ES2326375T3 - Produccion de extractos de lupulo que tienen bioactividad estrogena y antiproliferativa. - Google Patents
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Abstract
Un método para producir un extracto de lúpulo enriquecido en 8-prenilnaringenina con respecto a 6-prenilnaringenina, caracterizado porque el método comprende las etapas de someter el lúpulo o un producto de lúpulo a (1) una reacción de isomerización en presencia de agua como disolvente, y en presencia de una cantidad de una base, y (2) al menos a una extracción.
Description
Producción de extractos de lúpulo que tienen
bioactividad estrógena y antiproliferativa.
La presente invención se refiere a un método
para la producción de extractos de lúpulo enriquecidos con
8-prenilnaringenina con respecto a
6-prenilnaringenina, de acuerdo con el preámbulo de
la primera reivindicación.
El lúpulo contiene tres clases principales de
metabolitos secundarios, a saber los ácidos de lúpulo, el aceite
esencial de lúpulo y los polifenoles de lúpulo. Los ácidos de lúpulo
y el aceite esencial de lúpulo y, en cierta medida, los polifenoles
de bajo peso molecular, son los componentes más importantes del
lúpulo a los efectos de la fermentación de la cerveza. Los
extractos de lúpulo con fines de fermentación se preparan, por lo
general, por la extracción de los lúpulos o productos del lúpulo con
CO_{2} líquido o supercrítico, con el fin de obtener extractos de
lúpulo que contienen los metabolitos secundarios mencionados
anteriormente, en las proporciones deseadas.
Recientemente, un importante volumen de
investigación se ha centrado en la actividad biológica de los
flavonoides prenilados, que constituyen una clase específica de
polifenoles. Los flavonoides prenilados más importantes presentes
en el lúpulo fresco son las chalconas, en particular
xantohumol y desmetilxantohumol. Estas chalconas son precursores de
flavanonas tales como isoxantohumol (que tiene su origen en
el xantohumol), 8-prenilnaringenina y
6-prenilnaringenina (ambas procedentes de
desmetilxantohumol) (véase la Figura 1). La
8-prenilnaringenina ha sido identificada como el
principio activo de la actividad estrogénica del lúpulo, con una
actividad mayor que la de otros fitoestrógenos establecidos
(Milligan et al., 1999). Además de
8-prenilnaringenina, otros compuestos similares
derivados del lúpulo, tales como
6-prenilnaringenina, isoxantohumol,
6,8-diprenilnaringenina y
8-geranilnaringenina (Milligan et al., 2000),
han demostrado ser sólo débilmente estrogénicos. Ensayos in
vivo han confirmado la elevada actividad estrogénica de
8-prenilnaringenina (Milligan et al.,
2000).
Por otra parte, xantohumol ha demostrado ser un
compuesto preventivo del cáncer muy potente in vitro, con un
espectro extraordinariamente amplio de mecanismos inhibitorios en
las etapas de iniciación, promoción y progresión de la
carcinogénesis (Gerhauser et al., 2002). En coincidencia con
su potencial anti-iniciación, el xantohumol modula
de manera potente la actividad de enzimas que intervienen en el
metabolismo carcinógeno y en la detoxificación, por ejemplo, las
enzimas CYP450 (Henderson et al., 2000; Miranda et
al., 2000c), y quinona reductasas (Miranda et al.,
2000a). Adicionalmente, se ha demostrado que xantohumol es capaz de
eliminar especies de oxígeno reactivo que incluyen los radicales
hidroxilo y peroxilo (Miranda et al., 2000b; Rodríguez et
al., 2001), así como de inhibir el radical aniónico superóxido y
la producción de óxido nítrico (Zhao et al., 2003). Como
potencial actividad promotora antitumoral, xantohumol demuestra
propiedades antiinflamatorias a través de la inhibición de la
actividad de la ciclooxigenasa-1 y la
ciclooxigenasa-2 (Gerhauser et al., 2002).
Los mecanismos antiproliferativos dirigidos a la prevención de la
carcinogénesis en la fase de progresión incluyen la inhibición de
la síntesis de ADN y la inducción de la detención del ciclo celular
en la fase S, apoptosis e inducción de la diferenciación celular
(Miranda et al., 1999; Gerhauser et al., 2002).
Además, xantohumol ha demostrado ser eficaz a concentraciones
nanomolares en la prevención de lesiones preneoplásicas inducidas
por carcinógenos en el cultivo de glándulas mamarias de ratón, un
modelo que actúa como enlace entre los modelos de carcinogénesis
in vitro a corto plazo e in vivo a largo plazo
(Gerhauser et al., 2002).
Los flavonoides anteriormente descritos son
productos no esenciales en el procedimiento de fermentación de la
cerveza. En su gran mayoría, permanecen en el residuo después de la
extracción de los compuestos deseados del lúpulo con CO_{2}
líquido o supercrítico. En condiciones normales de fermentación, en
la que se usa lúpulo entero, productos de lúpulo o fracciones
particulares de lúpulo, la concentración total de flavonoides
prenilados puede ser de hasta 4 mg por litro de cerveza (Stevens
et al., 1999).
En el documento DE 199 39 350 se describe un
método para la producción de un extracto de lúpulo enriquecido en
xantohumol, según el cual se extrae un producto de lúpulo con un
disolvente orgánico o agua alcalina. Antes de esta extracción, el
producto de lúpulo se puede extraer con agua para eliminar las
sustancias hidrófilas. Como disolvente orgánico apropiado se
describe una solución de agua/etanol. Sin embargo, no se menciona
nada sobre la presencia de flavanonas preniladas en el extracto de
lúpulo.
De acuerdo con el documento WO03014287, la
actividad estrogénica de los extractos de lúpulo se debe atribuir,
en principio, a la presencia de 8-prenilnaringenina,
que ha demostrado ser el compuesto que exhibe la actividad
estrogénica más importante. Se informa de que la
6-prenilnaringenina exhibe también actividad
estrogénica, aunque menor que la de
8-prenilnaringenina, y de que xantohumol es capaz de
interferir en el metabolismo celular y se puede considerar un
agente de prevención del cáncer. Se describe que el uso de los
extractos de lúpulo del documento WO03014287 es adecuado en la
profilaxis o la terapia de estados patológicos causados por una
falta de estrógenos o alteraciones del metabolismo de hormonas
esteroides sexuales, en especial de estrógenos.
El documento WO03014287 describe igualmente un
método para producir un extracto de lúpulo enriquecido con chalconas
y flavanonas tales como xantohumol, isoxantohumol,
6-prenilnaringenina y
8-prenilnaringenina. El método comprende las etapas
de
- (1)
- extraer el lúpulo o un producto de lúpulo con un alcano C_{5}-C_{7} o CO_{2} supercrítico para eliminar las sustancias hidrófobas presentes en el lúpulo;
- (2)
- extraer el residuo obtenido en la etapa (1) con agua, con el fin de eliminar las sustancias hidrófobas contenidas en el lúpulo y, por último
- (3)
- extraer el residuo obtenido en la etapa (2) con un disolvente orgánico, seleccionado del grupo consistente en alcoholes, alcoholes con base acuosa, cetonas, cetonas con base acuosa, o ésteres, o mezclas de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
Las concentraciones de isoxantohumol,
6-prenilnaringenina y
8-prenilnaringenina en el extracto de lúpulo
obtenido de esta forma han demostrado aumentar con el incremento de
la temperatura durante la extracción con agua en la etapa (2). Sin
embargo, en todos los ejemplos, la relación ponderal de
8-PN/(8-PN+6-PN)
está dentro del intervalo de 18%-25%.
Del extracto de lúpulo descrito en el documento
WO02/085393 se afirma que contiene al menos 3% en peso de
flavonoides prenilados, en especial xantohumol, isoxantohumol y
8-prenilnaringenina. No obstante, una mayoría de
los extractos del documento WO02/085393 no exhibió una actividad
estrogénica reforzada en comparación con el extracto tradicional,
no enriquecido. Adicionalmente, no se ha demostrado ninguna
correlación entre la composición del extracto y la actividad
estrogénica. Tampoco se atribuye estrogenicidad a la
8-prenilnaringenina. Se señala, además, que las
propiedades estrogénicas del extracto se expresarían de manera
particular cuando contuvieran 1-30% en peso de
xantohumol, 0,01-50% en peso de isoxantohumol,
0,0005-10% en peso de
8-prenilnaringenina. Se afirma que el extracto de
lúpulo del documento WO02/085393 es apropiado para fabricar
medicamentos con propiedades estrogénicas, composiciones cosméticas,
suplementos nutricionales y preparaciones dietéticas.
Hänsel y Schulz (1988) describen someter
desmetilxantohumol y xantohumol, aislados de conos de lúpulo recién
cosechados, a isomerización en una solución etanólica de hidróxido
de potasio al 5%. Xantohumol isomerizó en isoxantohumol con una
recuperación de 80%, en tanto que la isomerización de
desmetilxantohumol proporcionó tanto
6-prenilnaringenina como
8-prenilnaringenina, con recuperaciones de 35% y
30%, respectivamente. De esta forma, sería posible obtener una
relación de
8-PN/(8-PN+6-PN) de
46%, demostrando que se favorece la formación de una
6-prenilnaringenina termodinámicamente más
estable.
De manera alternativa, Milligan et al.
(2002) describen la preparación de
8-prenilnaringenina a través de la desmetilación de
isoxantohumol, aislado tras la isomerización del residuo de un
extracto de diclorometano de conos secos de lúpulo en una solución
etanólica de hidróxido de potasio al 5%. El procedimiento de
desmetilación se llevó a cabo usando tricloruro de boro en una
mezcla de acetonitrilo y diclorometano, y demostró tener un
rendimiento de sólo 53%.
Una serie de patentes, por ejemplo los
documentos US 5.370.897, US 3.839.588 y US 1.246.425, describen
someter ácidos alfa a un procedimiento de isomerización alcalina
durante la producción de ácidos iso-alfa. Sin
embargo, los extractos adecuados para una reacción de isomerización
de este tipo se obtienen, en su mayor parte, por extracción con
hexano, dióxido de carbono supercrítico o líquido como disolventes
de extracción. Dado que tales extractos no contienen xantohumol ni
desmetilxantohumol, los extractos isomerizados carecen de las
correspondientes flavanonas preniladas. Adicionalmente, el
documento US 1.274.678 describe que cuando el extracto original que
contiene los ácidos alfa se obtiene por extracción con benceno, se
demuestra que resulta esencial eliminar los flavonoides prenilados,
xantohumol e isoxantohumol, puesto que estas sustancias interfieren
con el proceso de producción. De este modo, estos hallazgos sobre
la isomerización en medio alcalino carecen de importancia para la
presente invención.
Aunque se han desarrollado métodos para
enriquecer los extractos de lúpulo en flavonoides prenilados, hasta
la fecha no se han encontrado métodos para obtener extractos de
lúpulo en los que la 8-prenilnaringenina, altamente
estrogénica, esté presente de manera predominante en comparación con
su isómero, 6-prenilnaringenina.
Por lo tanto, un objeto de la presente invención
es ofrecer un método para la producción de un extracto de lúpulo con
un rendimiento optimizado de 8-prenilnaringenina, en
particular un método con el que se logre un enriquecimiento
predominante en 8-prenilnaringenina, comparada con
el isómero 6-prenilnaringenina.
Un objeto adicional de esta invención es
proporcionar extractos de lúpulo con composiciones específicas y
optimizadas de todos los flavonoides prenilados relevantes, o
derivados de los mismos, teniendo en consideración sus actividades
biológicas.
Esto se alcanza con la presente invención, por
medio de un procedimiento que muestra las especificidades técnicas
de la parte caracterizadora de la primera reivindicación.
El método de la presente invención se distingue
en que el lúpulo o un producto de lúpulo se someten a (1) una
reacción de isomerización en presencia de agua como disolvente, y en
presencia de una cantidad de una base, y (2) al menos a una
extracción.
En el método de la presente invención, se
prefiere utilizar agua como disolvente en la reacción de
isomerización.
\newpage
Se entiende que el lúpulo o el producto de
lúpulo comprende cualquier forma de lúpulo procesado, por ejemplo,
lúpulo peletizado o cualquier extracto de lúpulo o cualquier residuo
derivado del lúpulo que contiene flavonoides prenilados.
El inventor ha encontrado ahora que cuando se
lleva a cabo la reacción de isomerización en presencia de agua como
disolvente, es posible obtener un extracto de lúpulo que está
enriquecido de manera adicional en flavonoides prenilados. En
especial, con la presente invención se puede obtener un extracto
enriquecido en 8-prenilnaringenina (y xantohumol)
con respecto a 6-prenilnaringenina, en comparación
con el estado de la técnica, en donde el enriquecimiento se
manifiesta de manera particular cuando se utiliza exclusivamente
agua como disolvente en la reacción de isomerización. Debido al
enriquecimiento en 8-prenilnaringenina, se puede
obtener un extracto de lúpulo con una actividad estrogénica mayor,
en el que -además- la posible actividad proliferativa causada por
la presencia de 8-prenilnaringenina resulta
contrarrestada por la actividad antiproliferativa de xantohumol
(véase la Figura 2). En este sentido, es importante destacar que
xantohumol exhibe un espectro excepcionalmente amplio de mecanismos
de inhibición en todas las etapas de la carcinogénesis, es decir,
iniciación, promoción y progresión (Gerhauser et al.,
2002).
La secuencia en la que se lleva a cabo la
isomerización y la al menos una extracción no es crítica para la
invención. En la práctica, esto significa que la isomerización o la
al menos una extracción se puede efectuar en primer lugar.
\vskip1.000000\baselineskip
Es sabido que a temperaturas elevadas tanto
desmetilxantohumol como xantohumol, los flavonoides prenilados
(chalconas) más importantes presentes en el lúpulo o un producto de
lúpulo, experimentan una fácil isomerización térmica a través de
una cicloadición intramolecular tipo Michael en sus correspondientes
flavanonas. Mientras que la isomerización de xantohumol conduce de
forma casi exclusiva a isoxantohumol, la isomerización de
desmetilxantohumol da lugar a la formación de una mezcla de
8-prenilnaringenina (8-PN) y
6-prenilnaringenina (6-PN) en una
relación molar de (8-PN x
100%)/(8-PN + 6-PN) que,
habitualmente, se encuentra entre 15% y 25%, debido muy
probablemente a la menor estabilidad termodinámica de
8-PN, comparada con 6-PN.
Sorprendentemente, se ha encontrado ahora que cuando la reacción de
isomerización se lleva a cabo en presencia de agua y bajo
condiciones alcalinas específicas, la relación
(8-PN x 100%)/(8-PN +
6-PN) se desvía a favor de una 8-PN
termodinámicamente menos estable, manteniéndose casi inalterado el
rendimiento total de (8-PN + 6-PN).
Dado que 8-PN es el compuesto que tiene la mayor
actividad estrogénica, comparada con 6-PN o
cualquier otro compuesto derivado del lúpulo, la actividad
estrogénica del extracto de lúpulo obtenido de este modo puede verse
aumentada en 3 a 5 veces en comparación con los extractos de lúpulo
conocidos (por ejemplo, extracción hidroalcohólica a temperaturas
elevadas). Con el uso de agua como
disolvente exclusivo en la reacción de isomerización se ha encontrado un enriquecimiento optimizado en 8-PN.
disolvente exclusivo en la reacción de isomerización se ha encontrado un enriquecimiento optimizado en 8-PN.
Una realización preferida del método de la
presente invención se distingue porque la reacción de isomerización
se lleva a cabo bajo condiciones alcalinas, correspondientes a
concentraciones de KOH en agua (% en peso/volumen) de al menos 0,5,
preferentemente de al menos 1 y, más preferentemente, de al menos
5.
La realización de la reacción de isomerización
bajo condiciones alcalinas crecientes permite desviar la relación
(8-PN x 100%)/(8-PN +
6-PN) desde 15-25%, tal como se
conoce en el estado de la técnica, a más de 50%, a menudo por
encima de 60 y 75% cuando se usa agua como disolvente, o incluso más
a favor de 8-PN, mientras que el rendimiento total
de (8-PN + 6-PN) permanece
prácticamente invariable. Como resultado, se puede obtener un
extracto de lúpulo que está altamente enriquecido en
8-PN. O, dicho con otras palabras, con la presente
invención es posible invertir la relación
6-PN/8-PN y, mientras que con las
técnicas actualmente vigentes era posible obtener un
enriquecimiento selectivo en 6-PN, la presente
invención ofrece un enriquecimiento selectivo en
8-PN, que es el compuesto con mayor actividad
estrogénica. Bajo las condiciones de reacción usadas en el método
de la presente invención, hasta aproximadamente 95% del xantohumol
presente en el producto de lúpulo que se hace reaccionar puede
isomerizar en isoxantohumol. Se ha observado que el proceso de
isomerización puede ocurrir también de esta forma con extractos en
los que se
ha convertido previamente desmetilxantohumol en una determinada relación de (8-PN x 100%)/(8-PN + 6-PN).
ha convertido previamente desmetilxantohumol en una determinada relación de (8-PN x 100%)/(8-PN + 6-PN).
Se señala que en la técnica conocida, la
isomerización de chalconas en sus correspondientes flavanonas se
lleva a cabo, habitualmente, en una solución etanólica de hidróxido
de potasio al 5% (por ejemplo, Hänsel y Schulz, 1988) bajo
condiciones de reflujo durante 30 minutos, dando una relación
(8-PN x 100%)/(8-PN +
6-PN) de 40-46%. No obstante, con
la presente invención, el enriquecimiento en 8-PN
termodinámicamente menos estable se ha podido aumentar
significativamente mediante la realización de la reacción de
isomerización en agua, en especial a temperatura ambiente.
Para minimizar el riesgo de oxidación de los
reactantes o de los productos de reacción, la reacción de
isomerización se lleva a cabo, preferentemente, en atmósfera
inerte. Los reactantes, en especial xantohumol y desmetilxantohumol,
así como los productos de reacción isoxantohumol y
8-prenilnaringenina, contienen dobles enlaces y
grupos fenólicos, que son susceptibles de oxidación.
La temperatura a la que se lleva a cabo la
reacción de isomerización no es crítica para la invención y puede
ser cualquier temperatura situada entre el punto de congelación y el
punto de ebullición de la mezcla de reacción. De forma muy
especialmente apropiada, la reacción se lleva a cabo a temperatura
ambiente, si bien las temperaturas entre 40 y 60ºC, en particular
de aproximadamente 50ºC, se consideran también adecuadas.
Los inventores han encontrado, además, que la
reacción de isomerización se produce a una elevada velocidad de
reacción y puede completarse prácticamente en menos de 15 minutos,
incluso a temperatura ambiente. Resulta preferible llevar a cabo la
reacción de isomerización durante un período de tiempo de entre 0,25
y 4 h con el fin de favorecer la producción de
8-prenilnaringenina. El experto en la técnica será
capaz, en general, de ajustar la duración y la temperatura a la que
se efectúa la reacción de isomerización para obtener una conversión
y selectividad óptimas hacia los productos finales deseados y
minimizar el riesgo de formación de productos secundarios no
deseados, lo que podría ocurrir si la reacción de polimerización se
mantiene durante un período de tiempo demasiado prolongado.
\vskip1.000000\baselineskip
Para aislar los compuestos deseados del lúpulo o
del producto del lúpulo, ya sea antes o después de haber finalizado
la reacción de isomerización, el lúpulo o el producto de lúpulo se
someten al menos a una extracción.
La extracción de los flavonoides prenilados se
obtiene sometiendo el lúpulo o el producto de lúpulo a una
extracción con al menos un disolvente orgánico, seleccionado del
grupo de alcoholes, alcoholes con base acuosa, cetonas, cetonas con
base acuosa o ésteres, o mezclas de los mismos, o agua alcalina.
Ejemplos de disolventes orgánicos apropiados para su uso son los
disolventes de polaridad media, por ejemplo, acetato etílico o
acetona, o de alta polaridad, por ejemplo, etanol o metanol, o
mezclas de los mismos consistentes en 90/10 (en volumen) de acetato
etílico/metanol o una mezcla hidroalcohólica (75/25 (en volumen) de
etanol/agua).
Preferentemente, antes o después de someter el
lúpulo o el producto de lúpulo a la al menos una extracción, o
antes o después de someter el lúpulo o el producto de lúpulo a la
reacción de isomerización, el lúpulo o el producto de lúpulo se
someten a una etapa de extracción adicional con agua y/o al menos un
disolvente orgánico apolar, seguida de la recuperación del residuo
o del extracto enriquecido en flavonoides prenilados. La extracción
adicional con agua se efectúa con el propósito de obtener un mayor
enriquecimiento en flavonoides prenilados en el extracto de lúpulo
enriquecido, mediante la mayor eliminación posible de cualquier
material de carga hidrófilo funcional presente en el extracto
enriquecido. Ejemplos de tales materiales de carga no funcionales
incluyen proteínas. Una extracción adicional con al menos un
disolvente orgánico apolar permite reducir el contenido del
material de carga hidrófobo (lipófilo) no funcional, lo que conduce
a un mayor enriquecimiento o concentración adicional de flavonoides
prenilados en el extracto enriquecido en flavonoides prenilados.
En caso que la concentración de material de
carga hidrófobo en el material de partida del lúpulo o el producto
de lúpulo, que se deben someter a la reacción de isomerización y
extracción, sea excesivamente alta, puede considerarse una
extracción adicional con al menos un disolvente orgánico apolar. El
producto sometido a una extracción adicional de este tipo será,
principalmente, el residuo de lúpulo que permanece después de la
extracción primaria del lúpulo con CO_{2} líquido o supercrítico,
realizada bajo condiciones no exhaustivas (temperatura y presión
moderadas), para separar los compuestos de interés para la
fermentación de la cerveza del residuo que contiene metabolitos
secundarios más polares, incluidos los flavonoides prenilados
importantes.
La extracción de material de carga hidrófilo e
hidrófobo se puede llevar a cabo por cualquier procedimiento de
extracción apropiado conocido por el experto en la técnica.
Procedimientos de extracción adecuados incluyen extracciones
disolvente-disolvente (por ejemplo, agua frente a
acetato etílico, hexano frente a mezclas hidroalcohólicas), o
extracciones de fase sólida (solubilización del material hidrófilo e
hidrófobo en agua y un disolvente orgánico apolar, respectivamente,
o uso de sílice o sílice derivatizada). La separación de la fracción
con flavonoides prenilados después de las extracciones con agua y
el disolvente orgánico apolar, respectivamente, se puede llevar a
cabo, por ejemplo, por medio de decantación, filtración y/o
centrifugación.
Un método de extracción posible, por ejemplo,
comprende extraer el lúpulo con CO_{2} líquido o supercrítico y
recuperar el residuo obtenido, seguido por someter el residuo a la
reacción de isomerización bajo condiciones alcalinas.
Subsiguientemente, la mezcla de reacción que contiene el lúpulo
consumido por ebullición se acidifica hasta pH neutro y se recupera
el residuo, por ejemplo por filtración o centrifugación, después de
lavar con agua. A continuación, se pueden extraer selectivamente
los flavonoides prenilados del residuo, utilizando disolventes
adecuados o sus mezclas.
\vskip1.000000\baselineskip
Con el objeto de mejorar la viabilidad económica
de la presente invención y concentrar adicionalmente los compuestos
deseados, antes de someterlo a la reacción de isomerización y
extracción combinadas, el lúpulo o producto de lúpulo se someten a
una extracción en CO_{2} líquido o supercrítico o, al menos, un
disolvente orgánico sustancialmente apolar, seguida de la
recuperación del residuo que contiene los flavonoides
prenilados.
De hecho, esto significa que se recupera el
extracto de interés para los fines de fermentación, mientras el
residuo se enriquece en flavonoides prenilados y se le priva de la
mayor parte del material de carga hidrófobo por la
pre-extracción. Este residuo
pre-enriquecido se somete, entonces, a la
isomerización y a la al menos una extracción en orden
arbitrario.
\newpage
Otra posibilidad incluye el uso de extracción
con CO_{2} líquido o supercrítico de un extracto etanólico
denominado "extracto puro de resina", que se mezcla con un
vehículo (por ejemplo, tierra de diatomeas), y la recuperación del
residuo en el vehículo. Este residuo que contiene los flavonoides
prenilados se puede someter, entonces, a la isomerización y a la al
menos una extracción en cualquier orden.
\vskip1.000000\baselineskip
Los inventores han encontrado que es posible
inhibir o, incluso, contrarrestar una posible proliferación del
extracto de lúpulo enriquecido de la presente invención, inducida
por la actividad estrogénica de 8-prenilnaringenina,
por medio de la presencia de una cantidad de xantohumol en el
extracto enriquecido, puesto que se ha observado que xantohumol
exhibe actividad antiproliferativa. Sin embargo, los inventores han
encontrado que dicha inhibición sólo se puede obtener con la
condición de que la relación ponderal de xantohumol a
8-prenilnaringenina sea suficientemente alta. De
manera particular, los inventores han observado suficiente
inhibición con una relación ponderal de xantohumol a
8-prenilnaringenina de al menos 10, preferentemente
al menos 30. Esta relación se puede obtener agregando un exceso de
xantohumol al extracto enriquecido (véase la Figura 2). En otras
palabras, a relaciones ponderales determinadas de xantohumol a
8-prenilnaringenina, se puede obtener una inhibición
eficaz de la actividad proliferativa asociada con la estrogenicidad
de 8-prenilnaringenina mediante la actividad
antiproliferativa de xantohumol.
En este sentido, la Figura 2 demuestra que
concentraciones crecientes de 8-prenilnaringenina
conducen a un aumento de la proliferación de las células del cáncer
de mama MCF-7. Sorprendentemente, los inventores han
encontrado que para cada concentración de
8-prenilnaringenina, las concentraciones bajas de
xantohumol (< 1 \muM) estimulan la proliferación inducida por
8-prenilnaringenina, en particular aquellas
concentraciones a las que la relación de xantohumol con respecto a
8-prenilnaringenina es inferior a 10, mientras que
las concentraciones más elevadas de xantohumol, de al menos 5
\muM, han demostrado inhibir de forma significativa la
proliferación inducida por 8-prenilnaringenina.
Desgraciadamente, bajo las condiciones de
reacción que proporcionan la isomerización más eficaz de
desmetilxantohumol en 8-prenilnaringenina y
6-prenilnaringenina y que favorecen simultáneamente
la formación de 8-prenilnaringenina, xantohumol
experimenta una isomerización casi cuantitativa en isoxantohumol.
Por otra parte, es posible producir un extracto de lúpulo
enriquecido en xantohumol sometiendo el lúpulo o un producto de
lúpulo al menos a una extracción bajo condiciones no isomerizantes
(extracción bajo condiciones neutras o ácidas a temperatura
ambiente). Por lo tanto, el método de la presente invención
comprende, preferentemente, una etapa de mezclar el extracto,
obtenido por el método anteriormente descrito de un procedimiento
combinado de isomerización-extracción, con un
segundo extracto de lúpulo enriquecido en xantohumol. De esta forma,
se puede obtener un extracto de lúpulo que contiene tanto
xantohumol como 8-prenilnaringenina en una relación
ponderal específica. Es preferible que la relación ponderal de
xantohumol a 8-prenilnaringenina sea de al menos 10,
más preferentemente de al menos 30, puesto que dentro de estos
intervalos se puede obtener una mezcla que exhibe una combinación
apropiada de actividad estrogénica, debida a la presencia de
8-prenilnaringenina, y actividad quimiopreventiva
del cáncer, debida a la presencia de xantohumol. Esta combinación
permite compensar, por consiguiente, cualquier descenso del
contenido en xantohumol del material de partida tras la al menos una
reacción de isomerización, debida a la isomerización de xantohumol
en isoxantohumol. A través de la mezcla de un extracto enriquecido
en 8-prenilnaringenina, obtenido de la
extracción-isomerización combinada de esta
invención, con un extracto enriquecido en xantohumol, la presente
invención permite obtener un extracto de lúpulo con una relación
ponderal específica de 8-prenilnaringenina a
xantohumol independiente del grado de conversión de xantohumol en
isoxantohumol en la reacción de isomerización.
De este modo, con la presente invención se puede
obtener un extracto de lúpulo que contiene al menos 0,15% en peso de
8-prenilnaringenina y al menos 3% en peso de
xantohumol, más preferentemente al menos 0,33% en peso de
8-prenilnaringenina y al menos 10% en peso de
xantohumol.
Un método apropiado para obtener el extracto
enriquecido en xantohumol comprende las etapas de someter el lúpulo
o el producto de lúpulo al menos a una extracción mediante CO_{2}
líquido o supercrítico o, al menos, un disolvente orgánico
sustancialmente apolar, seguida de la recuperación del residuo
enriquecido en xantohumol, y someter el residuo al menos a una
extracción adicional con disolventes apropiados o mezclas de los
mismos, al objeto de incrementar más la concentración de
xantohumol.
De manera alternativa, la extracción con
CO_{2} líquido o supercrítico de un denominado "extracto puro de
resina" etanólico, que se mezcla con un vehículo (por ejemplo,
tierra de diatomeas) da lugar a un residuo en el vehículo
enriquecido en flavonoides prenilados. Este residuo se podría
someter, entonces, al menos a una extracción con disolventes
apropiados o mezclas de los mismos.
\vskip1.000000\baselineskip
En una realización preferida adicional del
método para la producción de un extracto de lúpulo según la presente
invención, el método comprende, adicionalmente, las etapas de
mezclar el extracto obtenido por la al menos una extracción y la
reacción de isomerización, con una cantidad de un extracto
enriquecido en un compuesto que posee una elevada actividad
estrogénica tal como una
8-alquil-naringenina,
preferentemente
8-isopentil-naringenina, que es
8-prenilnaringenina hidrogenada. El motivo de
agregar 8-isopentil-naringenina es
que los inventores han encontrado, de manera sorprendente, que
8-isopentil-naringenina exhibe
actividad estrogénica y que la actividad estrogénica es sólo
3-4 veces más débil que la actividad estrogénica de
8-prenilnaringenina (véase la Figura 4). Con
respecto a la
8-isopentil-naringenina, se señala
que, aun cuando su actividad estrogénica ha demostrado ser
3-4 veces más débil que la de
8-prenilnaringenina, la
8-isopentil-naringenina ha
demostrado exhibir una biodisponibilidad mayor y mejor estabilidad
comparada con 8-prenilnaringenina, dado que se
metaboliza con menor facilidad. Muy probablemente, este hecho se
puede atribuir a la ausencia del doble enlace en la cadena
lateral.
La obtención de un extracto enriquecido en
8-isopentil-naringenina se puede
realizar usando varios métodos.
Un primer método posible incluye las etapas
de:
- a.
- someter un extracto de lúpulo enriquecido en xantohumol a una reacción de isomerización, para convertir xantohumol en isoxantohumol;
- b.
- someter el extracto obtenido en la etapa (a) a una reacción de hidrogenación catalítica para convertir isoxantohumol en dihidro-isoxantohumol. La hidrogenación catalítica se lleva a cabo, preferentemente, con la admisión de H_{2} en presencia de un catalizador de hidrógeno tal como Pt o Pd soportado, o cualquier otro catalizador. Un ejemplo de vehículo adecuado es carbón activado. La reacción de hidrogenación se lleva a cabo, preferentemente, en MeOH;
- c.
- someter el producto de reacción de la etapa (b) a una reacción de desmetilación. Esto se efectúa para convertir el dihidro-isoxantohumol en 8-isopentil-naringenina. La reacción de desmetilación se puede llevar a cabo, por ejemplo, usando tribromuro de boro o cualquier otro agente de desmetilación.
\vskip1.000000\baselineskip
De esta forma, con el método anteriormente
descrito es posible convertir el xantohumol estrogénicamente
inactivo en un compuesto que posee una elevada actividad
estrogénica, a saber,
8-isopentil-naringenina. Se trata de
una ventaja importante, puesto que la concentración de xantohumol
en el lúpulo es significativamente mayor (0,3-1,2%
en peso) que la de desmetilxantohumol (0,005-0,2% en
peso), el precursor de 8-prenilnaringenina. Con el
método descrito anteriormente, se puede obtener un extracto de
lúpulo que no sólo está enriquecido en 8-PN, sino
también en 8-isopentil-naringenina,
como consecuencia de lo cual es posible incrementar
significativamente la actividad estrogénica.
Un segundo método posible de obtener un extracto
que contiene 8-isopentil-naringenina
consiste en la adición de este producto, obtenido por vía
sintética. Aunque la sustitución de la posición 8 tiene lugar
habitualmente con baja selectividad y rendimiento, debido al gran
número de etapas que intervienen, los inventores han desarrollado
ahora un método para la síntesis de
8-isopentil-naringenina que
comprende sólo un número limitado de etapas de reacción, con un
elevado rendimiento.
De acuerdo con este método, se somete
2,4,6-trimetoxi-benzaldehido (véase
la Figura 3) a una reacción de alquilación en presencia de un
reactivo órgano-metálico (por ejemplo,
isopentil-litio), seguida de desoxigenación a
1-alquil-2,4,6-trimetoxi-bencenos
(por ejemplo,
1-isopentil-2,4,6-trimetoxibenceno).
La desoxigenación se lleva a cabo, preferentemente, en presencia de
trietilsilano en ácido trifluoroacético. Se somete
1-alquil-2,4,6-trimetoxibenceno
a una reacción de acetilación, seguida de desmetilación, para
proporcionar
3-alquil-2,4,6-trihidroxiacetofenonas
(por ejemplo,
3-isopentil-2,4,6-trihidroxiacetofenona).
La reacción de acetilación se lleva a cabo, preferentemente, en
presencia de cloruro de acetilo y tetracloruro de estaño. La
desmetilación se lleva a cabo, preferentemente, en presencia de
tribromuro de boro.
En el transcurso de esta vía de síntesis, se
prefiere proteger selectivamente dos grupos fenólicos tales como
éteres metoximetilo (MOM). Se ha observado que el tercer grupo
fenólico resiste la reacción debido a su fuerte fijación
intramolecular al hidrógeno.
El producto de la reacción de desmetilación
obtenido de esta forma se somete a una reacción de aldol mixta en
la que interviene benzaldehído protegido con MOM, para dar la
formación de chalconas, que sufren una cicloadición intramolecular
tipo Michael en las correspondientes flavanonas. Mediante la
eliminación de los grupos protectores en ambiente ácido se obtienen
8-alquil-naringeninas (por ejemplo,
8-isopentil-naringenina).
La presente invención se refiere, asimismo, a un
extracto de lúpulo como tal, que comprende una mezcla de
8-prenilnaringenina y
6-prenilnaringenina, en donde la relación de
(8-prenilnaringenina x
100%)/(8-prenilnaringenina +
6-prenilnaringenina) es de al menos 50%,
preferentemente de al menos 60% y, más preferentemente, de al menos
75%. De este modo, el extracto de lúpulo comprende, preferentemente,
una cantidad de xantohumol tal que la relación ponderal de
xantohumol a 8-prenilnaringenina es de al menos 10,
preferentemente de al menos 20 y, más preferentemente, de al menos
30. Se prefiere que el extracto de lúpulo comprenda al menos 0,15%
(en peso), preferentemente al menos 0,33% de
8-prenilnaringenina y al menos 3%, preferentemente
al menos 10% (en peso) de xantohumol. De forma muy especialmente
preferida, el extracto de lúpulo comprende, adicionalmente, una
cantidad de isoxantohumol así como una cantidad de
8-alquil-naringenina,
preferentemente
8-isopentil-naringenina.
El extracto de lúpulo de la presente invención o
el extracto de lúpulo obtenible con los métodos de la presente
invención se puede utilizar para la fabricación de un medicamento o
un producto fitofarmacéutico dotado de actividades estrogénicas y
quimiopreventivas contra el cáncer combinadas, en el que la posible
actividad proliferativa causada por la presencia del fitoestrógeno
8-prenilnaringenina se contrarresta con la actividad
antiproliferativa de xantohumol. Además, el extracto de lúpulo de
la presente invención o el extracto de lúpulo obtenible con el
método de la presente invención se puede usar para fabricar un
medicamento o un producto fitofarmacéutico para el tratamiento o la
profilaxis de trastornos o síntomas o molestias o estados
patológicos causados por alteraciones del equilibrio hormonal de
carácter estrogénico.
Preferentemente, el trastorno o síntoma o
molestia o estado patológico causado por la alteración del
equilibrio hormonal de carácter estrogénico está relacionado con la
menopausia (incluida la perimenopausia). Por lo tanto, y
preferentemente, el estado patológico es osteoporosis. En otra
realización preferida, la enfermedad se selecciona del grupo
consistente en cánceres dependientes de las hormonas sexuales,
enfermedades cardiovasculares, disfunción de la próstata y cáncer de
colon.
La invención se refiere también a una
composición/suplemento nutricional que comprende el extracto de
lúpulo de la presente invención.
Adicionalmente, la invención se refiere a una
composición cosmética que comprende el extracto de lúpulo de la
presente invención.
Los extractos de lúpulo resultantes de la
presente invención pueden ser incorporados a diversas formulaciones,
incluidas píldoras, cápsulas, grageas, soluciones y similares, en
tanto que se pueden aplicar los excipientes habituales para su mejor
uso y biodisponibilidad.
En las reivindicaciones secundarias se definen
realizaciones preferidas adicionales.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se describe adicionalmente en los
siguientes ejemplos y figuras.
\vskip1.000000\baselineskip
El lúpulo consumido (variedad de lúpulo Nugget:
202,74 g), es decir, el residuo remanente tras la extracción del
lúpulo natural con CO_{2} líquido o supercrítico, se extrajo por
maceración a temperatura ambiente con 1 l de una mezcla disolvente
90/10 (en volumen) de acetato etílico y metanol, con el fin de
extraer selectivamente xantohumol y desmetilxantohumol del lúpulo
consumido. El extracto se filtró y se recuperó el extracto
enriquecido en xantohumol y desmetilxantohumol (720 ml). Después de
evaporar el disolvente bajo presión reducida, el residuo se
disolvió nuevamente en 100 ml de una mezcla 1/1 (en volumen) de
hexano/metanol, con el objetivo de extraer el material de carga
lipófilo, y se transfirió a un embudo de separación. Tras la adición
de 30 ml de agua acidificada (HCl 1N), se descartó la capa de
hexano que contuvo el material de carga lipófilo. La capa metanólica
remanente se sometió a presión reducida para evaporar el
disolvente. Tras la adición de agua (70 ml) y acetato etílico (100
ml), y después de la separación de fases, se secó la capa orgánica
que contuvo el extracto de lúpulo final.
\vskip1.000000\baselineskip
Rendimientos:
- \bullet Extracto de lúpulo final
- 4,64 g (2,3%)
- \bullet Desmetilxantohumol
- 2,41% en peso
\hskip0.2cm(medido por HPLC)
- \bullet Xantohumol
- 33,62% en peso
\hskip0.2cm(medido por HPLC)
\newpage
0,5 g del extracto de lúpulo obtenido en el
Ejemplo 1 se agitaron durante 1 h en agua (40 ml) que contuvo
cantidades variables de KOH (0 g, 0,2 g, 0,4 g y 2 g,
respectivamente). Subsiguientemente, la solución se acidificó a pH
= 4-5 usando HCl 6N. El extracto se recuperó por
extracción con acetato etílico y, después de retirar el disolvente,
se secó. Los resultados de los análisis de HPLC cuantitativa se
muestran en la Tabla 1. Se debe destacar que el extracto resultante
de agitar sin la adición de una base, contiene
8-prenilnaringenina y
6-prenilnaringenina en una relación muy similar a la
de los extractos de lúpulo disponibles en el comercio, mientras que
la adición de cantidades crecientes de una base aumentó
significativamente la relación (8-prenilnaringenina
x 100%)/(8-prenilnaringenina +
6-prenilnaringenina) a favor de
8-prenilnaringenina.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Un extracto de lúpulo que contuvo
8-prenilnaringenina y
6-prenilnaringenina se sometió a una reacción de
isomerización en hidróxido de potasio acuoso al 5% a temperatura
ambiente durante 30 minutos. Los resultados de los análisis de HPLC
cuantitativa se muestran en la Tabla 2. Tal como se puede ver en la
Tabla 2, la relación (8-prenilnaringenina x
100%)/(8-prenilnaringenina +
6-prenilnaringenina) aumentó desde 23% en el
extracto original a 73% tras la isomerización, a favor de
8-prenilnaringenina.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo comparativo
A
Se repitió la reacción de isomerización del
Ejemplo 3, con la excepción de que en lugar de hidróxido de potasio
acuoso al 5% se utilizó hidróxido de potasio etanólico al 5%. Los
resultados de los análisis de HPLC cuantitativa, que se muestran en
la Tabla 2, demuestran que se pudo obtener un extracto con una
relación (8-prenilnaringenina x
100%)/(8-prenilnaringenina +
6-prenilnaringenina) que aumentó desde 23% en el
extracto original a sólo 43% en el producto isomerizado.
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Figura 2 muestra el estímulo de crecimiento de
las células del cáncer de mama MCF-7 por parte de
8-prenilnaringenina y la inhibición de esta
proliferación en presencia de concentraciones crecientes de
xantohumol.
Se desarrolló un bioensayo para estudiar la
proliferación de células cancerosas dependientes del estrógeno por
parte de 8-prenilnaringenina y para determinar las
concentraciones de xantohumol necesarias para inhibir esta
proliferación inducida por 8-prenilnaringenina. A
tal efecto, se cultivaron células de cáncer de mama
MCF-7 que responden al estrógeno en placas de 96
pocillos, en presencia de una concentración fija y estimulante del
crecimiento de 8-prenilnaringenina y concentraciones
variables de xantohumol. Para cada concentración de
8-prenilnaringenina (1 nM, 10 nM y 100 nM), las
concentraciones de xantohumol fueron 0 \muM, 0,1 \muM, 1 \muM,
5 \muM, 10 \muM y 25 \muM, respectivamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Figura 4 muestra las curvas de respuesta a la
dosis para la actividad estrogénica de
17\beta-estradiol (E2),
8-prenilnaringenina (8-PN),
8-isopentil-naringenina
(8-PN-H2), y del intermedio
dihidro-isoxantohumol (IsoX-H2),
medidas con una pantalla de levadura inducible por estrógenos
(Saccharomyces cerevisiae) que expresa el receptor de
estrógeno humano y que contiene plasmidios de expresión portadores
de secuencias que responden al estrógeno, responsables de controlar
el gen informador Lac-Z (Milligan et al.,
2001). Las levaduras se cultivaron en un medio que contuvo
concentraciones crecientes de 17\beta-estradiol
(control positivo), 8-prenilnaringenina
(8-PN),
8-isopentil-naringenina
(8-PN-H2) o
dihidro-isoxantohumol (IsoX-H2). La
expresión del gen informador Lac-Z se midió y
cuantificó por espectrofotometría.
Claims (30)
1. Un método para producir un extracto de lúpulo
enriquecido en 8-prenilnaringenina con respecto a
6-prenilnaringenina, caracterizado porque el
método comprende las etapas de someter el lúpulo o un producto de
lúpulo a (1) una reacción de isomerización en presencia de agua como
disolvente, y en presencia de una cantidad de una base, y (2) al
menos a una extracción.
2. El método según la reivindicación 1,
caracterizado porque la reacción de isomerización se lleva a
cabo usando agua como disolvente.
3. El método según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque la reacción de isomerización se lleva a
cabo bajo condiciones alcalinas correspondientes a concentraciones
de KOH (% en peso/volumen) de al menos 0,1, preferentemente al menos
0,5, más preferentemente de al menos 1 y, de forma muy especialmente
preferida, de al menos 5.
4. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque, antes de
someter el lúpulo o un producto de lúpulo a la al menos una
extracción y a la reacción de isomerización, el lúpulo o el producto
de lúpulo se someten a una extracción en presencia de CO_{2}
líquido o supercrítico o, al menos, un disolvente orgánico
sustancialmente apolar, seguida de la recuperación del residuo que
contiene el extracto enriquecido en flavonoides prenilados.
5. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el método
comprende, adicionalmente, mezclar una cantidad del extracto de
lúpulo obtenido por al menos una extracción y la reacción de
isomerización, con una cantidad de un extracto de lúpulo enriquecido
en xantohumol.
6. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la reacción de
isomerización y la al menos una extracción continúan hasta obtener
un extracto que contiene al menos 0,15% en peso, preferentemente al
menos 0,33% en peso de 8-prenilnaringenina, y al
menos 3% en peso, preferentemente al menos 10% en peso de
xantohumol.
7. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque la reacción de
isomerización y la al menos una extracción continúan hasta obtener
un extracto con una relación de
xantohumol/8-prenilnaringenina de al menos 10,
preferentemente al menos 30.
8. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la reacción de
isomerización y la al menos una extracción continúan hasta obtener
un extracto que contiene 6-prenilnaringenina y
8-prenilnaringenina en una relación
(8-prenilnaringenina x
100%)/(8-prenilnaringenina +
6-prenilnaringenina) de al menos 50%,
preferentemente al menos 60% y, más preferentemente, de al menos
75%.
9. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque se utiliza como
producto de lúpulo un producto de lúpulo que ha sido sometido a una
etapa de extracción adicional con agua y/o al menos un disolvente
orgánico apolar, seguida de la recuperación del residuo que contiene
el extracto enriquecido en flavonoides prenilados.
10. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la al menos una
extracción se lleva a cabo con al menos un disolvente orgánico,
seleccionado del grupo de alcoholes, alcoholes con base acuosa,
cetonas, cetonas con base acuosa, o ésteres, o mezclas de los
mismos, o agua alcalina.
11. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque la reacción de
isomerización se lleva a cabo a una temperatura entre el punto de
congelación y la temperatura de ebullición de la mezcla de reacción,
preferentemente a temperatura ambiente.
12. El método según la reivindicación 11,
caracterizado porque la reacción de isomerización se lleva a
cabo a una temperatura entre la temperatura ambiente y 60ºC,
preferentemente a una temperatura aproximada a la temperatura
ambiente.
13. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque la reacción de
isomerización se lleva a cabo en una atmósfera inerte.
14. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque la reacción de
isomerización se lleva a cabo durante un período de tiempo de entre
0,25 y 4 h.
15. El método según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque el método
comprende, adicionalmente, la etapa de mezclar una cantidad del
extracto de lúpulo enriquecido, obtenido de la al menos una
extracción y la reacción de isomerización, con una cantidad de un
extracto de lúpulo enriquecido en una
8-alquil-naringenina,
preferentemente
8-isopentil-naringenina.
16. El método según la reivindicación 15,
caracterizado porque el extracto de lúpulo enriquecido en
8-isopentil-naringenina, se obtiene
con un método que comprende las etapas de:
- (a)
- someter un extracto de lúpulo enriquecido en xantohumol a una reacción de isomerización, para convertir xantohumol en isoxantohumol;
- (b)
- someter el extracto obtenido en la etapa (a) a una reacción de hidrogenación catalítica, para convertir isoxantohumol en dihidro-isoxantohumol;
- (c)
- someter el extracto obtenido en la etapa (b) a una reacción de desmetilación, para convertir dihidro-isoxantohumol en 8-isopentil-naringenina.
17. El método según la reivindicación 16,
caracterizado porque la reacción de isomerización en la etapa
(a) se lleva a cabo bajo condiciones alcalinas.
18. El método según las reivindicaciones 15 a
17, caracterizado porque el extracto de lúpulo enriquecido en
8-alquil-naringenina se obtiene por
la adición de una cantidad de
8-alquil-naringenina sintética,
preferentemente una cantidad de
8-isopentil-naringenina
sintética.
19. Un extracto de lúpulo que comprende una
mezcla de 8-prenilnaringenina y
6-prenilnaringenina, en la que la relación de
(8-prenilnaringenina x
100%)/(8-prenilnaringenina +
6-prenilnaringenina) es de al menos 50%,
preferentemente al menos 60% y, más preferentemente, de al menos
75%.
20. Un extracto de lúpulo según la
reivindicación 19, caracterizado porque el extracto comprende
una mezcla de xantohumol y 8-prenilnaringenina, en
donde la relación ponderal de xantohumol a
8-prenilnaringenina es de al menos 10,
preferentemente al menos 20 y, más preferentemente, de al menos
30.
21. Un extracto de lúpulo según la
reivindicación 19 ó 20, caracterizado porque el extracto de
lúpulo comprende al menos 0,15% (en peso), preferentemente al menos
0,33% de 8-prenilnaringenina y al menos 3%,
preferentemente al menos 10% (en peso) de xantohumol.
22. Un extracto de lúpulo según una de las
reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque el extracto de
lúpulo comprende, adicionalmente, isoxantohumol.
23. Un extracto de lúpulo según una cualquiera
de las reivindicaciones 19 a 22, caracterizado porque el
extracto de lúpulo comprende, adicionalmente, una cantidad de
8-alquil-naringenina,
preferentemente
8-isopentil-naringenina.
24. Uso del extracto de lúpulo según una
cualquiera de las reivindicaciones 19 a 23, o del extracto de lúpulo
obtenible según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, para
fabricar un medicamento o un producto fitofarmacéutico en el que la
posible actividad proliferativa, debida a la actividad estrogénica
de 8-prenilnaringenina, queda inhibida (o
contrarrestada) por la actividad antiproliferativa de
xantohumol.
25. Uso del extracto de lúpulo según una
cualquiera de las reivindicaciones 19 a 23, o del extracto de lúpulo
obtenible por el método según una cualquiera de las reivindicaciones
1 a 18, para fabricar un medicamento o un producto fitofarmacéutico
para el tratamiento o la profilaxis de uno cualquiera de los
trastornos, síntomas, molestias o estados patológicos, o una
combinación de los mismos, causados por una alteración del
equilibrio hormonal de carácter estrogénico.
26. Uso según la reivindicación 25, en el que el
trastorno, síntoma, molestia o estado patológico causado por la
alteración del equilibrio hormonal de carácter estrogénico es la
menopausia.
27. Uso del extracto de lúpulo según la
reivindicación 25, en el que el estado patológico es
osteoporosis.
28. Uso del extracto de lúpulo según la
reivindicación 25, en el que el estado patológico se selecciona del
grupo consistente en cánceres dependientes de las hormonas sexuales,
enfermedades cardiovasculares, disfunción de la próstata, cáncer de
colon.
29. Una composición/suplemento nutricional que
comprende una cantidad del extracto de lúpulo según una cualquiera
de las reivindicaciones 19 a 23.
30. Una composición cosmética que comprende una
cantidad del extracto de lúpulo según una cualquiera de las
reivindicaciones 19 a 23.
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