ES2329529T3 - Formulaciones terapeuticas que contienen veneno de serpiente y/o de insecto para la profilaxis y la terapia del neoplasma. - Google Patents

Abstract

Utilización de veneno de serpiente y de al menos un adyuvante para la fabricación de un medicamento que comprende una composición de liberación sostenida o dirigida por medio de liposomas para la prevención o tratamiento del neoplasma o del desarrollo neoplásico.

Description

Formulaciones terapéuticas que contienen veneno de serpiente y/o de insecto para la profilaxis y la terapia del neoplasma.

La presente invención comprende la utilización de formulaciones farmacéuticas que contienen veneno de serpiente o extractos procedentes de estos venenos, los cuales pueden contener, total o parcialmente, una actividad de la enzima fosfolipasa A_{2}, sola o en combinación con fosfolipasa A_{2} animal o vegetal, con o sin compuestos inhibidores de la fosfolipasa C o antisuero de la enzima fosfolipasa C mono o policlonal a fosfolipasa C, como candidatas a la vacuna terapéutica para todas las enfermedades neoplásicas.

Las Fosfolipasas A_{2} son enzimas lipolíticas que hidrolizan el enlace sn-2-aciléster de los glicerofosfolípidos. Existen numerosas formas de PLA_{2} en la naturaleza, que se describen y clasifican en varios grupos. Las PLA_{2} del tipo I, II y III son enzimas peptídicas extracelulares de bajo peso molecular (13-18 kDa), incluyendo veneno PLA_{2} (tipo I) de cobra y pancreático, PLA_{2} (tipo II) de serpiente de cascabel e inflamatorio y veneno de abeja (tipo III). Las PLA_{2} citosólicas intracelulares pertenecen a distintos grupos, incluyendo las enzimas de 85 kDa (tipo IV) y de 40-75 kDa.

Existen evidencias de que la fosfolipasa A_{2} (PLA_{2}) está involucrada en la patogénesis de muchas enfermedades. Por tanto, los niveles locales y circulantes de la enzima fosfolipasa A_{2} y productos enzimáticos son elevados durante la infección, la enfermedad inflamatoria, la lesión de tejidos y la disfunción cerebral y es una indicación precoz del desarrollo neoplásico antes de que se evidencie la masa de células tumorales por métodos convencionales de exploración tumoral en tejidos.

Una actividad excesiva de la fosfolipasa A_{2} puede provocar inflamación crónica, reacción alérgica, daño tisular y complicaciones patofisiológicas. Estos efectos pueden ser consecuencia de la acumulación de productos de fosfolipasa A_{2} (lisofosfolípidos y ácidos grasos libres, por ejemplo, ácido araquidónico) y la destrucción de componentes clave de la membrana fosfolipídica estructural, pero son potenciados por los metabolitos secundarios tales como eicosanoides y el factor activador plaquetario. Los productos de fosfolipasa A_{2} y los mediadores lipídicos procedentes de los mismos se ven implicados en numerosas actividades que forman parte integrante de la activación celular, quimiotaxis, adhesión, degranulación, fagocitosis y agregación.

La fosfolipasa A_{2} secretada en exceso en sitios locales puede resultar responsable del daño tisular común a los trastornos reumáticos, lesión del epitelio alveolar de la enfermedad pulmonar y reperfusión.

Durante la isquemia miocárdica aguda, la activación citosólica de la fosfolipasa A_{2} y fosfolipasa C provoca un incremento de Ca^{2+} intracelular. La acumulación posterior de lisofosfolípidos y ácidos grasos libres provoca el daño de las membranas sarcolemales, lo que conduce a una lesión celular irreversible y finalmente a la muerte celular.

La actividad citosólica alterada de la fosfolipasa A_{2} y fosfolipasa C, o defectos en su control y regulación, es un factor de predisposición al desarrollo de células tumorales.

Las prostaglandinas y eicosanoides relacionados son mediadores y reguladores importantes de las respuestas tanto inmunes como inflamatorias. La prostaglandina E_{2} induce la resorción ósea y el leucotrieno B_{4} estimula la vasodilatación y la quimiotaxis. Se observa un incremento de los niveles de fosfolipasa A_{2} en la artritis reumatoide (RA), la osteoartritis, gota, enfermedades vasculares y del colágeno. La fosfolipasa A_{2} induce la hiperactividad no específica de las vías aéreas evidente en el asma. La fosfolipasa A_{2} es elevada también en la peritonitis, el shock séptico, la insuficiencia renal, la pancreatitis, la enfermedad de Chron y la enfermedad de Graves.

La actividad de los sistemas de defensa mediados por células es estimulada por la formación consecutiva de interleuquina 1\beta (IL-1\beta), interleuquina-2 (IL-2) e interferón \gamma (IFN \gamma). El sistema es inhibido por la interleuquina-4 (IL-4) y también por la prostaglandina E_{2} (PGE_{2}) e histamina, que son liberadas cuando se activa el sistema inmune. La inhibición es fuerte en pacientes de cáncer, debido a que la PGE_{2} se forma en numerosas células cancerosas y su formación es estimulada por IL-1\beta. La PGE_{2} y la histamina son inhibidores de retroacción de la inmunidad mediada por células.

La PGE_{2} se forma a partir de ácido araquidónico en los monocitos, macrófagos, células cancerosas y demás células, cuando se libera el ácido araquidónico de los fosfolípidos celulares. La formación de PGE_{2} es estimulada por varios compuestos, incluidos histamina, IL-1 (\alpha y \beta) y el factor de necrosis tumoral \alpha (TNF\alpha). La PGE_{2} inhibe la formación y expresión del receptor de IL-2 mediante el incremento del nivel de AMP cíclico (cAMP) en células T ayudantes. Esta concomitancia reduce la formación de IFN\gamma.

La PGE_{2} inhibe la capacidad de las células asesinas naturales (NK) para unirse a células tumorales mediante el incremento de cAMP en las células asesinas naturales. Esto reduce la muerte de las células tumorales.

Cuando el sistema inmune es estimulado para destruir células tumorales, la muerte se ve impedida debido a que IL-1\beta estimula la formación de PGE_{2} en las células tumorales, lo que aumenta los niveles de cAMP en las células NK e impide la unión de NK y las células tumorales.

Se bloquea también la activación de la defensa mediada por células debido a que PGE_{2} aumenta el cAMP en las células T ayudantes e inhibe la formación de IL-2 e IFN\gamma.

La células T citotóxicas pueden producir también PGE_{2} inhibiendo así la actividad de las células NK.

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Antecedentes de la invención

Ciertos tumores humanos y animales experimentales contiene y/o produce grandes cantidades de prostaglandinas (PG). Se ha demostrado que las prostaglandinas E_{2} favorecen una proliferación celular significativa en el crecimiento tumoral y suprimen la capacidad de respuesta inmune.

La fosfolipasa C específica de fosfatidilinositol es una importante enzima para la señalización intracelular. Existen al menos tres grandes clases de fosfolipasas C específicas de fosfatidilinositol (PtdlnsPLC: PtdlnsPLC \beta, \gamma,\delta). Las PtdlnsPLC hidrolizan un fosfolípido de membrana menor, fosfatidilinositol-(4,5)-bifosfato (Ptdlns (4,5) P_{2}) para producir los segundos mensajeros inositol-(1,4,5)- trifosfato (Ins (1,4,5) P_{3}), que libera Ca^{++} de los almacenes intracelulares, aumentando la concentración de Ca^{++} libre intracelular, y diacilglicerol, que activa el Ca^{++} y la proteína fosfolípido-dependiente serina/treonina-quinasa, proteína quinasa C. Las proteínas fosforiladas por la proteína quinasa C incluyen factores de transcripción. Tanto el incremento de la concentración de Ca^{++} libre intracelular como la activación de proteína quinasa C conducen a una serie de eventos que culminan en la síntesis de ADN y en la proliferación celular de células tumorales.

Diversos factores de crecimiento y mitógenos, incluyendo el factor de crecimiento derivado plaquetario (PDGF), el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y la bombesina, actúan a través de los receptores específicos incrementando la actividad de Ptd Ins PLC en las células. La estimulación continua de Ptd Ins PLC puede llevar a la transformación celular.

Se ha descubierto que la actividad de Ptd Ins PLC aumenta en diversos tumores humanos. El 76% de los cánceres de mama humanos tienen una proteína inmunorreactiva Ptd Ins PLC-\gamma detectable en comparación con sólo un 6% en tejido mamario benigno.

La actividad citosólica de Ptd Ins PLC aumenta hasta más de 4 veces en el cáncer de pulmón humano de células no pequeñas y el cáncer celular renal en comparación con un tejido normal.

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Sumario de la invención

De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona la utilización de veneno de serpiente y al menos un adyuvante para la fabricación de un medicamento que comprende una composición de liberación sostenida o dirigida por medio de liposomas, para la prevención o el tratamiento del neoplasma o del desarrollo neoplásico. Preferentemente, el medicamento comprende además suero anti-fosfolipasa C o parte del mismo, o compuestos inhibidores de la fosfolipasa C.

Los compuestos inhibidores de la fosfolipasa C pueden ser uno o más de EDTA, fenantrolina, ácido cloromercuribenzoico, ácido yodoacético y 1-oleoil-2-acetil-sn-glicerol (OAG).

El medicamento puede comprender además otros agentes terapéuticamente eficaces.

Esta patente se refiere a la utilización de uno o más compuestos que, en general, se pueden describir en referencia a su función, causando directa o indirectamente la inhibición de la enzima fosfolipasa A_{2} y/o la fosfolipasa C, donde dicha inhibición es parcial o total.

Por tanto, la región Fc del anticuerpo a dicha fosfolipasa puede eliminarse total o parcialmente.

Además, esta patente se refiere a la utilización de uno o más compuestos que, en general se pueden describir en referencia a función por la interacción con la membrana celular neoplásica, impidiendo su crecimiento o propagación, impidiendo así la disrupción de los órganos corporales no implicados y provocando la no toxicidad al paciente o animal infectado que se está tratando.

Se demuestra aquí que el suero anti-PLA_{2} de veneno de serpiente y de plantas, insectos, mamíferos, y/o epítopos o moléculas mímicas de PLA_{2} son compuestos proliferativos antitumorales activos y de mejora inmune.

Por tanto, se puede utilizar un compuesto no tóxico que presenta actividad inhibidora contra las enzimas fosfolipasa C, conjuntamente con un suero anti-PLA_{2}, para obtener un incremento de la actividad antineoplásica.

El suero anti-PLA_{2} se puede generar en huevos, produciendo anticuerpos que no reaccionan con el sistema del complemento humano.

El suero anti-PLA_{2} se puede generar en mamíferos y extraerse del calostro.

Para su uso al respecto, los compuestos de la invención se administran a mamíferos, incluidos humanos, en una cantidad eficaz de 0,05 a 5 g al día por kilogramo de peso corporal. La cantidad depende, por supuesto, de la condición a ser tratada, de la gravedad de la condición, la vía de administración del medicamento y la naturaleza del sujeto. Los medicamentos se pueden utilizar i.v., por vía oral, parenteral, o por otras vías de administración estándar, incluyendo la dirección mediante liposomas/RBC.

Alternativamente, el antisuero se puede producir sintéticamente por impresión molecular de moléculas orgánicas patrón utilizando fosfolipasas.

El antisuero puede ser monoclonal o policlonal.

La actividad terapéutica de los compuestos de esta invención se demuestra mediante la inhibición de las líneas celulares tumorales in vitro e in vivo. La toxicidad de los compuestos se sometió a prueba en ratones Scid. Los resultados se exponen en la Figura 1 [datos sobre la toxicidad].

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Estudio de Toxicidad Método

Se trataron ratones Scid hembra (6-8 semanas de edad) con una dilución pura o 1:10 de preparación de antisuero, subcutáneamente (0,1 ml, diario) durante un período de 14 días. Se midió diariamente el peso de los ratones. A la finalización, se retiraron los órganos y se fijaron en formalina para su examen histológico.

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Resultados

No se evidenció ninguna toxicidad, tal como se evaluó mediante los pesos y el bienestar clínico de los animales (Figura 1). Los compuestos de esta invención se pueden combinar con otros agentes quimioterapéuticos o inmunosupresores/antiinflamatorios tales como esteroides o agentes antiinflamatorios no esteroideos en las composiciones farmacéuticas y métodos descritos aquí.

El anti-suero de veneno de serpiente y/o de insecto y/o de mamífero y/o de enzima PLA_{2} o sus epítopos se puede utilizar como tratamiento terapéutico en enfermedades en las que se evidencian altos niveles de fosfolipasa A_{2} (por ejemplo artritis reumatoide, véase Tabla B). Se plantea también que esta nueva terapia con suero anti-PLA_{2} de veneno (serpiente o insecto) y/o anti-componentes de PLA_{2} (procedentes de animales o plantas) se pueda aplicar como terapia profiláctica mediante la utilización de dosis sub-letales de venenos o extractos de la enzima PLA_{2} de veneno junto con PLA_{2} de mamífero o planta o péptidos sintéticos que muestren actividad de PLA_{2}, más un adyuvante, para estimular una respuesta de inmunoglobulina en el paciente, véanse los resultados - Eficacia de las vacunas en ratones Balb/c. Se plantea asimismo que un péptido sintético que incorpora la actividad de la fosfolipasa A_{2} y/o fosfolipasa C se podría utilizar para generar dicho antisuero o agente terapéutico o vacuna. Se puede utilizar en la generación de esta vacuna/anti-suero terapéutico por medio de la conocida homología de secuencias que existe entre la fosfolipasa A_{2} humana y los venenos de serpiente/insecto junto con PLA_{2} de animal utilizada en combinación con compuestos conocidos por inhibir la actividad de la fosfolipasa C o antisuero desarrollado contra esta enzima.

Se pueden formular composiciones de liberación sostenida o dirigida, por ejemplo mediante liposomas, o aquellas en las que el compuesto activo está protegido por revestimientos diferencialmente degradables, por ejemplo microencapsulación, capas múltiples, etc. También es posible liofilizar los nuevos compuestos y utilizar los productos liofilizados obtenidos, por ejemplo para la preparación de productos para su almacenamiento y posterior inyección.

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Experimentación

Se incorpora el uso farmacéutico de venenos o partes de los mismos y/o de PLA_{2} de mamífero o componentes enzimáticos como antígenos en vacunas: compuestos no tóxicos que presentan actividad anti-fosfolipasa C se pueden incorporar con el suero anti-PLA_{2} de cualquier origen, o moléculas mímicas que presenten actividad de la fosfolipasa A_{2}.

En ciertas aplicaciones de esta terapia, puede resultar necesario limitar la reacción ADCC que podría provocar la enfermedad del suero y asegurar que no se produzca que el componente de IgG (FC) sea segmentado enzimáticamente de la inmunoglobulina purificada por afinidad, de forma que las células asesinas naturales no reaccionen a la inmunoglobulina en el antisuero.

Capacidad del anti-suero de veneno de serpiente para inhibir la enzima fosfolipasa A_{2} aislada de fluido sinovial humano (Tabla A2)

Se sometió a prueba la inhibición de la enzima fosfolipasa A_{2} de fluido sinovial aislado de un paciente con artritis reumatoide en un rango de dilución del anti-suero de veneno de serpiente. El anti-suero de veneno de serpiente generado en caballos se reconstituyó en 10 ml de agua estéril. Se utilizaron las siguientes diluciones: 1:10; 1:20; 1:40; y 1:60. El método empleado fue el señalado en "Infection and Immunity, Sept. 1992, p. 3928-3931. Induction of Circulating Group II Phospholipase A_{2} Expression in Adults with Malaria".

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Resultados TABLA A2

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Pruebas in vitro de un veneno de serpiente purificado por no-afinidad

Se sometió a prueba un rango de líneas celulares tumorales con 3 concentraciones de anti-suero de veneno de serpiente por medio del ensayo MTT. Este antisuero no estaba purificado por afinidad. El ensayo MTT se describe en Alley y col. (Cancer Research, 48: 589-601, 1988), véase la Tabla B.

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(Tabla pasa a página siguiente)

Sumario de los resultados TABLA B

2

3

Ensayo del suero antiveneno de serpiente purificado por no afinidad frente a la línea celular de melanoma B96F1 Ratones

C57BL/6

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Procedimiento

Los ratones fueron inoculados vía subcutánea (sc) con 0,5 x 10^{6} células de melanoma B16F1 en la región del costado. Una vez desarrollados tumores palpables, los ratones recibieron diariamente inyecciones sc como sigue:

4

Se midieron diariamente las dimensiones de los tumores mediante calibradores. Una vez los tumores de los ratones control fueron de aproximadamente 1,5 cm o más de diámetro, se sacrificaron todos los ratones. Los tumores se retiraron y se pesaron.

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Resultados

Los pequeños tumores se apreciaron primero por palpación en todos los ratones 6-7 días después de la inoculación. Se midieron los cambios de volumen según las medidas de los calibradores, junto con el peso de los tumores en la autopsia. Véase la Fig. 2 [Efecto del suero antiveneno de serpiente purificado por no afinidad sobre el crecimiento del Melanoma B16F1] en cuanto al efecto del suero antiveneno de serpiente sobre el retardo del crecimiento de
tumores.

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Examen in vitro de la preparación de suero purificado por afinidad antiveneno de serpiente frente a un rango de líneas celulares tumorales (Fig. 3A [Tumor colorrectal humano C170HM2], Fig. 3B [Tumor de vejiga humano T24], Fig. 3C [Tumor de linfoma humano MOLT 4], Fig. 3D [Tumor pancreático humano PAN 1], Fig. 3E [Tumor de mama humano MDA 468], Fig. 3F [Tumor de pulmón de células pequeñas humano 841], Fig. 3G [Tumor gástrico humano ST24] y Fig. 3H [Tumor de ovario humano OVCAR3])

Introducción

Los efectos inhibidores in vitro de la preparación de suero antiveneno de serpiente generado en caballo, previamente evaluados, se ocultaron debido al aumento de células tumorales en el caldo. Por tanto, en el ensayo siguiente, se evaluó el suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad.

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Método

Se sembraron líneas celulares en placas de 96 pocillos a una concentración celular de 10^{4} células por pocillo tanto en medio sin suero (Hams F12:RPMI 1640 + 0,5% de seroalbúmina bovina) como en medio que contiene suero (RPMI 1640 + 10% de suero de ternera fetal inactivado por calor). La preparación de antisuero se diluyó en el medio correspondiente y se añadió a los pocillos 2-3 horas después de añadir las células (para permitir la adherencia celular). Se incubaron las placas a 37ºC en -5% de CO_{2} durante 3 días. Luego se incubaron las células con 1 mg/ml de MTT (metil tiazol tetrazolio) durante 4 horas a 37ºC. Después, se solubilizaron los cristales con dimetilsulfóxido y se midió la absorbancia a 550 nm.

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Resultados

Los antisueros de prueba inhibieron la totalidad de las líneas celulares a todas las concentraciones estudiadas. El nivel de inhibición fue estadísticamente significativo a partir del control no tratado a todas las diluciones de antisuero, con todas las líneas celulares, tal como se evaluó por medio de un análisis de variancia monodimensional.

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Prueba in vivo: Efectos del suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad sobre la línea celular C170HM_{2} colorrectal humana Materiales y Métodos

Se inyectaron vía subcutánea células C170MH_{2} en el costado izquierdo de diez ratones macho sin pelo. Se repartieron los ratones al azar en dos grupos.

Grupo 1 - 100 \mul de antisuero dos veces al día vía intravenosa (IV)

Grupo 2 - 100 \mul de PBS dos veces al día IV

Se midieron los tumores dos veces por semana, utilizando calibradores en dos dimensiones. Se calculó la sección transversal. También se pesaron los ratones una vez por semana. La terapia terminó el día 22.

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Resultados

Se midieron las áreas de sección transversal a intervalos de tiempo crecientes durante el experimento, tal como se muestra en la Fig. 4 [Efecto del suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad sobre el área de sección transversal media de C170HM_{2} en ratones sin pelo]. La preparación de antisuero purificado por afinidad indujo una deceleración en el crecimiento cuando se compara con controles de solución salina. Se realizó un ANOVA sobre cuyos resultados se evaluó el tratamiento con respecto al tiempo, y muestra una significancia de P = 0,028.

A la finalización del experimento, se pesaron los tumores, se muestran los resultados en la Fig. 5 [Efecto del suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad sobre el peso final de los tumores de C170HM_{2}]. No se observó ningún efecto tóxico de la preparación del antisuero purificado por afinidad.

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Exploración in vitro de la preparación de suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad en combinación con un inhibidor de fosfolipasa C, 1-oleoil-2-acetil-sn-glicerol (OAG) 5 \muM sobre un rango de líneas celulares cancerosas Métodos

La preparación de suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad se diluyó 1:2 y 1:10 y se combinó con 5 \muM de OAG y se añadió a los pocillos tal como se describe anteriormente para el Ensayo MTT. Las líneas celulares sometidas a prueba eran de tumor de mama humano, MDA 468, tumor de pulmón humano de células pequeñas 841 y tumor renal humano TK-10. Se muestran los resultados en la Fig. 6A [Suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad y (OAG) una combinación de inhibidor de Fosfolipasa C - Tumor de mama humano MDA 468], Fig. 6B [Suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad y (OAG) una combinación de inhibidor de Fosfolipasa C - Tumor de pulmón humano de células pequeñas 841] y 6C [Suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad y (OAG) una combinación de inhibidor de Fosfolipasa C - Tumor renal humano TK-10].

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Pruebas in vivo de la combinación de suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad y 1-oleoil-2-acetil-sn-glicerol (OAG) a una concentración 5 \muM sobre el crecimiento de la línea celular MDA 468 Método

Se retiraron asépticamente los tumores MDA 468 de los ratones Scid hembra donantes. Se trituró asépticamente el tejido, se juntó y se implantó en ratones Scid hembra anestesiados (el producto anestésico se componía de una inyección de 0,2 ml de Hypnorm (Jannsen):Hyonovel (Roche):agua destilada en una proporción de 1:1:5). Los implantes de tejido se componían de trozos de 3-5 mm^{2} y después del transplante subcutáneo en el costado izquierdo, se cosió la incisión. Entonces se repartieron al azar los ratones Scid en 2 grupos de 10 animales. Se trataron diariamente con una inyección subcutánea de 0,2 ml (en el costado opuesto al injerto de tumor) de una combinación de suero antiveneno de serpiente purificado por afinidad y una dilución (OAG) 5 \muM de preparación de antisuero. Los animales control recibieron 0,2 ml de solución salina tamponada con fosfato, pH 7,6. Se sacrificaron todos los animales el día 63 y los tumores se diseccionaron, pesaron y procesaron para su histología. Los resultados se muestran en la Fig. 7 [Efecto del suero antiveneno purificado por afinidad en combinación con 5 \muM del inhibidor de fosfolipasa C (OAG)].

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Eficacia de la vacuna en ratones Balb/c después de la prueba con células WEHI-3

El objetivo del estudio consiste en demostrar la eficacia de los niveles subletales del veneno de víbora de Russell atrapado dentro de liposomas y la enzima porcina fosfolipasa A_{2} atrapada dentro de liposomas trabajando en combinación para otorgar una respuesta sostenida y protectora del anticuerpo a una prueba con células de leucemia (células WEHI-3).

El veneno de víbora de Russell se sometió a toxoides con tetróxido de osmio al 2% y se atrapó en liposomas (fosfocolina y colesterol de huevo). Se esterilizaron los liposomas.

La enzima porcina fosfolipasa A_{2} se atrapó en liposomas (fosfocolina y colesterol de huevo) y se esterilizó.

La inmunización de los ratones consistía en una inyección subcutánea inicial de 0,25 ml (que contenía 250 \mug de veneno) y 3 días más tarde se inyectó vía subcutánea a los ratones 0,25 ml de PLA_{2} porcina (que contenía 250 \mug de PLA_{2} porcina). Se aplicaron refuerzos de cada vacuna a intervalos de 3 semanas.

Se inyectó a los ratones control 0,25 ml de solución salina fisiológica estéril los días que correspondían a las inoculaciones de los ratones de prueba.

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Animales

En el estudio se utilizaron ratones Balb/c (20-25 g). Se emplearon 15 ratones en cada grupo.

Grupo I - ratones de prueba

Grupo II - ratones control

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Pruebas

Los ratones inmunizados y de control se sometieron a prueba mediante una inyección intravenosa en la vena de la cola con aproximadamente 5 x 10^{5} células leucémicas (células WEHI-3) el día 30 del estudio.

Se observaron los ratones de prueba durante un período prolongado después de la muerte de los ratones control, aproximadamente a los 24 días.

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Resultados obtenidos

Todos los ratones control murieron de leucemia en un período de tiempo asignado de 24 días. La inoculación de la combinación de venenos protegió al grupo vacunado contra las células cancerosas y el coeficiente de supervivencia fue del 100% el día 35, cuando finalizó el experimento.

Claims (10)

1. Utilización de veneno de serpiente y de al menos un adyuvante para la fabricación de un medicamento que comprende una composición de liberación sostenida o dirigida por medio de liposomas para la prevención o tratamiento del neoplasma o del desarrollo neoplásico.

2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque el medicamento comprende además suero anti-fosfolipasa C o parte del mismo, o compuestos inhibidores de la fosfolipasa C.

3. Utilización según la reivindicación 2, caracterizada porque los compuestos inhibidores de la fosfolipasa C son uno o más de EDTA, fenantrolina, ácido cloromercuribenzoico, ácido yodoacético y 1-oleoil-2-acetil-sn-glicerol (OAG).

4. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el medicamento comprende además otros agentes terapéuticamente eficaces.

5. Utilización según la reivindicación 2, caracterizada porque la región Fc del anticuerpo a dicha fosfolipasa se elimina total o parcialmente.

6. Utilización según las reivindicaciones 2, 3 ó 5, caracterizada porque se utiliza un compuesto no tóxico que muestra actividad inhibidora contra las enzimas fosfolipasa C conjuntamente con un suero anti-fosfolipasa A_{2} (PLA_{2}) para obtener un aumento de la actividad antineoplásica.

7. Utilización según la reivindicación 6, caracterizada porque el suero anti-PLA_{2} se genera en el huevo, produciendo anticuerpos que no reaccionan con el Sistema del Complemento humano.

8. Utilización según la reivindicación 6, caracterizada porque el suero anti-PLA_{2} se genera en mamíferos y se extrae del calostro.

9. Utilización según la reivindicación 6, caracterizada porque el antisuero se produce sintéticamente mediante impresión molecular de moléculas orgánicas patrón utilizando fosfolipasas.

10. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, caracterizada porque el antisuero es monoclonal o policlonal.