ES2327025T3 - Liposomas. - Google Patents

Abstract

Liposoma que comprende un fármaco destinado para la terapia y/o diagnóstico, que comprende como constituyentes de membrana: [1] un compuesto básico representado por la siguiente fórmula 1** ver fórmula** en la que A representa un anillo aromático, R 1 y R 2 representan un grupo alquilo que tiene de 10 a 25 átomos de carbono, en el que R 1 y R 2 pueden ser iguales o diferentes, X 1 y X 2 representan -O-, -S-, -COO-, -OCO-, -CONH- o -NHCO, m es 0 ó 1, n es 0 o un número entero de 1 a 6; siendo la proporción molar del compuesto básico de 1 a 30% molar del total de los constituyentes de la membrana del liposoma; [2] un compuesto ácido que es un derivado de monoéster de ácido fosfórico, o un compuesto que tiene un grupo carboxilo o su sal, siendo seleccionado dicho derivado de monoéster de ácido fosfórico entre fosfato de prednisolona y fosfato de riboflavina, y siendo la proporción molar de dicho compuesto ácido de 0,5 a 30% molar del total de los constituyentes de la membrana del liposoma; y [3] un constituyente de membrana de liposoma diferente a [1] y [2].

Description

Liposomas.

Sector técnico

La presente invención se refiere a un liposoma que comprende un fármaco.

Antecedentes de la técnica

En los últimos años, han aumentado los estudios sobre el sistema de administración de fármacos (SAF) que pueden dirigir un fármaco, ADN, péptido y proteína a un sitio objetivo de manera segura, eficiente e indefectible, es decir, a un sitio enfermo, por ejemplo cáncer, neumonía, hepatitis, nefritis, a un sitio afectado del endotelio vascular o similares.

Puede citarse, por ejemplo, un método en el que vesículas cerradas tales como liposomas, emulsiones, microesferas de lípidos y nanopartículas se utilizan como un portador de fármaco, un método en el que se incluye un fármaco en su interior o se enlaza a un polímero portador tal como una miscela de polímero sintético de alto peso molecular o polisacárido, un método en el que dicha vesícula cerrada o un polímero portador se modifican en su superficie con una molécula funcional de alto peso molecular, tal como un anticuerpo o proteína, o una molécula funcional de bajo peso molecular, tal como una cadena de azúcar específica, péptido o similares para aumentar la directividad hacia las dianas, y así sucesivamente. Sin embargo, existen varios problemas a superar en el uso práctico de estos portadores de fármacos. Entre ellos, la dificultad de evasión de la materia extraña que reconoce el mecanismo de organismo y control de farmacocinéticas en el cuerpo que causan problemas. En particular, las vesículas cerradas han tenido dificultad para llevar a cabo la administración a un tejido o célula diana con una alta selectividad, debido a su agregación mediante la interacción con la proteína opsonina o proteína del plasma en la sangre o captura en el tejido del sistema retículoendotelial (SRE) tales como hígado o bazo.

Como medio para resolver este problema, se ha hecho posible evitar la adsorción de la proteína del plasma, proteína opsonina o similares para aumentar la estabilidad en sangre para evadir la captura en el SRE recubriendo la superficie de un polímero portador, incluidas las vesículas cerradas, con un polímero hidrofílico tal como polietilenglicol (PEG). Las vesículas cerradas, tales como liposomas, se acumulan pasivamente en un tejido en el que se ha aumentado la permeabilidad vascular en tejidos tumorales o sitios inflamatorios, debido a que pueden proporcionar un tiempo de residencia prolongado en la sangre. Esto hace posible llevar a cabo un tratamiento eficiente. Por otra parte, en el caso en que las vesículas cerradas han adquirido propiedades para evadir el SRE sobre la base de la modificación mencionada anteriormente, la interacción entre el liposoma y el tejido diana disminuye. Esto mejora la administración de las vesículas cerradas al tejido diana. Por el contrario, esto provoca defectos en los que la eficiencia de incorporación de las vesículas cerradas por las células en el tejido diana disminuye para, de esta manera, disminuir la eficiencia de administración de un fármaco contenido en las vesículas cerradas, o se inhibe la desintegración del liposoma provocada por la interacción con un biocomponente tal como proteína de la sangre, con el resultado que disminuye la velocidad de liberación del fármaco contenido en las vesículas cerradas.

Muchos liposomas que comprenden componentes básicos, tales como componentes de la membrana, han sido estudiados hasta ahora como herramientas para transportar genes al interior de las células. Los liposomas que comprenden varios compuestos básicos en la membrana tienen afinidad por las sustancias que poseen una carga negativa. En particular, la superficie de la célula está constituida por una sustancia que tiene una carga negativa, como un polisacárido sulfatado, tal como el sulfato de heparán, y, por lo tanto, se espera que los liposomas que comprenden compuestos básicos tengan una fuerte afinidad por la membrana celular. Sin embargo, cuando se administra en sangre dicho liposoma que comprende un compuesto básico, se une a una sustancia que tiene una carga negativa, tal como proteínas del suero o de la superficie de la membrana de los eritocritos, de manera que la carga de la superficie cambia o provoca agregación en la sangre y la perdida de afinidad por la membrana celular de interés. Por lo tanto, se desea un sistema de administración del fármaco que circule de manera estable sin interacción con proteínas o células del flujo sanguíneo y que tenga una mayor interacción con las células sólo en el sitio enfermo, de manera que pueda administrar el fármaco a las células.

Para resolver estos problemas, se han estudiado varios entornos sensibles a portadores de fármaco, es decir, portadores de fármaco que cambian sus propiedades en respuesta a un cambio del entorno debido a las enfermedades, o una diferencia en el entorno entre un tejido normal y un sitio enfermo. Por ejemplo, se conoce que en un sitio enfermo, tal como un tumor o una inflamación, el pH local disminuye en comparación con el tejido normal (V. Menkin, Bioquemical Mechanism in inflamation, Thomas, Springfiel, III, pp.96-7 (1956)) y se han abordado estudios dirigidos a la liberación o fijación de dianas de un fármaco en respuesta al entorno debido a los cambios de pH en dichos sitios lesionados (Biochim Biophys Acta, 1329(2), 291-301 (1997); FEBS, 421(1), 61-4 (1998)).

El documento EP 1 044 679, que constituye una técnica anterior a la vista del artículo 54(3) EPC, da a conocer un liposoma que tiene un fármaco incluido en él, dicho liposoma tiene una propiedad de orientar y una estabilidad asegurada en la sangre. La membrana del liposoma comprende (1) un compuesto básico que adquiere carga positiva dentro del intervalo de pH fisiológico, (2) un derivado de lípido de polímero hidrofílico, (3) un lípido, que constituye el liposoma y (4) un agente estabilizante tal como esterol. El liposoma de EP 1 044 679 puede utilizarse de manera efectiva en el diagnóstico y/o terapia.

Además, el documento WO 97/422166 da a conocer un liposoma como portador de fármaco, en el que dicho liposoma comprende como constituyentes de la membrana: (1) derivado de amidina como compuesto básico, (2) un fosfolípido como lípido que constituye el liposoma y (3) un agente estabilizante, tal como esterol.

Sin embargo, aún no se ha hecho reporte de un liposoma que responda a un cambio en el pH, mejorando la directividad hacia las dianas del mismo.

Divulgación de la invención

La presente invención se ha realizado para superar los defectos de los liposomas convencionales que se dirigen a dianas y dar a conocer un liposoma que se dirige hacia dianas que responda a cualquier cambio en el entorno. Es decir, un objetivo de la presente invención es dar a conocer un liposoma que muestre capacidad de dirigirse hacia la diana para un fármaco, ADN, péptido y proteína mediante un cambio en el pH en un sitio enfermo.

El liposoma de la presente invención bajo dichas condiciones de pH fisiológico, como en la sangre circulante, interactúa débilmente con una sustancia que tiene carga negativa y, por tanto, interactúa con menos frecuencia con las células y proteínas, por lo que es estable también en sangre. Sin embargo, en un sitio fijado como diana donde el pH disminuye, tal como un sitio inflamatorio o un sitio tumoral, su interacción con la sustancia que tiene carga negativa aumenta y, de esta manera, mejora su afinidad por las células y se acumula eficientemente en el sitio fijado como diana y, junto con esto, se impide su acumulación fuera del sitio fijado como diana. Como resultado, puede esperarse un efecto de alivio de los efectos secundarios.

Los problemas mencionados anteriormente pueden solucionarse mediante la presente invención tal como se describe más adelante.

(1) la presente invención se refiere a un liposoma que incluye un fármaco destinado a la terapia y/o diagnóstico, que comprende como constituyentes de la membrana:

[1] un compuesto básico representado por la fórmula siguiente:

1

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Donde en la fórmula 1, A representa un anillo aromático; R^{1} y R^{2} representan un grupo alquilo o un grupo alquenilo que tienen de 10 a 25 átomos de carbono, donde R^{1} y R^{2} pueden ser iguales o diferentes; X^{1} y X^{2} representan -O-, -S-, -COO-, -OCO-, -CONH- o NHCO-, donde X^{1} y X^{2} pueden ser iguales o diferentes; m es 0 ó 1 y n es 0 ó un entero entre 1 y 6;

[2] un compuesto ácido seleccionado de un derivado de monoéster de ácido fosfórico, o un compuesto que tiene un grupo carboxilo o su sal, siendo seleccionado dicho derivado de monoéster de ácido fosfórico entre fosfato de prednisolona y fosfato de rivoflavina y la proporción molar de dicho compuesto ácido, que es un derivado de monoéster de ácido fosfórico o un derivado de ácido carboxílico es de 0,5 a 30% molar del total de los constituyentes de la membrana del liposoma;

[3] un constituyente de la membrana del liposoma distinto de [1] y [2].

(2) La presente invención se refiere a un liposoma como el que se ha definido anteriormente, que se acumula eficientemente en un sitio enfermo tal como un sitio inflamatorio o un sitio tumoral en un entorno de pH de 5 a 7.

(3) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1) anterior, en el que la proporción molar del compuesto básico es de 1 a 30% molar del total de los constituyentes de la membrana del liposoma.

(4) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1) anterior, en el que el compuesto ácido, que es un compuesto que tiene un grupo carboxilo o su sal, es un ácido graso.

(5) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (4) anterior, en el que el ácido graso es ácido oleico, ácido esteárico, ácido palmítico o ácido mirístico.

(6) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1) anterior, en el que el otro constituyente de la membrana del liposoma es un fosfolípidos y/o esterol.

(7) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1) anterior, en el que el fármaco destinado para la terapia y/o diagnóstico es un agente anticancerígeno, un antibiótico, un agente enzimático, un inhibidor de enzimas, un antioxidante, un inhibidor de la absorción de lípido, un agente hormonal, un agente antiinflamatorio, un agente esteroideo, un vasodilatador, un agente inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina, un antagonista de los receptores de angiotensina, un inhibidor del crecimiento/migración de las células de músculo suave, un inhibidor de agregación plaquetaria, un anticoagulante, un inhibidor de la liberación de mediadores químicos, un agente supresor del crecimiento celular endotelial vascular, un inhibidor de la aldosa reductasa, un inhibidor del crecimiento de las células mesangiales, un inhibidor de hipoxigenasa, inmunosupresor, un inmunoactivador, un agente antiviral, un inhibidor de la reacción de Maillard, un inhibidor de amiloidosis, un inhibidor NOS, un inhibidor AGEs o un radical bloqueador.

(8) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1), en el que el fármaco destinado a terapia y/o diagnóstico es un ácido nucleico, un polinucleótido o un gen.

(9) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1), en el que el fármaco destinado a terapia y/o diagnóstico es glicosiaminoglicano.

(10) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1), en el que el fármaco destinado a terapia y/o diagnóstico es un oligosacárido y/o un polisacárido.

(11) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1), en el que el fármaco destinado a terapia y/o diagnóstico es una proteína o un péptido.

(12) La presente invención se refiere a un liposoma según el punto (1), en el que el fármaco destinado a terapia y/o diagnóstico es un fármaco de diagnóstico intracorporal tal como un medio de contraste de rayos X, un fármaco de diagnóstico de medicina nuclear radiomarcado o un fármaco de diagnóstico para el diagnóstico por resonancia magnética nuclear.

(13) El liposoma según la presente invención es útil para incrementar la proporción de acumulación de liposoma en un sitio enfermo, de manera que dicha proporción de la cantidad de absorción de sulfato de condroitina C y liposoma en una solución tampón de fosfato de pH 6,5 con respecto a una solución tampón de pH 7,4 es, como mínimo, de 1,5.

Según sea necesario, puede añadirse al liposoma de la presente invención, un derivado de lípido de un polímero hidrofílico como agente de modificación de superficie y se desea que su peso molecular sea de 1000 a 7000. Como derivado de lípido del polímero hidrofílico, se desean derivados de polietilenglicol. En particular, se desean compuestos que tienen una cadena de polietilenglicol y diacilglicerol en una molécula.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es un gráfico que ilustra la afinidad de cada liposoma al proteoglicano (sulfato de condroitina C).

Mejor manera de llevar a cabo la invención

A continuación, se hará una explicación de las realizaciones de la presente invención. El constituyente del liposoma de la presente invención está compuesto por un compuesto básico que le confiere a la membrana una carga positiva a pH fisiológico cercano a condiciones ácidas cuando está contenido en la membrana por sí mismo, un compuesto ácido que tiene una carga negativa a pH fisiológico, pero que se eliminó la ionización del mismo para disminuir la carga negativa a pH cercano al pH fisiológico por el lado ácido, cuando está contenido en la membrana por sí mismo y otros componentes constituyentes del liposoma. No está particularmente limitada y puede ser utilizada hasta que forme una estructura microesférica y tenga seguridad.

En el presente documento, las condiciones de pH fisiológico significan el pH en el cuerpo, es decir, alrededor de 7,4, aproximadamente en el intervalo de 7,2 a 7,6. El lado ácido más cerca del pH fisiológico indica el lado ácido que está cerca del pH 7,4, es decir, el lado ácido aproximadamente a un pH en el intervalo de 6 a 8. Se espera que los compuestos ácidos, cuya disociación se evita en este intervalo muestren resultados debido a una combinación con el compuesto ácido. Sin embargo, los compuestos cuya disociación se evita sólo en la región extremadamente ácida como a pH 4 o menos, por ejemplo, derivados de diéster de ácido fosfórico, no tengan esa acción y por tanto no se incluyen en los compuestos ácidos de la presente invención como se evidenciará de los ejemplos descritos posteriormente en este documento.

Ejemplos específicos de constituyentes de la membrana del liposoma de la presente invención incluyen compuestos básicos representados por la fórmula 1 descrita anteriormente, un compuesto ácido, que es un derivado de monoéster de ácido fosfórico, tal como se definió anteriormente, o un compuesto que tiene un grupo carboxilo o su sal y otro constituyente de la membrana del liposoma y no están particularmente limitados y puede utilizarse siempre que formen una estructura microesférica y tenga seguridad.

La cantidad de compuesto básico es preferentemente de 1 a 30, aún más de 5 a 30% molar del total del constituyente de la membrana del liposoma. La acumulación en un sitio enfermo tal como un sitio inflamatorio o un sitio tumoral a pH de 5 a 7 se incrementa en este intervalo.

El derivado de monoéster de ácidofosfórico se selecciona entre fosfato de prednisolona y fosfato de rivoflavina. En particular, se desea como constituyente del liposoma de la presente invención, el compuesto ácido, que es derivado de monoéster de ácido fosfórico, ya que se específicamente acumula en un sitio enfermo, tal como un sitio inflamatorio o un sitio tumoral en la región de pH ácido.

El compuesto que tiene un grupo carboxilo o su sal es un compuesto que tiene un grupo COOX^{8}, donde X^{8} representa hidrógeno o un catión farmacéuticamente aceptable, tal como sodio o potasio. Un ácido graso no está particularmente limitado, a menos que se deteriore la estabilidad estructural del liposoma. Específicamente, pueden citarse, ácido oleico natural o sintético, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido mirístico y ácido linoleico.

La cantidad del compuesto ácido que es un derivado de monoéster de ácido fosfórico o un derivado de ácido carboxílico, es preferentemente de 0,5 a 30% molar del total de los constituyentes de la membrana del liposoma. En este intervalo, la acumulación en el sitio enfermo, tal como un sitio inflamatorio o un sitio tumoral se incrementa a pH de 5 a 7.

La presente invención se caracteriza por la adición a [1] un compuesto básico, [2] un compuesto ácido específico como un constituyente de la membrana del liposoma. La fosfatidilcolina, que ha sido utilizada convencionalmente como un lípido es un compuesto diéster del ácido fosfórico. Sin embargo, es un compuesto bipolar iónico que tiene un grupo ácido y un grupo básico en una molécula y es neutral a pH cercano al fisiológico.

Pueden citarse, como los otros constituyentes de la membrana del liposoma, excluyendo a los compuestos básicos mencionados anteriormente, fosfolípidos y esteroles, tales como colesterol. Pueden citarse como fosfolípidos, fosfolípidos sintéticos, por ejemplo, fosfatidilcolina (lecitina), fosfatidilglicerol, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, esfingomielina, cardiolipina y aquellos obtenidos mediante la hidrogenación de estos compuestos mediante un método común.

La membrana del liposoma de la presente invención puede, además, comprender un estabilizador, que incluye, por ejemplo, esterol tal como colesterol y azúcares tales como glicerol y sacarosa, que disminuyen la fluidez de la membrana. Como un antioxidante, pueden citarse, por ejemplo, homólogos de tocoferol, es decir, vitamina E. El tocoferol existe como cuatro isómeros \alpha, \beta, \gamma y \delta. Cualquiera de ellos puede utilizarse en la presente invención.

El derivado de lípido de un polímero hidrofílico que modifica la superficie del liposoma no está particularmente limitado, a menos que deteriore la estabilidad estructural del liposoma. Pueden citarse, por ejemplo, polietilenglicol, dextrana, pululano, ficoll, alcohol polivinílico, ácido poliamino sintético, amilosa, amilopectina, manano, ciclodextrina, pectina, carragenato y derivados de los mismos. Entre ellos, se desean, polietilenglicol y derivados de polietilenglicol.

El peso molecular del derivado de lípido del polímero hidrofílico se encuentra preferentemente de 1000 a 7000. En particular, el polietileno glicol y los derivados de polietilenglicol que tienen peso molecular de 1000 y 7000 tienen efectos considerables para mejorar la retención en la sangre y, por lo tanto, son preferentes. El derivado de polietilenglicol no está particularmente limitado. Sin embargo, es preferente un compuesto que tenga una cadena de polietilenglicol y un diacilglicol en una molécula.

Para modificar la superficie del liposoma con el polímero hidrofílico, pueden citarse varios métodos y no está particularmente limitado a éste. Sin embargo, es preferente un método en el que el polímero hidrofílico mencionado anteriormente está unido a un compuesto hidrofóbico tal como un alcohol alifático de cadena larga, esterol, un alquilo de polioxipropileno, un éster de ácido graso de glicerol o un fosfolípido y la parte del compuesto hidrofóbico se inserta en la superficie del liposoma.

Puede utilizarse, como un fármaco para diagnóstico y/o terapia, una sustancia farmacéuticamente aceptable farmacológicamente activa, una sustancia fisiológicamente activa y/o sustancia para diagnóstico en dependencia del propósito. El tipo de fármaco no está particularmente limitado a menos que la formación del liposoma no sea dañada.

Específicamente, pueden citarse un agente anticancerígeno, un antibiótico, un agente enzimático, un antioxidante, un lípido inhibidor de la absorción, un agente hormonal, un agente antiinflamatorio, un agente esteroideo, un vasodilatador, un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina, un antagonista de los receptores de la angiotensina, un inhibidor del crecimiento/migración de las células del músculo suave, un inhibidor de la agregación plaquetaria, un anticoagulante, un inhibidor de la liberación de mediadores químicos, un agente acelerador o supresor del crecimiento celular endotelial vascular, un inhibidor de la aldosa reductasa, un inhibidor del crecimiento de las células mesangiales, un inhibidor de la lipoxigenasa, un inmunosupresor, un inmunoactivador, un agente antiviral, un inhibidor de la reacción de Maillard, un inhibidor de amiloidosis, un inhibidor de la síntesis de monóxido de nitrógeno, un inhibidor de los productos finales de la glicosilación, un bloqueador de radicales, una proteína, un péptido, un ácido nucléico, un polinucleótido y un gen.

Por ejemplo, como ejemplos de agentes anticancerígenos, pueden citarse ciclofosfamida, ifosfamida, n-óxido de mostaza hodroclorhídrico, tiotepa, bisulfán, carbocuona, hidrocloruro de nimustina, ranimustina, melfalán, tiosilato de improsulfano, dacarbazina, hidrocloruro de procarbazina, citarabina, enocitabina, mercaptopurina, tioisnosina, fluoracilo, doxifluridina, tegafur, metotrexato, carmofur, hidroxicarbamida, sulfato de vincristina, sulfato de vinblastina, sulfato de vindesina, etopósido, cromomicina A_{3}, hidroloruro de daounrubicina, hidrocloruro de aclarubicina, pirarubicina, hidrocloruro de epirubicina, dactinomicina, hidrocloruro de mitoxantrona, hidrocloruro de bleomicina, sulfato de peplomicina, mitomicina C, neocarzinostatina, L asparginasa, aceglatona, mitobronitol, sulafto de dextrán sódico, acetato de octreotida, cisplatina, carboplatina, citrato de tamoxifeno, acetato de medroxiprogesterona, fosfato de estramustina sódica, acetato de goserelina, acetato de leuprorelina e hidrocloruro de irinotecano.

Como antibióticos, pueden citarse bencilpenicilina potásica, bencilpenicilina benzatínica, fenoximetilpenicilina postásica, feneticilina sódica, cloxacilina sódica, flucoxacilina sódica, ampicilina, tosilato de sultamicina, hidrocloruro de bacampicilinalenampicilina, hectacilina sódica, ciclacilina, amoxicilina, hidrocloruro de pivmecilinam, aspoxicilina, carbenicilina sódica, carinadicilina sódica, sulbenicilina sódica, ticarcilina sódica, piperacilina sódica, cefaloridina, cefalotin sódico, cefasolin sódico, cefapirin sódico, cefradina, cefalexina, propilenglicol cefatricina, cefroxadina, cefaclor, cefadroxil, hidrocloruro de cefotiam hexetilo, cefuroxima sódica,cefuroxima axetil, cefamandole sodium, cefdinir, hidrocloruro de cefetament pivoxilo,ceftibuteno cefmetamol sódico, cefoxitina sódica, cefotetán sódico, cefminox sódico, cefbuperazona sódica, cefpiramida sódica, cefsulodina sódica, cefotaxima sódica, cefoperazona sódica, ceftriaxo, ceftizoxima sódica, hidrocloruro de cefmenoxima, ceftriaxona sódica, ceftacidima, sódio cefpimizol, cefixima, cefteram, pivoxilo, cefuzonam sódico, cefpodoxima proxetilo, cefodicima, sulfato de cefpiroma, latamoxef sódica, flomoxef sódica, imipenema, cilastatina sódicaaztreonam, carumonam sódico, sulfato de estreptomicina, sulfato de kanamicina, sulfato de fradiomicina, sulfato de amikacina, sulfato de gentamicina, sulfato de paromomicina, sulfato de bakanamicina, sulfato de ribostamicina, sulfato de dibekacina, tobramicina, sulfato de sisomicina, sulfato de micronomicina, sulfato de astromicina, sulfato de netilmicina, sulfato de isepamicina, kitasamicina, sulfato de arbekacina, eritromicina, kitasamicina, acetilkitasamicina, fosfato de oleandomicina, josamicina, acetilespiramicina, midecamicina, acetato de midecamicina, rokitamicina, roxitromicina, claritromicina, tetraciclina, hidrocloruro de demetilclortetraciclina, rolitetraciclina, hidrocloruro de doxiciclina, hidrocloruro de minociclina, cloranfenicol, cloranfenicol succianato sódico, palmitato de cloranfenicol, tianfenicol, hidrocloruro de trianfenicol aminoacetato, sulfato de colistina, colistina metasulfonato sódica, sulfato de polimixina B, bacitracina, hidrocloruro de vancomicina, hidrocloruro de lincomicina, clindamicina, hidrocloruro de espectiomicina, fosfomicina sódica y fosfomicina cálcica.

Como ejemplos del agente enzimático, pueden citarse quimotripsina, tripsina cristalina, estreptoquinasa, estreptodornasa, hialuronidasa, urokinasa, nasaruplasa, alteplasa, cloruro de lisozima, proteinasa semialcalina, serrapeptasa, tisoquinasa, duteplasa, batroxobina, pronasa y promelina.

Como ejemplos del antioxidante, pueden citarse tocoferol, ácido ascórbico y ácido úrico.

Como ejemplos del agente antiinflamatorio, se pueden citar salicilato de colina, sasapirina, salicilato sódico, aspirina, diflunisal, ácido frufenámico, ácido mefenámico, floctafenina, ácido tolfenámico, diclofenaco sódico, tolmentina sódica, sulindaco, fenbufeno, felbinaco etilo, indometacina, indometacina farsenílica, acemetacina, maleato de proglumetacina, amfebaco sódico, nabumetona, ibuprofeno, flurubiprofeno, fluribuprofeno axetílico, quetoprofeno, naproxeno, ácido protizínico, pranoprofeno, fenoprofeno cálcico, ácido tiaprofénico, oxaprozina, loxoprofeno sódico, alminoprofeno, zaltoprofeno, fenilbutazona, clofezona, quetofenilbutazona, piroxicam, tenoxicam, ampiroxicam, hidrocloruro de tiaramida, hidrocloruro de tinoridina, hidrocloruro de bencidamina, epirizol y emorfa-
zona.

Como ejemplos del agente esteroideo, se pueden citar acetato de cortisona, hidrocortisona (fosfoéster, acetato), butirato de hidrocortisona, succinato sódico de hidrocortisona, prednisolona (acetato, succinato, éster de butilacetato terciario, fosfoéster), metilprednisolona (acetato), succinato sódico de metilprednisolona, triamcinolona, acetonida de triamcinilona (acetato de triamcinolona), dexametasona, (fosfoéster, acetato, fosfato sódico, éster de ácido sulfúrico), palmitato de dexametasona, betametasona (fosfato, sal disódica), acetato de parametasona, acetato de fluorocortisona, acetato de halopredona, propionato de clobetasol, halcinonida, propionato de beclometasona, valerato de betametasona, acetato de betametasona y acetato de cortisona.

Como ejemplos del inhibidor de la enzima convertidora de agiotensina, se pueden citar alacepril, hidrocloruro de imidapril, hidrocloruro de temocapril, hidrocloruro de delapril, hidrocloruro de benazepuril, captopril, cilazapril, maleato de enalapril y lisinopril.

Como ejemplos de vasodilatador, se pueden citar teofilina, diprofilina, proxifilina, aminofilina, teofilina colina, prostaglandina, derivados de prostaglandina, alprostadil alfadex, alprostadil, limaprost alfadex, papaverina, ciclandelato, cinarizina, fumarato de benciclano, maleato de cinepazida, hidrocloruro de dilazep, trapidil, hidrocloruro de difenidol, ácido nicotínico, hexanicotinato de inositol, citrato de nicametato, tartrato alcohol nicotínico, nicotinato de tocoferol, hepronicato, hidrocloruro de isoxsuprino, sulfato de bematano, hidrocloruro de torarizona, mesilato de dihidroergotoxina, tartrato de ifenprodilo, hidrocloruro de moxisilito, nicergolina, hidrocloruro de nicardipina, nilvadipina, nifedipina, hidrocloruro de benidipina, hidrocloruro de diltiazem, nisoldipina, nitrendipina, hidrocloruro de manidipina, hidrocloruro de barnidipina, hidrocloruro de efonidipina, hidrocloruro de verapamilo, hidrocloruro de trimetazidina, captopril, maleato de enalapril, alacepril, hidrocloruro de delapril, cilazapril, lisinopril, hidrocloruro de benazepurilo, hidrocloruro de hidralazina, hidrocloruro de todralazina, budralazina, cadralazina, indapamida, hidrocloruro de carbocromen, efloxato, hidrocloruro de etafenona, hidrocloruro de oxifedrina, nicorandil, nitrito de amilo y nitrato de isosorbida.

Como ejemplos del inhibidor del crecimiento/migración de las células de músculo suave, se pueden citar heparina sódica, dalteparina sódica (heparina de bajo peso molecular), heparina cálcica y sulfato de dextrana.

Como ejemplos del inhibidor de coagulación plaquetaria, se pueden citar hidrocloruro de ticlopidina, cilostazol, icosapentato de etilo, beraprost sódico, hidrocloruro de salpgrelato, batroxobina y dipiridamol.

Como ejemplos de anticoagulante, se pueden citar heparina sódica, dalteparina sódica (heparina de bajo peso molecular), heparina cálcica, sulfato de dextrana, warfarina potásica y argatrobán.

Como ejemplos de inhibidor de liberador de mediador químico, se pueden citar tranilast, fumarato de quetotifeno, hidrocloruro de azelastina, oxatomida, amlexanox y reprinast.

Como ejemplos de inmunosupresor, se puede citar ciclosporina.

Como ejemplos de agente antiviral, se pueden citar aciclovir, ganciclovir, didanocina, zidovudina, sorivudina y vidarabina.

El tipo de fármaco para diagnóstico a ser incluido no está particularmente limitado si no afecta la formación del portador del fármaco. Específicamente, medio de contraste de rayos X, fármaco de diagnóstico de medicina nuclear radiomarcado y fármaco de diagnóstico de resonancia magnética nuclear para diagnóstico.

Por ejemplo, como ejemplos de medio de contraste de rayos X, se pueden citar amidotrizoato meglumina, iotalamato sódico, iotalamato meglumina, gastrografina, iodamina meglumina, lipiodol ultrafluído, adipiodona meglumina, ácido ioxáglico, iotrozato meglumina, iotrolano, ácido iopanoico, iopamidol, iohexol, ioversol, iopodato sódico, iomeprol, isopaque y ácido iodoxámico.

El liposoma de la presente invención puede obtenerse fácilmente por un método común. Un ejemplo de dicho método se describirá a continuación. Los constituyentes, tales como un compuesto básico y un compuesto acídico y otros constituyentes, tales como un fosfolípido, un estabilizante y antioxidante se mezclan en un disolvente orgánico, tal como cloroformo, en un recipiente y se evapora el solvente orgánico. Posteriormente, se realiza un secado al vacío para formar una película fina sobre la pared interna del recipiente. A continuación, se añade un fármaco al recipiente y se lleva a cabo una agitación vigorosa, obteniendo, de esta manera, una dispersión de liposomas. La dispersión de liposomas obtenida se centrifuga y el sobrenadante se decanta para eliminar el fármaco que no estaba encapsulado. Opcionalmente, si es necesario, se puede añadir, además, una solución de lípido derivado de polímero hidrofílico y la mezcla se calienta para obtener el liposoma de la presente invención.

El liposoma de la presente invención se puede obtener también añadiendo una solución de lípido derivado de polímero hidrofílico al mismo tiempo que el mezclado de los constituyentes. El método de adición del lípido derivado de polímero hidrofílico se puede llevar a cabo en cualquier momento sin provocar un problema en concreto. Sin embargo, en el caso del método de adición al mismo tiempo que la mezcla de los constituyentes, el lípido derivado de polímero hidrofílico también se incorpora en el interior del liposoma y algunas veces puede darse el caso de que ocurra una disminución sustancial de la proporción de superficie de modificación y una disminución de volumen encapsulado.

Como método alternativo, los constituyentes pueden mezclarse y la mezcla puede descargarse a alta presión mediante la utilización de un emulsificador del tipo de descarga a alta presión, para obtener el liposoma de la presente invención.

El método de administración del liposoma de la presente invención no está particularmente limitado y la administración es intravenosa como solución. Cuando se administra el liposoma de la presente invención a organismos vivos, se acumula de manera específica en una región de pH ácido, tal como un sitio de inflamación o un sitio tumoral, y en otras regiones se evita su acumulación. Teniendo en cuenta esto, es adecuado como vehículo para agente antinflamatorio o agente antitumoral y posee de manera efectiva los efectos que provocan la potencia de los fármacos de mostrar y de aliviar sus efectos secundarios.

En lo adelante, la presente invención se ilustrará de manera específica mediante ejemplos.

Ejemplo 1 Preparación de liposoma que comprende hidrocloruro de 3,5-dipentadeciloxibenzamidina (compuesto básico) y ácido mirístico (ácido graso) como constituyentes

(1-[1]) Primeramente, se congeló una solución mezclada de lípidos obtenida mediante la disolución de 4,62 mmol de fosfatidilcolina, 4,62 mmol de colesterol y 0,76 mmol de hidrocloruro de 3,5-dipentadeciloxibenzamidina en 100 ml de alcohol t-butílico en un baño de hielo y se liofilizó durante toda la noche para obtener la mezcla de liposoma.

(1-[2]) Se midieron 0,06 mmol de la mezcla de liposoma obtenida en el procedimiento de (1-[1]) en un matraz de tipo berenjena y se añadieron a la misma 2 ml de una solución de ácido mirístico/cloroformo 1,14 mM. Después de eliminar el cloroformo, la mezcla se secó al vacío durante toda la noche para formar una película fina de lípidos sobre la pared interna del matraz.

Se añadieron 6 ml de solución salina fisiológica y la mezcla se sometió a ultrasonido a 55ºC durante 5 minutos para obtener una dispersión de liposomas. Esta mezcla fue extrudida bajo presión utilizando una película de policarbonato con tamaño de poro de 0,2 \mum y una película de policarbonato con tamaño de poro de 0,1 \mum. De esta manera, se obtuvo la dispersión de liposomas del título, que tiene un tamaño de partícula promedio de 90 a 200 nm. Se obtuvo la dispersión de liposomas del título que comprende 7,3% molar del compuesto básico [1] de la presente invención y 3,7% molar del compuesto ácido [2] de la presente invención. El tamaño de partícula promedio del liposoma obtenido fue de 125,5 nm.

Ejemplo 2 Preparación de liposoma que comprende hidrocloruro de 3,5-dipentadeciloxibenzamidina (compuesto básico) y fosfato sódico de prednisolona (derivado del monoéster de ácido fosfórico) como constituyentes

A 0,6 mmol de la mezcla de lípidos obtenida en el procedimiento de (1-[1]) se añadieron 10 ml de una solución acuosa de fosfato sódico de prednisolona y la mezcla se sometió a ultrasonido a 55ºC durante 5 minutos para obtener una dispersión de liposomas. Esta fue sometida a selección del tamaño de partícula alimentándola bajo presión mediante la utilización de una película de policarbonato con tamaño de poro de 0,2 \mum y una película de policarbonato con tamaño de poro de 0,1 \mum. La dispersión de liposomas obtenida se aplicó a una columna (Sepharose 4 \Phi 3 cm x 20 cm, eluyente: solución salina fisiológica) para colectar la fracción de liposomas para obtener la dispersión de liposomas del título, que tiene un tamaño de partícula de 90 a 200 nm (tamaño de partícula promedio 130,7 nm).

Ejemplo 3 Preparación de liposoma que comprende hidrocloruro de 3,5-dipentaciloxibenzamidina (compuesto básico) y fosfato sódico de riboflavina (derivado del monoéster de ácido fosfórico) como constituyentes

A 0,6 mmol de la mezcla de lípidos obtenida en el procedimiento de (1-[1]) se añadieron 10 ml de una solución acuosa de fosfato sódico de riboflavina y la mezcla se sometió a ultrasonido a 55ºC durante 5 minutos para obtener una dispersión de liposomas. Posteriormente, se siguió la misma operación que en el Ejemplo 2 para obtener la dispersión de liposomas del título. El tamaño de partícula promedio del liposoma obtenido fue de 117,9 nm.

Ejemplo Comparativo 1

A 0,6 mmol de la mezcla de lípidos obtenida mediante el procedimiento mencionado anteriormente en (1-[1]) se añadieron 10 ml de solución salina fisiológica y la mezcla se sometió a ultrasonido a 55ºC durante 5 minutos para obtener una dispersión de liposomas. Ésta fue procesada de la misma forma que en (1-[2]) mencionado anteriormente para obtener la dispersión de liposomas del título, que tiene un tamaño de partícula promedio de 90 a 200 nm. El tamaño de partícula promedio del liposoma obtenido fue de 110,5 nm.

Ejemplo Comparativo 2

Preparación de liposoma que comprende hidrocloruro de 3,5-dipentadeciloxibenzamidina y fosfatidilglicerol como constituyente

Se midieron 0,06 mmol de la mezcla de lípidos obtenida mediante el procedimiento (1-[1]) mencionado anteriormente en un matraz de tipo berenjena de 50 ml y se añadieron al mismo 2 ml de una solución fosfatidilglicerol/cloroformo 1,14 mM. Después de eliminar el cloroformo, la mezcla se secó al vacío durante toda la noche para formar una película fina de lípidos sobre la pared interior del matraz. A ésta, se añadieron 6 ml de solución salina fisiológica y se sometió a ultrasonido a 55ºC durante 5 minutos para obtener una dispersión de liposomas. Esta se procesó de la misma forma que anteriormente en (1-[2]) para obtener la dispersión de liposoma del título, que tiene un tamaño de partícula promedio de 90 a 200 nm. El tamaño de partícula promedio del liposoma obtenido fue de
138,8 nm.

Ejemplo comparativo 3

Preparación de liposoma que comprende hidrocloruro de 3,5-dipentadeciloxibenzamidina y derivado de polietilénglicol-fosfatidiletanolamina como constituyentes

La concentración de lípidos de la dispersión de liposomas obtenida en el Ejemplo Comparativo 1 se ajustó a 20 mM. A esta dispersión de liposomas se añadió el mismo volumen de una solución de derivado de polietilénglicol-fosfatidiletanolamina (peso molecular: 6.000 y concentración: 1,214 mg/ml) y, a continuación, la mezcla se calentó a 60ºC durante 30 minutos para obtener la dispersión de liposomas del título, que tiene un tamaño de partícula de 90 a 200 nm (tamaño de partícula promedio: 117,4 nm).

Ejemplo de Prueba 1

Afinidad de varios tipos de liposomas por el proteoglicano

El objetivo de este ensayo fue examinar la afinidad del liposoma por el proteoglicano sobreproducido en un sitio de inflamación o en un sitio tumoral, bajo condición ácida y en la vecindad de la neutralidad.

Se mezcló glucosaminoglicano, que actúa como un polímero aniónico de cadena de azúcares, contenido en un proteoglicano con liposoma en cada uno de los Ejemplos y Ejemplos Comparativos y se midió la cantidad de glucosaminoglicano adsorbida en cada liposoma. Se disolvió sulfato de condroitina C (peso molecular: 30.000 a 60.000), como glucosaminoglicano, en tampón fosfato a pH 7,4 y se ajustó a 0,1 mg/ml y, posteriormente, se ajustó a pH 6,0 ó pH 6,5 con HCl 6N. Se mezclaron 0,3 ml de la solución de sulfato de condroitina C obtenida a pH 7,4 ó pH 6,0 y 0,3 ml de cada dispersión de liposoma, en la que se ajustó la concentración de lípidos a 10 mM con solución salina fisiológica y se calentó a 37ºC durante 1 hora. Después de enfriar, se llevó a cabo una ultracentrifugación a 100.000 g durante 1 hora y se recogió el sobrenadante. Se determinó sulfato de condroitina C en el sobrenadante mediante la utilización de un kit de ensayo de proteoglicano Blyscan y se calculó la cantidad de adsorción de sulfato de condroitina C en cada liposoma.

Resultados

Los resultados se muestran en la figura 1. Los liposomas en el Ejemplo Comparativo 1, que no comprende compuesto ácido, y los Ejemplos Comparativos 2 y 3, en los que el compuesto ácido era un fosfodiéster tuvieron la misma cantidad de adsorción de sulfato de condroitina C a pH 6,0 ó 6,5 y pH 7,4. Se confirmó que los liposomas, según los Ejemplos 1 a 3 de la presente invención, mostraron alguna diferencia en la cantidad de adsorción de sulfato de condroitina C entre pH 6,0 ó 6,5 y pH 7,4 y fue suprimida la cantidad de adsorción a pH 7,4. Es decir, se observó que los liposomas de la presente invención tuvieron una afinidad suprimida por el proteoglicano en la vecindad de la neutralidad, mientras en que en un entorno ácido mostraron una alta afinidad por el mismo.

Ejemplo de Prueba 2

Toxicidad aguda

El objetivo de este ensayo fue conocer el grado de toxicidad del liposoma de la presente invención comparado con los convencionales. Con este objetivo, se realizaron ensayos de toxicidad letal del liposoma de la presente invención en ratas.

Método

Las dispersiones de liposomas de los Ejemplos 1 a 3 se concentraron utilizando una membrana de ultrafiltración y se diluyeron opcionalmente con agua destilada esterilizada para inyección según fue necesario, para preparar soluciones de ensayo. Los ratones de 5 semanas de edad en cuarentena se dividieron en grupos de 5 animales por grupo y se les administró 100 ml/kg de solución de ensayo a los ratones a través de la vena de la cola. Por otra parte, al grupo de control de disolvente se les administró 100 ml/kg de solución salina fisiológica. Después de la administración de la solución de ensayo, se observó cuidadosamente la condición general, como mínimo, una vez al día durante 7 días y se anotaron indicaciones de casos de toxicidad y muerte. Además, después de 7 días de administración, se realizó autopsia para extraer los órganos respectivos. Se prepararon secciones patológicas de cada órgano y se realizaron observaciones de los mismos.

Resultados

No se observó ningún caso de muerte durante el periodo de observación en el caso de los liposomas de la presente invención. En la observación histopatológica de cada órgano, no se observó ningún cambio hitopatológico. Es decir, se confirmó que los liposomas de la presente invención tiene una toxicidad extremadamente baja y una elevada seguridad.

Aplicabilidad industrial

Los liposomas de la presente invención tienen una capacidad muy alta en fijar como diana el sitio afectado tales como inflamación y tumor, en los que el pH ha disminuido en regiones ácidas. Además, tienen una elevada seguridad.

Por lo tanto, los liposomas de la presente invención que portan un fármaco para diagnóstico y/o terapia son muy eficaces con fin diagnóstico y terapia de tejidos y/u órganos en los que ha ocurrido inflamación o lesión tumoral.

Claims (10)

1. Liposoma que comprende un fármaco destinado para la terapia y/o diagnóstico, que comprende como constituyentes de membrana:

[1]

un compuesto básico representado por la siguiente fórmula 1

2

\quad

en la que A representa un anillo aromático, R^{1} y R^{2} representan un grupo alquilo que tiene de 10 a 25 átomos de carbono, en el que R^{1} y R^{2} pueden ser iguales o diferentes, X^{1} y X^{2} representan -O-, -S-, -COO-, -OCO-, -CONH- o -NHCO, m es 0 ó 1, n es 0 o un número entero de 1 a 6; siendo la proporción molar del compuesto básico de 1 a 30% molar del total de los constituyentes de la membrana del liposoma;

[2]

un compuesto ácido que es un derivado de monoéster de ácido fosfórico, o un compuesto que tiene un grupo carboxilo o su sal, siendo seleccionado dicho derivado de monoéster de ácido fosfórico entre fosfato de prednisolona y fosfato de riboflavina, y siendo la proporción molar de dicho compuesto ácido de 0,5 a 30% molar del total de los constituyentes de la membrana del liposoma; y

[3]

un constituyente de membrana de liposoma diferente a [1] y [2].

\vskip1.000000\baselineskip

2. Liposoma, según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto que tiene un grupo carboxilo o su sal, es un ácido graso.

3. Liposoma, según las reivindicaciones 1 ó 2, en el que dicho ácido graso es ácido oleico, ácido esteárico, ácido palmítico o ácido mirístico.

4. Liposoma, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el constituyente de la membrana del liposoma diferente a [1] y [2] es fosfolípido y/o esterol.

5. Liposoma, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho fármaco destinado para terapia y/o diagnóstico es un agente anticáncer, un antibiótico, un agente enzimático, un inhibidor enzimático, un antioxidante, un inhibidor de absorción de lípidos, un agente hormonal, un agente antinflamatorio, un agente esteroideo, un vasodilatador, un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina, un antagonista del receptor de angiotensina, un inhibidor del crecimiento/migración de células de músculo suave, un inhibidor de agregación plaquetaria, un anticoagulante, un inhibidor de liberador de mediador químico, un agente de crecimiento o supresión de células del endotelio vascular, un inhibidor de aldosa reductasa, un inhibidor del crecimiento de células mesangiales, un inhibidor de lipoxigenasa, un inmunosupresor, un inmunoactivador, un agente antiviral, un inhibidor de la reacción de Maillard, un inhibidor de amiloidosis, un inhibidor de NOS, un inhibidor de AGE o un bloqueador de radicales.

6. Liposoma, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho fármaco destinado para terapia y/o diagnóstico es un ácido nucleico, polinucleótido o un gen.

7. Liposoma, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho fármaco destinado para terapia y/o diagnóstico es un glucosaminoglucano.

8. Liposoma, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho fármaco destinado para terapia y/o diagnóstico es oligosacárido y/o polisacárido.

9. Liposoma, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho fármaco destinado para terapia y/o diagnóstico es proteína o péptido.

10. Liposoma, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicho fármaco destinado para terapia y/o diagnóstico es un fármaco de diagnóstico intracorpóreo, tal como un medio de contraste de rayos X, un fármaco de diagnóstico de medicina nuclear radiomarcado o un fármaco de diagnóstico de resonancia magnética nuclear para diagnóstico.