ES2336080T3 - Nuevos compuestos inmunoefectores. - Google Patents

Nuevos compuestos inmunoefectores. Download PDF

Info

Publication number
ES2336080T3
ES2336080T3 ES02723106T ES02723106T ES2336080T3 ES 2336080 T3 ES2336080 T3 ES 2336080T3 ES 02723106 T ES02723106 T ES 02723106T ES 02723106 T ES02723106 T ES 02723106T ES 2336080 T3 ES2336080 T3 ES 2336080T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
antigen
group
pharmaceutical composition
compounds
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES02723106T
Other languages
English (en)
Inventor
David A. Johnson
Jory R. Baldridge
Greg Sowell
Christopher W. Cluff
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Corixa Corp
Original Assignee
Corixa Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Corixa Corp filed Critical Corixa Corp
Application granted granted Critical
Publication of ES2336080T3 publication Critical patent/ES2336080T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/38—Phosphonic acids [RP(=O)(OH)2]; Thiophosphonic acids ; [RP(=X1)(X2H)2(X1, X2 are each independently O, S or Se)]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula: **(Ver fórmula)** y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que X es un miembro que se selecciona entre el grupo constituido por -O- o -NH-; Y es un miembro que se selecciona entre el grupo constituido por -O- y -S-; R1, R2 y R3 son cada uno miembros que se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por acilo (C9-C14), con la condición de que R1, R2 y R3 no sean todos grupos tetradecanoilo cuando R4 es PO3H2, R5 y R6 son H, X e Y son O, n es 1, m es 2 y p y q son 0. R4 es un miembro que se selecciona entre el grupo constituido por -H y -PO3R7R8, en la que R7 y R8 son cada uno miembros que se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por -H, y grupos alifáticos (C1-C4); R5 es un miembro que se selecciona entre el grupo constituido por -H, -CH3 y -PO3R9R10, en la que R9 y R10 son cada uno miembros que se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por -H y grupos alifáticos (C1-C4); R6 se selecciona entre H, OH, grupos oxialifáticos (C1-C4); -PO3R11R12, -OPO3R11R12, -SO3R11, -OSO3R11, -NR11R12, -SR11, -CN, -NO2, -CHO, -CO2R11, y -CONR11R12, en las que R11 y R12 se seleccionan cada uno independientemente entre H y grupos alifáticos (C1-C4), con la condición de que uno de R4 y R5 es un grupo que contiene fósforo y que cuando R4 es -PO3R7R8, R5 es distinto de -POsR9R1; en las que "*1", "*2", "*3" y "**" representan centros quirales; en las que n, m, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0 a 6, con la condición de que la suma de p y m sea de 0 a 6.

Description

Nuevos compuestos inmunoefectores.
Campo de la invención
Esta invención se refiere generalmente a compuestos inmunoefectores, su uso en composiciones farmacéuticas, y procedimientos para su producción y su uso en vacunación profiláctica y/o terapéutica. Más particularmente, la presente invención se refiere a nuevos compuestos que comprenden 2-desoxi-2-amino-\beta-D-glucopiranosa (glucosamina) unida mediante enlace glicosídico a un grupo cíclico aminoalquilo (aglicona), y a su uso en sistemas farmacéuticos adyuvantes.
Antecedentes de la invención
Inmunidad humoral e inmunidad mediada por células son las dos ramas principales de la respuesta inmune de los mamíferos. La inmunidad humoral implica la generación de anticuerpos frente a antígenos extraños. Los anticuerpos son producidos por linfocitos B. La inmunidad mediada por células implica la activación de linfocitos T que o bien actúan sobre células infectadas que cargan con antígenos extraños o bien estimulan a otras células para que actúen sobre células infectadas. Ambas ramas del sistema inmunitario de mamíferos son importantes para luchar con la enfermedad. La inmunidad humoral es la línea principal de defensa contra agentes patógenos bacterianos. En el caso de enfermedad vírica, la inducción de linfocitos T citotóxicos (CTL) parece que es crucial para inmunidad protectora. Así, una vacuna eficaz preferiblemente estimula ambas ramas del sistema inmunitario para proteger contra la enfermedad.
Las vacunas presentan antígenos extraños a partir de agentes que provocan enfermedad a un hospedador de manera que el hospedador puede montar una respuesta inmune protectora. A menudo, los antígenos de la vacuna son formas inactivadas o atenuadas de los microbios que causan la enfermedad. La presencia de componentes y antígenos no esenciales en estas vacunas inactivadas o atenuadas ha alentado considerables esfuerzos para refinar los componentes de vacunas que han incluido desarrollar antígenos sintéticos bien definidos usando técnicas químicas y recombinantes. Sin embargo, el refinado y simplificación de vacunas microbianas ha conducido a una pérdida concomitante de potencia. Antígenos sintéticos de peso molecular bajo, aunque carecen de contaminantes potencialmente nocivos, a menudo no son suficientemente inmunogénicos por si mismos. Estas observaciones han conducido a los investigadores a añadir estimuladores del sistema inmunitario, conocidos como adyuvantes, a las composiciones de vacunas para potenciar la actividad de los componentes de vacunas.
Adyuvantes inmunitarios son compuestos que, cuando se administran a un individuo o se prueban in vitro, aumentan la respuesta a un antígeno en un sujeto al que se administra el antígeno, o impulsan ciertas actividades de células del sistema inmunitario. Se han preparado y probado numerosos compuestos que exhiben diversos grados de actividad adyuvante (véanse, por ejemplo, Shimizu y col. 1985, Bulusu y col. 1992, Ikeda y col. 1993, Shimizu y col, 1994, Shimizu y col. 1995, Miyajima y col. 1996). Sin embargo, estos y otros sistemas adyuvantes anteriores a menudo despliegan propiedades tóxicas, son inestables y/o tienen efectos inmunoestimulantes inaceptablemente bajos.
Actualmente, el único adyuvante permitido para uso humano en Estados Unidos es el alumbre, un grupo de sales de aluminio (por ejemplo hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio) con el que se formulan antígenos de vacunas. Vehículos en partículas como alumbre según informes fomentan la captación, procesamiento y presentación de antígenos solubles por macrófagos. Sin embargo, el alumbre no está exento de efectos laterales y está limitado desafortunadamente a inmunidad humoral (anticuerpo) solamente.
El descubrimiento y desarrollo de sistemas adyuvantes eficaces es esencial para mejorar la eficacia y seguridad de vacunas existentes y futuras. Así, hay necesidad continua de nuevos y mejores sistemas adyuvantes, particularmente los que discurren por ambas ramas efectoras del sistema inmunitario, para facilitar mejor el desarrollo de una próxima generación de vacunas sintéticas. La presente invención satisface ésta y otras necesidades.
Resumen de la invención
Los compuestos de esta invención son moléculas inmunoefectoras que impulsan respuestas inmunitarias humorales y mediadas por células a los antígenos de las vacunas. Los compuestos se pueden describir generalmente como pertenecientes a la clase de los compuestos AGP cíclicos, en los que AGP significa fosfatos de aminoalquil glucosaminida. La expresión "AGP cíclico" significa un fosfato de azacicloalquilo o (azacicloalquil)alquilo glucosaminida, en el que una 2-desoxi-2-amino-\beta-D-glucopiranosa (glucosamina) está unida mediante enlace glicosídico a un grupo azacicloalquilo o (azacicloalquil)alquilo (aglicona).
Los compuestos de esta invención comprenden una 2-desoxi-2-amino-\beta-D-glucopiranosa (glucosamina) unida mediante enlace glicosídico a un grupo cíclico aminoalquilo (aglicona). Los compuestos están fosforilados en la posición 4- ó 6- del anillo glucosamina y acilados con restos alcanoiloxitetradecanoilo sobre el nitrógeno de aglicona y las posiciones 2 y 3 del anillo glucosamina. Los compuestos objeto de la invención se describen generalmente por la fórmula (I):
1
y sales farmacéuticamente aceptables de la misma, en la que X es -O- o -NH- e Y es -O- o -S-, R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno independientemente un grupo acilo (C_{9}-C_{14}), que incluye grupos acilo saturados, insaturados y ramificados; R^{4} es -H o -PO_{3}R^{7}R^{8}, en la que R^{7} y R^{8} son cada uno independientemente H, o grupos alifáticos (C_{1}-C_{4}); R^{5} es -H, CH_{3} o PO_{3}R^{9}R^{10}, en la que R^{9} y R^{10} se seleccionan cada uno independientemente entre -H y grupos alifáticos (C_{1}-C_{4}); R^{6} se selecciona independientemente entre H, OH, grupos oxialifáticos (C_{1}-C_{4}), -PO_{3}R^{11}R^{12}, -OPO_{3}R^{11}R^{12}, -SO_{3}R^{11}, -OSO_{3}R^{11}, -NR^{11}R^{12}, -SR^{11}, -CN, -NO_{2}, -CHO, -CO_{2}R^{11}, y -CONR^{11}R^{12}, en las que R^{11} y R^{12}, se seleccionan cada uno independientemente entre H y grupos alifáticos (C_{1}-C_{4}); con la condición de que uno de R^{4} y R^{5} es un grupo que contiene fósforo y que cuando R^{4} es -PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} es distinto de PO_{3}R^{9}R^{10}, en la que "*^{1-3}" y "**" representan centros quirales; en la que n, m, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0 a 6, con la condición de que la suma de p y m es de 0 a 6.
R^{1}, R^{2} y R^{3} no son todos grupos tetradecanoílo cuando R^{4} es PO_{3}H_{2}, R^{5} y R^{6} son H, X e Y son -O-, n es 1, m es 2 y p y q son 0.
En algunas realizaciones de compuestos de la presente invención X e Y son cada uno oxígeno, R^{4} es -PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} y R^{6} son H, y n, m, p y q son números enteros de 0 a 3. En una realización más preferida R^{7} y R^{8} son -H. En una realización incluso más preferida n es 1, m es 2, y los subíndices p y q son 0. Todavía en una realización incluso más preferida, R^{1}, R^{2} y R^{3} son grupos acilo C_{9}-C_{13}, lo más preferiblemente grupos acilo C_{10}-C_{12}. En una realización todavía más preferida, *^{1-3} están en la configuración R, Y está en la posición ecuatorial, y ** está en la configuración S. Particularmente preferidos son (N-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido, Fórmula (III),
2
y (N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxy-4-O-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido, Fórmula (IV),
3
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que contienen compuestos de las fórmulas generales y específicas anteriores. Las composiciones farmacéuticas se pueden combinar con una diversidad de antígenos y en una diversidad de formulaciones conocidas por los expertos en la técnica.
Los compuestos de la presente invención también son útiles en métodos para inducir una respuesta inmunitaria en un sujeto. Los métodos suponen administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos de la presente invención, preferiblemente en una composición farmacéutica que también contiene un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente invención también abarca compuestos para tratar a un mamífero que padece o es susceptible de padecer una infección patógena, cáncer o un trastorno autoinmune. Los compuestos son útiles para administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos de la presente invención, preferiblemente en una composición farmacéutica que también contiene un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Todavía adicionalmente, la presente invención implica compuestos para tratar enfermedades o dolencias que se mejoran mediante producción de óxido nítrico en el sujeto. Un tratamiento de este tipo supone poner en contacto al sujeto con una cantidad eficaz de un compuesto o compuestos de la presente invención, o con una cantidad eficaz de una composición que contiene uno o más compuestos de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones los compuestos de la presente invención se pueden administrar 48 horas antes, inmediatamente antes y durante la isquemia.
Descripción detallada de la invención Definiciones
El término "acilo" se refiere a aquellos grupos derivados de un ácido orgánico mediante eliminación de la porción hidroxilo del ácido. Por consiguiente, acilo quiere decir que incluye, por ejemplo, acetilo, propionilo, butirilo, decanoílo, y pivaloílo. Por ejemplo, "acilo (C_{9}-C_{14})", por ejemplo, se refiere a un grupo acilo que tiene de 9 a 14 carbonos.
El término "alifático" por sí mismo o como parte de otro sustituyente, significa, salvo que se afirme otra cosa, un resto hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, o cíclico, que incluye un resto que contiene tanto elementos cíclicos como de cadena abierta, que pueden ser completamente saturados o mono- o poli-insaturados, que tienen el número de átomos de carbono designado (es decir, C_{1}-C_{4} significa uno a cuatro carbonos). Ejemplos de radicales hidrocarburo saturados incluyen grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo sec-butilo, ciclopropilo, ciclopropilmetilo, metileno, etileno, y n-butileno. Un grupo alquilo insaturado es aquel que tiene uno o más enlaces dobles y/o enlaces triples. Ejemplos de grupos alifáticos insaturados incluyen vinilo, 2-propenilo, crotilo, -2-(butadienilo), 1-propinilo y 3-propinilo.
El término "oxialifático" se refiere a los grupos que tienen un grupo alifático unido a la molécula restante a través de un átomo de oxígeno.
Cada uno de los términos anteriores (por ejemplo "alquilo", "acilo") significa que incluye las formas tanto sustituidas como no sustituidas del resto indicado.
Pueden ser sustituyentes de los grupos alifáticos una diversidad de grupos que se seleccionan entre: -OR', =O, =S, =NR', =N-OR', -NR'R'', -SR', -halógeno, -SiR'R''R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO_{2}R',-CONR'R'', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR'-C(O)NR''R''', -NR''C(O)_{2}R', -NH-C(NH_{2})=NH, -NR'C(NH_{2})=NH, -NH-C(NH_{2})=NR', -S(O)R', -S(O)_{2}R', -S(O)_{2}NR'R'', -CN y -NO_{2} en un número que oscila desde cero hasta (2m'+1), donde m' es el número total de átomos de carbono en dicho radical. R', R'' y R''' cada uno independientemente se refieren a hidrógeno y grupos alifáticos (C_{1}-C_{4}) no sustituidos. A partir de la discusión anterior sobre sustituyentes, un experto en la técnica entenderá que el término "alquilo" significa que incluye grupos tales como haloalquilo (por ejemplo, -CF3 y -CH_{2}CF_{3}) y similares.
Los términos "halo" o "halógeno" por sí mismos o como parte de otro sustituyente, significan, salvo que se afirme otra cosa, un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. En compuestos que tienen múltiples sustituyentes halógeno, los halógenos pueden ser iguales o diferentes.
La expresión sales farmacéuticamente aceptables significa que incluye sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos y bases relativamente no tóxicos, dependiendo de los sustituyentes particulares que se encuentran en los compuestos descritos en este documento. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, se pueden obtener sales de adición de base mediante la adición de la base deseada, ya sea pura o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de base farmacéuticamente aceptables incluyen sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amina orgánica, o magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen funcionalidades relativamente básicas, se pueden obtener sales de adición de ácido mediante la adición del ácido deseado, ya sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen las que se derivan de ácidos inorgánicos como ácido clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrógeno-fosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico, o fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico, isobutírico, oxálico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico, y similares. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato, y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónico y galacturónico y similares (véase por ejemplo, Berge, S.M., y col., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Ciertos compuestos específicos de la presente invención contienen ambas funcionalidades básica y ácida que permiten que los compuestos se conviertan en sales de adición bien de base o bien de ácido.
Las formas neutras de los compuestos se pueden regenerar poniendo en contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto progenitor de manera convencional. La forma progenitora del compuesto difiere de las diversas formas de sal en ciertas propiedades físicas, tales como solubilidad en disolventes polares, pero por lo demás las sales son equivalentes a la forma progenitora del compuesto para los fines de la presente invención.
Además de las formas de sal, se describen en este documento compuestos que están en forma de profármaco. Profármacos de los compuestos que se describen en este documento son aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos bajo condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente invención. Adicionalmente, los profármacos se pueden convertir en compuestos de la presente invención mediante procedimientos químicos o bioquímicos en un medio ex vivo. Por ejemplo, los profármacos, se pueden convertir lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se colocan en un reservorio de parche transdérmico con una adecuada enzima o reactivo químico.
Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, incluso formas hidratadas. En general las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y tienen la intención de que estén abarcadas por el alcance de la presente invención. Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas múltiples cristalinas o amorfas. En general todas las formas físicas son equivalentes para los usos que se contemplan por presente invención y tienen la intención de que estén dentro del alcance de la presente invención.
Ciertos compuestos de la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos) o enlaces dobles; se tiene la intención de que los racematos, diastereómeros, isómeros geométricos e isómeros individuales estén todos abarcados dentro del alcance de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Por ejemplo, los compuestos pueden estar radiomarcados con isótopos radiactivos, tales como por ejemplo tritio (^{3}H), yodo-125 (^{125}I) o carbono-14 (^{14}C). Se tiene la intención de que todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, sean radiactivas o no, estén abarcadas dentro del alcance de la presente invención.
Introducción
En un esfuerzo para mejorar la seguridad de las vacunas, los fabricantes están evitando las vacunas de células enteras inactivadas, y están produciendo vacunas recombinantes y subunitarias. En la preparación de estas vacunas más seguras se eliminan componentes bacterianos y virales superfluos, mientras que permanecen las estructuras mínimas o epitopos que se estiman necesarios para la inmunidad protectora. La seguridad de estas vacunas se mejora debido a la eliminación de componentes bacterianos y virales superfluos que muchas veces resulta que son tóxicos y pirógenos. Sin embargo, los mismos componentes que dan como resultado toxicidad, proporcionan inmunoestimulación no específica que hace tan eficaces a las vacunas de células enteras. Sin la inmunoestimulación adicional las estructuras mínimas y epitopos que comprenden vacunas recombinantes y subunitarias son a menudo escasamente inmunógenas.
Una molécula de disacárido derivada de LPS de Salmonella minnesota R595, MPL® inmunoestimulante (Corixa Corp.) tiene propiedades inmunoestimulantes. MPL® inmunoestimulante, Monofosforil lípido A, es un derivado estructural de lípido A (o LPS) y tiene un índice terapéutico mejorado con relación al lípido A (véanse la patente de EE.UU. 4.987.237 sobre la estructura Monofosforil lípido A; las patentes de EE.UU, N^{os}. 4.436.727 y 4.436.728 sobre descripción de preparación de Monofosforil lípido A). Otros inmunoestimulantes útiles incluyen 3-de-O-acilado monofosforil lípido A (3D-MPL), que se describe en la patente de EE.UU. Nº 4.912.094. El compuesto se puede administrar con seguridad a seres humanos a dosis de hasta al menos 20 \mug/kg, aunque pueden ocurrir aumentos de temperatura, síntomas de tipo gripal, que aumentan el ritmo cardíaco y descensos modestos en la presión sanguínea en algunos pacientes a niveles de dosis de \geq 10 \mug/kg. Cultivo celular y evaluaciones en animales confirman que el MPL® inmunoestimulante todavía retiene algo de la actividad inmunoestimulante del LPS progenitor porque quedan pirogénesis y la capacidad para inducir citocinas pro-inflamatorias tales como TNF e IL-8, si bien a niveles de dosis más altos. Así, la necesidad de adyuvantes eficaces de vacunas está bien reconocida. Idealmente, estos adyuvantes impulsarán la respuesta inmunitaria protectora sin inducir toxicidad ni pirogénesis no deseadas.
En un esfuerzo para obtener un inmunoestimulante que tenga baja pirogénesis, se han preparado moléculas sintéticas que comparten similitudes estructurales con MPL® inmunoestimulante. Estas nuevas moléculas que se denominan colectivamente fosfatos de aminoalquil glucosaminida (AGP), están constituidas por un resto de glucosa acilada unido a un grupo aminoalquilo acilado (Johnson y col., (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9: 2273-2278; PCT/WO 98/50399 y referencias en las mismas). Cada molécula posee seis colas de ácido graso que se piensa que es el número óptimo para actividad adyuvante máxima. La sustitución de diferentes restos químicos dentro de las estructuras de aminoalquilo fue diseñada en los AGP en previsión de optimizar las propiedades de estabilidad y solubilidad. Así, los AGP se pueden separar en líneas generales en varias familias sobre la base de la estructura de sus grupos aminoalquilo. Después de la evaluación biológica inicial, se hizo evidente que los motivos de aminoalquilo podían afectar drásticamente a las propiedades pirógenas de los AGP (véanse la solicitud de patente de EE.UU. Nº de serie 09/074.720 presentada el 7 de mayo de 1998 y las patentes de EE.UU. N^{os}. 6.113.918 y 6.303.347). Como parte del proceso de selección inicial de los compuestos sintéticos adyuvantes, se determinó el dato de pirogénesis en conejos. Se destacó que varios de los compuestos no suscitaron respuesta de fiebre cuando se administraron por vía i.v. a dosis de 10 \mug/kg. En general, estos mismos compuestos fallaron en inducir niveles detectables de citocinas inflamatorias TNF-\alpha o IL-1\beta en un análisis de inducción de citocinas ex vivo sobre células mononucleares de sangre humana periférica. En este documento se informa sobre estudios de propiedades adyuvantes de una clase de AGP que induce actividad mínima tanto en prueba pirogénica en conejo como el análisis de citocinas ex vivo.
Compuestos y composiciones
La presente invención proporciona compuestos que se describen generalmente por la fórmula (I):
4
y sales farmacéuticamente aceptables de la misma, en la que X es -O- o -NH- e Y es -O- o -S-, R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno independientemente un grupo acilo (C_{9}-C_{14}), que incluye grupos acilo saturados, insaturados y ramificados; R^{4} es -H o -PO_{3}R^{7}R^{8}, en la que R^{7} y R^{8} son cada uno independientemente H, o grupos alifáticos (C_{1}-C_{4}); R^{5} es -H, -CH_{3} o -PO_{3}R^{9}R^{10}, en la que R^{9} y R^{10} se seleccionan cada uno independientemente entre -H y grupos alifáticos (C_{1}-C_{4}); R^{6} se selecciona independientemente entre H, OH, grupos oxialifáticos (C_{1}-C_{4}), -PO_{3}R^{11}R^{12}, -OPO_{3}R^{11}R^{12}, -SO_{3}R^{11}, -OSO_{3}R^{11}, -NR^{11}R^{12}, -SR^{11}, -CN, -NO_{2}, -CHO, -CO_{2}R^{11}, y -CONR^{11}R^{12}, en las que R^{11} y R^{12} se seleccionan cada uno independientemente entre H y grupos alifáticos (C_{1}-C_{4}); con la condición de que uno de R^{4} y R^{5} sea un grupo que contiene fósforo y que cuando R^{4} es -PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} es distinto de -PO_{3}R^{9}R^{10}, en la que "*^{1-3}" y "**" representan centros de quiral; en la que n, m, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0 a 6, con la condición de que la suma de p y m es de 0 a 6.
R^{1} , R^{2} y R^{3} no son todos acilo C_{14} cuando R^{7} , R^{8}, R^{9} y R^{10} son todos alquilo C_{1}-C_{4}.
Aunque el hexopiranósido en la Fórmula I se muestra en la configuración gluco, otros glicósidos están dentro del alcance de la invención. Por ejemplo glicopiranósidos, que incluyen otros hexopiranósidos (por ejemplo, allo, altro, mano, gulo, ido, galacto, talo), están dentro del alcance de la invención.
En la fórmula general anterior, la configuración de los centros 3'-estereógenos a los que se unen los restos de acilo graso normal, que se denotan "*^{1}", "*^{2}" y "*^{3}", es R o S, pero preferiblemente R. La estereoquímica absoluta de los átomos de carbono de la unidad de aglicona cíclica a la que se unen R^{6} y la unidad de glicosamina, directamente o indirectamente (denotadas "**") puede ser R o S. En la fórmula general anterior, Y puede estar en la posición ecuatorial o axial, pero es preferiblemente ecuatorial. Todos los estereoisómeros, enantiómeros, diastereómeros y mezclas de los mismos se considera que están dentro del alcance de la presente invención.
Se incluyen en la invención compuestos en los que R^{1}, R^{2} y R^{3} son todos acilo C_{9}-C_{13}.
En realizaciones preferidas, de la presente invención, X e Y son -O-, R^{4} es fosfono, R^{5} y R son H, y n, m, p y q son números enteros de 0 a 3 y más preferiblemente 0 a 2. Lo más preferiblemente el número entero n es 1, el número entero m es 2, y los números enteros p y q son 0. En esta realización preferida, los compuestos de esta invención son 4-fosfatos de 2-pirrolidinilmetil-\beta-D-glucosaminida que tienen la fórmula general (V):
\vskip1.000000\baselineskip
5 
\newpage
En una realización preferida de la presente invención, la configuración de los centros 3'-estereógenos (^{"*1-3"}) a los que se unen es R, Y está en la posición ecuatorial, y la estereoquímica absoluta del centro estereógeno de pirrolidina ("**") es S. Realizaciones particularmente preferidas son (N-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; Fórmula (III)
6
y (N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido y sales farmacéuticamente aceptables del mismo; Fórmula (IV),
7
Preparación de compuestos
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar usando los métodos que se explican en Johnson y col., Bioorg. Med. Chem. Lett. 9: 2273-2278 (1999) y PCT/WO 98/50399 y referencias en las mismas. En general los métodos sintéticos que se describen en las referencias anteriormente destacadas son aplicables en líneas generales a la preparación de compuestos que tienen diferentes grupos acilo y sustituciones. Un experto en la técnica apreciará que los métodos convergentes descritos en este documento pueden ser modificados para usar agentes acilantes alternativos, o se pueden iniciar con materiales disponibles comercialmente que tienen unidos grupos acilo apropiados.
Evaluación de compuestos
Los compuestos que se proporcionan en este documento se pueden evaluar en una diversidad de formatos de análisis para seleccionar un compuesto que tenga un perfil farmacóforo adecuado. Por ejemplo, la patente de EE.UU. Nº 6.013.640 describe modelos en animales adecuados para evaluar efectos cardioprotectores de compuestos descritos en este documento. Los ejemplos a continuación también proporcionan análisis para evaluar la pirogenia de los compuestos objeto, y análisis adicionales para evaluar los efectos proinflamatorios de los compuestos.
La presente invención proporciona adicionalmente composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos proporcionados en este documento en mezcla con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Los vehículos adecuados dependerán de la dolencia que se está tratando junto con la ruta de administración. Por consiguiente, se proporciona a continuación una discusión de los vehículos en conjunción con los métodos de uso.
Composiciones farmacéuticas y sus usos
En una realización, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. El compuesto está presente en una cantidad terapéuticamente eficaz, cantidad del compuesto que se requiere para conseguir el efecto deseado en términos de tratar una enfermedad, dolencia o de conseguir un suceso biológico. Las composiciones farmacéuticas pueden actuar como un adyuvante cuando se co-administran con un antígeno.
Composiciones de esta invención incluyen tanto composiciones que se formulan para administración directa de los compuestos activos sin dilución a pacientes, bien sea en conjunción con vacunas o con otro agente activo, como solas, así como composiciones más concentradas de los compuestos que se pueden formular para dilución posterior, de modo que se evita la expedición y/o almacenamiento de cantidades grandes de diluyente (por ejemplo agua, disolución salina o materiales acuosos). En general, composiciones farmacéuticas de esta invención que se diseñan para administración directa o inmediata a un sujeto (esto es, sin dilución) contendrán uno o más de los compuestos, en una cantidad terapéuticamente eficaz. Esta cantidad variará tanto sobre la base del compuesto o compuestos terapéuticos particulares como del efecto terapéutico deseado. Composiciones más concentradas contendrán cantidades del compuesto o compuestos de la invención según puedan ser apropiadas para tales composiciones.
Para preparar composiciones farmacéuticas, los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden ser tanto sólidos como líquidos. Preparaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos, píldoras, cápsulas, sellos, supositorios, y gránulos dispersables, Un excipiente sólido puede ser una o más sustancias, que también pueden actuar como diluyentes, agentes saborizantes, aglutinantes, conservantes, agentes desintegradores de comprimidos, o material de encapsulación.
En polvos, el vehículo es un sólido finamente dividido que está en mezcla con el componente activo finamente dividido. En comprimidos, el componente activo se mezcla con el vehículo que tiene las propiedades aglutinantes necesarias en proporciones adecuadas y se compacta a la forma y tamaño deseados.
También se pueden preparar formas sólidas de las composiciones secando por atomización formulaciones acuosas de los adyuvantes activos (por ejemplo, en forma de una sal) o liofilizando y moliendo con excipientes.
Vehículos adecuados para las composiciones sólidas de esta invención incluyen, por ejemplo, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, una cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao, y similares. El término "preparación" tiene la intención de incluir la formulación del compuesto activo con material de encapsulación como un vehículo que proporciona una cápsula en la que el componente activo con o sin otros vehículos, está rodeado por un vehículo, que está así en asociación con él. De modo similar, se incluyen sobres y pastillas para chupar. Comprimidos, polvos, cápsulas, píldoras, sellos, y pastillas para chupar se pueden usar como formas farmacéuticas sólidas adecuadas para administración oral.
Para preparar supositorios, se funde en primer lugar una cera de bajo punto de fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos o manteca de cacao y se dispersa en la misma homogéneamente el componente activo, agitando. La mezcla homogénea fundida se vierte a continuación en moldes del tamaño conveniente, se deja enfriar, hasta que solidifique.
Preparaciones en forma líquida incluyen disoluciones, suspensiones, y emulsiones, por ejemplo, agua o disoluciones de agua/propilenglicol. Para inyección parenteral, se pueden formular preparaciones líquidas en disolución en polietilenglicol acuoso. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se formulan en una formulación de emulsión estable (por ejemplo, una emulsión de agua en aceite o una emulsión de aceite en agua) o una formulación acuosa que comprende preferiblemente uno o más tensioactivos. En emulsiones de este tipo se pueden usar tensioactivos adecuados bien conocidos por los expertos en la técnica. En una realización, la composición está en forma de una dispersión micelar que comprende al menos un tensioactivo adecuado. Los tensioactivos útiles en dispersiones micelares de este tipo incluyen fosfolípidos. Ejemplos de fosfolípidos incluyen diacil fosfatidil gliceroles tales como dimiristoil fosfatidil glicerol (DPMG), dipalmitoil fosfatidil glicerol (DPPG), y diestearoil fosfatidil glicerol (DSPG); diacil fosfatidil colinas, tales como dimiristoil fosfatidil colina (DPMC), dipalmitoil fosfatidil colina (DPPC), y diestearoil fosfatidil colina (DSPC); ácidos diacil fosfatídicos, tales como ácido dimiristoil fosfatídico (DPMA), ácido dipalmitoil fosfatídico (DPPA), y ácido diestearoil fosfatídico (DSPA); y diacil fosfatidil etanolaminas tales como dimiristoil fosfatidil etanolamina (DPME), dipalmitoil fosfatidil etanolamina (DPPE), y diestearoil fosfatidil etanolamina (DSPE). Otros ejemplos incluyen, pero no se limitan, derivados de etanolamina (tales como fosfatidil etanolamina, según mencionado anteriormente, o cefalina), serina (tal como fosfatidil serina) y 3'-O-lisil glicerol (tal como 3'-O-lisil-fosfatidilglicerol).
Se pueden preparar disoluciones acuosas adecuadas para uso oral disolviendo el componente activo en agua y añadiendo adecuados colorantes, saborizantes, estabilizadores, y agentes espesantes según se desee. Se pueden hacer suspensiones acuosas adecuadas para uso oral dispersando el componente activo finamente dividido en agua con material viscoso, tal como gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, y otros agentes de suspensión bien conocidos.
También se incluyen preparaciones en formas sólidas, que se diseñan para ser convertidas, inmediatamente antes de uso, en preparaciones en formas líquidas para administración oral. Formas líquidas de este tipo incluyen disoluciones, suspensiones, y emulsiones. Estas preparaciones pueden contener, además del componente activo, colorantes, saborizantes, estabilizadores, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes espesantes, agentes solubilizadores, y similares.
La preparación farmacéutica está preferiblemente en forma farmacéutica monodosis. En una forma de este tipo la preparación está subdividida en monodosis que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma farmacéutica monodosis puede ser una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de preparación, tales como comprimidos envasados, cápsulas, y polvos en viales o ampollas. Asimismo, la forma farmacéutica unitaria puede ser la propia cápsula, comprimido, sello, o pastilla para chupar, o puede ser el número apropiado de cualquiera de ellas en forma envasada.
Así, los sistemas adyuvantes de la invención son particularmente ventajosos para hacer y usar vacuna y otras composiciones inmunoestimulantes para tratar o prevenir enfermedades, de modo que inducen inmunidad activa hacia antígenos en mamíferos, preferiblemente en seres humanos. La preparación de vacuna es una técnica bien desarrollada y hay disponible fácilmente orientación general de diversas fuentes sobre la preparación y formulación de vacunas. Un ejemplo de este tipo es "New Trends and Developments in Vaccines", editado por Voller y col., University Park Press, Baltimore, Md., EE.UU. 1978.
En una realización ilustrativa, el antígeno en una composición de vacuna de la invención es un péptido, polipéptido, o porción inmunógena del mismo. Una "porción inmunógena", según se usa en este documento es una porción de una proteína que es reconocida (es decir, se une específicamente a ella) por un receptor de antígeno de superficie de linfocito B y/o linfocito T. Porciones inmunógenas de este tipo generalmente comprenden al menos 5 restos aminoácido, más preferiblemente al menos 10, y todavía más preferiblemente al menos 20 restos aminoácido de una proteína antigénica o una variante de la misma.
Porciones inmunógenas de polipéptidos antígenos se pueden identificar generalmente usando técnicas bien conocidas, tales como las que se resumen en Paul, Fundamental Immunology, 3rd ed., 243-247 (Raven Press, 1993) y referencias citadas en este documento. Técnicas de este tipo incluyen seleccionar polipéptidos por la capacidad para reaccionar con anticuerpos, antisueros y/o líneas de linfocitos T o clones específicos a antígenos. Según se usa en este documento, antisueros y anticuerpos son "específicos a antígenos" si se unen específicamente a un antígeno (es decir, reaccionan con la proteína en un inmunoanálisis ELISA u otro, y no reaccionan detectablemente con proteínas no relacionadas). Se pueden preparar antisueros y anticuerpos de este tipo según se describe en este documento, y usando técnicas bien conocidas. Una porción inmunógena de una proteína es una porción que reacciona con dichos antisueros y células T a un nivel que no es sustancialmente menos que la reactividad del polipéptido de longitud completa (por ejemplo, en un análisis ELISA y/o de reactividad de células T). Dichas porciones inmunógenas pueden reaccionar dentro de dichos análisis a un nivel que es similar o mayor que la reactividad del polipéptido de longitud completa. Estas selecciones se pueden realizar generalmente usando métodos bien conocidos por los expertos ordinarios en la técnica, tales como los que se describen en Harlow y Lane, "Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. Por ejemplo, se puede inmovilizar un polipéptido sobre un soporte sólido y ponerlo en contacto con suero del paciente para dejar que se unan los anticuerpos dentro del suero con el polipéptido inmovilizado. Se puede retirar a continuación el suero sin unir y se pueden detectar los anticuerpos unidos usando, por ejemplo, Proteína A marcada con ^{125}I.
Se preparan antígenos de péptido y polipéptido usando alguna de las diversas técnicas bien conocidas. Se pueden preparar fácilmente polipéptidos recombinantes codificados por secuencias de ADN a partir de secuencias aisladas de ADN usando alguno de una diversidad de vectores de expresión conocidos por los expertos ordinarios en la técnica. La expresión se puede conseguir en cualquier célula hospedadora apropiada que haya sido transformada o transfectada con un vector de expresión que contenga una molécula de ADN que codifique un polipéptido recombinante. Células hospedadoras adecuadas incluyen procariotas, levadura, y células eucariotas superiores, tales como células de mamíferos y células de plantas. Preferiblemente, las células hospedadoras empleadas son E. coli, levadura o una línea celular de mamífero tal como COS o CHO.
\newpage
Porciones y otras variantes de un antígeno de proteína que tiene menos de aproximadamente 100 aminoácidos, y generalmente menos de aproximadamente 50 aminoácidos, también pueden ser generadas por medios sintéticos, usando técnicas bien conocidas para los expertos ordinarios en la técnica. Por ejemplo, se pueden sintetizar poliésteres de este tipo usando cualquiera de las técnicas de fase-sólida disponibles comercialmente, tal como el método de síntesis de fase-sólida de Merrifield, en el que se añaden secuencialmente aminoácidos a un cadena creciente de aminoácidos. Véase Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2146, 1963. Instalaciones para síntesis automática de polipéptidos están disponibles comercialmente de proveedores tales como Perkin Elmer/Applied BioSystems Division (Foster City, CA), y se pueden hacer funcionar según las instrucciones del fabricante.
Dentro de ciertas realizaciones específicas, un antígeno polipéptido usado en las composiciones de la vacuna de la invención puede ser una proteína de fusión que comprende dos o más polipéptidos distintos. Un compañero de fusión, por ejemplo, puede ayudar a proporcionar epitopos T auxiliares (un compañero de fusión inmunológica), preferiblemente epitopos T auxiliares reconocidos por seres humanos, o puede ayudar a expresar la proteína (un impulsor de expresión) con rendimientos más altos que la proteína nativa recombinante. Ciertos compañeros de fusión preferidos son compañeros de fusión tanto inmunológicos como impulsores de expresión. Otros compañeros de fusión se pueden seleccionar de modo que aumenten la solubilidad de la proteína o faciliten que la proteína sea orientada a los compartimentos intracelulares deseados. Compañeros de fusión todavía adicionales incluyen marcadores de afinidad, que facilitan la purificación de la proteína.
Se pueden preparar generalmente proteínas de fusión usando técnicas estándar, que incluyen conjugación química. Preferiblemente, una proteína de fusión se expresa como una proteína recombinante, permitiendo la producción de niveles aumentados, con relación a la proteína no fusionada, en un sistema de expresión. En resumen, secuencias de ADN que codifican los componentes de polipéptido se pueden ensamblar separadamente, y se pueden ligar a un vector de expresión apropiado. El extremo 3' de la secuencia de ADN que codifica un componente de polipéptido se liga, con o sin un conector de péptido, al extremo 5' de una secuencia de ADN que codifica el segundo componente de polipéptido de modo que los marcos de lectura de las secuencias estén en fase. Esto permite la traducción en una proteína de fusión sencilla que retiene la actividad biológica de ambos polipéptidos componentes.
Se puede emplear una secuencia conectora de péptido para separar los componentes de polipéptido primero y segundo por una distancia suficiente para asegurar que cada polipéptido se pliega en sus estructuras secundaria y terciaria. Dicha secuencia conectora de péptido se incorpora a la proteína de fusión usando técnicas estándar bien conocidas en la técnica. Se pueden elegir secuencias conectoras de péptido adecuadas sobre la base de los siguientes factores: (1) su capacidad para adoptar una conformación flexible extendida; (2) su incapacidad para adoptar una segunda estructura que podría interactuar con epitopos funcionales sobre los polipéptidos primero y segundo; y (3) la falta de restos hidrófobos o cargados que pudieran reaccionar con los epitopos funcionales de polipéptidos. Secuencia conectoras de péptido preferidas contienen restos Gly, Asn y Ser. También se pueden usar otros aminoácidos casi neutros, tales como Thr y Ala en la secuencia conectora. Secuencias de aminoácidos que se pueden emplear útilmente como conectoras incluyen las que se describen en Maratea y col., Gene 40:39-46, 1985; Murphy y col., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 83: 8258-8262, 1986; patente de EE.UU. Nº. 4.935.233 y patente Nº. 4.751.180. La secuencia conectora generalmente puede ser de 1 a aproximadamente 50 aminoácidos de longitud. No se requieren secuencias conectoras cuando los polipéptidos primero y segundo tienen regiones de aminoácidos N-terminales no esenciales que se pueden usar para separar los dominios de funciones y prevenir la interferencia estérica.
Dentro de realizaciones preferidas, un asociado de fusión inmunológica procede de proteína D, una proteína superficial de la bacteria gram-negativa Haemophilus influenza B (WO 91/18926). Preferiblemente, un derivado de proteína D comprende aproximadamente el primer tercio de la proteína (por ejemplo, los primeros 100-110 aminoácidos N-terminales), y un derivado de proteína D puede estar lipidizado. Dentro de ciertas realizaciones preferidas, los primeros 109 restos de un compañero de fusión de Lipoproteína D se incluyen sobre el extremo N para proporcionar al polipéptido epitopos de células T exógenos adicionales y para aumentar el nivel de expresión en E. coli (funcionado así como un impulsor de expresión). La cola lipídica asegura presentación óptima de las células que presentan antígeno a antígeno. Otros compañeros de fusión incluyen la proteína no estructural de virus de influenza, NS1 (hemaglutinina). Típicamente, se usan los 81 aminoácidos N-terminales, aunque se pueden usar diferentes fragmentos que incluyen epitopos T auxiliares.
En otra realización, el asociado de fusión inmunológica es la proteína conocida como LYTA, o una porción de la misma (preferiblemente una porción de C-terminal). LYTA se deriva de Streptococcus pneumoniae, que sintetiza una N-acetil-L-alanina amidasa conocida como amidasa LYTA (codificada por el gen LytA; Gene 43: 265-292, 1986). LYTA es una autolisina que degrada específicamente ciertas uniones en el esqueleto de peptidoglicano. El dominio C-terminal de la proteína LYTA es responsable de la afinidad a la colina o a algunos análogos de colina tales como DEAE. Esta propiedad ha sido explotada para el desarrollo de plásmidos que expresan C-LYTA de E. coli útiles para expresión de proteínas de fusión. Se ha descrito purificación de proteínas híbridas que contienen el fragmento de C-LYTA en el término amino (véase Biotechnology 10: 795-798, 1992). Dentro de una realización preferida, una porción de LYTA que se repite se puede incorporar a una proteína de fusión. Se encuentra una porción que se repite en la región C-terminal que comienza en el resto 178. Una porción que se repite particularmente preferida incorpora los restos 188-305.
En otra realización de la invención, se usa el sistema adyuvante que se describe en este documento en la preparación de composiciones de vacunas basadas en ADN. Vacunas ilustrativas de este tipo contienen ADN que codifica uno o más antígenos polipéptidos, tales que el antígeno se genera in situ. El ADN puede estar presente dentro de cualquiera de una diversidad de sistemas de suministro conocidos por los expertos ordinarios en la técnica, que incluyen sistemas de expresión de ácido nucleico, sistemas de expresión de bacterias y virales. Se conocen bien en la técnica numerosas técnicas de suministro de genes, tales como las descritas por Rolland, Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Systems 15: 143-198, 1998, y referencias que se citan en la misma. Sistemas de expresión de ácido nucleico apropiados contienen las secuencias de ADN necesarias para expresión en el paciente (tal como un promotor y una señal de terminación adecuados). Sistemas bacterianos de suministro implican la administración de una bacteria (tal como Bacillus-Calmette-Guerín) que expresa una porción inmunógena del polipéptido sobre su superficie celular o segrega dicho epitopo. En una realización preferida, se introduce el ADN usando un sistema de expresión viral (por ejemplo vaccinia u otro virus pox, retrovirus, o adenovirus), que típicamente implica el uso de un virus competente para la replicación no patógeno (defectuoso). Se describen sistemas ilustrativos, por ejemplo, en Fisher-Hoch y col., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 86: 317-321, 1989; Flexner y col., Ann. N. Y. Acad. Sci. 569: 86-103, 1989; Flexner y col., Vaccine 8: 17-21, 1990; patentes de EE.UU. N^{os}. 4.603.124, 4.769.330, y 5.017.487; WO 89/01973; patente de EE.UU. Nº. 4.777.127; GB 2.200.651; EP 0.345.242; WO 91/02805; Berkner, Biotechniques 6: 616-627, 1988; Rosenfeld y col., Science 252: 431 -434, 1991; Kolls y col., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 91: 215-219, 1994; Kass-Eisler y col., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 90: 11498-11502, 1993; Guzman y col., Circulation 88: 2838-2848, 1993; y Guzman y col., Cir. Res. 73: 1202-1207,1993. Técnicas para incorporar ADN en sistemas de expresión de este tipo son bien conocidas para los expertos ordinarios en la técnica.
Como alternativa, el ADN puede estar "desnudo", según se describe, por ejemplo, en Ulmer y col., Science 259: 1745-1749, 1993 y se revisó por Cohen, Science 259: 1691-1692, 1993. La captación de ADN desnudo se puede aumentar revistiendo el ADN sobre nódulos biodegradables que se transportan eficazmente a las células. Será evidente que una vacuna puede comprender componente tanto polinucleótido como polipéptido, si se desea.
Aun más, será evidente que una vacuna puede contener sales farmacéuticamente aceptables de los antígenos de polinucleótido, polipéptido y/o carbohidrato deseados. Por ejemplo dichas sales se pueden preparar a partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables, que incluyen bases orgánicas, (por ejemplo, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias y aminoácidos básicos) y bases inorgánicas (por ejemplo, sales de sodio, potasio, litio amonio, calcio y magnesio).
El sistema adyuvante de la presente invención exhibe fuertes efectos adyuvantes cuando se administra sobre un amplio intervalo de dosificaciones y un amplio intervalo de proporciones.
La cantidad de antígeno en cada dosis de vacuna generalmente se selecciona como una cantidad que induce respuesta inmunoprotectora sin efectos laterales adversos significativos en vacunas típicas. Dichas cantidades variarán dependiendo del inmunógeno específico que se emplee y cómo se presente. Generalmente, la expectativa es que cada dosis comprenderá aproximadamente 1-1000 \mug de proteína, más típicamente aproximadamente 2-100 \mug, preferiblemente aproximadamente 5-50 \mug. Evidentemente, la dosificación administrada puede ser dependiente de la edad, peso, clase de tratamiento concurrente, si lo hay, y naturaleza del antígeno administrado.
La actividad inmunógena de una cantidad dada de una composición de vacuna de la presente invención se puede determinar fácilmente, por ejemplo monitorizando el aumento en el título de anticuerpo frente al antígeno usado en la composición de la vacuna (Dalsgaard, K. Acta Veterinia Scandinavica 69: 1-40 (1978)). Otro método común implica inyectar intradérmicamente a ratones CD-1 diversas cantidades de una composición de vacuna, recolectar después suero de los ratones y probar en cuanto a anticuerpo anti-inmunógeno, por ejemplo, mediante ELISA. Estas y otras aproximaciones similares serán evidentes para el técnico experto.
El antígeno se puede derivar y/o aislar esencialmente a partir de cualquier fuente deseada dependiendo de la enfermedad infecciosa, enfermedad autoinmunitaria, dolencia, cáncer, agente patógeno, o una enfermedad que no se vaya a tratar con una composición de vacuna dada. A manera de ilustración, los antígenos se pueden derivar a partir de fuentes virales, tales como virus de influenza, virus de leucemia felina, virus de inmunodeficiencia felina, VIH-1, VIH-2 humanos, virus de herpes simple tipo 2, citomegalovirus humano, hepatitis A, B, C o E, virus respiratorio sincitial, virus de papiloma humano, virus de rabia, sarampión, o glosopeda. Antígenos ilustrativos también se pueden derivar a partir de fuentes bacterianas, tales como ántrax, difteria, enfermedad de Lyme, malaria, tuberculosis, leishmaniasis, T. cruzi, Ehrlachia, Candida, etc. o de protozoos tales como Babeosis bovis o Plasmodium. Los antígenos estarán constituidos típicamente por aminoácidos naturales o sintéticos, por ejemplo, en forma de péptidos, polipéptidos o proteínas, pueden estar constituidos por polisacáridos, o pueden ser mezclas de los mismos. Antígenos ilustrativos se pueden aislar a partir de fuentes naturales, se pueden sintetizar por medio de síntesis en fase sólida, o se pueden obtener por vía de técnicas de ADN recombinante.
En otra realización, se usan antígenos de tumores en las composiciones de vacunas de la presente invención para la profilaxis y/o la terapia de cáncer. A menudo las células cancerosas tienen antígenos distintivos sobre sus superficies, tales como factor de crecimiento epidérmico truncado, proteína de unión a folato, mucinas epiteliales, melanoferrina, antígeno carcinoembriónico, antígeno de membrana específico de próstata, HER2-neu, que son candidatos para uso en vacunas terapéuticas de cáncer. Dado que los antígenos de tumores son normales o están relacionados con componente normales del cuerpo, el sistema inmunitario a menudo falla en montar una respuesta inmunitaria eficaz contra estos antígenos para destruir las células tumorales. Para conseguir dicha respuesta, se puede utilizar el sistema adyuvante que se describe en este documento. Como resultado, pueden entrar proteínas exógenas en el sistema de señalización para procesar antígenos endógenos, que conducen a la producción de linfocitos células T citolíticos o citotóxicos (CTL). Este efecto adyuvante facilita la producción de CTL específicos para el antígeno que buscan y destruyen aquellas células tumorales que llevan en su superficie el antígeno(s) del tumor usado(s) para inmunización. Tipos de cánceres ilustrativos para los que se puede usar esta aproximación incluyen próstata, colon, mama, ovárico, pancreático, cerebro, cabeza y cuello, melanoma, leucemia, linfoma, etc.
En otra realización de la invención, el sistema adyuvante de la presente invención se puede administrar solo, es decir, sin que se co-administre antígeno, para potenciar el sistema inmunitario para tratamiento de enfermedades infecciosas crónicas, especialmente en pacientes inmunitariamente debilitados. Ejemplos ilustrativos de enfermedades infecciosas para las que se puede emplear esta aproximación para tratamiento terapéutico o profiláctico se pueden encontrar en la patente de EE.UU. Nº. 5.508.310. La potenciación del sistema inmunitario de esta manera también puede ser útil como una medida preventiva para limitar los riesgos de infecciones nosocomiales y/o post-quirúrgicas.
En otra realización, el antígeno presente en las composiciones de vacunas no es un antígeno extraño, más bien es un autoantígeno, por ejemplo la composición de vacuna se dirige hacia una enfermedad autoinmunitaria tal como diabetes tipo 1, enfermedades autoinmunitarias convencionales específicas de un órgano, enfermedades neurológicas, enfermedades reumáticas, psoriasis, enfermedades del tejido conjuntivo, citopenias autoinmunitarias, y otras enfermedades autoinmunitarias. Dicha autoinmunidad convencional específica de un órgano puede incluir tiroiditis (de Graves + Hashimoto), gastritis, adrenalitis (de Addison), ovaritis, cirrosis biliar primaria, miastenia gravis, fallo gonadal, hipoparatiroidismo, alopecia, síndrome de malabsorción, anemia perniciosa, hepatitis, enfermedades de anticuerpos anti-receptor y vitíligo. Dichas enfermedades neurológicas pueden incluir esquizofrenia, enfermedad de Alzheimer, depresión, hipopituitarismo, diabetes insípida, síndrome sicca y esclerosis múltiple. Dichas enfermedades reumáticas/enfermedades de tejido conjuntivo pueden incluir artritis reumatoide, lupus sistémico eritematoso (SLE) o Lupus, escleroderma, polimiositis, enfermedad de intestino inflamado, dermatomiositis, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, vasculitis, artritis psoriática, dermatitis psoriática exfoliativa, penfigus vulgaris, síndrome de Sjogren. Otras enfermedades autoinmunitarias relacionadas pueden incluir uvorretinitis autoinmunitaria, glomerulonefritis, síndrome post cardiotomía de infarto miocárdico, hemosiderosis pulmonar, amiloidosis, sarcoidosis, estomatitis aftosa, y otras enfermedades inmunitarias relacionadas, según se han presentado en este documento y se conocen en las técnicas relacionadas.
Si bien se puede emplear cualquier vehículo adecuado conocido por los expertos ordinarios en la técnica, en las composiciones de vacunas de esta invención el tipo de vehículo variará típicamente dependiendo del modo de administración deseado. Las composiciones de la presente invención se pueden formular para cualquier manera de administración apropiada, incluyendo por ejemplo, administración tópica, oral, nasal, intravenosa, intracraneal, intraperitoneal, intradérmica, subcutánea o intramuscular. Para administración parenteral, tal como inyección subcutánea, el vehículo comprenderá a menudo agua, disolución salina, alcohol, una grasa, una cera o un tampón. Para administración oral, se usan a menudo los vehículos anteriores, o también se puede emplear un vehículo sólido tal como manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa, glucosa, sacarosa y carbonato de magnesio. También se pueden emplear como vehículos para las composiciones de esta invención microesferas biodegradables (por ejemplo, polilactato, poliglicolato). Se describen microesferas biodegradables adecuadas, por ejemplo, en patentes de EE.UU. N^{os}. 4.897.268; 5.075.109; 5.928.647; 5.811.128; 5.820.883; 5.853.763; 5.814.344 y 5.942.252, cuyas descripciones se incorporan a este documento por referencia en su totalidad. También son adecuados sistemas de vehículo de proteína modificada de núcleo de hepatitis B, tales como los que se describen en WO/99 40934, y referencias citadas en este documento, todas incorporadas en este documento por referencia. También se puede emplear un vehículo que comprende complejos de proteína en partículas tales como los que se describen en la patente de EE.UU. Nº. 5.928.647, cuya descripción se incorpora a este documento por referencia en su totalidad, que son capaces de inducir respuestas de linfocito T citotóxico de clase I restringidas en un hospedador.
En una realización ilustrativa, las formulaciones de vacuna se administran a las mucosas, en particular a la cavidad oral, y preferiblemente a un sitio sublingual, para suscitar una respuesta inmunitaria. La administración a la cavidad oral puede ser preferida en muchos casos sobre el suministro parenteral tradicional debido a la facilidad y comodidad ofrecidas por las técnicas de administración no invasivas. Aun más, esta aproximación proporciona adicionalmente un medio para suscitar inmunidad de la mucosa, que puede ser a menudo difícil de conseguir con suministro parenteral tradicional, y que puede proporcionar protección de agentes patógenos de las vías respiratorias y/o alérgenos. Una ventaja adicional de la administración a la cavidad oral es que se puede mejorar la adhesión del paciente al tratamiento con suministro sublingual de vacuna, especialmente para aplicaciones pediátricas o para aplicaciones que requieren tradicionalmente numerosas inyecciones a lo largo de un período de tiempo prolongado, tales como con las terapias de des-sensibilización de alergia.
Las composiciones de vacunas también pueden comprender tampones (por ejemplo, disolución salina tamponada neutra, disolución salina tamponada de fosfato, o tampones de fosfato sin disolución salina), carbohidratos (por ejemplo glucosa, manosa, sacarosa o dextranos), manitol, proteínas, polipéptidos o aminoácidos tales como glicina, antioxidantes, bacteriostáticos, agentes quelantes tales como EDTA o glutatión, adyuvantes (por ejemplo, hidróxido de aluminio), solutos que hacen la disolución isotónica, hipotónica o débilmente hipertónica con la sangre del receptor, agentes de suspensión, agentes de espesamiento y/o conservantes. Como alternativa, las composiciones de la presente invención se pueden formular como un liofilizado. Las composiciones también se pueden encapsular dentro de liposomas usando tecnología bien conocida.
Por lo tanto, en una realización, las composiciones de vacunas son formulaciones acuosas que comprenden una cantidad eficaz de uno o más tensioactivos. Por ejemplo, la composición puede estar en la forma de una dispersión micelar que comprende al menos un tensioactivo adecuado, por ejemplo un tensioactivo de fosfolípido. Ejemplos ilustrativos de fosfolípidos incluyen diacil fosfatidil gliceroles, tales como dimiristoil fosfatidil glicerol (DPMG), dipalmitoil fosfatidil glicerol (DPPG), y diestearoil fosfatidil glicerol (DSPG); diacil fosfatidil colinas, tales como dimiristoil fosfatidil colina (DPMC), dipalmitoil fosfatidil colina (DPPC), y diestearoil fosfatidil colina (DSPC); ácidos diacil fosfatídicos, tales como ácido dimiristoil fosfatídico (DPMA), ácido dipalmitoil fosfatídico (DPPA), y ácido diestearoil fosfatídico (DSPA); y diacil fosfatidil etanolaminas tales como dimiristoil fosfatidil etanolamina (DPME), dipalmitoil fosfatidil etanolamina (DPPE), y diestearoil fosfatidil etanolamina (DSPE).
Típicamente, la relación molar tensioactivo:adyuvante en una formulación acuosa será de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 1:10, más típicamente de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 1:5, aunque se puede usar cualquier cantidad de tensioactivo eficaz en una formulación acuosa para adaptarse mejor a los objetivos específicos de interés.
En otra realización, la composición es una emulsión, tal como emulsión agua en aceite o una emulsión aceite en agua. Emulsiones de este tipo generalmente son bien conocidas para los expertos en la técnica.
El sistema adyuvante de la presente invención se puede emplear como el único sistema adyuvante, o como alternativa, se puede administrar junto con otros adyuvantes o inmunoefectores. A manera de ilustración, adyuvantes de este tipo pueden incluir adyuvantes basados en aceite (por ejemplo Completo o Incompleto de Freund), liposomas, sales minerales (por ejemplo AlK(SO_{4})_{2}, AlNa(SO_{4})_{2}, AlNH_{4}(SO_{4})_{2}, sílice, alumbre, Al(OH_{3}), Ca_{3}PO_{4})_{2}, kaolín, y carbono), polinucleótidos (por ejemplo ácidos poli IC y poli AU), polímeros (por ejemplo, polímeros de bloques no iónicos, polifosfacenos, cianoacrilatos, polimerasa-(DL-lactida-co-glicolida), entre otros, y ciertas sustancias naturales (por ejemplo, lípido A y sus derivados, cera D de Mycobacterium tuberculosis, así como sustancias que se encuentran en Corynebacterium parvum, Bordetella pertussis, y miembros del género Brucella), albúmina de suero bovino, toxoide de difteria, toxoide de tétanos, edestina, hemocianina de lapa californiana, Toxina A de pseudomonas, coleragenoide, toxina de cólera, toxina de tosferina, proteínas virales, y proteínas eucarióticas tales como interferones, interleucinas, o factor de necrosis tumoral. Se pueden obtener proteínas de este tipo a partir de fuentes naturales y recombinantes según métodos bien conocidos para los expertos en la técnica. Cuando se obtienen a partir de fuentes recombinantes, el adyuvante puede comprender un fragmento de proteína que comprende al menos la porción inmunoestimulante de la molécula. Otras macromoléculas inmunoestimulantes conocidas que se pueden usar en la práctica de la invención incluyen, pero no se limitan, polisacáridos, ARNt, polímeros sintéticos no metabolizables tales como polivinilamina, poli(ácido metacrílico), polivinilpirrolidona, policondensados mixtos (con peso molecular relativamente alto) de ácido 4',4-diaminodifenilmetano-3,3'-dicarboxílico y ácido 4-nitro-2-aminobenzoico (Véase Sela, M., Science 166: 1365-1374 (1969)) o glicolípidos, lípidos o carbohidratos.
En una realización, el sistema adyuvante se diseña preferiblemente para inducir una respuesta inmunitaria predominantemente de tipo Th1. Altos niveles de citocinas de tipo Th1 (por ejemplo, IFN-\gamma, TNF\alpha, IL-2 e IL-12) tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunitarias mediadas por células a un antígeno administrado. En contraposición, niveles altos de citocinas de tipo Th2 (por ejemplo, IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10) tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunitarias humorales. Después de la aplicación de una vacuna como se proporciona en este documento, un paciente tolerará una respuesta inmunitaria que incluya respuestas de tipo Th1 y Th2. Dentro de una realización preferida, en la que una respuesta es predominantemente de tipo Th1, el nivel de citocinas de tipo Th1 aumentará en una magnitud mayor que el nivel de citocinas de tipo Th2. Se pueden evaluar fácilmente los niveles de estas citocinas usando análisis estándar. Para una revisión de las familias de citocinas véase Mosmann y Coffman, Ann. Rev. Immunol. 7: 145-173, 1989.
Por ejemplo, adyuvantes adicionales para uso en suscitar predominantemente una respuesta de tipo Th1 incluyen, por ejemplo, una combinación de monofosforil lípido A, tal como 3-de-O-acilado monofosforil lípido A (3D-MPL), junto con una sal de aluminio. Adyuvantes de MPL están disponibles de Corixa Corporation (Seattle, WA; véanse las patentes de EE.UU. N^{os}. 4.436.727; 4.877.611; 4.866.034 y 4.912.094). Oligonucleótidos que contienen CpG (en los que el dinucleótido de CpG es no metilado) también inducen predominantemente una respuesta Th1. Oligonucleótidos de este tipo son bien conocidos y se describen, por ejemplo, en los documentos WO 96/02555, WO 99/33488 y patentes de EE.UU. N^{os}. 6.008.200 y 5.856.462. También se describen secuencias de ADN inmunoestimulantes, por ejemplo, por Sato y col., Science 273: 352,1996. Otros adyuvantes ilustrativos que se pueden incluir en las composiciones de vacuna incluyen Montanide ISA 720 (Seppic, Francia), SAF (Chiron, California, Estados Unidos), ISCOMS (CSL), MF-59 (Chiron), adyuvante Detox® (Corixa, Hamilton, MT).
Las composiciones descritas en este documento se pueden administrar como parte de una formulación de liberación retardada (es decir, una formulación tal como una cápsula, esponja o gel (compuesta de polisacáridos, por ejemplo) que efectúa una liberación lenta del compuesto después de la administración). Formulaciones de este tipo se pueden preparar generalmente usando tecnología bien conocida (véase, por ejemplo, Coombes y col., Vaccine 14: 1429-1438, 1996) y se pueden administrar, por ejemplo, por vía oral, rectal o implantación subcutánea, o por implantación en el sitio diana deseado. Formulaciones de liberación retardada pueden contener un polipéptido, polinucleótido o anticuerpo disperso en una matriz de vehículo y/o contenido dentro de un reservorio circundado por una membrana que controla el caudal. Vehículos para uso dentro de formulaciones de este tipo son biocompatibles, y también pueden ser biodegradables; preferiblemente la formulación proporciona un nivel relativamente constante de liberación de componente activo. Vehículos de este tipo incluyen micropartículas de poli(lactida-co-glicolida), poliacrilato, látex, almidón, celulosa, dextrano, y similares. Otros vehículos de liberación retardada incluyen biovectores supramoleculares, que comprenden un núcleo hidrófilo no líquido (por ejemplo, un polisacárido u oligosacáridos reticulado) y, opcionalmente, una capa externa que comprende un compuesto anfifílico, tal como un fosfolípido (véase por ejemplo, patente de EE.UU. Nº. 5.151.254 y solicitudes PCT WO 94/20078, WO/94/23701 y WO 96/06638). La cantidad de compuesto activo contenido dentro de una formulación de liberación retardada variará dependiendo del sitio de implantación, la velocidad y duración de liberación esperada y la naturaleza de la dolencia que se ha de tratar o
prevenir.
Se pueden emplear cualquiera de una diversidad de vehículos conocidos dentro de las composiciones farmacéuticas y vacunas para facilitar la producción de una respuesta inmunitaria específica al antígeno que se dirija a las células. Vehículos de suministro incluyen células que presentan antígenos (APC), tales como células dendríticas, macrófagos, linfocitos B, monocitos y otras células que se puedan crear para que sean APC eficientes. Células de este tipo pueden ser genéticamente modificadas, pero no lo necesitan, para aumentar la capacidad de presentar el antígeno, para mejorar activación y/o mantenimiento de la respuesta del linfocito T, para tener efectos anti-diana per se y/o para ser inmunológicamente compatibles con el receptor (por ejemplo haplotipo HLA coincidente). Las APC se pueden aislar generalmente a partir de cualquiera de una diversidad de fluidos biológicos y órganos que incluyen tejidos tumorales y pretumorales, y pueden ser células autólogas, alogénicas, sinergénicas o xenogénicas.
Ciertas realizaciones preferidas de la presente invención usan células dendríticas o progenitoras de las mismas como células que presentan antígeno. Las células dendríticas son APC muy potentes (Banchereau y Steinman, Nature 392: 245-251,1998) y se ha mostrado que son eficaces como adyuvantes fisiológicos para suscitar inmunidad antitumoral profiláctica o terapéutica (véase Timmerman y Levy, Ann. Rev. Med. 50: 507-529, 1999). En general, se pueden identificar células dendríticas sobre la base de su forma típica (estrellada in situ, con procesos citoplásmicos marcados (dendritas) visibles in vitro), su habilidad para captar antígenos de proceso y presentes con alta eficacia y su habilidad para activar respuestas de células T naive. Evidentemente, las células dendríticas pueden ser creadas para expresar receptores o ligandos específicos de la superficie celular que no se encuentran comúnmente en células dendríticas in vivo o ex vivo, y dichas células dendríticas modificadas se contemplan por la presente invención. Como alternativa a las células dendríticas, se pueden usar dentro de una vacuna células dendríticas cargadas de antígenos segregados de vesículas (denominadas exosomas) (véase Zitvogel y col., Nature Med. 4: 594-600,1998).
Se pueden obtener células y progenitores dendríticos a partir de sangre periférica, médula ósea, células infiltradas en el tumor, células infiltradas en tejidos pretumorales, nodos linfáticos, bazo, piel, sangre de cordón umbilical o cualquier otro tejido o fluido adecuado. Por ejemplo, se pueden diferenciar células dendríticas ex vivo añadiendo una combinación de citocinas tales como GM-CSF, IL-4, IL-13 y/o TNF-\alpha a cultivos de monocitos recolectados de sangre periférica. Como alternativa, células positivas CD34, recolectadas de sangre periférica, sangre de cordón umbilical o médula ósea, se pueden diferenciar en células dendríticas añadiendo al medio de cultivo combinaciones de GM-CSF, IL-3, TNF-\alpha, ligando CD40, LPS, ligando flt3 y/u otro(s) compuesto(s) que induce(n) diferenciación, maduración y proliferación de células dendríticas.
Las células dendríticas se clasifican convenientemente como células "inmaduras" y "maduras", lo que permite discriminar de una manera sencilla entre dos fenotipos bien caracterizados. Sin embargo, esta nomenclatura no se debería interpretar que excluya todas las posibles etapas intermedias de diferenciación. Las células dendríticas inmaduras se caracterizan como APC con una capacidad alta para captación y procesado de antígeno, lo que se correlaciona con la expresión alta de receptor de Fc\gamma y receptor de manosa. El fenotipo maduro se caracteriza típicamente por una expresión más baja de estos marcadores, pero una expresión alta de moléculas de superficie celular responsables de la activación de células T tales como MHC de clase I y clase II, moléculas de adhesión (por ejemplo, CD54 y CD11) y moléculas co-estimulantes (por ejemplo CD40, CD80 y 4-1BB).
Las APC se pueden transfectar generalmente con un polinucleótido que codifica un polipéptido antígeno (o porción u otra variante del mismo) de tal modo que el polipéptido antígeno, o una porción inmunógena del mismo, se expresa sobre la superficie celular. Dicha transfección puede tener lugar ex vivo, y una composición o vacuna que comprende dichas células transfectadas, y los adyuvantes descritos en este documento, se pueden usar entonces para fines terapéuticos. Como alternativa, se puede administrar a un paciente un vehículo de suministro de gen que fija como diana una célula dendrítica u otra que presenta antígeno, dando como resultado transfección que ocurre in vivo. Transfección in vivo y ex vivo de células dendríticas, por ejemplo, se puede realizar generalmente usando alguno de los métodos conocidos en la técnica, tales como los que se describen en WO 97/24447, o la aproximación de cañón de genes descrita por Mahvi y col., Immunology and Cell Biology 75: 456-460, 1997. Se puede conseguir la carga de antígenos en células dendríticas incubando células dendríticas o células progenitoras con polipéptido antígeno, ADN (desnudo o con un vector de plásmido) o ARN; o con bacterias o virus recombinantes que expresan antígeno (por ejemplo, vaccinia, viruela aviar, adenovirus o vectores de lentivirus). Antes de la carga, el polipéptido se puede conjugar covalentemente a un compañero inmunológico que proporciona célula T auxiliar (por ejemplo una molécula vehículo). Como alternativa, una célula dendrítica se puede impulsar con un compañero inmunológico no conjugado, separadamente o en presencia del polipéptido.
\vskip1.000000\baselineskip
Tratamiento de trastornos relacionados con óxido nítrico
En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos para tratar enfermedades o dolencias mediadas por óxido nítrico, particularmente isquemia y lesión por reperfusión. Dicho tratamiento comprende administrar a un sujeto con necesidad de tratamiento de este tipo una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención. Generalmente se acepta que los inductores de la transcripción de gen iNOS y síntesis de proteína son proinflamatorios y por consiguiente algo "tóxicos" o escasamente tolerados en animales y seres humanos. Endotoxina (LPS) y citocinas proinflamatorias tales como IL-1, TNF-\alpha e IFN-\gamma son conocidos inductores de iNOS. Todos son inherentemente tóxicos y capaces de inducir respuesta inflamatoria sistémica, síndrome de dificultad respiratoria en adulto, fallo múltiple de órganos y colapso cardiovascular cuando se administran a animales.
La investigación de la actividad cardioprotectora de MPL® inmunoestimulante demostró que la inducción de óxido nítrico sintasas (iNOS) es importante en el efecto cardioprotector retrasado del compuesto. Adicionalmente, la señalización de óxido nítrico (NO), presumiblemente a través de reservas constitutivas de NOS, es importante en el efecto cardioprotector agudo del compuesto. En vista de la actividad residual de tipo endotóxico de MPL® inmunoestimulante, no es sorprendente que el compuesto pueda ser capaz de inducir señalización de óxido nítrico. Todavía adicionalmente, se ha sugerido señalización de óxido nítrico como un potencial sistema de señalización por el que el preacondicionamiento isquémico suscita cardioprotección. Esta observación en combinación con el hecho de que los donantes de óxido nítrico son cardioprotectores proporciona apoyo adicional para el sistema de señalización NOS/NO como la ruta para cardioprotección de MPL® inmunoestimulante.
Los compuestos de la presente invención son útiles para tratar enfermedades o dolencias moduladas o mejoradas por óxido nítrico, particularmente isquemia y lesión por reperfusión (véase, solicitud de patente de EE.UU. Nº. de serie: 09/808669, presentada el 14 de Marzo de 2001, sobre una descripción de las propiedades cardioprotectoras de fosfatos de aminoalquil glucosaminida y métodos para analizar propiedades cardioprotectoras).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar la invención que se reivindica.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1 Preparación de Sal de trietilamonio de N-[(R)-3-Tetradecanoil-oxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-Desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-tetra-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil-\beta-D-glucopi-ranósido; sal de trietilamonio del compuesto de fórmula (II)
(1a) A una disolución de bromuro de 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil-6-O-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-\beta-D-glucopiranosilo (1,05 g, 0,81
mmol) en 1,2-dicloroetano (10 ml) seco se añadieron tamices moleculares (0,5 g) de 4 \ring{A}, CaSO_{4} anhidro (2,2 g, 16 mmol), y N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinametanol (0,40 g, 0,75 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente, se trató con Hg(CN)_{2} (1,02 g, 4,05 mmol), y se calentó a reflujo durante 16 h. en la oscuridad. Se diluyó la mezcla de reacción fría con CH_{2}Cl_{2} y se filtró. Se lavó el filtrado con KI ac. 1 N, se secó (Na_{2}S0_{4}), y se concentró. Cromatografía rápida sobre gel de sílice (gradiente de elución, 15\rightarrow20% EtOAc/hexanos) proporcionó 0,605 g (43%) de N-[(R)-3-tetra-decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-O-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-\beta-D-glucopiranósido como un sólido amorfo.
(1b) Se trató una disolución del compuesto preparado en (1a) anterior (0,50 g, 0,29 mmol) en AcOH (10 ml) a 60ºC con polvo de cinc (0,98 g, 15 mmol) en tres porciones iguales durante un período de 1 h. La mezcla de reacción fría se sometió a ultrasonidos, se filtró a través de una almohadilla de Celite, y se concentró. El resto resultante se repartió entre CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} aq saturado, y se separaron las capas. La capa orgánica se secó (Na_{2}S0_{4}) y se concentró. Se agitó una disolución del amino alcohol bruto obtenido y ácido (R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoico (0,155 g, 0,34 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3,5 ml) con tamices moleculares en polvo de 4 \ring{A} (0,25 g) durante 0,5 h y se trataron luego con 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina (0,11 g, 0,44 mmol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 8 h, se filtró a través de Celite, y se concentró. Cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc/hexanos al 50% dio 0,355 g (68%) de N[(R)-3-tetra-decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetra-decanoil]-\beta-D-glucopiranósido como un jarabe incoloro.
(1c) Se hidrogenó una disolución del compuesto preparado en (1b) anterior (0,300 g, 0,166 mmol) en una mezcla de AcOH (1 ml) y tetrahidrofurano (9 ml) en presencia de PtO_{2} (0,15 g) a temperatura ambiente y 70 psig (483 kPa de presión manométrica) durante 18 h. Se diluyó la mezcla de reacción con CHCl_{3}-MeOH 2:1 (50 ml) y se sometió a ultrasonidos brevemente. Se recogió el catalizador y se lavó con CHCl_{3}-MeOH 2:1 y se concentró el combinado del filtrado y los lavados. Cromatografía rápida sobre gel de sílice con CHCl_{3}-MeOH-H_{2}O-Et_{3}N (90:10:0,5:0,5) dio producto parcialmente purificado que se disolvió en CHCl_{3}-MeOH 2:1 (30 ml) en baño de hielo y se lavó con HCl aq 0,1 N (12 ml) en baño de hielo. Se filtró la fase orgánica y se liofilizó con Et_{3}N aq al 2% (5 ml, exenta de pirógenos) dando 0,228 g (79%) de sal de trietilamonio de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxy-4-O-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-tetradecanoil-oxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido como un polvo incoloro: p.f. 67-70ºC; IR (película) 3306, 2955, 2923, 2853, 1736, 1732, 1644, 1548, 1466, 1378, 1245, 1177, 1110, 1053, 844 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}-CD_{3}OD) \delta 0,88 (m, 18 H), 1,01-2,05 (mH), 2,20-2,70 (m, 12 H), 3,06 (q, 6 H, J= 7,2 Hz), 3,3-3,25 (mH), 4,52 (d, 1 H, J= 8 Hz), 5,05-5,28 (m, 4 H), 7,44 (d, 1 H, J= 9 Hz); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 173,3, 173,0, 170,3, 169,6, 168,6, 101,8, 100,4, 75,8, 72,5, 72,4, 70,9, 70,8, 70,3, 70,2, 69,9, 69,3, 67,9, 66,6, 56,5, 56,3, 54,5, 47,4, 45,8, 44,6, 41,4, 41,0, 39,7, 39,2, 39,0, 34,5, 34,3, 34,1, 32,0, 29,7, 29,4, 28,1, 27,3, 25,7, 25,3, 25,2, 25,1, 24,0, 22,7, 21,6, 14,1, 8,6.
Análisis calculado para C_{101}H_{194}N_{3}O_{17}P\cdotH_{2}O: C, 68,47; H, 11,15; N, 2,37; P, 1,75. Encontrado: C, 68,79; H, 11,00; N, 2,24; P, 1,97.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 Preparación de sal de trietilamonio de N-[(R)-3-Dodecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-Desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil-\beta-D-glucopiranósido; sal de trietilamonio de compuesto (III)
(2a) A una disolución de bromuro de 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-3-O-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil-6-O-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-\alpha-D-glucopiranosilo (1,60 g, 1,27
mmol) en 1,2-dicloroetano (3,2 ml) seco se añadieron tamices moleculares (0,6 g) de 4 \ring{A}, CaS0_{4} anhidro (1,0 g, 7,3 mmol), y N-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinametanol (0,58 g, 1,14 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 h a temperatura ambiente, se trató con Hg(CN)_{2} (0,58 g, 2,35 mmol), y se calentó a reflujo durante 6 h en la oscuridad. Se diluyó la mezcla de reacción fría con CH_{2}Cl_{2} y se filtró a través de un lecho de Celite. Se lavó el filtrado con KI ac. 1 N, se secó (Na_{2}S0_{4}), y se concentró. Cromatografía rápida sobre gel de sílice (gradiente de elución, 25\rightarrow35% EtOAc/hexanos) produjo 1,72 g (82%) de N-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-3-O-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-6-O-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-\beta-D-glucopiranósido como un aceite incoloro.
(2b) Se trató una disolución del compuesto preparado en (2a) anterior (1,58 g, 0,806 mmol) en AcOH (40 ml) a 60ºC con polvo de cinc (2,6 g, 40 mmol) en tres porciones iguales durante un período de 1 h. La mezcla de reacción fría se sometió a ultrasonidos, se filtró a través de una almohadilla de Celite, y se concentró. El resto resultante se repartió entre EtOAc y NaHCO_{3} aq saturado, y se separaron las capas. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para dar 1,3 g de un sólido blanco. Se trató una disolución del amino alcohol bruto obtenido y ácido (R)-3-dodecanoiloxitetradecanoico (0,45 g, 1,05 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) con 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina (0,30 g, 1,21 mmol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 18 h y se concentró. Cromatografía rápida sobre gel de sílice con 40\rightarrow50% EtOAc/hexanos dio 0,89 g (56%) de N[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido como una espuma blanca.
(2c) Se hidrogenó una disolución del compuesto preparado en (2b) anterior (0,75 g, 0,44 mmol) en una mezcla de AcOH (4,5 ml) y tetrahidrofurano (45 ml) en presencia de PtO_{2} (0,45 g) a temperatura ambiente y 70 psig (483 kPa de presión manométrica) durante 18 h. Se diluyó la mezcla de reacción con CHCl_{3}-MeOH 2:1 (35 ml) y se sometió a ultrasonidos brevemente. Se recogió el catalizador y se lavó con CHCl_{3}-MeOH 2:1 y se concentró el combinado de filtrado y lavados. Cromatografía rápida sobre gel de sílice con CHCl_{3}-MeOH-H_{2}0-Et_{3}N (gradiente de elución: 96:4:0,3:0,3 \rightarrow 90:10:0,5:0,5) dio producto parcialmente purificado (0,51 g) que se disolvió en CHCl_{3}-MeOH 2:1 (50 ml) en baño de hielo y se lavó con HCl aq 0,1 N (20 ml) en baño de hielo. Se filtró la fase orgánica y se concentró. La cera blanca obtenida se liofilizó con Et_{3}N aq al 2% (70 ml, exenta de pirógenos) para dar 0,54 g (78%) de sal de trietilamonio de N-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxy-4-O-fosfono-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-dodecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido como un polvo blanco: p.f. 146-151ºC; IR (película) 3292, 3100, 2958, 2922, 2852, 1739, 1731, 1659, 1651, 1644, 1562, 1555, 1468, 1455, 1433, 1377, 1339, 1310, 1253, 1238, 1183, 1160, 1107, 1080, 1047, 960, 856, 722 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}-CD_{3}OD) \delta 0,88 (m, 18 H), 1,0-2,10 (mH), 2,20-2,75 (m, 12 H), 3,04 (q, 6 H, J= 7,2 Hz), 3,3-4,3 (mH), 4,45 (d, 1 H, J= 8,5 Hz), 5,0-5,28 (m, 4 H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 173,9, 173,4, 173,2, 170,6, 170,1, 169,2, 101,4, 75,5, 74,0, 70,8, 70,7, 70,2, 68,5, 60,5, 56,6, 53,6, 47,4, 45,6, 40,9, 39,6, 38,8, 34,5, 34,3, 34,2, 34,1, 31,9, 29,7, 29,6, 29,5, 29,4, 29,4, 29,3, 29,2, 27,3, 25,2, 25,0, 23,6, 22,7, 21,6, 14,0, 8, 3.
EM-MALDI calculada para [M + Na]^{+} 1590, 1900, encontrada 1590,1866; Análisis calculado para C_{95}H_{182}N_{3}O_{17}P\cdot
3H_{2}O: C, 66,20; H, 10,99; N, 2,44. Encontrado: C, 66,36; H, 10,69; N, 2,15.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 Preparación de sal de trietilamonio de N-[(R)-3-Decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-Desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil-\beta-D-glucopiranósido; sal de trietilamonio de compuesto (IV)
(3a) A una disolución de bromuro de 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-3-O-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil-6-O-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-\alpha-D-glucopiranosilo (1,70 g, 1,38 mmol) en 1,2-dicloroetano (3,5 ml) seco se añadieron tamices moleculares (0,6 g) de 4 \ring{A}, CaSO_{4} anhidro (1,2 g, 8,8 mmol), y N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinametanol (0,60 g, 1,24 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 h a temperatura ambiente, se trató con Hg(CN)2 (0,63 g, 2,5 mmol), y se calentó a reflujo durante 6 h en la oscuridad. Se diluyó la mezcla de reacción fría con CH_{2}Cl_{2} y se filtró a través de un lecho de Celite. Se lavó el filtrado con KI ac. 1 N, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se concentró. Cromatografía rápida sobre gel de sílice (gradiente de elución, 25\rightarrow40% EtOAc/hexanos) produjo 1,82 g (80%) de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-3-O-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-6-O-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino)-\beta-D-glucopiranósido como un aceite incoloro.
(3b) Se trató una disolución del compuesto preparado en (3a) anterior (1,67 g, 1,02 mmol) en AcOH (50 ml) a 60ºC con polvo de cinc (3,33 g, 51 mmol) en tres porciones iguales durante un período de 1 h. La mezcla de reacción fría se sometió a ultrasonidos, se filtró a través de una almohadilla de Celite, y se concentró. El resto resultante se repartió entre EtOAc y NaHCO_{3} aq saturado, y se separaron las capas. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na_{2}S0_{4}), y se concentró para dar 1,25 g de un sólido blanco. Se trató una disolución del amino alcohol bruto obtenido y ácido (R)-3-decanoiloxitetradecanoico (0,53 g, 1,33 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) con 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina (0,38 g, 1,53 mmol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 18 h y se concentró. Cromatografía rápida sobre gel de sílice con 40\rightarrow50% EtOAc/hexanos dio 1,23 g (74%) de N[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-decanoiloxitetra-decanoil]-\beta-D-glucopiranósido como una espuma blanca.
(3c) Se hidrogenó una disolución del compuesto preparado en (3b) anterior (1,07 g, 0,654 mmol) en una mezcla de AcOH (6,5 ml) y tetrahidrofurano (65 ml) en presencia de PtO_{2} (0,66 g) a temperatura ambiente y 70 psig (483 kPa de presión manométrica) durante 18 h. Se diluyó la mezcla de reacción con CHCl_{3}-MeOH 2:1 (50 ml) y se sometió a ultrasonidos brevemente. Se recogió el catalizador y se lavó con CHCl_{3}-MeOH 2:1 y se concentró el combinado de filtrado y lavados. El sólido céreo resultante se liofilizó con trietilamina aq al 2% dando \sim1 g de sal de trietilamonio bruta como un polvo blanco. Cromatografía rápida sobre gel de sílice con CHCl_{3}-MeOH-H20-Et_{3}N (gradiente de elución: 96:4:0,3:0,3\rightarrow88:12:1:0,6) dio producto parcialmente purificado (0,84 g) que se disolvió en CHCl_{3}-MeOH 2:1 (168 ml) en baño de hielo y se lavó con HCl aq 0,1 N (67 ml) en baño de hielo. Se filtró la fase orgánica y se concentró. La cera blanca obtenida (\sim0,7 g) se liofilizó con Et_{3}N aq al 2% (70 ml, exenta de pirógenos) dando 0,79 g (79%) de sal de trietilamonio de N-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinilmetil 2-desoxy-4-O-fosfono-2-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-decanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido como un polvo blanco: p.f. 121-122ºC; IR (película) 3287, 3093, 2961, 2913, 2850, 1745, 1738, 1732, 1716, 1666, 1660, 1651, 1644, 1635, 1565, 1556, 1538, 1470, 1455, 1434, 1416, 1378, 1337, 1311, 1248, 1184, 1104, 1081, 1021, 964, 721 cm^{-1}; RMN ^{1}H (CDCl_{3}-CD_{3}OD) \delta 0,88 (m, 18 H), 1,0-2,05 (mH), 2,20-2,75 (m, 12 H), 3,04 (q, 6 H, J= 7,2 Hz), 3,3-4,3 (mH), 4,45 (d, 1 H, J= 8,5 Hz), 5,0-5,28 (m, 4 H); RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 173,7, 173,4, 173,2, 170,5, 170,1, 169,1, 101,4, 75,6, 74,0, 70,8, 70,2, 68,7, 60,4, 56,6, 53,8, 47,4, 45,6, 41,0, 39,6, 38,9, 34,5, 34,3, 34,2, 34,1, 31,9, 29,7, 29,6, 29,5, 29,4, 29,4, 29,3, 29,2, 27,3, 25,3, 25,0, 23,7, 22,7, 21,6, 14,1, 8,4.
Em-MALDI calculada para [M + Na]+ 1506,0961, encontrada 1506,1008; Análisis calculado para C_{89}H_{170}N_{9}O_{17}P: C, 67,43; H, 10,81; N, 2,65. Encontrado: C, 67,26; H, 10,85; N, 2,47.

Claims (24)

1. Un compuesto que tiene la fórmula:
8
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que X es un miembro que se selecciona entre el grupo constituido por -O- o -NH-;
Y es un miembro que se selecciona entre el grupo constituido por -O- y -S-;
R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno miembros que se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por acilo (C_{9}-C_{14)}, con la condición de que R^{1}, R^{2} y R^{3} no sean todos grupos tetradecanoilo cuando R^{4} es PO_{3}H_{2}, R^{5} y R^{6} son H, X e Y son O, n es 1, m es 2 y p y q son 0.
R^{4} es un miembro que se selecciona entre el grupo constituido por -H y -PO_{3}R^{7}R^{8}, en la que R^{7} y R^{8} son cada uno miembros que se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por -H, y grupos alifáticos (C_{1}-C_{4});
R^{5} es un miembro que se selecciona entre el grupo constituido por -H, -CH_{3} y -PO_{3}R^{9}R^{10}, en la que R^{9} y R^{10} son cada uno miembros que se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por -H y grupos alifáticos (C_{1}-C_{4});
R^{6} se selecciona entre H, OH, grupos oxialifáticos (C_{1}-C_{4}); -PO_{3}R^{11}R^{12}, -OPO_{3}R^{11}R^{12}, -SO_{3}R^{11}, -OSO_{3}R^{11},
-NR^{11}R^{12}, -SR^{11}, -CN, -NO_{2}, -CHO, -CO_{2}R^{11}, y -CONR^{11}R^{12}, en las que R^{11} y R^{12} se seleccionan cada uno independientemente entre H y grupos alifáticos (C_{1}-C_{4}), con la condición de que uno de R^{4} y R^{5} es un grupo que contiene fósforo y que cuando R^{4} es -PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} es distinto de -POsR^{9}R^{1};
en las que "*^{1}", "*^{2}", "*^{3}" y "**" representan centros quirales;
en las que n, m, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0 a 6, con la condición de que la suma de p y m sea de 0 a 6.
\vskip1.000000\baselineskip
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{1}, R^{2} y R^{3} se seleccionan cada uno independientemente entre acilo C_{9}-C_{13}.
3. El compuesto de la reivindicación 1 ó la reivindicación 2, en el que X e Y son -O-, R^{4} es PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} y R^{6} son H, y n, m, p, y q son números enteros de 0 a 2.
4. Los compuestos de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en los que R^{7} y R^{8} son -H.
5. El compuesto de la reivindicación 3 ó la reivindicación 4, en el que n es 1, m es 2, p y q son 0.
6. El compuesto de cualquier reivindicación precedente en el que R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno acilo C_{10}-C_{12}.
7. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno restos decanoílo.
8. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno restos dodecanoílo.
9. El compuesto de cualquier reivindicación precedente en el que *^{1}, *^{2} y *^{3} están en la configuración R.
10. El compuesto de la reivindicación 1 que es de fórmula III o fórmula IV:
9 
\vskip1.000000\baselineskip
10
11. Una composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-10.
12. La composición farmacéutica de la reivindicación 11 que comprende adicionalmente al menos un antígeno.
13. La composición farmacéutica de la reivindicación 12, en la que el antígeno procede del grupo constituido por Herpes Simplex Virus Tipo 1, Herpes Simplex Virus Tipo 2, citomegalovirus humano, VIH, hepatitis A, B, C o E, Virus Respiratorio Sincitial, virus de papiloma humano, virus de influenza, tuberculosis, Leishmaniasis, T. cruzi, Ehrlachia, Candida, Salmonela, Neiseria, Borrelia, Clamidia, Bordetela, Plasmodio y Toxoplasma.
14. La composición farmacéutica de la reivindicación 12, en la que el antígeno es un antígeno de tumor humano.
15. La composición farmacéutica de la reivindicación 14, en la que el antígeno de tumor se deriva de un cáncer de próstata, colon, mama, ovárico, pancreático, cerebro, cabeza y cuello, melanoma, leucemia o linfoma.
16. La composición farmacéutica de la reivindicación 12, en la que el antígeno es un auto-antígeno.
17. La composición farmacéutica de la reivindicación 16, en la que el auto-antígeno es un antígeno asociado con una enfermedad autoinmunitaria.
18. La composición farmacéutica de la reivindicación 17, en la que la enfermedad autoinmunitaria es diabetes de tipo 1, esclerosis múltiple, miastenia gravis, artritis reumatoide o psoriasis.
19. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 11-18, en una formulación acuosa.
20. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 11-18, en una formulación en emulsión.
21. La composición farmacéutica de la reivindicación 19 ó la reivindicación 20 que comprende uno o más tensioactivos.
22. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 11-18, en una formulación sólida.
23. El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 ó una composición de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 22 para la fabricación de un medicamento para tratamiento profiláctico o terapéutico de una infección patógena, cáncer o un trastorno autoinmunitario.
24. El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 ó una composición de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 22 para la fabricación de un medicamento para tratar isquemia o lesión por reperfusión.
ES02723106T 2002-02-04 2002-02-04 Nuevos compuestos inmunoefectores. Expired - Lifetime ES2336080T3 (es)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US2002/003580 WO2003065806A1 (en) 2002-02-04 2002-02-04 New immunoeffector compounds

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2336080T3 true ES2336080T3 (es) 2010-04-08

Family

ID=27732075

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES02723106T Expired - Lifetime ES2336080T3 (es) 2002-02-04 2002-02-04 Nuevos compuestos inmunoefectores.

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP1482795B1 (es)
JP (1) JP2005516980A (es)
KR (1) KR100885008B1 (es)
CN (1) CN1301134C (es)
AT (1) ATE447844T1 (es)
AU (1) AU2002253909B2 (es)
BR (1) BR0215588A (es)
CA (1) CA2474398A1 (es)
CY (1) CY1109692T1 (es)
CZ (1) CZ2004862A3 (es)
DE (1) DE60234386D1 (es)
DK (1) DK1482795T3 (es)
ES (1) ES2336080T3 (es)
HU (1) HUP0500539A2 (es)
IL (1) IL163304A (es)
MX (1) MXPA04008559A (es)
NO (1) NO20043707L (es)
PT (1) PT1482795E (es)
WO (1) WO2003065806A1 (es)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6911434B2 (en) 2002-02-04 2005-06-28 Corixa Corporation Prophylactic and therapeutic treatment of infectious and other diseases with immunoeffector compounds
CZ2004861A3 (cs) * 2002-02-04 2004-12-15 Corixa Corporation Profylaktická a terapeutická léčba infekčních a jiných nemocí pomocí imunoefektorových sloučenin
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
TR201900418T4 (tr) 2005-12-22 2019-02-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pnömokok polisakkarit konjugat aşısı.
EP2390363A1 (en) 2006-06-02 2011-11-30 GlaxoSmithKline Biologicals s.a. Method for identifying whether a patient will be responder or not to immunotherapy based on the differential expression of the PRF1 gene
EA020817B1 (ru) 2007-06-26 2015-02-27 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцина, содержащая конъюгаты капсульных полисахаридов streptococcus pneumoniae
MX2010002965A (es) 2007-09-17 2010-09-14 Oncomethylome Sciences Sa Deteccion mejorada de la expresion de mage-a.
MX2011009597A (es) 2009-03-17 2012-05-29 Glaxosmithkline Biolog Sa Deteccion mejorada de la expresion del gen.
GB0917457D0 (en) 2009-10-06 2009-11-18 Glaxosmithkline Biolog Sa Method
GB201101331D0 (en) 2011-01-26 2011-03-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Compositions and uses
GB201113570D0 (en) 2011-08-05 2011-09-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EP3972637A4 (en) * 2019-05-20 2023-06-21 Soligenix, Inc. Compositions and methods of manufacturing trivalent filovirus vaccines
BR112022000710A2 (pt) 2019-07-21 2022-03-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vacina viral terapêutica
EP4161570A1 (en) 2020-06-05 2023-04-12 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Modified betacoronavirus spike proteins
EP4032547A1 (en) 2021-01-20 2022-07-27 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Hsv1 fce derived fragements for the treatment of hsv

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4987237A (en) * 1983-08-26 1991-01-22 Ribi Immunochem Research, Inc. Derivatives of monophosphoryl lipid A
US5607698A (en) * 1988-08-04 1997-03-04 Ciba-Geigy Corporation Method of preserving ophthalmic solution and compositions therefor
US6113918A (en) * 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6013640A (en) 1998-08-21 2000-01-11 Ribi Immunochem Research, Inc. Phosphoglycolipid and methods for its use
US6699846B2 (en) 2000-03-17 2004-03-02 Corixa Corporation Mono- and disaccharides for the treatment of nitric oxide related disorders
WO2002012258A1 (en) * 2000-08-04 2002-02-14 Corixa Corporation New immunoeffector compounds
CZ2004861A3 (cs) * 2002-02-04 2004-12-15 Corixa Corporation Profylaktická a terapeutická léčba infekčních a jiných nemocí pomocí imunoefektorových sloučenin

Also Published As

Publication number Publication date
ATE447844T1 (de) 2009-11-15
DE60234386D1 (de) 2009-12-24
NO20043707L (no) 2004-09-03
AU2002253909B2 (en) 2008-06-05
EP1482795A4 (en) 2006-08-09
DK1482795T3 (da) 2010-02-01
HUP0500539A2 (en) 2006-09-28
WO2003065806A1 (en) 2003-08-14
EP1482795A1 (en) 2004-12-08
KR100885008B1 (ko) 2009-02-20
JP2005516980A (ja) 2005-06-09
PT1482795E (pt) 2010-02-09
CN1622754A (zh) 2005-06-01
EP1482795B1 (en) 2009-11-11
MXPA04008559A (es) 2004-12-06
IL163304A (en) 2010-11-30
CZ2004862A3 (cs) 2005-01-12
CN1301134C (zh) 2007-02-21
CA2474398A1 (en) 2003-08-14
AU2002253909A1 (en) 2003-09-02
KR20040083433A (ko) 2004-10-01
BR0215588A (pt) 2005-03-22
CY1109692T1 (el) 2014-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6525028B1 (en) Immunoeffector compounds
EP1311522B1 (en) New immunoeffector compounds
AU2001281001A1 (en) New immunoeffector compounds
ES2336080T3 (es) Nuevos compuestos inmunoefectores.
US20030190333A1 (en) Immunostimulant compositions comprising aminoalkyl glucosaminide phosphates and saponins
JP7724008B2 (ja) ジアリールトレハロース化合物及びその使用
ES2556970T3 (es) Ciertos compuestos de fosfato de aminoalquil glucosaminida y sus usos
KR100858947B1 (ko) 면역효과기 화합물을 사용하는 감염성 질환 및 기타질환의 예방학적 및 치료학적 처치
AU2002240250A1 (en) Immunostimulant compositions comprising aminoalkyl glucosaminide phosphates and saponins
SG11202112870WA (en) Vaccine adjuvants based on tlr receptor ligands
RU2289585C2 (ru) Новые аминоалкилглюкозаминидфосфатные соединения, иммуностимулирующая фармацевтическая композиция, их содержащая, и способ индуцирования иммунного ответа
NZ534478A (en) New immunoeffector compounds
HK1077164A (en) New immunoeffector compounds