ES2334803T3 - Derivados de nucleosidos y uso terapeutico de los mismos. - Google Patents

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Won J. Choi
Young B. Lee
Lak S. Jeong
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Abstract

El uso, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo, de un compuesto que es un nucleósido de la siguiente fórmula I'': **(Ver fórmula)** en la que: Y es H o OH; y X es H, F, Cl, Br, I o CH3; o la siguiente fórmula II'': **(Ver fórmula)** en la que: Y es H o OH; y X es H, F, Cl, Br o I; o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.

Description

Derivados de nucleósidos y uso terapéutico de los mismos.
Campo de la invención
Esta solicitud se refiere a compuestos nucleósidos, y métodos sintéticos relacionados, y sus composiciones para uso en métodos terapéuticos para el tratamiento de trastornos hiperproliferativos, que incluyen cánceres, administrando compuestos nucleósidos.
Antecedentes de la invención
Se necesitan nuevos compuestos nucleósidos como moléculas terapéuticas para el tratamiento de trastornos tales como cánceres. Se necesitan métodos para usar tanto los conocidos como los nuevos compuestos nucleósidos para el tratamiento de trastornos particulares.
Breve descripción de los dibujos
La Fig. 1 es un gráfico que muestra la inhibición del crecimiento del tumor por RX-3117 en ratones sin pelo inyectados subcutáneamente con células de carcinoma de colon humano HCT116.
Sumario de la invención
Se sintetizaron y analizaron una serie de compuestos nucleósidos para ver sus actividades terapéuticas, incluyendo las actividades anti-cáncer. Se demuestra que los compuestos nucleósidos de la invención son útiles para el tratamiento de trastornos hiperproliferativos, que incluyen tumores, tales como tumores de pecho, tumores de colon, tumores de pulmón y tumores de estómago.
Descripción detallada de la invención Definiciones
El término "nucleósido" y las expresiones "compuesto nucleósido", y "derivado de nucleósido" se usan intercambiablemente en esta solicitud para significar compuestos de fórmula I o II, como se define a continuación. Todos los términos científicos y técnicos usados en esta solicitud tienen significados comúnmente usados en la técnica a menos que se especifique de otro modo. Tal como se usan en esta solicitud, las siguientes palabras o frases tienen los significados especificados.
Tal como se usa aquí, "vehículo farmacéuticamente aceptable" quiere decir cualquier material que, cuando se combina con un compuesto de la invención, permite que el compuesto retenga la actividad biológica, tal como la capacidad para potenciar la actividad antibacteriana de mastocitos y macrófagos. Los ejemplos incluyen, pero no están limitados a, cualquiera de los vehículos farmacéuticos estándar tales como una disolución salina tamponada con fosfato, agua, emulsiones tales como emulsiones aceite/agua, y varios tipos de agentes humectantes. Las composiciones que comprenden tales vehículos se formulan por métodos convencionales bien conocidos (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Chapter 43, 14^{th} Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa.).
El término "conjugado" quiere decir un compuesto formado como un composite entre dos o más moléculas. Más específicamente, en la presente invención, el derivado nucleósido puede estar unido, por ejemplo, covalentemente unido, a restos dirigidos específicos de la célula que forman un compuesto conjugado para el suministro eficiente y específico del agente a una célula de interés.
La frase "resto dirigido" quiere decir una molécula que sirve para suministrar el compuesto de la invención a un sitio específico para la actividad deseada. Los restos dirigidos incluyen, por ejemplo, moléculas que unen específicamente moléculas sobre una superficie celular específica. Tales restos dirigidos útiles en la invención incluyen anticuerpos de antígeno anti-superficie celular. Las citoquinas, que incluyen interleuquinas y factores tales como el factor que estimula el granulocito/macrófago (GMCSF) son también restos dirigidos específicos, que se sabe que se unen a células específicas que expresan altos niveles de sus receptores.
La expresión "resto profármaco" es un grupo de substitución que facilita el uso de un compuesto de la invención, por ejemplo, facilitando la entrada del fármaco dentro de las células o la administración del compuesto. El resto profármaco se puede escindir del compuesto, por ejemplo, por medio de enzimas de escisión in vivo. Los ejemplos de restos profármaco incluyen grupos fosfato, uniones péptido, y azúcares, restos que se pueden hidrolizar in vivo.
"Tratar" quiere decir inhibir, reducir, modular, mejorar, o bloquear por lo menos un síntoma que caracteriza un estado patológico, en un sujeto amenazado, o afectado por el estado.
Un "trastorno hiperproliferativo" es un trastorno caracterizado por la proliferación anormal de células, y genéricamente incluye trastornos de la piel tales como psoriasis así como tumores benignos y malignos de todos los sistemas orgánicos. Esta última clase de trastornos hiperproliferativos incluye, por ejemplo, carcinomas de pecho (incluyendo carcinomas lobulares y de conductos) y otros tumores sólidos, carcinomas, sarcomas, y cánceres que incluyen carcinomas del pulmón como carcinoma de células pequeñas, carcinoma de células grandes, carcinoma escamoso, y adenocarcinoma, mesotelioma del pulmón, adenocarcinoma colorectal, carcinoma de estómago, adenocarcinoma prostático, carcinoma de ovario tal como cistadenocarcinoma seroso y cistadenocarcinoma mucinoso, tumores de células germinales del ovario, carcinomas testiculares, y tumores de células germinales, adenocarcinoma pancreático, adenocarcinoma biliar, carcinoma hepatocelular, carcinoma de vejiga que incluye carcinoma de células transicionales, adenocarcinoma, y carcinoma escamoso, adenocarcinoma de células renales, carcinomas endometriales que incluyen adenocarcinomas y tumores Mullerianos mixtos (carcinosarcomas), carcionomas del endocervix, ectocervix, y vagina tales como adenocarcinoma y carcinoma escamoso, tumores de la piel como carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, melanoma, y tumores de apéndices cutáneos, carcinoma esofágico, carcinomas de la nasofaringe y orofaringe que incluyen carcinoma escamoso y adenocarcinomas, carcinomas de las glándulas salivares, tumores del cerebro y del sistema nervioso central que incluyen tumores de origen glial, neuronal, y meníngeo, tumores del nervio periférico, sarcomas del tejido blando y sarcomas de hueso y cartílago.
La presente invención comprende compuestos nucleósidos y sus compuestos para uso en el tratamiento de un trastorno, enfermedad o estado hiperproliferativo en un sujeto (por ejemplo, un paciente humano u otro sujeto animal). Los compuestos para su uso según la invención comprenden administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un compuesto nucleósido según la invención. Tal tratamiento, por ejemplo, puede prevenir, mejorar, y/o inhibir los síntomas del estado hiperproliferativo, y/o puede prevenir o inhibir la proliferación o crecimiento celular, por ejemplo, en un tumor, tal como un neoplasma maligno. Una estrategia de tratamiento descrita aquí disminuiría la carga tumoral, por lo menos hasta un grado medible, y mejoraría la supervivencia de pacientes que sufren un estado hiperproliferativo. Entre las enfermedades, trastornos y estados susceptibles de tratamiento por agentes de la invención están los neoplasmas, y más específicamente tumores de varios orígenes (pulmón, colon, estómago, músculo liso, esófago, linfoma no Hodgkin, y cáncer de pulmón de células no pequeñas, etc.).
Compuestos útiles en métodos según la invención
Los compuestos útiles en los métodos de la invención incluyen nucleósidos que tienen la fórmula I:
1
en la que Y=H o OH y X=H, F, Cl, Br, I, o CH_{3}.
También están incluidos los compuestos que tienen la fórmula II:
2
en la que Y=H o OH y X=H, F, Cl, Br, o I. Aunque se ilustra en las conformaciones estereoquímicas basadas en azúcares naturales, la invención incluye los estereoisómeros relacionados, y mezclas. Los estereoisómeros relacionados incluyen enantiómeros, diastereoisómeros y sus mezclas, y mezclas racémicas y mezclas de dos o más diastereoisómeros. La invención incluye también sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos.
Los compuestos de la invención pueden ser muy activos contra una amplia gama de enfermedades hiperproliferativas, incluyendo tumores. Por ejemplo, los compuestos según la invención pueden ser activos contra tumores del ovario, tumores del pecho, tumores cervicales, tumores de la próstata, tumores del hígado, tumores de pulmón, tumores de riñón, tumores de colon, tumores pancreáticos, tumores de cerebro, tumores de estómago y melanoma. Por muy activo se entiende que un compuesto puede tener un IC_{50} de 5,0 \muM o menos, 2,0 \muM o menos, 1,0 \muM o menos, o 0,5 \muM o menos, con respecto a por lo menos una línea celular para un tumor particular. Las líneas celulares ejemplares para determinar la actividad incluyen OVCAR-3 humana para tumores de ovario, MCF-7 o MDA-MB-231 para tumores de pecho, HeLa para tumores cervicales, PC3 o LNCap para tumores de próstata, HepG2 para tumores del hígado, A549 o NCI-H226 para tumores de pulmón, UMRC2 para tumores de riñón, HT-29 o HCT116 para tumores de colon, PANC-1 para tumores pancreáticos, U251 para tumores cerebrales, MKN-45 para tumores de estómago y SK-MEL-28 para melanoma.
Composiciones farmacéuticas y administración
Los compuestos de la invención son útiles como composiciones farmacéuticas preparadas con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención, como se define aquí, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos nucleósidos de la invención se pueden formular como composiciones farmacéuticas y administrar a un sujeto que necesite tratamiento, por ejemplo, un mamífero, tal como un paciente humano, en varias formas adaptadas a la ruta de administración escogida, por ejemplo, oral o parenteralmente, por ruta intravenosa, intramuscular, tópica o subcutánea.
De este modo, los compuestos nucleósidos de la invención se pueden administrar sistémicamente, por ejemplo, oralmente, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable tal como un diluyente inerte o un vehículo comestible asimilable, o por inhalación o insuflación. Pueden estar encerrados en cápsulas de gelatina de envoltura dura o blanda, pueden estar en comprimidos, o se pueden incorporar directamente en los alimentos de la dieta de un paciente. Para la administración terapéutica oral, los compuestos nucleósidos se pueden combinar con uno o más excipientes y usar en la forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, y similares. Los compuestos nucleósidos se pueden combinar con un vehículo inerte en polvo fino e inhalar por el sujeto o ser insuflados. Tales composiciones y preparaciones deben contener por lo menos 0,1% de compuestos nucleósidos. El porcentaje de las composiciones y preparaciones, por supuesto, se puede variar y puede estar convenientemente entre alrededor de 2% y alrededor de 60% del peso de una forma de dosificación unitaria dada. La cantidad de compuestos nucleósidos en tales composiciones terapéuticamente útiles es tal que se obtendrá un nivel de dosificación efectiva.
Los comprimidos, trociscos, píldoras, cápsulas, y similares pueden contener también los siguientes: aglomerantes tales como goma de tragacanto, acacia, almidón de maíz o gelatina; excipientes tales como fosfato de dicalcio; un agente desintegrante tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico y similares; se puede añadir un lubricante tal como estearato de magnesio; y un agente endulzante tal como sacarosa, fructosa, lactosa o aspartamo o un agente saborizante tal como menta piperita, aceite de gaulteria, o saborizante de cereza. Cuando la forma de dosificación unitaria es una cápsula, puede contener, además de materiales del tipo anterior, un vehículo líquido, tal como un aceite vegetal o un polietilenglicol. Varios otros materiales pueden estar presentes como revestimientos o para modificar de otro modo la forma física de la forma de dosificación unitaria sólida. Por ejemplo, los comprimidos, píldoras o cápsulas se pueden revestir con gelatina, cera, shellac o azúcar y similares. Un jarabe o elixir pueden contener el compuesto activo, sacarosa o fructosa como agente endulzante, metil- y propil-parabenes como conservantes, un colorante y saborizante tal como sabor a cereza o naranja. Por supuesto, cualquier material usado para preparar cualquier forma de dosificación unitaria debe ser farmacéuticamente aceptable y sustancialmente no tóxico en las cantidades empleadas. Además, los compuestos nucleósidos se pueden incorporar en preparaciones y dispositivos de desprendimiento sostenido.
Los compuestos nucleósidos se pueden administrar también intravenosa o intraperitonealmente por infusión o inyección. Las disoluciones de los compuestos nucleósidos se pueden preparar en agua, opcionalmente mezclada con un tensioactivo no tóxico. También se pueden preparar dispersiones en glicerol, polietilenglicoles líquidos, triacetina, y sus mezclas y en aceites. En condiciones ordinarias de almacenamiento y uso, estas preparaciones pueden contener un conservante para prevenir el crecimiento de microorganismos.
Las formas de dosificación farmacéutica apropiada para inyección o infusión pueden incluir disoluciones o dispersiones acuosas estériles o polvos estériles que comprenden los compuestos nucleósidos que están adaptados para la preparación extemporánea de disoluciones o dispersiones inyectables o infundibles, opcionalmente encapsuladas en liposomas. En todos los casos, la forma de dosificación final debe ser estéril, fluida y estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento. El vehículo líquido puede ser un disolvente o un medio de dispersión que comprende, por ejemplo, agua, etanol, un polialcohol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos y similares), aceites vegetales, ésteres de glicerilo no tóxicos, y sus mezclas apropiadas. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, por la formación de liposomas, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones o por el uso de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos se puede producir por varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenes, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, trimerosal, y similares. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, tampones o cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede producir por el uso en las composiciones de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
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Se preparan disoluciones estériles inyectables incorporando los compuestos nucleósidos en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con varios de los otros ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de esterilización en filtro. En el caso de polvos estériles para la preparación de disoluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secado a vacío y técnicas de liofilización, que dan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional presente en las disoluciones previamente esterilizadas en filtro.
Para la administración tópica, los compuestos nucleósidos se pueden aplicar en forma pura. Sin embargo, será deseable generalmente administrarlas a la piel como composiciones o formulaciones, en combinación con un vehículo dermatológicamente aceptable, que puede ser un sólido o un líquido.
Los vehículos sólidos útiles incluyen sólidos finamente divididos tales como talco, arcilla, celulosa microcristalina, sílice, alúmina y similares. Otros vehículos sólidos incluyen nanopartículas o micropartículas poliméricas no tóxicas. Los vehículos líquidos útiles incluyen agua, alcoholes o glicoles o mezclas de agua/alcohol/glicol, en las que los compuestos nucleósidos se pueden disolver o dispersar en concentraciones efectivas, opcionalmente con la ayuda de tensioactivos no tóxicos. Se pueden añadir adyuvantes tales como fragancias y agentes antimicrobianos adicionales para optimizar las propiedades para un uso dado. Las composiciones líquidas resultantes se pueden aplicar en almohadillas absorbentes, usar para impregnar vendajes y otras vendas, o pulverizar sobre el área afectada usando pulverizadores de aerosol o del tipo de bomba.
También se pueden emplear espesantes tales como polímeros sintéticos, ácidos grasos, sales y ésteres de ácido graso, alcoholes grasos, celulosas modificadas o materiales minerales modificados con vehículos líquidos para formar pastas extendibles, geles, pomadas, jabones y similares, para la aplicación directamente a la piel del usuario.
Los ejemplos de composiciones dermatológicas útiles que se pueden usar para suministrar los compuestos nucleósidos a la piel son conocidos en la técnica; por ejemplo, véase Jacquet et al. (Patente de EE.UU. No. 4.608.392), Geria (Patente de EE.UU. No. 4.992.478), Smith et al. (Patente de EE.UU. No. 4.559.157), y Wortzman (Patente de EE.UU. No. 4.820.508).
Las dosis útiles de los compuestos de fórmula I o II se pueden determinar comparando su actividad in vitro, y la actividad in vivo en modelos animales. Los métodos para la extrapolación de dosis efectivas en ratones, y otros animales, a seres humanos son conocidos en la técnica; por ejemplo, véase, la patente de EE.UU. No. 4.938.949.
Generalmente, la concentración de los compuestos nucleósidos en una composición líquida, tal como una loción, será de alrededor de 0,1-25% en peso, o de alrededor de 0,5-10% en peso. La concentración en una composición sólida o semisólida tal como un gel o un polvo puede ser de alrededor de 0,1-5% en peso, o de alrededor de 0,5-2,5% en peso.
La cantidad de los compuestos nucleósidos requerida para su uso en el tratamiento variará dependiendo de la sal particular seleccionada y de la ruta de administración, la naturaleza del estado que se está tratando y la edad y estado del paciente, y será finalmente a discreción del médico o especialista clínico que lo atiende.
Las dosis efectivas y rutas de administración de los agentes de la invención son convencionales. La cantidad exacta (dosis efectiva) del compuesto nucleósido variará de sujeto a sujeto, dependiendo de, por ejemplo, la especie, edad, peso y estado general o clínico del sujeto, la severidad o mecanismo de cualquier trastorno que se está tratando, el agente particular o vehículo usado, el método y programa de administración, y similares. Una dosis terapéuticamente efectiva se puede determinar empíricamente, por procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, The Pharmacological Basis of Therapeutics, Goodman and Gilman, eds., Macmillan Publishing Co., New York. Por ejemplo, una dosis efectiva se puede estimar inicialmente, en ensayos de cultivo celular o en modelos animales apropiados. El modelo animal se puede usar también para determinar los intervalos de concentración apropiados y las rutas de administración. Tal información se puede usar a continuación para determinar las dosis útiles y las rutas de administración en seres humanos. Se puede seleccionar también una dosis terapéutica por analogía con dosis para agentes terapéuticos comparables.
El modo particular de administración y el régimen de dosificación se seleccionarán por el especialista clínico que lo atiende, teniendo en cuenta las particularidades del caso (por ejemplo, el sujeto, la enfermedad, el estado de la enfermedad implicada, y si el tratamiento es profiláctico). El tratamiento puede incluir dosis diarias o multi-diarias del (de los) compuesto(s) durante un periodo de unos pocos días a meses, o incluso años.
En general, sin embargo, una dosis apropiada estará en el intervalo de alrededor de 0,5 a alrededor de 100 mg/kg, por ejemplo, de alrededor de 10 a alrededor de 75 mg/kg de peso corporal por día, tal como de 3 a alrededor de 50 mg por kilogramo de peso corporal del receptor por día, de 6 a 90 mg/kg/día, o en el intervalo de 15 a 60 mg/kg/día. Por ejemplo, las dosis apropiadas pueden ser 0,5, 5, 10, 25, 50, 100, 250 o 500 mg/kg de peso corporal por día.
Los compuestos nucleósidos se administran convenientemente en forma de dosificación unitaria; por ejemplo, que contiene de 5 a 1000 mg, de 10 a 750 mg, o de 50 a 500 mg de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.
Los compuestos nucleósidos se pueden administrar para conseguir concentraciones en plasma máximas de alrededor de 0,5 a alrededor de 75 \muM, de alrededor de 1 a 50 \muM, o, de alrededor de 2 a alrededor de 30 \muM. Las concentraciones en plasma deseables ejemplares incluyen por lo menos o no más de 0,25, 0,5, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100 o 200 \muM. Esto se puede conseguir, por ejemplo, por inyección intravenosa de una disolución de 0,05 a 5% de los compuestos nucleósidos, opcionalmente en disolución salina, o administrados oralmente en forma de bolo que contiene alrededor de 1-100 mg de los compuestos nucleósidos. Los niveles en sangre deseables se pueden mantener por infusión continua para proporcionar alrededor de 0,01-5,0 mg/kg/h, por ejemplo, por lo menos o no más de 0,005, 0,01, 0,1, 2,5, 5,0 o 10,0 mg/kg/h. Alternativamente, tales niveles se pueden obtener por infusiones intermitentes que contienen alrededor de 0,4-15 mg/kg, por ejemplo, por lo menos o no más de 0,25, 0,5, 1,0, 5,0, 10,0, 15,0 o 25,0 mg/kg de los compuestos nucleósidos.
Los compuestos nucleósidos pueden estar presentes convenientemente en una sola dosis o en dosis divididas administradas a intervalos apropiados, por ejemplo, en forma de dos, tres, cuatro o más sub-dosis por día. La subdosis misma se puede dividir adicionalmente, por ejemplo, en varias administraciones discretas aproximadamente espaciadas; tal como inhalaciones múltiples de un insuflador o por aplicación de una pluralidad de gotas en el ojo.
Dirigiendo los nucleósidos hacia las células
En una realización ejemplar, el compuesto nucleósido se dirige hacia las células en las que se desea el tratamiento, por ejemplo, hacia células cancerosas humanas. El compuesto se dirige hacia la célula deseada por conjugación con un resto dirigido que se une específicamente a la célula deseada, dirigiendo por ello la administración de una molécula conjugada. Los restos dirigidos útiles son ligandos que se unen específicamente a antígenos celulares o ligandos de la superficie celular, por ejemplo, anticuerpos contra el antígeno celular B, CD19 (tal como B43) y similares.
Para formar los conjugados de la invención, los restos dirigidos se unen covalentemente a sitios sobre el compuesto nucleósido. El resto dirigido, que es a menudo una molécula de polipéptido, se une a compuestos de la invención en sitios reactivos, que incluyen NH_{2}, SH, CHO, COOH, y similares. Se usan agentes de unión específica para unir los compuestos. Los agentes de unión se escogen según el sitio reactivo al que se va a unir el resto dirigido.
Los métodos para seleccionar un agente de unión apropiado y el sitio reactivo para la unión del resto dirigido al compuesto de la invención son conocidos, y se describen, por ejemplo, en Hermanson, et al., Bioconjugate Techniques, Academic Press, 1996; Hermanson et al., Immobilized Affinity Ligand Techniques, Academic Press, 1992; y Pierce Catalog and Handbook, 1996, pp. T155-T201.
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Ejemplos
La invención se puede clarificar adicionalmente por referencia a los siguientes Ejemplos, que sirven para ejemplificar algunas de las realizaciones preferidas.
Ejemplos 1-2
Síntesis de derivados de nucleósido
Todos los disolventes anhidros tales como acetonitrilo, metanol, etanol, acetato de etilo, tetrahidrofurano, cloroformo, y cloruro de metileno se destilaron sobre CaH_{2} o P_{2}O_{5} o Na/benzofenona previamente a su uso. Todos los productos químicos eran de grado de reactivo y se compraron de Aldrich Chemical Company (Milwaukee, Wis.), o Sigma Chemical Company (St. Louis, Mo.).
Características físicas
Los espectros de RMN del protón se registraron en un espectrómetro Varian-400 MHz en disolventes deuterados tales como DMSO-d_{6}, CDCl_{3}, acetonitrilo-d_{3} o acetona-d_{6}. Los desplazamientos químicos se dan en partes por millón (ppm) con tetrametilsilano (TMS) como estándar interno a cero ppm. Las constantes de acoplamiento (J) se dan en hercios y las abreviaturas s, d, t, q y m se refieren a singlete, doblete, triplete, cuadruplete y multiplete, respectivamente. Se realizó TLC sobre placas 60F_{254} prerevestidas Merck. Se realizó cromatografía en columna usando gel de sílice 60 (malla 230-400, Merck).
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Ejemplo 1 Síntesis de fluorociclopentenol substituido
Se preparó un fluorociclopentenol apropiadamente substituido a partir de isopropilideno-D-ribosa 1 como se resume en el Esquema 1.
Un intermedio importante en la síntesis es el \beta-alcohol alílico terciario 6. El epímero \alpha correspondiente es resistente a la oxidación, y de este modo dificulta la formación del intermedio 7. El \beta-alcohol alílico terciario 6 se prepara selectivamente a partir de su equivalente de anillo abierto, intermedio 5. Se encontró que la presencia de grupos protectores voluminosos sobre el alcohol primario favorece la formación del compuesto 5 sobre su epímero diastereoisómero, facilitando de este modo la preparación del intermedio \beta-alcohol alílico terciario 6 y, finalmente, el producto 7 oxidado. En este aspecto, el grupo protector bencilo dio el \alpha-epímero equivocado, el grupo protector terc-butildimetilsililo mostró alguna selectividad (alrededor de 75:8 \beta:\alpha), el grupo protector terc-butildifenilsililo mostró mejor rendimiento e incluso más alta selectividad y el grupo tritilo proporcionó alto rendimiento y alta estereoselectividad.
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Esquema 1
3
2,3-O-Isopropilideno-5-tritil-D-ribosa (2)
Una disolución de isopropilideno-D-ribosa 1 (10 g, 52,58 mmol) y cloruro de tritilo (21,95 g, 78,88 mmol) en piridina (250 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Después de añadir agua, la mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo, se secó, se filtró, y se evaporó a vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando hexano y acetato de etilo (4:1) como eluyente para dar éter tritílico 2 (21,53 g, 95%) en forma de un aceite incoloro; ^{1}RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,40-7.21 (m, 15H), 5,72 (d, J=4,0 Hz, 0,4H), 5,32 (s, 0,6H), 4,76 (d, J=5,6 Hz, 0,6H), 4,72 (dd, J=6,0, 4,0H), 4,63 (d, J=6,0 Hz, 0,6H), 4,57 (dd, J=6,4, 1,2 Hz, 0,4H), 4,34-4,33 (m, 0,6H), 4,18-4,17 (m, 0,4H), 4,09 (s ancho, 2H), 3,40 (dd, J=10,4, 2,8 Hz, 0,4H), 3,39 (dd, J=10,0, 3,6 Hz, 0,6H), 3,32 (dd, J=10,0, 3,6 Hz, 0,6H), 3,00 (dd, J=10,4, 3,2 Hz, 0,4H), 1,53 (s, 1,2H), 1,46 (s, 1,8H), 1,35 (s, 1,2H), 1,32 (s, 1,8H).
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(1R)-1-((4R,5S)-2,2-Dimetil-5-vinil-[1,3]dioxolan-4-il)-2-tritiloxi-etanol (3)
A una suspensión agitada de bromuro de metil-trifenilfosfonio (32,28 g, 90,36 mmol) en tetrahidrofurano (300 ml) se añadió terc-butóxido de potasio (10,79 g, 88,26 mmol), la pureza del reactivo: 95%) a 0ºC, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de que se enfrió la muestra de nuevo hasta 0ºC, se añadió una disolución de lactol 2 (18,18 g, 42,03 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 3 horas, y a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se repartió entre agua y acetato de etilo, se lavó con salmuera, se secó, se filtró, y se evaporó a vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando hexano y acetato de etilo (8:1) como eluyente para dar olefina 3 (15,20 g, 82%) en forma de un sólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,45-7.21 (m, 15H), 5,96 (td, J=10,4, 6,8 Hz, 1H), 5,37 (td, J=16,8, 1,6 Hz, 1H), 5,23 (td, J=10,8, 1,6 Hz, 1H), 4,67 (t, J=6,4, 1H), 4,15 (dd, J=8,8, 6,4 Hz, 1H), 3,77-3,71 (m, 1H), 3,36 (dd, J=9,6, 3,6 Hz, 1H), 3,32 (dd, J=9,6, 6,0 Hz, 1H), 2,37 (d, J=4,8 Hz, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
1-((4S,5S)-2,2-Dimetil-5-vinil-[1,3]dioxolan-4-il)-2-tritiloxi-etanona (4)
A una disolución agitada de (COCl)_{2} (28,69 ml, 57,38 mmol, disolución 2M en CH_{2}Cl_{2}) en CH_{2}Cl_{2} (200 ml) se añadió gota a gota una disolución de DMSO (8,9 ml, 125,51 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) a -78ºC, y la mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante 30 minutos. Se añadió una disolución de alcohol 3 (15,44 g, 35,86 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) y la mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 1 hora. Se añadió trietilamina (32,99 ml, 236,68 mmol) a -78ºC y a continuación la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Se añadió cuidadosamente una disolución saturada de cloruro de amonio a 0ºC y la mezcla de reacción se repartió entre CH_{2}Cl_{2} y agua. La capa orgánica se secó, se filtró, y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando hexano y acetato de etilo (6:1) para dar cetona 4 (13,83 g, 90%) en forma de un sólido blanco; ^{1}RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,46-7,23 (m, 15H), 5,56 (ddd, J=17,2, 10,4, 6,8 Hz, 1H), 5,26 (td, J=16,8, 1,2 Hz, 1H), 5,13 (td, J=10,4, 1,2 Hz, 1H), 4,88-4,84 (m, 1H), 4,76 (d, J=7,6 Hz, 1H), 4,06 (d, J=18,0 Hz, 1 H), 3,72 (d, J=18,4 Hz, 1H), 1,41 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
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(2R)-2-((4S,5S)-2,2-Dimetil-5-vinil-[1,3]dioxolan-4-il)-1-tritiloxi-but-3-en-2-ol (5)
A una disolución agitada de 4 (14,66 g, 34,22 mmol) en tetrahidrofurano (150 ml) se añadió gota a gota bromuro de vinilmagnesio (68,44 ml, 68,44 mmol, disolución 1M en tetrahidrofurano) a -78ºC, y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a la misma temperatura. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente en disolución saturada de cloruro de amonio y salmuera, y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró, y se evaporó. El aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (hexano:acetato de etilo = 9:1) para dar 5 (15,62 g, 100%) en forma de un semisólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,43-7,22 (m, 15H), 6,16 (dd, J=17,2, 10,8 Hz, 1H), 6,01-5,93 (m, 1H), 5,42 (dd, J=17,2, 1,2 Hz, 1H), 5,27 (dd, J=10,8, 1,2 Hz, 1H), 4,99 (d, J=16,0 Hz, 1H), 4,98 (d, J=11,2 Hz, 1H), 4,54-4,47 (m, 2H), 3,33 (d, J=8,8 Hz, 1H), 3,05 (d, J=8,4 Hz, 1H), 2,54 (s ancho, 1H), 1,46 (s, 3H), 1,40 (s, 3H).
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(3aS,4R,6aS)-2,2-Dimetil-4-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-ol (6)
A una disolución agitada de 5 (14,55 g, 31,86 mmol) en cloruro de metileno (100 ml) se añadió dihidrocloruro de triciclohexilfosfina[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidroimidazol-2-ilideno]-[bencilideno]rutenio (VI) (270 mg, 0,32 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. Los compuestos volátiles se retiraron a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 5:1) para dar 6 (12,38 g, 94%) en forma de un semisólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,47-7,21 (m, 15H), 5,93 (dd, J=5,6, 1,6 Hz, 1H), 5,73 (d, J=5,6 Hz, 1H), 5,31 (d, J=6,5 Hz, 1H), 4,56 (d, J=5,6 Hz, 1H), 3,59 (d, J=9,2 Hz, 1H), 3,15 (d, J=9,2 Hz, 1H), 3,02 (s, 1H), 1,32 (s, 3H), 1,21 (s, 3H).
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(3R,6aR)-2,2-Dimetil-6-tritiloximetil-3a,6a-dihidro-ciclopenta[1,3]dioxol-4-ona (7)
Una disolución de 6 (12,17 g, 28,40 mmol), tamices moleculares de 4 \ring{A} (14,2 g), y dicromato de piridinio (32,05 g, 85,20 mmol) en DMF (100 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. Después de que la mezcla se diluyó con éter dietílico y acetato de etilo, la mezcla se filtró a través de una almohadilla corta de una mezcla de gel de sílice y Celite. El filtrado se evaporó y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 4:1) para dar cetona 7 (11,14 g, 92%) en forma de un sólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,44-7,22 (m, 15H), 6,42 (t, J=2,0 Hz, 1H), 4,96 (d, J=5,2 Hz, 1H), 4,45 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,23 (dd, J=18,4, 2,0 Hz, 1H), 3,93 (dd, J=18,0, 2,0 Hz, 1H), 1,34 (s, 6H).
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(3R,6aR)-5-Yodo-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-3a,6a-dihidro-ciclopenta[1,3]dioxol-4-ona (8)
A una disolución agitada 7 (17,19 g, 40,30 mmol) y yodo (12,37 g, 43,86 mmol) en cloruro de metileno (80 ml) se añadió piridina (3,0 ml, 36,27 mmol) en atmósfera de nitrógeno a 0ºC, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla se diluyó con cloruro de metileno y agua y la capa orgánica se lavó con agua, disolución saturada de tiosulfato de sodio, salmuera, y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de la evaporación de los disolventes, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 7:1) para dar cetona 8 (16,03 g, 72%) en forma de un sólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,43-7,15 (m, 15H), 5,35 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,45 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,19 (d, J=16,0 Hz, 1H), 4,08 (d, J=16,0 Hz, 1H), 1,36 (s, 3H), 1,24 (s, 3H).
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(3R,4R,6aR)-5-Yodo-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-ol (9)
A una disolución agitada 8 (8,97 g, 16,25 mmol) y cloruro de cerio (III) heptahidrato (6,66 g, 17,88 mmol) en metanol (80 ml) se añadió borohidruro de sodio (676 mg, 17,88 mmol) a 0ºC, y la mezcla se agitó a la misma temperatura durante 1 hora. La mezcla se diluyó con salmuera y se extrajo con acetatol de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 6:1) para dar 9 (8,56 g, 95%) en forma de un sólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,48-7,20 (m, 15H), 5,20 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,76 (t, J=5,6 Hz, 1H), 3,88 (d, J=12,0 Hz, 1H), 3,79 (d, J=12,0 Hz, 1H), 2,78 (d, J=10,4 Hz, 1H), 1,40 (s, 3H), 1,30 (s, 3H).
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(3R,4R,6aR)-terc-Butil-(5-yodo-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-iloxi)-difenil- silano (10)
A una disolución agitada de 9 (8,53 g, 15,39 mmol) e imidazol (3,14 g, 46,17 mmol) en N,N-dimetilformamida (70 ml) anhidra se añadió TBDPSCl (4,80 ml, 18,47 mmol) a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante la noche. La mezcla se enfrió rápidamente con agua, se extrajo con éter dietílico, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 30:1) para dar 10 (11,66 g, 96%) en forma de un aceite incoloro; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,82-7,18 (m, 25H), 4,94 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,47 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,05 (d, J=5,6 Hz, 1H), 3,89 (d, J=12,0 Hz, 1H), 3,78 (d, J=12,0 Hz, 1H), 1,29 (s, 3H), 1,25 (s, 3H), 1,13 (s, 9H).
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(3R,4R,6aR)-terc-Butil-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-iloxi)-difenil-silano (11)
A una disolución agitada de 10 (11,66 g, 14,71 mmol) y N-fluorobencenosulfonimida (5,566 g, 17,65 mmol) en tetrahidrofurano seco (100 ml) se añadió lentamente n-butil-litio (27,6 ml, 44,13 mmol, disolución 1,6M en hexanos) a -78ºC en atmósfera de nitrógeno, y la mezcla de reacción se agitó a la misma temperatura durante 1 hora. La mezcla se enfrió rápidamente con disolución saturada de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se evaporó. El residuo se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 6:1) para dar 11 (7,35 g, 73%) en forma de un sólido blanco; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,81-7,17 (m, 25H), 4,94 (d, J=7,2 Hz, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 3,89 (t, J=12,0 Hz, 1H), 3,77 (t, J=12,0 Hz, 1H), 1,42 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,08 (s, 9H).
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(3R,4R,6aR)-5-Fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-ol (12)
A una disolución agitada de 11 (7,35 g, 10,73 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) se añadió gota a gota fluoruro de tetra-n-butilamonio (12,88 ml, 12,88 mmol, 1,0 M en tetrahidrofurano) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de la retirada del disolvente, el residuo se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 4:1) para dar 12 (4,31 g, 90%) en forma de un aceite incoloro; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,43-7,18 (m, 15H), 5,12 (t, J=5,6 Hz, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,38 (t, J=5,6 Hz, 1H), 3,91 (d, J=13,2 Hz, 1H), 3,74 (d, J=13,2 Hz, 1H), 2,75 (d, J=10,4 Hz, 1H), 1,43 (s, 3H), 1,39 (s, 3H).
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Ejemplo 2 Síntesis de 2-fluorociclopentenil-nucleósidos
El fluoro-ciclopentenol 12 se copuló con una N^{3}-benzoilbase protegida, según se resume en el Esquema 2.
Procedimiento general para la condensación de la base
Una disolución de dietilazodicarboxilato (780 mg, 4,48 mmol) en tetrahidrofurano seco (30 ml) se añadió gota a gota a una disolución del fluorociclopentenol 12 (800 mg, 1,79 mmol), trifenilfosfina (1.174,8 mg, 4,48 mmol), y una seleccionada N^{3}-benzoilbase (derivados de uracilo, 3,58 mmol) en tetrahidrofurano seco (10 ml) a 0ºC en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, y a continuación los compuestos volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 4:1) para dar el producto condensado con base.
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Esquema 2
4
El rendimiento y los datos espectroscópicos para los productos de condensación 13-18 eran como sigue:
(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-il)-1H- pirimidina-2,4-diona (13). 865 mg, 75%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,97-7,24 (m, 15H), 7,66 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,92 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,49 (s ancho, 1H), 4,72 (t, J=6,0 Hz, 1H), 4,35 (d, J=13,2 Hz, 1H), 4,29 (t, J=6,0 Hz, 1H), 4,15 (dt, J=13,2, 2,4 Hz, 1H), 1,43 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
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(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-il)-5- fluoro-1H-pirimidina-2,4-diona (14). 924,6 mg, 78%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,94-7,24 (m, 15H), 7,13 (d, J=5,2 Hz, 1H), 5,33 (td, J=6,0, 0,8 Hz, 1H), 5,27 (s ancho, 1H), 4,62 (t, J=7,2 Hz, 1H), 4,03 (d, J=12,8 Hz, 1H), 3,87 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 1,44 (s, 3H), 1,36 (s, 3H).
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(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-5-cloro-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol- 4-il)-1H-pirimidina-2,4-diona (15). 875,3 mg, 72%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,95-7,21 (m, 15H), 7,83 (s, 1H), 5,42 (td, J=6,0, 0,8 Hz, 1H), 5,35 (s ancho, 1H), 4,65 (t, J=7,2 Hz, 1H), 3,99 (t, J=12,8 Hz, 1H), 3,75 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 1,43 (s, 3H), 1,32 (s, 3H).
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(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-5-bromo-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol- 4-il)-1H-pirimidina-2,4-diona (16). 893,7 mg, 69%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,04 (s, 1H), 7,97-7,28 (m, 15H), 5,29 (td, J=6,0, 0,8 Hz, 1H), 5,25 (s ancho, 1H), 4,71 (t, J=7,2 Hz, 1H), 4,15 (d, J=12,8 Hz, 1H), 3,95 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 1,41 (s, 3H), 1,37 (s, 3H).
\newpage
(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-il)-5-yodo-1H-pirimidina-2,4-diona (17). 855,2 mg, 62%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,26 (s, 1H), 7,93-7,22 (m, 15H), 5,38 (td, J=6,0, 0,8 Hz, 1H), 5,29 (s ancho, 1H), 4,73 (t, J=7,2 Hz, 1H), 4,14 (t, J=12,8 Hz, 1H), 3,97 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 1,48 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
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(3R,4S,6aR)-3-Benzoil-1-(5-fluoro-2,2-dimetil-6-tritiloximetil-4,6a-dihidro-3aH-ciclopenta[1,3]dioxol-4-il)-5-metil-1H-pirimidina-2,4-diona (18). 990,4 mg, 84%; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,94-7,22 (m, 15H), 7,25 (s, 1H), 5,43 (td, J=6,0, 0,8 Hz, 1H), 5,19 (s ancho, 1H), 4,52 (t, J=7,2 Hz, 1H), 4,13 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,01 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H), 2,02 (s, 3H), 1,44 (s, 3H), 1,36 (s, 3H).
Procedimiento general para la desprotección
Un compuesto protegido 13-18 (1,00 mmol) se disolvió en 10 ml de HCl/metanol 1N (2:1, v/v) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. El disolvente se retiró a presión reducida, y el residuo resultante se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice (cloruro de metileno:metanol = 10:1) para dar un derivado de N-benzoil-uracilo.
El derivado de N-benzoil-uracilo obtenido anteriormente se trató con 10 ml de amoniaco metanólico, y la mezcla se agitó en un tubo cerrado a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se evaporó y el residuo se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice (cloruro de metileno:metanol = 5:1) para dar un derivado de uracilo de la Tabla 1, que se cristalizó en éter dietílico/metanol.
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TABLA 1 Derivados de uracilo
5
El rendimiento y los datos espectroscópicos para los derivados de uracilo 19-24 eran como sigue:
(1S,4R,5S)-1-(2-Fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona (19, RX-3116).
170,4 mg, 66%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,48 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,74 (d, J=8,0, 1H), 5,44 (s ancho, 1H), 4,68 (t, J=5,2 Hz, 1H), 4,37 (t, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,12 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-5-Fluoro-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona (20, RX-3116A). 168,5 mg, 61%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,74 (dd, J=6,4, 0,8 Hz, 1H), 5,46 (s ancho, 1H), 4,67 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,18 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,12 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-5-Cloro-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona (21, RX-3116B). 190,2 mg, 65%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,43 (s, 1H), 5,45 (s ancho, 1H), 4,69 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,35 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,15 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-5-Bromo-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona (22, RX-3116C). 192,1 mg, 57%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,59 (s, 1H), 5,43 (s ancho, 1H), 4,64 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,35 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,16 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,11 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-1-(2-Fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-yodo-1H-pirimidina-2,4-diona (23, RX-3116D). 195,9 mg, 51%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,67 (s, 1H), 5,46 (s ancho, 1H), 4,66 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,36 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,15 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,08 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-1-(2-Fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-metil-1H-pirimidina-2,4-diona (24, RX-3116E). 202,4 mg, 75%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,62 (s, 1H), 5,49 (s ancho, 1H), 4,69 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,36 (d, J=13,2 Hz, 1H), 4,17 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,10 (dt, J=13,2, 2,4 Hz, 1H), 1,82 (s, 3H).
Procedimiento general para la conversión en derivados de citosina
Una disolución de un compuesto de uracilo 19-24 de la Tabla 1 (1,00 mmol) en piridina anhidra (10 ml) se trató con anhídrido acético (940 \mul, 10,0 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El residuo obtenido después de la evaporación de todos los compuestos volátiles se diluyó con cloruro de metileno; se lavó con HCl diluido, disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera; se secó (MgSO_{4}); se filtró, y se evaporó. El residuo que contiene el triacetato se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Una disolución de 1,2,4-triazol (760 mg, 11,0 mmol) y oxicloruro de fósforo (915 \mul, 10,0 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se trató con trietilamina (1,25 ml, 9,0 mmol) y triacetato (1,00 mmol) en 4 ml de acetonitrilo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. Se añadió trietilamina (1,5 ml) y agua (4,5 ml) adicional, y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Después de la dilución con cloruro de metileno, la mezcla se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó. El residuo se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional
A una disolución del residuo anterior en 1,4-dioxano (8 ml) se añadió hidróxido de amonio (28%, 2 ml) a 0ºC, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas. Después de la retirada de todos los componentes volátiles, el residuo se disolvió en amoníaco metanólico (5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se evaporó, y el residuo se purificó por cromatografía en columna ODS (agua:acetona = 20:1) para dar el derivado de citosina deseado de la Tabla 2, que se cristalizó en éter dietílico/metanol.
TABLA 2 Derivados de citosina
6
El rendimiento y los datos espectroscópicos para los derivados de citosina 25-29 eran como sigue:
(1S,4R,5S)-4-Amino-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona (25, RX-3117). 133,8 mg, 52%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,47 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,92 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,35 (s ancho, 1H), 4,69 (t, J=5,6 Hz, 1H), 4,36 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,26 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,11 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-4-Amino-5-fluoro-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona (26, RX-3117A). 156,9 mg, 57%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,79 (d, J=6,4 Hz, 1H), 5,41 (s ancho, 1H), 4,68 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,23 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,12 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-4-Amino-5-cloro-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona (27, RX-3117B). 134,2 mg, 46%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,50 (s, 1H), 5,37 (s ancho, 1H), 4,70 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,41 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,25 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,17 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-4-Amino-5-bromo-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona (28, RX-3117C). 164,7 mg, 49%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,62 (s, 1H), 5,41 (s ancho, 1H), 4,69 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,40 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,22 (td, J=5,6, 1,2 Hz, 1H), 4,14 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
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(1S,4R,5S)-4-Amino-1-(2-fluoro-4,5-dihidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-yodo-1H-pirimidin-2-ona (29, RX-3117D). 160,9 mg, 42%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,70 (s, 1H), 5,43 (s ancho, 1H), 4,66 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,34 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,21 (td, J=5,6, 0,8 Hz, 1H), 4,08 (dt, J=12,8, 2,4 Hz, 1H).
Procedimiento general para la desoxigenación
A una disolución agitada de un derivado de uracilo de la Tabla 1 (0,50 ml) en piridina (5 ml) se añadió DMAP (1,00 mmol) y 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (0,75 mmol) a temperatura ambiente. Diez horas después, el disolvente se retiró y el residuo se repartió entre cloruro de metileno y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó a continuación sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se retiró a presión reducida y el residuo en bruto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una disolución agitada del residuo en bruto en acetonitrilo anhidro (5 ml) se añadió 4-dimetilamino-piridina (1,00 mmol) y clorotioformiato de fenilo (0,60 mmol), y a continuación la mezcla de reacción se dejó calentar para agitar a temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla se repartió entre cloruro de metileno y salmuera, y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y se filtró. Los componentes volátiles se retiraron y el residuo que contiene el tioéster de fenilo se usó en la siguiente reacción de radicales sin purificación adicional.
A una disolución agitada del residuo que contiene tioéster de fenilo en benceno seco se añadió trietilborano (1,00 mmol, disolución 1,0 M en hexanos) e hidruro de tributilestaño (1,00 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se evaporó, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (cloruro de metileno:metanol = 20:1) para dar el producto desoxigenado.
A una disolución agitada del producto desoxigenado en tetrahidrofurano (5 ml) se añadió gota a gota fluoruro de tetra-n-butilamonio (1,20 mmol, 1,0 M en tetrahidrofurano) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Después de la retirada del disolvente, el residuo se purificó por cromatografía flash en columna de gel de sílice (cloruro de metileno:metanol = 5:1) para dar un derivado de uracilo 2'-desoxigenado de la Tabla 3, que se cristalizó en éter dietílico/metanol.
TABLA 3 Derivados de uracilo 2'-desoxigenado
7
Los rendimientos y datos espectroscópicos para los derivados de uracilo desoxigenado 30-35 eran como sigue:
(1S,4R)-1-(2-Fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona (30, RX-3216). 63,0 mg, 52%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,50 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,85 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,52 (s ancho, 1H), 4,62 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,39 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,25 (m, 1H), 2,05-2,18 (m, 2H).
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(1S,4R)-5-Fluoro-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona (31, RX-3216A). 63,7 mg, 49%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,75 (d, J=6,4 Hz, 1H), 5,5 (s ancho, 1H), 4,65 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,34 (d, J=12,8 Hz), 4,15 (m, 1H), 2,04-2,20 (m, 2H).
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(1S,4R)-5-Cloro-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona (32, RX-3216B). 65,0 mg, 47%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,39 (s, 1H), 5,35 (s ancho, 1H), 4,69 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H), 2,05-2,18 (m, 2H).
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(1S,4R)-5-Bromo-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidina-2,4-diona (33, RX-3216C). 72,2 mg, 45%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,57 (s, 1H), 5,35 (s ancho, 1H), 4,69 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H), 2,08-2,22 (m, 2H).
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(1S,4R)-1-(2-Fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-yodo-1H-pirimidina-2,4-diona (34, RX-3216D). 75,5 mg, 41%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,69 (s, 1H), 5,39 (s ancho, 1H), 4,67 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,16 (m, 1H), 2,01-2,17 (m, 2H).
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(1S,4R)-1-(2-Fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-metil-1H-pirimidina-2,4-diona (35, RX-3216E). 67,9 mg, 53%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,72 (s, 1H), 5,39 (s ancho, 1H), 4,68 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,15 (m, 1H), 2,10-2,25 (m, 2H).
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Procedimiento general para la conversión en derivados de citosina
Una disolución de un compuesto de uracilo de la Tabla 3 (0,5 mmol) en piridina anhidra (5 ml) se trató con anhídrido acético (470 \mul, 5.0 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. El residuo obtenido después de la evaporación de todos los compuestos volátiles se diluyó con cloruro de metileno; se lavó con HCl diluido, disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera; se secó (MgSO_{4}); se filtró, y se evaporó. El residuo que contiene triacetato se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Una disolución de 1,2,4-triazol (760 mg, 11,0 mmol) y oxicloruro de fósforo (915 \mul, 10,0 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se trató con trietilamina (1,25 ml, 9,0 mmol) y triacetato (1,00 mmol) en 4 ml de acetonitrilo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. Se añadieron trietilamina (1,5 ml) y agua (4,5 ml) adicionales, y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Después de la dilución con cloruro de metileno, la mezcla se lavó con disolución saturada de NaHCO_{3}, se secó (MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó. El residuo se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
A una disolución del residuo anterior en 1,4-dioxano (8 ml) se añadió hidróxido de amonio (28%, 2 ml) a 0ºC, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas. Después de la retirada de todos los componentes volátiles, el residuo se disolvió en amoniaco metanólico (5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se evaporó, y el residuo se purificó por cromatografía en columna ODS (agua:acetona =20:1) para dar el derivado de citosina 2'-desoxigenada de la Tabla 4, que se cristalizó en éter dietílico/metanólico.
TABLA 4 Derivados de citosina 2'-desoxigenada
8
Los rendimientos y los datos espectroscópicos para los derivados de citosina desoxigenada 36-40 eran como sigue:
(1S,4R)-4-Amino-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona (36, RX-3217). 63,9 mg, 53%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,48 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,95 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,40 (s ancho, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,08 (d, J=12,8 Hz, 1H), 2,04-2,19 (m, 1H).
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(1S,4R)-4-Amino-5-fluoro-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona (37, RX- 3217A). 53,1 mg, 41%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,81 (d, J=6,4 Hz, 1H), 5,39 (s ancho, 1H), 4,37 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,11 (d, J=12,8 Hz, 1H), 2,08-2,21 (m, 1H).
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(1S,4R)-4-Amino-5-cloro-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona (38, RX- 3217B). 62,0 mg, 45%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,51 (s, 1H), 5,39 (s ancho, 1H), 4,45 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,23 (m, 1H), 4,18 (d, J=12,8 Hz, 1H), 2,05-2,16 (m, 2H).
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(1S,4R)-4-Amino-5-bromo-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-1H-pirimidin-2-ona (39, RX- 3217C). 76,8 mg, 48%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,61 (s, 1H), 5,46 (s ancho, 1H), 4,41 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,23 (m, 1H), 4,16 (d, J=12,8 Hz, 1H), 2,08-2,17 (m, 2H).
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(1S,4R)-4-Amino-1-(2-fluoro-4-hidroxi-3-hidroximetil-ciclopent-2-enil)-5-yodo-1H-pirimidin-2-ona (40, RX- 3217D). 64,2 mg, 35%; ^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,63 (s, 1H), 5,38 (s, 1H), 4,35 (d, J=12,8 Hz, 1H), 4,19 (m, 1H), 4,11 (d, J=12,8 Hz, 1H), 2,11-2,23 (m, 2H).
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Ejemplo 3 Inhibición del crecimiento celular de compuestos nucleósidos Crecimiento de líneas celulares de cáncer
Se obtuvieron líneas celulares de cáncer para determinar el efecto de los compuestos nucleósidos de las siguientes fuentes: OVCAR-3 (ovario) humano, MCF-7 (pecho, dependiente de hormonas), MDA-MB-231 (pecho), HeLa (cervix), PC3 (próstata), LNCap (próstata), HepG2 (hígado), A-549 (pulmón), NCI-H226 (pulmón), HT-29 (colon), HTCT116 (colon), SK-MEL-28 (melanoma) y PANC-1 (páncreas) de la American Type Culture Collection (ATCC) (Manassas, VA); U251 (cerebro) de Riken (Japón); MKN-45 (estómago) de DSMZ (Alemania); UMRC2 (riñón) del United States National Cancer Institute (Bethesda, MD). Todas las líneas celulares excepto MDA-MB-231, HCT116, UMRC2 y PAN-1 se cultivaron en medio RPMI1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) enriquecido con suero bovino fetal al 10% ("FBS"), piruvirato de sodio 1 mM, HEPES 10 mM y 100 U/ml de penicilina y 100 \mug/ml de estreptomicina ("P/S"). Se mantuvieron células MDA-MB-231, HCT116, UMRC2 y PANC-1 en medio de Eagle modificado con Dulbecco ("DMEM", Invitrogen) enriquecido con FBS al 10%, P/S, HEPES 10 mM y L-glutamina 2 mM. Todas las células se incubaron a 37ºC en CO_{2} al 5% humidificado.
Ensayo de inhibición del crecimiento celular
Se puede evaluar la inhibición del crecimiento de los derivados de nucleósido contra varias células tumorales humanas. Se puede estudiar la importancia relativa de los grupos substituyentes particulares en los compuestos. Los derivados de nucleósido, preparados como se describen anteriormente, se ensayan con DMSO como control.
El ensayo de inhibición del crecimiento de RX-3117 contra 16 líneas celulares de tumor humano se realizó usando el método de la Sulforhodamina B ("SRB") (Skehan et al., J. National Cancer Institute, 82: 1107-1112 (1990)). Brevemente, células tumorales que crecen exponencialmente se sembraron en una placa de 96 pocillos con una densidad de 2-3 x 10^{3} células/pocillo y se trataron con compuestos nucleósidos al día siguiente. Se usaron para cada tratamiento pocillos por triplicado. Las células se incubaron con los diferentes compuestos durante 96 horas a 37ºC en un atmósfera de CO_{2} al 5% humidificado. Después de 96 horas de incubación, las células se fijaron con ácido tricloroacético al 10% ("TCA"), se incubaron durante 1 hora a 4ºC, y se lavaron 3 veces con agua del grifo. Subsecuentemente, las células se tiñeron con sulforhodamina B al 0,4% en ácido acético al 1% durante 30 minutos, se lavaron 4 veces con ácido acético al 1%, y se secaron al aire de nuevo. Después de 5 minutos de agitación en disolución de Tris 10 mM, se midió la absorbancia de cada pocillo a 530 nm usando el Benchmark Plus Microplate reader (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA).
Para trasladar los valores de OD_{530} al número de células vivas en cada pocillo, los valores de OD_{530} se compararon con aquellos de OD_{530} estándar frente a la curvas del número de células generadas para cada línea celular. El porcentaje de supervivencia se calculó usando la fórmula:
% de supervivencia = número de células vivas [ensayo]/número de células vivas [control] x 100
Los valores de IC_{50} se calcularon por medio de análisis de regresión no lineal.
La tabla 5 resume la inhibición del crecimiento celular (IC_{50}, \muM) determinada para RX-3117.
TABLA 5 Inhibición del crecimiento celular (IC_{50}, \muM) por RX-3117 contra líneas celulares de cáncer humano
9
Como se muestra en la tabla 5, los derivados de nucleósido de la invención son activos contra una amplia gama de líneas celulares tumorales.
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Ejemplo 4 Estudio de xenoinjerto ex vivo
Para observar la inhibición del crecimiento del tumor en un modelo animal, se realizó un estudio de xenoinjerto ex vivo en ratones sin pelo utilizando RX-3117. Las líneas celulares de cáncer humano apropiadas son aquellas que se han ensayado ya para ver la inhibición del crecimiento celular del cáncer, y particularmente preferido era el carcinoma de colon HCT116. La eficacia antitumor del RX-3117 se evaluó contra xenoinjertos tumorales inyectados subcutáneamente en ratones sin pelo y se midió el volumen del tumor después del tratamiento de RX-3117.
La suspensión de células HCT116 (2 x 10^{6} células en 0,1 ml de RPMI) se inyectó subcutáneamente en el flanco derecho de ratones macho atímicos de seis semanas de edad (BALB/c nu/nu) el día 0. Se inyectó a un número suficiente de ratones suspensión de células HCT116 de modo que se seleccionaran tumores en un intervalo de volumen tan estrecho como sea posible para el ensayo el día del inicio del tratamiento. Los animales con tumores dentro del intervalo de tamaño apropiado se asignaron a varios grupos de tratamiento. El RX-3117 se disolvió en DMSO al 10% en PBS y el disolvente solo sirvió como control. Todas las medicaciones del estudio (control, RX-3117: 2 mg/kg/día, RX-3117: 10 mg/kg/día) se efectuaron por medio de inyecciones intraperitoneales tres veces por semana comenzando desde el día 5 y terminando el día 37. Para cuantizar el crecimiento del tumor, se midieron tres diámetros perpendiculares de los tumores con calibres cada 3-5 días, y se controló el peso corporal de los ratones para ver la toxicidad. El volumen del tumor se calculó usando la fórmula: volumen tumoral (mm^{3}) = (anchura) x (longitud) x (altura) x \pi/6.
El volumen del tumor (media\pmSEM) en cada grupo de animales se presenta en la Fig. 1, que muestra una medida del volumen del tumor como indicador de la eficacia del RX-3117 contra xenoinjertos de carcinoma de colon humano HCT116. El tratamiento con RX-3117 fue bien tolerado sin muertes y no se observó más de 1 g de fluctuación de peso corporal. Después del día 37, el volumen del tumor se redujo significativamente en los ratones tratados con RX-3117 a 2 a 10 mg/kg de tratamiento comparado con los controles. De este modo, como se demuestra en la Fig. 1, el RX-3117 causa la inhibición del crecimiento del tumor en ratones sin pelo inyectados sc con células de carcinoma de colon humano HCT116.
Las realizaciones ilustradas y discutidas en esta memoria descriptiva se desean solo para enseñar a aquellos expertos en la técnica el mejor modo conocido por los inventores para hacer uso de la invención.

Claims (13)

1. El uso, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo, de un compuesto que es un nucleósido de la siguiente fórmula I':
10
en la que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br, I o CH_{3};
o la siguiente fórmula II':
11
en la que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br o I;
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
2. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho trastorno antiproliferativo comprende un tumor.
3. El uso según la reivindicación 2, en el que dicho tumor se selecciona de tumores del ovario, tumores del pecho, tumores cervicales, tumores de la próstata, tumores del hígado, tumores pulmonares, tumores renales, tumores de colon, tumores pancreáticos, tumores cerebrales, tumores del estómago y melanoma.
4. Un compuesto que es un nucleósido de la siguiente fórmula III: @lin
12 
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en la que:
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13 
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Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br, I o CH_{3};
con la condición de que, cuando A es
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14 
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X no es CH_{3};
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
\newpage
5. Un compuesto según la reivindicación 4, o un uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el nucleósido tiene la siguiente fórmula I:
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15 
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en la que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br, I o CH_{3};
o la siguiente fórmula II:
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16 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br o I.
\newpage
6. Un compuesto según la reivindicación 4 o la reivindicación 5, o un uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el nucleósido es:
17
7. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente activa de un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
8. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 que tiene un IC_{50} no mayor de 10 \mum con respecto a por lo menos una línea celular para un tumor seleccionado de tumores del ovario, tumores del pecho, tumores cervicales, tumores de la próstata, tumores del hígado, tumores de pulmón, tumores de riñón, tumores de colon, tumores pancreáticos, tumores cerebrales, tumores de estómago y melanoma.
9. Un compuesto según la reivindicación 8, en el que dicha línea celular se selecciona de OVCAR-3 humano para tumores del ovario, MCF-7 o MDA-MB-231 para tumores del pecho, HeLa para tumores cervicales, PC3 o LNCap para tumores de la próstata, HepG2 para tumores del hígado, A549 o NCI-H226 para tumores de pulmón, UMRC2 para tumores de riñón, HT-29 o HCT116 para tumores de colon, PANC-1 para tumores pancreáticos, U251 para tumores cerebrales, MKN-45 para tumores de estómago y SK-MEL-28 para melanoma.
10. Un compuesto según la reivindicación 8 o la reivindicación 9 que tiene un IC_{50} no mayor de 1,0 \mum.
11. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 y 8 a 10 para uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal por medio de terapia.
12. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 y 8 a 10 para uso en el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo.
13. Un procedimiento para producir un compuesto que es un nucleósido de la siguiente fórmula I:
18
en la que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br, I o CH_{3};
o la siguiente fórmula II:
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19 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que:
Y es H o OH; y
X es H, F, Cl, Br o I;
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable;
comprendiendo el procedimiento por lo menos una etapa seleccionada de:
\vskip1.000000\baselineskip
20
200
en la que B se selecciona de terc-butildimetilsililo, terc-butildifenilsililo, bencilo y tritilo.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9315534B2 (en) * 2007-08-10 2016-04-19 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Radiologic agents for monitoring alzheimer's disease progression and Evaluating a Response to Therapy and processes for the preparation of such agents
EP2515650A4 (en) * 2009-12-23 2013-05-29 Univ Nebraska TARGETED RADIOACTIVELY MARKED COMPOUNDS AND THEIR USE FOR THE TREATMENT AND DIAGNOSIS OF CANCER
AU2014232502B8 (en) 2013-03-15 2018-01-18 Rexahn Pharmaceuticals, Inc. Process for the preparation of 4-amino-1-((1S,4R, 5S)-2-fluoro-4,5-dihydroxy-3-hydroxymethyl-cyclopent-2-enyl)-1H-pyrimidin-2-one
EP3307251B8 (en) * 2015-06-09 2021-12-01 Ocuphire Pharma, Inc. Fluorocyclopentenylcytosine uses and processes of preparation

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6187674A (ja) * 1984-10-06 1986-05-06 Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd シクロペンテン環を有する新規ヌクレオシド
US4975434A (en) * 1986-05-27 1990-12-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Antiviral and anticancer cyclopentenyl cytosine
JP2004533406A (ja) * 2000-10-18 2004-11-04 フアーマセツト・リミテツド ウイルス感染症および異常細胞増殖を治療するための修飾ヌクレオシド
TWI299664B (en) * 2003-01-06 2008-08-11 Osi Pharm Inc (2-carboxamido)(3-amino)thiophene compounds

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