ES2329369T3 - Tratamiento de la enfermedad de alzheimer y la angiopatia amiloide cerebral. - Google Patents
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Abstract
Anticuerpos en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. El uso de un anticuerpo, que reconoce de forma específica cualquiera de las variantes predominantes del péptido beta amiloide, Ab40 y Ab42 en la preparación de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
Description
Tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y la
angiopatía amiloide cerebral.
La presente invención se refiere al tratamiento
y/o prevención de enfermedades asociadas con la presencia de
depósitos de amiloide, que incluyen la enfermedad de Alzheimer.
Se conocen algunos hechos sobre el fenómeno
bioquímico y metabólico asociado con la presencia de la enfermedad
de Alzheimer (EA). Dos cambios estructurales e histopatológicos
observados en los cerebros de los que tienen la EA son los ovillos
neurofibrilares (ONF) y los depósitos de amiloide. Los ovillos
neurofibrilares también están presente en otras enfermedades
neurodegenerativas, pero la presencia de depósitos de amiloide tanto
en los espacios intraneuronales (placas neuríticas) como cerca de
la microvasculatura (placas vasculares) parece que es
característica de la EA. De estos, parece que las placas neuríticas
son los más comunes (Price, D.L., y colaboradores, Drug
Development Research (1985) 5:59-68).
El componente principal de estas placas de
amiloide es un péptido de 40-42 aminoácidos
denominado péptido amiloide A\beta4.
El péptido amiloide A\beta4 es un polipéptido
que se origina de la proteolisis de glicoproteínas de membrana
denominadas proteínas precursoras del péptido amiloide A\beta4
(\betaAPP). Estas proteínas, precursoras del péptido amiloide,
constan de 695 a 770 aminoácidos, todos ellos codificados por el
mismo gen.
Se han identificado 2 variantes principales del
péptido amiloide A\beta4, el péptido A\beta40 y A\beta42, que
contienen 40 y 42 aminoácidos, respectivamente, que presentan
diferentes distribuciones tisulares tanto en afecciones
fisiológicas como patológicas. La variante de 42 aminoácidos es la
forma predominante en las placas de amiloide localizadas en los
cerebros de los pacientes con EA.
Hasta ahora se han propuesto diferentes
soluciones posibles para proporcionar una posible vacuna contra la
EA.
En el documento EP526511, se propone la
administración de dosis homeopáticas de A\beta a pacientes con EA
preestablecida. Sin embargo, debido a las dosis usadas, los niveles
de A\beta endógeno que circulan en el plasma apenas varían, y por
lo tanto no se espera beneficio terapéutico.
Schenk y col., (Nature, 1999;
400:173-177) describen la inmunización de ratones
transgénicos PDAPP con A\beta42, que sobreexpresan APP mutante,
previniendo así la formación de placas de amiloide, distrofia
neurítica y astrogliosis.
En el documento W09927944 (Schenk D.), se
describe un tratamiento para la EA por administración de A\beta42
a un paciente.
Un ensayo clínico en fase III en 360 pacientes
diagnosticados con EA de media a moderada en 4 países europeos y
Estados Unidos, en los que se usó el péptido amiloide A\beta42
como antígeno, se interrumpió después de describir encefalitis en
algunos pacientes (Scrip Daily Online, 25 Feb 2002, S007455320,
The Scientist 16 [7]: 221 de abril, 2002).
El problema de usar una proteína endógena como
vacuna (o una proteína presente naturalmente en el animal que se
está vacunando), como es el caso del péptido A\beta42, es que el
organismo responde produciendo anticuerpos contra A\beta42 y
contra fracciones más pequeñas que también pueden tener funciones
fisiológicas desconocidas, y entre algunos de los posibles
problemas que se pueden mencionar está el posible desarrollo de
enfermedades autoinmunes debido a la generación de anticuerpos
contra la proteína endógena, dificultad en la generación de una
respuesta inmunitaria debido al fracaso del sistema inmunitario para
reconocer los antígenos endógenos, y el posible desarrollo de una
respuesta inflamatoria aguda.
La presente invención se dirige al tratamiento
de la enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades amiloides, por
administración de un péptido, de la parte del extremo C de Ap,
conjugado con una proteína, que en una realización preferida de la
presente invención, dicha proteína es la hemocianina de lapa
californiana.
La presente invención se refiere a una vacuna
para prevenir y/o tratar la enfermedad de Alzheimer y otras
enfermedades amiloides relacionadas.
De acuerdo con una realización preferida de la
presente invención, se proporciona una vacuna para prevenir y/o
tratar la enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades relacionadas,
que supera las desventajas asociadas con el uso de péptidos,
proteínas o inmunógenos endógenos.
\newpage
Son ejemplos de otras enfermedades
caracterizadas por los depósitos de amiloide, el síndrome
hereditario islandés, mieloma múltiple y encefalitis espongiforme,
incluyendo la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.
La introducción de una respuesta inmunitaria
puede ser activa, como cuando se administra un inmunógeno para
inducir anticuerpos que reaccionan con A\beta en un paciente, o
pasiva, como cuando se administra un anticuerpo que reacciona por
si mismo con A\beta en un paciente.
Para el propósito de la presente invención, las
siguientes expresiones se definen como sigue:
La expresión "enfermedades amiloides
relacionadas" incluye enfermedades asociadas con la acumulación
de amiloide que puede estar restringida a un órgano, amiloidosis
localizada, o extendida por varios órganos, amiloidosis sistémica.
La amiloidosis secundaria puede estar asociada con infecciones
crónicas (tales como, por ejemplo, la tuberculosis) o inflamación
crónica (por ejemplo, artritis reumatoide), fiebre mediterránea
familiar (FMF) y otros tipos de amiloidosis sistémica encontrada en
pacientes con tratamiento de hemodiálisis a largo plazo. Las formas
localizadas de amiloidosis incluyen, pero no se limitan a diabetes
de tipo II y otras enfermedades relacionadas con la misma,
enfermedades neurodegenerativas con scrapie, encefalitis
espongiforme bovina, enfermedad de
Creutzfeldt-Jackob, enfermedad de Alzheimer,
angiopatía amiloide cerebral.
La expresión "inmunización pasiva" se usa
para referirse a la administración de anticuerpos o fragmentos de
los mismos, a un individuo con la intención de conferir inmunidad a
ese individuo.
En el primer aspecto, la invención proporciona
el uso de un péptido conjugado con una proteína, que actúa como un
inmunógeno para producir anticuerpos capaces de reconocer
específicamente cualquiera de las variantes predominantes del
péptido amiloide beta A\beta40 y A\beta42, en la preparación de
un medicamento para prevenir y/o tratar una enfermedad
caracterizada por la acumulación de depósitos de amiloide en el
cerebro de un paciente, seleccionada de cualquiera de las
enfermedades que consisten en enfermedad de Alzheimer o angiopatía
amiloide cerebral, caracterizado porque el péptido es el SEQ ID No
2.
En el segundo aspecto, la invención proporciona
el uso de un anticuerpo o un fragmento o derivado activo de un
anticuerpo que reconoce específicamente cualquiera de las variantes
predominantes del péptido amiloide beta A\beta40 y A\beta42, en
la preparación de un medicamento para prevenir y/o tratar una
enfermedad caracterizada por la acumulación de depósitos de
amiloide en el cerebro de un paciente seleccionado de cualquiera de
las enfermedades que consisten en enfermedad de Alzheimer o
angiopatía amiloide cerebral, en el que el anticuerpo o el
fragmento o derivado activo del anticuerpo que reconoce
específicamente las variantes predominantes del péptido A\beta,
se obtiene por inmunización de mamíferos o aves con el péptido de
SEQ ID No 2.
En una realización preferida de la presente
invención, la enfermedad es la enfermedad de Alzheimer.
La medicación obtenida se puede usar tanto en
pacientes asintomáticos como en los que muestran síntomas de la
enfermedad.
De acuerdo con la presente invención, las
composiciones que son capaces de provocar una respuesta inmunitaria
dirigida contra algunos componentes de las placas de amiloide son
eficaces para el tratamiento o prevención de enfermedades
relacionadas con los depósitos de amiloide. En particular, de
acuerdo con un aspecto de la presente invención, se puede prevenir
el avance, reducir los síntomas y/o reducir el proceso de depósito
de amiloide en un individuo, cuando se administra al paciente una
dosis inmunoestimuladora de un péptido o un anticuerpo obtenido del
mismo.
De acuerdo con un aspecto de la presente
invención, los anticuerpos se obtienen por inmunización de mamíferos
o aves, mediante el uso de un péptido conjugado con una proteína
como inmunógeno.
De acuerdo con una realización preferida de la
presente invención, los mamíferos usados para la inmunización
pueden ser rumiantes, equinos, lagomorfos, carnívoros, primates, o
cualquier otro animal que permita que se le extraigan cantidades de
suero adecuadas del mismo para el anticuerpo. Entre las aves usadas
para la inmunización, se pueden mencionar, pero no se limitan a
galliformes, anseriformes y columbiformes, entre otros.
De acuerdo con la realización más preferida de
la presente invención, la proteína usada para la conjugación con el
péptido es la proteína de la lapa californiana.
En el presente documento también se describen
péptidos seleccionados de un grupo que consiste en el péptido de
SEQ ID No 2, el péptido de SEQ ID No 3, los péptidos que resultan de
cortar por eliminación los restos aminoácidos de los extremos
N-terminal y/o C-terminal de SEQ ID
No 2 y SEQ ID No 3, y péptidos que resultan de alargar por adición
de restos a cualquiera de los péptidos de SEQ ID No 2 y SEQ ID No
3.
También se describen péptidos seleccionados del
grupo compuesto por el péptido de SEQ ID No 2, péptidos con una
secuencia que resulta de la eliminación de restos aminoácidos
N-terminales y/o C-terminales y
péptidos que resultan de adición a cualquiera de las secuencias
precedentes de restos aminoácidos necesarios para la conjugación de
proteína.
En esta solicitud, los aminoácidos se abrevian
usando los códigos de una letra aceptados en este campo, como se
indica a continuación:
- A =
- Ala = alanina
- C =
- Cys = cisteína
- D =
- Asp = ácido aspártico
- E =
- Glu = ácido glutámico
- F =
- Phe = fenilalanina
- G =
- Gly = glicina
- H =
- His = histidina
- l =
- Ile = isoleucina
- K
- Lys = lisina
- L =
- Leu = leucina
- M =
- Met = metionina
- N =
- Asn = asparagina
- P =
- Pro = prolina
- Q =
- Gln = glutamina
- R =
- Arg = arginina
- S =
- Ser = serina
- T =
- Thr = treonina
- V =
- Val = valina
- W =
- Trp = triptófano
- Y =
- Tyr = tirosina
\vskip1.000000\baselineskip
Las secuencias descritas en el presente
documento e identificadas como SEQ ID no 1, SEQ ID no 2, SEQ ID no
3, SEQ ID no 4, corresponden a las siguientes secuencias de
aminoácidos:
- SEQ ID NO 1
- LVFFAEDV
- SEQ ID NO 2
- GLMVGGW
- SEQ ID NO 3
- GLMVGGVVIA
- SEQ ID NO 4
- RHDSGYEVHHQK
\vskip1.000000\baselineskip
Los anticuerpos obtenidos de los péptidos
anteriores tienen los códigos SAR-1,
SAR-2, SAR-3 y SAR-4
que corresponden a lo siguiente
- SEQ ID NO 1
- SAR-2
- SEQ ID NO 2
- SAR-2
- SEQ ID NO 3
- SAR-4
- SEQ ID NO 4
- SAR-1
\vskip1.000000\baselineskip
La información relacionada con la identificación
de secuencias de péptidos, descritas en el presente documento y que
acompañan el presente documento en un formato de lectura por
ordenador, se indica en la lista de secuencias que se presenta
junto con este documento.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención se ilustra mediante los
siguientes ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
Los 4 anticuerpos policlonales contra los 4
péptidos conjugados con KLH que se usaron como inmunógenos, se
generaron por inmunización en conejos blancos de Nueva Zelanda.
Se inyectó cada inmunógeno en 2 conejos, con 5
inyecciones en cada conejo: la primera inyección intradérmica del
conjugado péptido-KLH en PBS y emulsionado en
adyuvante completo de Freud, y 4 inyecciones intramusculares más
como dosis de refuerzo los días 14, 28, 49 y 80, del mismo conjugado
péptido-KLH en PBS, pero esta vez emulsionado en
adyuvante incompleto de Freud, dejando la sangre 90 días para
detectar la presencia de anticuerpos.
Después de recoger la sangre, se separó el suero
y se prepurificó por desalinización y después los anticuerpos se
purificaron por afinidad en una matriz que comprendía 1,5 ml de
material activado EMD-Epoxy (Merck) al que se
habían añadido 5 mg del correspondiente péptido. Las fracciones
purificadas se envasaron en BSA al 0,1% (Sigma) y se almacenaron a
4ºC, pudiéndose añadir glicerol al 20-50% como
crioprotector.
\vskip1.000000\baselineskip
Se usó el procedimiento de Laemmli descrito en
Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, New
York, 1998, modificado para mejorar la separación de péptidos
pequeños.
El aparato usado era un Miniprotean 3 de
Bio-Rad.
Se usó un gel de acrilamida al 15%, mezclado con
los siguientes componentes:
Se usaron disoluciones madre iniciales del
péptido A\beta40 y 42 de 1 mg/ml (disuelto en PBS). Se cogió el
volumen necesario de estas disoluciones para cada una de las
muestras y se completó hasta 20 \mul con SBLT (SBL + base Tris 2
M). Después se hirvieron las muestras durante 5 minutos para
desnaturalizar los péptidos y eliminar las posibles proteasas.
El centro de la cubeta se llenó con tampón del
cátodo y el exterior con tampón del ánodo, siendo la composición de
estos tampones la siguiente:
Tampón del ánodo
24,2 g de base Tris (concentración final 0,2
M)
Diluir hasta 1 litro con H_{2}O
Ajustar a pH 8,9 con HCl concentrado
Almacenar a 4ºC hasta 1 mes
Tampón del cátodo
12,11 g de base Tris (concentración final 0,1
M)
17,92 g de tricina (concentración final 0,1
M)
1 g de SDS (concentración final 0,1%)
Diluir hasta 1 litro con H_{2}O
No ajustar el pH
Almacenar a 4ºC hasta 1 mes
Finalmente, las muestras se cargaron en los
pocillos: 20 \mul/pocillo. Usando el Polypeptide Standard
Kaleidoscope de Bio-Rad como marcador, la migración
empezó con un voltaje bajo (30 V), y después el voltaje se elevó a
100 V, después de aproximadamente 1 hora de electroforesis.
\vskip1.000000\baselineskip
Las proteínas separadas en el gel se
transfirieron a la membrana de PVDF por electrotransferencia. En los
puntos de transferencia se puso lo siguiente:
Lado negro - esponja - papeles Whatmann 3 (o
papeles de filtro) - gel - membrana - papeles Whatmann 3 - esponja
-
lado transparente.
lado transparente.
La cubeta después se llenó con tampón de
electrotransferencia:
Glicina 38 nM
Base Tris 59 mM
Metanol al 40%
La transferencia se hizo durante 2 horas a 200
mA. Durante la transferencia, el tampón se mantuvo con agitación
con el agitador magnético.
\vskip1.000000\baselineskip
Los anticuerpos y la leche en polvo se
disolvieron en PBS-t (PBS + Tween 20 al 0,05%),
llevando a cabo el lavado también con PBS-T.
Después de la transferencia, la superficie de la
membrana se bloqueó con disolución al 5% de leche en polvo durante
1 hora con agitación y a temperatura ambiente (T.a.)
Después de esto, la membrana se lavó durante 2 x
5 minutos a T.a.
Después se incubó con anticuerpo primario
(SAR-1, SAR-2, SAR-3
o SAR-4) durante 1 hora a T.a. al menos diluido
1:500 en PBS-T.
La membrana se lavó: 3 x 10 minutos a T.a.
Después se incubó con anticuerpo secundario: anticonejo de
cabra-HRP durante 1 hora a T.a. (1:10.000 en todos
los casos).
El lavado de la membrana se repitió otra vez: 3
x 10 minutos a T.a.
\vskip1.000000\baselineskip
Después del último lavado, la membrana se incubó
con la disolución del kit de quimioluminiscencia, usando el kit
ECL+Plus de Pharmacia.
La membrana se envolvió en celofán y se expuso a
película de doble emulsión (Hyperfilm MP de Amersham), durante
tiempos distintos entre 30 segundos y 2 minutos.
\vskip1.000000\baselineskip
Las secciones de cerebro se fijaron en parafina
mediante las siguientes etapas:
a) fijación en formol neutro al 10%
b) deshidratación por etapas sucesivas en
concentraciones crecientes de alcohol
c) pasos a través de xilol y parafina, esta
última etapa en un horno a 60-62ºC.
d) realización de bloques de parafina, que se
cortaron en tamaños de 4 micrómetros y se montaron en
portaobjetos.
Después las secciones se desparafinaron
pasándolas a través de las siguientes disoluciones:
- Xilol al 100%
- 10 minutos
- Xilol al 100%
- 10 minutos
- Etanol al 100%
- 5 minutos
- Etanol al 100%
- 5 minutos
- Etanol al 96%
- 5 minutos
- Etanol al 90%
- 5 minutos
- Etanol al 70%
- 5 minutos
- PBS
- 5 minutos x 3 veces
\vskip1.000000\baselineskip
Después, se trataron de la siguiente forma:
a) ácido fórmico al 96% durante 3 minutos en una
campana de ventilación y con agitación
b) Lavado rápido con agua
c) Lavado con PBS 2 x 5 minutos
d) Bloqueo de las peroxidasas endógenas durante
15 minutos en una disolución compuesta de 70 ml de PBS, 30 ml de
metanol y 1 ml de H_{2}O_{2}
e) Lavado en PBS 3 x 5 minutos
f) Lavado en PBS/T (Triton o
Tween-20 al 0,5% en PBS) 3 x 5 minutos
g) Bloqueo de la unión no específica con suero
de cabra (suero de cabra normal) diluido 10:100 en PBS/T durante 2
horas
h) incubación de los anticuerpos primarios toda
la noche a 4ºC en una cámara de humedad:
- \quad
- Sar-1... Dilución 1:150 en PBS
- \quad
- Sar-2... Dilución 1:1500 en PBS
- \quad
- Sar-3... Dilución 1:1500 en PBS
- \quad
- Sar-4... Dilución 1:2000 en PBS
i) Lavado en PBS/T 3 x 5 minutos
j) Incubación en anticuerpo secundario
(anticonejo de cabra) diluido 1:200 en PBS durante 45 minutos
k) Lavado en PBS 4 x 5 minutos
l) Incubación de ABC (complejo de
avidina-biotina) de Vector Labs con una dilución de
1:100 en PBS/T durante 45 minutos en la oscuridad, manteniendo
estas condiciones hasta completarse el desarrollo
m) Lavado en PBS 3 x 5 minutos
n) Desarrollo en diaminobencidina (DAB)
El tiempo se controló empíricamente con un
microscopio estereoscópico. Para ello, primer se hizo un lavado en
una disolución de Tris-HCl 0,5 M durante 10 minutos
con agitación, para continuar después con incubación con un
sustrato de diaminobencidina (DAB) diluido en
Tris-HCl 0,05 M y al que se añade H_{2}O_{2} 0,5
\mul/ml a 4ºC. Una vez finalizada la reacción, se hicieron 3
lavados en PBS a 4ºC durante 5 minutos cada vez, y después se hizo
la deshidratación en etanol al 70%, 90% y 100% durante 2 minutos
cada vez, pasando a través de xilol durante 4 minutos y un paso más
a través de xilol durante 2 minutos, hasta que se montaron con
Eukitt para la observación con microscopio.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta lista de referencias citadas por el autor
de la solicitud es sólo para la conveniencia del lector. No forma
parte del documento de patente europea. Aunque se ha tenido mucho
cuidado al recopilar las referencias, no se pueden excluir errores
u omisiones y la EPO rechaza cualquier responsabilidad en este
aspecto.
\vskip1.000000\baselineskip
- \bullet EP 526511 A
- \bullet WO 9927944 A, Schenk D.
\vskip1.000000\baselineskip
Price, D.L. Drug Development
Research, 1985, vol. 5, 59-68
Schenk y col. Nature, 1999,
vol. 400,173-177
The Scientist, 1 de abril de 2002,
vol. 16 (7), 22
Current Protocols in Molecular Biology.
John Wiley and Sons, 1998.
NÚMERO DE SECUENCIAS: 4
INFORMACIÓN DE LA SECUENCIA 1:
| CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: | |
| LONGITUD: 8 | |
| TIPO: aminoácido | |
| TIPO DE MOLÉCULA: péptido | |
| FUENTE: Síntesis química |
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA:
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SEQ ID NO
1
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INFORMACIÓN DE LA SECUENCIA 2:
| CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: | |
| LONGITUD: 8 | |
| TIPO: aminoácido | |
| TIPO DE MOLÉCULA: péptido | |
| FUENTE: Síntesis química |
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA:
\vskip1.000000\baselineskip
SEQ ID NO
2
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INFORMACIÓN DE LA SECUENCIA 3:
| CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: | |
| LONGITUD: 8 | |
| TIPO: aminoácido | |
| TIPO DE MOLÉCULA: péptido | |
| FUENTE: Síntesis química |
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA:
\vskip1.000000\baselineskip
SEQ ID NO
3
\vskip1.000000\baselineskip
INFORMACIÓN DE LA SECUENCIA 4:
| CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: | |
| LONGITUD: 8 | |
| TIPO: aminoácido | |
| TIPO DE MOLÉCULA: péptido | |
| FUENTE: Síntesis química |
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA:
\vskip1.000000\baselineskip
SEQ ID NO
4
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<110> UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA
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<120> Procedimiento de tratamiento de la
enfermedad de Alzheimer
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<130> EP.1513.A.2.
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<160> 4
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<170> PatentIn versión 3.1
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<210> 1
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<211> 8
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<212> PRT
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<213> Síntesis química
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<400> 1
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<210> 2
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<211> 8
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<212> PRT
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<213> Síntesis química
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<400> 2
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<210> 3
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<211> 10
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<212> PRT
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<213> Síntesis química
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<400> 3
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<212> PRT
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<213> Síntesis química
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<400> 4
\hskip1cm9
Claims (7)
1. Uso de un péptido conjugado con una proteína,
que actúa como un inmunógeno, para la producción de anticuerpos que
pueden reconocer específicamente cualquiera de las variantes
predominantes del péptido amiloide beta A\beta40 y A\beta42 en
la preparación de un medicamento para prevenir y/o tratar una
enfermedad caracterizada por la acumulación de depósitos de
amiloide en el cerebro de un paciente, seleccionada de una
cualquiera de las enfermedades que consisten en enfermedad de
Alzheimer o angiopatía amiloide cerebral, caracterizado
porque el péptido es SEQ ID No 2.
2. El uso de acuerdo con la reivindicación
previa, caracterizado porque la enfermedad es la enfermedad
de Alzheimer.
3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1,
caracterizado porque la enfermedad es la angiopatía amiloide
cerebral.
4. El uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones previas, caracterizado porque la proteína
es la proteína de la lapa californiana (KLH).
5. Uso de un anticuerpo o un fragmento o
derivado activo de un anticuerpo que reconoce específicamente
cualquiera de las variantes predominantes del péptido amiloide beta
A\beta40 y A\beta42, en la preparación de un medicamento para
prevenir y/o tratar una enfermedad caracterizada por la
acumulación de depósitos de amiloide en el cerebro de un paciente,
seleccionada de cualquiera de las enfermedades que consisten en la
enfermedad de Alzheimer o angiopatía amiloide cerebral, en la que
el anticuerpo o el fragmento o derivado activo que reconoce
específicamente cualquiera de las variantes predominantes del
péptido A\beta, se obtiene por inmunización de mamíferos o aves
con el péptido de SEQ ID No 2.
6. El uso de acuerdo con la reivindicación 6,
caracterizado porque la enfermedad es la enfermedad de
Alzheimer.
7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6,
caracterizado porque la enfermedad es la angiopatía amiloide
cerebral.
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