ES2331644T3 - Inmunoterapia de trastornos autoinmunes usando anticuerpos cuya diana son celulas b. - Google Patents

Abstract

El uso de al menos un anticuerpo LL2 desnudo murino, quimérico, completamente humano o humanizado en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmunitario.

Description

Inmunoterapia de trastornos autoinmunes usando anticuerpos cuya diana son células B.

Campo de la invención

La presente invención se refiere al uso de un anticuerpo LL2 desnudo en la preparación de un medicamento. El anticuerpo se administra solo o en combinación, y está desnudo. La presente invención se dirige también a métodos terapéuticos multimodales en los que la administración del anticuerpo se complementa mediante la administración de otras modalidades terapéuticas.

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Antecedentes

Se han investigado los anticuerpos contra el antígeno CD20 para la terapia de los linfomas de las células B. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico anti-CD20, denominado "IDEC-C2B8", tiene actividad contra los linfomas de las células B cuando se proporciona en forma de anticuerpos sin conjugar en inyecciones repetidas de dosis que exceden de 500 mg por inyección. Maloney et al., Blood 84:2457 (1994); Longo, Curr. Opin. Oncol. 8:353 (1996). Alrededor del 50 por ciento de los pacientes de linfoma no Hodgkin tratados con este régimen, que tenían la forma de grado bajo poco activa, mostraron respuestas. También se han obtenido respuestas terapéuticas mediante el uso de un anticuerpo monoclonal murino anti-CD-20 B1 marcado con ^{131}I cuando se proporcionó en forma de dosis repetidas que excedían de 600 mg por inyección. Kaminski et al., N. Engl. J. Med. 328:459 (1993); Press et al., N. Engl. J. Med. 329:1219 (1993); Press et al., Lancet 346:336 (1995). Sin embargo, estos anticuerpos, proporcionados como formas sin conjugar o formas radiomarcadas, han mostrado solamente una actividad modesta en pacientes con una forma más prevalente y letal de linfoma de las células B, de tipo intermedio o agresivo.

Las enfermedades autoinmunitarias son una clase de enfermedades asociadas a un trastorno de las células B. Los ejemplos incluyen las trombocitopenias inmunomediadas, tales como púrpura trombocitopénica idiopática aguda y púrpura trombocitopénica idiopática crónica, miastenia gravis, nefritis lúpica, lupus eritematoso, y artritis reumatoide. Los tratamientos más habituales son los corticoesteroides y los fármacos citotóxicos, que pueden ser muy tóxicos. Estos fármacos inhiben también todo el sistema inmunitario, lo que puede dar como resultado infecciones graves, y pueden tener efectos adversos sobre el hígado y los riñones. Otros agentes terapéuticos que se han usado para tratar las enfermedades autoinmunitarias de Clase III hasta la fecha se han dirigido contra las células T y los macrófagos. Sigue existiendo la necesidad de métodos más eficaces para el tratamiento de las enfermedades autoinmunitarias, en particular las enfermedades autoinmunitarias de Clase III.

El documento US-A 5 686 072 está relacionado con el uso de una inmunotoxina anti-CD22 con ciertas inmunotoxinas anti-CD19 en el tratamiento del cáncer y de las enfermedades autoinmunitarias.

Stein et al. (Cancer Immunol. Immunother. 37.293 (1993) describe la especificidad por el epítopo del anticuerpo LL2.

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Resumen de la invención

Por lo tanto, un objetivo de la presente invención es proporcionar un método para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias mediante el uso de un anticuerpo hacia un antígeno de las células B.

Otro objetivo de la invención es el uso de dosis comparativamente bajas de un anticuerpo desnudo hacia el antígeno CD22, o una combinación de anticuerpos desnudos hacia un antígeno CD22 y otro antígeno de las células B, preferiblemente CD20 y/o CD74.

Aún otro objetivo de la invención es el uso de una combinación de uno o más anticuerpos desnudos hacia antígenos CD22 y/o anticuerpos hacia antígenos de las células B que están conjugados con fármacos, toxinas o radioisótopos terapéuticos.

Un objetivo adicional de esta invención es proporcionar métodos multimodales para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias, en los que un anticuerpo desnudo hacia el antígeno CD22 se complementa con la administración de otras modalidades terapéuticas, tales como las dirigidas contra las células T, las células plasmáticas y los
macrófagos.

Estos y otros objetivos se consiguen mediante el contenido de las reivindicaciones independientes. Se pueden tomar las realizaciones preferidas de las reivindicaciones dependientes.

Otros objetivos, características y ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada.

Descripción detallada 1. Visión General

Los clones de células B que albergan receptores Ig de autoanticuerpos están presentes en los individuos normales. La autoinmunidad surge cuando estas células B se hacen hiperactivas, y maduran hasta células plasmáticas que secretan el autoanticuerpo. De acuerdo con la presente invención, los trastornos autoinmunitarios se pueden tratar administrando un anticuerpo LL2 desnudo. En una realización, se usan dosis comparativamente bajas del anticuerpo completo desnudo o de una combinación de anticuerpos completos desnudos. En otras realizaciones, se puede usar tal anticuerpo LL2 desnudo en combinación con conjugados de anticuerpos que se unen a un antígeno de las células B, tal como los antígenos CD22, CD20, CD19, y CD74 o el antígeno HLA-DR, con fármacos, toxinas o radioisótopos terapéuticos que son útiles. La presente invención se dirige también a métodos terapéuticos multimodales en los que la administración de anticuerpos se complementa mediante la administración de otras modalidades
terapéuticas.

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2. Definiciones

En la descripción siguiente se usan con frecuencia varias expresiones. Se proporcionan las siguientes definiciones para facilitar la comprensión de la invención.

Un gen estructural es una secuencia de ADN que se transcribe a un ARN mensajero (ARNm) que se traduce después a una secuencia de aminoácidos característica de un polipéptido específico.

Un promotor es una secuencia de ADN que dirige la transcripción de un gen estructural. En general, un promotor está localizado en la región de 5' de un gen, en posición proximal respecto del sitio de inicio de la transcripción de un gen estructural. Si un promotor es un promotor inducible, la velocidad de la transcripción se incrementa en respuesta a un agente inductor. En contraste, la velocidad de la transcripción no está regulada por un agente inductor cuando el promotor es un promotor constitutivo.

Una molécula de ADN aislada es un fragmento de ADN que no está integrado en el ADN genómico de un organismo. Por ejemplo, un gen de anticuerpo clonado es un fragmento de ADN que se ha separado del ADN genómico de una célula de mamífero. Otro ejemplo de una molécula de ADN aislada es una molécula de ADN sintetizada químicamente que no está integrada en el ADN genómico de un organismo.

Un potenciador es un elemento regulador de ADN que puede incrementar la eficacia de la transcripción, independientemente de la distancia o de la orientación del potenciador respecto del sitio de inicio de la transcripción.

El ADN complementario (cADN) es una molécula de ADN monocatenaria que se forma a partir de un molde de ARNm mediante la enzima transcriptasa inversa. En general, se emplea un cebador complementario a porciones del ARNm para la iniciación de la transcripción inversa. Los expertos en la técnica también usan el término "cADN" para referirse a una molécula de ADN bicatenaria que consiste en tal molécula de ADN monocatenaria y su cadena de ADN complementaria.

El término expresión se refiere a la biosíntesis de un producto génico. Por ejemplo, en el caso de un gen estructural, la expresión implica la transcripción del gen estructural en ARNm y la traducción del ARNm en uno o más polipéptidos.

Un vector de clonación es una molécula de ADN, tal como un plásmido, cósmido o bacteriófago, que tiene la capacidad de replicarse de manera autónoma en una célula hospedadora. Los vectores de clonación contienen en general uno o un pequeño número de sitios de reconocimiento para endonucleasas de restricción, en los cuales se pueden insertar secuencias de ADN exógenas de una manera determinable sin la pérdida de una función biológica esencial del vector, así como un gen marcador que es adecuado para el uso en la identificación y la selección de las células transformadas con el vector de clonación. Los genes marcadores incluyen en general genes que proporcionan resistencia a tetraciclina o resistencia a ampicilina.

Un vector de expresión es una molécula de ADN que comprende un gen que se expresa en una célula hospedadora. En general, la expresión génica se coloca bajo el control de ciertos elementos reguladores, que incluyen promotores constitutivos o inducibles, elementos reguladores específicos del tejido, y potenciadores. Se dice que tal gen está "unido de manera operable" a los elementos reguladores.

Un hospedador recombinante puede ser cualquier célula procariótica o eucariótica que contiene un vector de clonación o un vector de expresión. Esta expresión incluye también las células procarióticas o eucarióticas que se han modificado genéticamente para que contengan el/los gen(es) clonado(s) en el cromosoma o el genoma de la célula hospedadora.

Como se usa en el presente documento, un anticuerpo abarca los anticuerpos desnudos y los anticuerpos conjugados y los fragmentos de anticuerpos, que pueden ser monoespecíficos o multiespecíficos. Incluye tanto los anticuerpos policlonales como monoclonales, así como ciertos anticuerpos recombinantes, tales como los anticuerpos quiméricos y humanizados y las proteínas de fusión.

Un anticuerpo quimérico es una proteína recombinante que contiene los dominios variables y las regiones determinantes de la complementariedad derivados de un anticuerpo de roedor, mientras el resto de la molécula de anticuerpo deriva de un anticuerpo humano.

Los anticuerpos humanizados son proteínas recombinantes en las que se han transferido las regiones determinantes de la complementariedad murinas de un anticuerpo monoclonal desde las cadenas variables pesadas y ligeras de la inmunoglobulina murina a un dominio variable humano.

Los anticuerpos humanos son anticuerpos que se aíslan de humanos y después se producen en cultivo o mediante el uso de animales cuyos sistemas inmunitarios se han alterado para que respondan a la estimulación con antígenos produciendo anticuerpos humanos.

Como se usa en el presente documento, un agente terapéutico es una molécula o átomo que está conjugado con un resto de anticuerpo para producir un conjugado que es útil para la terapia. Los ejemplos de agentes terapéuticos incluyen fármacos, toxinas, enzimas, hormonas, citocinas, inmunomoduladores, compuestos de boro y radioisótopos terapéuticos. Los radioisótopos terapéuticos preferidos incluyen los emisores \beta, \alpha y Auger, con un intervalo de kev de 80-500 kev. Los radioisótopos terapéuticos ejemplares incluyen ^{198}Au, ^{32}P, ^{125}I, ^{131}I, ^{90}Y, ^{186}Re, ^{188}Re, ^{67}Cu, y ^{211}At.

Un anticuerpo desnudo es un anticuerpo completo que no está conjugado con un agente terapéutico. Los anticuerpos desnudos incluyen tanto anticuerpos policlonales como monoclonales, así como ciertos anticuerpos recombinantes, tales como los anticuerpos quiméricos y humanizados.

Un anticuerpo conjugado es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que está conjugado con un agente terapéutico.

Un anticuerpo multiespecífico es un anticuerpo que se puede unir simultáneamente a al menos dos objetivos que son de estructura diferente, p.ej., dos antígenos diferentes, dos epítopos diferentes en el mismo antígeno, o un hapteno y/o un antígeno o epítopo. Una especificidad estaría dirigida a un antígeno o epítopo de las células B.

Un anticuerpo biespecífico es un anticuerpo que se puede unir simultáneamente a dos objetivos que tienen una estructura diferente. Los anticuerpos biespecíficos (bsAb) y los fragmentos de anticuerpos biespecíficos (bsFab) tienen al menos un brazo que se une específicamente a un antígeno o epítopo de las células B y al menos otro brazo que se une específicamente a un conjugado seleccionable como objetivo.

Una proteína de fusión es una molécula de unión a antígenos producida de manera recombinante en la que están unidos dos o más segmentos diferentes de anticuerpos de cadena simple o de fragmentos de anticuerpos con las mismas o diferentes especificidades. Se puede producir una diversidad de proteínas de fusión biespecíficas mediante el uso de ingeniería molecular. En una forma, la proteína de fusión biespecífica es monovalente, y consiste, por ejemplo, en un scFv con un único sitio de unión para un antígeno y un fragmento Fab con un único sitio de unión para un segundo antígeno. En otra forma, la proteína de fusión biespecífica es divalente, y consiste, por ejemplo, en una IgG con dos sitios de unión para un antígeno y dos scFv con dos sitios de unión para un segundo antígeno.

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3. Producción de Anticuerpos Monoclonales, Anticuerpos Humanizados, Anticuerpos Quiméricos y Anticuerpos Humanos

Los expertos en la técnica conocen en general los anticuerpos anti-CD20, anti-CD22, anti-CD19 y anti-CD74. Véase, por ejemplo, Ghetie et al., Cancer Res. 48:2610 (1988); Hekman et al., Cancer Immunol. Immunother. 32:364 (1991); Kaminski et al., N. Engl. J. Med. 329:459 (1993); Press et al., N. Engl. J. Med. 329:1219 (1993); Maloney et al., Blood 84:2457 (1994); Press et al., Lancet 346:336 (1995); Longo, Curr. Opin. Oncol. 8:353 (1996). Más en particular, los anticuerpos monoclonales de roedores hacia los antígenos CD22, CD20, CD19, o CD74 se pueden obtener mediante métodos conocidos para los expertos en la técnica. Véase en general, por ejemplo, Kohler y Milstein, Nature 256:495 (1975), y Coligan et al. (eds.), CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, VOL. 1, páginas 2.5.1-2.6.7 (John Wiley & Sons 1991) ["Coligan"]. Brevemente, se pueden obtener anticuerpos monoclonales inyectando a ratones una composición que comprende el antígeno, verificando la presencia de la producción de anticuerpos extrayendo una muestra de suero, extrayendo el bazo para obtener linfocitos B, fusionando los linfocitos B con células de mieloma para producir hibridomas, clonando los hibridomas, seleccionando los clones positivos que producen anticuerpos hacia el antígeno que se inyectó, cultivando los clones que producen anticuerpos hacia el antígeno, y aislando los anticuerpos a partir de los cultivos de hibridomas.

Se pueden aislar y purificar anticuerpos monoclonales a partir de cultivos de hibridomas mediante una diversidad de técnicas bien establecidas. Tales técnicas de aislamiento incluyen la cromatografía de afinidad con Proteína A-Sepharose, cromatografía de exclusión por tamaños, y cromatografía de intercambio iónico. Véase, por ejemplo, Coligan en las páginas 2.7.1-2.7.12 y en las páginas 2.9.1-2.9.3. Además, véase Baines et al., "Purification of Immunoglobulin G (IgG)", en METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, VOL. 10, páginas 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992).

Se pueden obtener cantidades adecuadas de antígenos bien caracterizados para la producción de anticuerpos mediante el uso de técnicas habituales. Como ejemplo, se puede inmunoprecipitar CD22 de proteínas de linfocitos B mediante el uso de los anticuerpos depositados descritos por Tedder et al., pat. de EE.UU. nº 5.484.892 (1996).

De manera alternativa, se pueden obtener proteínas de los antígenos CD22, CD20, CD19, o CD74 a partir de células cultivadas transfectadas que sobreproducen el antígeno de interés. Se pueden construir vectores de expresión que comprenden moléculas de ADN que codifican cada una de estas proteínas mediante el uso de las secuencias nucleotídicas publicadas. Véase, por ejemplo, Wilson et al., J. Exp. Med. 173:137 (1991); Wilson et al., J. Immunol. 150:5013 (1993). Como ilustración, se pueden obtener moléculas de ADN que codifican CD22 sintetizando moléculas de ADN mediante el uso de oligonucleótidos largos que actúan como cebadores mutuos. Véase, por ejemplo, Ausubel et al., (eds.), CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, páginas 8.2.8 a 8.2.13 (1990) ["Ausubel"]. Además, véase Wosnick et al., Gene 60:115 (1987); y Ausubel et al. (eds.), SHORT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, 3ª edición, páginas 8-8 a 8-9 (John Wiley & Sons, Inc. 1995). Las técnicas establecidas mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa proporcionan la capacidad de sintetizar genes que pueden llegar a tener una longitud de 1,8 kilobases. Adang et al., Plant Molec. Biol. 21:1131 (1993); Bambot et al., PCR Methods and Applications 2:266 (1993); Dillon et al., "Use of the Polymerase Chain Reaction for the Rapid Construction of Synthetic Genes", en METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Vol. 15: PCR PROTOCOLS: CURRENT METHODS AND APPLICATIONS, White (ed.), páginas 263-268, (Humana Press, Inc. 1993).

En una variación de esta aproximación, se puede obtener un anticuerpo monoclonal fusionando células de mieloma con células de bazo de ratones inmunizados con una línea de células pre-B murinas transfectadas de manera estable con cADN que codifica el antígeno de interés. Véase Tedder et al., patente de EE.UU. nº 5.484.892 (1996).

Un ejemplo de un anticuerpo monoclonal anti-CD22 murino adecuado es el anticuerpo monoclonal LL2 (anteriormente EPB-2), que se produjo contra células Raji humanas derivadas de un linfoma de Burkitt. Pawlak-Byczkowska et al., Cancer Res. 49:4568 (1989). Este anticuerpo monoclonal tiene un isotipo IgG_{2\alpha}, y el anticuerpo se introduce rápidamente en las células de linfoma. Shih et al, Int. J. Cancer 56:538 (1994). Los estudios de inmunotinción y de radioinmunodetección in vivo han demostrado la sensibilidad excelente de LL2 en la detección de linfomas de células B. Pawlak-Byczkowska et al., Cancer Res. 49:4568 (1989); Murthy et al., Eur. J. Nucl. Med. 19:394 (1992). Además, se ha demostrado que los fragmentos LL2-Fab' marcados con ^{99m}Tc son útiles en el seguimiento de la reestadificación de los linfomas de células B, mientras el LL2 intacto marcado con ^{131}I y los fragmentos F(ab')_{2} de LL2 marcados se han usado para seleccionar como objetivo sitios de linfomas y para inducir respuestas terapéuticas. Murthy et al., Eur. J. Nucl. Med. 19:394 (1992); Mills et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 34:479 (1993) [Resumen 2857]; Baum et al., Cancer 73 (Supl. 3):896 (1994); Goldenberg et al., J. Clin. Oncol. 9:548 (1991). Además, se ha demostrado que los fragmentos de LL2 Fab' conjugados con un derivado de la exotoxina de Pseudomonas inducen remisiones completas en xenoinjertos de linfomas humanos medibles que crecen en ratones atímicos. Kreitman et al., Cancer Res. 53:819 (1993). Un ejemplo de un anticuerpo anti-CD74 es el anticuerpo
LL1.

En una realización adicional, un anticuerpo de la presente invención es un anticuerpo quimérico en el que las regiones variables de un anticuerpo humano se han sustituido por las regiones variables de un anticuerpo LL2 de roedor. Las ventajas de los anticuerpos quiméricos incluyen una inmunogenicidad disminuida y una estabilidad in vivo incrementada.

Los expertos en la técnica conocen bien los métodos para la construcción de anticuerpos quiméricos. Como ejemplo, Leung et al., Hybridoma 13:469 (1994), describe cómo se produjo una quimera de LL2 combinando secuencias de ADN que codifican los dominios V_{\kappa} y V_{H} del anticuerpo monoclonal LL2 con los dominios de las regiones constantes de IgG_{1} y \kappa humanos. Esta publicación proporciona también las secuencias de nucleótidos de las regiones variables de las cadenas ligeras y pesadas de LL2, V_{\kappa} y V_{H}, respectivamente.

Aún en otra realización, un anticuerpo de la presente invención es un anticuerpo monoclonal "humanizado". Es decir, las regiones determinantes de la complementariedad de ratón se transfieren desde las cadenas variables pesadas y ligeras de la inmunoglobulina de ratón a un dominio variable humano, seguido por la sustitución de algunos residuos humanos en las regiones estructurales de sus homólogos murinos. Los anticuerpos monoclonales humanizados de acuerdo con esta invención son adecuados para el uso en los métodos terapéuticos. Las técnicas generales para clonar dominios variables de inmunoglobulinas murinas se describen, por ejemplo, en la publicación de Orlandi et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86: 3833 (1989). Las técnicas para producir anticuerpos monoclonales humanizados se describen, por ejemplo, en Jones et al., Nature 321:522 (1986), Riechmann et al., Nature 332:323 (1988), Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988), Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285 (1992), Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12:437 (1992), y Singer et al., J. Immun. 150:2844 (1993). La publicación de Leung et al., Mol. Immunol. 32:1413 (1995), describe la construcción de un anticuerpo LL2 humanizado.

En otra realización, un anticuerpo de la presente invención es un anticuerpo monoclonal humano. Tales anticuerpos se obtienen de ratones transgénicos que se han "modificado" para que produzcan anticuerpos humanos específicos en respuesta a la exposición al antígeno. En esta técnica, se introducen elementos del locus de las cadenas pesadas y ligeras humanas en cepas de ratones que derivan de líneas de células pluripotenciales embrionarias que contienen interrupciones seleccionadas de los loci de las cadenas pesadas y de las cadenas ligeras endógenas. Los ratones transgénicos pueden sintetizar anticuerpos humanos específicos para los antígenos humanos, y se pueden usar los ratones para producir hibridomas que secretan anticuerpos humanos. Los métodos para la obtención de anticuerpos humanos a partir de ratones transgénicos se describen en Green et al., Nature Genet. 7:13 (1994), Lonberg et al., Nature 368:856 (1994), y Taylor et al., Int. Immun. 6:579 (1994).

La presente invención abarca la combinación del anticuerpo LL2 con anticuerpos y fragmentos de anticuerpos. Los fragmentos de anticuerpos son las porciones de unión al antígeno de un anticuerpo, tales como F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, y similares. Los fragmentos de anticuerpo se unen al mismo antígeno que es reconocido por el anticuerpo intacto. Por ejemplo, un fragmento de anticuerpo monoclonal anti-CD22 se une a un epítopo de CD22. Los bsAb de la presente invención incluyen, pero sin limitación, los bsMAbs IgG x IgG, IgG x F(ab')2, IgG x Fab', IgG x scFv; F(ab')2 x F(ab')2, Fab' x F'(ab')2, Fab' x Fab', Fab' x scFv y scFv x scFv. Además, están incluidas especies tales como scFv x IgG x scFv y Fab' x IgG x Fab', scFv x F(ab')2 x scFv y Fab' x F(ab')2 x Fab'.

La expresión "fragmento de anticuerpo" incluye también cualquier proteína sintética o modificada genéticamente que actúa como un anticuerpo uniéndose a un antígeno específico para formar un complejo. Por ejemplo, los fragmentos de anticuerpos incluyen los fragmentos aislados, los fragmentos "Fv", que consisten en las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras, las moléculas polipeptídicas de cadena simple recombinantes en las que las regiones variables de las cadenas ligeras y pesadas están conectadas mediante un espaciador peptídico ("proteínas sFv"), y las unidades de reconocimiento mínimas que consisten en los residuos de aminoácidos que imitan la región hipervariable.

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4. Producción de Proteínas de Fusión

Otro método para producir bsAbs es modificar proteínas de fusión recombinantes uniendo dos o más segmentos diferentes de anticuerpos de cadena simple o de fragmentos de anticuerpos con las especificidades dobles necesarias. Véase, p.ej., Coloma et al., Nature Biotech. 15:159-163, 1997. Se puede producir una diversidad de proteínas de fusión biespecíficas mediante el uso de la ingeniería molecular. En una forma, la proteína de fusión biespecífica es monovalente, y consiste, por ejemplo, en un scFv con un único sitio de unión para un antígeno y un fragmento Fab con un único sitio de unión para un segundo antígeno. En otra forma, la proteína de fusión biespecífica es divalente, y consiste, por ejemplo, en una IgG con dos sitios de unión para un antígeno y dos scFv con dos sitios de unión para un segundo antígeno.

Los anticuerpos de cadena simple biespecíficos funcionales (bscAb), también denominados diacuerpos, se pueden producir en células de mamífero mediante el uso de métodos recombinantes. Véase, p.ej., Mack et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 92: 7021-7025, 1995. Por ejemplo, los bscAb se producen uniendo dos fragmentos Fv de cadena simple por medio de un espaciador de glicocola-serina mediante el uso de métodos recombinantes. Los dominios V de la cadena ligera (VL) y V de la cadena pesada (VH) de los dos anticuerpos de interés se aíslan mediante el uso de métodos de PCR habituales. Los cADNs de VL y de VH se obtienen a partir de cada hibridoma, y después se unen para formar un fragmento de cadena simple en una PCR de fusión en dos etapas. La primera etapa de PCR introduce el espaciador de (Gly4-Ser1)3, y la segunda etapa une los amplicones de VL y VH. Cada molécula de cadena simple se clona después en un vector de expresión bacteriano. Tras la amplificación, se corta una de las moléculas de cadena simple y se subclona en el otro vector, que contiene la segunda molécula de cadena simple de interés. El fragmento bscAb resultante se subclona en un vector de expresión eucariótico. Se puede obtener una expresión de proteína funcional transfectando el vector en células de ovario de hámster chino. Se pueden usar métodos recombinantes para producir una diversidad de proteínas de fusión.

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5. Acoplamiento de Anticuerpos a Emulsiones Lipídicas

Se pueden usar emulsiones lipídicas submicrónicas de larga circulación, estabilizadas con fosfatidiletanolamina modificada con poli(etilen glicol) (PEG-PE), como vehículos farmacológicos para los anticuerpos de la presente invención. Las emulsiones están compuestas de dos partes principales: un núcleo lipídico, p.ej., triglicérido, estabilizado con emulgentes, p.ej., fosfolípidos. Las escasas propiedades emulgentes de los fosfolípidos se pueden potenciar añadiendo un co-emulgente biocompatible tal como polisorbato 80. En una realización preferida, el anticuerpo se conjuga a la superficie de los glóbulos de emulsión lipídicos con un agente de acoplamiento heterobifuncional basado en poli(etilen glicol), poli(etilen glicol)-vinilsulfona-éster de N-hidroxi-succinimidilo (NHS-PEG-VS).

La emulsión lipídica submicrónica se prepara y se caracteriza como se ha descrito. Lundberg, J. Pharm. Sci., 83:72 (1993); Lundberg et al., Int. J. Pharm., 134:119 (1996). La composición básica de la emulsión lipídica es trioleína:DPPC:polisorbato 80, 2:1:0,4 (p/p). Cuando se indica, se añade PEG-DPPE en la mezcla lipídica en una cantidad del 2-8% molar calculada respecto de DPPC.

El procedimiento de acoplamiento comienza con la reacción del grupo éster de NHS de NHS-PEG-VS con el grupo amino de diestearoil fosfatidil-etanolamina (DSPE). Se hacen reaccionar veinticinco \mumol de NHS-PEG-VS con 23 \mumol de DSPE y 50 \mumol de trietilamina en 1 ml de cloroformo durante 6 horas a 40ºC para producir un derivado de poli(etilen glicol) de fosfatidil-etanolamina con un grupo de vinilsulfona en el extremo distal de la cadena de poli(etilen glicol) (DSPE-PEG-VS). Para la conjugación del anticuerpo, se incluye DSPE-PEG-VS en la emulsión lipídica al 2% molar de DPPC. Los componentes se dispersan en viales de disoluciones de reserva a -20ºC, y el disolvente se evapora hasta sequedad a presión reducida. Se añade solución salina tamponada con fosfato (PBS), la mezcla se calienta a 50ºC, se agita en vórtice durante 30 segundos y se somete a sonicación con un sonicador de sonda MSE durante 1 minuto. Las emulsiones se pueden almacenar a 4ºC, y se usan preferiblemente para la conjugación antes de 24 horas.

El acoplamiento de los anticuerpos a los glóbulos de la emulsión se lleva a cabo por medio de una reacción entre el grupo vinilsulfona del extremo distal del PEG en la superficie de los glóbulos y los grupos tiol libres del anticuerpo. La vinilsulfona es un derivado atractivo para el acoplamiento selectivo a grupos tiol. A pH aproximadamente neutro, la VS se acoplará con una semivida de 15-20 minutos a las proteínas que contienen grupos tiol. La reactividad de la VS es ligeramente menor que la de maleimida, pero el grupo VS es más estable en agua y se produce un enlace estable en la reacción con los grupos tiol.

Antes de la conjugación, el anticuerpo se reduce mediante 2-mercaptoetanol 50 mM durante 10 minutos a 4ºC en tampón Tris 0,2 M (pH 8,7). El anticuerpo reducido se separa del 2-mercaptoetanol en exceso con una columna de centrifugado de Sephadex G-25, equilibrada en solución salina al 0,9% tamponada con acetato sódico 50 mM (pH 5,3). Se ensayó la concentración de proteína en el producto midiendo su absorbancia a 280 nm (y suponiendo que 1 mg/ml de disolución de anticuerpo da 1,4) o mediante cuantificación de anticuerpo marcado con ^{125}I. Los grupos tiol se determinan con Aldrithiol^{TM} siguiendo el cambio de absorbancia a 343 nm y con cisteína como patrón.

La reacción de acoplamiento se lleva a cabo en solución salina tamponada con HEPES (pH 7,4) durante la noche a temperatura ambiente bajo Argón. El exceso de grupos de vinilsulfona se neutraliza con 2-mercaptoetanol 2 mM durante 30 minutos, y el exceso de 2-mercaptoetanol y del anticuerpo se elimina mediante cromatografía en gel en una columna de Sepharose CL-48. Los inmunoconjugados se recogen cerca del volumen vacío de la columna, se esterilizan haciéndolos pasar a través de un filtro estéril de 0,45 \mum, y se almacenan a 4ºC.

La eficacia de acoplamiento se calcula mediante el uso de un anticuerpo marcado con ^{125}I. Se estima la recuperación de las emulsiones a partir de las medidas de [^{14}C]DPPC en experimentos paralelos. La conjugación de LL2 reducido al grupo VS de DSPE-PEG-VS injertado en la superficie es muy reproducible, con una eficacia típica de casi el 85%.

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6. Uso Terapéutico de Anticuerpos en Regímenes Simples y Multimodales

La presente invención contempla el uso de un anticuerpo LL2 desnudo como composición terapéutica primaria para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias. Tal composición puede contener anticuerpos policlonales o anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos LL2 preferidos incluyen un anticuerpo monoclonal LL2 murino, anticuerpo LL2 quimérico, y anticuerpo LL2 humanizado. Se pueden usar anticuerpos hacia un único antígeno de las células B o hacia más de un antígeno de las células B en combinación con un anticuerpo LL2 desnudo. En una realización preferida, se emplean anticuerpos biespecíficos y proteínas de fusión que comprenden especificidades para más de un antígeno o epítopo de las células B en combinación con un anticuerpo LL2 desnudo.

Por ejemplo, una composición terapéutica de la presente invención puede contener, además del anticuerpo LL2 desnudo, anticuerpos anti-CD22 desnudos monoclonales adicionales dirigidos hacia epítopos de CD22 diferentes, no bloqueantes. Los estudios de inhibición cruzada de anticuerpos monoclonales han identificado cinco epítopos en CD22, denominados epítopos A-E. Véase, por ejemplo, Schwartz-Albiez et al., "The Carbohydrate Moiety of the CD22 Antigen Can Be Modulated by Inhibitors of the Glycosylation Pathway", en LEUKOCYTE TYPING IV. WHITE CELL DIFFERENTIATION ANTIGENS, Knapp et al. (eds.), p. 65 (Oxford University Press 1989). Como ilustración, el anticuerpo LL2 se une al epítopo B. Stein et al., Cancer Immunol. Immunother. 37:293 (1993). Por lo tanto, la presente invención contempla composiciones terapéuticas que comprenden una mezcla de anticuerpos anti-CD22 monoclonales que se unen a al menos dos epítopos de CD22, y en las que la mezcla contiene el anticuerpo LL2 desnudo. Por ejemplo, tal mezcla puede contener anticuerpos monoclonales que se unen con al menos dos epítopos de CD22 seleccionados del grupo que consiste en el epítopo A, epítopo B, epítopo C, epítopo D y epítopo E.

Los expertos en la técnica conocen bien los métodos para la determinación de la especificidad de unión de un anticuerpo anti-CD22. Se proporcionan métodos generales, por ejemplo, en Mole, "Epitope Mapping", en METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, VOLUME 10: IMMUNOCHEMICAL PROTOCOLS, Manson (ed.), páginas 105-116 (The Humana Press, Inc. 1992). Más concretamente, se describen ensayos de bloqueo competitivo para determinar la especificidad por los epítopos de CD22 en Stein et al., Cancer Immunol. Immunother. 37:293 (1993), y en Tedder et al., patente de EE.UU. nº 5.484.892 (1996).

La patente de Tedder describe también la producción de mutantes de CD22, que carecen de uno o más dominios similares a inmunoglobulina. Estas proteínas mutantes se usaron para determinar que los dominios similares a inmunoglobulina 1, 2, 3 y 4 corresponden a los epítopos A, D, B y C, respectivamente. Así, la unión de un anticuerpo de ensayo con un panel de proteínas CD22 que carecen de dominios similares a inmunoglobulinas particulares puede identificar también la especificidad por los epítopos de CD22.

Las composiciones terapéuticas descritas en el presente documento son útiles para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias, en particular para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias de Clase III que incluyen las trombocitopenias inmunomediadas tales como púrpura trombocitopénica idiopática aguda y púrpura trombocitopénica idiopática crónica, dermatomiositis, corea de Sydenham, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico, nefritis lúpica, fiebre reumática, síndromes poliglandulares, penfigoide ampolloso, diabetes mellitus, púrpura de Henoch-Schonlein, nefritis postestreptocócica, eritema nudoso, arteritis de Takayasu, enfermedad de Addison, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, sarcoidosis, colitis ulcerosa, eritema multiforme, nefropatía por IgA, poliarteritis nudosa, espondilitis anquilosante, síndrome de Goodpasture, tromboangitis obliterante, síndrome de Sjogren, cirrosis biliar primaria, tiroiditis de Hashimoto, tirotoxicosis, esclerodermia, hepatitis activa crónica, polimiositis/dermatomiositis, policondritis, pénfigo vulgar, granulomatosis de Wegener, nefropatía membranosa, esclerosis lateral amiotrófica, tabes dorsalis, arteritis de células gigantes/polimialgia, anemia perniciosa, glomerulonefritis rápidamente progresiva y alveolitis fibrosante. En este contexto, las composiciones terapéuticas se usan para disminuir en la sangre el número de células B normales durante un periodo prolongado.

Aunque el anticuerpo LL2 desnudo es la composición terapéutica principal para el tratamiento de las enfermedades autoinmunitarias, la eficacia de tal terapia con anticuerpo desnudo se puede incrementar complementando el anticuerpo LL2 desnudo con otras terapias descritas en el presente documento. En tales regímenes multimodales, la composición terapéutica complementaria se puede administrar antes, al mismo tiempo o después de la administración del anticuerpo LL2 desnudo. La terapia multimodal de enfermedades autoinmunitarias de Clase III puede comprender la coadministración de agentes terapéuticos que se dirigen contra las células T, las células plasmáticas o los macrófagos, tales como anticuerpos dirigidos contra epítopos de las células T, más en particular contra los epítopos de CD4 y CD5. También se pueden coadministrar gammaglobulinas. En algunos casos, puede ser deseable coadministrar fármacos inmunosupresores tales como corticoesteroides y posiblemente también fármacos citotóxicos. En este caso, se pueden usar dosis más bajas de corticoesteroides y de fármacos citotóxicos en comparación con las dosis usadas en las terapias convencionales, por lo que se reducen los efectos secundarios negativos de estos agentes terapéuticos. Las composiciones terapéuticas complementarias se pueden administrar antes, al mismo tiempo o después de la administración del anticuerpo LL2 desnudo.

En una realización alternativa, los anticuerpos hacia CD22, CD20, CD19, y CD74 o el antígeno HLA-DR se conjugan con un fármaco, toxina, enzima, hormona, citocina, inmunomodulador, compuesto de boro o radioisótopo terapéutico, o se puede usar una proteína de fusión de un anticuerpo y una toxina. Estos conjugados y proteínas de fusión se usan en combinación con el anticuerpo LL2 desnudo.

Los fármacos que se sabe que actúan sobre las células B, las células plasmáticas y/o las células T son especialmente útiles de acuerdo con la presente invención, conjugados con un anticuerpo hacia células B, o administrados en forma de un componente separado en combinación con el anticuerpo LL2 desnudo. Estos incluyen metotrexato, fenilbutirato, briostatina, ciclofosfamida, etopósido, bleomicina, doxorrubicina, carmustina, vincristina, procarbazina, dexametasona, leucovorina, prednisona, maitansinoides tales como DM1, caliqueamicina, rapamicina, leflunomida, FK506, immuran, fludarabina, azatiopina, micofenolato, y ciclosporina. Se prefieren especialmente los fármacos tales como immuran, metotrexato y fludarabina, que actúan tanto sobre las células B como sobre las células T. Son ilustrativas de las toxinas que se emplean de manera adecuada de acuerdo con la presente invención la ricina, abrina, ribonucleasa, DNasa I, enterotoxina-A estafilocócica, proteína antiviral de fitolaca, gelonina, toxina de la difteria, exotoxina de Pseudomonas, endotoxina de Pseudomonas y RNAsas, tales como onconasa. Véase, por ejemplo, Pastan et al., Cell 47:641 (1986), y Goldenberg, CA - A Cancer Journal for Clinicians 44:43 (1994). Los expertos en la técnica conocen otros fármacos y toxinas adecuadas.

También se pueden usar agonistas y antagonistas de citocinas en las terapias multimodales según la presente invención. El factor de necrosis tumoral \alpha (TNF\alpha) y la interleucina-1 (IL-1) son importantes en la mediación de la inflamación en la artritis reumatoide. Por lo tanto, los reactivos anti-TNF\alpha, tales como Infiximab y Etanercept (Enbrel), son útiles en la terapia multimodal según la invención, así como los reactivos anti-IL-1.

Otros agentes terapéuticos secundarios útiles en las terapias multimodales son IL-2 y GM-CSF, que se pueden conjugar con un anticuerpo anti-células-B, o combinar con un anticuerpo anti-células-B desnudo como componente separado.

En general, la dosis de anticuerpos administrados variará dependiendo de factores tales como la edad, el peso, la altura, el sexo, la condición médica general y el historial médico previo del paciente. En general, es deseable proporcionar al receptor una dosis de componente de anticuerpo, inmunoconjugado o proteína de fusión que esté en el intervalo de alrededor de 1 pg/kg a 10 mg/kg (cantidad de agente/peso corporal del paciente), aunque se puede administrar una dosis menor o mayor según lo dicten las circunstancias.

La administración de los anticuerpos a un paciente puede ser intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, intrapleural, intratecal o mediante perfusión a través de un catéter regional, o mediante inyección intralesional directa. Cuando se administran proteínas terapéuticas mediante inyección, la administración puede ser mediante infusión continua o mediante inyecciones rápidas simples o múltiples. La inyección intravenosa proporciona un modo útil de administración debido a la minuciosidad de la circulación en la distribución rápida de anticuerpos.

En las realizaciones preferidas, el anticuerpo LL2 desnudo se administra a dosis proteicas bajas, tales como 20 miligramos a 2 gramos de proteína por dosis, administradas una vez, o de forma repetida, parenteralmente. De manera alternativa, el anticuerpo LL2 desnudo se administra en dosis de 20 a 1000 miligramos de proteína por dosis, o 20 a 500 miligramos de proteína por dosis, o 20 a 100 miligramos de proteína por dosis.

Los anticuerpos, solos o conjugados con liposomas, se pueden formular según métodos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles, mediante los cuales las proteínas terapéuticas se combinan en una mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Se dice que una composición es un "vehículo farmacéuticamente aceptable" si su administración puede ser tolerada por un paciente receptor. La solución salina tamponada con fosfato es un ejemplo de un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los expertos en la técnica conocen bien otros vehículos adecuados. Véase, por ejemplo, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19ª Ed. (1995).

Para la terapia, se administran los anticuerpos a un paciente en una cantidad terapéuticamente eficaz en un vehículo farmacéuticamente aceptable. A este respecto, una "cantidad terapéuticamente eficaz" es una que es fisiológicamente significativa. Un agente es fisiológicamente significativo si su presencia da como resultado un cambio detectable en la fisiología de un paciente receptor. En el presente contexto, un agente es fisiológicamente significativo si su presencia da como resultado la inactivación o la destrucción de las células B seleccionadas como objetivo.

Se pueden emplear métodos farmacéuticos adicionales para controlar la duración de la acción de un anticuerpo en una aplicación terapéutica. Se pueden preparar preparaciones de liberación controlada por medio del uso de polímeros para acomplejar o adsorber el anticuerpo. Por ejemplo, los polímeros biocompatibles incluyen matrices de poli(etileno-acetato de vinilo) y matrices de copolímero de polianhídrido de un dímero de ácido esteárico y ácido sebácico. Sherwood et al., Bio/Technology 10:1446 (1992). La velocidad de liberación de un anticuerpo desde tal matriz depende del peso molecular de la proteína, la cantidad de anticuerpo dentro de la matriz, y el tamaño de las partículas dispersadas. Saltzman et al., Biophys. J. 55:163 (1989); Sherwood et al., anteriormente mencionado. Se describen otras formas farmacéuticas sólidas en REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19ª ed. (1995).

La presente invención, así descrita en general, se entenderá más fácilmente con referencia a los siguientes ejemplos, que se proporcionan a modo de ilustración y no pretenden ser limitantes de la presente invención.

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Ejemplo 1

Tratamiento de un paciente con LL2 humanizado

Un paciente se sometió a terapia con un anticuerpo monoclonal LL2 humanizado. Se infundieron al paciente de forma intravenosa 634 mg de anticuerpo LL2 humanizado, y el tratamiento se repitió 6, 13, y 20 días después de este tratamiento inicial. Inmediatamente después de la última dosis, el valor en suero de hLL2 fue 389,7 \mug/ml, y un mes después de la última dosis el valor en suero de hLL2 fue 186,5 \mug/ml. Las células B normales en la sangre antes de la terapia con hLL2 disminuyeron significativamente en la sangre 2 meses tras la terapia, y hubo una reaparición mínima de células B normales cinco meses tras la terapia. Los resultados se muestran en la siguiente tabla.

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TABLA 1 Células B y células T en sangre

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Ejemplo 2

Tratamiento de un paciente con púrpura trombocitopénica idiopática crónica

Una mujer de 50 años con púrpura trombocitopénica idiopática crónica se ha tratado con prednisona, gammaglobulinas, y dexametasona a dosis elevada, pero la enfermedad progresa. Se somete a esplenectomía, lo cual no consigue estabilizar la enfermedad. El recuento de plaquetas cae a menos de 20.000/microlitro, y se incrementa la frecuencia de episodios hemorrágicos. La paciente se trata entonces con hLL2, 480 mg de forma intravenosa cada semana, durante un período de seis semanas. Cuatro semanas después de la última dosis de hLL2 se incrementa el número de plaquetas en un 100%, y los episodios hemorrágicos se hacen infrecuentes. Tres meses después de la última infusión de anticuerpos la enfermedad está en remisión.

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Ejemplo 3

Tratamiento un paciente con artritis reumatoide progresiva

Un hombre de 60 años, con artritis reumatoide progresiva grave de las articulaciones de los dedos, muñecas y codos, no ha respondido a la terapia con metotrexato, y obtiene solamente un alivio leve cuando se le aplica terapia con Enbrel. El paciente se trata entonces con hLL2, 600 mg de forma intravenosa cada semana, durante un período de ocho semanas. Después de 3 semanas se observa una mejora del 30% en las medidas de la actividad de la enfermedad, que se mantiene durante 6 meses. El paciente se trata de nuevo con hLL2, con la misma dosis y la misma frecuencia. El paciente continúa mejorando, y 6 meses después de la segunda terapia con hLL2 se observa una mejora del 70%. No se observan anticuerpos anti-hLL2 humanos en ningún momento durante o después de la terapia con hLL2. Aunque las células B normales están significativamente reducidas en la sangre, no se observan complicaciones infecciosas u otra toxicidad relacionada con el fármaco.

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Ejemplo 4

Tratamiento de un paciente con miastenia gravis

Un hombre de 55 años no ha respondido a ninguna de las terapias convencionales para miastenia gravis, y es ingresado en una unidad de terapia intensiva neurológica. El paciente se estabilizó mediante plasmaféresis, y se le administró inmunoglobulina intravenosa para reducir el título del anticuerpo anti-receptor de acetilcolina. El paciente permaneció en cama, y después se trató con hLL2, 800 mg de forma intravenosa cada semana, durante un período de seis semanas. Una semana después de la última dosis de hLL2, se observó una caída del 70% de los linfocitos B, y se observó una caída significativa del título de anti-acetilcolina. Dos meses después de la última dosis de hLL2 el paciente tenía movilidad, y se le dio de alta del hospital.

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Ejemplo 5

Terapia de combinación de artritis reumatoide progresiva

Otro paciente con artritis reumatoide progresiva grave de las articulaciones de los dedos, muñecas y codos no ha respondido a la terapia con metotrexato, y obtiene solamente un alivio leve cuando se le aplica terapia con Enbrel. El paciente se trata entonces con 300 mg de hLL2 y de Rituximab, de forma intravenosa cada semana, durante un período de cinco semanas. Se observa una mejora significativa en las medidas de la actividad de la enfermedad, que se mantiene durante 6 meses. El paciente se trata de nuevo con el mismo régimen y continúa mejorando. Seis meses después de la segunda terapia se observa una mejora adicional. No se observan anticuerpos anti-hLL2 o anti-Rituximab humanos en ningún momento durante o después de la terapia. Aunque las células B normales están significativamente reducidas en la sangre, no se observan complicaciones infecciosas u otra toxicidad relacionada con el fármaco.

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Ejemplo 6

Terapia de combinación de púrpura trombocitopénica idiopática crónica

Se ha tratado un paciente con púrpura trombocitopénica idiopática crónica con prednisona, gammaglobulinas, y dexametasona a dosis elevada, pero la enfermedad progresa. Se somete a esplenectomía, lo cual no consigue estabilizar la enfermedad. El recuento de plaquetas cae a menos de 20.000/microlitro, y se incrementa la frecuencia de episodios hemorrágicos. Este paciente se trata con 10 mCi de 90-itrio-hLL2 y 200 mg de hLL2, seguido de dosis de 300 mg de hLL2 y de Rituximab, de forma intravenosa cada semana, durante un período de seis semanas. Cuatro semanas después de la última dosis de hLL2 y Rituximab se incrementa el número de plaquetas en un 150%, y los episodios hemorrágicos se hacen infrecuentes. Tres meses después de la última infusión de anticuerpos la enfermedad está en remisión.

Claims (21)

1. El uso de al menos un anticuerpo LL2 desnudo murino, quimérico, completamente humano o humanizado en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmunitario.

2. El uso según la reivindicación 1 en el que dicho anticuerpo es LL2 humanizado.

3. El uso según cualquier reivindicación precedente, en el que dicho medicamento está en forma de unidades de dosis de 20 a 200 mg por dosis, para la administración parenteral.

4. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento comprende una diversidad de dichas dosis parenterales para la administración parenteral repetida.

5. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 4, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo quimérico.

6. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento comprende al menos dos anticuerpos monoclonales desnudos dirigidos hacia epítopos de CD22 diferentes no bloqueantes.

7. El uso según la reivindicación 1, en el que dichas enfermedades autoinmunitarias se seleccionan del grupo que consiste en púrpura trombocitopénica idiopática aguda, púrpura trombocitopénica idiopática crónica, dermatomiositis, corea de Sydenham, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico, nefritis lúpica, fiebre reumática, síndromes poliglandulares, penfigoide ampolloso, diabetes mellitus, púrpura de Henoch-Schonlein, nefritis postestreptocócica, eritema nudoso, arteritis de Takayasu, enfermedad de Addison, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, sarcoidosis, colitis ulcerosa, eritema multiforme, nefropatía por IgA, poliarteritis nudosa, espondilitis anquilosante, síndrome de Goodpasture, tromboangitis obliterante, síndrome de Sjogren, cirrosis biliar primaria, tiroiditis de Hashimoto, tirotoxicosis, esclerodermia, hepatitis activa crónica, polimiositis/dermatomiositis, policondritis, pénfigo vulgar, granulomatosis de Wegener, nefropatía membranosa, esclerosis lateral amiotrófica, tabes dorsalis, arteritis de células gigantes/polimialgia, anemia perniciosa, glomerulonefritis rápidamente progresiva y alveolitis fibrosante.

8. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento se usa en combinación con un anticuerpo anti-CD20 desnudo.

9. El uso según la reivindicación 8, en el que dicho anti-CD20 desnudo es un anticuerpo anti-CD20 quimérico, humanizado o humano.

10. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento se usa en combinación con un anticuerpo anti-CD74 desnudo.

11. El uso según la reivindicación 10, en el que dicho anti-CD74 desnudo es un anticuerpo anti-CD74 quimérico, humanizado o humano.

12. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento se administra con un agente terapéutico secundario dirigido contra las células T, las células plasmáticas, los macrófagos o las citocinas inflamatorias, en el que dicho agente terapéutico secundario está conjugado con un anticuerpo anti-células B o se administra por separado.

13. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento se administra con un agente terapéutico secundario que es un conjugado de un anticuerpo anti-células B con IL-2 o GM-CSF.

14. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento se administra con un agente terapéutico secundario dirigido contra una citocina inflamatoria.

15. El uso según la reivindicación 14, en el que dicho agente terapéutico secundario es un agente anti-TNF\alpha o anti-IL-1.

16. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento se administra en combinación con un agente terapéutico secundario que es un conjugado de un anticuerpo anti-CD20, anti-CD22 o anti-CD74 con un fármaco, toxina, enzima, citocina, hormona, compuesto de boro o radionucleido terapéutico.

17. El uso según la reivindicación 16, en el que dicho anticuerpo desnudo y dicho anticuerpo conjugado se dirigen contra el mismo antígeno o epítopo.

18. El uso según la reivindicación 16, en el que dicho anticuerpo desnudo y dicho anticuerpo conjugado se dirigen contra antígenos o epítopos diferentes.

19. El uso según la reivindicación 16, en el que dicho conjugado es un conjugado con un fármaco en el que el fármaco es un fármaco que actúa contra las células B, las células plasmáticas o las células T o contra una citocina inflamatoria.

20. El uso según la reivindicación 16, en el que dicho conjugado comprende una enzima y en el que dicha enzima es una RNAsa.

21. El uso según la reivindicación 16, en el que dicho conjugado es un conjugado con un fármaco en el que el fármaco se selecciona del grupo que consiste en metotrexato, fenilbutirato, briostatina, ciclofosfamida, etopósido, bleomicina, doxorrubicina, carmustina, vincristina, procarbazina, dexametasona, leucovorina, prednisona, maitansinoides tales como DM1, caliqueamicina, rapamicina, leflunomida, FK506, immuran, fludarabina, azatiopina, micofenolato, y ciclosporina.