ES2323733T3 - Metodo para modificar un sistema macromolecular. - Google Patents

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ES2323733T3 ES06775948T ES06775948T ES2323733T3 ES 2323733 T3 ES2323733 T3 ES 2323733T3 ES 06775948 T ES06775948 T ES 06775948T ES 06775948 T ES06775948 T ES 06775948T ES 2323733 T3 ES2323733 T3 ES 2323733T3
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Abstract

Método para modificar una macromolécula, el método incluyendo los pasos de (i) proveer la macromolécula; (ii) proveer un compuesto de la fórmula general (I): ** ver fórmula** N es un grupo amino primario protegido con el grupo de protección P, donde el grupo de protección implica ambas valencias libres del grupo amino primario; m es un número entero del 1-12 y N es un número entero del 1-2000; R 1 y R 2 son independientemente seleccionados del grupo consistente en hidrógeno y alquilo C 1-4; y X es un grupo reactivo seleccionado de grupos reactivos que contienen oxetano y grupos reactivos que contienen oxirano; y (iii) dejar que el compuesto de la fórmula general (I) reaccione con las macromoléculas, para formar injertos en la macromolécula.

Description

Método para modificar un sistema macromolecular.
Campo de la invención
La invención se refiere a métodos de modificación de una macromolécula, en particular una matriz de polímero, mediante la funcionalización con entidades moleculares que comprenden una fracción reactiva, un brazo espaciador de óxido de alquileno y un grupo funcional que comprende una amina primaria protegida.
Antecedentes de la invención
Hay una necesidad creciente de hacer una funcionalización específica de varios sistemas macromoleculares (en resumen, macromoléculas) incluyendo biomoléculas grandes y materiales poliméricos. Una amina primaria es un grupo funcional muy versátil, que puede ser usado tanto como punto de partida para varias reacciones químicas como para modificar las propiedades fisioquímicas del sistema macromolecular.
Para muchas aplicaciones, se requiere además tener el grupo funcional fijado al sistema macromolecular mediante un largo brazo espaciador de productos químicos para asegurar el acceso óptimo al grupo funcional. Los óxidos polialquilenos u oligoalquilenos representan una familia de fragmentos moleculares que pueden ser usados para este tipo de brazos funcionales, mientras que exponen una alta compatibilidad con ambientes biológicos o químicos dependiendo de la aplicación.
Los sistemas macromoleculares donde las entidades moleculares de este tipo son útiles para formar productos funcionalizados con amina, incluyen moléculas biológicas tales como proteínas y nucleótidos, materiales rebordeados para la síntesis peptídica, resinas para cromatografía, materiales poliméricos para la filtración, así como capas superficiales para el uso en componentes medicinales, componentes para el diagnóstico in vivo o in vitro, sistemas analíticos, etc.
En la literatura, hay varios métodos para introducir aminas primarias como grupos funcionales en resinas de polímero usadas para aplicaciones tales como síntesis de fase sólida o cromatografía. La mayor parte de estos métodos fijan el grupo amino en el esqueleto del polímero bien directamente o mediante un enlazador corto (menos de 10 átomos). Algunos ejemplos de esto son la reacción directa de una ftalimida deprotonada con un haluro de alquilo primario seguido de hidracinolisis de la imida, y la reacción de azida con haluros de alquilo o tosilatos seguida de una reducción. También se ha demostrado que la reacción de bromoetil ftalimida con fracciones de alcóxido en la macromolécula seguida de hidracinolisis es útil en algunos casos. En algunos casos, la funcionalidad de amina primaria ha sido obtenida como un grupo funcional terminal en un largo brazo espaciador de alcóxido fijado a una resina de polímero. En estos casos, la amina primaria - fracción de brazo espaciador de alcóxido, se forma de una forma gradual, es decir, el brazo espaciador de alcóxido se une seguido de la fijación de la amina primaria al brazo espaciador de alcóxido usando reacciones como se ha descrito anteriormente. La química implicada en los métodos descritos anteriormente requiere condiciones bastante duras que frecuentemente son incompatibles con los sistemas macromoleculares. Especialmente las macromoléculas biológicas son degradadas, pero también las resinas usadas para la cromatografía se pueden dañar bajo condiciones de este tipo. En el último caso esto es especialmente importante para las resinas macroporosas donde la dura condición alterará la porosidad de las resinas. Además, las reacciones mencionadas raramente son cuantitativas, lo que da lugar a que aumenten los productos derivados indeseados.
Existen ejemplos de óxidos de alquileno asimétricos obtenidos de etilenoglicol donde un grupo terminal es una amina y otro grupo terminal es un hidróxido. Estos compuestos principalmente existen como versiones cortas oligoméricas donde la separación de los óxidos de alquileno simétricos es posible. Además, el alto coste de producción de estas moléculas y la dificultad de convertir selectivamente la funcionalidad de hidroxi en un grupo reactivo que puede ser reaccionado con una sistema macromolecular limita totalmente la aplicabilidad industrial de estos compuestos para la funcionalización de sistemas macromoleculares.
Algunos ejemplos de polietilenoglicoles asimétricos preparados por etoxilación directa de una etanolamina con una amida o grupo de protección de imida han sido descritos en la bibliografía.
Lange y Wahl (Bull. Chim. Soc. Fr. 1951, 340-342) describieron la etoxilación de N-acetiletanoamina formando derivados mono y dietoxilados. Lontjens y otros (Polym. Bull. 30, 1993 págs. 489-494) describen la síntesis de politilenoglicoles monoamínicos en un proceso de etoxilación con altas temperaturas, que crea varios subproductos. Y-I Huang (J. polym. Sci. 23, 1985, págs. 795-799) describe la etoxilación de una base Shiff de benzaldehido de etanolamina seguida de hidrólisis al polietilenoglicol monoamino-sustituido. En estos dos últimos ejemplos, el producto fue reaccionado mediante la amina primaria para formar entidades poliméricas dejando un grupo hidróxilo libre. En ningún caso se obtuvo un derivado de amina primaria.
Por lo tanto, hay una necesidad en la técnica de entidades moleculares, que permitan la funcionalización eficaz y económica de sistemas macromoleculares con un brazo espaciador de alcóxido y una funcionalidad de amina primaria.
Breve descripción de la figura
La figura 1 ilustra la preparación del compuesto de la fórmula general (I); m es 1, n en la figura 1 se corresponde con n-1 en la fórmula (I), y Z en la figura 1 se corresponde con X en la fórmula (I).
Descripción de la invención
La presente invención se refiere a un método para modificar una macromolécula, en particular una matriz de polímero, por ej. matrices de polímero usadas como soportes sólidos para síntesis, al igual que para objetivos cromatográficos.
En particular, la presente invención se refiere a un método para modificar una macromolécula, en particular una matriz de polímero, el método incluyendo los pasos de
(i) proveer la macromolécula (p. ej. matriz de polímero);
(ii) proveer un compuesto de la fórmula general (I):
1
donde
\quad
N es un grupo amino primario protegido con el grupo de protección P, donde el grupo de protección implica ambas valencias libres del grupo amino primario;
\quad
m es un número entero de 1-12 y n es un número entero de 1-2000;
\quad
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C_{1-4}; y
\quad
X es un grupo reactivo; y
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(iii) dejar que el compuesto de la fórmula general (I) reaccione con la macromolécula (p. ej. matriz de polímero), para formar injertos en dicha macromolécula.
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Compuestos de la fórmula general (I)
El compuesto útil para la modificación de macromoléculas, en particular matrices de polímero, puede ser representado por compuestos de la fórmula general (I):
2
donde
\quad
N es un grupo amino primario protegido con el grupo de protección P, donde el grupo de protección implica ambas valencias libres del grupo amino primario;
\quad
m es un número entero de 1-12 y N es un número entero de 1-2000;
\quad
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C_{1-4}; y
\quad
X es un grupo reactivo.
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Se apreciará que los compuestos de la fórmula general (I) son del tipo de poli(oxialquileno)"amino protegido". Por lo tanto, los métodos son adecuados para introducir en macromoléculas (por ej. matrices de polímero) un grupo amino primario mediante un enlazador generalmente hidrofílico.
Los compuestos de la fórmula general (I) comprenden una fracción {P}-N, representando un grupo amino primario protegido con el grupo de protección P, donde el grupo protección implica ambas valencias libres del grupo amino primario.
Los grupos de protección que implican ambas valencias libres del grupo amino primario son normalmente del tipo imida [(RC(=O))_{2}N-] y del tipo imina [R-C=N-].
Por ejemplo, los grupos de protección del tipo imida pueden ser aquellos seleccionados de anhídridos succínicos/ácidos succínicos (succinimidas) y anhídridos ftálicos/ácidos ftálicos (ftalimidas).
En una forma de realización habitualmente preferida, el grupo de protección es del tipo imida. Habitualmente la mayoría de grupos de protección preferidos son anhídridos succínicos/ácidos succínicos (succinimidas) y anhídridos ftálicos/ácidos ftálicos (ftalimidas), en particular anhídridos ftálicos/ácidos ftálicos (ftalimidas).
\quad
m es un número entero de 1-12, p. ej. 1-6, tal como 1-4, o 1-3, 6 1-3, ó 1-2, en particular 1. n es un número entero de 1-2000, más habitual de 1-100, 6 1-50, 0 1-10 o 1-8, tales como 1-6, 0 1-5, 6 1-4, 0 1-3, 1-2, 0 2-6, 6 2-4, 0 1.
\quad
R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C_{1-4}.
\quad
El alquilo C_{1-4} abarca metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, terbutilo y (2-metil)-prop-1-il.
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Los ejemplos concretos son aquellos donde R^{1} y R^{2} se seleccionan independientemente de hidrógeno y metilo, por consiguiente, los compuestos que tienen fragmentos de etilenoglicol y de propilenoglicol. Las formas de realización habitualmente más preferidas son aquellas donde todos los R^{1} y R^{2} son hidrógeno, es decir, corresponden a compuestos que tienen fragmentos de etilenoglicol.
El grupo reactivo está diseñado para ser capaz de reaccionar con funcionalidades simples en la macromolécula (por ej. matriz de polímero), por ej. aminas, funcionalidades de alcohol y de tiol, posiblemente tras la activación de tales grupos. Para este propósito, pueden usarse grupos reactivos que contienen éter cíclico pequeño tales como oxiranos (epóxidos) y oxetanos, pero también pueden usarse grupos funcionales tales como isocianatos, ácidos carboxílicos, cloruros de ácido o compuestos vinílicos activados. Algunos ejemplos concretos son los grupos reactivos que contienen oxiranos y oxetanos de los cuales un oxirano adecuado conteniendo grupos reactivos (X) puede ser el derivado de epiclorohidrina (ver ejemplo 5). Un ejemplo alternativo de un grupo reactivo es un ácido carboxílico que contiene un grupo reactivo, por ej. como se ilustra en el Ejemplo 7. Para estos dos ejemplos, un grupo CH2 se incluye como una parte del grupo reactivo X, cf. CH_{2}(O)CHCH_{2} - en el Ejemplo 5 y HOOCCH_{2} - en el Ejemplo 7.
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Preparación de compuestos de la fórmula general (1)
En una forma de realización preferida de la invención, la entidad molecular se forma mediante la polialcoxilación de una hidroxialquilamina protegida en N, seguida de la fijación de la fracción reactiva mediante un enlace C-O. Esta es una vía rentable para los óxidos de polialquileno asimétricos, en la que mediante la selección cuidadosa de catalizadores y tiempo de reacción se puede conseguir el buen control de la longitud de cadena y pureza. Además, variando el contenido de óxidos de alquileno tales como óxido de etileno y óxido de propileno puede controlarse la estructura molecular e hidrofilicidad del producto.
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Síntesis de polietilenoglicol-alquilaminas protegidas
El punto de partida para esta síntesis es la hidroxialquilamina protegida (b). Los ejemplos de alquilaminas simples y útiles incluyen etanolamina, 3-hidproxipropilamina, 2-hidroxipropilamina. También pueden usarse aminas más complejas tales como 3 oxi-5-hidroxi-1-pentanamina o 4-hidroximetil-benzilamina.
El grupo amino en la hidroxialquilamina (a) está protegida con un grupo de protección que permite la etoxilación y fijación posterior de la fracción reactiva. Los grupos de protección tales como imidas, amidas, iminas o derivados de urea son bastante útiles para este propósito. La ftalimida amina protegida formada de etanolamina y anhídrido ftálico está disponible comercialmente a gran escala. En comparación con la protección de amida simple, tiene la ventaja de que no queda hidrógeno en el átomo de nitrógeno y como resultado es estable hacia el ataque nuclefílico en transformaciones posteriores. Esto es particularmente importante puesto que el protón de amida en aminas protegidas con amida regulares tiene una concentración de ácido similar a la del grupo hidroxi terminal en el polialcóxido, lo que da lugar a que aumenten las reacciones de sustitución mal definidas.
Una vez que el grupo amino es protegido, el grupo de hidroxi libre puede ser reaccionado con oxiranos en presencia de un catalizador para formar el derivado de polialcóxido (c). Comúnmente los oxiranos usados incluyen óxido de etileno y óxido de propileno o mezclas derivadas. La selección del catalizador y las condiciones de reacción son particularmente importantes. Las condiciones previamente proporcionadas para la reacción entre 2-hidroxietilpftalimida y óxido de etileno implican altas concentraciones de catalizador de hidróxido de sodio y temperaturas por encima de los 160ºC, condiciones que invariablemente dan lugar a que aumenten los productos muy coloreados con unas variaciones de peso molecular grandes y niveles altos de impurezas. Como se ejemplifica en esta patente, la disminución de la temperatura y la concentración de catalizador dan productos de pureza aceptable. La aplicación de catalizadores a base de lantano o lantánido dan productos muy puros, casi incoloros, con distribución escasa del peso molecular.
Los polialcóxidos basados en óxidos de etileno son muy hidrofílicos y biocompatibles. El uso de óxido de propileno en vez de óxido de etileno produce moléculas que son relativamente menos solubles en agua y presenta algún grado de interacción hidrofóbica con biomoléculas. Los dos monómeros pueden ser copolimerizados para confeccionar la hidrofilicidad incluso más aún.
El polialcóxido derivado es entonces funcionalizado con una fracción reactiva para formar la entidad molecular deseada, que se utiliza para modificar sistemas macromoleculares. La fracción reactiva debería ser capaz de reaccionar con grupos funcionales en el sistema macromolecular tales como aminas, alcoholes, tioles, etc. como se ha mencionado anteriormente.
La presente invención proporciona - en una forma de realización - un método para la preparación de un compuesto de la fórmula general (I)
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3
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donde {P}-N es un grupo ftalimido, m es un número entero de 1-12, n es un número entero de 1-2000, R^{1} y R^{2} son ambos hidrógeno, y X es un grupo reactivo, dicho método comprendiendo las fases de:
(a)
proveer un \alpha-hidroxi-\omega-amino-alcano C_{2-13} protegido en N por un ftalimido;
(b)
hacer reaccionar dicho alcano con óxido de etileno en presencia de un catalizador; y
(c)
convertir la funcionalización del grupo terminal OH del producto obtenido en la fase (b).
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La reacción en la fase (b) se lleva a cabo preferiblemente en ausencia de aire atmosférico (en particular oxígeno). Además, la reacción normalmente se lleva a cabo bajo presión, p. ej. 2-10 bar, y a temperaturas elevadas, por ej. 80-200ºC, tal como 100-190ºC. La cantidad de catalizador es normalmente 0,1-3% basada en la cantidad de \alpha-hidroxi-\omega-amino-alcano C_{2-13} protegido en N por un ftalimido, donde la cantidad necesaria está correlacionada con los equivalentes del óxido de etileno usado, es decir, cuánto más equivalentes de óxido de etileno se usen, más alta será la cantidad de catalizador. El número de equivalentes de óxido de etileno usados corresponde con la longitud de cadena deseable, es decir, el número "n" en la fórmula general (I). Los catalizadores adecuados son, por ej., aquellos seleccionados de NaOH, KOH, KOCH_{3}, MEO-3, y MEO-LA.
La conversión en la fase (c) se lleva a cabo para introducir el grupo reactivo X, bien uniendo un grupo reactivo a la molécula mediante el átomo de oxígeno, o mediante la conversión de la funcionalidad de hidróxilo terminal, p. ej. por oxidación al ácido carboxílico correspondiente. Esto se ilustra en la sección de ejemplos.
Injerto de un compuesto de la fórmula general (I) en macromoléculas
La entidad molecular completa se utiliza entonces para modificar sistemas macromeleculares (macromoléculas), tales como matrices de polímero, biomoléculas (enzimas, proteínas, etc.), y superficies de materiales. En los casos donde el grupo reactivo en el sistema macromolecular es un grupo amino, la reacción procederá bastante frecuentemente sin un catalizador aunque se suelen necesitar catalizadores en la reacción con grupos hidróxilo (es decir, alcoholes).
Los ejemplos ilustrativos de matrices de polímero adecuadas son los seleccionados de copolímeros de poliacrilato PS, POEPS, POEPOP, SPOCC, PEGA, CLEAR, HYDRA, PEG, copolímeros de poliéter-poliamina , y diaminas de polietileno reticulado, Expansin, poliamida, Jandagel, PS-BDODMA, PS-HDODA, PS-TTEGDA, PS-TEGDA, GDMA-PMMA, PS- TRPGDA, ArgoGel, resinas Argopore, Toiopearl, otros poliacrilatos reticulados, PEGA de alta capacidad, Fractogel, Sefadex, sefarosa, otras agarosas reticuladas, y derivados de los mencionados.
En una fase final, el grupo de protección de la amina primaria terminal en la cadena lateral de alcóxido puede ser eliminada. Los grupos de protección de ftalimida son eliminados mediante el tratamiento con soluciones que contienen hidracina o etilenodiamina, mientras que grupos de protección tipo imina pueden ser hidrolizados incluso bajo condiciones más suaves utilizando concentraciones más bajas de ácidos o bases en agua. Los grupos de protección tipo amida requieren más a menudo tratamiento base fuerte a temperaturas elevadas y, por ello, son menos favorables.
Si se usa el procedimiento de arriba, los sistemas macromoleculares pueden ser restituidos por brazos funcionales derivados de hidrofilicidad deseada con una amina primaria fácilmente accesible como un grupo terminal. Los sistemas macromoleculares de este tipo pueden ser usados como tales o siendo modificados mediante la modificación química del grupo amino.
El grupo amino puede usarse como un punto de partida para química de fase sólida o puede ser usado como un punto de fijación para las moléculas más complejas, tales como proteínas, nucleótidos o ligandos de afinidad.
En resumen, la invención consiste en la formación de entidades moleculares específicas y el uso de estas entidades para la modificación de sistemas macromoleculares. La formación consiste en 4 fases:
1.
Alcoxilación de una amina de alquilo de hidroxi N-protegida.
2.
Fijación de una fracción reactiva mediante el terminal libre de hidroxi del óxido de polialquileno.
3.
Reacción de la fracción reactiva con grupos funcionales del sistema macromolecular.
4.
Eliminación del grupo N-protector para liberar una amina primaria.
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Formas de realización específicas
En una forma de realización concreta, la presente invención se refiere a un método para modificar una macromolécula, en particular una matriz de polímero, incluyendo el método los pasos de
(i) proveer la macromolécula (por ej. matriz de polímero);
(ii) proveer un compuesto de la fórmula general (I):
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4
donde
\quad
{P}-N es un grupo ftalimido;
\quad
m es 1 y n es un número entero de 1-100;
\quad
R^{1} y R^{2} son ambos hidrógeno; y
\quad
X es un grupo reactivo, tal como es seleccionado de los grupos reactivos que contienen oxetano, y de los grupos reactivos que contienen oxirano, en particular de los grupos reactivos que contienen oxetano o de los grupos reactivos que contienen oxirano; y
\vskip1.000000\baselineskip
(iii) dejar que el compuesto de la fórmula general (I) reaccione con la macromolécula (por ej. matriz de polímero), para formar injertos en dicha macromolécula.
En una forma de realización adicional concreta, la invención proporciona un compuesto de la fórmula general (I):
5
donde
\quad
{P}-N es un grupo ftalimido;
\quad
m es 1 y N es un número entero de 1-100;
\quad
R^{1} y R^{2} son ambos hidrógeno; y
\quad
X es un grupo reactivo que contiene oxetano o un grupo reactivo que contiene oxirano.
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En estas formas de realización, X preferiblemente representa CH_{2}(O)CHCH_{2}-(oxiranil-metil).
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Formas de realización alternativas
Aunque las macromoléculas referidas en este caso se basan principalmente en esqueletos derivados de moléculas orgánicas, - en la forma de realización alternativa - se prevé que el método aquí definido puede ser útil para modificar sustratos de vidrio (por ej. placas, perlas, bastoncitos, etc.). En ejemplos de este tipo, el grupo reactivo (X en el compuesto de la fórmula general (I)) debería ser capaz de reaccionar con grupos de superficie de SI-OH del sustrato de vidrio en cuestión o grupos de superficie de sustrato de vidrio ya derivatizados. Por lo tanto, un grupo reactivo adecuado frecuentemente será del tipo silano.
En otra alternativa, se prevé que el grupo reactivo X del compuesto de la fórmula general (I) puede simplemente ser un par electrónico, es decir, que -CH_{2} O-X es -CH_{2}O, correspondiente a un grupo terminal deprotonado - CH_{2}-OH de la cadena del óxido de polialquileno. Tal grupo reactivo puede, p. ej., reaccionar con grupos epóxidos de la macromolécula.
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Ejemplos Ejemplo 1 Alcoxilación de N-(2-hidroxietil)-ftalimida
La síntesis fue realizada en un autoclave de 3 litros equipado con un manto de calentamiento, un serpentín de enfriamiento interno y un agitador mecánico.
El catalizador fue añadido a 300 g de N-(2-hidroxietil)-ftalimida (HPI, Katwijk Chemie bv, NL). La carga del reactor fue secada a 130ºC mediante una purga de nitrógeno durante 20 minutos. Después se añadió óxido de etileno a la temperatura seleccionada para mantener la sobrepresión en el nivel de entre 3-5 bar (veáse tabla abajo). Después de introducir 640 g de óxido de etileno (EO), el producto fue esterilizado a vapor 30 minutos a la temperatura de reacción. El etoxilato obtenido fue descargado a 40ºC y pesado.
6
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Los catalizadores MEO-3 y MEO-LA son catalizadores de lantanio heterogéneos desarrollados por Mexeo, PI. Se estiman purezas basándose en espectros Maldi Tof.
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Ejemplo 2 Funcionalización de N-(2-hidroxietil)-ftalamida alcoxilada con epiclorhidrina
La N-(2-hidroxietil)-ftalimida alcoxilada preparada como se describe en el Ejemplo 1 usando el catalizador MEO-3 fue secada por evaporación azeotrópica de acetonitrilo (5 ml/g PEG, 2x) y disuelta en THF (5 ml/g PEG) con agitación y exclusión de humedad. El hidruro de sodio [60% en peso dispersión en aceite mineral] fue añadido en pequeñas cantidades a la solución PEG con agitación y exclusión de humedad. La reacción de desprotonación fue agitada a temperatura ambiente durante 2 h. La epiclorohidrina fue añadida gota a gota y la reacción fue agitada a 40ºC durante 12 h. El solvente se evaporó al vacío y el residuo fue mezclado con acetonitrilo (25 ml). La sal sódica precipitada fue separada mediante un centrifugado a 8000 r.p.m. durante 20 min y el sobrenadante fue decantado y evaporado al vacío. Los productos fueron lavados con heptano (3x25 ml) para eliminar aceite mineral y fueron secados bajo un vacío alto.
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Ejemplo 3 Injerto en una matriz de polímero
El producto del Ejemplo 2 es injertado en una matriz de polímero como en el Ejemplo 9.
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Ejemplo 4 Hidrólisis de una ftalimida derivada de una matriz de polímero
La matriz de polímero obtenida en el Ejemplo 3 es lavada en un embudo de filtro de vidrio con 150 ml de metanol y tras esto, es lavada con 150 ml de butanol. Después de vaciar el solvente, otros 50 ml de butanol se añaden al vaso de precipitados y se deja a temperatura ambiente durante 2 h. El butanol se vacía y la resina se coloca en un matraz de fondo redondo. A la resina, se le añaden 11 ml de etilenodiamina y después 30 ml de butanol. La mezcla es agitada y calentada a 90ºC durante 15 h bajo atmósfera inerte. El producto resultante es lavado con agua seguido de 0,5 M HCl hasta que el pH sea aprox. 1-2. La resina es luego extraída del solvente y cubierta con 2 M HCl. La mezcla es agitada y calentada a 90ºC durante 2 h. Finalmente, la resina es lavada íntegramente con 1 M NaOH, seguido de agua.
Ejemplo 5 Preparación de Oxirano- PEG-Ftalimida
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7
Disolver la PEG-ftalimida preparada como se describe en el Ejemplo 1 usando el catalizador MEO-3 (1 equiv) en THE (5 ml) y añadir hidruro de sodio (60% aceite) (1 equiv) con agitación. Después de 6 h, añadir epiclorohidrina (1,5 equiv) gota a gota a la mezcla reactiva a 45ºC agitándola durante 16 h. Añadir DCM a la mezcla reactiva, filtrar las impurezas insolubles. Vaporizar el solvente en vacío para producir el producto.
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Ejemplo 6 Preparación de VO-2000-PEG-amina
8
Lavar la resina VO-2000 (una resina a base de PEG reticulado con oxetano comercializada por VersaMatrix A/S) (0,5 mmol OH) con DMF y añadir KOBut^{t} (4 equiv) en DMF (5 mL). Mantener la mezcla reactiva a 100ºC y enjuagar con argón. Añadir oxirano-PEG-ftalimida preparada como se describe en el Ejemplo 1 usando el catalizador MEO-3 (4 equiv) en DMF (5 mL) a la mezcla reactiva y dejar que la reacción continué durante toda la noche. Filtrar la resina, lavar con DMF, etanol, agua, etanol y butanol. Añadir etilenodiamina (5 equiv) a la resina en butanol y mantener la mezcla reactiva a 90ºC durante toda la noche. Lavar la resina con butanol, etanol, agua, etanol, DMF y DCM.
\vskip1.000000\baselineskip
Análisis: la prueba de Kaiser es positiva
Carga: Fmoc-Gly-OH se fijó a la resina con el método de activación TBTU/NEM. El grupo Fmoc en la resina previamente pesada fue dividido con 20% de piperidina en DMF y la absorbencia del aducto de piperidina-fulveno medida a 290 nm y se calculó el valor OD de la carga de amino de la resina. Carga medida = 0,69 mmol/g
Ejemplo 7 Preparación de PEG-ftalimida carboxílica
9
Disolver PEG-ftalimida preparada como se describe en el Ejemplo 1 usando el catalizador MEO-3 (1 equiv) en 25 mL de agua/8 mL de H_{2}SO_{4} conc. y añadir CrO_{3} en 5 mL agua. Agitar la solución durante 16 h a temperatura ambiente. Añadir 25 mL de agua a la mezcla reactiva y extraída con DCM (3x). Combinar las capas orgánicas y lavadas con agua (2x) y NaOH saturado (2x) y secar la fracción orgánica sobre Na_{2}SO_{4} y concentrar en vacío.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 8 Preparación de amina VA-1900-PEG
10
Se lava la resina VA-1900 (una resina a base de PEG reticulado con acrilamida con una longitud media de cadena PEG de 1900 dalton comercializada por VersaMatrix NS) (0,017 mmol NH_{2}) con DMF y se añade PEG-ftalimida carboxílica preparada como se describe en el Ejemplo 7 (10 equiv), TBTU (9.6 equiv) y NEM (13.3 equiv) en DMF a la resina y se deje que la reacción continúe durante 3 h. Filtrar la resina, lavarla con DMF, etanol, agua, etanol y butanol. Añadir etilenodiamina (5 equiv) a la resina en butanol y mantener la mezcla reactiva a 90ºC durante toda la noche. Lavar la resina con butanol, etanol, agua, etanol, DMF y DCM.
\vskip1.000000\baselineskip
Análisis: la prueba de Kaiser es positiva
Carga: Fmoc-Gly-OH fue fijada a la resina con el método de activación TBTU/NEM. El grupo Fmoc en la resina previamente pesada fue dividido con el 20% de piperidina en DMF y la absorbencia del aducto de piperidina-fulveno medida a 290 nm y se calculó el valor OD de la carga de amino de la resina. Carga medida = 0,27 mmol/g
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 9 Derivatización de resina acrilada
Se lavaron 15 mL de resina epoxiacrilada con agua destilada, etanol y THF y los excedente de THF fueron eliminados por succión. Se disolvieron 11,4 g de PEG-ftalimida (4 equiv) en 6 mL de THF y se añadieron 720 mg de hidruro de sodio (4 equiv). La reacción fue violenta creando una gran cantidad de espuma. La solución fue entonces añadida a la resina + 4 mL THF. El acoplamiento procedió a 45 grados durante toda la noche. La resina fue lavada con THF, etanol, agua, etanol y finalmente butanol. Se añadieron 1,5 mL de etilenodiamina a 9 mL de butanol y se añadieron a la resina. La reacción tuvo lugar a 90 grados durante toda la noche. La resina fue lavada con butanol, etanol y agua.
Análisis: Se realizó una prueba de Kaiser en unas perlas y se volvieron azules y positivas indicando la presencia de aminas primarias en la resina.
Carga: Se lavaron 15 mL de resina amino-PEG con agua, etanol y DMF pero sin eliminar el DMF intersticial por succión. Se mezclaron 5,35 g de Fmoc-Gly (4 equiv.) y 5,78 g de TBTU (4 equiv) y 2,27 mL de NEM (4 equiv) en 18 mL y se añadieron a la resina. El acoplamiento fue realizado a temperatura ambiente durante el fin de semana. Después del fin de semana, se tomaron perlas alícuotas de 100 \mul para probar la carga de Fmoc que dio una carga de 307 \mumol NH_{2} /g de resina seca.
\vskip1.000000\baselineskip
Documentos citados en la descripción
Esta lista de documentos citados por el solicitante ha sido recopilada exclusivamente para la información del lector y no forma parte del documento de patente europea. La misma ha sido confeccionada con la mayor diligencia; la OEP sin embargo no asume responsabilidad alguna por eventuales errores u omisiones.
\vskip1.000000\baselineskip
Documentos de patente citados en la descripción
\bulletLANGE WAHL Bull. Chim. Soc. Fr., 1951, 340-342 [0008]
\bulletLONTJENS et al. Polym. Bull., 1993, vol. 30, 489-494 [0008]
\bulletY-I HUANG J. polym. Sci., 1985, vol. 23, 795-799 [0008]

Claims (7)

  1. \global\parskip0.950000\baselineskip
    1. Método para modificar una macromolécula, el método incluyendo los pasos de
    (i) proveer la macromolécula;
    (ii) proveer un compuesto de la fórmula general (I):
    11
    donde
    \quad
    N es un grupo amino primario protegido con el grupo de protección P, donde el grupo de protección implica ambas valencias libres del grupo amino primario;
    \quad
    m es un número entero del 1-12 y N es un número entero del 1-2000;
    \quad
    R^{1} y R^{2} son independientemente seleccionados del grupo consistente en hidrógeno y alquilo C_{1-4}; y
    \quad
    X es un grupo reactivo seleccionado de grupos reactivos que contienen oxetano y grupos reactivos que contienen oxirano; y
    \vskip1.000000\baselineskip
    (iii) dejar que el compuesto de la fórmula general (I) reaccione con las macromoléculas, para formar injertos en la macromolécula.
  2. 2. Método según la reivindicación 1, donde la macromolécula es una matriz de polímero.
  3. 3. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el grupo de protección {P}-N es un grupo ftalimido.
  4. 4. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el grupo de protección {P}-N es un grupo ftalimido, m es 1, N es 1-10.
  5. 5. Método según la reivindicación 1, incluyendo los pasos de
    (i) proveer la macromolécula;
    (ii) proveer un compuesto de la fórmula general (I):
    12
    donde
    \quad
    {P}-N es un grupo ftalimido;
    \quad
    m es 1 y N es un número entero del 1-100;
    \quad
    R^{1} y R^{2} son ambos hidrógeno; y
    \vskip1.000000\baselineskip
    (iii) dejar que el compuesto de la fórmula general (I) reaccione con la macromolécula, para formar injertos en dicha macromolécula.
    \global\parskip1.000000\baselineskip
  6. 6. Compuesto de la fórmula general (I):
    13
    donde
    \quad
    {P}-N es un grupo ftalimido;
    \quad
    m es 1 y n es un número entero del 1-100;
    \quad
    R^{1} y R^{2} son ambos hidrógeno; y
    \quad
    X es un grupo reactivo que contiene oxetano o un grupo reactivo que contiene oxirano.
    \vskip1.000000\baselineskip
  7. 7. Método para la preparación de un compuesto de la fórmula general (I):
    14
    donde {P}-N es un grupo ftalimido, m es un número entero de 1-12, N es un número entero de 1-2000, R^{1} y R^{2} son ambos hidrógeno, y X es un grupo reactivo seleccionado de grupos reactivos que contienen oxetano y grupos reactivos que contienen oxirano, comprendiendo ambos métodos los pasos de:
    (a)
    proveer un \alpha-hidroxi-\omega-amino-alcano C_{2-13} protegido en N por un ftalimido;
    (b)
    hacer reaccionar dicho alcano con óxido de etileno en presencia de un catalizador; y
    (c)
    convertir o poner en función el grupo terminal OH del producto obtenido en la fase (b).
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