ES2330688T3 - Composicion farmaceutica de microesferas para prevenir la amputacion de pie diabetico. - Google Patents
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Abstract
Una composición farmacéutica que contiene microesferas cargadas con Factor de Crecimiento Epidérmico para ser administrada por viaparenteral en los miembros inferiores de pacientes diabéticos aquejados de lesiones isquémicas cutáneas crónicas. La composiciónde la presente invención, en contraste al estado de la tecnica anterior, es ùtil porque reduce la frecuencia de administración durante el tratamiento y permite que la cicatrización de las lesiones sea más rápida comparada con la administraciÌn de cantidades equivalentes del Factor libre en solución.
Description
Composición farmacéutica de microesferas para
prevenir la amputación de pie diabético.
La presente invención versa acerca de una
composición farmacéutica que comprende microesferas poliméricas que
contienen factor de crecimiento epidérmico (EGF) para la
aplicación, mediante vía parenteral, en las extremidades inferiores
de pacientes diabéticos con heridas ulcerativas isquémicas crónicas
cutáneas para evitar la amputación de extremidades diabéticas.
La diabetes mellitus es el principal factor de
riesgo no traumático para la amputación de las extremidades
inferiores. La ulceración del pie es una complicación significativa
de la diabetes con una incidencia anual ligeramente superior al 2%
(Abbott C.A., et al (2002) The North-West
Diabetes Foot Care Study: Incidence of, and risk factors for, new
diabetic foot ulceration in a community-based
patient cohort. Diabet. Med. 19(5): 377-84).
Al menos el 15% de los pacientes diabéticos desarrollan úlceras
crónicas en sus pies durante sus vidas (Reiber G.E. (1996) The
epidemiology of diabetic foot problems. Diabet. Med. 13 Suppl
1:S6-11) y, se estima que aproximadamente el 10%-30%
de estos pacientes requieren una amputación de su extremidad
inferior (Lipsky B.A. (2004) Medical treatment of diabetic foot
infections. Clin. Infect. Dis. 39 Suppl 2:S104-14).
La mortalidad hasta los 5 años de los pacientes que han sufrido una
amputación de las extremidades inferiores es de aproximadamente el
50-60% (Reiber G.E. (1996) The epidemiology of
diabetic foot problems. Diabet. Med. 13 Suppl
1:S6-11). Se han utilizado varios procedimientos
para el tratamiento de los pacientes diabéticos con heridas
ulcerativas isquémicas crónicas cutáneas. Incluyen un control
metabólico riguroso, una profilaxis de los factores modificables de
riesgo, desbridamientos quirúrgicos, el uso de apósitos, un
tratamiento antimicrobiano de las infecciones, la eliminación de la
presión en la zona lesionada, el uso de injertos de piel, factores
de crecimiento y el uso de procedimientos de revascularización en
caso de indicación.
Después del control metabólico, el
desbridamiento quirúrgico es el tratamiento más importante para la
curación de la úlcera diabética y se debería llevar a cabo antes que
cualquier otra modalidad terapéutica local. El desbridamiento
quirúrgico consiste en eliminar todo el tejido muerto e infectado
(incluyendo huesos) de la región lesionada, al igual que de los
tejidos callosos circundantes.
Está bien establecido el uso de apósitos para
las úlceras de pie diabético, y aunque se han estudiado varios
tipos de apósitos, no se conocen las ventajas de cada tipo de
apósito sobre los otros. Además, dado que ha habido pocos estudios
acerca del uso de apósitos, y que han estado dirigidos
principalmente a úlceras leves, se requieren más evidencias de
ensayos clínicos para demostrar su eficacia. Los nuevos tipos de
apósitos, que han sido estudiados en ensayos clínicos, incluyen
aquellos basados en una membrana polimérica semipermeable,
promogram (una matriz de colágeno), alginato, carboximetilcelulosa,
hialuronano y aquellos que utilizan presión subatmosférica (Eldor
R., et al. (2004) New and experimental approaches to
treatment of diabetic foot ulcers: a comprehensive review of
emerging treatment strategies. Diabet Med. 21(11):
1161-73).
Se han desarrollado varios procedimientos para
crear sustitutos de la piel que son colocados en la úlcera. Por
ejemplo, se produce Dermagraft al sembrar fibroblastos de dermis
humana en un andamio sintético de material bioabsorbible. Este
dispositivo se ha mostrado efectivo en úlceras leves con una mayor
proporción de curación en un menor intervalo de tiempo. (Marston
W.A., et al. (2003) Dermagraft Diabetic Foot Ulcer Study
Group. The efficacy and safety of Dermagraft in improving the
healing of chronic diabetic foot ulcers: results of a prospective
randomized trial. Diabetes Care 26: 1701-5). El
Apligraf consiste en una capa de dermis compuesta de fibroblastos
humanos en una matriz de colágeno bovino tipo I y una capa de
epidermis formada por queratinocitos humanos. De forma similar,
este sustituto de la piel ha mostrado que produce una curación
significativamente mayor y más rápida de las lesiones cuando se
aplica en úlceras neuropáticas leves y no infectadas (Veves A.,
et al (2001) Graftskin, a human skin equivalent, is
effective in the management of non-infected
neuropathic diabetic foot ulcers: a prospective randomized
multicenter clinical trial. Diabetes Care 24:
290-5).
En un ensayo clínico aleatorio, doble ciego,
controlado por placebo de fase III, una formulación de gel de
factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) mostró ser
efectivo y seguro para el tratamiento de pacientes diabéticos que
tienen úlceras neuropáticas con buena perfusión sanguínea (Wieman
T.J., et al (1998) Clinical efficacy of beclapermin (rh
PDGF-BB) gel. Diabetes Care 21 (5):
822-7). La mayoría de los pacientes (95%) incluidos
en este estudio tiene úlceras con un área \leq 10 cm^{2}
conforme a la evaluación de la planimetría. El gel de becaplermina
100 \mug/g, en comparación con un placebo, aumentó
significativamente la curación completa de las lesiones un 43% (50
en vez del 35%, p = 0,007) y disminuyó el tiempo requerido para
conseguir este efecto un 32% (86 en vez de 127 días, p = 0,013).
Los resultados satisfactorios con PDGF o becaplermina (Regranex)
llevan a su aprobación para el tratamiento de úlceras neuropáticas
ubicadas en los miembros inferiores de pacientes diabéticos, que se
extienden hasta el tejido subcutáneo o más profundamente y tienen un
flujo sanguíneo adecuado (Brem H., Sheehan P., Boulton A.J. (2004)
Protocol for treatment of diabetic foot ulcers. Am. J. Surg.
187(5A):1 S-10S). Recientemente, se publicó
un procedimiento para la administración de un agente curativo como
el factor de crecimiento epidérmico (EGF), que consiste en la
infiltración de una disolución de EGF en la lesión por medio de
varias inyecciones (WO 03/053458). Pero tiene una desventaja
evidente: es muy traumático para el paciente dado que la aplicación
de las inyecciones en la lesión es extremadamente dolorosa. En cada
tratamiento se deben aplicar varias inyecciones y el paciente debe
recibir el tratamiento en días alternos durante varias semanas.
Considerando las desventajas de este procedimiento, el uso de una
formulación de liberación sostenida de EGF podría reducir la
frecuencia de la administración de fármacos, lo que potenciaría
muchísimo la comodidad y la conformidad del paciente.
Existe una patente (U.S. 6.086.863) en la que se
pueden incluir factores de regulación y de crecimiento (es decir,
factor de crecimiento epidérmico) en composiciones profilácticas o
terapéuticas que contienen microesferas de poliestireno u otros
polímeros no degradables, para mejorar el procedimiento de
reparación de las lesiones como las úlceras de pie diabético, por
medio de la aplicación local de una suspensión de estas
microesferas en un vehículo apropiado. La aplicación tópica de los
fármacos tiene la limitación relacionada con el control deficiente
de esta dosis que alcanza la ubicación de acción dado que pueden
interferir varios factores con la absorción del fármaco, entre ellos
se pueden mencionar la presencia de tejido necrótico y exudados
locales, el impedimento del flujo sanguíneo, las enzimas que
degradan el EGF.
Por lo tanto, un problema importante en el
tratamiento de las úlceras de pie diabético es determinar la dosis
efectiva de un fármaco que provoca la regeneración del tejido
isquémico y previene la amputación de la extremidad diabética.
Muchas otras patentes se han centrado en otros
procedimientos diseñados para acelerar la velocidad de curación.
Sin embargo, ninguno de estos procedimientos ha probado ser
ampliamente efectivo.
En general, la presente invención hace
referencia a una composición farmacéutica que contiene microesferas
cargadas con factor de crecimiento epidérmico, para ser
administradas por vía parenteral en las extremidades inferiores de
pacientes diabéticos que tienen heridas isquémicas crónicas
cutáneas, con el objetivo de prevenir la amputación de estos
miembros. En la presente invención, el término microesferas incluye
microesferas y nanoesferas. La encapsulación del EGF en
microesferas permite: (i) la liberación lenta del fármaco y (ii) la
protección del EGF contra procedimientos degradativos como la
proteína digestiva por las proteasas ubicadas en la ubicación de la
acción.
En la presente invención, se pueden describir
las microesferas como esferas poliméricas con el fármaco dispersado
de manera homogénea en todo su volumen, que se libera de una forma
controlada.
En el contexto de la presente invención, la
expresión "liberación controlada" incluye la liberación del
fármaco de una forma continua, discontinua, lineal o no lineal.
Esto se acompaña al usar distintas composiciones de la matriz
polimérica, la inclusión de excipientes que modifican los perfiles
de liberación y/o la adición de potenciadores de la degradación
polimérica u otras modificaciones, que se realizan de manera
individual o combinada, producen el efecto esperado en las
propiedades de la composición.
Las microesferas se obtienen mediante el
procedimiento de doble emulsión/evaporación de disolvente como
describen Okada et al. (US 4.652.441).
Los polímeros preferidos para el desarrollo de
la presente invención son aquellos que, por sus propiedades, son
biocompatibles y biodegradables. La última condición es de extrema
importancia dado que permite la aplicación parenteral de la
formulación mediante su infiltración en la lesión. Se prefieren
especialmente los homopolímeros de ácido glicólico o láctico y los
copolímeros
(poli(lacturo-co-glicoluro),
abreviado PLGA) derivados de ambos. Estos polímeros poseen
características que los han convertido en excelentes biomateriales
para la fabricación de suturas, de dispositivos ortopédicos de
fijación y de matrices poliméricas para sistemas de administración
de fármacos (Ashammakhi N. et al (2001) Developments in
Craniomaxillofacial Surgery: Use of Self-Reinforced
Bioabsorbable Osteofixation Devices. Plast. Recontr. Surg. Special
Topic: 167-80; Eppley B.L. (2005) Use of resorbable
plates and screws in pediatric facial fractures. J. Oral
Maxillofac. Surg. 63(3): 385-91). En cuanto a
sus propiedades, son biocompatibles y biodegradables; además de
ofrecer la posibilidad de variar los perfiles de liberación del
fármaco en base a la composición de la matriz polimérica, el peso
molecular del polímero y la adición de otros excipientes a las
partículas.
Además de los PLGA, se pueden utilizar otros
polímeros con propiedades similares como la biocompatibilidad y la
biodegradabilidad. Incluyen la policaprolactona, los copolimeros de
polihidroxibutirato-polihidroxivalerato, los
copolímeros de ácido poliláctico-policaprolactona,
los poliortoésteres y los polianhídridos.
En una realización preferente, las microesferas
de la composición farmacéutica tienen un diámetro que se encuentra
en el intervalo entre 1 y 100 \mum y el EGF constituye el
1,6-2,4% de la masa total de las microesferas.
En otra realización preferente, se libera el EGF
encapsulado en las microesferas, después del primer día de su
infiltración, en cantidades entre 5 y 10 µg por día y conservan sus
propiedades físico-químicas y biológicas durante 14
días. Otro aspecto de la presente invención hace referencia al
tratamiento de lesiones isquémicas de un paciente diabético, por
medio de la administración por medio de la infiltración local, en
el tejido local que incluye los bordes y la parte inferior de la
lesión, de la composición farmacéutica mencionada anteriormente.
La microencapsulación de fármacos proteínicos
requiere una atención especial en relación con la actividad de
estas biomoléculas después del procedimiento de microencapsulación.
Esto es debido al hecho de que las proteínas son, en su mayoría,
sensibles a temperaturas elevadas que se generan con frecuencia en
los procedimientos de encapsulación y al disolvente orgánico
utilizado para disolver los polímeros. Por otra parte, cada
proteína exhibe su propio comportamiento en los procedimientos de
microencapsulación. Considerando estos aspectos, el establecimiento
de una metodología para la preparación de microesferas cargadas con
proteínas con su actividad biológica inalterada, requiere un estudio
exhaustivo para seleccionar el procedimiento, el polímero, el
disolvente, los aditivos, etc. apropiados.
Como el agente activo, la composición
farmacéutica puede contener EGF obtenido de fuentes naturales, por
medio de síntesis química o por medio de tecnología del ADN
recombinante.
La composición farmacéutica también puede
contener, como parte del vehículo, algunos fármacos adicionales de
los siguientes grupos: antimicrobianos (penicilinas,
cefalosporinas, quinolona, metronidazol, clindamicina, vancomicina,
macrólidos, tetraciclinas, aztreonam y imipenem), anestésicos,
analgésicos del grupo de antiinflamatorios no esteroidales,
fármacos con una acción angiogénica (factor de crecimiento
endotelial vascular, factor de crecimiento de los fibroblastos),
otros factores de crecimiento (factor de estimulación de colonias de
granulocitos) o eritropoyetina.
La patología tratada con la composición
farmacéutica objeto de la presente invención es la herida
ulcerativa isquémica crónica cutánea de las extremidades
inferiores. Dependiendo tanto de: las condiciones de la lesión y las
características del paciente que va a ser tratado, las microesferas
incluidas en la composición farmacéutica podrían requerir la
encapsulación conjunta de otra molécula. Estos agentes terapéuticos
adicionales pertenecen al grupo de antimicrobianos, anestésicos,
analgésicos del grupo de los fármacos antiinflamatorios no
esteroidales, fármacos con una acción angiogénica, y otros factores
de crecimiento.
La composición farmacéutica, antes de su
administración a los pacientes, debería estar suspendida en un
vehículo apropiado, que puede ser bien una disolución salina que
contiene potenciadores de la viscosidad como la
carboximetilcelulosa, la hidroxipropilmetilcelulosa y detergentes
como los polisorbatos o un hidrogel termosensible de tipo
PEG-PLGA-PEG o bien un derivado de
quitosán o dextrano.
La composición farmacéutica objeto de la
presente invención permitió reducir la frecuencia de administración
durante el tratamiento y aumentó de manera imprevista el beneficio
terapéutico al reducir el tiempo total del tratamiento, dado que la
curación de las lesiones fue más rápida que el de lesiones tratadas
con cantidades equivalentes de EGF no encapsulado. No se esperaba
el efecto terapéutico mejorado de nuestra formulación, porque el
perfil de liberación lenta conseguido produce bajas concentraciones
de EGF. También de manera imprevista, otra formulación en la que se
utilizaron algunos excipientes para acelerar la liberación de EGF y
obtener de esta manera mayores concentraciones del fármaco no
tuvieron los efectos terapéuticos de la formulación de la presente
invención.
Figura 1. Esquema que representa la ubicación de
las úlceras inducidas en el modelo animal.
Figura 2. Diagrama del procedimiento para
obtener las microesferas cargadas con EGF por el procedimiento de
doble emulsión - evaporación de disolvente.
Figura 3. Micrografía electrónica de reflejo del
haz sobre el espécimen de una microesfera cargada con EGF.
Figura 4. Perfil de liberación de EGF de
microesferas de PLGA. El eje X muestra el tiempo en días y el eje Y
representa la cantidad de EGF liberada que se expresa como un
porcentaje del total de EGF contenido en las microesferas que se
utilizó en el experimento, (\blacklozenge) formulación de
liberación rápida y (\medbullet) formulación de liberación
lenta.
Figura 5. Cromatografía líquida de alta presión
con fase inversa de EGF digerido con tripsina bajo distintas
condiciones. A: Control, B: EGF libre, C: EGF encapsulado en
microesferas de PLGA, D: EGF mezclado con microesferas vacías de
PLGA.
Para presentar una descripción más completa de
la invención, se describen los siguientes ejemplos:
Se preparó una disolución polimérica (10% (p/v)
de PLGA 50:50 (Sigma, St. Louis, Misuri, EE. UU.) al disolver 1 g
del polímero en diclorometano (DCM). Se depositó un mililitro de la
disolución de PLGA en un recipiente de vidrio y se añadieron 200
\mul de una disolución acuosa de EGF a 20 mg/ml. Esta mezcla fue
sometida a ultrasonidos durante 30 segundos por medio de una sonda
ultrasónica (IKASONIC U 200 S control (IKA Labortechnik, Alemania).
Se añadió la primera emulsión a 40 ml de alcohol de polivinilo al
1% y se obtuvo la segunda emulsión por medio de una agitación
enérgica de las fases a 14.000 rpm utilizando un T8 Ultraturrax
(IKA Labortechnik, Alemania). Se añadió la doble emulsión a 140 ml
de alcohol de polivinilo al 1% 30.000-70.000
(Sigma, St. Louis, Misuri, EE. UU.) y se agitó en un homogeneizador
(IKA Labortechnik, Alemania) a 300 rpm durante 1 h para evaporar el
diclorometano. Finalmente, se recogieron las microesferas mediante
filtración, se lavaron 5 veces con 50 ml de agua destilada y se
secaron mediante secado por congelación en un liofilizador
(Edwards, Reino Unido). Se almacenaron las microesferas secadas a
4ºC hasta que fueron usadas (Figura 2).
Se obtuvieron las microesferas de EFG con
excipientes siguiendo el mismo procedimiento pero con la adición de
Pluronic F-127 (10 mg) y de NaCl (0,5 mg) en la
fase acuosa interna.
Se calculó la eficacia del procedimiento de
microencapsulación y de la carga proteínica de las partículas, por
medio de la determinación de la concentración de EGF mediante el
ensayo de microBCA, en la disolución resultante de la digestión de
las partículas con 1 N de NaOH que fueron neutralizadas con 1 N de
HCl antes de la determinación.
Se obtuvieron micropartículas de forma esférica
como resultado del procedimiento de microencapsulación. Exhibieron
una superficie y unos poros regulares (Figura 3). Se obtuvieron
estas microesferas con un rendimiento de aproximadamente el 85%.
Fue posible incorporar, en las microesferas, entre el
40-60% de la masa total de proteína introducida en
el procedimiento de encapsulación. Las partículas exhibieron una
carga proteínica entre el 1,6 y el 2,4%. El tamaño de las
microesferas era menor de 25 \mum.
La inclusión de excipientes no varió, de forma
significativa, las características de las microesferas que
contenían EGF.
Se suspendieron cincuenta mg de microesferas
cargadas con EGF en 1 mililitro de fluido receptor (0,001% de Tween
80 y 0,1% de azida sódica, en PBS con un pH de 7,2). Se incubó la
suspensión a 37°C bajo agitación suave. A intervalos especificados
de tiempo (0,25 (6 h), 0,5 (12 h), 1, 3, 7 y 14 días), se
centrifugaron muestras durante 5 min a 5000 rpm en una
centrifugadora de mesa Hettich (Tuttlingen, Alemania), se recogió
el sobrenadante y se añadió un volumen idéntico de fluido receptor
fresco. Se evaluó la concentración de EGF en cada muestra extraída
con el ensayo de rnicroBCA.
El perfil de liberación de EGF encapsulado en
las microesferas de PLGA exhibió una liberación explosiva, que se
produjo durante el primer día y otra etapa en la que la liberación
de EGF se produjo continuamente durante los siguientes 14 días.
Durante toda la primera etapa se liberó aproximadamente el 20% del
total de proteína encapsulada en ambas preparaciones, mientras que
en el resto del periodo de evaluación los perfiles de liberación
fueron distintos: la liberación de EGF de las microesferas con
excipientes alcanzó casi el 65% (con una tasa aproximada de 28
\mug por día) y se liberó hasta el 30% de las partículas sin
excipientes (con una tasa aproximada de 7 \mug por día) (Figura
4).
Este experimento tiene el objetivo de demostrar
que el EGF encapsulado conserva sus propiedades
físico-químicas y biológicas. Se evaluaron las
propiedades del EGF, liberado durante el periodo de incubación (14
días).
El EGF liberado durante el primer día, hasta los
días 7 y 14 se caracterizó por medio de varias técnicas analíticas:
cromatografía líquida de alta presión con fase inversa
(RP-HPLC), electroforesis en gel de poliacrilamida
con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE),
inmunoanálisis por absorción ligada al complejo
enzima-sustrato (ELISA) y bioensayos de la
actividad antiviral in vitro. Los resultados se muestran en
la tabla 2.
Estos resultados permiten afirmar que el EGF
liberado tiene características físico-químicas y
biológicas similares al EGF utilizado para obtener las
microesferas.
Se preparó un mg de EGF de manera independiente
en tres condiciones distintas: (i) disuelto en 1 ml de
hidrogenocarbonato de sodio (NaHCO_{3}) al 4%, (ii) encapsulado
en microesferas de PLGA (2% en peso) y suspendido en 1 ml de
NaHCO_{3} al 4% y (iii) mezclado con 50 mg de microesferas vacías
de PLGA y suspendido en 1 ml de NaHCO_{3} al 4%. Después de eso,
se añadieron 100 \mul de 200 \mug/ml de tripsina en NaHCO_{3}
al 4% a cada preparación y fueron incubados a 37ºC durante 4 horas
con una agitación suave. Se utilizó como control un mg de EGF
disuelto en 1,1 ml de NaHCO_{3} al 4%. Se paró la reacción al
añadir 10 \mul de ácido trifluoracético. Se centrifugaron
muestras que contenían microesferas durante 10 minutos a 6000 g y
se separó el sobrenadante de los gránulos. Se separó el EGF
microencapsulado o adsorbido en las microesferas del polímero
mediante una extracción con diclorometanolácido acético (Ruiz J.M.,
et al (1989) Microencapsulation peptide: a study of the
phase separation of Poly (D,L-lactic
acid-co-glycolic acid) copolymers
50/50 by silicone oil. J. Pham. Sci. 49: 69-77). Se
analizaron todas las muestras mediante RP-HPLC
después del procedimiento descrito por Han et al. (Han K.,
et al. (1998) Site-specific degradation and
transport of recombinant human epidermal growth factor (rhEGF) in
the rat gastrointestinal mucosa. Int. J. Pharm. 168:
189-197). Los resultados (Figura 5) muestran que
tanto el EGF no encapsulado como el EGF mezclado con microesferas
vacías estaban completamente degradados. Sin embargo, el EGF
encapsulado estaba protegido contra la proteólisis y su perfil
cromatográfico era similar al del control.
\vskip1.000000\baselineskip
El experimento descrito en el presente documento
con el objetivo de evaluar el efecto de curación, en lesiones
agudas de prognosis satisfactoria, de la nueva formulación
farmacéutica con microesferas de EGF que se va a utilizar para la
infiltración o de manera parenteral, por medio de inyecciones en los
bordes y en la parte inferior de la herida.
Biomodelo experimental: Ratas Wistar
machos con un peso corporal de 225-250 gramos. Se
mantuvieron a los animales en áreas controladas de las
instalaciones para los animales en CIGB bajo un horario constante de
iluminación de 12 \times 12 horas, ciclos de cambio de aire, y un
acceso libre a la dieta. Las ratas estaban alojadas individualmente
en cajas T3 con una sustitución del sustrato (esterilizado
previamente) cada 48 horas.
Inducción de úlceras: Se anestesiaron los
animales mediante inyección intraperitoneal de quetamina/xilacina.
Se depiló mecánica y químicamente el dorso de las ratas
comprendiendo el área desde el espacio retroescapular hasta el
sacro. Se aseptizó esta región con una disolución de povidona yodada
y alcohol de isopropilo. Se marcó el área sobre la piel
seleccionada para la inducción de las úlceras con tinta china para
crear lesiones circulares de anchura total con la ayuda de biotomos
de 9 mm (AcuDrem, Florida, EE. UU.).
Como se indica en la Figura 1, se indujeron seis
lesiones simétricas y equidistantes en cada animal. Se lavaron las
lesiones con una solución salina estéril y se delineó su borde
interno con tinta permanente para un cálculo posterior del área de
la lesión en el tiempo cero. Se higienizó a diario las lesiones de
todos los animales con etanol al 70% y solución salina estéril antes
de la aplicación de cualquier tratamiento.
Las úlceras creadas en los animales fueron
asignadas de manera aleatoria a los siguientes grupos de
tratamiento experimental utilizando una tabla con una
correspondencia cruzada de orden de entrada/grupo:
Grupo I- sin tratamiento. Es un control para la
evolución espontánea.
Grupo II- placebo (vehículo utilizado para
suspender las microesferas: 0,3% de carboximetilcelulosa, 0,1% de
Tween 20 y 0,9% de cloruro sódico que es infiltrado
localmente).
Grupo III- infiltración de microesferas (sin
excipientes) que contienen 675 microgramos de EGF, que estaban
suspendidos en 1 ml del vehículo designado para esta formulación.
Se llevaron a cabo infiltraciones en los bordes y en la parte
inferior de las heridas.
Grupo IV- infiltración de microesferas (con
excipientes) que contienen 675 microgramos de EGF, que estaban
suspendidos en 1 ml del vehículo designado para esta formulación.
Se llevaron a cabo las infiltraciones en los bordes y en la parte
inferior de las heridas.
Grupo V- EFG libre (75 mg/ml) en solución salina
al 0,9%.
Cada grupo consistía en 10 ratas; por lo tanto,
se estudiaron 60 heridas por grupo. Se llevaron a cabo los
tratamientos a diario, en animales tratados con las formulaciones
sin microesferas, insertando la aguja (271/2) en los bordes y en la
parte inferior de las lesiones. Antes de cada tratamiento los
animales eran sedados con diazepam por vía intraperitoneal. Los
animales tratados con un vehículo y formulaciones que contenían
microesferas cargadas con EGF solo eran infiltrados una vez.
Se trazaron las lesiones en hojas transparentes
para calcular la cinética de la contracción de las heridas a lo
largo de los siguientes tiempos: Tiempo 0- representa el 100% de
área abierta de la lesión y 0% de contracción de la herida, Tiempo
1-72 horas después de la inducción de las lesiones,
Tiempo 2- cinco días después de la inducción de las lesiones,
Tiempo 3- siete días después de la inducción de las lesiones,
Tiempo 4- nueve días después de la inducción de las lesiones. Se
estableció el noveno día como el final de este estudio, en el que se
sacrificaron los animales, conforme a experiencias previas en la
cinética de la curación espontánea de estas lesiones. Se
digitalizaron las imágenes con los bordes de las lesiones. Se
calcularon el área de las lesiones y el porcentaje de contracción
utilizando el software de análisis de imágenes DIGIPAT. Se
llevó a cabo un análisis estadístico de cada parámetro con el
paquete SPSS utilizando la prueba no paramétrica U de Mann Whitney,
se dio por sentado un nivel de significación de p < 0,05.
Los animales fueron sacrificados mediante
inyección intraperitoneal con una sobredosis de pentobarbital
sódico (250 mg/kg). Se secaron las lesiones del panículo carnoso y
se fijadas en formalina neutral al 10% para una inclusión posterior
en parafina. Se utilizaron hematoxilina/eosina, colorantes
tricrómicos de van Giesson y Masson. Se determinó para cada grupo,
el número de animales con un 100% de epitelización de la lesión, y
con una epidermis estratificada y diferenciada.
En la Tabla 3 se muestran los valores para la
cinética de la contracción de la herida (valores de contracción en
mm se expresan en términos de cambio porcentual del tamaño de la
herida con respecto al tamaño de la herida en el Tiempo 0).
De manera imprevista, la formulación que
contiene microesferas de EGF con un perfil de liberación más lenta
(sin excipientes encapsulados conjuntamente), ejerció el efecto más
potente de contracción de los bordes de las heridas, que, en otras
palabras, significa que ejerce el efecto más favorable en la
aceleración de la curación total. La contracción representa la
convergencia de varios eventos consolidados que aproximan la herida
a la fase de remodelamiento:
En la Tabla 4 se muestra el porcentaje del área
ocupado por tejido maduro y de granulación ordenada de las úlceras
en cada grupo experimental. Los cálculos se llevaron a cabo en las
muestras recogidas en el Tiempo 4 cuantificando el número de campos
microscópicos positivos coincidentemente con las reacciones
tricrómicas de van Giesson y Masson en cada muestra. Dos
anatomopatólogos realizaron las evaluaciones de manera
independiente y de forma ciega.
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\vskip1.000000\baselineskip
De manera imprevista, la formulación basada en
microesferas de EGF con un perfil de liberación más lenta (sin
excipientes encapsulados conjuntamente) ejerció el efecto más
potente en el proceso de establecimiento y de maduración del tejido
de granulación, lo que se corresponde con la anterior descripción
mencionada para el proceso de la contracción de las heridas.
También se estudió el efecto de los tratamientos
en relación con el proceso de epitelialización de las lesiones. Se
evaluó el aspecto microscópico del epitelio considerando la
reepitelialización de la úlcera, la presencia de epitelio
estratificado, y la existencia de una capa de queratina total. Para
el estudio microscópico, se practicó una hemisección longitudinal
central en las lesiones y se incluyeron las piezas resultantes en
el mismo bloque de parafina. Se estudiaron un total de 120 cortes
histológicos por grupo experimental, que representan 60 lesiones.
Los resultados se muestran en la Tabla 5.
El Grupo III, tratado con la formulación basada
en microesferas de EGF de perfil de liberación lenta (sin
excipientes encapsulados conjuntamente), mostró de manera
sorprendente los mejores indicadores de respuesta epitelial, apoyado
por la reepitelialización total y la madurez del epitelio.
Se llevó a cabo el siguiente experimento a la
evaluación del efecto de curación, en lesiones crónicas de mala
prognosis que simulan lesiones en pacientes diabéticos, de la nueva
formulación farmacológica basada en microesferas que contienen EGF,
para ser utilizadas para su infiltración.
Biomodelo experimental: Ratas Wistar
machos con un peso corporal de 225-250 gramos. Se
mantuvieron a los animales en áreas controladas de las
instalaciones para los animales en CIGB bajo un horario constante de
iluminación de 12 \times 12 horas, ciclos de cambio de aire, y un
acceso libre a la dieta. Las ratas estaban alojadas individualmente
en cajas T3 con una sustitución del sustrato (esterilizado
previamente) cada 48 horas. Los animales habían sido tratados
previamente durante dos meses con una disolución de metilglioxal al
0,01% para crear un entorno de glicosilación similar al que existe
en un paciente diabético de evolución de larga duración. Entre
otros daños orgánicos, esto lleva a una ralentización de la
granulación y remodelamiento de heridas (Berlanga J., Cibrian D.,
et al. (2005) Methylglyoxal administration induces
diabetes-like microvascular changes and perturbs
the healing process of cutaneous wounds. Clin Sci (Lond).
109(1): 83-95).
Inducción de úlceras: Se anestesiaron los
animales mediante inyección intraperitoneal de quetamina/xilacina.
Se depiló mecánica y químicamente el dorso de las ratas
comprendiendo el área desde el espacio retroescapular hasta el
sacro. Se aseptizó esta región con una disolución de povidona yodada
y alcohol de isopropilo. Se marcó el área sobre la piel
seleccionada para la inducción de las úlceras con tinta china para
crear lesiones circulares de anchura total con la ayuda de biotomos
de 9 mm (AcuDrem, Florida, EE. UU.). Se indujeron seis lesiones
simétricas y equidistantes en cada animal. Se lavaron las lesiones
con una solución salina estéril y se delinearon sus bordes
interiores con tinta permanente para un cálculo posterior del área
de la herida en el tiempo cero. Las lesiones de todos los animales
fueron higienizados diariamente con etanol al 70% y una solución
salina estéril antes de la aplicación de cualquier tratamiento.
Las úlceras creadas en los animales fueron
asignadas de manera aleatoria a los siguientes grupos de tratamiento
experimental utilizando una tabla de correspondencia cruzada de
orden de entrada/grupo:
Grupo I- sin tratamiento. Es un control para la
evolución espontánea.
Grupo II- placebo (vehículo utilizado para
suspender las microesferas: 0,3% de carboximetilcelulosa, 0,1% de
Tween 20 y 0,9% de cloruro sódico que es infiltrado
localmente).
Grupo III- infiltración de microesferas (sin
excipientes) que contienen 1 mg de EGF, que estaba suspendido en 1
ml del vehículo designado para esta formulación. Se llevaron a cabo
infiltraciones en los bordes y en la parte inferior de las
heridas.
Grupo IV- infiltración de microesferas (con
excipientes) que contienen 1 mg de EGF, que estaba suspendido en 1
ml del vehículo designado para esta formulación. Se llevaron a cabo
las infiltraciones en los bordes y en la parte inferior de las
heridas.
Grupo V- EFG libre (75 mg/ml) en solución salina
al 0,9%.
Cada grupo consistía en 10 ratas; por lo tanto,
se estudiaron 60 heridas por grupo. Se llevaron a cabo los
tratamientos a diario, en animales tratados con las formulaciones
sin microesferas. Antes de cada tratamiento los animales eran
sedados con diazepam por vía intraperitoneal. Los animales tratados
con un vehículo y formulaciones que contenían microesferas cargadas
con EGF solo eran infiltrados una vez.
Se trazaron las lesiones en hojas transparentes
para calcular la cinética de la contracción de las heridas a lo
largo de los siguientes tiempos: Tiempo 0- representa el 100% de
área abierta de la lesión y 0% de contracción de la herida, Tiempo
1-72 horas después de la inducción de las lesiones,
Tiempo 2- cinco días después de la inducción de las lesiones,
Tiempo 3- siete días después de la inducción de las lesiones,
Tiempo 4- nueve días después de la inducción de las lesiones y
Tiempo 5- catorce días después de la inducción de las lesiones. Se
estableció el decimocuarto día como el final de este estudio, en el
que se sacrificaron los animales, conforme a experiencias previas
en la cinética de la curación espontánea de estas lesiones. Se
digitalizaron las imágenes con los bordes de las lesiones. Se
calcularon el área de las lesiones y el porcentaje de contracción
utilizando el software de análisis de imágenes DIGIPAT. Se
llevó a cabo un análisis estadístico de cada parámetro con el
paquete SPSS utilizando la prueba no paramétrica U de Mann Whitney,
se dio por sentado un nivel de significación de p < 0,05.
Los animales fueron sacrificados mediante
inyección intraperitoneal con una sobredosis de pentobarbital
sódico (250 mg/kg). Se secaron las lesiones del panículo carnoso y
se fijaron en formalina neutral al 10% para una inclusión posterior
en parafina. Se utilizaron hematoxilina/eosina, colorantes
tricrómicos de van Giesson y Massons. Se determinó para cada grupo,
el número de animales con un 100% de epitelización de la lesión, y
con una epidermis estratificada y diferenciada.
Los valores para la cinética de la contracción
de la herida se muestran en la Tabla 6.
\vskip1.000000\baselineskip
Los valores de contracción en mm se expresan en
términos de cambio porcentual del tamaño de la herida con respecto
al tamaño de la herida en el Tiempo 0.
De forma imprevista, la formulación que contiene
microesferas de FCE con un perfil de liberación más lenta (sin
excipientes encapsulados conjuntamente), ejerce el efecto más
potente de contracción de los bordees de las heridas, que, en otras
palabras, significa que ejerce el efecto más favorable en la
aceleración de la curación completa. La contracción representa la
convergencia de varios eventos consolidados que aproximan la herida
a la fase de remodelamiento. Es extraordinario que estas heridas
simulen el microentorno bioquímico de la herida diabética en la que
el mecanismo de contracción está abolido patológicamente de forma
parcial o total. En la Tabla 7 se muestra el porcentaje del área
ocupado por tejido maduro y de granulación organizada de las
úlceras crónicas en cada grupo experimental. Los cálculos se
llevaron a cabo en las muestras recogidas en el Tiempo 5
cuantificando el número de campos microscópicos positivos
coincidentemente con las reacciones tricrómicas de van Giesson y
Masson en cada muestra. Varios anatomopatólogos y un especialista
realizaron las evaluaciones de manera independiente y de forma
ciega.
\vskip1.000000\baselineskip
De manera imprevista, las formulaciones basadas
en microesferas de EGF con un perfil de liberación más lenta (sin
excipientes encapsulados conjuntamente) ejercieron el efecto más
potente sobre el proceso de establecimiento y de maduración del
tejido de granulación, lo que se corresponde con la anterior
descripción mencionada para el proceso de la contracción de las
heridas.
También se estudió el efecto de los tratamientos
en relación con el proceso de epitelialización de las lesiones. Se
evaluó el aspecto microscópico del epitelio considerando la
reepitelialización de la úlcera crónica, la presencia de epitelio
estratificado, y la existencia de una capa de queratina. Para el
estudio microscópico se practicó un hemisección longitudinal
central en las lesiones y se incluyeron las piezas resultantes en
el mismo bloque de parafina. Se estudiaron un total de 120 cortes
histológicos por grupo experimental, lo que representa 60 lesiones.
No se eliminó ninguna lesión por contaminación bacteriana. Los
resultados se muestran en la Tabla 8.
\vskip1.000000\baselineskip
El Grupo III, tratado con la formulación basada
en microesferas de EGF que tienen un perfil lento (sin excipientes)
mostró de manera sorprendente los mejores indicadores de respuesta
epitelial, apoyado por la reepitelialización total y la madurez del
epitelio.
\vskip1.000000\baselineskip
Se administró la formulación basada en
microesferas de EFG de perfil lento (sin excipientes) a pacientes
con úlceras de pie diabético y con riesgo de una amputación
importante. Se trató a una paciente diabética de 58 años con una
úlcera crónica en el pie derecho, de un área de 30,5 cm^{2} y se
trataron las evidencias de isquemia del miembro afectado con la
formulación objeto de la presente invención. Después del
desbridamiento de la lesión, se administró la formulación de
microesferas de EGF con un perfil de liberación más lenta, una vez
cada 15 días durante un mes por medio de la infiltración de los
bordes y de la parte inferior de la herida. Fue observada la rápida
formación de tejido de granulación útil desde la primera semana
después del inicio del tratamiento, llegando a cubrir el 100% del
área afectada en la tercera semana. La paciente mostró una
evolución satisfactoria con un cierre completo de la lesión y
evitando la necesidad de indicar la amputación. La composición
farmacéutica se toleró bien y no se detectaron efectos
adversos.
La administración perilesional e intralesional
de esta formulación favoreció la formación de tejido de granulación
y el cierre de la herida, lo que promovió de manera imprevista que
el proceso de curación de la úlcera ocurriese en un intervalo más
corto de tiempo con respecto a tratamientos anteriores y se evitó la
necesidad de la amputación. Esta modalidad de tratamiento resultó
tener una mejor tolerancia gracias a la reducción sustancial de las
inyecciones.
Claims (9)
1. Una composición farmacéutica que contiene
microesferas de factor de crecimiento epidérmico para su uso en el
tratamiento de úlceras de pie diabético o de heridas isquémicas
crónicas cutáneas de las extremidades inferiores de pacientes
diabéticos y para evitar la amputación de dichas extremidades
inferiores, en la que dicha composición se administra por vía
parenteral.
2. La composición farmacéutica de la
reivindicación 1, en la que el factor de crecimiento epidérmico
está encapsulado en microesferas o nanoesferas poliméricas.
3. La composición farmacéutica de la
reivindicación 2, en la que las microesferas están fabricadas de un
material polimérico seleccionado del grupo que consiste en
homopolímeros de ácido glicólico o láctico y los copolímeros (poli
(lacturo-co-glicoluro) derivados de
ambos, policaprolactona, copolímeros de
polihidroxibutirato-polihidroxivalerato,
copolímeros de ácido poliláctico-policaprolactona,
poliortoésteres y polianhídridos.
4. La composición farmacéutica de la
reivindicación 2, en la que dichas microesferas tienen un diámetro
en el intervalo desde 1 \mum hasta 100 \mum.
5. La composición farmacéutica de la
reivindicación 2, en la que el factor de crecimiento epidérmico
constituye el 1,6-2,4% de la masa total de las
microesferas.
6. La composición farmacéutica de la
reivindicación 1, en la que la tasa de liberación del factor de
crecimiento epidérmico, después del primer día, es de entre 5 y 10
\mug/día.
7. La composición farmacéutica de la
reivindicación 1, en la que el factor de crecimiento epidérmico
liberado durante 14 días conserva sus propiedades
físico-químicas y biológicas.
8. La composición farmacéutica conforme a
cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la
composición se administra por medio de la infiltración local en el
tejido que incluye los bordes y la parte inferior de las
lesiones.
9. La composición farmacéutica conforme a las
reivindicaciones 1 a 7, en la que las microesferas están
suspendidas en un hidrogel termosensible del tipo
PEG-PLGA-PEG o un derivado de
quitosán o dextrano.
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|---|---|---|---|
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| WO (1) | WO2007087759A2 (es) |
| ZA (1) | ZA200806648B (es) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018104874A1 (es) * | 2016-12-09 | 2018-06-14 | Desarrolladora Y Comercializadora De Tecnologías Biomédicas Decotecbio S.A.S. De C.V. | Composición coadyuvante de un factor de crecimiento y un neuropéptido para acelerar la cicatrización de heridas y la repitelización de órganos |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU23411B6 (es) * | 2005-12-29 | 2009-09-08 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Uso tópico del factor de crecimiento epidérmico en liposomas para prevenir la amputación del pie diabético |
| RU2351334C1 (ru) * | 2007-12-04 | 2009-04-10 | Георгий Кимович Золоев | Способ лечения хронической ишемии нижних конечностей ii б - iv степени |
| ES2340902B1 (es) | 2008-07-01 | 2011-05-03 | Laboratorios Farmaceuticos Rovi, S.A. | Composicion farmaceutica con glicosaminoglicanos y su uso en tratamiento de ulceras cronicas. |
| GB0814302D0 (en) | 2008-08-05 | 2008-10-01 | Coretherapix Slu | Compounds and methods |
| KR101156094B1 (ko) * | 2010-02-22 | 2012-06-20 | 경상대학교산학협력단 | 약물송달을 위한 양친성 ＰＨＡ－ｍＰＥＧ 공중합 나노 컨테이너 |
| RU2421221C1 (ru) * | 2010-03-22 | 2011-06-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ лечения критической ишемии нижних конечностей различного генеза |
| RU2425675C1 (ru) * | 2010-05-25 | 2011-08-10 | Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Способ лечения больных с нейропатической и нейроишемической формами синдрома "диабетическая стопа" |
| ES2357601B1 (es) | 2011-01-26 | 2012-03-21 | Laboratorios Farmacéuticos Rovi, S.A. | Procedimiento de preparación de derivados de glicosaminoglicanos donadores de óxido n�?trico y su uso en tratamiento de úlceras crónicas. |
| EP2737895A1 (en) | 2012-11-30 | 2014-06-04 | Praxis Pharmaceutical, S.A. | Microparticles with EGF, method of preparation and use |
| EP2821077A1 (en) | 2013-07-04 | 2015-01-07 | Praxis Biopharma Research Institute | Lipid nanoparticles for wound healing |
| EP3097922A1 (fr) | 2015-05-28 | 2016-11-30 | Denis Barritault | Composition pour le traitement des lesions tissulaires |
| CN106267163A (zh) * | 2015-06-09 | 2017-01-04 | 济南博创医药科技有限公司 | 一种治疗皮肤创伤的药物组合物及其药物制剂 |
| KR102218427B1 (ko) * | 2017-09-20 | 2021-02-22 | 차의과학대학교 산학협력단 | 단백질 약물을 포함하는 코아세르베이트 조성물 및 이를 포함하는 창상 치료제 |
| CU20190022A7 (es) * | 2019-03-18 | 2020-10-20 | Centro De Ingenieria Genetica Y Biotecnologia Biocubafarma | Composición farmacéutica para el tratamiento de la úlcera del pie diabético |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE52535B1 (en) | 1981-02-16 | 1987-12-09 | Ici Plc | Continuous release pharmaceutical compositions |
| JPS60100516A (ja) | 1983-11-04 | 1985-06-04 | Takeda Chem Ind Ltd | 徐放型マイクロカプセルの製造法 |
| NZ226171A (en) | 1987-09-18 | 1990-06-26 | Ethicon Inc | Gel formulation containing polypeptide growth factor |
| JP2670680B2 (ja) * | 1988-02-24 | 1997-10-29 | 株式会社ビーエムジー | 生理活性物質含有ポリ乳酸系微小球およびその製造法 |
| US5034375A (en) | 1988-08-10 | 1991-07-23 | Institute Of Molecular Biology, Inc. | Process of wound healing using PDGF and EGF |
| US4944948A (en) | 1989-02-24 | 1990-07-31 | Liposome Technology, Inc. | EGF/Liposome gel composition and method |
| JPH04505319A (ja) | 1989-04-04 | 1992-09-17 | アルコン ラボラトリーズ インコーポレイテッド | 創傷、切傷および擦傷に対する治療剤のデリバリーとしてのリポソームの使用 |
| US5130298A (en) | 1989-05-16 | 1992-07-14 | Ethicon, Inc. | Stabilized compositions containing epidermal growth factor |
| CA2038945A1 (en) | 1989-08-01 | 1991-02-02 | Norman D. Weiner | Topical delivery of peptides/proteins entrapped in dehydration/rehydration liposomes |
| AU629316B2 (en) * | 1990-04-11 | 1992-10-01 | Flora Inc. | Periodontal disease treatment system |
| US6902743B1 (en) * | 1995-05-22 | 2005-06-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Therapeutic treatment and prevention of infections with a bioactive material(s) encapuslated within a biodegradable-bio-compatable polymeric matrix |
| US6132759A (en) * | 1996-05-03 | 2000-10-17 | Innogenetics N.V. | Medicaments containing gelatin cross-linked with oxidized polysaccharides |
| EP0910348B1 (en) * | 1996-05-23 | 2003-04-02 | Samyang Corporation | Locally administrable, biodegradable and sustained-release pharmaceutical composition for periodontitis and process for preparation thereof |
| US6515016B2 (en) * | 1996-12-02 | 2003-02-04 | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | Composition and methods of paclitaxel for treating psoriasis |
| US5861149A (en) * | 1997-06-04 | 1999-01-19 | Polyheal Ltd. | Methods for wound treatment |
| AU2000202A (en) * | 2000-10-31 | 2002-05-15 | Pr Pharmaceuticals Inc | Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules |
| CU23043A1 (es) | 2001-12-20 | 2005-05-20 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Composicion farmaceutica que contiene factor de crecimiento epidrmico (egf) para la prevencion de la amputacion de pie diabetico. |
| US7517528B2 (en) | 2002-03-12 | 2009-04-14 | Bio-Click Technologies, Ltd. | Method and composition for treating skin wounds with epidermal growth factor |
| CN1720989A (zh) * | 2004-07-15 | 2006-01-18 | 深圳市清华源兴生物医药科技有限公司 | 一种表皮生长因子缓释微球及其制备方法与应用 |
| CU23411B6 (es) | 2005-12-29 | 2009-09-08 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Uso tópico del factor de crecimiento epidérmico en liposomas para prevenir la amputación del pie diabético |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018104874A1 (es) * | 2016-12-09 | 2018-06-14 | Desarrolladora Y Comercializadora De Tecnologías Biomédicas Decotecbio S.A.S. De C.V. | Composición coadyuvante de un factor de crecimiento y un neuropéptido para acelerar la cicatrización de heridas y la repitelización de órganos |
Also Published As
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