es el alcohol preferido para
utilizar en los medios y métodos de acuerdo con la presente
invención. Las formulaciones A y B daban también resultados
aceptables.
Ejemplo
2
Se llevó a cabo un experimento adicional para
comparar un medio de acuerdo con la presente invención
(correspondiente esencialmente a la formulación J que se describe
en el Ejemplo 1), con los medios disponibles comercialmente
Candida ID y Candida CHROMagar^{TM}.
Cultivos puros de diversas cepas de C.
albicans se dejaron crecer en placas de agar de Dextrosa Oxoid
Sabouraud durante 48 horas, y se utilizaron éstas para preparar
suspensiones de células en solución salina que tenían una turbidez
McFarland equivalente al estándar 1. Las suspensiones se aplicaron
luego en bandas sobre placas de test utilizando la técnica de
bandas decrecientes, y se incubaron a 30ºC durante 24 horas.
Después de 24 horas, el color era generalmente
evidente sólo en las partes más fuertemente inoculadas de las
placas (zonas de inoculación primera y segunda). Las colonias
simples, en todas las placas, carecían generalmente de color. Los
resultados se muestran a continuación.
Todas las cepas utilizadas en este experimento
están disponibles de Oxoid a petición.
Los resultados demuestran que, si bien los tres
medios se comportaban satisfactoriamente, después de 24 horas de
incubación el medio de acuerdo con la invención proporcionaba
resultados más positivos que el medio CHROMagar^{TM}
Candida. El medio de la invención era también comparable, o
posiblemente incluso algo superior, al medio Candida ID en
términos de resultados positivos obtenidos al cabo de 24 horas. Esto
era extremadamente sorprendente e inesperado (en relación con
Willinger et al., que encontraron un crecimiento de
335-384 C. albicans en Candida ID
comparado con un crecimiento de 167-370 en
CHROMagar^{TM} Candida, que se identificaban correctamente
a las 24 horas), dado que el medio Candida ID comprende un
activador de hexosaminida que acelera la inducción de la
hexosaminidasa relevante.
Después de 48 horas de incubación, todos los
medios daban resultados positivos con la totalidad de las 20 cepas
testadas, y la mayoría de las colonias individuales estaban
coloreadas. Sin embargo, el crecimiento de PAD 32651 en el medio
Candida ID era deficiente, y muchas colonias individuales
eran incoloras o estaban sólo débilmente coloreadas.
Ejemplo
3
Se utilizó una mezcla en suspensión de
diferentes especies de Candida para inocular un medio sólido
de acuerdo con la invención (correspondiente esencialmente a la
formulación J que se describe en el Ejemplo 1), y se incubó a 30ºC
durante 48 horas. Los resultados típicos se muestran en la Figura 1,
que es una fotografía de una placa que muestra el crecimiento del
inóculo y colonias separadas. Incluso en monocromo, la
diferencia entre las colonias de diferentes especies es
evidente.
Claims (16)
1. Un medio para la detección y/o identificación
de una levadura Candida, comprendiendo el medio: un cromógeno
que comprende una hexosaminida; carbohidrato en el intervalo
1-5 g/litro y un alcohol, que no es un carbohidrato,
que comprende entre 1 y 5 átomos de carbono; siendo el medio tal
que el crecimiento de la levadura Candida en condiciones
apropiadas da como resultado la hidrólisis del cromógeno para
generar un cromóforo de un color derivado que es un color diferente
del generado por hidrólisis del cromógeno en un medio estándar que
carece esencialmente de un alcohol pero por lo demás es idéntico al
medio de la invención.
2. Un medio de acuerdo con la reivindicación 1,
en el cual el cromógeno se hidroliza en presencia de C.
albicans para dar un cromóforo con un color derivado.
3. Un medio de acuerdo con la reivindicación 1 ó
2, en el cual el cromógeno comprende una glucosaminida.
4. Un medio de acuerdo con la reivindicación 1 ó
2, en el cual el cromógeno corresponde a la fórmula general
X-GluNAc (en donde Glu es glucosa, NAc es un grupo
N-acetilo y X es un cromóforo); o
X-Gal-NAc (en donde Gal es
galactosa, NAc es un grupo N-acetilo y X es un
cromóforo).
5. Un medio de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 4, que comprende carbohidrato en el intervalo
de 2-4 g/litro.
6. Un medio de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, que comprende glucosa.
7. Un medio de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, que comprende un alcohol en el
intervalo de 1-10 ml/l.
8. Un medio de acuerdo con la reivindicación 7,
que comprende un alcohol en el intervalo de 5-7
ml/l.
9. Un medio de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en donde el alcohol comprende entre 2
y 4 átomos de carbono.
10. Un medio de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones anteriores, que comprende etanol.
11. Un medio de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones anteriores que comprende
5-bromo-4-cloro-3-indolil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida
o sal de p-toluidina de
5-bromo-6-cloro-3-indolil-fosfato
o
5-bromo-6-cloro-3-indolil-N-acetil-\beta-D-glucosaminida
o X-GalNAc (en donde Gal es galactosa, NAc es un
grupo N-acetilo y X es un cromóforo) o sal de
p-toluidina de
5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato
o
6-cloro-3-indoxil-fosfato.
12. Un medio de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones anteriores, que comprende uno o más de los
siguientes: ácido málico; peptonas; y KH_{2}PO_{4}.
13. Un método de detección y/o identificación de
una levadura Candida en una mezcla, comprendiendo el método
los pasos de: poner en contacto la muestra con un medio de acuerdo
con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores; incubar el
medio, en condiciones apropiadas, para permitir el crecimiento de la
levadura Candida; y detectar la presencia de un cromóforo
que tiene un color derivado indicativo de la presencia de la
levadura Candida.
14. Un método de detección y/o identificación de
C. albicans de acuerdo con la reivindicación 13.
15. Un método de acuerdo con la reivindicación
13 ó 14, en el cual el medio se incuba a una temperatura
comprendida en el intervalo de 30-37ºC durante al
menos 24 horas.
16. Un método de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 13-15, que distingue entre
C. albicans, C. tropicalis, y C. krusei.
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