ES2333784T3

ES2333784T3 - Procedimiento para la preparacion de derivados de equinocandina.

Info

Publication number: ES2333784T3
Application number: ES02805374T
Authority: ES
Inventors: Philippe Boffelli; Agnes Brouillard; Colette Colladant; Serge Droux; Michel Elter; Didier Ferroud; Guy Lemaitre; Joseph Paladino
Original assignee: Novexel SA
Current assignee: Novexel SA
Priority date: 2001-12-14
Filing date: 2002-12-12
Publication date: 2010-03-01
Anticipated expiration: 2022-12-12
Also published as: US20070105760A1; CY1110694T1; US20050032679A1; TWI322820B; EA007964B1; KR20040066167A; AU2002364991B9; BR0214937A; US20100273977A1; HUP0402602A3; WO2003054001A2; MXPA04005484A; CN1604908A; PT1456229E; CO5590934A2; CN100584859C; EA200400806A1; DE60233589D1; WO2003054001A3; HUP0402602A2

Abstract

Procedimiento para la preparación de los compuestos de Fórmula (I): **(Ver fórmula)** en la que R representa una cadena lineal o ramificada o cíclica que contiene hasta 30 átomos de carbono, conteniendo opcionalmente uno o más heteroátomos y uno o más heterociclos, que comprende las siguientes etapas: a) un compuesto de Fórmula (II): **(Ver fórmula)** se somete a la acción de un ácido de fórmula R-CO2H, encontrándose dicho ácido en una forma activada aislada o no aislada, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (III): **(Ver fórmula)** b) en caso dado, el compuesto de fórmula (III) se somete a una reacción de alquilación del alcohol en la posición 5 mediante la acción de un alcohol de fórmula Alk-OH, en presencia de PPTS, siendo Alk un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con el fin de obtener el compuesto de fórmula (III''): **(Ver fórmula)** c) el compuesto de Fórmula (III) ó (III'') se somete a una reacción de deshidratación, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (IV): **(Ver fórmula)** d) el compuesto de Fórmula (IV) se somete a una reacción de aminación reductora mediante la acción de etilendiamina en presencia de un agente reductor tal como NaBH3CN, en presencia de un ácido de Lewis o de NaBH(OCOR''3), representando OCOR'' Boc-L-Pro, Bzl-L-Pro o cualquier otro aminoácido ópticamente activo así como cualquier otro ácido carboxílico quiral o no quiral, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (I) tal como se define anteriormente, que comprende una mayoría de uno de los isómeros activos, sometiéndose entonces dicho compuesto de Fórmula (I), en caso dado y en cualquier orden adecuado, a una o más de las siguientes operaciones: - purificación por cromatografía, - purificación por cristalización, - la acción de una base, - salificación.

Description

Procedimiento para la preparación de derivados de equinocandina.

El objeto de la presente invención es un proceso para la preparación de derivados de equinocandina, los intermedios y productos obtenidos y su utilización como medicamentos antifúngicos.

Se conocen en la técnica anterior numerosos compuestos que tienen actividad antifúngica. Se pueden mencionar, en particular, los derivados de equinocandina tal como se definen en la Solicitud Internacional WO 99/29716 y en especial 1-[4-[(2-aminoetil)amino]-N2-[[4'-(octiloxi)[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina, equinocandina B, como forma 4S o 4R o como mezcla de estereoisómeros y sus análogos acilados, así como sus sales de adición de ácidos.

El objetivo de la presente invención consiste en proporcionar un nuevo procedimiento para la preparación de derivados de equinocandina y obtener nuevas sales de estos últimos.

La equinocandina se puede presentar en forma de dos epímeros denominados isómero A e isómero B, que corresponden a las configuraciones R y S del sustituyente en la posición 4.

Uno de los objetos de la presente invención consiste en obtener, en el rso del procedimiento, una parte mayoritaria de uno de los dos isómeros, es decir, al menos una cantidad superior al 50%, del isómero denominado forma A, que corresponde al compuesto farmacológicamente activo de Fórmula (I), lo cual no es el caso para el proceso según la WO 99/29716, donde el isómero A activo obtenido durante el proceso antes de purificación en columna cromatográfica es minoritario.

Además, otro objeto de la presente invención consiste en evitar la purificación de los productos intermedios mediante cromatografía y obtener productos cristalizados, lo que permite un aumento significativo del rendimiento.

Por tanto, un objeto de la invención es un procedimiento para la preparación de los compuestos de Fórmula (I):

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en la que R representa una cadena lineal o ramificada o cíclica que contiene hasta 30 átomos de carbono, conteniendo opcionalmente uno o más heteroátomos y uno o más heterociclos, que comprende las siguientes etapas:

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a): un compuesto de Fórmula (II):

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: se somete a la acción de un ácido de fórmula R-CO_{2}H, siendo R tal como se define anteriormente, encontrándose dicho ácido, si es conveniente, en una forma activada aislada o no aislada, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (III):

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b): si es necesario, el compuesto de fórmula (III) se somete a una reacción de alquilación del alcohol en la posición 5 mediante la acción de un alcohol de fórmula Alk-OH, en presencia de PPTS, siendo Alk un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con el fin de obtener el compuesto de fórmula (III'):

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c): el compuesto de Fórmula (III) ó (III') se somete a una reacción de deshidratación, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (IV):

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d): el compuesto de Fórmula (IV) se somete a una reacción de aminación reductora mediante la acción de etilendiamina en presencia de un agente reductor tal como NaBH_{3}CN, en presencia de un ácido de Lewis o de NaBH(OCOR'_{3}), representando OCOR' Boc-L-Pro, Bzl-L-Pro o cualquier otro aminoácido ópticamente activo así como cualquier otro ácido carboxílico quiral o no quiral, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (I) tal como se define anteriormente, que comprende una mayoría de uno de los isómeros activos, sometiéndose entonces dicho compuesto de Fórmula (I), en caso dado, y en cualquier orden adecuado, a una o más de las siguientes operaciones:

: - purificación por cromatografía,

: - purificación por cristalización,

: - la acción de una base,

: - salificación.

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Preferentemente, la invención tiene por objeto un procedimiento tal como se ha definido anteriormente en el que los compuestos de Fórmulas (I), (III), (III') o (IV) contienen un grupo R que representa los siguientes grupos:

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Preferentemente, la invención tiene por objeto un proceso tal como se ha definido anteriormente en el que los compuestos de Fórmulas (I), (III), (III') o (IV) contienen un grupo R que representa el siguiente grupo:

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El compuesto de Fórmula (II) se prepara de acuerdo con el método descrito en la Solicitud Internacional WO 99/29716, página 18 (Preparación 2, "Nucleus of deoxymulundocandin").

La activación del ácido de fórmula R-CO_{2}H se lleva a cabo de acuerdo con los métodos estándar conocidos por los especialistas en la técnica (Journet M. y col., J. Org. Chem. (1999), 64, 2411-2417; Pöchlauer P. y col., Tetrahedron 54 (1998) 3489-3494; Kunushima y col., Tetrahedron (1999) 55 13159-13170). En particular, se utiliza pentafluorofenol para obtener el éster activado de pentafluorofenol, el cual se aísla antes de su utilización en la reacción de acilación de la amina. Otro método consiste en la utilización de N-hidroxisuccinimida (eventualmente N-hidroxibenzotriazol) con el fin de obtener el éster activado de N-hidroxisuccinimida (eventualmente N-hidroxibenzotriazol), el cual también se aísla.

La etapa de acilación subsiguiente para obtener un compuesto de Fórmula (III) se lleva a cabo en presencia de una base de acuerdo con los métodos conocidos o los especialistas en la técnica y viene ilustrada en los ejemplos descritos a continuación.

También es posible llevar a cabo la acilación sin aislar el éster activo y sin añadir una base mediante una operación en presencia de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metil-morfolinio (DMTMM). Esta última alternativa tiene la ventaja de eliminar una etapa de aislamiento y, por tanto, mejorar el rendimiento.

La etapa de deshidratación del compuesto de Fórmula (III) para obtener el compuesto de Fórmula (IV) se puede llevar a cabo de la siguiente manera:

-: La etapa de deshidratación se lleva a cabo en presencia de un hidrácido halogenado tal como HBr en presencia de Mgl_{2}. En este caso, no es necesario pasar por el intermedio de Fórmula (III').

-: A modo de variante, puede resultar deseable someter a alquilación el grupo hidroxilo en la posición 5 antes de proceder a la etapa de deshidratación. Por ejemplo, la metilación se puede llevar a cabo con metanol en presencia de PPTS (para-toluenosulfonato de piridinio) con el fin de obtener un compuesto de Fórmula (III') donde Alk representa metilo.

-: Finalmente, esta reacción de deshidratación se puede llevar a cabo también en presencia de bromuro de alfa-acetoxiisobutirilo (AIBB) en dioxano. En este último caso, la operación se puede llevar a cabo en el compuesto de Fórmula (III') o directamente en el compuesto de Fórmula (III) en presencia de Mgl_{2}.

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Preferentemente, el compuesto obtenido después de la reacción de deshidratación se purifica después por cristalización a partir de una mezcla de DMF (dimetilformamida)/MeCN (acetonitrilo). Se pueden utilizar también las mezclas de los siguientes disolventes: DMF/acetona y DMF/AcOEt (acetato de etilo).

La reacción de aminación reductora de los compuestos de Fórmula (IV) para obtener la equinocandina de Fórmula (I) se lleva a cabo de acuerdo con los métodos descritos en la literatura y conocidos por los especialistas en la técnica (Yamada K. y col., J. Chem. Soc. Perkin Trans I (1983) 265-270; Hutchins R. y col., Org. prep. Proc. Int. 11(5) (1979) 201-246). En particular, se utiliza etilendiamina en presencia de NaBH_{3}CN mediante el acoplamiento con TiCl_{4} o cualquier otro ácido de Lewis o en presencia de NaBH(OCOR'_{3}), representando OCOR' Boc-L-Pro, Bzl-L-Pro o cualquier otro aminoácido ópticamente activo así como cualquier otro ácido carboxílico quiral o no quiral.

El acoplamiento del reactivo de reducción NaBH_{3}CN con un ácido de Lewis, en particular TiCl_{4}, es un elemento esencial para la selectividad y, por tanto, para obtener una mezcla del isómero A y del isómero B en la que el isómero A activo es mayoritario. En general, se obtiene una proporción de isómero A superior al 70%, y en particular comprendida entre el 80 y el 85%. La situación es similar con los demás reactivos mencionados anteriormente.

En particular, en cuanto al compuesto de Fórmula (Ia), en esta etapa se obtiene una relación del isómero A/isómero B del 80-85%/20-15% respectivamente, mientras que el proceso tal como se describe en la WO 97/29716 conduce a una mezcla en la que el isómero A es minoritario o equivalente (mezcla racémica de A y B).

Durante la etapa de aminación reductora, si es conveniente se puede aislar un intermedio de reacción antes de la reducción, siendo, por tanto, un objeto de la presente invención. Se trata de una imidazolidina de Fórmula (IV') o (IV'a) en la que R representa un grupo -Ph-Ph-O-C_{8}H_{17}.

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Puede resultar deseable purificar el producto o los productos obtenidos mediante cromatografía o recristalización. Esta operación se lleva a cabo de acuerdo con los métodos habituales conocidos por los especialistas en la técnica. En particular, cuando el producto obtenido se encuentra en forma de una sal de ácido trifluoroacético después de la cromatografía, es conveniente eliminar esta sal mediante la acción de una base con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (I) en forma de base.

La reacción de salificación se lleva a cabo de acuerdo con los métodos habituales conocidos por los especialistas en la técnica. Se lleva a cabo la preparación del clorhidrato o del diclorhidrato en presencia de ácido clorhídrico en metanol.

Más en particular, un objeto de la presente invención consiste en un procedimiento para la preparación de los compuestos de Fórmula (Ia):

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que comprende las siguientes etapas:

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a): un compuesto de Fórmula (II):

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: se somete a la acción de un ácido de Fórmula C_{8}H_{17}-O-Ph-Ph-CO_{2}H, encontrándose dicho ácido, en caso dado, en una forma activada, aislada o no aislada, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (IIIa):

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b): en caso dado, el compuesto de Fórmula (IIIa) se somete a una reacción de alquilación del alcohol en la posición 5 mediante la acción de metanol en presencia de PPTS con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (IIIa'):

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c): el compuesto de Fórmula (IIIa) o (IIIa') se somete a una reacción de deshidratación, para obtener un compuesto de Fórmula (IVa):

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d): el compuesto de Fórmula (IVa) se somete a una reacción de aminación reductora mediante la acción de etilendiamina en presencia de un agente reductor tal como NaBH_{3}CN acoplado con TiCl_{4}, NaBH(Boc-L-Pro)_{3} o NaBH(Bzl-L-Pro)_{3}, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (Ia) tal como se ha definido anteriormente, que comprende una mayoría de uno de los isómeros activos, sometiéndose dicho compuesto de Fórmula (Ia) a una o más de las siguientes operaciones en un orden apropiado:

: - cromatografía,

: - cristalización,

: - acción de una base,

: - salificación mediante la acción de ácido clorhídrico.

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El compuesto de Fórmula (Ia) se puede encontrar en forma de una mezcla de dos epímeros (carbono asimétrico en la posición 4) que se denominan isómero A o isómero B. El compuesto de Fórmula (I) obtenido según el procedimiento ya definido anteriormente permite obtener una mezcla isómero A/isómero B de aproximadamente un 70-85%/30-15%.

Las etapas de purificación/cristalización y salificación que se llevan a cabo después de la reacción de aminación reductora permiten obtener selectivamente el epímero A activo del compuesto de Fórmula (Ia).

Preferentemente, el compuesto de Fórmula (Ia) se purifica mediante cromatografía sobre sílice y después por cromatografía en fase inversa utilizando una mezcla de disolventes orgánicos, agua y ácido trifluoroacético, para obtener la sal de ácido trifluoroacético del compuesto de Fórmula (Ia). Luego, se somete esta sal a la acción de una base, por ejemplo por la acción de una disolución acuosa de bicarbonato de sodio, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (Ia) en forma de base. Después, la base obtenida se salifica mediante la acción de ácido clorhídrico para obtener la sal correspondiente, a saber el diclorhidrato del compuesto de Fórmula (Ia).

Por tanto, un objeto particular de la invención consiste en un procedimiento tal como se ha definido anteriormente, caracterizado porque el compuesto de Fórmula (Ia) se somete sucesivamente a las siguientes operaciones:

a): purificación por cromatografía sobre sílice y después por cromatografía en fase inversa utilizando una mezcla de disolventes orgánicos, agua y ácido trifluoroacético, con el fin de obtener la sal del ácido trifluoroacético del compuesto de Fórmula (Ia);

b): acción de una base, por ejemplo acción de una disolución acuosa de bicarbonato de sodio, para obtener el compuesto de Fórmula (Ia) en forma de base;

c): salificación mediante la acción de ácido clorhídrico, con el fin de obtener la sal correspondiente, a saber el diclorhidrato del compuesto de Fórmula (Ia).

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Por tanto, un objeto particular de la invención consiste en un procedimiento tal como se ha definido anteriormente, caracterizado porque la reacción de activación del ácido se lleva a cabo en presencia de pentafluorofenol, N-hidroxisuccinimida o eventualmente N-hidroxibenzotriazol.

Por tanto, un objeto particular de la invención consiste en un procedimiento tal como se ha definido anteriormente, caracterizado porque la reacción de acilación en presencia de un ácido aislado activado se lleva a cabo en presencia de diisopropiletilamina.

Por tanto, un objeto particular de la invención consiste en un procedimiento tal como se ha definido anteriormente, caracterizado porque la reacción de activación y la posterior reacción de acilación en presencia de un ácido aislado activado se llevan a cabo en presencia de N-metilpirrolidona y DMTMM.

Por tanto, un objeto particular de la invención consiste en un procedimiento tal como se ha definido anteriormente, caracterizado porque la reacción de deshidratación se lleva a cabo en presencia de BAIB y, si es el caso, Mgl_{2}.

Por tanto, un objeto particular de la invención consiste en un procedimiento tal como se ha definido anteriormente, caracterizado porque la reacción de deshidratación se lleva a cabo en presencia de HBr-AcOH y Mgl_{2}.

Por tanto, un objeto particular de la invención consiste en un procedimiento tal como se ha definido anteriormente, caracterizado porque el producto que tiene su origen en la deshidratación se purifica mediante cristalización a partir de una mezcla dimetilformamida (DMF)/acetonitrilo, DMF/acetona o DMF/AcOEt.

Por tanto, un objeto particular de la invención consiste en un procedimiento tal como se ha definido anteriormente, caracterizado porque la reacción de aminación reductora se lleva a cabo en presencia de un agente reductor seleccionado de entre NaBH_{3}CN acoplado con TiCl_{4}, NaBH(Boc-L-Pro)_{3} y NaBH(Bzl-L-Pro)_{3}.

Por tanto, un objeto de la invención consiste también en el diclorhidrato de 1-[4-[(2-aminoetil)amino]-N2-[[4'-(octiloxi)-[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina, equinocandina B, en su forma 4S o 4R o en forma de una mezcla de los dos estereoisómeros.

El proceso descrito anteriormente permite que el isómero A del compuesto de Fórmula (I) o (Ia) se obtenga de forma mayoritaria antes de la separación de los isómeros mediante cromatografía.

En la WO 99/29716 se prepara 1-[4-[(2-aminoetil)amino]-N2-[[4'-(octiloxi)-[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina, equinocandina B, en forma de base o de sal de ácido trifluoroacético (Ejemplo 14). El diclorhidrato tiene la ventaja de poseer mayor estabilidad y mejor solubilidad en agua.

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Ejemplo 1 Diclorhidrato de 1-[4-(2-aminoil)amino]-N2-[[4'-(octiloxi)-[1,1'-bifenil]- 4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina Equinocandina B I): Primera etapa: Acilación del compuesto de Fórmula (IIa) y obtención de un compuesto de Fórmula (III)

1-[(4R,5R)-4,5-dihidroxi-N2-[[4'-(octiloxi)-[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-
treonina]-5-L-serina Equinocandina B.

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Ruta 1: Mediante el éster activado de pentafluorofenol aislado

Etapa 1

Preparación del éster activado: Pentafluorofenil 4'-octiloxibifenil-4-carboxilato

Se introducen en 1 litro de diclorometano 100 g de ácido 4-octiloxibifenil-4'-carboxílico y 62 g de pentafluorofenol. Se agita durante 15 minutos y se añaden durante 15 minutos 69,6 g de N,N'-diciclohexilcarbodiimida en solución en 500 ml de diclorometano. La suspensión de color beige oscuro se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se filtra la diciclohexilurea y se concentra el filtrado. Se lleva a cabo la destilación hasta un volumen constante mediante la adición regular de etanol hasta una temperatura de vapor de 74ºC. El medio de reacción se enfría hasta temperatura ambiente, seguido de agitación durante una hora, filtración y después lavado con etanol. Después del secado, se obtienen 145,7 g del producto deseado en forma de cristales. Rendimiento: 96,5%.

RMN (CDCl_{3}): 8,23-7,72 (AA' BB') 4H; 7,01-7,60 (AA' BB') 4H; 4,02 (t) 2H; 1,82 (quint) 2H; 1,48 (quint) 2H; 1,32 (m) 8H; 0,89 (t) 3H.

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Etapa 2

Acilación

Se introducen 23,2 g del compuesto de Fórmula (II) ("nucleus of deoxymuluncandina" preparado de acuerdo con la Preparación 2 de la WO 99/29716) y 14,1 g del éster obtenido anteriormente en 60 ml de DMF. Se introducen en la suspensión 6,7 ml de diisopropiletilamina y se agita durante 24 horas bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. Se vierte el medio de reacción homogéneo en un litro de agua durante 10 minutos, al mismo tiempo que se agita moderadamente, se agita la suspensión durante 2 horas, se filtra y se lava el sólido con agua. Se seca el sólido al vacío a temperatura ambiente, después se lleva a reflujo en 100 ml de cloruro de metileno, bajo nitrógeno, mientras se agita durante 2 horas (40ºC). Se enfría a temperatura ambiente durante 1 hora, se agita durante 1 hora, se filtra el sólido y se enjuaga tres veces con cloruro de metileno. Se seca al vacío a temperatura ambiente. Se obtienen 26,9 g del producto esperado en forma de un sólido de color beige. Rendimiento: 91,5%.

CCM: Rf: 0,14 placa de sílice; revelado UV 254 nm; eluyente: CH_{2}Cl_{2}-MeOH-agua: 86-13-1.

RMN: (DMSO).

Treonina: 8,16 (1H), 4,85 (1H), 4,41 (1H), 1,13 (3H); \gamma-Hidroxiprolina: 4,42 (1H), 1,92-2,28 (2H), 4,44 (1H), 3,86-3,70 (2H); \beta-Hidroxi-homotirosina: 7,36 (1H), 4,23 (1H), 4,20 (1H), 2,53-2,46 (2H), 6,98 (2H), 6,68 (2H); Serina: 7,40 (1H), 4,86 (1H), 3,66-3,60 (2H); \beta-Hidroxi-\gamma-metilprolina: 4,27 (1H), 4,03 (1H), 2,38 (1H), 0,99 (3H), 3,25-3,93 (2H); "Ornitina": 7,98 (1H), 5,16 (1H), 3,96 (1H), 8,54 (1H), 4,44 (1H), 1,98 (2H); Cadena aromática y octiloxi: 7,98 (2H), 7,71 (2H), 7,68 (2H), 7,02 (2H), 4,00 (2H), 1,72 (2H), 1,41 (2H), 1,28 (2H), 1,25 (2H), 1,31 (2H), 1,27 (2H), 0,86 (3H).

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Ruta 2: Mediante el éster activado de HOSu aislado

Etapa 1

Síntesis del éster activado: 4'-octiloxibifenil-4-carboxilato de 2,5-dioxopirrolidina

Se introducen 9,3 g de ácido de octiloxibifenilo, 93 ml de diclorometano, 3,8 g de N-hidroxisuccinimida, 6,3 g de EDC y se agita durante 3 horas a temperatura ambiente. Se añaden 6 ml de agua, se agita durante 10 minutos, seguido de decantación y reextracción con 45 ml de diclorometano. Se lava la fase orgánica con agua (3 veces, 45 ml) y se seca sobre sulfato de sodio. Después de llevar hasta sequedad bajo vacío, se obtienen 12,05 g del producto esperado en forma de cristales. Rendimiento: 99,9%.

RMN: CDCl_{3}: 8,2-7,65 (AA' BB') 4H; 7,6-6,97 (AA' BB') 4H; 4,02 (t, 2H); 2,93 (amplio) 4H; 1,83 (quint, 2H); 1,45 (m) 2H; 1,3 (m) 8H; 0,9 (t) 3H.

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Etapa 2

Acilación

1,43 g del éster succinimídico preparado anteriormente se disuelven en 6 ml de DMF. Se introducen 2,42 g de "núcleo de desoximuluncandina" (preparado de acuerdo con la Preparación 2 de la WO 99/29716) y 0,66 ml de diisopropiletilamina. Se agita la solución durante 18 horas a temperatura ambiente. Se introducen 35 ml de agua y se agita durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de filtración, se recoge el sólido en 30 ml de agua bajo agitación durante 2 horas en un recipiente de reacción, seguido de filtración y enjuagado con agua. Se seca el sólido al vacío a temperatura ambiente y se obtienen 2,75 g del producto esperado en forma de un sólido de color beige. Rendimiento: 98,2%.

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Ruta 3: Síntesis por activación directa con DMTMM

Se disuelven 2,8 g de "desoximuluncandina" (preparado de acuerdo con la Preparación 2 de la WO 99/29716) en 8,3 ml de N-metilpirrolidona. Se añaden 1,12 g de ácido octiloxibifenílico y 0,95 g de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metil-morfolinio (DMTMM). Después de su agitación durante 24 horas a temperatura ambiente, se vierte el medio de reacción en 133 ml de agua bajo agitación. Se agita durante 20 minutos, se filtra el sólido y se enjagua 3 veces con agua (3 veces, 7 ml). Después de secado al vacío a 40ºC, se obtienen 2,66 g del producto esperado 4 en forma de un sólido de color beige. Rendimiento: 73,5%.

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II): Segunda etapa: Deshidratación - Obtención de un compuesto de Fórmula (IVa)

1-[N2-[4'-(octiloxi)-[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-4-oxo-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina
Equinocandina B.

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Ruta 1: Mediante el compuesto de Fórmula (III'a)

Etapa 1

Alquilación

1-[(4R,5R)-4-hidroxi-5-moxi-N2-[[4'-(octiloxi)[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-
treonina]-5-L-serina Equinocandina B (III'a).

Se disuelven 283 g del producto IIIa obtenido en la primera etapa en 5,67 litros de metanol. Se añaden en una sola vez 22,7 g de p-toluenosulfonato de piridinio mientras se agita y la agitación dura 6 horas bajo reflujo (42ºC) y 12 horas a temperatura ambiente. Se concentra al vacío hasta dos volúmenes residuales, después se añaden 1,2 litros de agua. Se agita la suspensión durante 18 horas. Se filtra el sólido y se enjuaga dos veces con agua. Después de secado en una estufa al vacío a temperatura ambiente, se obtienen 270,5 g del producto esperado en forma de un polvo de color beige. Rendimiento: 94,2%.

NMR: (DMSO): Treonina: 8,11 (1H), 4,84 (1H), 4,41 (1H), 1,11 (3H); \gamma-Hidroxiprolina: 4,40 (1H), 1,91-2,27 (2H), 4,42 (1H), 3,67-3,87 (2H); \beta-Hidroxi-homotirosina: 7,32 (1H), 4,22 (1H), 4,18 (1H), 2,51-2,44 (2H), 6,96 (2H), 6,65 (2H), 9,03 (1H); Serina: 7,36 (1H), 4,87 (1H), 3,58-3,63 (2H); \beta-Hidroxi-\gamma-metilprolina: 4,32 (1H), 4,05 (1H), 2,37 (1H), 1,00 (3H), 3,27-3,94 (2H); "Ornitina": 7,88 (1H), 4,94 (1H), 4,06 (1H), 8,50 (1H), 4,43 (1H), 3,16 (3H), 1,93-2,03 (2H); Cadena aromática y octiloxi: 7,97 (2H), 7,70 (2H), 7,65 (2H), 7,02 (2H), 4,00 (2H), 1,73 (2H), 1,43 (2H), 1,32 (2H), 1,27-1,28 (6H), 0,87 (3H).

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Etapa 2

Deshidratación

265,3 g de producto metoxilado (III'a) obtenido anteriormente se disuelven en 5,3 litros de dioxano. Se añaden durante 20 minutos 71,8 ml de bromuro de \alpha-acetoxiisobutirilo (BAIB). Se agita el medio durante 7 horas. Se añaden durante 15 minutos 4,1 litros de una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (NaHCO_{3}). Se agita durante 15 minutos y el dioxano se destila al vacío a una temperatura que no sobrepasa 30ºC. Se añaden 3,2 litros de agua y se agita durante 15 horas a temperatura ambiente. Se filtra el sólido y se enjagua dos veces con agua. Después de secado en una estufa al vacío, se obtienen 251,2 g del producto esperado en forma de un sólido de color ocre. Rendimiento: 97,5%. Se cristaliza el producto de acuerdo con la preparación descrita a continuación.

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Ruta 2: A partir del producto (IIIa) obtenido en la Etapa a) mediante la acción de BAIB/Mgl_{2}/dioxano

23,26 g de yoduro de magnesio anhidro se suspenden en 500 ml de dioxano y se agita durante 30 minutos. Se introducen 12,25 ml de bromuro de \alpha-acetoxiisobutirilo (BAIB) y la suspensión de color ocre se agita a temperatura ambiente durante 45 minutos. Una solución de 50 g del producto (IIIa) obtenido en la primera etapa disueltos en 400 ml de dioxano se añade durante 1 hora y el embudo de adición se enjuaga con 25 ml de dioxano. Se agita la suspensión durante 19 horas a temperatura ambiente. Se introduce una disolución de 5 g de bicarbonato de sodio disueltos en 50 ml de agua durante 30 minutos (pH de 5-6 al final de la adición). Se agita durante 2 horas, seguido de destilación al vacío hasta una volumen residual de 250 ml a una temperatura interna inferior a 35ºC. Se reestablece la presión atmosférica de nitrógeno y se añaden 200 ml de dimetilformamida, seguido de destilación al vacío hasta un volumen residual de 250 ml y esta solución se vierte, a temperatura ambiente, en 2,8 litros de agua. Después de enjuagado con DMF, se agita durante 1 hora. Se filtra el sólido y se enjuaga con agua. Se seca el sólido durante 24 horas al vacío a 30ºC. Se obtienen 46 g del producto esperado en forma de un sólido de color beige. Rendimiento: 98,6%. Entonces, se cristaliza el producto de acuerdo con el método descrito a continuación.

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Ruta 3: A partir del producto IIIa obtenido en la primera etapa mediante la acción de HBr-AcOH/Mgl_{2}/MEC

10 g del producto obtenido en la Etapa a) se disuelven en 180 ml de metil etil cetona (MEC). Se introducen 4,65 g de yoduro de magnesio anhidro y 10 ml de MEC. Se agita durante 35 minutos a temperatura ambiente, seguido de enfriamiento a 20ºC. Se introducen 3 ml de una solución al 33% de HBr en AcOH. Se agita la suspensión durante 4 horas a 20ºC. Se añaden 10 ml de una disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (bicarbonato de sodio). Se agita durante 1 hora a 20ºC (disolución). Se vierte la solución en 700 ml de agua durante 2 horas mientras se destila la MEC al vacío a 40ºC. Se lleva a cabo la destilación hasta un volumen residual de 430 ml. Se añaden 100 ml de agua y la destilación continúa hasta un volumen residual de 430 ml. Se repite la operación dos veces. Se recoge la suspensión a temperatura ambiente y se agita durante toda la noche. Se filtra el sólido y se lava con agua 3 veces con 50 ml. Después de su secado a vacío a temperatura ambiente, se obtienen 9,3 g del producto esperado en forma de un polvo de color beige. El producto se purifica por cristalización de acuerdo con el método descrito a continuación. Rendimiento: 94,5% sin tener en cuenta los disolventes.

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Cristalización del producto de Fórmula (IVa) obtenido anteriormente (ruta 1, 2 ó 3)

10 g de 1-[N2-[4'-(octiloxi)-[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-4-oxo-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina Equinocandina B (obtenida anteriormente, ruta 1, 2 ó 3) se disuelven durante 1 hora, bajo agitación y a temperatura ambiente, en 30 ml de dimetilformamida (DMF). Se introducen 51 mg de iniciador (cristales del producto obtenido de acuerdo con las rutas 1, 2 ó 3) y se agita durante 2 horas. Después, se introducen regularmente 67 ml de acetonitrilo durante 2 horas. Al final de la introducción, se agita durante 19 horas, seguido de la filtración y enjuagado 3 veces con 10 ml de acetonitrilo. Después de secado al vacío a temperatura ambiente, se obtienen 7,10 g del producto esperado en forma de cristales blancos. Rendimiento: 71%.

CCM: rf = 0,28; Gel de sílice 60F_{254}, UV 254 nm; Fase móvil: CH_{2}Cl_{2}/MeOH/agua, 86/13/1.

NMR: (DMSO): Treonina: 7,94 (1H), 4,50 (1H), 4,25 (1H), 1,18 (3H); \gamma-Hidroxiprolina: 4,39 (1H), 1,93-2,20 (2H), 4,40 (1H), 3,85-3,71 (2H); \beta-Hidroxi-homotirosina: 7,53 (1H), 4,06 (1H), 4,25 (1H), 2,44-2,53 (2H), 6,96 (2H), 6,66 (2H), 9,06 (1H); Serina: 7,74 (1H), 4,96 (1H), 3,72 (2H); \beta-Hidroxi-\gamma-metilprolina: 4,33 (1H), 3,98 (1H), 2,31 (1H), 0,99 (3H), 3,26-4,0 (2H); "Ornitina": 8,37 (1H), 3,84-3,64 (2H), 8,11 (1H), 4,83 (1H), 2,82-3,11 (2H); Cadena aromática y octiloxi: 7,91 (2H), 7,69 (2H), 7,66 (2H), 7,02 (2H), 4,02 (2H), 1,74 (2H), 1,43 (2H), 1,32-1,28 (6H), 1,28 (2H), 0,87 (3H).

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III): Tercera etapa: Aminación reductora del compuesto de Fórmula (IVa) y obtención de un compuesto de Fórmula (Ia)

1-[4-[(2-aminoil)amino]-N2-[[4'-(octiloxi)[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina Equinocandina B.

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Ruta 1

8 g del producto de Fórmula (IVa) obtenido de acuerdo con la Etapa II y 2,52 ml de etilendiamina se disuelven en 80 ml de tetrahidrofurano (THF) mientras se agita durante 30 minutos a 1 hora bajo nitrógeno y a temperatura ambiente. Se añade durante 30 minutos una solución de 0,36 g de tetracloruro de titanio disuelto en 80 ml de THF. Se agita durante 1 hora, seguido de enfriamiento a 5ºC. Se añaden 3,2 ml de ácido acético glacial disuelto en 16 ml de THF. Se agita durante 1 hora a 5ºC, seguido de enfriamiento a 0ºC y se añade durante 15 minutos una solución de 1,04 g de cianoborohidruro de sodio disuelto en 24 ml de THF. Se deja que la temperatura del medio de reacción suba a 5ºC durante 30 minutos y se agita durante 30 minutos a esta temperatura. Después, se deja que la temperatura suba hasta temperatura ambiente, mientras se agita durante 3 horas, seguido de destilación al vacío hasta 40 ml de volumen. Se añade una solución de 7,2 g de bicarbonato de sodio disuelto en 80 ml de agua, se destila al vacío hasta un volumen residual de 80 ml y luego se añaden 32 ml de metanol y 128 ml de acetato de etilo. Se agita durante 10 minutos, seguido de decantación, reextracción de la fase acuosa con una mezcla acetato de etilo/metanol y destilación de todas las fases orgánicas al vacío hasta un volumen residual de 40 ml. Se introducen 40 ml de DMF y se prosigue con la destilación hasta un volumen residual de 60 ml. Se vierte esta solución en 320 ml de agua durante 20 minutos y se agita durante 15 horas a temperatura ambiente. Si es necesario, se ajusta el pH a 9-9,5 con hidróxido sódico diluido, seguido de filtración y enjuagado con una disolución acuosa de 1,2 g de bicarbonato de sodio (pH de 9-9,5). Después de secar el sólido en una estufa al vacío a 30ºC durante 18 horas, se obtienen 8,55 g de la base cruda esperada en forma de un sólido de color blanco. Rendimiento: 100%. Proporción isomérica A/B: 80/20.

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Ruta 2

10 g del producto de Fórmula (IV) obtenido en la Etapa II se introducen bajo agitación y atmósfera de nitrógeno en 600 ml de THF. Se añaden 20 g de un tamiz molecular de 3\ring{A}, luego 3,16 ml de etilendiamina y finalmente 110,4 g de tri-bencil-L-prolina-borohidruro de sodio. Se agita la solución homogénea a temperatura ambiente durante 6 horas, seguido de filtración del tamiz molecular y enjuagado con THF. Se destila el filtrado hasta sequedad al vacío a una temperatura interna inferior a 40ºC. Se añaden lentamente 600 ml de una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio sobre la resina obtenida mientras se agita. Se añaden 20 g del agente de filtración Hyflosupercel Kieselgühr a la suspensión y se agita durante 16 horas a temperatura ambiente, seguido de filtración y lavado con agua. La torta se disuelve pasándola cuatro veces por 100 ml de metanol. El filtrado metanólico se concentra hasta sequedad al vacío sin sobrepasar 40ºC. Se obtienen 21,25 g del producto esperado.

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Ruta 3: Aislamiento del intermedio de la reacción de aminación reductora (compuesto de Fórmula IV'A)

1-[4-[N,N'-imidazolidin]-N2-[[4'-(octiloxi)[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina Equinocandina B.

Una suspensión del producto de Fórmula (IVa) obtenido en la Etapa II en 40 ml de diclorometano y 0,32 ml de etilendiamina se agita durante 18 horas. Se añaden 80 ml de dietil éter y se agita durante 5 horas. Se filtra el sólido y se enjuaga varias veces con dietil éter. Después de secado en una estufa al vacío durante 15 horas a temperatura ambiente, se obtienen 0,76 g del compuesto esperado en forma de un sólido blanco. Este intermedio se somete entonces a la acción de una reacción reductora de acuerdo con las rutas 1 ó 2 anteriores. Este compuesto aislado es nuevo y forma parte de la presente invención. Rendimiento: 73%.

MASA: (FAB) MH^{+} 1100; MNa^{+}: 1122.

RMN: Treonina: 8,51 (1H), 4,72 (1H), 4,38 (1H), 1,20 (3H); \gamma-Hidroxiprolina: 4,37 (1H), 1,90-2,22 (2H), 4,42 (1H), 3,88-3,66 (2H); \beta-Hidroxi-homotirosina: 7,46 (1H), 4,17 (1H), 4,17 (1H), 2,46 (2H), 6,96 (2H), 6,65 (2H); Serina: 7,47 (1H), 4,84 (1H), 3,65-3,60 (2H); \beta-Hidroxi-\gamma-metilprolina: 4,22 (1H), 3,93 (1H), 2,29 (1H), 0,95 (3H), 3,22-3,90 (2H); "Ornitina": 7,45 (1H), 2,72-3,51 (2H), 9,55 (1H), 4,28 (1H), 1,63-2,12 (2H); Imidazolidina: 2,63-2,94 (2H); 2,78-3,02 (2H); Cadena aromática y octiloxi: 7,87-7,72 (2H, 2H), 7,66 (2H), 7,03 (2H), 4,02 (2H), 1,72 (2H), 1,27 1,32 1,43 (4 x 2H), 1,29 (2H), 0,88 (3H).

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IV): Cuarta etapa: Purificación por cromatografía del compuesto de Fórmula (Ia) obtenido anteriormente (de acuerdo con la ruta 1, 2 ó 3) y separación de los dos isómeros A y B (A o B correspondiendo a los estereoisómeros R o S en posición 4)

Ditrifluoroacetato de 1-[4-[(2-aminoil)amino]-N2-[[4'-(octiloxi)[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-
hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina Equinocandina B.

Se acondiciona una columna Prochrom LC 200 con 2,5 kg de sílice Merck 11763 utilizando como fase móvil una mezcla de cloruro de metileno (43) - acetonitrilo (50) - metanol (7) - agua (5) - ácido trifluoroacético (1). 24 g del compuesto obtenido anteriormente (Etapa III, ruta 1) se disuelven en 126 ml de una mezcla compuesta de acetonitrilo (50) - metanol (7) - agua (5) - TFA (1). Se filtra la solución y se añaden 86 ml de cloruro de metileno. Se inyecta esta solución en la columna. Se lleva a cabo la elución a un caudal de 76 l/h y una presión de 14 bar. La detección se realiza a 280 nm, seguido de destilación de las fracciones recogidas al vacío a una temperatura externa inferior a 40ºC. Se obtienen 36,75 g del producto en forma de la disal sólida de TFA. Proporción isomérica A/B = 99,3/0,7.

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V): Quinta etapa: Purificación por cromatografía del ditrifluoroacetato (eliminación de las demás sales)

Se acondiciona una columna Prochrom LC 50 con 300 g de sílice Daisogel SP 120 nº 5/1502 en fase inversa, utilizando como fase móvil una mezcla de agua (90) - acetonitrilo (10) - ácido trifluoroacético (0,1). 36,75 g de la sal obtenida anteriormente en la primera cromatografía se disuelven en una mezcla compuesta de 57,3 ml de agua (90) - acetonitrilo (10) - ácido trifluoroacético (0,1) y 26,8 ml de acetonitrilo puro. Se filtra la solución y se inyecta esta solución en la columna. Se lleva a cabo la elución con agua (90) - acetonitrilo (10) - ácido trifluoroacético (0,1) en el primer caso para eliminar las sales minerales y después con agua (50) - acetonitrilo (50) - ácido trifluoroacético (0,1) para retirar el producto. Las fracciones recogidas se destilan al vacío a una temperatura externa inferior a 40ºC. La solución acuosa límpida resultante se liofiliza. Se obtienen 15,59 g del producto esperado en forma de una disal sólida algodonosa blanca de TFA. Proporción isomérica A/B = 99,4/0,6. Rendimiento acumulativo de las dos cromatografías: 53,8%. Rendimiento de la reducción amino: 28,7%.

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VI) Sexta etapa: Retorno a la base

Se disuelven en 143,7 ml de agua 14,37 g del compuesto obtenido anteriormente en forma de sal de ditrifluoroacetato liofilizada. Se agita durante 15 minutos en nitrógeno y se añaden 57,5 ml de una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se agita durante 17 horas. Se añaden 430 ml de una mezcla 8/2 de acetato de etilo/metanol y se agita durante 15 minutos. La fase orgánica superior se decanta y la fase acuosa se vuelve a extraer con 288 ml de una mezcla de acetato de etilo (8) - metanol (2). Las fases orgánicas se combinan, se decantan cuidadosamente y se destilan hasta sequedad al vacío sin sobrepasar 35ºC. Se añaden 143,7 ml de agua al extracto seco y la suspensión se agita durante 30 minutos, seguido de filtración y lavado con agua hasta que ya no se encuentren fluoruros. Después de secar el sólido al vacío a 40ºC, se obtienen 10,91 g del producto esperado en forma de un polvo blanco. Rendimiento: 91,6%.

\newpage

Microanálisis (agua: 8,8%)

14

VII: Séptima etapa: Salificación (ácido clorhídrico)

Diclorhidrato de 1-[4-[(2-aminoil)amino]-N2-[[4'-(octiloxi)[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina Equinocandina B.

10,53 g del compuesto obtenido en la etapa anterior se disuelven en 263 ml de metanol mientras se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se filtra y enjuaga dos veces con 31,6 ml de metanol. Se añaden 2,1 ml de ácido clorhídrico al 36% bajo agitación y bajo nitrógeno a temperatura ambiente. Se agita durante 30 minutos, seguido de destilación hasta sequedad al vacío sin sobrepasar 35ºC. El extracto seco se recoge en 105,3 ml de óxido de diisopropilo. La suspensión obtenida se agita durante 2 horas, seguido de filtración y lavado dos veces con 21,1 ml de óxido de diisopropilo. Después de secar el sólido en una estufa al vacío a 40ºC, se obtienen 10,52 g del producto esperado en forma de un polvo blanco. Rendimiento: 93,7%.

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Microanálisis (agua: 5,75%)

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VIII: Octava etapa: Cristalización de la sal de ácido clorhídrico

Diclorhidrato de 1-[4-[(2-aminoetil)amino]-N2-[[4'-(octiloxi)[1,1'-bifenil]-4-il]carbonil]-L-ornitina]-4-[4-(4-hidroxifenil)-L-treonina]-5-L-serina Equinocandina B.

2,75 g del compuesto obtenido de acuerdo con la Etapa VII se disuelven en una mezcla de 235,4 ml de acetonitrilo y 14,8 ml de agua desmineralizada, mientras se calienta bajo reflujo (77,4ºC). Se agita durante 15 minutos a 77ºC, después se enfría el medio de reacción a +50ºC durante 45 minutos. La iniciación se realiza con 41,25 mg del compuesto cristalizado, seguido de enfriamiento regular hasta 20ºC durante 30 minutos y agitación durante 2 horas 15 minutos, para que la cristalización pueda desarrollarse. La suspensión se concentra al vacío hasta un volumen residual de 55 ml mientras se deja que la temperatura suba de 5ºC a 20ºC. Se reestablece la presión normal de nitrógeno, seguido de enfriamiento a 0ºC durante 20 minutos, con agitación a 0ºC durante 17 horas, filtración bajo presión de nitrógeno y enjuagado con 11 ml de acetonitrilo. Después de secar el sólido cristalizado en una estufa al vacío y a 40ºC durante 24 horas, se obtienen 2,29 g del producto esperado en forma de un sólido cristalino blanco. Rendimiento: 83,3%.

HPLC: Tr = 5,8 (isómero A); Tr = 7,1 (isómero B); Kromasil C18, 15 cm, 4,6 mm, 5 \mum; Fase móvil: acetonitrilo-agua-TFA al 50/50/0,1; 210 nm, 35ºC, 1 ml/min.

RMN: CDCl_{3}: 9,07 (m) 1H; 8,48 (d, j=8) 1H; 8,00 (d, j=8) 2H; 7,96 (d, j=8,5) 2H; 7,71 (d, j=8,5) 2H; 7,64 (d, j=8,5) 2H; 7,60 (d, j=9) 1H; 7,37 (d, j=9,5) 1H; 7,02 (d, j=8,5) 2H; 6,97 (d, j=8,5) 2H; 6,65 (d, j=8,5) 2H; 4,90 (m) 1H; 4,77 (m) 1H; 4,66 (m) 1H; 4,45 (m) 1H; 4,42 (m) 1H; 4,39 (m) 1H; 4,34 (s) 1H; 4,26 (m) 1H; 4,22 (m) 1H; 4,08 (m) 1H; 4,01 (t, j=6,5) 2H; 3,88 (m) 3H; 3,70 (m) 21H; 3,51 (m) 2H; 3,48 (m) 1H; 3,31 (m) 2H; 3,28 (m) 1H; 3,16 (m) 2H; 2,53 (dd, j=6 y 13,5) 1H; 2,44 (dd, j=7,5 y 13,5) 1H; 2,27 (m) 1H; 2,25 (m) 1H; 2,15 (m) 2H; 1,94 (m) 1H; 1,74 (m) 2H; 1,44 (m) 2H; 1,22 a 1,40 (m) 8H; 1,13 (d, j=6) 3H; 0,99 (d, j=6,5) 3H; 0,88 (t, j=7) 3H.

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Ejemplo 2 Composición farmacéutica

Se prepararon tabletas que contenían:

Producto del Ejemplo 1: 150 mg

Excipiente csp: 1 g

Detalle del excipiente: almidón, talco, estearato de magnesio.

Claims

1. Procedimiento para la preparación de los compuestos de Fórmula (I):

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a): un compuesto de Fórmula (II):

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: se somete a la acción de un ácido de fórmula R-CO_{2}H, encontrándose dicho ácido en una forma activada aislada o no aislada, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (III):

18

b): en caso dado, el compuesto de fórmula (III) se somete a una reacción de alquilación del alcohol en la posición 5 mediante la acción de un alcohol de fórmula Alk-OH, en presencia de PPTS, siendo Alk un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, con el fin de obtener el compuesto de fórmula (III'):

19

20

d): el compuesto de Fórmula (IV) se somete a una reacción de aminación reductora mediante la acción de etilendiamina en presencia de un agente reductor tal como NaBH_{3}CN, en presencia de un ácido de Lewis o de NaBH(OCOR'_{3}), representando OCOR' Boc-L-Pro, Bzl-L-Pro o cualquier otro aminoácido ópticamente activo así como cualquier otro ácido carboxílico quiral o no quiral, con el fin de obtener el compuesto de Fórmula (I) tal como se define anteriormente, que comprende una mayoría de uno de los isómeros activos, sometiéndose entonces dicho compuesto de Fórmula (I), en caso dado y en cualquier orden adecuado, a una o más de las siguientes operaciones:

: - purificación por cromatografía,

: - purificación por cristalización,

: - la acción de una base,

: - salificación.

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2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque los compuestos de Fórmulas (I), (III), (III') o (IV) contienen un grupo R que representa los siguientes grupos:

21

3. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque los compuestos de Fórmulas (I), (III), (III') o (IV) contienen un grupo R que representa el siguiente grupo:

22

4. Procedimiento para la preparación de los compuestos de Fórmula (Ia)

23

que comprende las siguientes etapas:

a): un compuesto de Fórmula (II):

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24

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26

27

: - cromatografía,

: - cristalización,

: - acción de una base,

: - salificación mediante la acción de ácido clorhídrico.

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5. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado porque el compuesto de Fórmula (Ia) experimenta sucesivamente las siguientes operaciones:

a): purificación por cromatografía sobre sílice y después por cromatografía en fase inversa utilizando una mezcla de disolventes orgánicos, agua y ácido trifluoroacético con el fin de obtener la sal de ácido trifluoroacético del compuesto de Fórmula (Ia);

b): acción de una base, por ejemplo acción de una disolución acuosa de bicarbonato de sodio, para obtener el compuesto de Fórmula (Ia) en forma de una base;

c): salificación mediante la acción de ácido clorhídrico con el fin de obtener la sal correspondiente, a saber el diclorhidrato del compuesto de Fórmula (Ia).

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6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la reacción de activación del ácido se lleva a cabo en presencia de pentafluorofenol, N-hidroxisuccinimida u eventualmente N-hidroxibenzotriazol.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la reacción de acilación en presencia de un ácido activado aislado se lleva a cabo en presencia de diisopropiletilamina.

8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la reacción de activación y después de acilación en presencia de un ácido activado no aislado se lleva a cabo en presencia de N-metilpirrolidona y DMTMM.

9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la reacción de deshidratación se lleva a cabo en presencia de BAIB y, en caso dado, de Mgl_{2}.

10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la reacción de deshidratación se lleva a cabo en presencia de HBr-AcOH y Mgl_{2}.

11. Procedimiento según las reivindicaciones 9 y 10, caracterizado porque el producto que tiene su origen en la deshidratación se purifica mediante cristalización a partir de una mezcla de DMF/acetona o DMF/AcOEt.

12. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la reacción de aminación reductora se lleva a cabo en presencia de un agente reductor seleccionado entre NaBH_{3}CN acoplado con TiCl_{4}, NaBH(Boc-L-Pro)_{3} y NaBH(Bzl-L-Pro)_{3}.

13. Procedimiento para la preparación de un compuesto de Fórmula (IV) o (IVa) mediante una reacción de deshidratación de los compuestos de Fórmulas (III') o (III'a) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 9 a 11.

14. Procedimiento para la preparación de un compuesto de Fórmula (I) o (Ia) mediante una reacción de aminación reductora de los compuestos de Fórmulas (IV) o (IVa) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 12.

15. Compuestos de Fórmulas (III') o (III'a) según las reivindicaciones 1 y 4 como compuestos intermedios.

16. Compuestos de Fórmulas (IV'), siendo R tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, y (IV'a) representando R Ph-Ph-OC_{8}H_{17}, como compuestos intermedios

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