ES2335229T3 - Procedimiento para la reduccion enzimatica enantioselectiva de cetocompuestos. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para la reducción enzimática enantioselectiva de cetocompuestos de fórmula general I (I)R1-C(O)-R2 en la que R1 representa uno de los restos 1) -alquilo (C1-C20), siendo alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada, 2) -alquenilo (C2-C20), siendo alquenilo de cadena lineal o de cadena ramificada y dado el caso contiene hasta cuatro dobles enlaces, 3) -alquinilo (C2-C20), siendo alquinilo de cadena lineal o de cadena ramificada y dado el caso contiene hasta cuatro triples enlaces, 4) -arilo (C6-C14), 5) -alquil (C1-C8)-arilo (C6-C14), 6) -heterociclo (C5-C14), que está no sustituido o está mono, di o trisustituido con -OH, halógeno, -NO2 y/o -NH2, o 7) -cicloalquilo (C3-C7); en la que los restos mencionados anteriormente bajo 1) a 7) están no sustituidos o están mono, di o trisustituidos independientemente entre sí con -OH, halógeno, -NO2 y/o -NH2, y R2 representa uno de los restos 8) -alquilo (C1-C6), siendo alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada, 9) -alquenilo (C2-C6), siendo alquenilo de cadena lineal o de cadena ramificada y dado el caso contiene hasta tres dobles enlaces, 10) -alquinilo (C2-C6), siendo alquinilo de cadena lineal o de cadena ramificada y dado el caso contiene dos triples enlaces, o 11) -alquil (C1-C10)-C(O)-O-alquilo (C1-C6), siendo alquilo lineal o de cadena ramificada y está no sustituido o está mono, di o trisustituido con -OH, halógeno, -NO2 y/o -NH2, en la que los restos mencionados anteriormente bajo 8) a 11) están no sustituidos o están mono, di o trisustituidos independientemente entre sí con -OH, halógeno, -NO2 y/o -NH2, caracterizado porque una mezcla monofásica líquida que comprende (a) al menos el 5% en peso/volumen de un compuesto de fórmula (I), (b) al menos el 15% en volumen de 2-propanol y/o 2-butanol, y (c) agua se trata con una óxido reductasa R-específica en presencia de un cofactor, para formar un hidroxicompuesto quiral de fórmula general II (II)R1-CH(OH)-R2 en la que R1 y R2 tienen el significado indicado anteriormente, regenerándose el cofactor mediante la oxidación del 2-propanol y/o 2-butanol.
Description
Procedimiento para la reducción enzimática
enantioselectiva de cetocompuestos.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para la reducción enzimática enantioselectiva de
cetocompuestos, especialmente de ésteres del ácido
4-halo-3-oxobutírico
para dar los correspondientes R-alcoholes o ésteres
del ácido
S-4-halo-3-hidroxibutírico.
Las carbonil reductasas (otras denominaciones:
alcohol deshidrogenasas, óxido reductasas) se conocen como
catalizadores para la reducción de compuestos de carbonilo o para la
oxidación de alcoholes secundarios. Estas enzimas necesitan una
coenzima, por ejemplo NAD(P)H. La reducción de cetonas
con la carbonil reductasa obtenida de Lactobacillus kefir y
la coenzima NADPH se conoce por ejemplo por el documento US
5.342.767.
Los hidroxicompuestos ópticamente activos son
unidades estructurales quirales valiosas con amplia aplicación para
la síntesis de compuestos farmacológicamente eficaces, sustancias
aromáticas, feromonas, productos agroquímicos e inhibidores
enzimáticos. Los ésteres del ácido
S-4-halo-3-hidroxibutírico
son por ejemplo productos intermedios importantes para la síntesis
de inhibidores de la HMG-CoA reductasa,
D-carnitina y otros.
Se conocen enzimas enantioselectivas, que por
ejemplo pueden reducir ésteres del ácido
4-halo-3-oxobutírico
para dar los correspondientes ésteres del ácido
S-4-halo-3-hidroxibutírico.
Como ejemplos pueden mencionarse:
reductasas de levadura de panadería
(D-enzyme-1,
D-enzyme-2, J. Am. Chem. Soc. 107,
2993-2994, 1985);
aldehído reductasa 2 de Sporobolomyces
salmonicolor (Appl. Environ. Microbiol. 65,
5207-5211, 1999);
éster del ácido cetopantoténico reductasa de
Candida macedoniensis (Arch. Biochem. Biophys. 294,
469-474, 1992);
reductasa de Geotrichum candidum (Enzyme
Mircrob. Technol. 14, 731-738, 1992);
carbonil reductasa de Candida magnoliae
(documento WO 98/35025);
carbonil reductasa de Kluyveromyces
lactis (documento JP-A Hei
11-187869);
proteína portadora de
\beta-cetoacil-acilo reductasa de
la ácido graso sintetasa tipo II (documento JP-A
2000-189170);
(R)-2-octanol
deshidrogenasa de Pichia finlandica (documento EP 1179595
A1);
alcohol deshidrogenasas secundarias
R-específicas de organismos del género
Lactobacillus (Lactobacillus kefir (documento
US5200335), Lactobacillus brevis (documento DE 19610984 A1)
(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. Diciembre de 2000; 56 Pt 12:
1696-8), Lactobacillus minor (documento
DE10119274); Pseudomonas (documento US 05385833) (Appl
Microbiol Biotechnol. Agosto de 2002;
59(4-5):483-7. publicación
electrónica del 26 de junio de 2002, J. Org. Chem. 1992, 57,
1532).
A excepción de las enzimas de
Pseudomonas, de Lactobacillus y de Pichia
finlandica (documento EP 1179595 A1) las enzimas conocidas en
la mayoría de los casos no aceptan ningún alcohol secundario como
sustrato y tampoco catalizan la oxidación de alcoholes
secundarios.
Por tanto, en un proceso de reducción enzimático
industrial estas enzimas deben acoplarse a una enzima adicional
responsable de la regeneración del cofactor NADH o NADPH. Tales
enzimas adecuadas para la regeneración de NAD(P)H son
formiato deshidrogenasa, glucosa deshidrogenasa, malato
deshidrogenasa, glicerol deshidrogenasa y alcohol deshidrogenasa,
que preferiblemente se expresan junto con la enzima para la
reducción de ésteres del ácido
4-halo-3-oxobutírico.
Pudo demostrarse que las células recombinantes
de Escherichia coli, que por ejemplo expresan simultáneamente
el gen para la carbonil reductasa de Candida magnoliae, así
como el gen para la glucosa deshidrogenasa de Bacillus
megaterium, pueden utilizarse de manera eficaz en el sistema
bifásico acuoso/orgánico, lográndose concentraciones de sustrato de
> 40% (porcentaje en peso) (Appl Microbiol Biotechnol (2001), 55;
590-595, Ann N Y Acad Sci. 13 de diciembre de 1998;
864:87-95).
Procesos con enzimas del grupo de los
Lactobacillales (Lactobacillus minor; documento DE
10119274) se han realizado hasta la fecha satisfactoriamente con
regeneración de coenzima acoplada a sustrato con
2-propanol, realizándose la reducción de sustratos
insolubles también en altas concentraciones mediante la utilización
de sistemas bifásicos acuosos/orgánicos (documentos US 5342767,
DE10119274).
Básicamente en la aplicación de la regeneración
de coenzima acoplada con sustrato con 2-propanol o
2-butanol se consideró la tolerancia reducida de la
mayoría de las enzimas con respecto al 2-propanol y
2-butanol como limitativa. Habitualmente se
utilizan concentraciones de 2-propanol claramente
inferiores al 10% en volumen.
En el estado de la técnica no se conoce ningún
procedimiento que describa el uso de óxido reductasas
R-específicas de levaduras con regeneración de
coenzima acoplada con sustrato con 2-propanol y/o
2-butanol.
Mediante la utilización limitada del cosustrato
2-propanol se consiguieron sólo tasas de conversión
y concentraciones de sustrato insatisfactorias (Angew Chemie Int Ed
Engl 2002, 41: 634-637, Biotechnol Bioeng 5 de abril
de 2004; 86 (1): 55-62).
En el documento EP 1 179 595 A se describe un
procedimiento para la reducción enantioselectiva de compuestos de
carbonilo, en el que se utilizan el compuesto de carbonilo en una
concentración del 0,1-90% y el cosustrato glucosa,
formiato, etanol o 2-propanol en un exceso de
1-20 veces.
El documento WO 02/086126 A enseña un
procedimiento para la reducción enantioselectiva de compuestos de
carbonilo, en el que la óxido reductasa S o
R-específica, el cofactor NAD(P)H y el
compuesto de carbonilo se incuban en un sistema de 2 fases.
El documento WO 2004/111083 A y el documento WO
03/078615 A describen procedimientos para la producción de
hidroxicompuestos, reduciéndose compuestos de carbonilo con NADH
como cofactor y 2-propanol o
2-butanol como cosustrato por medio de una óxido
reductasa S-específica de Pichia capsulata o
Rhodococcus para dar los correspondientes
S-hidroxicompuestos.
Recientemente pudo aislarse una alcohol
deshidrogenasa de cadena mediana, S-específica de
Rhodococcus ruber, que también es todavía estable y activa a
concentraciones considerablemente mayores de
2-propanol del 50-80% (porcentaje
en volumen). (Biotechnol Bioeng 5 de abril de 2004; 86 (1):
55-62), documento WO 03/078615).
La invención tiene como objetivo superar estos
inconvenientes y se refiere a un procedimiento para la reducción
enzimática enantioselectiva de cetocompuestos de fórmula general
I
(I)R_{1}-C(O)-R_{2}
en la que R_{1} representa uno de
los
restos
1) -alquilo (C_{1}-C_{20}),
siendo alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada,
2) -alquenilo
(C_{2}-C_{20}), siendo alquenilo de cadena
lineal o de cadena ramificada y dado el caso contiene hasta cuatro
dobles enlaces,
3) -alquinilo
(C_{2}-C_{20}), siendo alquinilo de cadena
lineal o de cadena ramificada y dado el caso contiene hasta cuatro
triples enlaces,
4) -arilo
(C_{6}-C_{14}),
5) -alquil
(C_{1}-C_{8})-arilo
(C_{6}-C_{14}),
6) -heterociclo
(C_{5}-C_{14}), que está no sustituido o está
mono, di o trisustituido con -OH, halógeno, NO_{2} y/o -NH_{2},
o
7) -cicloalquilo
(C_{3}-C_{7}),
en la que los restos mencionados anteriormente
bajo 1) a 7) están no sustituidos o están mono, di o trisustituidos
independientemente entre sí con -OH, halógeno, -NO_{2} y/o
-NH_{2},
y R_{2} representa uno de los restos
8) -alquilo (C_{1}-C_{6}),
siendo alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada,
9) -alquenilo (C_{2}-C_{6}),
siendo alquenilo de cadena lineal o de cadena ramificada y dado el
caso contiene hasta tres dobles enlaces,
10) -alquinilo
(C_{2}-C_{6}), siendo alquinilo de cadena lineal
o de cadena ramificada y dado el caso contiene dos triples enlaces,
o
11) -alquil
(C_{1}-C_{10})-C(O)-O-alquilo
(C_{1}-C_{6}), siendo alquilo lineal o de cadena
ramificada y está no sustituido o está mono, di o trisustituido con
-OH, halógeno, -NO_{2} y/o -NH_{2},
en la que los restos mencionados anteriormente
bajo 8) a 11) están no sustituidos o están mono, di o trisustituidos
independientemente entre sí con -OH, halógeno, -NO_{2} y/o
-NH_{2},
que está caracterizado porque
una mezcla monofásica líquida que comprende
(a) al menos el 5% en peso/volumen de un
compuesto de fórmula (I),
(b) al menos el 15% en volumen de
2-propanol y/o 2-butanol, y
(c) agua
se trata con una óxido reductasa
R-específica en presencia de un cofactor, para
formar un hidroxicompuesto quiral de fórmula general II
(II)R_{1}-CH(OH)-R_{2}
en la que R_{1} y R_{2} tienen
el significado indicado anteriormente, regenerándose el cofactor
mediante oxidación del 2-propanol y/o
2-butanol.
\vskip1.000000\baselineskip
Por el término "arilo" se entienden restos
de carbono aromáticos con de 6 a 14 átomos de carbono en el anillo.
Los restos -arilo (C_{6}-C_{14}) son por ejemplo
fenilo, naftilo, por ejemplo 1-naftilo,
2-naftilo, bifenililo, por ejemplo
2-bifenililo, 3-bifenililo y
4-bifenililo, antrilo o fluorenilo. Los restos
bifenililo, los restos naftilo y especialmente los restos fenilo
son restos arilo preferidos. Por el término "halógeno" se
entiende un elemento de la serie flúor, cloro, bromo o yodo. Por el
término "-alquilo (C_{1}-C_{20})" se
entiende un resto hidrocarbonado, cuya cadena de carbonos es lineal
o ramificada y contiene de 1 a 20 átomos de carbono, por ejemplo
metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, butilo terciario,
pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonenilo o decanilo. Por el
término "-alquilo C_{0}" se entiende un enlace covalente.
Por el término "-cicloalquilo
(C_{3}-C_{7})" se entienden restos
hidrocarbonados cíclicos, tales como ciclopropilo, ciclobutilo,
ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.
El término "-heterociclo
(C_{5}-C_{14})" representa un anillo
heterocíclico de 5 miembros a 14 miembros monocíclico o bicíclico,
que está parcialmente saturado o completamente saturado. Ejemplos de
heteroátomos son N, O y S. Ejemplos del término "-heterociclo
(C_{5}-C_{14})" son restos, que se derivan de
pirrol, furano, tiofeno, imidazol, pirazol, oxazol, isoxazol,
tiazol, isotiazol, tetrazol,
1,2,3,5-oxatiadiazol-2-óxido,
triazolona, oxadiazolona, isoxazolona, oxadiazolidindiona, triazol,
que están sustituidos con F, -CN, -CF_{3} o
-C(O)-O-alquilo
(C_{1}-C_{4}),
3-hidroxipirro-2,4-diona,
5-oxo-1,2,4-tiadiazol,
piridina, pirazina, pirimidina, indol, isoindol, indazol,
ftalazina, quinolina, isoquinolina, quinoxalina, quinazolina,
cinnolina, carbolina y derivados benzocondensados, ciclopenta,
ciclohexa o cicloheptacondensados de estos heterociclos. Se
prefieren especialmente los restos 2 ó 3-pirrolilo,
fenilpirrolilo, tales como 4 ó
5-fenil-2-pirrolilo,
2-furilo, 2-tienilo,
4-imidazolilo, metil-imidazolilo,
por ejemplo 1-metil-2, -4 o
-5-imidazolilo,
1,3-tiazol-2-ilo,
2-piridilo, 3-piridilo,
4-piridilo, 2, 3 ó
4-piridil-N-óxido,
2-pirazinilo, 2, 4 ó 5-pirimidinilo,
2, 3 ó 5-indolilo, 2-indolilo
sustituido, por ejemplo 1-metil,
5-metil, 5-metoxi,
5-benciloxi, 5-cloro o
4,5-dimetil-2-indolilo,
1-bencil-2- o
-3-indolilo,
4,5,6,7-tetrahidro-2-indolilo,
ciclohepta[b]-5-pirrolilo, 2,
3 ó 4-quinolilo, 1, 3 ó
4-isoquinolilo,
1-oxo-1,2-dihidro-3-isoquinolilo,
2-quinoxalinilo, 2-benzofuranilo,
2-benzo-tienilo,
2-benzoxazolilo o benzotiazolilo o
dihidropiridinilo, pirrolidinilo, por ejemplo 2 ó
3-(N-metilpirrolidinilo), piperazinilo,
morfolinilo, tiomorfolinilo, tetrahidrotienilo o
benzodioxolanilo.
La invención se refiere también a procedimientos
análogos para la reducción enzimática enantioselectiva del
cetocompuesto 2,5-hexanodiona y del cetocompuesto
acetoxiacetona.
La presente invención se basa en el conocimiento
de que en el caso de aplicar alcohol deshidrogenasas
R-específicas u óxido reductasas, éstas también
pueden utilizarse a concentraciones de 2-propanol
y/o 2-butanol muy por encima del 15% en volumen y
especialmente por encima del 25% en volumen.
De esta manera se abre la posibilidad de reducir
de manera enantioselectiva también sustratos poco solubles en agua,
tal como por ejemplo ésteres del ácido
4-halo-3-oxobutírico
a alta concentración enzimáticamente en un sistema acuoso/orgánico
homogéneo. Esto supone especialmente una ventaja, cuando el alcohol
quiral generado debe suministrarse en un proceso continuo
directamente, sin aislamiento previo a una reacción secundaria que
tiene lugar en una mezcla de reacción acuosa/orgánica
monofásica.
Éste es el caso por ejemplo en la reducción
enantioselectiva de 4-cloroacetoacetato, en el que
el producto generado éster etílico del ácido
S-4-cloro-3-hidroxibutírico
se alimenta a una mezcla de reacción homogénea de este tipo en un
procedimiento de cianuración y puede procesarse para dar éster
etílico del ácido
(R)-4-ciano-3-hidroxibutírico
(documento WO 03/097581 A1).
Por el término "óxido reductasa
R-específica" o alcohol deshidrogenasa se
entienden aquéllas que reducen los compuestos de carbonilo no
sustituidos, tales como por ejemplo 2-butanona,
2-octanona o acetofenona preferiblemente para dar
los correspondientes R-hidroxicompuestos, tales como
por ejemplo R-2-butanol,
R-2-octanol o
R-2-feniletanol.
La óxido reductasa R-específica
utilizada según la invención es preferiblemente de origen microbiano
y procede especialmente de bacterias del grupo
Lactobacillales, especialmente del género
Lactobacillus, por ejemplo Lactobacillus kefir
(documento US 5,200,335), Lactobacillus brevis (documento DE
19610984 A1) (Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. diciembre de
2000; 56 Pt 12:169b-8), Lactobacillus minor
(documento DE10119274) o Leuconostoc carnosum, o de
levaduras, especialmente de los géneros Pichia,
Candida, Pachysolen, Debaromyces o
Issatschenkia, de manera especialmente preferible de
Pichia finlandica (documento EP 1 179 595 A1).
En el procedimiento según la invención se
utiliza como cofactor preferiblemente NAD(P)H. Por el
término
"NADPH" se entiende nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato reducido. Por el término "NADP" se entiende nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato.
"NADPH" se entiende nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato reducido. Por el término "NADP" se entiende nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato.
Una forma de realización del procedimiento según
la invención se caracteriza porque la mezcla monofásica líquida, en
caso de utilizar una óxido reductasa de origen bacteriano, comprende
al menos el 25% en volumen de 2-propanol y/o
2-butanol.
Una forma de realización adicional del
procedimiento según la invención consiste en que la mezcla
monofásica líquida comprende entre el 25 y el 90% en volumen,
especialmente entre el 35 y el 70% en volumen, de
2-propanol y/o 2-butanol.
En la mezcla monofásica líquida, el compuesto de
fórmula general (I) está comprendido preferiblemente entre el 5 y
el 50% en peso/volumen, especialmente entre el 15 y el 50% en
peso/volumen.
En el caso de aplicar una óxido reductasa de
levaduras, la mezcla monofásica líquida comprende preferiblemente
al menos el 15% en volumen de 2-propanol.
En el procedimiento según la invención se
utiliza como compuesto de fórmula general (I) preferiblemente
4-cloroacetoacetato de etilo, acetoacetato de
metilo, 3-oxovalerato de etilo,
4-hidroxi-2-butanona,
piruvato de etilo, 2,3-dicloroacetofenona,
1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etan-1-ona,
acetofenona, 2-octanona, 3-octanona,
1,4-dicloro-2-butanona,
cloruro de fenacilo, 4-bromoacetoacetato de etilo,
1,1-dicloroacetona,
1,1,3-tricloroacetona o
1-cloroacetona.
En el procedimiento según la invención la enzima
puede utilizarse completamente purificada, parcialmente purificada
o bien contenida en células. A este respecto, las células utilizadas
pueden estar presentes en forma nativa, permeabilizada o
lisada.
Por cada kg de compuesto de fórmula I que ha de
convertirse pueden utilizarse de 10 000 a preferiblemente 10
millones de unidades (U) de óxido reductasa. A este respecto la
unidad enzimática 1 U corresponde a la cantidad de enzima que se
necesita para hacer reaccionar 1 \mumol del compuesto de fórmula I
por minuto (min.).
Al agua se le puede añadir un tampón, por
ejemplo tampón fosfato de potasio, tampón Tris/HCl o tampón
trietanolamina con un valor de pH de desde 5 hasta 10,
preferiblemente un valor de pH de desde 6 hasta 9.
El tampón puede comprender adicionalmente además
iones para la estabilización de la enzima, por ejemplo iones
magnesio.
Por lo demás, en el procedimiento según la
invención puede utilizarse además un estabilizador adicional de la
alcohol deshidrogenasa, tal como por ejemplo glicerina, sorbitol,
1,4-DL-ditiotreitol (DTT) o
dimetilsulfóxido (DMSO).
La concentración del cofactor
NAD(P)H con respecto a la fase acuosa asciende a desde
0,001 mM hasta 1 mM, especialmente desde 0,01 mM hasta 0,1 mM.
La temperatura asciende por ejemplo a desde
aproximadamente 10ºC hasta 60ºC, preferiblemente desde 20ºC hasta
35ºC.
A este respecto, una variante del procedimiento
para aumentar el rendimiento del cetocompuesto es aquélla en la que
el cosustrato oxidado en el procedimiento se extrae de la mezcla de
reacción o bien por etapas o bien de manera continua.
Por lo demás puede suministrarse cosustrato
nuevo, enzima o cofactor a la mezcla básica de reacción por etapas
o de manera continua.
El procedimiento según la invención se realiza
por ejemplo en un recipiente de reacción de vidrio o metal. Para
ello se traspasan los componentes individualmente al recipiente de
reacción y se agitan bajo una atmósfera de por ejemplo nitrógeno o
aire. Según el sustrato y el compuesto de fórmula I utilizado el
tiempo de reacción asciende a desde 1 hora hasta 96 horas,
especialmente desde 2 horas hasta 24 horas.
Con los siguientes ejemplos se explican con más
detalle formas de realización preferidas de la invención.
\newpage
La reducción de los compuestos de fórmula 1 se
realiza convenientemente de tal manera que los componentes
mencionados a continuación se traspasan a un recipiente de reacción
y se incuban con un buen mezclado a temperatura ambiente. Tras la
finalización de la reacción puede aislarse y purificarse el producto
según la solubilidad mediante extracción a partir de la disolución
de reacción acuosa, mediante destilación a partir de la disolución
de reacción o mediante la combinación de extracción y
destilación.
En todos los ejemplos mencionados a continuación
se utilizaron las enzimas en forma de extractos brutos.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (9)
1. Procedimiento para la reducción enzimática
enantioselectiva de cetocompuestos de fórmula general I
(I)R_{1}-C(O)-R_{2}
en la que R_{1} representa uno de
los
restos
1) -alquilo (C_{1}-C_{20}),
siendo alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada,
2) -alquenilo
(C_{2}-C_{20}), siendo alquenilo de cadena
lineal o de cadena ramificada y dado el caso contiene hasta cuatro
dobles enlaces,
3) -alquinilo
(C_{2}-C_{20}), siendo alquinilo de cadena
lineal o de cadena ramificada y dado el caso contiene hasta cuatro
triples enlaces,
4) -arilo
(C_{6}-C_{14}),
5) -alquil
(C_{1}-C_{8})-arilo
(C_{6}-C_{14}),
6) -heterociclo
(C_{5}-C_{14}), que está no sustituido o está
mono, di o trisustituido con -OH, halógeno, -NO_{2} y/o
-NH_{2}, o
7) -cicloalquilo
(C_{3}-C_{7});
en la que los restos mencionados anteriormente
bajo 1) a 7) están no sustituidos o están mono, di o trisustituidos
independientemente entre sí con -OH, halógeno, -NO_{2} y/o
-NH_{2},
y R_{2} representa uno de los restos
8) -alquilo (C_{1}-C_{6}),
siendo alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada,
9) -alquenilo (C_{2}-C_{6}),
siendo alquenilo de cadena lineal o de cadena ramificada y dado el
caso contiene hasta tres dobles enlaces,
10) -alquinilo
(C_{2}-C_{6}), siendo alquinilo de cadena lineal
o de cadena ramificada y dado el caso contiene dos triples enlaces,
o
11) -alquil
(C_{1}-C_{10})-C(O)-O-alquilo
(C_{1}-C_{6}), siendo alquilo lineal o de cadena
ramificada y está no sustituido o está mono, di o trisustituido con
-OH, halógeno, -NO_{2} y/o -NH_{2},
en la que los restos mencionados anteriormente
bajo 8) a 11) están no sustituidos o están mono, di o trisustituidos
independientemente entre sí con -OH, halógeno, -NO_{2} y/o
-NH_{2},
caracterizado porque
una mezcla monofásica líquida que comprende
(a) al menos el 5% en peso/volumen de un
compuesto de fórmula (I),
(b) al menos el 15% en volumen de
2-propanol y/o 2-butanol, y
(c) agua
se trata con una óxido reductasa
R-específica en presencia de un cofactor, para
formar un hidroxicompuesto quiral de fórmula general II
(II)R_{1}-CH(OH)-R_{2}
en la que R_{1} y R_{2} tienen
el significado indicado anteriormente, regenerándose el cofactor
mediante la oxidación del 2-propanol y/o
2-butanol.
2. Procedimiento para la reducción enzimática
enantioselectiva del cetocompuesto 2,5-hexanodiona,
caracterizado porque una mezcla monofásica líquida que
comprende
(a) al menos el 5% en peso/volumen de
2,5-hexanodiona,
(b) al menos el 15% en volumen de
2-propanol y/o 2-butanol, y
(c) agua
se trata con una óxido reductasa
R-específica en presencia de un cofactor,
regenerándose el cofactor mediante la oxidación del
2-propanol y/o 2-butanol.
3. Procedimiento para la reducción enzimática
enantioselectiva del cetocompuesto acetoxiacetona,
caracterizado porque una mezcla monofásica líquida que
comprende
(a) al menos el 5% en peso/volumen de
acetoxiacetona,
(b) al menos el 15% en volumen de
2-propanol y/o 2-butanol, y
(c) agua
se trata con una óxido reductasa
R-específica en presencia de un cofactor,
regenerándose el cofactor mediante la oxidación del
2-propanol y/o 2-butanol.
4. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la óxido
reductasa R-específica es de origen microbiano y
procede especialmente de bacterias del grupo Lactobacillales,
especialmente del género Lactobacillus, o de levaduras,
especialmente de los géneros Pichia, Candida,
Pachysolen, Debaromyces o Issatschenkia.
5. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque como cofactor se
utiliza NAD(P)H.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la mezcla
monofásica líquida, en caso de usar una óxido reductasa de origen
bacteriano, comprende al menos el 25% en volumen de
2-propanol y/o 2-butanol.
7. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la mezcla
monofásica líquida comprende entre el 25 y el 90% en volumen,
especialmente entre el 35 y el 70% en volumen, de
2-propanol y/o 2-butanol.
8. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la mezcla
monofásica líquida comprende el cetocompuesto entre el 5 y el 50%
en peso/volumen, especialmente entre el 15 y el 50% en
peso/volumen.
9. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 y 4 a 8, caracterizado porque como
compuesto de fórmula general (I) se utiliza
4-cloroacetoacetato de etilo, acetoacetato de
metilo, 3-oxovalerato de etilo,
4-hidroxi-2-butanona,
piruvato de etilo, 2,3-dicloroacetofenona,
acetofenona,
1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etan-1-ona,
2-octanona, 3-octanona,
1,4-dicloro-2-butanona,
cloruro de fenacilo, 4-bromoacetoacetato de etilo,
1,1-dicloroacetona,
1,1,3-tricloroacetona o
1-cloroacetona.
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