ES2337492T3 - Formulaciones y formas de uso de la vacuna capsomero de virus de papiloma. - Google Patents
Formulaciones y formas de uso de la vacuna capsomero de virus de papiloma. Download PDFInfo
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Abstract
Una formulación antigénica que comprende un capsómero de virus de papiloma humano para usar como una vacuna, estando dicho capsómero compuesto de una proteína de fusión compuesta de proteína L1 de virus de papiloma humano, residuos de amino ácido adyacentes de una segunda proteína, donde la segunda proteína es un antígeno de tumor humano, un antígeno viral o antígeno bacterial, provocando dicha formulación una respuesta inmune la cual neutraliza los viriones del virus de papiloma humano donde dicho capsómero es obtenido por separación de partículas tipo virus.
Description
Formulaciones y formas de uso de la vacuna
capsómero de virus de papiloma.
La presente invención se relaciona con
formulaciones de vacunas que comprenden proteínas del virus del
papiloma, como proteínas de fusión, proteínas truncadas, o
proteínas de fusión truncadas. La invención adicionalmente abarca
métodos para producir capsómeros de las formulaciones, como también
métodos profilácticos y terapéuticos para su uso.
Infecciones con ciertas cepas de alto riesgo de
virus genital de papiloma en humanos (VPH) -por ejemplo. VPH 16,
18, o 45- se cree que son el principal factor de riesgo para la
formación de tumores malignos del tracto anogenital. De las
posibles malignidades, el carcinoma cervical es, con mucho, el más
frecuente: de acuerdo a un estimado por la Organización Mundial de
la Salud (OMS), casi 500.000 nuevos casos de la enfermedad ocurren
anualmente. Por la frecuencia con la cual ocurre esta patología, la
conexión entre infección con VPH y carcinoma cervical ha sido
extensivamente examinada, llevando a numerosas generalizaciones.
Por ejemplo, se conocen lesiones precursoras de
neoplasia intraepitelial cervical (NIC) por ser causadas por
infecciones con el virus del papiloma [Crum, New Eng. J. Med.
310.880-883 (1984)]. ADN de los genomas de ciertos
tipos de VPH, incluyendo por ejemplo, cepas 16, 18, 33, 35, y 45,
han sido detectados en mas de 95% de las biopsias de tumor de
pacientes con esta enfermedad, como también en líneas celulares
primarias cultivadas de los tumores. Se ha encontrado que
aproximadamente 50 a 70% de las células tumorales NIC incluyen ADN
derivado solo de VPH 16.
Los productos de proteínas de los genes
tempranos de VPH 16 y VPH 18 E6 y E7 han sido detectados en líneas
celulares de carcinoma cervical como también en queratinocitos
humanos transformados in vitro [Wettstein, et al., en
PAPILLOMA VIRUSES AND HUMAN CANCER, Pfister (Ed.),CRC Press: Boca
Raton, FL 1990 pp 155-179] y un porcentaje
significativo de pacientes con carcinoma cervical tienen anticuerpos
anti-E6 o anti-E7. Se ha mostrado
que las proteínas E6 y E7 participan en inducción de síntesis de ADN
celular en células humanas, transformación de queratinocitos
humanos y otros tipos de células, y formación de tumores en ratones
transgénicos [Arbelt, et al., J. Virol. ,
68:4358-4364 (1994): Auewarakul, et al., Mol.
Cell. Biol. 14:8250-8258 (1994); Barbosa. et
al., J. Virol. 65:292-298 (1991); Kaur, et
al., J. Gen. Virol. 70:1261-1266 (1989):
Schlegel, et al., EMBO J., 7:3181-3187
(1988)]. La expresión constitutiva de las proteínas E6/E7 parece ser
necesaria para mantener la condición transformada de tumores
VPH-positivos.
A pesar de la capacidad de algunas cepas VPH
para inducir fenotipos neoplásicos in vivo e in vitro,
todavía otros tipos de VPH causan verrugas genitales benignas tales
como Condylomata acuminata y son solo raramente asociados
con tumores malignos [Ikenberg. In Gross, et al., (eds.)
GENITAL PAPILLOMAVIRUS INFECTIONS. Springer Verlag: Berlin, pp.,
87-112]. Cepas de bajo riesgo de este tipo incluyen,
por ejemplo, VPH 6 y 11.
Más a menudo, los virus del papiloma genital
humano son transmitidos entre humanos durante el coito, lo cual en
muchos casos, conlleva a la infección persistente en la membrana
mucosa anogenital. Mientras esta observación sugiere que la
infección primaria induce una respuesta inmune inadecuada o que el
virus ha desarrollado la habilidad de evadir la vigilancia inmune,
otras observaciones sugieren que el sistema inmune está activo
durante la manifestación primaria como también durante la
progresión maligna de infecciones del virus del papiloma [Altmann
et al. en VIRUSES AND CANCER, Minson et al., (eds.)
Cambridge University Press, (1994) pp. 71-80].
Por ejemplo, la manifestación clínica de la
infección primaria con virus de papiloma de conejo o bovino puede
ser prevenida con vacunación con extractos de verrugas o proteínas
estructurales virales [Altmann, et al., supra; Campo, Curr.
Top. En Microbiol and Immunol. 186:255-266 (1994);
Yindle and Frazer, Curr. Top. En Microbiol. and Immunol.
186;217-253 (1994)]. Roedores previamente vacunados
con recombinantes vaccinia que codifican proteínas tempranas VPH 16
E6 o E7, o con péptidos E6 o E7 sintéticos, son de la misma forma
protegidos de la formación de tumores después de la inoculación de
células transformadas autólogas VPH 16 [Altman, et al.,
supra; Campo, et al., supra; Yindle and Frazer, et al.
supra]. La regresión de las verrugas puede ser inducida por la
transferencia de linfocitos de animales regresores seguida de
infección por virus de papiloma animal. Finalmente, en pacientes
inmunosuprimidos, tales como, por ejemplo, receptores de
transplantes de órganos o individuos infectados con VIH, la
incidencia de verrugas genitales, NIC, y cáncer anogenital es
elevada.
DE4435907A y Virology 234, 1997, páginas
93-111 revela varios métodos para producir
partículas tipo virus VPH. W09531476A revela el uso de un
polipéptido sintético durante la preparación de una proteína de
fusión L1 recombinante.
Hasta la fecha, no se han descrito vacunas de
VPH que comprendan el virus del papiloma humano proteína L1 tardía
en la forma de capsómeros que sean adecuados para propósitos
profilácticos y terapéuticos. Ya que la proteína L1 no está
presente en lesiones genitales malignas, la vacunación con la
proteína L1 no tiene ningún potencial terapéutico para estos
pacientes. La construcción de proteínas quiméricas, que comprende
residuos de amino ácidos de la proteína L1 y, por ejemplo proteína
E6 o E7, lo que da lugar a capsómeros quiméricos, combina funciones
profilácticas y terapéuticas de una vacuna. Un método para
producción de alto nivel de capsómeros quiméricos sería por lo
tanto particularmente deseable, en vista de las posibles ventajas
ofrecidas por tal vacuna para intervención profiláctica y
terapéutica.
Por lo tanto existe una necesidad en la técnica
para proveer formulaciones de vacunas que puedan prevenir o tratar
infección con VPH. Métodos para producir formulaciones de vacuna que
superen los problemas conocidos en la técnica por ser asociados con
la expresión y purificación de la proteína VPH recombinante sería
manifiestamente útil para tratar la población de individuos ya
infectados con VPH como también sería útil para inmunizar la
población de individuos susceptibles a la infección con VPH.
La presente invención provee formulaciones
terapéuticas y profilácticas de la vacuna que comprenden capsómeros
de papiloma humano quiméricos. La invención también provee métodos
terapéuticos para tratar pacientes infectados con VPH como también
métodos profilácticos para prevenir la infección por VPH en un
individuo susceptible. Métodos para la producción y purificación de
capsómeros y proteínas de la invención también son contemplados.
En un aspecto de la invención, se consideran las
vacunaciones profilácticas para la prevención de la infección con
VPH las cuales incorporan las proteínas estructurales L1 y L2 del
virus del papiloma. El desarrollo de una vacuna de este tipo
enfrenta obstáculos significativos porque los virus del papiloma no
pueden ser propagados a titulaciones adecuadas en cultivos
celulares u otros sistemas experimentales para proveer las proteínas
virales en suficiente cantidad para una producción económica de la
vacuna. Además, metodologías recombinantes para expresar las
proteínas no son siempre sencillas y usualmente resultan en un bajo
rendimiento de proteína. Recientemente han sido descritas
partículas tipo-virus (VLPs), similares en
conformación a estructuras cápsidas virales, las cuales son
formadas en células Sf-9 de insecto en la expresión
de proteínas virales L1 y L2 (o L1 por sí sola) usando vaccinia
recombinante o baculovirus. La purificación de los VLPs puede ser
lograda muy simplemente por medio de centrifugación en CsCl o
gradientes de sacarosa [Kimbauer, et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. (USA), 99:12180-12814 (1992): Kirnbaurer, et
al., J. Virol. 67:6929-6936 (1994); Proso, et
al., J. Virol. 6714:1936-1944 (1992): Sasagawa,
et al., Virology 2016:126-195 (1995):
Volpers, et al., J. Virol. 69: 3258-3264
(1995); Zhou, et al., J. Gen. Virol.
74:762-769 (1993): Zhou, et al., Virology
185:251-257 (1991)].WO93/02184 describe un método
en el cual partículas tipo virus de papiloma (VLPs) son usadas para
aplicaciones diagnósticas o como una vacuna contra infecciones
causadas por el virus del papiloma. WO 94/00152 describe la
producción de proteína recombinante de L1 la cual imita el epítopo
neutralizante conformacional en viriones de papiloma humanos y
animales.
En otro aspecto de la invención, las
vacunaciones terapéuticas son provistas para aliviar complicaciones
de, por ejemplo, carcinoma cervical o lesiones precursoras
resultando de infección con virus del papiloma, y por lo tanto
representan una alternativa a la intervención profiláctica.
Vacunaciones de este tipo pueden comprender proteínas tempranas de
papiloma, principalmente E6 o E7, las cuales son expresadas en las
células infectadas persistentemente. Se asume que, siguiendo la
administración de una vacunación de este tipo,
células-T citotóxicas pueden ser activadas contra
células infectadas persistentemente en lesiones genitales. La
aplicación PCT de patente WO 93/20844 revela que la proteína
temprana E7 y fragmentos antigénicos de la misma del virus de
papiloma de VPH o VPB son terapéuticamente efectivos en la
regresión, pero no en la prevención, de tumores de virus de
papiloma en mamíferos. Mientras que proteínas VPH tempranas han sido
producidas por expresión recombinante en E. coli o tipos
celulares eucarióticos apropiados, la purificación de las proteínas
recombinantes se ha probado difícil debido a la baja solubilidad
inherente y procedimientos de purificación complejos los cuales
generalmente requieren una combinación de pasos, incluyendo
cromatografía de intercambio de iones, filtración en gel y
cromatografía de afinidad.
De acuerdo a la presente invención,
formulaciones de vacunas que comprenden capsómeros de virus del
papiloma están provistas las cuales comprenden (i) una primera
proteína que es una proteína viral intacta expresada como una
proteína de fusión comprendida en parte de residuos de amino ácidos
de una segunda proteína; donde la segunda proteína es un antígeno
tumoral humano, un antígeno viral o un antígeno bacterial, dicha
formulación provocando una respuesta inmune la cual neutraliza
viriones del virus de papiloma humano donde dicho capsómero es
obtenido por separación de o desensamblaje de partículas tipo virus.
De acuerdo a la invención, formulaciones de la vacuna están
provistas comprendiendo capsómeros de virus de papiloma bovino (VPB)
y virus de papiloma humano. Capsómeros de virus de papiloma bovino
preferidos comprenden proteínas de virus de papiloma bovino tipo 1.
Capsómeros de virus de papiloma humano preferidos comprenden
proteínas de cualquiera de las cepas de virus de papiloma humano
VPH6, VPH11, VPH16, VPH18, VPH33, VPH35, y VPH45. Las formulaciones
de la vacuna más preferidas comprenden capsómeros que comprenden
proteínas de VPH16.
En un aspecto, formulaciones de vacuna capsómero
de la invención comprenden una primera proteína viral intacta
expresada como una proteína de fusión con residuos de amino ácido
adicionales de una segunda proteína. Proteínas virales intactas
preferidas son las proteínas estructurales virales de papiloma L1 y
L2. Capsómeros compuestos de fusiones de proteína viral intacta
pueden ser producidos usando las proteínas L1 y L2 juntas o la
proteína L1 solamente. Capsómeros preferidos están hechos
completamente de proteínas de fusión L1, la secuencia de amino
ácido la cual es expuesta en SEQ ID NO: 2 y codificada por la
secuencia de polinucleótido de SEQ ID NO: 1. Amino ácidos de la
segunda proteína pueden ser derivados de numerosas fuentes
(incluyendo residuos de amino ácido de la primera proteína) siempre
y cuando la adición de los residuos de amino ácido de la segunda
proteína a la primera proteína permita la formación de capsómeros.
Preferiblemente, la adición de los residuos de amino ácido de la
segunda proteína inhibe la habilidad de la proteína viral intacta de
formar estructuras de partícula tipo virus; más preferiblemente,
los residuos de amino ácido de la segunda proteína promueven la
formación de capsómeros. En una modalidad de la invención, la
segunda proteína puede ser cualquier antígeno tumoral humano,
antígeno viral, o antígeno bacterial el cual es importante en la
estimulación de una respuesta inmune en estados de enfermedades
neoplásicas o infecciosas. En una modalidad preferida, la segunda
proteína es también una proteína de virus de papiloma. También es
preferido que la segunda proteína sea el producto de la expresión
del gen temprano del virus de papiloma. También es preferido, sin
embargo, que la segunda proteína sea seleccionada del grupo de E1,
E2, E3, E4, E5. E6, y E7 - productos tempranos de genes codificados
en el genoma de las cepas de virus de papiloma VPH6, VPH11, VPH18,
VPH33, VPH35, o VPH 45. Es más preferido que la segunda proteína
sea codificada por el VPH16 gen E7, el marco de lectura abierto el
cual es dispuesto en SEQ ID NO: 3. Capsómeros ensamblados de
subunidades de proteína de fusión son referidos de aquí en adelante
como capsómeros quiméricos. En una modalidad, la formulación de la
vacuna de la invención es compuesta de capsómeros quiméricos donde
residuos de amino ácidos de la proteína L1 forman aproximadamente 50
a 99% del total de residuos de amino ácidos de proteína de fusión.
En otra modalidad, residuos de amino ácido L1 forman
aproximadamente 60 a 90% del total de los residuos de amino ácido de
la proteína de fusión; en una modalidad particularmente preferida,
amino ácidos L1 comprenden aproximadamente 80% de los residuos de
amino ácido de proteína de fusión.
En otro aspecto de la invención el cual es el
tema de la aplicación de patente EP 98950930.2, formulaciones de
vacuna de capsómero son provistas que son compuestas de proteínas
virales truncadas teniendo una supresión de uno o más residuos de
amino ácidos necesarios para la formación de una partícula tipo
virus. Es preferido que la supresión de amino ácido no inhiba la
formación de capsómeros por la proteína truncada, y es más preferido
que la supresión favorezca la formación del capsómero.
Formulaciones de vacunas preferidas de este tipo incluyen
capsómeros compuestos de L1 truncada con o sin proteínas virales L2.
Capsómeros particularmente preferidos están compuestos de proteínas
truncadas L1. Proteínas truncadas contempladas por la invención
incluyen aquellas que tienen uno o más residuos de amino ácidos
borrados del terminal carboxi de la proteína, o uno o más residuos
de amino ácidos borrados del terminal amino de la proteína, o uno o
más residuos de amino ácido borrado de una región interna (es
decir, no de cualquiera de los terminales) de la proteína.
Formulaciones de la vacuna de capsómero preferidas están compuestas
de proteínas truncadas en el terminal carboxi. En formulaciones que
incluyen la proteína L1 derivada de VPH 16, es preferido que se
borren desde 1 a 34 residuos de amino ácido carboxi terminal.
Supresiones relativamente más cortas también son contempladas las
cuales ofrecen la ventaja de menor modificación de las propiedades
antigénicas de las proteínas L1 y los capsómeros formados del mismo.
Es más preferido, sin embargo, que 34 residuos de amino ácidos sean
borrados de la secuencia L1, correspondiendo a amino ácidos 472 a
505 en VPH16 expuesto en SEQ ID NO: 2, y codificado por la secuencia
de polinucleótido correspondiente a los nucleótidos 1414 a 1516 en
la secuencia de codificación L1 VPH16 expuesta en SEQ ID NO: 1.
Cuando una formulación de vacuna de capsómero es
hecha de proteínas que portan una supresión interna, es preferido
que la secuencia de amino ácido borrada comprenda la región de
localización nuclear de la proteína. En la proteína L1 de VPH16, la
señal de localización nuclear es encontrada desde aproximadamente el
residuo de amino ácido 499 a aproximadamente el residuo de amino
ácido 505. Siguiendo la expresión de las proteínas L1 donde el NLS
ha sido borrado, el montaje de las estructuras de capsómero ocurre
en el citoplasma de la célula huésped. Consiguientemente, la
purificación de los capsómeros es posible desde el citoplasma en vez
de desde el núcleo donde proteínas intactas L1 se ensamblan en
capsómeros. Capsómeros que resultan del montaje de proteínas
truncadas donde secuencias de amino ácido adicionales no remplazan
las secuencias de proteína borradas son necesariamente no quiméricas
en naturaleza.
Formulaciones de vacuna de capsómero también son
provistas lo cual es el tema de la aplicación de patente EP
98950930.2 comprendiendo proteína viral truncada expresada como una
proteína de fusión adyacente a residuos de amino ácidos de una
segunda proteína. Proteínas virales truncadas preferidas de la
invención son las proteínas virales de papiloma estructural L1 y
L2. Capsómeros compuestos de fusiones de proteína viral truncada
pueden ser producidas usando componentes de proteína L1 y L2.
Capsómeros compuestos de fusiones de proteína viral truncada pueden
ser producidas usando componentes de proteínas L1 y L2 juntos o solo
la proteína L1. Capsómeros preferidos son aquellos compuestos de
residuos de amino ácido de proteína L1. Componentes de proteína
viral truncada de las proteínas de fusión incluyen aquellas que
tienen uno o más residuos de amino ácido borrados del terminal
carboxi de la proteína, o uno o más residuos de amino ácido borrados
del terminal amino de la proteína, o uno o más residuos de amino
ácido borrados de una región interna (es decir, no de ninguno de los
terminales) de la proteína. Formulaciones preferidas de la vacuna
de capsómero están compuestas de proteínas truncadas en el terminal
carboxi. En esas formulaciones incluyendo la proteína L1 derivada de
VPH16, es preferido que desde 1 a 34 residuos de amino ácido
carboxi terminal sean borrados. Supresiones relativamente más cortas
también son contempladas que ofrecen la ventaja de menor
modificación de las propiedades antigénicas del componente de la
proteína L1 de la proteína de fusión y los capsómeros formados del
mismo. Es más preferido, sin embargo, que 34 residuos de amino
ácido sean borrados desde la secuencia L1, correspondiendo a los
amino ácidos 472 a 505 en VPH16 presentado en SEQ ID NO: 2, y
codificado por la secuencia de polinucleótido que corresponde a
nucleótidos 1414 a 1516 en la secuencia de codificación de VPH16
humano L1 presentada en SEQ ID NO: 1. Cuando la formulación de la
vacuna es compuesta de capsómeros formados por proteínas que portan
una supresión interna, es preferido que la secuencia de amino ácido
borrada comprenda la región de localización nuclear, o secuencia, de
la proteína.
Amino ácidos de la segunda proteína pueden ser
derivados de numerosas fuentes siempre y cuando la adición de los
residuos de amino ácido de la segunda proteína a la primera proteína
permita la formación de capsómeros. Preferiblemente, la adición de
los residuos de amino ácido de la segunda proteína promueve o
favorece la formación de capsómeros. Residuos de amino ácido de la
segunda proteína pueden ser derivados de numerosas fuentes,
incluyendo residuos de amino ácido de la primera proteína. En una
modalidad preferida, la segunda proteína es también una proteína
del virus de papiloma. También es preferido que la segunda proteína
sea el producto de expresión del gen temprano del virus del
papiloma. Es más preferido, sin embargo, que la segunda proteína sea
seleccionada del grupo de productos del gen temprano que
codificando por genes E1, E2, E3, E4, E5, E6, y E7 del virus de
papiloma. En una modalidad, la formulación de la vacuna de la
invención es compuesta de capsómeros quiméricos donde los residuos
de amino ácido de la proteína L1 forman aproximadamente 50 a 99% del
total de los residuos de amino ácido de la proteína de fusión. En
otra modalidad, residuos de amino ácido L1 forman aproximadamente
60 a 90% del total de residuos de amino ácido de proteína de fusión;
en una modalidad particularmente preferida, amino ácidos L1
comprenden aproximadamente 80% de los residuos de amino ácido de
proteína de fusión.
En una modalidad preferida de la invención,
proteínas de las formulaciones de la vacuna son producidas por
metodologías recombinantes, pero en formulaciones que comprenden
proteína viral intacta, las proteínas pueden ser aisladas de las
fuentes naturales. Proteínas intactas aisladas de fuentes naturales
pueden ser modificadas in vitro para incluir residuos de
amino ácido adicionales para proveer una proteína de fusión de la
invención usando técnicas de modificación covalente bien conocidas
y practicadas rutinariamente en la técnica. Similarmente, en
formulaciones que comprenden proteínas virales truncadas, las
proteínas pueden ser aisladas de fuentes naturales como proteínas
intactas e hidrolizadas in vitro usando hidrólisis química o
digestión enzimática con cualquiera de un numero de proteasas
sitio-específicas o generales, la proteína truncada
subsecuentemente modificada para incluir residuos de amino ácido
adicionales como descrito arriba para proveer una proteína de
fusión truncada de la invención, la cual es el tema de la aplicación
de patente EP 98950930.2.
En la producción de capsómeros, técnicas de
biología molecular recombinante pueden ser utilizadas para producir
ADN que codifique la proteína intacta deseada, la proteína truncada,
o la proteína de fusión truncada. Metodologías recombinantes
requeridas para producir un ADN que codifique una proteína deseada
son bien conocidas y rutinariamente practicadas en la técnica.
Manuales de laboratorio, por ejemplo Sambrook, et al.,
(eds.). MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL. Cold Spring Harbor
Press: Cold Spring Harbor, NY (1989) y Ausebel et al.,
(eds.). PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley&Sons. Inc.
(1994-1997), describen en detalle técnicas
necesarias para realizar las manipulaciones de ADN requeridas. Para
la producción a gran escala de capsómeros quiméricos, la expresión
protéica puede ser realizada usando vectores virales o eucarióticos.
Vectores preferibles incluyen cualquiera de los vectores de
expresión procarióticos bien conocidos, baculovirus recombinantes,
vectores COS célula específicos, recombinantes de vaccinia, o
construcciones de expresión levadura específicas. Cuando proteínas
recombinantes son usadas para proveer capsómeros de la invención,
las proteínas pueden ser primero aisladas de la célula huésped de
su expresión y a partir de entonces incubadas bajo condiciones que
permiten auto montaje para proveer capsómeros. Alternativamente,
las proteínas pueden ser expresadas bajo condiciones donde los
capsómeros son formados en la célula huésped.
La invención también contempla procesos para la
producción de capsómeros de las formulaciones de la vacuna. En un
método, las proteínas L1 son expresadas de ADN que codifica seis
histidinas adicionales en el terminal carboxi de la secuencia
codificadora de la proteína L1. Proteínas L1 expresadas con
histidinas adicionales (proteínas His L1) son mas preferiblemente
expresadas en E. coli y las proteínas His L1 pueden ser
purificadas usando cromatografía de afinidad de níquel. Proteínas
His L1en lisado de célula son suspendidas en un amortiguador de
desnaturalización, por ejemplo, 6M hidrocloruro de guanidina o un
amortiguador de capacidad desnaturalizante equivalente, y después
sometido a cromatografía de níquel. Proteína eluida del paso de
cromatografía de níquel es renaturalizada, por ejemplo en 150 mM
NaCl, 1mM CaCl_{2}, 0.01% Triton-X 100, 10 mM
HEPES (-2 hidroxietil
piperazina-N'-2 etano ácido
sulfónico), pH 7.4. De acuerdo a un método preferido de la
invención, el montaje de capsómeros toma lugar después de diálisis
de las proteínas purificadas, preferiblemente después de diálisis
contra 150 mM NaCl, 25 mM Ca^{2+}, 10% DMSO (dimetil sulfóxido,
0.1% Triton-X 100, 10 mM Tris [tris-(hidroximetil)
amino-metano] ácido acético con un pH de valor
5.0.
La formación de capsómeros puede ser monitoreada
por microscopía electrónica, y, en casos donde los capsómeros están
compuestos de proteínas de fusión, la presencia de varios
componentes de proteína en el capsómero ensamblado puede ser
confirmada por análisis de Western blot usando antisuero
especifico.
De acuerdo a la presente invención,
formulaciones de vacunas se proveen para uso en tratamiento
terapéutico de individuos infectados con VPH. El uso de
formulaciones de vacunas también provee para tratamiento
profiláctico de individuos susceptibles a infección con VPH.
Mientras que individuos infectados pueden ser fácilmente
identificados usando técnicas de diagnóstico estándar, individuos
susceptibles pueden ser identificados, por ejemplo, como aquellos
involucrados en relaciones sexuales con un individuo infectado. Sin
embargo, debido a la alta frecuencia de infección por VPH, todas
las personas activas sexualmente son susceptibles a la infección con
el virus de papiloma.
La administración de una formulación de vacuna
puede incluir uno o más componentes adicionales tales como
vehículos farmacéuticamente aceptables, diluyentes, adyuvantes, y/o
amortiguadores. Las vacunas pueden ser administradas una única vez
o múltiples veces. La formulación de la vacuna de la invención puede
ser administrada por varias vías incluyendo, por ejemplo,
administración oral, intravenosa, intramuscular, nasal, rectal,
transdérmica, vaginal, subcutánea e intraperitoneal.
Formulaciones de la vacuna de la invención
ofrecen numerosas ventajas cuando son comparadas a preparaciones
convencionales de vacunas. Como parte de una vacunación terapéutica,
los capsómeros pueden promover la eliminación de células
persistentemente infectadas en, por ejemplo, pacientes con NIC o
carcinoma cervical. Adicionalmente, vacunaciones terapéuticas de
este tipo también pueden servir un propósito profiláctico
protegiendo pacientes con lesiones NIC de una
re-infección. Como una ventaja adicional, los
capsómeros pueden escapar neutralización por anticuerpos
anticápsidos pre existentes y por lo tanto poseen una vida media de
circulación más larga comparado con partículas quiméricas tipo
virus.
Formulaciones de vacunas que comprenden
capsómeros quiméricos pueden proveer la ventaja adicional de
antigenicidad aumentada de ambos componentes de proteína de la
proteína de fusión de la cual se forma el capsómero. Por ejemplo,
en un VLP, componentes de proteína del capsómero subyacente puede
ser enterrada en la estructura global como un resultado de
posicionamiento internalizado dentro del mismo VLP. Similarmente,
epítopos de los componentes de proteína pueden ser obstruidos
estéricamente como un resultado de contacto
capsómero-a-capsómero, y por lo
tanto inaccesible para provocar una respuesta inmune. Resultados
preliminares usando proteínas de fusión L1/E7 para producir VLPs
respaldan esta posición en la que ninguna respuesta de anticuerpos
fue detectada contra el componente E7. Esta observación es
consistente con previos resultados los cuales indican que la región
terminal carboxi de L1 forma estructuras de brazo interpentaméricas
que permiten el ensamblaje de capsómeros en cápsidos [Garcia, et
al., J. Virol. 71:2988-2995 (1997)].
Presumiblemente en una estructura quimérica de capsómero, ambos
componentes de la proteína de la subestructura de la proteína de
fusión son accesibles para provocar una respuesta inmune. Vacunas
de capsómero podrían por lo tanto ofrecer la ventaja adicional de
antigenicidad aumentada contra cualquier componente de proteína,
incluyendo, por ejemplo, epítopos neutralizantes de proteínas de
otros virus, expresadas como una fusión con secuencias de amino
ácido L1.
La presente invención es ilustrada por los
siguientes ejemplos. El Ejemplo 1 describe la construcción de
vectores de expresión para producir proteínas de fusión, o
quiméricas, o virales. El Ejemplo 2 se relaciona a la generación de
baculovirus recombinantes para la expresión de proteínas virales. El
Ejemplo 3 trata la purificación de capsómeros. El Ejemplo 4
describe un protocolo de inmunización para la producción de
antisuero y anticuerpos monoclonales. El Ejemplo 5 provee un ELISA
péptido para cuantificar la formación de capsómeros. El Ejemplo 6
describe un ELISA de captura de antígenos para cuantificar la
formación de capsómeros. El Ejemplo 7 provee un ensayo de
hemoaglutinina para ensayar para la inducción de anticuerpos
neutralizantes.
El ADN que codifica el marco de lectura abierta
VPH 16 L1 fue eliminado del plásmido
16-114/k-L1/L2-pSynxtVI-
[Kirnbauer et al., J. Virol. 67:6929-6936
(1994)] usando BglII y el fragmento resultante subclonado en
pUC 19 (New England, Biolabs, Beverly, MA) previamente linealizado
en el único sitio de restricción BamHI. Dos construcciones
de expresión básica fueron primero generadas para permitir inserción
subsecuente de ADN para permitir expresión de la proteína de
fusión. Una construcción codificada VPH 16 L1\Delta310 teniendo
una supresión de nueve amino ácidos: se conocía que la región
borrada mostraba homología de bajo nivel con todas las otras
proteínas L1 del virus de papiloma. La segunda construcción, VPH 16
L1 \DeltaC. codificaba una proteína con una supresión de 34 amino
ácidos de los residuos del terminal carboxi L1. Otras construcciones
incluyen un sitio de restricción EcoRV en la posición de la
supresión para inserción facilitada de ADN que codifica otras
secuencias de proteína. La adición del sitio EcoRV codifica
dos amino ácidos de proteína no-L1, aspartato e
isoleucina.
Dos cebadores (SEQ ID NOs: 5 y 6) fueron
diseñados para amplificar el vector pUC19 y la secuencia
codificadora completa VPH 16 L1, excepto nucleótidos 916 hasta 942
en la SEQ ID NO: 1. Los cebadores fueron sintetizados para producir
también un sitio de restricción único EcoRV (subrayado en las
SEQ ID Nos: 5 y 6) en los terminales del producto de
amplificación.
El producto PCR resultante fue digerido con
EcoRV para proveer terminaciones complementarias y el
producto de digestión circularizado por ligación. El ADN ligado fue
transformado en E. coli usando técnicas estándar y plásmidos
de colonias resultantes fueron exploradas para la presencia de un
sitio de restricción EcoRV. Un clon designado VPH 16 L1
\Delta310 fue identificado como teniendo la supresión apropiada de
veintisiete nucleótidos y ésta construcción fue usada para insertar
fragmentos de ADN que codifican otras proteínas VPH 16 en el sitio
EcoRV como se discute abajo.
Dos cebadores (SEQ ID NOs: 7 y 8) fueron
diseñados complementariamente para el marco de lectura abierta VPH
16 L1 tal que los cebadores colindaran uno con otro para permitir
amplificación en direcciones contrarias sobre la plantilla de ADN
que comprende las secuencias VPH 16 L1 en pUC19 descrito arriba.
Cada cebador introdujo un sitio de restricción
EcoRV en el terminal del producto de amplificación. En el
cebador corriente abajo (SEQ ID NO: 8), el sitio EcoRV fue
seguido por un codón de parada TAA translacional posicionado de
forma que el producto de amplificación, en la ligación de los
extremos de EcoRV para circularizar, incluiría la supresión
de los 34 amino ácidos del terminal carboxi. Se realizó PCR para
amplificar el marco parcial de lectura abierto L1 y el vector
completo. El producto de amplificación fue roto con EcoRV,
circularizado con ADN T4 ligasa, y transformado en células \alpha
DH5 E. coli. Plásmidos de clones viables fueron analizados
para la presencia de un sitio EcoRV el cual linearizara el
plásmido. Una construcción positiva designada pUCHPv16L1\DeltaC
fue identificada y usada para insertar ADN de otras proteínas VPH 16
usando el sitio EcoRV.
Fragmentos de ADN de VPH 16 E7 que codifican
amino ácidos 1-50, 1-60,
1-98, 25-75, 40-98,
50-98 en SEQ ID NO: 4 fueron amplificados usando
cebadores que introducían sitios de restricción terminal 5'EcoRV
para facilitar la inserción del fragmento en cualquiera de las
secuencias modificadas VPH 16 L1 \Delta310 y VPH 16 L1 \DeltaC.
En varias de las reacciones de amplificación, el cebador E7.1 (SEQ
ID NO: 9) fue usado en combinación con el cebador E7.2 (SEQ ID NO:
10) para generar un fragmento de ADN que codifica amino ácidos E7
1-50: con el cebador E7.3 (SEQ ID NO: 11) para
generar un fragmento de ADN que codifica amino ácidos E7
1-60: o con el cebador E7.4 (SEQ ID NO: 12) para
generar un fragmento de ADN que codifica amino ácidos E7
1-98. En otras reacciones de amplificación, pares
de cebadores E7.5 (SEQ ID NO: 13) y E7.6 (SEQ ID NO: 14) fueron
usados para amplificar un fragmento de ADN codificando amino ácidos
E7 25-75: E7.7 (SEQ ID NO: 15) y E7.4 (SEQ ID NO:
12) fueron usados para amplificar un fragmento de ADN codificando
amino ácidos E7 40-98; y E7.8 (SEQ ID NO: 16) y E7.4
(SEQ ID NO: 12) fueron usados para amplificar un fragmento de ADN
codificando amino ácidos E7 50-98.
Similarmente, nucleótidos del ADN que codifica
la proteína matriz de influenza (SEQ ID NO: 17) fue amplificado
usando el par de cebadores presentado en SEQ ID NOs: 19 y 20. Ambos
cebadores introdujeron un sitio de restricción EcoRV en el
producto de amplificación.
Productos PCR de cada una de las reacciones de
amplificación fueron cortados con EcoRV e insertadas en el
sitio EcoRV de cualquiera de las secuencias VPH 16 L1
\Delta310 y VPH 16 L1 \DeltaC previamente linearizadas con la
misma enzima. Para lograr determinar la orientación de las
inserciones en plásmidos que codifican amino ácidos E7
25-75 y 50-98 y plásmido incluyendo
proteína de matriz de influenza, se utilizó digestión ClaI, tomando
ventaja de un sitio de restricción que esta superpuesto con el sitio
de restricción recién creado EcoRV (GATATCGAT) e
incluido en el cebador corriente arriba. Para las tres
construcciones de expresión incluyendo la metionina de iniciación
de VPH 16 E7, la orientación de la inserción fue determinada
utilizando un sitio de restricción Ns/I dentro de la región
codificadora E7.
Una vez que las construcciones de expresión con
inserciones apropiadas fueron identificadas, la región de
codificación de la proteína para L1 y para amino ácidos insertados
fue eliminado como una unidad usando enzimas de restricción
XbaI y SmaI y el ADN aislado ligado al plásmido pVL
1393 (Invitrogen) para generar baculovirus recombinantes.
\vskip1.000000\baselineskip
La secuencia VPH 16 L1 \DeltaC incluye ADN del
sitio EcoRV que resulta en la translación de amino ácidos no
encontrados normalmente en polipéptidos L1 tipo salvaje. Por lo
tanto, una serie de construcciones de expresión fue diseñada en la
cual el sitio EcoRV artificial fue eliminado. La secuencia L1
para éstas series de construcciones de expresión fue designado VPH
16L1\DeltaC*.
Para generar una construcción de expresión que
contiene la secuencia VPH 16L1\DeltaC*, dos reacciones PCR fueron
realizadas para amplificar dos fragmentos superpuestos de
pUC-VPH16L1\DeltaC codificando amino ácidos E7
1-50. Los fragmentos de ADN resultantes fueron
superpuestos en la posición del límite L1/E7 pero no contenía los
dos sitios de restricción EcoRV. El fragmento 1 fue generado
usando cebadores P1 (SEQ ID NO: 21) y P2 (SEQ ID NO: 22) y el
fragmento 2 usando cebadores P3 (SEQ ID NO: 23) y P4 (SEQ ID NO:
24).
Después de las dos primeras reacciones de
amplificación, los dos productos purificados fueron usados como
plantillas en otra reacción PCR usando solamente los cebadores P1 y
P4. El producto amplificado resultante fue digerido con enzimas
EcoNI y HindIII insertado en la construcción de
expresión VPH 16L1\DeltaC descrito arriba seguido de digestión
con las mismas enzimas. La construcción de expresión resultante se
diferenciaba de la construcción original VPH16L\DeltaC con ADN
codificando amino ácidos L1 y E7 1-50 por pérdida de
los dos sitios de restricción internos EcoRV. El primer
sitio EcoRV fue reemplazado por ADN codificando alanina
nativa L1 y amino ácidos de glicina en esta posición y la segunda
fue remplazada por una señal de parada translacional. En adición,
la construcción de expresión, designada VPH 16 L1\DeltaC* E7
1-52, contenía los primeros 52 amino ácidos de VPH
16 E7 como resultado de usar el cebador P4 que también codifica
residuos de amino ácidos E7 histidina en la posición 51 y tirosina
en la posición 52. VPH 16 L1\DeltaC* E7 1-52 fue
entonces usado para generar construcciones de expresión VPH 16
L1\DeltaC adicionales posteriormente incluyendo ADN que codifica
amino ácidos E7 1-55 usando el cebador P1 (SEQ ID
NO: 21) en combinación con el cebador P5 (SEQ ID NO: 25), amino
ácidos E7 1-60 con el par de cebadores P1 y P6 (SEQ
ID NO: 26), y amino ácidos E7 1-65 con el par de
cebadores P1 y P7 (SEQ ID NO: 27). Las secuencias de ADN
codificadoras de amino ácido adicionales en los productos de
amplificación surgieron del diseño de los cebadores para incluir
nucleótidos adicionales para los amino ácidos deseados.
Similarmente, VPH 16 L1\DeltaC* E7
1-70 fue generado usando la plantilla de ADN que
codifica VPH 16 L1\DeltaC* E7 1-66 y el par de
cebadores P1 y P8 (SEQ ID NO: 28).
Siguiendo cada reacción PCR, los productos de
amplificación fueron digeridos con EcoNI y HindIII e
insertados en VPH16L1\DeltaC previamente digerido con las mismas
enzimas. Secuencias de cada una de las construcciones fueron
determinadas usando un instrumento de secuenciamiento Applied
Biosystems Prism 377 con dideoxinucleótidos de terminación de cadena
fluorescente [Prober et al., Science
238:336-341 (1987)].
\vskip1.000000\baselineskip
Células Spodoptera frugiperda (Sf9)
fueron cultivadas en cultivos de suspensión o monocapa a 27º en
medio TNMFH (Sigma) suplementado con 10% de suero fetal de becerro
y 2 mM de glutamina. Para la construcción de baculovirus
recombinante basado en VPH 16 L1, células Sf9 fueron transfectadas
con 10 \mug de plásmido de transferencia junto con 2 \mug de
ADN Baculo-Gold linearizado (PharMingen, San Diego,
CA). Virus recombinante fueron purificados de acuerdo al protocolo
sugerido por el fabricante.
Para probar la expresión de proteína VPH 16 L1,
10^{5} células Sf9 fueron infectadas con baculovirus recombinante
a una multiplicidad de infección (m.o.i) de 5 a 10. Después de
incubación por tres a cuatro días a 28ºC, se extrajo el medio y las
células fueron lavadas con PBS. Las células fueron lisadas en
amortiguador SDS de muestra y analizadas por
SDS-PAGE y Western blotting usando anticuerpos
anti-VPH16 L1 y anti-VPH16 E7.
Para poder determinar cuáles de las
construcciones de expresión de proteína L1 quimérica producirían
preferencialmente capsómeros, extractos de células transfectadas
fueron sometidos a centrifugación de gradiente. Las fracciones
obtenidas del gradiente fueron analizadas para el contenido de
proteína L1 por Western blotting y para formación VLP por
microscopía electrónica. Los resultados son mostrados en la Tabla
1.
La proteína VPH L1 intacta, como también la
expresión de productos VPH 16 L1\Delta310 y VPH 16 L1\DeltaC. Se
mostró que cada uno producía capsómeros y partículas tipo virus en
iguales proporciones. Cuando las secuencias de codificación E7
fueron insertadas en el vector VPH 16 L1 \Delta310, sólo proteínas
de fusión incluyendo amino ácidos E7 1a 50 producidos dieron lugar a
formación detectable de capsómeros.
Cuando el ADN que codifica E7 fue insertado en
el vector VPH 16 L1\DeltaC, se encontró que todas las proteínas
de fusión producen capsómeros; proteínas quiméricas incluyendo
residuos de amino ácido E7 40-98 produjeron el
nivel más alto de estructuras exclusivamente de capsómero. Proteínas
quiméricas incluyendo amino ácidos E7 1-98 y
25-75 ambos produjeron predominantemente capsómeros,
aunque también se observó formación de partículas tipo virus. La
proteína quimérica incluyendo amino ácidos 1-60
resultó en niveles casi iguales de producción de capsómeros y
partículas tipo virus.
Cuando secuencias E7 fueron insertadas en el
vector VPH 16 L1\Delta*C, se mostró que todas las proteínas de
fusión producían capsómeros. La inserción de ADN que codifica para
residuos E7 1-52, 1-55, y
1-60 produjeron el nivel más alto de capsómeros,
pero se observaron niveles iguales de producción de partículas tipo
virus. Mientras la inserción de ADN que codifique ADN E7 para
residuos 1-65, 1-70,
25-75, 40-98, y 1-98
resultó en niveles de cápsido comparativamente más bajos o
indetectables, capsómeros fueron producidos en altas cantidades.
\vskip1.000000\baselineskip
Células Trichopulsia ni (TN) High Five fueron
cultivadas a una densidad de aproximadamente 2 x 10^{6} células/ml
en medio libre de suero Ex-Cell 405 (JRH
Biosciences). Aproximadamente 2 x 10^{8} células fueron
peletizadas por centrifugación a 1000 x g por 15 minutos,
resuspendido en 20 ml de medio, e infectado con baculovirus
recombinante a m.o.i de 2 a 5 por 1 hora a temperatura ambiente.
Después de la adición de 200 ml de medio, las células fueron
sembradas sobre placa e incubadas por 3 a 4 días a 27ºC. Seguido de
la incubación, las células fueron recolectadas, peletizadas, y
resuspendidas en 10 ml de amortiguador de extracción.
Los siguientes pasos fueron realizados a 4ºC.
Las células fueron sonicadas por 45 segundos a 60 vatios y el
lisado de células resultante fue centrifugado a 10.000 rpm en un
rotor Sorval SS34. El sobrenadante fue removido y retenido mientras
que el peletizado fue resuspendido en 6 ml de amortiguador de
extracción, sonicado por 3 segundos adicionales a 60 vatios, y
nuevamente centrifugado. Los dos sobrenadantes fueron combinados,
puestos en capas sobre un gradiente de dos pasos que contiene 14 ml
de 40% sacarosa sobre 8 ml de solución CsCl (4.6 g CsCl por 8 ml en
amortiguador de extracción), y centrifugado en un rotor Sorval AH629
de contenedor oscilante por 2 horas a 27,000 rpm a 10ºC. La región
de interfase entre la CsCl y la sacarosa junto con la capa completa
CsCl fueron recolectados en tubos Quickseal de 13.4 ml (Beckman) y
se agrego amortiguador de extracción para ajustar el volumen a 13.4
ml. Se centrifugaron las muestras toda la noche a 50.000 rpm a 20ºC
en un rotor Beckman 70 TI. Los gradientes fueron fraccionados (1 ml
por fracción) perforando tubos arriba y en el fondo con una aguja
de calibre 21. Las fracciones de cada tubo fueron recolectadas y 2.5
\mul de cada fracción fueron analizados por un 10% gel
SDS-poliacrilamida y Western blotting usando un
anticuerpo anti-VPH16 L1.
Partículas tipo virus y capsómeros fueron
separados de las fracciones identificadas arriba por sedimentación
en 10 a 50% gradientes de sacarosa. Fracciones pico de gradientes
CsCl fueron reunidas y dializadas por 2 horas contra 5 mM HEPES (pH
7.5). La mitad del dializado fue usado para producir capsómero por
desensamblaje de VLPs intactos durante la noche agregando EDTA
(concentración final 50 mM), EGTA (50 mM), DTT (30 mM). NaCl (100
mM), y Tris/HCl, pH 8.0, (10 mM). Como control, solo se agregó NaCl
y Tris/HCl a la otra mitad.
\newpage
Para el análisis de capsómeros producidos de
VLPs desensamblados, EDTA, EGTA, y DTT (concentración final 5 mM
cada uno) fueron agregados a los protectores de sacarosa los cuales
fueron centrifugados a 250,000 x g por 2 a 4 horas a 4ºC. Las
fracciones fueron recolectadas perforando tubos desde el fondo. Una
dilución de 1:10 de cada fracción fue entonces analizada por captura
de antígeno ELISA.
Ratones calvos/c son inmunizados subcutáneamente
tres veces, cada cuatro semanas con aproximadamente 60 \mug de
capsómeros quiméricos de VPH mezclados 1:1 con Adyuvante de Freund
completo o incompleto en un volumen total de 100 \mug. Seis
semanas después de la tercera inmunización, los ratones son
sacrificados y se recolecta sangre por punción cardíaca.
Placas de microtítulo (Dynatech) son cubiertas
toda la noche con 50 \mul de péptido E701 [Muller et al.,
1982] a una concentración de 10 \mug/ml en PBS. Los pozos son
cubiertos por 2 horas a 37ºC con 100 \mul de amortiguador que
contiene 5% de BSA y 0.05% Tween 20 en PBS y lavados tres veces con
PBS que contiene 0.05% Tween 20. Después de la tercera lavada. 50
\mul de suero diluido 1:5000 en BSA/Tween 20/PBS es agregado a
cada pozo y se incuba por 1 hora. Se lavan las placas nuevamente
como antes y 50 \mul de conjugado de peroxidasa de
cabra-anti-ratón es agregado a una
dilución de 1:5000. Después de 1 hora, se lavan las placas y se
manchan usando sustrato ABTS (0.2 mg/ml,
2.2'-Azino-bis(ácido
3-etilbenziazolina-\beta-sulfónico
en 0.1 M amortiguador
Na-Acetato-Fosfato (pH 4.2) con 4
\mul 30% H_{2}O_{2} por 10 ml). La extinción es medida después
de 1 hora a 490 nm en un lector de placa automático Dynatech.
Para permitir cuantificación relativa de
partículas tipo virus y capsómeros en fracciones de gradientes CsCl,
se utilizó una captura de antígeno ELISA. Placas de microtítulo
fueron cubiertas toda la noche con 50 \mul/pozo de una dilución
de 1:500 (concentración final de 2 \mug por ml, en PBS) con una
proteína A anticuerpo monoclonal de ratón purificado de proteína A
inmuno específico para VPH 16 L1 (anticuerpos 25/C, MM07 y Ritti 1
fueron obtenidos de ratones inmunizados con VPH 16 VLPs). Se
bloquearon placas con 5% leche/PBS por 1 hora y 50 \mul de
fracciones de gradientes CsCl fueron agregados por 1 hora a 37ºC
usando una dilución de 1:300 (en 5% leche/PBS). Después de tres
lavadas con PBS/0.05% Tween 20, 50 \mul de un antisuero de conejo
policlonal (dilución 1:3000 en leche/PBS), cultivado contra VPH 16
VLPs fue agregado y se incubaron placas a 37º por 1 hora. Las placas
fueron lavadas nuevamente y posteriormente incubadas con 50 \mul
de conjugado de peroxidasa de
cabra-anti-conejo (Sigma) diluido
1:5000 en PBS conteniendo 5% de leche por 1 hora. Después del lavado
final, las placas fueron teñidas con sustrato ABTS por 30 minutos y
la extinción fue medida a 490 nm en un lector de placa automático
Dynatech. Como control negativo, el ensayo también incluyó pozos
cubiertos solamente con PBS.
Para probar anticuerpos monoclonales para
especificidad de capsómero, los VLPs con EDTA/DTT para desensamblar
partículas. Preparaciones de partícula tratadas fueron ensayadas en
un ELISA antígeno-captura y las lecturas fueron
comparadas a controles no tratados. Para el desensamblaje, 40 \mul
de VLPs fueron incubados toda la noche a 4ºC en 500 \mul de
amortiguador de disrupción conteniendo 30 mM DTT. 50 mM usados en el
ELISA de captura de arriba en una dilución
1:20-1:40.
Para poder determinar la extensión a la cual
vacunas de capsómero quiméricas provocan producción de anticuerpos
neutralizantes, se realiza un ensayo de inhibición de
hemaglutinación como se describe brevemente abajo. Este ensayo es
basado en previas observaciones que partículas tipo virus son
capaces de hemoaglutinar células rojas sanguíneas.
Los ratones son inmunizados con cualquiera de
las vacunas de capsómero quiméricas y suero es recolectado como
descrito arriba en el Ejemplo 4. Como controles positivos,
partículas tipo virus VPH16 L1 (VLPs) PV1 bovino (VPB) L1 VLPs son
ensayados en paralelo con una preparación de capsómero quimérico.
Para establecer una línea base positiva, el VPH16 o VPB1 VLPs son
primero incubados con o sin suero recolectado de ratones inmunizados
después de lo cual se agregan células sanguíneas rojas. La
extensión a la cual la preincubación con suero de ratón inhibe la
hemoaglutinación de células rojas sanguíneas es una indicación de la
capacidad de neutralización de suero de ratón. Los experimentos son
entonces repetidos usando capsómeros quiméricos para poder
determinar el efecto neutralizante del suero de ratón en la vacuna.
Un protocolo breve para el ensayo de inhibición de hemoaglutinación
es descrito abajo.
Cien microlitros de heparina (1000 usp
unidades/ml) son agregadas a 1 ml de sangre de ratón fresca. Células
sanguíneas rojas son lavadas tres veces con PBS seguido de
centrifugación y resuspensión en un volumen de 10 ml. Después, los
eritrocitos son resuspendidos en 0.5 ml de PBS y almacenados a 4ºC
por hasta tres días. Para el ensayo de hemoaglutinina 70 \mul de
la suspensión son usados por pozo en una placa de 96 pozos.
Alicuotas de capsómero quimérico de gradientes
CsCl son dializados por una hora contra 10 mM Hepes (pH7.5) y 100
\mul de diluciones dobles en serie en PBS son agregadas a
eritrocitos de ratón en placas de microtítulo de 96 pozos de fondo
redondo las cuales son posteriormente incubadas por
3-16 horas a 4ºC. Para la inhibición de
hemoaglutinación, los capsómeros son incubados con diluciones de
anticuerpos en PBS por 60 minutos a temperatura ambiente y después
son agregadas a los eritrocitos. El nivel de hemoaglutinación de
eritrocitos, y por lo tanto la presencia de anticuerpos
neutralizantes, es determinada por métodos estándar.
En resultados preliminares, suero de ratón
generado contra capsómeros quiméricos comprendiendo proteína
VPH16L1\DeltaC en asociación con residuos de amino ácido E7 1-98 se observó que inhibe la hemoaglutinación por VPH16 VLPs, pero no por VPB VLPs. El suero de ratón fue por lo tanto positivo para la neutralización de anticuerpos contra los VLPs humanos y ésta neutralización diferencial fue más probablemente el resultado de especificidad de anticuerpos por epítopos contra los cuales los anticuerpos fueron cultivados.
VPH16L1\DeltaC en asociación con residuos de amino ácido E7 1-98 se observó que inhibe la hemoaglutinación por VPH16 VLPs, pero no por VPB VLPs. El suero de ratón fue por lo tanto positivo para la neutralización de anticuerpos contra los VLPs humanos y ésta neutralización diferencial fue más probablemente el resultado de especificidad de anticuerpos por epítopos contra los cuales los anticuerpos fueron cultivados.
Numerosas modificaciones y variaciones en la
invención son expuestas en los ejemplos ilustrativos de arriba y se
espera que le ocurran a aquellos diestros en la técnica.
Consiguientemente solo tales limitaciones como aparecen en las
reivindicaciones anexas deben ser ubicadas en la invención.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- APLICANTE:
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Formulaciones de Vacuna de Capsómero de Virus de Papiloma y Métodos de Uso
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 27
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- DIRECCION DE CORRESPONDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESTINATARIO: Marshall, O'Toole, Gerstein, Murray & Borun
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 233 South Wacker Drive, 6300 Sears Tower
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Chicago
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Illinois
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAIS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- APARTADO POSTAL: 60606-6402
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- FORMULARIO LEÍBLE POR COMPUTADORA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disco floppy
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- COMPUTADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: PatetIn Release #1.0, Versión #1.30
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE APLICACIÓN ACTUAL:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE APLICACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE ARCHIVO:
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CLASIFICACIÓN:
\vskip0.800000\baselineskip
- (vii)
- INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Williams Jr., Joseph A.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- NÚMERO DE REGISTRO: 38,659
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE REFERENCIA/EXPEDIENTE: 27013/34028
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TELÉFONO: 312-474-6300
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TELEFAX: 312-474-0448
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1518 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..1518
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 506 amino ácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: amino ácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 297 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERÍSTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACIÓN: 1..297
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 98 amino ácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: amino ácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:4:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 34 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCCCGATATC GCCTTTAATG TATAAATCGT CTGG
\hfill34
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:6:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCCCGATATC TCAAATTATT TTCCTACACC TAGTG
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAAGATATCT TGTAGTAAAA ATTTGCGTCC TAAAGGAAAC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:8:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 44 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:8:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAAGATATCT AATCTACCTC TACAACTGCT AAACGCAAAA AACG
\hfill44
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:9:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAAAGATATC ATGCATGGAG ATACACCTAC ATTGC
\hfill35
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:10:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 34 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTTGATATC GGCTCTGTCC GGTTCTGCTT GTCC
\hfill34
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:11:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 44 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTTGATATC CTTGCAACAA AAGGTTACAA TATTGTAATG GGCC
\hfill44
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:12:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:12:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAAAGATATC TGGTTTCTGA GAACAGATGG GGCAC
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:13:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTTGATATC GATTATGAGC AATTAAATGA CAGCTCAG
\hfill38
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:14:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (G)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:14:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTTGATATC GTCTACGTGT GTGCTTTGTA CGCAC
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:15:
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTATCGATA TCGGTCCAGC TGGACAAGCA GAACCGGAC
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:16:
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:16:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTTGATATC GATGCCCATT ACAATATTGT AACCTTTTG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:17:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 294 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- CARACTERISTICA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE/CLAVE: CDS
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- LOCALIZACION: 1..294
\newpage
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:17:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:18:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 97 amino ácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TIPO: amino ácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:18:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:19:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:19:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTTGATATC GATATGGAAT GGCTAAAGAC AAGACCAATC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:20:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:20:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTTGATATC GTTGTTTGGA TCCCCATTCC CATTG
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:21:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:21:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTTATGACAT ACATACATTC TATG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:22:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:22:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCATGCATTC CTGCTTGTAG TAAAAATTTG CGTCC
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:23:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 29 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:23:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTACAAGCAG GAATGCATGG AGATACACC
\hfill29
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:24:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 36 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:24:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATCTGAAGC TTAGTAATGG GCTCTGTCCG GTTCTG
\hfill36
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:25:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:25:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATCTGAAGC TTATCAATAT TGTAATGGGC TCTGTCCG
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:26:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 54 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:26:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATCTGAAGC TTACTTGCAA CAAAAGGTTA CAATATTGTA ATGGGCTCTG TCCG
\hfill54
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:27:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 69 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:27:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:28:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 47 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CADENAS: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: linear
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:28:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATCTGAAGC TTATTGTACG CACAACCGAA GCGTAGAGTC ACACTTG
\hfill47
Claims (9)
1. Una formulación antigénica que comprende un
capsómero de virus de papiloma humano para usar como una vacuna,
estando dicho capsómero compuesto de una proteína de fusión
compuesta de proteína L1 de virus de papiloma humano, residuos de
amino ácido adyacentes de una segunda proteína, donde la segunda
proteína es un antígeno de tumor humano, un antígeno viral o
antígeno bacterial, provocando dicha formulación una respuesta
inmune la cual neutraliza los viriones del virus de papiloma humano
donde dicho capsómero es obtenido por separación de partículas tipo
virus.
2. Una formulación antigénica que comprende un
capsómero de virus de papiloma humano para ser usado como una
vacuna, estando dicho capsómero compuesto de una proteína de fusión
compuesta de proteína L1 de virus de papiloma humano, residuos de
amino ácido adyacentes de una segunda proteína, donde la segunda
proteína es un antígeno de tumor humano, un antígeno viral o
antígeno bacterial, provocando dicha formulación una respuesta
inmune la cual neutraliza los viriones del virus de papiloma humano
donde dicho capsómero es obtenido por el desensamblaje de partículas
tipo virus.
3. La formulación antigénica de acuerdo con la
reivindicación 1 o 2 donde la proteína L1 es codificada en el genoma
de un virus de papiloma humano seleccionado del grupo que consiste
de VPH6, VPH11, VPH16, VPH18, VPH33, VPH35, y VPH45.
4. La formulación antigénica de acuerdo con la
reivindicación 3 donde el virus de papiloma es VPH16.
5. La formulación antigénica de acuerdo con la
reivindicación 1 o 2 donde los residuos de amino ácido de la segunda
proteína son derivados de una proteína VPH.
6. La formulación antigénica de acuerdo con la
reivindicación 5 donde la proteína VPH es una proteína VPH
temprana.
7. La formulación antigénica de acuerdo con la
reivindicación 6 donde la proteína VPH temprana es seleccionada de
un grupo que consiste de E1, E2, E3, E4, E5, E6, y E7.
8. El uso de la formulación de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la producción de una
composición farmacéutica para el tratamiento de infección con VPH y
enfermedades relacionadas a éste.
9. El uso de la formulación de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la producción de una
composición farmacéutica para la prevención de infección con VPH y
enfermedades relacionadas a éste.
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| DE122007000092I1 (de) * | 1994-10-07 | 2008-03-27 | Univ Loyola Chicago | Papillomavirusähnliche partikel, fusionsproteine sowie verfahren zu deren herstellung |
| AU7704498A (en) * | 1997-05-29 | 1998-12-30 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Human frp and fragments thereof including methods for using them |
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| US7182947B2 (en) * | 1998-02-20 | 2007-02-27 | Medigene Ag | Papillomavirus truncated L1 protein and fusion protein constructs |
| CA2229955C (en) * | 1998-02-20 | 2003-12-09 | Medigene Gmbh | Papilloma virus capsomere vaccine formulations and methods of use |
| GB9806666D0 (en) * | 1998-03-27 | 1998-05-27 | Stanley Margaret | Antigen preparation and use |
| AUPP765398A0 (en) * | 1998-12-11 | 1999-01-14 | University Of Queensland, The | Treatment of papillomavirus infections |
| DE19905883C2 (de) * | 1999-02-11 | 2001-05-23 | Deutsches Krebsforsch | Chimäre Virus-ähnliche Partikel bzw. chimäre Capsomere von BPV |
| FI107932B (fi) * | 1999-02-16 | 2001-10-31 | Mikael Paronen | Polymeerikalvo ja menetelmä sen valmistamiseksi |
| US6551597B1 (en) * | 1999-03-18 | 2003-04-22 | President & Fellows Of Harvard College | Vaccine compositions for human papillomavirus |
| DE19925235A1 (de) | 1999-06-01 | 2000-12-07 | Medigene Ag | Zytotoxische T-Zellepitope des Papillomavirus L1-Proteins und ihre Verwendung in Diagnostik und Therapie |
| DE19925199A1 (de) * | 1999-06-01 | 2000-12-07 | Medigene Ag | Zytotoxische T-Zellepitope des Papillomavirus L1-Proteins und ihre Verwendung in Diagnostik und Therapie |
| DE19925234A1 (de) * | 1999-06-01 | 2000-12-14 | Medigene Ag | Capsomere, stabile Capsomere, Capside, VLPs, oder CVLPs bzw. damit beladenen Zellen und ihre Verwendung in Diagnostik und Therapie |
| EP1212358B1 (en) * | 1999-08-25 | 2004-12-15 | Merck & Co., Inc. | Synthetic papillomavirus genes optimized for expression in human cells |
| CA2875298A1 (en) * | 1999-12-09 | 2001-06-14 | Medimmune, Inc. | In vitro method for disassembly/reassembly of papillomavirus virus-like particles (vlps) |
| US6600018B1 (en) | 2000-04-10 | 2003-07-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Secreted frizzled related protein, sFRP, fragments and methods of use thereof |
| US6908613B2 (en) * | 2000-06-21 | 2005-06-21 | Medimmune, Inc. | Chimeric human papillomavirus (HPV) L1 molecules and uses therefor |
| DE10055545A1 (de) * | 2000-11-09 | 2002-07-25 | Deutsches Krebsforsch | Für Expression in Eukaryonten optimierte HPV 16-L1 und HPV 16-L2 kodierende DNA Sequenzen |
| DE10059630A1 (de) * | 2000-12-01 | 2002-06-06 | Medigene Ag | Arzneimittel zur Vermeidung oder Behandlung von durch humanen Papillomavirus-Typ 18-hervorgerufenem Tumor |
| AU2002367977B2 (en) | 2001-08-13 | 2008-06-19 | University Of Rochester | Transcutaneous immunization against papillomavirus with papillomavirus virus-like particles |
| AU2002326093A1 (en) * | 2001-08-31 | 2003-03-10 | University Of Cape Town | Papillomavirus proteins and pharmaceutical compositions |
| US20040121465A1 (en) * | 2002-02-14 | 2004-06-24 | Novavax, Inc. | Optimization of gene sequences of virus-like particles for expression in insect cells |
| SI1506222T1 (sl) † | 2002-05-17 | 2009-10-31 | Universty Of Cape Town | Himerni L1-proteini humanega papilomavirusa 16, ki obsegajo L2-peptid, delci, podobni virusu, pripravljeni iz njih, in postopek za pripravo delcev |
| US8101189B2 (en) | 2002-07-05 | 2012-01-24 | Folia Biotech Inc. | Vaccines and immunopotentiating compositions and methods for making and using them |
| ES2431963T3 (es) | 2002-07-05 | 2013-11-28 | Folia Biotech Inc. | Partícula viral adyuvante |
| SE0202897D0 (sv) * | 2002-10-01 | 2002-10-01 | Quantovir Ab | Method and kit for quantitative and qualitative determination of human papillomavirus |
| SE0202896D0 (sv) * | 2002-10-01 | 2002-10-01 | Quantovir Ab | Method for estimating the risk of carcinoma development |
| US7763259B2 (en) * | 2003-01-10 | 2010-07-27 | The Regents Of The University Of Colorado | Therapeutic and prophylactic vaccine for the treatment and prevention of papillomavirus infection |
| US7172773B2 (en) * | 2004-04-26 | 2007-02-06 | Renew Life Inc. | Food supplement formulation |
| ATE474596T1 (de) * | 2004-09-10 | 2010-08-15 | Asahi Glass Co Ltd | Impfstoff gegen humanes papillomavirus zur oralen verabreichung |
| EP1819835B1 (en) | 2004-12-08 | 2010-08-04 | Gen-Probe Incorporated | Detection of nucleic acids from multiple types of human papillomaviruses |
| US7314630B2 (en) * | 2005-01-07 | 2008-01-01 | Yao-Xiong Hu | Compounds and methods of early diagnosis of cervical cancer and genital condyloma with HPV, CHSP60 tumor suppressor H-Ras, K-Ras and PTEN derived peptides modified |
| WO2008134935A1 (en) | 2007-04-29 | 2008-11-13 | Beijing Wantai Biological Pharmacy Enterprise Co., Ltd. | Truncated human papillomavirus type 18 l1 proteins |
| US9428555B2 (en) * | 2007-04-29 | 2016-08-30 | Beijing Wantai Biological Pharmacy Enterprise Co., Ltd. | Truncated L1 protein of Human Papillomavirus type 16 |
| DK2154149T3 (da) * | 2007-05-29 | 2019-10-14 | Univ Xiamen | En trunkeret l1-protein af human papillomavirus 6 |
| US8507811B2 (en) * | 2009-02-02 | 2013-08-13 | Apple Inc. | Touch sensor panels with reduced static capacitance |
| EP2377879A1 (en) * | 2010-04-14 | 2011-10-19 | Deutsches Krebsforschungszentrum | N-terminal HPV E7 fusion proteins |
| WO2015196112A1 (en) | 2014-06-19 | 2015-12-23 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Human papilloma virus constructs |
| WO2016026919A1 (en) * | 2014-08-20 | 2016-02-25 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Vaccines and manufacturing methods for treatment and prevention of disease |
| WO2021013067A1 (zh) * | 2019-07-19 | 2021-01-28 | 神州细胞工程有限公司 | 嵌合的人乳头瘤病毒6型l1蛋白 |
| US11382700B2 (en) | 2020-05-08 | 2022-07-12 | Globus Medical Inc. | Extended reality headset tool tracking and control |
| US11510750B2 (en) | 2020-05-08 | 2022-11-29 | Globus Medical, Inc. | Leveraging two-dimensional digital imaging and communication in medicine imagery in three-dimensional extended reality applications |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2194839T3 (es) | 1991-07-19 | 2003-12-01 | Univ Queensland | Vacuna de papilomavirus. |
| GB9207701D0 (en) | 1992-04-08 | 1992-05-27 | Cancer Res Campaign Tech | Papillomavirus e7 protein |
| EP1835029A1 (en) | 1992-06-25 | 2007-09-19 | Georgetown University | Papillomavirus vaccines |
| US5437951A (en) * | 1992-09-03 | 1995-08-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Self-assembling recombinant papillomavirus capsid proteins |
| US5618536A (en) | 1992-09-03 | 1997-04-08 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Chimeric papillomavirus-like particles |
| ATE492289T1 (de) * | 1993-03-09 | 2011-01-15 | Univ Rochester | Herstellung von menschlichen papillomavirus hbv- 11 kapsidprotein l1 und virus-ähnliche partikeln |
| AUPM566794A0 (en) * | 1994-05-17 | 1994-06-09 | University Of Queensland, The | Process and product |
| DE122007000092I1 (de) * | 1994-10-07 | 2008-03-27 | Univ Loyola Chicago | Papillomavirusähnliche partikel, fusionsproteine sowie verfahren zu deren herstellung |
| DE4435907C2 (de) | 1994-10-07 | 1997-07-24 | Lutz Prof Dr Gissmann | Papillomavirusähnliche Partikel und deren Anwendung |
| JP3413020B2 (ja) * | 1996-07-17 | 2003-06-03 | 株式会社東芝 | 半導体装置の製造方法 |
| DE19712541C1 (de) | 1997-03-25 | 1998-11-05 | Deutsches Krebsforsch | Papillomviren, Mittel zu deren Nachweis sowie zur Therapie von durch sie verursachten Erkrankungen |
| CA2295316C (en) * | 1997-07-03 | 2007-06-26 | University Of Colorado, University Technology Corporation | Homogeneous human papilloma virus capsomere containing compositions, methods for manufacture, and the use thereof as diagnostic, prophylactic or therapy |
| WO1999010557A1 (fr) | 1997-08-26 | 1999-03-04 | Nsk Ltd. | Procede de production d'un palier a roulement |
| US6228368B1 (en) * | 1997-10-06 | 2001-05-08 | Loyola University Of Chicago | Papilloma virus capsomere formulations and method of use |
-
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