ES2323634T5 - Proteínas quiméricas l1 del virus del papiloma humano 16 que contienen un péptido l2, partículas tipo virus preparadas a partir de estas proteínas y un método para preparar las partículas - Google Patents

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Abstract

Un método para producir un polipéptido L1 quimérico del virus de papiloma humano (HPV) que contiene un péptido L2 del HPV, preferiblemente un polipéptido o péptido del HPV-16, comprendiendo el método las etapas de: introducir una secuencia de ADN que codifica para el péptido L2 en una secuencia de ADN que codifica para el polipéptido L1; introducir la secuencia de ADN que incluye las secuencias para el polipéptido L1 y el péptido L2 en una célula huésped en la cual se puede expresar la secuencia de ADN; causar la expresión de la secuencia de ADN, preferiblemente o bien en un sistema de expresión de procariota o en un sistema de expresión de eucariota; y recuperar al polipéptido quimérico L1 resultante que incluye al péptido L2

Description

Proteínas quiméricas l1 del virus del papiloma humano 16 que contienen un péptido l2, partículas tipo virus preparadas a partir de estas proteínas y un método para preparar las partículas
Antecedentes de la invención
La invención se relaciona con un método para preparar polipéptidos, y en particular partículas tipo virus (VLP) o capsómeros del virus del papiloma humano.
Los virus del papiloma son un grupo de virus de ADN pequeño, que inducen verrugas y otras lesiones en una variedad de vertebrados superiores incluidos los humanos.
Los virus del papiloma (PV) son miembros del género Papillomavirus, familia Papillomaviridae, y contienen un genoma circular de ADN bicatenario con un tamaño típico de 7.900 pares de bases (Seedorf y colaboradores, 1985). Todos los PV tienen una organización genómica similar, con una región génica temprana que codifica proteínas involucradas en la replicación del ADN y en la transformación celular, y una región tardía que codifica las proteínas de la cápside viral (Figura 1). Una región no codificadora conocida como la región larga de control (LCR) contiene elementos de control para transcripción y replicación.
Los virus del papiloma codifican dos proteínas virales estructurales, L1 y L2. El virión contiene 360 moléculas L1 1 dispuestas como 72 capsómeros, cada uno de los cuales es un pentámero compuesto de cinco moléculas L1 (Baker y colaboradores, 1991). La proporción de moléculas L1 a L2 ha sido estimada aproximadamente en 30:1 (Doobar y colaboradores, 1987), lo que sugiere que cada virión contendría aproximadamente doce moléculas L2. El mayor número de moléculas L1 por virión ha conducido a denominar a L1 como a la proteína ‘principal’ de la cápside y a denominar a L2 como a la proteína ‘secundaria’ de la cápside.
L1 de HPV-16 es codificada por un gen de 1.518 kb, dando lugar a una proteína de 504 aminoácidos. L1 1 tiene un peso molecular de 55 a 58 kD (Browne y colaboradores, 1988). Los dominios de L1 probablemente median el enlazamiento celular y contengan determinantes antigénicos que median las respuestas inmunes de las células T y del anticuerpo al virus.
Entre los virus del papiloma humano genital (HPV) existen HPV de bajo riesgo (por ejemplo, HPV 6 y HPV 11) que causan verrugas genitales y lesiones cervicales que usualmente retroceden o no progresan hasta malignidad, y genotipos de alto riesgo (u oncogénicos) (por ejemplo, HPV 16 y HPV 18), que están asociados en gran medida con lesiones cervicales y carcinomas. Los HPV han sido considerados también como los agentes etiológicos en varios otros cánceres anogenitales y del tracto aerodigestivo (Breitburd y colaboradores, 1999). Un cuerpo apremiante de evidencia clínica, molecular, experimental y epidemiológica ha establecido que ciertos tipos de HPV son la causa principal del cáncer cervical (Lowy y colaboradores, 1994; IARC, 1995).
HPV 16 está presente en la mayoría de los casos del cáncer cervical y tres tipos adicionales (HPV 18, 31 y 45) están presentes en aproximadamente un 30% adicional de los casos (IARC, 1999).
Aunque la incidencia del cáncer cervical está disminuyendo en los EU, es la neoplasia maligna más frecuente en mujeres en países en desarrollo, con aproximadamente 500.000 nuevos casos diagnosticados cada año.
Tradicionalmente, la mayoría de las vacunas profilácticas han consistido de virus vivos atenuados de virus inactivados con formalina. Los viriones del virus de papiloma son altamente inmunogénicos, induciendo títulos altos (> 100.000) de anticuerpos de neutralización cuando se los inocula sistémicamente (Doretzky y colaboradores, 1980; Kimbauer y colaboradores, 1991, 1992). Sin embargo, debido a las dificultades y a los riegos involucrados en la generación de grandes cantidades de estas vacunas tradicionales, se ha hecho un gran énfasis en el desarrollo de subunidades de proteína viral o de vacunas de partículas tipo virus (VLP).
La mejor proteína candidata para una vacuna profiláctica contra HPV es la proteína principal L1 de la cápside, que se autoensambla en las VLP (Schiller y Lowy, 2001). Estas VLP están muy bien caracterizadas, y morfológicamente parecen indistinguibles de todos los viriones (Chen y colaboradores, 2001; Rose y colaboradores, 1993). La inyección de las VLP en animales experimentales induce anticuerpos neutralizadores (Rose y colaboradores, 1998); los ensayos preliminares en humanos de vacunas inyectadas de VLP han demostrado también que estas son bien toleradas y son altamente inmunogénicas, y en el último caso, estimularon respuestas robustas de células B y T (Evans y colaboradores, 2001; Harro y colaboradores, 2001).
Una vacuna profiláctica barata ye efectiva contra tipos oncogénicos de los HPV mucotrópicos podría tener un impacto potencial sobre el agobio del cáncer en el mundo, especialmente contra HPV 16.
Un epítopo común de neutralización para los HPV tipos 6 y 16 ha sido encontrado en la región (aa) 108 - 120 de la proteína secundaria de la cápside del HPV 16, L2 (Kawana y colaboradores, 1998, 1999). Los ratones Balb/c que fueron inmunizados en forma nasal con un péptido sintético correspondiente al epítopo produjeron una respuesta inmune que resultó en anticuerpos IgA e IgG que reaccionan en forma cruzada con las cápsides L1/L2 del HPV 6, 16 y 18 (Kawana y colaboradores, 2001). La inmunización de conejos con cualquiera de los dos péptidos que se superponen derivados de la región 94 - 122 de la secuencia L2 ya sea virus del papiloma oral de conejo (ROPV) o virus del papiloma del conejo común (CRPV) dio como resultado sueros que reaccionaron con el análogo purificado L2, específicamente el L2 reconocido en células infectadas y en virus neutralizado in vitro. Los conejos inmunizados con péptidos del CRPV fueron inmunes al reto del CRPV (Embers y colaboradores, 2002).
Los inventores decidieron por lo tanto investigar adicionalmente la presentación de este epítopo L2 sobre las VLP L1 quiméricas como vacuna.
En relación con el estado del arte, Müller y colaboradores (1997, Virology, vol. 234 (1), páginas 93 - 111) describen proteínas quiméricas L1 del HPV 16 que tienen insertada una secuencia E7 del HPV-16 ya sea en la posición C-terminal
o en una posición intermedia.
Además, Slupetzky y colaboradores (2001, J. Gen. Virol, vol. 82, páginas 2799 - 2804) describen proteínas quiméricas L1 del HPV-16 que tienen insertadas en diferentes bucles de la superficie de la cápside al epítopo LELDKWAS del péptido de la célula B de 8aa del gp41 del VIH-1.
Resumen de la invención
De acuerdo con una primera realización de la invención, se provee un método parta producir un polipéptido L1 del virus de papiloma humano quimérico (HPV) que contiene un péptido L2 del HPV, comprendiendo el método las etapas de:
introducir una secuencia de ADN que codifica para el péptido L2 en una secuencia de ADN que codifica para el polipéptido L1;
introducir la secuencia de ADN que incluye las secuencias para el polipéptido L1 y el péptido L2 en una célula huésped en la cual se puede expresar la secuencia de ADN;
causar la expresión de la secuencia de ADN; y
recuperar al polipéptido quimérico L1 resultante que incluye al péptido L2,
donde el polipéptido quimérico tiene la secuencia de aminoácidos definida en cualquiera de las Figuras 6, 10, 12 y 14 (SQ ID NOS: 5, 9, 11 y 13).
El polipéptido L1 del HPV y el péptido L2 del HPV son del HPV-16.
El péptido L2 del HPV tiene la siguiente secuencia de aminoácidos: LVEETSFIDAGAP (SEQ ID NO: 1.
La expresión de la proteína podría ser o bien en un sistema de expresión procariota o en uno eucariota. De la misma forma, en el método, la secuencia de ADN que codifica para el polipéptido quimérico puede ser la secuencia de ADN establecida en cualquiera de las Figuras 5, 7, 9, 11 y 13 (SEQ ID NOS: 4, 6, 8, 10 y 12).
El polipéptido quimérico L1 puede ensamblarse dentro de las partículas tipo virus y/o los capsómeros. La partícula tipo virus o el capsómero pueden ser inmunogénicos.
De acuerdo con una segunda realización de la invención, se provee una secuencia quimérica de ADN para el L1 del HPV dentro de la cual ha sido insertada la secuencia de ADN que codifica para el anterior péptido L2 del HPV (SEQ ID NO: 1), siendo la secuencia resultante de L1 del HPV, capaz de expresar al péptido L2 del HPV, en donde la secuencia quimérica de ácido nucleico puede ser una secuencia como la establecida en cualquiera de las Figuras 5, 7, 9, 11 y 13.
De acuerdo con una tercera realización de la invención, se provee un vector que incluye la secuencia de ácido nucleico descrita anteriormente.
De acuerdo con una cuarta realización de la invención, se provee una célula huésped que incluye el vector descrito anteriormente.
De acuerdo con una realización adicional de la invención, se provee un polipéptido del HPV que tiene la secuencia de aminoácidos establecida en cualquiera de las Figuras 6, 8, 10, 12 y 14 (SEQ ID NOS: 5, 7, 9, 11 y 13.
De acuerdo con otra realización de la invención, se provee un método para producir un polipéptido quimérico L1 del virus de papiloma humano (HPV) que contiene un péptido heterólogo, el cual es el péptido heterólogo L2 del HVL de SEQ ID NO:1, comprendiendo el método las etapas de:
introducir una secuencia de ADN que codifica para el péptido heterólogo en una secuencia de ADN que codifica para el polipéptido L1 por medio del reemplazo de las posiciones de los nucleótidos 241-279, 520-558, 1240-1278 ó 1291-1329 con dichas secuencias de ADN que codifican para dicho péptido heterólogo;
introducir la secuencia de ADN que incluye las secuencias para el polipéptido L1 y el péptido heterólogo en una célula huésped en la cual se puede expresar la secuencia de ADN;
provocar la expresión de la secuencia de ADN; y
recuperar al polipéptido quimérico resultante L1 que incluye al péptido heterólogo.
De acuerdo con aún una una realización adicional de la invención, se provee una vacuna que incluye al polipéptido quimérico L1 del HPV o una secuencia de ADN que codifica para el polipéptido, sustancialmente como se describió anteriormente. La vacuna puede ser para tratamiento profiláctico o terapéutico de la infección con el HPV, en particular HPV 6, 16 y 18.
La vacuna será capaz de inducir una respuesta inmunogénica para HPV y para el péptido introducido en un huésped adecuado.
La vacuna puede incluir además un excipiente y/o adyuvante farmacéutico.
Descripción de los dibujos
La Figura 1
muestra una representación diagramática de la organización genómica de HPV 16;
La Figura 2
muestra la estructura monomérica de L1 del HPV 16;
La Figura 3
muestra la secuencia de nucleótidos de la secuencia nativa del gen para L1 del HPV 16 dentro de la
cual se insertó el epítopo de L2 para producir los constructos quiméricos de las Figuras 5 a 14 (SEQ ID
NO: 2);
La Figura 4
muestra la secuencia de aminoácidos de la Figura 3 (SEQ ID NO: 3);
La Figura 5
muestra la secuencia de nucleótidos del constructo quimérico A (SEQ ID NO: 4);
La Figura 6
muestra la secuencia de aminoácidos del constructo quimérico A (SEQ ID NO: 5);
La Figura 7
muestra la secuencia de nucleótidos del constructo quimérico C (SEQ ID NO: 6);
La Figura 8
muestra la secuencia de aminoácidos del constructo quimérico C (SEQ ID NO: 7);
La Figura 9
muestra la secuencia de nucleótidos del constructo quimérico E (SEQ ID NO: 8);
La Figura 10
muestra la secuencia de aminoácidos del constructo quimérico E (SEQ ID NO: 9);
La Figura 11
muestra la secuencia de nucleótidos del constructo quimérico F (SEQ ID NO: 10);
La Figura 12
muestra la secuencia de aminoácidos del constructo quimérico F (SEQ ID NO: 11);
La Figura 13
muestra la secuencia de nucleótidos del constructo quimérico H (SEQ ID NO: 12);
La Figura 14
muestra la secuencia de aminoácidos del constructo quimérico H (SEQ ID NO: 13);
La Figura 15
muestra una representación diagramática del constructo quimérico A;
La Figura 16
muestra una representación diagramática del constructo quimérico C;
La Figura 17
muestra una representación diagramática del constructo quimérico E;
La Figura 18
muestra una representación diagramática del constructo quimérico F;
La Figura 19
muestra una representación diagramática del constructo quimérico H;
La Figura 20
muestra los datos obtenidos a partir de las titulaciones de punto final de ratones inoculados con las VLP
quiméricas obtenidas del constructo A;
La Figura 21 muestra los datos obtenidos a partir de las titulaciones de punto final de ratones inoculados con las VLP quiméricas obtenidas del constructo C; La Figura 22 muestra los datos obtenidos a partir de las titulaciones de punto final de ratones inoculados con las VLP
quiméricas obtenidas del constructo E;
La Figura 23 muestra los datos obtenidos a partir de las titulaciones de punto final de ratones inoculados con las VLP quiméricas obtenidas del constructo F; La Figura 24 muestra los datos obtenidos a partir de las titulaciones de punto final de ratones inoculados con las VLP
quiméricas obtenidas del constructo H;
La Figura 25 muestra los datos obtenidos a partir de las titulaciones de punto final de ratones inoculados con las VLP obtenidas de una L1 no quimérica del HPV 16 (SA-opt); La Figura 26 muestra la respuesta de los ratones a los refuerzos después de la inmunización inicial; La Figura 27 muestra la secuencia de nucleótidos del péptido L2 que fue insertado en la secuencia L1 (SEQ ID NO:
14); y
La Figura 28 muestra la secuencia de aminoácidos del péptido L2 que fue insertado en la secuencia L1 (SEQ ID NO: 1). Descripción detallada de una realización de la invención Diseño de constructos quiméricos Se sintetizaron los cebadores que codifican al péptido: LVEETSFIDAGAP (SEQ ID NO: 1) que es un epítopo común de neutralización para HPV 6 y 16 en la región (aa) 108 - 120 de la proteína secundaria de la
cápside del HPV, L2.
Se acuerdo con la estructura monomérica de L1 del HPV 16 publicada por Chen y colaboradores (2000) (Figura 2), se exponen diferentes bucles y de regiones superficiales cuando se forman pentámeros y estructuras de orden superior. Con base en el mapeo del epítopo del anticuerpo V5 (anticuerpo de neutralización erigido para L1), se seleccionaron
diferentes regiones/bucles para la inserción del péptido L2 para mantener la región de enlazamiento del anticuerpo V5
de las VLP de L1. Se ha mapeado la región antigénica principal (región de enlazamiento V5) de la molécula L1 con los residuos aminoácidos A266, (estando localizado F50 debajo del residuo superficial V271) y S282 (Roden y colaboradores, 1996, White y colaboradores, 1999). Con base en estos residuos, los inventores decidieron no alterar el bucle B de la molécula, ya que esto alteraría la región antigénica y posiblemente destruiría epítopos vitales de L1.
Las siguientes regiones de L1 fueron seleccionadas por lo tanto para inserción del péptido L2:
A: bucle E - F (SEQ ID NOS: 4 y 5)
C: bucle D - E (SEQ ID NOS: 6 y 7)
E: región entre la hélice h4 y la región J de L1 (SEQ ID NOS: 8 y 9)
F: hélice h4 (SEQ ID NOS: 10 y 11)
H: bucle interno C - D (SEQ ID NOS: 12 y 13)
5 Síntesis de constructos quiméricos
Se prepararon los constructos quiméricos por medio de PCR siendo diseñados los cebadores con el extremo 3’ que codifica para el péptido L2. Se utilizó como molde el gen SA-opt para L1 del HPV (Figuras 3 y 4) clonado en el vector del plásmido pSK. Se utilizó la siguiente secuencia de ADN para codificar al péptido L2:
5’ - TTAGTGGAAGAAACTAGTTTTATTGATGCTGGTGCACCA - 3’ (SEQ ID NO: 14).
10 Se insertó el péptido L2 en el gen por medio del reemplazo de las regiones mostradas en la Tabla 1. Este método de reemplazo de los nucleótidos existentes, en lugar de limitarse a insertar los nucleótidos para L2 dentro de la secuencia de L1 sin ningún reemplazo, es conveniente porque las alteraciones de la estructura terciaria se mantienen en un mínimo, y la posibilidad de efectos estéricos o de interferencias con el enlazamiento del anticuerpo con secuencias cercanas debido a “bucles” extra de péptidos se minimiza.
15 Se describe la posición del epítopo insertado de L2 por los constructos quiméricos en las Figuras 15 a 19 respectivamente.
Los genes quiméricos de los constructos secuenciados pSK fueron clonados dentro de un vector pFastbac1 (sitio Sal I / Xba I). Se utilizó el ADN de los clones de pFastbac1 para transfectar las células DH10bac para preparar clones bácmidos.
20 Los constructos quiméricos se expresaron en células de insectos utilizando el sistema de expresión de baculovirus Bacto-Bac® (Life Technologies).
Tabla 1: Inserción del péptido L2
Constructo quimérico
Posición del nucleótido del péptido L2 Mostrado en la Figura No. (SEQ ID NO) Posición del aminoácido del péptido L2 Mostrado en la Figura No. (SEQ ID NO)
A C E F H
520 - 558 391 - 429 1291 - 1329 1240 - 1278 241 - 279 5 (4) 7 (6) 9 (8) 11 (10) 13 (12) 174 - 186 131 - 143 431 - 443 414 - 426 81 - 93 6 (5) 8 (7) 10 (9) 12 (11) 14 (13)
El ADN de bácmido fue transferido dentro de células de insectos sf21 (Spodoptera frugiperda) utilizando Cellfectin. Se 25 siguió el protocolo básico de Bac-to-Bac® para amplificar al virus recombinante e infectar las células de insecto sf21 para expresión de las VLP quiméricas.
Se siguió un protocolo básico de purificación de VLP de L1 del HPV. Se hicieron girar las células infectadas de insecto a
3.000 rpm y se las resuspendió en solución salina amortiguada con fosfato (PBS) con NaCl 0,5 M. Se sonicó la suspensión 4 veces con intervalos de 5 segundos. Esta fue luego colocada sobre un cojín de sacarosa al 40% y se
30 precipitó a 100.000 x g durante 3 horas. Se resuspendió el precipitado en amortiguador de CsCl (PBS con 0,4 g/ml de CsCl) y se resuspendió preparando a través de agujas de calibre 18 y 26 para reducir la viscosidad antes de la sonicación (4 veces con intervalos de 5 segundos). Se centrifugó la suspensión a 100.000 x g a 10°C durante 24 horas.
No se observaron bandas distintas en los gradientes de CsCl. Se recogieron por lo tanto fracciones de 500 1l y se las analizó por medio de ELISA utilizando anticuerpos monoclonales V5 y D9 (epítopo lineal) específicos para conformación. Se reunieron las fracciones que se encontró que reaccionaban con los anticuerpos V5 y/o D9 y se dializó contra PBS a 4°C durante la noche.
5 Resultados
Las transferencias Western demostraron que un anticuerpo monoclonal L2 surgido contra el péptido en conejos (obtenidos con el Dr. Neil Christensen del Jake Gittlen Cancer Research Institute, The Milton S. Hershey Medical Centre, Hersey Pennsylvania, EUA) enlazado a las partículas quiméricas L1 (55 kD), mostrando que el epítopo L2 se expresa por medio de los constructos quiméricos.
10 La caracterización del anticuerpo de las VLP purificadas se llevó a cabo por medio de ELISA utilizando un panel de anticuerpos suministrado por el Dr. Neil Christensen (Chistensen y colaboradores, 1996, 2001). La Tabla 2 resume los datos.
Tabla 2
V5
E70 U4 9A D9 123 L2
A
+ - + + + + +
C
- - + + + + +
E
+ + + + + + +
F
+ + + + + + +
H
- - - - + + +
SA-opt L1
+ + + + - + -
15 A continuación se da una breve descripción de los anticuerpos y sus regiones de enlazamiento en la Tabla 3.
V5
Monoclonal, anticuerpo de conformación específica; siendo críticos aa 266 y 282
E70
Monoclonal, anticuerpo de conformación específica; siendo críticos aa 50, 266 y 282
U4
Monoclonal, anticuerpo de conformación específica
9A
Monoclonal, se enlaza a una región lineal en el área aa 1 - 171
D9
Monoclonal, se enlaza a la proteína desnaturalizada L1
123
Monoclonal, se enlaza en la región aa 11 - 130
L2
Anticuerpo policlonal que se enlaza al epítopo de L2 (aa 108 - 120)
Microscopía electrónica de las partículas quiméricas
Los resultados por EM mostraron que las partículas formadas a partir de los constructos quiméricos no son idénticas a aquellas producidas por el gen para L1 del HPV de tipo silvestre. Las partículas formadas están principalmente en 20 estado parcialmente roto o parcialmente disociado y generalmente se consideran que se aglutinan juntas.
Experimentación en animales con antígeno quimérico Se utilizaron seis grupos de 5 ratones Balb/c para la experimentación en animales para determinar si la inoculación con las VLP quiméricas produjo una respuesta inmune. Las VLP quiméricas producidas a partir de 5 constructos quiméricos y las VLP producidas a partir de L1 no quimérica del HPV 16 (SA-opt) fueron inyectadas con una concentración de 100
1g en dos sitios subcutáneos. Los animales fueron inoculados en las semanas 0, 2 y 4. Se tomaron muestras de sangre y lavados vaginales en diferentes periodos de tiempo. Se reunieron los sueros de los ratones de cada grupo y se los analizó por medio de ELISA utilizando las VLP producidas
en células de insectos por baculovirus recombinantes. Se llevaron a cabo titulaciones de punto final para cada grupo de ratones para determinar el grado de respuesta y producir una mejor reflexión de la respuesta (Figuras 20 a 26). Los resultados indican que se logró una respuesta inmune mayor. REFERENCIAS Baker, T. S., W. W. Newcomb, N. H. Olson, L. M. Cowsert, C. Olson, Y J. C. Brown. 1991. Biophys. J. 60: 1445 - 1456. Breitburd, F. y P. Coursaget. 1999. Cancer Biology 9: 431 - 445. Browne, H. M., M. J. Churcher, M. A. Stanley, G. L. Smith, y A. C. Minson. 1988. J. Gen. Virol. 69, 1263 - 1273. Chen, X. S., Garcea, R. L., Goldberg, I., Casini, G., y Harrison, S. C. (2000). Mol Cell 5, 557 - 567.
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Claims (10)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un método para producir un polipéptido L1 quimérico del virus de papiloma humano (HPV) que contiene un péptido L2 del HPV, preferiblemente un polipéptido o péptido del HPV-16, comprendiendo el método las etapas de:
    introducir una secuencia de ADN que codifica para el péptido L2 en una secuencia de ADN que codifica para el polipéptido L1;
    introducir la secuencia de ADN que incluye las secuencias para el polipéptido L1 y el péptido L2 en una célula huésped en la cual se puede expresar la secuencia de ADN;
    causar la expresión de la secuencia de ADN, preferiblemente o bien en un sistema de expresión de procariota o en un sistema de expresión de eucariota; y
    recuperar al polipéptido quimérico L1 resultante que incluye al péptido L2, en donde el polipéptido quimérico tiene una secuencia de aminoácidos establecida en cualquiera de las Figuras 6, 10, 12 y 14 (SEQ ID NOS: 5, 9, 11 y 13).
  2. 2.
    Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la secuencia de ADN que codifica para el polipéptido quimérico tiene una secuencia de ADN establecida en cualquiera de las Figuras 5, 9, 11 y 13 (SEQ ID NOS: 4, 8, 10 y 12).
  3. 3.
    Un método de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en donde el polipéptido quimérico L1 es capaz de ensamblarse dentro de las partículas tipo virus y/o los capsómeros, preferiblemente las partículas inmunogénicas tipo virus o los capsómeros.
  4. 4.
    Una secuencia de ADN de virus de papiloma humano (HPV) que tiene una secuencia de ADN establecida en cualquiera de las Figuras 5, 9, 11 y 13 (SEQ ID NOS: 4, 8, 10 y 12).
  5. 5.
    Un vector que incluye una secuencia de ADN como se describe en la reivindicación 4.
  6. 6.
    Una célula huésped que incluye un vector como el reivindicado en la reivindicación 5.
  7. 7.
    Un polipéptido del virus de papiloma humano (HPV) que tiene una secuencia de aminoácidos establecida en cualquiera de las Figuras 6, 10, 12 y 14 (SEQ ID NOS: 5, 9, 11 y 13).
  8. 8.
    Un método para producir un polipéptido quimérico L1 del virus de papiloma humano (HPV) que contiene un péptido heterólogo, que es el péptido L2 del HPV de la SEQ. ID NO. 1 comprendiendo el método las etapas de:
    introducir una secuencia de ADN que codifica para el péptido heterólogo en una secuencia de ADN que codifica para el polipéptido L1 por medio del reemplazo de las posiciones de los nucleótidos 241-279, 520-558, 1240-1278 ó 1291-1329 con dicha secuencia de ADN que codifica para dicho péptido heterólogo;
    introducir la secuencia de ADN que incluye las secuencias para el polipéptido L1 y el péptido heterólogo en una célula huésped en la cual se puede expresar la secuencia de ADN;
    provocar la expresión de la secuencia de ADN; y
    recuperar al polipéptido quimérico resultante L1 que incluye al péptido heterólogo.
  9. 9.
    Una vacuna que incluye un polipéptido quimérico L1 del virus del papiloma humano (HPV) como se describe en la reivindicación 8 o una secuencia de ADN como se describe en la reivindicación 4, preferiblemente para uso en el tratamiento terapéutico o profiláctico de una infección con HPV, y más preferiblemente para uso en el tratamiento de HPV 6, 16 ó 18.
  10. 10.
    Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 9, que es capaz de inducir una respuesta inmunogénica para HPV y/o para el péptido introducido en un huésped adecuado, y que comprende además un excipiente y/o adyuvante farmacéutico.
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