ES2331264T3 - Metodo para la sintesis de las sales de sodio de derivados retinoilo. - Google Patents

Abstract

Un método para la síntesis de la sal de sodio de un compuesto seleccionado entre los siguientes (I-VI): **(Ver fórmula)** que comprende las siguientes etapas consecutivas: - acilar directamente los grupos amino de ácido L-cisteico, ácido L-homocisteico, y ácido L-cisteinosulfínico se desarrolla utilizando un anhídrido de ácido carboxílico-carbónico mezclado en medio orgánico de agua en la presencia de Na2CO3 - separar contaminantes insolubles - separar las sales de sodio

Description

Método para la síntesis de las sales de sodio de derivados retinoilo.

Esta invención se relaciona con la síntesis de compuestos novedosos que tienen propiedades terapéuticas en sí mismos, y son capaces de potenciar la eficacia de otros compuestos terapéuticamente activos, por ejemplo compuestos citotóxicos utilizados en el tratamiento del cáncer. Los compuestos novedosos han mostrado que poseen una propiedad que inhibe el crecimiento celular, y en adición a esto, también incrementan la actividad farmacológica de una formulación paclitaxel convencional y pueden hacer posible fabricar una nueva formulación de paclitaxel, que exhibe solubilidad mejorada y eficacia terapéutica.

Antecedente de la invención

Aunque el término "quimioterapia" tiene originalmente un significado muy amplio, que abarca el tratamiento de varias enfermedades con agentes químicos, actualmente tienen un significado más específico. En el idioma moderno, el término "quimioterapia" se refiere usualmente al uso de agentes químicos para destruir las células de cáncer. Entre los agentes químicos actualmente utilizados como fármacos antineoplásicos, la mayor parte de la función al deteriorar la capacidad de replicación de las células cancerígenas al interferir con actividades de ADN y ARN se asocia con la división celular.

Los actuales inventores han hecho compuestos novedosos disponibles, que comprenden solo los residuos de sustancias de ocurrencia natural. Estos compuestos, numerados I a VI, tienen baja toxicidad. Se lleva a cabo un estudio de toxicidad de dosis única i.p. en ratas de acuerdo con los principios OECD de las Buenas Prácticas de Laboratorio. Se encuentra que los compuestos I-VI, en un nivel de dosis de 100 mg/kg de peso corporal no produce mortalidad. La dosis letal mínima así está por encima de 100 mg/kg de peso corporal para estos compuestos (I-VI).

Considerando la "quimioterapia" en su significado más amplio, es decir la administración de agentes químicos para la prevención, tratamiento o alivio de una afección médica, surgen múltiples problemas similares. Es importante optimizar la eficacia, por ejemplo la toma y especificidad objetivo del compuesto, su distribución en el cuerpo y su depuración, simultáneamente como minimizar los efectos colaterales posibles, riesgos al equipo médico etc. Se debe tomar en consideración también el costo de producción, facilidad de preparación, modos de administración, estabilidad durante almacenamiento etc. En particular, es deseable ser capaz de incrementar la solubilidad y biodisponibilidad de agentes farmacéuticos pobremente solubles, que incrementan su eficacia y reducen sus efectos colaterales.

Considerando la "quimioterapia" en su significado más específico, es decir el uso de agentes químicos para destruir las células de cáncer, subsiste una tarea urgente para elaborar nuevas sustancias disponibles y formulaciones, que por lo menos exhiban eficacia mejorada y menos efectos colaterales, pero preferiblemente también características mejoradas que se relacionan con solubilidad, seguridad, estabilidad etc.

En particular, es deseable hacer una nueva formulación disponible de paclitaxel, que exhibe estabilidad mejorada, eficacia mejorada y que reduce los efectos colaterales, comparado con formulaciones disponibles actualmente. Problemas adicionales y las soluciones innovadoras correspondientes será evidentes a partir de la siguiente descripción y las reivindicaciones.

Técnica antecedente

La DE 40 32 187 (Hermes Fabrik pharmazeutischer Präparate Franz Gradinger GmbH & Co., DE) describe varios compuestos N-Retinoil-L-aminomercapto y sus sales fisiológicamente aceptables. Los compuestos se sugieren para uso en el tratamiento tópico y sistémico de enfermedades de las membranas mucosas. Un estudio más cerrado de las fórmulas estructurales revela que los elementos estructurales, centrales para los compuestos (I-VI) de acuerdo con la presente invención están ausentes o son diferentes en la DE 40 32 187. Notablemente, los compuestos de la DE 40 32 187 contienen un azufre en estado de oxidación -2 y -1 respectivamente. La función fisiológica, así como también las propiedades físicas y químicas de estos compuestos que contienen azufre se determinan mediante su estado de oxidación. Tampoco existe indicación que estos compuestos podrían influenciar las propiedades de paclitaxel u otras sustancias solubles moderadas o insolubles en agua.

Kalemkerian et al., Activity of fenretinide plus chemotherapeutic agents in small-cell lung cancer cell lines, Cancer Chemother Pharmacol, (1999) 43: 145-150. Este artículo describe un retinoide sintético que es un inductor potente de apoptosis en células de cáncer, y que puede tener la capacidad de mejorar la actividad de otros agentes citotóxicos. Todos los estudios de combinación se desarrollan en un rango de concentraciones de cada agente individual y los agentes juntos en una relación fija que corresponde a la relación de los valores IC_{50} de cada agente solo como se identifica en experimentos preliminares. Los autores establecen que su estudio no hace posible decir sí los agentes experimentales interactúan en una forma mutuamente exclusiva o mutuamente no exclusiva. No se discute los hechos de solubilización y almacenamiento de paclitaxel u otros farmacéuticos insolubles en agua o solubles moderados.

Zhang et al., An investigation of the antitumour activity and biodistribution of polymeric micellar paclitaxel, Cancer Chemother Pharmacol, (1997) 40: 81-86. En este estudio, la formulación de Cremofor Paclitaxel convencional se compara con un paclitaxel micelar polimérico, administrado mediante inyección i.p. Se utiliza un copolímero dibloque amfifílico biodegradable, monometoxi poli(etilenglicol) bloque-poli (D,L-lactida) [mPEG-PDLLA].La formulación micelar muestra resultados muy prometedores. Las ventajas mencionadas sin embargo se relacionan con la liberación lenta de paclitaxel de las micelas, debido a la fuerte asociación hidrófoba entre el paclitaxel y el alto peso molecular de mPEG-PDLLA. Adicionalmente, la toxicidad y las consecuencias a largo plazo de este modo de administración de liberación lenta se necesitan estudiar adicionalmente.

La U.S. 6,054,594 describe un método de síntesis orgánica de Tiolactonil retimanoda N-homocisteína, un compuesto que tiene propiedades antineoplásicas y antiaterogénicas.

Ackland et al. presenta dos investigaciones de la síntesis de 2'-O-(N-alquilsuccinamil) eritromicina en su documento Approaches to novel water soluble prodrugs of erythromycin A., in J Chem Res Minprint, 1991, 1265-1278.

La EP 0 413 528 se relaciona con composiciones amfotéricas y formas poliméricas de ácidos alfa hidroxi.

Breve resumen de la invención

Se ha encontrado que los compuestos terapéuticamente activos se pueden disolver en micelas de un compuesto que en si mismo exhibe la actividad terapéutica deseada o una actividad favorable que interactúa con o que potencia la actividad deseada, y cuyos compuestos exhiben baja toxicidad. La presente invención se relaciona con un método para la síntesis de sales de sodio de derivados Retinoilo, que pertenecen al grupo de ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-cisteico (I), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteico (II), ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-homocisteico (III), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-homocisteico (IV), ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-cisteinosulfínico (V), y ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinosulfínico (VI), que exhiben efectos terapéuticos per se, y que en combinación con los farmacéuticos conocidos exhiben un efecto sinérgico.

Descripción de la invención

Los actuales inventores han encontrado sorprendentemente que el ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-cisteico (I), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteico (II), ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-homocisteico (III), ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-homocisteico (IV), ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-cisteinosulfínico (V), y ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinosulfínico (VI) son capaces de incrementar la solubilidad de compuestos solubles moderados, así como también de potenciar su eficacia terapéutica.

Estos compuestos novedosos, que son objeto por el mismo solicitante, son amidas de ácido todos-transretinoico o ácido 13-cis-retinoico con ácido L-cisteico (3-sulfo-L-alanina), ácido L-homocisteico, ácido L-cisteinosulfínico. Las Fórmulas estructurales de estos compuestos se presentan adelante:

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Las moléculas de estos compuestos exhiben simultáneamente una parte hidrófila y una hidrófoba en soluciones acuosas. En la forma de sales, estos compuestos son capaces de formar micelas en soluciones acuosas en concentraciones iguales a o mayores que la concentración de micela crítica (CMC).

Los actuales inventores hacen disponible una técnica para síntesis a gran escala de los compuestos (I-VI), sales farmacéuticamente útiles de los mismos, y en particular sales Na de los mismos. La síntesis de los compuestos (I-VI) de la invención involucra una acilación directa de los grupos amino de ácido L-cisteico, ácido L-homocisteico, y ácido L-cisteinosulfínico al mezclar anhídrido de ácido carbónico-carboxílico en medio orgánico de agua, que contiene Na_{2}CO_{3}. La solubilidad de las sales de sodio de los compuestos (I-VI) en mezclas de 2-propanol-agua hace posible separar contaminantes insolubles (sales inorgánicas y aminoácidos de partida). Los compuestos puros (I-VI) luego se obtienen mediante precipitación de sus soluciones concentradas en 2-propanol-agua utilizando una mezcla de metanol-2-propanol.

El método anterior de síntesis desarrollado por los inventores hace posible producir sales de sodio de los compuestos (I-VI) en buenos rendimientos. El método es simple y ahorra tiempo. Los productos finales se pueden preparar en forma pura, sin necesidad de cromatografía. Los compuestos (I-VI) en la forma de sales de sodio se pueden almacenar en una solución de 2-propanol-agua 2:1 (v/v) o etanol 2:1 (v/v) durante por lo menos seis meses a temperaturas bajas sin ningún cambio notable en sus propiedades. Con el fin de preparar las formulaciones de los compuestos inventivos (I-VI) con paclitaxel o Taxol®, las sales de sodio de estos compuestos se convierten fácilmente en sus formas acídicas, y se disuelven en metanol.

La evaluación de las pruebas de la citotoxicidad de los compuestos I a VI, en la forma de sales de sodio en el rango de concentración 10-11 M a 10-6 M, se ha desarrollado en cultivos de MDA-MB-231 células, y revelan la siguiente dependencia: un incremento de las concentraciones de los compuestos inventivos conduce a un mejoramiento de la inhibición de crecimiento celular, que alcanza un valor cercano a 50% para los compuestos I y II; un valor cercano a 35% para los compuestos III y IV; y un valor cercano a 30% para los compuestos V y VI.

Las sales de sodio de los compuestos I a VI se convierten en las formas acídicas correspondientes de los compuestos y se disuelven en metanol, con el fin de preparar las formulaciones de paclitaxel/compuesto (I-VI). En la misma concentración de paclitaxel, la formulación de paclitaxel y el compuesto I, o paclitaxel y el compuesto II, exhiben una alta inhibición de crecimiento celular cercana a 70% (cercana a 45% comparado con el paclitaxel solo como control positivo); la formulación de paclitaxel y el compuesto III o paclitaxel y el compuesto IV exhiben una inhibición de crecimiento celular cercana a 60% (cercana a 30% comparado con paclitaxel solo como control positivo); la formulación de paclitaxel y el compuesto V o paclitaxel y el compuesto VI exhiben una inhibición de crecimiento celular cercana a 55% (cercana a 25% comparado con paclitaxel como control positivo). La relación molar de paclitaxel: compuesto (I-VI) es 1:7.

Las sales de sodio de los compuestos (I-VI) se convierten en las formas acídicas correspondientes de los compuestos y se disuelven en Taxol® para preparar las formulaciones Taxol®/compuesto (I-VI).

El grado de inhibición de crecimiento celular para la formulación de Taxol®/compuesto I o Taxol®/compuesto II es cercana a 75% (cercana a 50% comparado con Taxol® solo como control positivo); para la formulación Taxol®/com-
puesto III o Taxol®/ el compuesto IV, la inhibición es cercana a 65% (cercana a 35% comparado con Taxol® solo como control positivo); para la formulación Taxol®/compuesto V o Taxol®/compuesto VI, cercana a 60% (cercana a 30% comparado con Taxol® solo como control positivo). La relación molar de paclitaxel: compuesto (I-VI) es 1:10.

Los compuestos (I-VI) combinan sorprendentemente una capacidad para la inhibición del crecimiento de células de tumor con el poder de disolver el paclitaxel, creando micelas mezcladas en solución salina. Los inventores muestran adicionalmente que estos compuestos (I-VI) son capaces de potenciar la eficacia de paclitaxel.

La invención se ilustrará en más detalle en los siguientes ejemplos no limitantes.

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Ejemplos Materiales y métodos

Los ácidos todos-trans-Retinoico, 13-cis-Retinoico, L-cisteico, ácido L-homocisteico, y ácido L-cisteinosulfínicos se compran de Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA. Todos los otros reactivos y disolventes químicos se compran de Aldrich Chemical Co.

Se determina el espectro ^{1}H-RMN a 400 MHz utilizando un espectrómetro Varian Unity-400. Se determina el espectro para las formas acídicas de los compuestos, sin embargo los derivados de ácido L-homocisteico III y IV se utilizan en la forma de sales de sodio. Se utiliza DMSO-d_{6} como el disolvente.

Se utilizan 60 placas precubiertas de gel de sílice Merck para cromatografía de capa delgada (TLC) y se desarrollan en un sistema disolvente de cloroformo: metanol: ácido acético: agua (65:25:5:5, v/v/v/v). La detección de los compuestos en placas TLC se logra al rociar con 10% de H_{2}SO_{4} en metanol, se calientan a 150ºC, o utilizando una solución de 0,3% ninhidrina en ácido 1-butanol-acético 100:3 (v/v).

La determinación de las concentraciones de los compuestos sintetizados se desarrolla mediante espectro UV (espectrofotómetro Shimadzu UV-mini-1240, \lambda \div250-500 nm, \lambda_{max} 346 nin, \varepsilon 45000, MeOH) para los derivados de ácido todos-trans-retinoico, y por peso para los derivados de ácido 13-cis-retinoico. Las concentraciones determinadas por el espectro UV son iguales a los pesos de las muestras.

Los compuestos sintetizados (en forma acídica) son solubles en cloroformo, THF, etanol, metanol, y 70% de etanol ac. Las sales de sodio de los derivados de ácido L-cisteico y ácido L-cisteinosulfínico (I, II, V, VI) son solubles solo en mezclas que contienen agua (por ejemplo metanol-agua, etanol-agua, THF-agua, etc). También se disuelven sales de sodio de los derivados de ácido L-homocisteico (III, IV) en metanol y algunas mezclas que contienen metanol (por ejemplo cloroformo-metanol, THF metanol, etc.).

Todas las etapas de la síntesis se desarrollan en atmósfera de nitrógeno seco.

El paclitaxel se compra de Sigma (St. Louis, MO, USA) y Taxol® se compra de Bristol-Myers Squibb Co. La estirpe celular MDA-MB-231 I de adenocarcinoma de mama humano se compra de American Type Culture Collection (ATCC-HTB-26, Lote 1227150). La estirpe celular se propaga mediante cultivo en frascos Nunclon de 25 cm^{2} (Nunc A/S, Dinamarca) en Medio Eagle Esencial Mínimo (MEM), que contiene antibióticos y se complementa con 10% (v/v) de suero bovino fetal (FBS) (Sigma, St.Louis, MO, USA). Los cultivos se mantienen en medio de crecimiento a 37ºC en una atmósfera humidificada, 95% de aire y 5% de CO_{2}.

Una suspensión de células de tumor (60 X 10^{3} células/mL) se prepara en MEM con 5% de FBS y antibiótico. La suspensión celular (200 \muL) se siembra en pozos de placas de 96 microplacas Nunclon (Nunc A/S, Dinamarca) en una densidad de 12 X 10^{3} células/pozo. Las soluciones de los fármacos a ser probados se agregan a los cultivos en el día 0 o día 1 en volúmenes de 2 \muL. En todos los casos las células se incuban durante 3 días.

Al final del periodo de incubación, se despegan las células adheridas mediante tripsinización y el número de células viables se cuenta utilizando la prueba de exclusión de tinte azul tripan y un hemocitómetro.

Todos los experimentos se desarrollan por lo menos dos veces y los conteos de células se hacen en triplicado para cada concentración de fármaco. Cada serie de control y prueba consiste de 6-8 cultivos. Los resultados se expresan como la DE de número de células medio y las diferencias entre la serie de control y la prueba se evalúan por medio de la prueba t de Student. La citotoxicidad de cada fármaco probado se evalúa mediante el grado de inhibición de crecimiento celular. Se evalúa la inhibición de crecimiento celular como sigue:

Inhibición de crecimiento celular, % = \frac{\text{Control-Serie de prueba}}{Control} x 100

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Ejemplo 1 Síntesis de ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-cisteico (sal de sodio) (I)

El ácido todos-trans-Retinoico (150 mg, 0.5 mmol) y trietilamina (71 \mul, 0.51 mmol) se disuelven en 1 ml de tetrahidrofurano anhidro, luego se agrega acetonitrilo anhidro (2 ml), la mezcla se enfría a -20ºC, y se agrega 66 \mul (0.51 mmol) de cloroformato isobutilo. Después de 30 min, la mezcla, libre del clorhidrato trietilamina precipitado, se pipetea en una solución de monohidrato de ácido L-cisteico (94 mg, 0.5 mmol) en 3 ml de 1M de Na_{2}CO_{3} y 1.5 ml de H_{2}O. La mezcla obtenida se agita durante aproximadamente 5 h a 20-25ºC, se diluye con 15 ml de 2-propanol-agua 2:1 (v/v), se filtra y se concentra bajo presión reducida a aproximadamente 5 ml. Luego se agrega 20 ml de 2-propanol-agua 5:1 (v/v), y la solución se agita durante unos pocos minutos mientras que se forma un precipitado blanco. La suspensión obtenida se filtra, se concentra como se describió anteriormente, y se diluye con 20 ml de 2-propanol-metanol 1:1 (v/v). Se separa un precipitado amarillo del producto deseado, se disuelve en 15 ml de 2-propanol-agua 2:1 (v/v) y se almacena durante la noche a -18ºC con el fin de remover trazas de impurezas. Después de la remoción del material insoluble, se obtiene una solución clara del producto puro. Esta solución se utiliza para el almacenamiento del compuesto I.

Producción: 40%.

R_{f} 0.30-0.35. ^{1}H-RMN (CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s, C(CH_{3})_{2}], 1.43 y 1.56 [2H+2H, 2m, CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 [3H, s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.25 (3H, s, CH_{3}C=CHCO), 2.78-2.89 (2H, m, SCH_{2}), 4.40 (1H, m, NCH), 5.84 (1H, s, =CHCO), 6.11-6.36 [4H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.91 [1H, dd, J 15.2, 11.5 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.07 (1H, d, J 6.4 Hz, NH), \sim 12.4 (1H, brs, CO_{2}H).

Con el fin de obtener la forma acídica del compuesto I, se evapora una solución del compuesto (2-propanol-agua 2:1, v/v) bajo presión reducida, se disuelve en agua, se acidifica cuidadosamente con 0.1M de HCl a pH 3.5 y se extrae con Cloroformo-2-propanol-metanol (2:1:1, v/v/v). Después de la evaporación de los disolventes orgánicos bajo presión reducida, el residuo se disuelve en metanol seco (aproximadamente 5 mg/mL), se almacena durante la noche a -18ºC, se filtra y se utiliza inmediatamente.

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Ejemplo 2 Síntesis de ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteico (sal de sodio) (II)

Este compuesto se sintetiza como se describió anteriormente durante 1, utilizando 150 mg (0.5 mmol) de ácido 13-cis-retinoico y 94 mg (0.5 mmol) de monohidrato de ácido L-cisteico.

Producción: 35%.

R_{f} 0.30-0.35. ^{1}H-RMN (CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s, C(CH_{3})_{2}], 1.43 y 1.57 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 y 1.98 (3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.82 (2H, m, SCH_{2}), 4.37 (1H, m, NCH), 5.68 (1H, s, =CHCO), 6.13-6.26 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.87 [1H, dd, J 15.4, 11.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7.85 [1H, d, J 15.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.04 (1H, d, J 6.4 Hz, NH), \sim 12.4 (1H, br s, CO_{2}H).

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Ejemplo 3 Síntesis de ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-homocisteico (sal de sodio) (III)

Este compuesto se sintetiza como se describió anteriormente durante 1, utilizando 150 mg (0.5 mmol) de ácido todos-trans-retinoico y 92 mg (0.5 mmol) de ácido L-homocisteico.

Producción: 31%.

R_{f} 0.30-0.35. ^{1}H-RMN (CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s, C(CH_{3})_{2}], 1.43 y 1.56 [2H+2H, 2m, CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.87 (2H, m, SCH_{2}CH_{2}), 1.94 [3H, s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.25 (3H, s, CH_{3}C=CHCO), 2.41 (2H, m, SCH_{2}), 3.94 (1H, m, NCH), 5.98 (1H, s, =CHCO), 6.11-6.32 [4H, m, CH=CHC (CH_{3})=CHCH=CH], 6.86 (1H, dd, J 15.0, 11.5 Hz, =CHCH=CH), 7.43 (1H, d, J 7.1 Hz,
NH).

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Ejemplo 4 Síntesis de ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-homocisteico (sal de sodio) (IV)

Este compuesto se sintetiza como se describió anteriormente durante 1, utilizando 150 mg (0.5 mmol) de ácido 13-cis-retinoico y 92 mg (0.5 mmol) de ácido L-homocisteico.

Producción: 25%.

R_{f} 0.30-0.35. ^{1}H-RMN (CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s, C(CH_{3})_{2}], 1.42 y 1.56 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.68 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.87 (2H, m, SCH_{2}CH_{2}), 1.93 y 1.94 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.41 (2H, m, SCH_{2}), 3.95 (1H, m, NCH), 5.83 (1H, s, =CHCO), 6.18 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.81 [1H, dd, J 15.4, 11.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7.42 (1H, d, J 7.3 Hz, NH), 7.93 [1H, d, J 15.4 Hz, CH=CHC (CH_{3})=CHCH=CH].

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Ejemplo 5 Síntesis de ácido N-(todos-trans-Retinoil)-L-cisteinosulfínico (sal de sodio) (V)

Este compuesto se sintetiza como se describió anteriormente durante 1, utilizando 150 mg (0.5 mmol) de ácido todos-trans-retinoico y 77 mg (0.5 mmol) de ácido L-cisteinosulfínico.

Producción: 28%.

R_{f} 0.30-0.35. ^{1}H-RMN (CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s, C(CH_{3})_{2}], 1.43 y 1.56 [2H+2H, 2m, CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.96 [3H, s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 2.00 (2H, m, CH_{2}C=), 2.26 (3H, s, CH_{3}C=CHCO), 2.88-3.00 (2H, m, SCH_{2}), 4.51 (1H, m, NCH), 5.84 (1H, s, =CHCO), 6.11-6.36 [4H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.94 [1H, dd, J 15.0, 11.4 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.47 (1H, d, J 7.9 Hz, NH), \sim 12.6 (1H, br s, CO_{2}H).

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Ejemplo 6 Síntesis de ácido N-(13-cis-Retinoil)-L-cisteinosulfínico (sal de sodio) (VI)

Este compuesto se sintetiza como se describió anteriormente durante 1, utilizando 150 mg (0.5 mmol) de ácido 13-cis-retinoico y 77 mg (0.5 mmol) de ácido L-cisteinosulfínico.

Producción: 23%.

R_{f} 0.30-0.35. ^{1}H-RMN (CD_{3}SOCD_{3}, 400 MHz) \delta 1.00 [6H, s, C(CH_{3})_{2}], 1.42 y 1.56 [2H+2H, 2m,
CH_{2}CH_{2}C(CH_{3})_{2}], 1.67 [3H, s, CH_{3}C=CC(CH_{3})_{2}], 1.95 y 1.97 [3H+3H, 2s, CH_{3}C=(CH)_{3}C(CH_{3})=CHCO], 1.99 (2H, m, CH_{2}C=), 2.51 (1H, dd, J 13.2, 2.9 Hz, SCH^{a}H^{b}), 2.65 (1H, dd, J 13.2, 8.2 Hz, SCH^{a}H^{b}), 4.77 (1H, m, NCH), 5.72 (1H, s, =CHCO), 6.20 [3H, m, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 6.87 [1H, dd, J 15.6, 11.5 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 7.88 [1H, d, J 15.6 Hz, CH=CHC(CH_{3})=CHCH=CH], 8.21 (1H, d, J 7.9 Hz, NH).

Claims (4)

1. Un método para la síntesis de la sal de sodio de un compuesto seleccionado entre los siguientes (I-VI):

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que comprende las siguientes etapas consecutivas:

- acilar directamente los grupos amino de ácido L-cisteico, ácido L-homocisteico, y ácido L-cisteinosulfínico se desarrolla utilizando un anhídrido de ácido carboxílico-carbónico mezclado en medio orgánico de agua en la presencia de Na_{2}CO_{3}

- separar contaminantes insolubles

- separar las sales de sodio

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el medio orgánico de agua es una mezcla de tetrahidrofuranoacetonitrilo-agua.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la separación se desarrolla mediante la adición de una mezcla de 2-propanol-agua con el medio orgánico de agua.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque la precipitación se desarrolla mediante la adición de una mezcla de 2-propanolmetanol en una solución concentrada de la sal de sodio del compuesto en
2-propanol-agua.