ES2341461T5 - Procedimientos de tratamiento de la artrosis con anticuerpos ANTI-IL-6 - Google Patents

Description

Procedimientos de tratamiento de la artrosis con anticuerpos ANTI-IL-6

Antecedentes de la invención

La artrosis es una enfermedad que afecta a millones de personas. Los pacientes con artrosis padecen síntomas tales como dolor articular y rigidez articular, que conducen a deformaciones de la articulación y a una disminución o pérdida de la función articular. Son agentes típicos usados para tratar a los que padecen artrosis la aspirina y fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) convencionales, tales como ibuprofeno, diclofenaco y naproxeno. El documento EP0331640A2 describe el uso de interleucina 6 en el tratamiento de afecciones óseas tales como la osteoporosis y la artrosis. Existe la necesidad en la técnica de procedimientos adicionales de tratamiento de la artrosis con agentes terapéuticos.

Sumario de la invención

En un aspecto, la presente invención se refiere a procedimientos de tratamiento de la artrosis que comprenden: administrar, a un sujeto que padece artrosis, una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-IL-6. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica se administra por vía intraarticular o intravenosa. En ciertas realizaciones, el anticuerpo contra IL-6 es un anticuerpo monoclonal. En ciertas realizaciones, el anticuerpo contra IL-6 es CNTO 328. En ciertas realizaciones, la presente invención se refiere a la administración adicional de uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en: sal cálcica del ácido 6-(5-carboxi-5-metil-hexiloxi)-2,2dimetil-hexanoico, agentes antiinflamatorios no esteroideos, piroxicam, diclofenaco, naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, ketoprofeno, ibuprofeno, ácido mefenámico, indometacina, sulindaco, apazona, fenilbutazona, aspirina, celecoxib, parecoxib, valdecoxib, etoricoxib, corticosteroides, hyalgan y synvisc. En ciertas realizaciones, el dolor artrósico puede tratarse con un anticuerpo anti-IL-6. En ciertas realizaciones, la presente invención se refiere procedimientos de tratamiento de la artrosis que comprenden: administrar a un sujeto que padece artrosis una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-IL-6.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de un anticuerpo anti-IL-6 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artrosis en sujetos.

Definiciones

En un entorno clínico, un médico puede evaluar si un paciente padece artrosis mediante índices clínicos convencionales, incluyendo procedimientos radiológicos (por ejemplo, rayos X de las articulaciones afectadas) y determinación del Índice de Artrosis de las Universidades Western Ontario y McMaster ("WOMAC") (véase, por ejemplo, Creamer y col. (1999) J. Rheumatol. 26: 1785-1792).

El término "anticuerpo" se refiere a un polipéptido monomérico (por ejemplo, anticuerpos de cadena sencilla) o multimérico que comprende una región flanqueante de un gen de inmunoglobulina, o fragmentos del mismo, que se une específicamente a y reconoce un antígeno. Los genes de inmunoglobulina reconocidos incluyen los genes de la región constante kappa, lambda, alfa, gamma, delta, épsilon y mu, así como la miríada de genes de la región variable de la inmunoglobulina. Las cadenas ligeras se clasifican como kappa o lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como gamma, mu, alfa, delta o épsilon, que a su vez definen las clases de inmunoglobulinas IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. El término "anticuerpo" también incluye polipéptidos de unión a antígeno tales como Fab, Fab’, F(ab’)2, Fd, Fv, dAb y fragmentos de región determinante de complementariedad (CDR), anticuerpos de cadena sencilla (scFv), anticuerpos quiméricos y diacuerpos. El término anticuerpo incluye anticuerpos policlonales y anticuerpos monoclonales, a menos que se indique otra cosa.

Una unidad estructural de inmunoglobulina (anticuerpo) ejemplar comprende un tetrámero. Cada tetrámero está compuesto por dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas, teniendo cada par una cadena "ligera" (de aproximadamente 25 kDa) y una "pesada" (de aproximadamente 50-70 kDa). El extremo amino-terminal de cada cadena define una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos, principalmente responsables del reconocimiento de antígenos. Las expresiones cadena ligera variable (VL) y cadena pesada variable (VH) se refieren a estas cadenas ligeras y pesadas, respectivamente.

Como se usa en el presente documento, un fragmento Fd se refiere a un fragmento de anticuerpo que está que consiste en los dominios VH y CH1; un fragmento Fv está constituido por los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo; y un fragmento dAb (Ward y col., Nature 341: 544-546 (1989)) está constituido por un dominio VH.

En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo de cadena sencilla (scFv) en el que un dominio VL y VH se emparejan para formar una molécula monovalente por medio de un engarce sintético que permite que se generen

como una sola cadena proteica. (Bird y col., Science 242: 423-426 (1988) y Huston y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883 (1988).) En algunas realizaciones, los anticuerpos son diacuerpos, es decir, son anticuerpos bivalentes en los que se expresan dominios VH y VL en una sola cadena polipeptídica, pero usando un engarce que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios de la misma cadena, forzando de este modo a los dominios a emparejarse con dominios complementarios de otra cadena y generando dos sitios de unión a antígeno. (Véase, por ejemplo, Holliger P. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993), y Poljak R. J. y col., Structure 2: 1121-1123 (1994)).

Un anticuerpo "anti-IL-6" es un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de IL-6. Los ejemplos de polipéptidos de IL-6 incluyen, pero sin limitación, un polipéptido de IL-6 de ratón (por ejemplo, SEC ID Nº: 2), un polipéptido de IL-6 de rata (por ejemplo, SEC ID Nº: 4) y un polipéptido de IL-6 humano (por ejemplo, SEC ID Nº: 6). Un ejemplo de un "anticuerpo anti-IL-6" es CNTO 328 (cCLB8), un anticuerpo monoclonal quimérico de humanoratón contra IL-6 (véase, por ejemplo, van Zaanen, y col. (1998) Br. J. Haematol. 102: 783-790).

Un "anticuerpo anti-receptor de IL-6" es un anticuerpo que se une específicamente al dominio extracelular de un polipéptido receptor de IL-6. Un ejemplo de un "anticuerpo anti-receptor de IL-6" es MRA (tocilizumab). Los ejemplos de polipéptidos de dominio extracelular de IL-6R incluyen, pero sin limitación, un polipéptido de IL-6R de ratón (por ejemplo, SEC ID Nº: 8), un polipéptido de IL-6R de rata (por ejemplo, SEC ID Nº: 10) y un polipéptido de IL-6R humano (por ejemplo, SEC ID Nº: 12).

El término "inmunoensayo" es un ensayo que usa un anticuerpo para unirse específicamente a un antígeno. El inmunoensayo se caracteriza por el uso de las propiedades de unión específicas de un anticuerpo particular para aislar, dirigir y/o cuantificar el antígeno.

Las expresiones "se une específicamente (o selectivamente)" a un anticuerpo o "específicamente (o selectivamente) inmunorreactivo con", cuando se refieren a un antígeno proteico o peptídico, se refieren a una reacción de unión que es determinante de la presencia de una proteína específica. Típicamente, un anticuerpo se une específicamente a un antígeno cuando tiente una Kd de al menos aproximadamente 1 µM o inferior, más habitualmente de al menos aproximadamente 0,1 µM o inferior y, preferentemente, de al menos aproximadamente 10 nM o inferior para ese antígeno.

Pueden usarse una diversidad de formatos de inmunoensayo (por ejemplo, transferencias de Western, ELISA, etc.) para seleccionar anticuerpos específicamente inmunorreactivos con una proteína particular. Por ejemplo, se usan de forma rutinaria inmunoensayos de ELISA en fase sólida para seleccionar anticuerpos específicamente inmunorreactivos con una proteína (véase, por ejemplo, Harlow y Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Nueva York: Cold Spring Harbor Press, (1990) para una descripción de formatos de inmunoensayo y condiciones que pueden usarse para determinar la inmunorreactividad específica).

Como se usa en el presente documento, la expresión "anticuerpo humano" se refiere a cualquier anticuerpo en el que las secuencias de dominio variable y constante son secuencias humanas. El término anticuerpos incluye secuencias procedentes de genes humanos pero que se han modificado, por ejemplo, para disminuir la posible inmunogenicidad, aumentar la afinidad, eliminar cisteínas que puedan causar un plegamiento indeseable, etc. El término incluye anticuerpos de este tipo producidos de forma recombinante en células no humanas, que podrían conferir una glicosilación atípica de células humanas. Estos anticuerpos pueden prepararse de una diversidad de formas, como se describe a continuación.

La expresión "anticuerpo quimérico", como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo que comprende regiones de dos o más anticuerpos diferentes. En una realización, una o más de las CDR proceden de un anticuerpo anti-IL-6 humana. En otra realización, todas las CDR proceden de un anticuerpo anti-IL-6 humana. En otra realización, las CDR de más de un anticuerpo anti-IL-6 humana se combinan en un anticuerpo quimérico. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede comprender una CDR1 de la cadena ligera de un primer anticuerpo anti-IL6 humana, una CDR2 de la cadena ligera de un segundo anticuerpo anti-IL-6 humana y una CDR3 de la cadena ligera de un tercer anticuerpo anti-IL-6 humana y las CDR de la cadena pesada pueden proceder de uno o más anticuerpos anti-IL-6 distintos. Además, las regiones flanqueantes pueden proceder de uno de los anticuerpos antiIL-6 de los que se obtienen una o más de las CDR, o de uno o más anticuerpos humanos diferentes. Por ejemplo, una o más CDR de un anticuerpo de especie no humana (por ejemplo, ratón o rata) puede insertarse de forma recombinante en una región flanqueante de anticuerpo humano dando como resultado un anticuerpo "humanizado".

Descripción detallada

La presente invención se refiere a procedimientos de tratamiento de un sujeto que padece artrosis por administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-IL-6. Se han descrito procedimientos para generar anticuerpos contra IL-6 (véase, por ejemplo, Wendling y col. (1993) J. Rheumatol. 20: 259-262; Patente de Estados Unidos Nº 5.618.700), incluyendo anticuerpos anti-IL-6 humana humanizados (véanse, por

ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 6.121.423 y 5.856.135) y anticuerpos contra IL-6R (véanse, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 5.795.965 y 5.817.790); MRA (tocilizumab; atilzumab; rhPM-1 (Drugs of the Future (2003) 28: 314-319) (Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) que se obtuvo del anticuerpo anti-IL-6R humano de ratón PM1 (véase, por ejemplo, Hirata y col. (1999) J. Immunol. 143: 2900-2906).

Para la preparación de anticuerpos monoclonales o policlonales contra IL-6 e IL-6R, pueden usarse procedimientos conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Kohler y Milstein, Nature 256: 495-497 (1975); Kozbor y col., Immunology Today 4: 72 (1983); Cole y col., págs. 77-96 en Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985)). Además, puede usarse la tecnología de presentación en fago para identificar anticuerpos de cadena sencilla y fragmentos Fab heteroméricos que se unan específicamente a antígenos seleccionados (véase, por ejemplo, McCafferty y col., Nature 348: 552-554 (1990); Marks y col., Biotechnology 10: 779-783 (1992)). Típicamente, se emplean polipéptidos de IL-6 e IL-6R para generar anticuerpos contra IL-6 e IL-6R, respectivamente. En el caso de los polipéptidos de IL-6, pueden purificarse a partir de fuentes nativas, células que secretan de forman natural polipéptidos de IL-6. Como alternativa, pueden usarse péptidos sintéticos obtenidos de secuencias de IL-6 e IL-6R desveladas en el presente documento y conjugarse con una proteína transportadora como inmunógeno. Además, pueden emplearse polipéptidos de IL-6 o IL-6R recombinantes para generar anticuerpos afines. Por ejemplo, polipéptidos recombinantes de IL-6 de ratón (Nº Catálogo 406-ML-025), IL-6 de rata (Nº Catálogo 506-RL-050) e IL-6 humana (Nº Catálogo 206-IL-010), así como dominio extracelular soluble recombinante de polipéptido de IL-6R humano (Nº Catálogo 227-SR-025) están disponibles en el mercado en R&D Systems Inc., Minneapolis, MN. Además, pueden generarse o aislarse ácidos nucleicos que codifican IL-6 (véase, por ejemplo, Hirano y col. (1986) Nature 324: 73-76; Brakenhoff y col. (1987) J. Immunol. 139: 4116-4121; SEC ID Nº: 1, 3 y 5) e IL-6R (véase, por ejemplo, Yamasaki y col. (1988) Science 241: 825-828; SEC ID Nº: 7, 9 y 11) usando técnicas rutinarias en el campo de la genética recombinante y de la química de ácidos nucleicos sintéticos. Los textos básicos que desvelan los procedimientos generales de uso en la presente invención incluyen Sambrook y col., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2ª ed., 1989; Kriegler, Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual, 1990; y Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel y col., eds., 1998.

Pueden generarse anticuerpos policlonales típicamente por inmunización de un animal con el antígeno de elección. La inmunización de los animales puede ser por cualquier procedimiento conocido en la técnica. Véase, por ejemplo, Harlow y Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Nueva York: Cold Spring Harbor Press, 1990. Se conocen bien en la técnica procedimientos para inmunizar animales no humanos tales como ratones, conejos, ratas, ovejas, cabras, cerdos, ganado bovino y caballos. Véase, por ejemplo, Harlow y Lane, anteriormente, y Patente de Estados Unidos Nº 5.994.619.

En ciertas realizaciones, se administra un antígeno IL-6 con un adyuvante para estimular la respuesta inmune. Los adyuvantes ejemplares incluyen adyuvante completo o incompleto de Freund, RIBI (dipéptidos muramilo) o ISCOM (complejos inmunoestimulantes). Preferentemente, si se está administrando un polipéptido, el programa de inmunización implicará dos o más administraciones del polipéptido, dispersadas a lo largo de varias semanas.

Después de la inmunización de un animal con un antígeno IL-6 o IL-6R, pueden obtenerse anticuerpos policlonales y/o células productoras de anticuerpos del animal. En algunas realizaciones, se obtiene suero que contiene anticuerpo anti-IL-6 o anti-IL-6R del animal por extracción de sangre o sacrificio del animal. El suero puede usarse según se obtiene del animal, puede obtenerse la fracción de inmunoglobulina a partir del suero, o los anticuerpos anti-IL-6 o anti-IL-6R pueden purificarse a partir del suero.

La respuesta inmune del animal a una preparación de inmunógeno puede controlarse realizando extracciones de sangre de ensayo y determinando el título de reactividad contra la proteína de elección. Cuando se obtienen títulos de anticuerpo apropiadamente altos contra el inmunógeno, puede recogerse sangre del animal y prepararse antisueros. El nivel de anticuerpos contra IL-6 o IL-6R en suero puede ensayarse usando un inmunoensayo de IL-6

o IL-6R. Los anticuerpos policlonales pueden purificarse a partir del suero de un animal inmunizado usando técnicas de purificación de anticuerpos y proteínas convencionales.

También pueden prepararse anticuerpos monoclonales contra IL-6 e IL-6R. En ciertas realizaciones, pueden usarse técnicas de hibridoma para generar anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, pueden prepararse líneas celulares inmortalizadas productoras de anticuerpos a partir de células aisladas del animal inmunizado. Después de la inmunización, el animal se sacrifica y se inmortalizan células B esplénicas y/o de ganglios linfáticos. Los procedimientos de inmortalización de células incluyen, pero sin limitación, transfectarlas con oncogenes, infectarlas con un virus oncogénico, cultivarlas en condiciones que seleccionen a favor de células inmortalizadas, someterlas a compuestos carcinógenos o mutantes, fusionarlas con una célula inmortalizada, por ejemplo, una célula de mieloma, e inactivar un gen supresor de tumores. Véase, por ejemplo, Harlow y Lane, anteriormente. Si se usa la fusión con células de mieloma, las células de mieloma preferentemente no secretan polipéptidos de inmunoglobulina (una línea celular no secretora).

Las células inmortalizadas pueden explorarse usando IL-6 o IL-6R, o porciones de las mismas, o una célula que exprese IL-6 o IL-6R. En ciertas realizaciones, la exploración inicial puede realizarse usando un inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA) o radioinmunoensayo.

En algunas realizaciones, se producen anticuerpos humanos por inmunización de un animal no humano que comprende en su genoma alguno o todos los loci de cadena pesada y cadena ligera de inmunoglobulina humana con un antígeno de IL-6 o IL-6R. En ciertas realizaciones, el animal no humano puede ser un animal XENOMOUSE™ (Abgenix Inc., Fremont, CA). Otro animal no humano que puede usarse es un HuMAb-Mouse®, un ratón transgénico producido por Medarex (Medarex, Inc., Princeton, NJ).

Los ratones XENOMOUSE™ son cepas de ratón modificadas por ingeniería genética que comprenden grandes fragmentos de loci de cadena ligera y cadena pesada de inmunoglobulina humana y que son deficientes en la producción de anticuerpos de ratón. Véase, por ejemplo, Green y col., Nature Genetics 7: 13-21 (1994) y Patentes de Estados Unidos Nº 5.916.771, 5.939.598, 5.985.615, 5.998.209, 6.075.181, 6.091.001, 6.114.598, 6.130.364,

6.162.963 y 6.150.584. Las células B esplénicas de un XENOMOUSE™ pueden fusionarse con un mieloma de ratón no secretor (por ejemplo, la línea celular de mieloma P3-X63-AG8-653) y pueden identificarse anticuerpos monoclonales a partir de la combinación de hibridomas resultantes. Los anticuerpos contra IL-6 o IL-6R secretados por un hibridoma pueden purificarse a partir de un cultivo de hibridoma y usarse en los procedimientos de la presente invención. Los ácidos nucleicos que codifican las cadenas pesada y ligera del anticuerpo contra IL-6 o IL6R pueden aislarse de un hibridoma y expresarse en una célula huésped, por ejemplo, células NSO, células CHO, etc., para proporcionar un material fuente a partir del cual puedan obtenerse anticuerpos contra IL-6 o IL-6 purificados.

En otra realización, un animal transgénico se inmuniza con IL-6 o IL-6R, se aíslan células primarias, por ejemplo, células de bazo o de sangre periférica, a partir de un animal transgénico inmunizado y se identifican las células individuales productoras de anticuerpos específicos para el antígeno deseado. Se aísla ARNm poliadenilado de cada célula individual y se realiza una reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) usando cebadores sentido que hibriden con secuencias de la región de variable, por ejemplo, cebadores degenerados que reconozcan la mayor parte o todas las regiones FR1 de los genes de las regiones variables de las cadenas pesada y ligera humanas y cebadores antisentido que hibriden con secuencias de la región constante o de unión. Los ADNc de las regiones variables de las cadenas pesada y ligera se clonan después y se expresan en cualquier célula huésped adecuada, por ejemplo, una célula de mieloma, como anticuerpos quiméricos con regiones constantes de inmunoglobulina respectivas, tales como los dominios constantes κ o λ y de cadena pesada. Véase Babcook, J. S. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 7843-48, 1996. Después pueden identificarse y aislarse como se describe en el presente documento anticuerpos anti-IL-6 o IL-6R.

En otro aspecto la divulgación proporciona un procedimiento para generar anticuerpos anti-IL-6 o anti-IL-6R humanizados. En algunas realizaciones, se inmunizan ratas o ratones con un antígeno IL-6 o IL-6R como se describe a continuación en condiciones que permitan la producción de anticuerpos. Se aíslan células productoras de anticuerpos de los animales, se fusionan con mielomas para producir hibridomas y se aíslan los ácidos nucleicos que codifican las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo anti-IL-6 o anti-IL-6R de interés. Posteriormente, estos ácidos nucleicos se modifican por ingeniería genética usando técnicas conocidas por los expertos en la materia y, como se describe adicionalmente a continuación, para reducir la cantidad de secuencia no humana, es decir, humanizar el anticuerpo para reducir la respuesta inmune en seres humanos

En otra realización, pueden usarse técnicas de presentación en fago para proporcionar bibliotecas que contengan un repertorio de anticuerpos con afinidades variables por IL-6 o IL-6R. A modo de ejemplo, un procedimiento para preparar la biblioteca de anticuerpos para su uso en técnicas de presentación en fago comprende las etapas de inmunizar a un animal no humano que comprende loci de inmunoglobulina humanos con un polipéptido IL-6 o IL-6R para generar una respuesta inmune, extraer células productoras de anticuerpos del animal inmunizado; aislar el ARN de las células extraídas, realizar la transcripción inversa del ARN para producir ADNc, amplificar el ADNc usando un cebador e insertar el ADNc en un vector de presentación en fago de modo que los anticuerpos se expresen en el fago. El fago resultante se ensaya para determinar su inmunorreactividad contra un polipéptido IL-6

o IL-6R. Pueden obtenerse anticuerpos recombinantes anti-IL-6 o anti-IL-6R de la invención de este modo.

Se describen técnicas para la identificación de anticuerpos humanos de alta afinidad a partir de dichas bibliotecas, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos Nº 5.223.409; Publicaciones PCT Nº WO 92/18619, WO 91/17271, WO 92/20791, WO 92/15679, WO 93/01288, WO 92/01047, WO 92/09690; Fuchs y col., Bio/Technology 9: 13701372 (1991); Hay y col., Hum. Antibod. Hybridomas 3: 81-85 (1992); Huse y col., Science 246: 1275-1281 (1989); McCafferty y col., Nature 348: 552-554 (1990); Griffiths y col., EMBO J. 12: 725-734 (1993); Hawkins y col., J. Mol. Biol. 226: 889-896 (1992); Clackson y col., Nature 352: 624-628 (1991); Gram y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 3576-3580 (1992); Garrad y col., Bio/Technotogy 9: 1373-1377 (1991); Hoogenboom y col., Nuc. Acid Res. 19: 4133-4137 (1991); y Barbas y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 7978-7982 (1991).

Existen kits disponibles en el mercado para generar bibliotecas de presentación en fago (por ejemplo, Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, Nº Catálogo 27-9400-01; y el kit de presentación en fago Stratagene SurfZAP™, Nº Catálogo 240612), así como sistemas disponibles en el mercado para producir anticuerpos expresados en fago completamente humanos, tales como Cambridge Antibody Technology PLC (Cambridge, Reino Unido) y MorphoSys AG (por ejemplo, HuCAL® GOLD technology, Martinsried, Alemania).

Después de la exploración y aislamiento de un anticuerpo anti-IL-6 o anti-IL-6R a partir de una biblioteca de presentación de inmunoglobulinas recombinantes, pueden recuperarse ácidos nucleicos que codifiquen los anticuerpos seleccionados a partir del paquete de presentación (por ejemplo, del genoma de fago) y subclonarse en otros vectores de expresión por técnicas de ADN recombinante convencionales. Por ejemplo, el ADN que codifica un anticuerpo expresado en fago puede clonarse en un vector de expresión recombinante e introducirse en una célula huésped de mamífero o una célula procariota, según sea apropiado para ese anticuerpo.

Composiciones Farmacéuticas

La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-IL-6 para el tratamiento de sujetos que necesiten tratamiento para la artrosis. El tratamiento puede implicar la administración de uno o más anticuerpos monoclonales anti-IL-6 de la invención en solitario o con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se usa en el presente documento, la expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquiera de y a todos los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes retardantes de la absorción e isotónicos y similares, que sean fisiológicamente compatibles. Algunos ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables son agua, solución salina, solución tamponada con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de los mismos. En muchos casos, pueden estar presentes en la composición agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro sódico. Los ejemplos adicionales de sustancias farmacéuticamente aceptables son agentes humectantes o cantidades minoritarias de sustancias adyuvantes tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes o tampones que potencia la vía útil o eficacia del anticuerpo.

Las composiciones de la presente invención pueden estar en una diversidad de formas, por ejemplo, formas de dosificación líquidas, semisólidas y sólidas, tales como soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infundibles), dispersiones o suspensiones, comprimidos píldoras, polvos, liposomas y supositorios. La forma particular depende de la aplicación terapéutica y del modo de administración deseado. Las composiciones típicas están en forma de soluciones inyectables o infundibles, tales como composiciones similares a las usadas para la inmunización pasiva de seres humanos.

Típicamente, las composiciones terapéuticas son estériles y estables en las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición puede formularse con una solución, microemulsión, dispersión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada para una alta concentración de fármaco. Pueden prepararse soluciones inyectables estériles por incorporación del anticuerpo anti-IL-6 en la cantidad necesaria en un disolvente apropiado con uno o una combinación de los ingredientes enumerados anteriormente, según sea necesario, seguida de esterilización por filtración. Generalmente, se preparan dispersiones por incorporación del compuesto activo en un vehículo estéril que contenga un medio de dispersión básico y los otros ingredientes necesarios de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos de preparación incluyen secado al vacío y secado por congelación, que producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución previamente esterilizada por filtración de los mismos. La fluidez apropiada de una solución puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento, tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula necesario en el caso de una dispersión y mediante el uso de tensioactivos. Puede provocarse la absorción prolongada de composiciones inyectables incluyendo en la composición un agente que retrase la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.

En ciertas realizaciones, la composición de anticuerpo puede prepararse con un vehículo que protegerá el anticuerpo frente a una liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada incluyendo implantes, parches transdérmicos y sistemas de administración microencapsulados. Pueden usarse polímeros biodegradables, biocompatibles, tales como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Muchos procedimientos para la preparación de dichas formulaciones están patentados o los conocen en general los expertos en la materia. Véase, por ejemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems (J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1978).

Procedimientos Terapéuticos de Uso

En otra realización, la invención proporciona un anticuerpo anti-IL-6 en la preparación de un medicamento para el uso en el tratamiento de un sujeto que padece artrosis por administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-IL-6 a un sujeto que lo necesite. Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una

cantidad, a dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, suficiente para inhibir, detener o permitir una mejora del trastorno o afección que se está tratando cuando se administra en solitario o junto con otro agente farmacéutico o tratamiento en un sujeto particular o una población de sujetos. El término "sujeto" se refiere a un miembro de la clase Mammalia. Los ejemplos de mamíferos incluyen, sin limitación, seres humanos, primates, chimpancés, roedores, ratones, ratas, conejos, caballos, perros, gatos, ovejas y vacas. Por ejemplo, en un ser humano u otro mamífero, una cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse experimentalmente en un laboratorio o entorno clínico o puede ser la cantidad requerida por las directrices de la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos, o una agencia extranjera equivalente, para la enfermedad particular y el sujeto que se esté tratando.

Deberá apreciarse que la determinación de formas de dosificación, cantidades de dosificación y vías de administración apropiadas está dentro del nivel de especialidad en las técnicas farmacéutica y médica. Una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo puede variar de acuerdo con factores tales como la patología, edad, sexo y peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo para generar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente eficaz es también una en la que los efectos terapéuticamente beneficiosos tienen mayor peso que cualquier efecto tóxico o perjudicial de un agente.

El anticuerpo puede administrarse una o múltiples veces. Por ejemplo, el anticuerpo puede administrarse de tres veces al día a una vez cada seis meses o cada más tiempo. La administración puede ser en un programa tal como tres veces al día, dos veces al día, una vez al día, una vez cada dos días, una vez cada tres días, una vez por semana, una vez cada dos semanas, una vez al menos, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses y una vez cada seis meses.

La coadministración de un anticuerpo con un agente terapéutico adicional (terapia de combinación) incluye la administración de una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-IL-6 y el agente terapéutico adicional y administrar dos o más composiciones farmacéuticas separadas, comprendiendo una el anticuerpo antiIL-6 y comprendiendo la otra u otras el agente o agentes terapéuticos adicionales. Además, la coadministración o terapia de combinación se refiere a anticuerpos y agentes terapéuticos adicionales que se están administrando al mismo tiempo unos con otros, así como a casos en los que un anticuerpo y los agentes terapéuticos adicionales se administran en momentos diferentes. Por ejemplo, un anticuerpo puede administrarse una vez cada tres días, mientras que el agente terapéutico adicional se administra una vez al día. Como alternativa, un anticuerpo puede administrarse antes de o después del tratamiento del trastorno con el agente terapéutico adicional. Un anticuerpo y uno o más agentes terapéuticos adicionales (la terapia de combinación) pueden administrarse una vez, dos veces o al menos el periodo de tiempo hasta que la afección se trate, palie o cure.

Por ejemplo, el anticuerpo anti-IL-6 puede coadministrarse con agentes tales como anticuerpos contra TNF-α tales como REMICADE™, CDP-870 y HUMIRA™, moléculas de fusión de inmunoglobulina con receptor de TNFα (tales como ENBREL™), inhibidores de COX-2 (tales como celecoxib, rofecoxib, parecoxib, valdecoxib y etoricoxib), inhibidores de metaloproteasa-13 (preferentemente inhibidores selectivos de MMP-13), agentes antiinflamatorios no esteroideos ("AINE") tales como piroxicam, diclofenaco, ácidos propiónicos tales como naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, ketoprofeno e ibuprofeno, fenamatos tales como ácido mefenámico, indometacina, sulindaco, apazona, pirazolonas tales como fenilbutazona, salicilatos tales como aspirina, sal cálcica del ácido 6-(5-carboxi -5metil-hexiloxi)-2,2-dimetil-hexanoico (gemcabeno cálcico), ligandos α2δ (tales como NEUROTIN™ y PREGABALIN™) y terapias intraarticulares tales como corticosteroides y ácidos hialurónicos, tales como hyalgan y synvisc.

Los anticuerpos de la presente invención pueden administrarse mediante una diversidad de procedimientos conocidos en la técnica, incluyendo por una vía oral, mucosa, bucal, intranasal, inhalable, intravenosa, subcutánea, intramuscular, parenteral o tópica. En ciertas realizaciones, el modo de administración es parenteral (por ejemplo, intravenoso, subcutáneo, intraperitoneal, intramuscular). En ciertas realizaciones, el anticuerpo se administra por infusión o inyección intravenosa. En una realización particular, el anticuerpo se administra por inyección intraarticular, intramuscular o subcutánea. Como se apreciará por el experto en la materia, la vía y/o modo de administración variarán dependiendo de los resultados deseados.

Los regímenes de dosificación pueden ajustarse para proporcionar la respuesta óptima deseada (por ejemplo, una respuesta terapéutica). Por ejemplo, puede administrarse una sola dosis en embolada, puede administrarse varias dosis divididas a lo largo de tiempo o la dosis puede reducirse o aumentarse proporcionalmente según lo marquen las exigencias de la situación terapéutica. Pueden formularse composiciones parenterales en forma de unidad de dosificación para facilitar la administración y la uniformidad de la dosificación. La forma unitaria de dosificación, según se usa en el presente documento, se refiere a unidades físicamente separadas adaptadas como dosificaciones unitarias para los sujetos mamíferos a tratar; conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico necesario.

Un intervalo no limitante ejemplar para una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo de la invención es de 1 a 40 mg/kg. En ciertas realizaciones, la dosis es de 8-20 mg. En otras realizaciones, la dosis es de 10-12 mg. En ciertas realizaciones, el intervalo de dosis para inyección intraarticular sería de 15-30 mg/dosis. Debe señalarse que los valores de dosificación pueden variar con el tipo y la gravedad de la afección que se va aliviar. Debe entenderse además que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosificación específicos deberían ajustarse a lo largo del tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administre o supervise la administración de las composiciones, y esos intervalos de dosificación expuestos en el presente documento son solamente ejemplares y no pretenden limitar el alcance de la práctica de la composición reivindicada.

Ejemplos 1-3

Materiales y procedimientos

Pueden ensayarse anticuerpos anti-IL-6 y anti-receptor de IL-6 para determinar su capacidad para disminuir marcadores cuantitativos o cualitativos en modelos de artrosis in vivo. Por ejemplo, un modelo de artrosis inducida por yodoacetato monosódico (véase, por ejemplo, Bove y col. (2003) Osteoarthritis and Cartilage 11: 821-830) puede realizarse en ratas para evaluar el efecto de anticuerpos contra IL-6 en un ensayo de carga de peso.

En los Ejemplos 1-3 el Día 0 se anestesian ratas con isofluorano y se inyectan en la articulación de la rodilla de la pata trasera derecha de una rata Wistar macho 1,0 mg de monoyodoacetato ("MIA") en 50 µl de solución salina tamponada con fosfato (PBS) a través del ligamento infrapatelar, y se inyectan en la articulación de la rodilla de la pata trasera izquierda 50 µl de solución salina a través del ligamento infrapatelar. La inyección de MIA en la articulación da como resultado la inhibición de la glucolisis y, en última instancia, la muerte de los condrocitos circundantes. El día antes de la administración de anticuerpo, Día 6 o Día 13 después de la inyección de MIA, se determina el diferencial de peso de las patas traseras entre la articulación trasera derecha artrósica y la articulación trasera izquierda en la que se inyectó solución salina de ratas Wistar macho (150 g) con un aparato de ensayo de incapacidad, modelo 2KG (Linton Instrumentation, Norfolk, Reino Unido). El aparato de ensayo de incapacidad tiene una cámara en la parte superior con una pared frontal inclinada hacia fuera que sirve de soporte a los miembros delanteros de las ratas, y dos almohadillas detectoras de peso, una para cada pata trasera.

Después, se administra además a las ratas por inyección intraarticular o intraperitoneal 50 µl de PBS que contiene 1, 3, 10, 20 ó 30 µg de un anticuerpo policlonal de cabra anti-IL-6 de ratón (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN), o un anticuerpo policlonal anti-IgG de rata (Producto Nº R 5005, Sigma, St. Louis, MO), el día 7 o el día 14 después de la inyección de MIA, y el diferencial de peso de las patas traseras se mide a las 0-24 horas después de la inyección de anticuerpo.

El porcentaje de inhibición de un cambio en la función de la articulación de la pata trasera se calcula como el porcentaje de cambio en la distribución de peso de las patas traseras para animales tratados frente a animales de control en el mismo punto temporal (por ejemplo, anticuerpo policlonal anti-IL-6 frente a anticuerpo policlonal anti-IgG a las 2 horas después de la inyección). Por ejemplo,

Porcentaje de inhibición de un cambio en la distribución de peso de las patas traseras

en la que:

ΔWC es el diferencial de peso de las patas traseras entre el miembro izquierdo sano y el miembro artrósico del animal de control al que se le administró al anticuerpo anti-IgG de rata solamente, según se midió en un punto temporal particular (por ejemplo, a las 1, 4 ó 24 horas) después de la inyección el Día 7 o el Día 14; y ΔWG es el diferencial de peso de las patas traseras entre el miembro izquierdo sano y el miembro artrósico del animal al que se le administró el anticuerpo anti-IL-6 de rata, según se midió en el mismo punto temporal usado para determinar el ΔWC.

Ejemplo 1

El modelo de MIA se realizó como se ha descrito anteriormente en los Materiales y Procedimientos, de la forma siguiente: se indujeron ratas con MIA como se ha descrito anteriormente, y se les administró 1, 3, 10, 20 ó 30 µg del

anticuerpo policlonal contra IL-6 o el anticuerpo policlonal contra IgG en la rodilla artrósica derecha en un volumen de 50 µl de PBS y un volumen de 50 µl de PBS en la rodilla de control izquierda el día 7 después de la inyección de MIA. Se inyectó a seis ratas a cada dosis. Después de una hora tras la inyección de anticuerpo, se midió el diferencial de peso. El porcentaje de inhibición de un cambio en la distribución de peso de las patas traseras de las ratas tratadas con anticuerpo contra IL-6 en comparación con las ratas tratadas con anticuerpo policlonal contra IgG se describe en la Tabla 1. Las dosis de 20 y 30 microgramos de anticuerpo contra IL-6 inhibían significativamente (p < 0,05) el cambio en la distribución de peso de las patas traseras frente al policlonal contra IgG de rata. Los datos se presentan como el porcentaje medio de inhibición ± error típico de la media (ETM).

Tabla 1

Dosis (µg/rodilla)

% Inhibición

1

28 ± 5

3

27 ± 12

10

18 ± 8

20

60 ± 7*

30

63 ± 4*

*p < 0,05 frente a policlonal contra IgG de rata (ANCOVA de un factor seguido de procedimiento de Hochberg)

Ejemplo 2

El modelo de MIA se realizó como se ha descrito anteriormente en los Materiales y Procedimientos de la forma siguiente: se indujeron ratas con MIA como se ha descrito anteriormente y se les administró 30 µg del anticuerpo contra IL-6 en la rodilla artrósica derecha en un volumen de 50 µl de PBS y un volumen de 50 µl de PBS en la

15 rodilla de control izquierda el día 14 después de la inyección de MIA. Se inyectó a ocho ratas a cada dosis. Después de una hora, 4 horas y 24 horas después de la inyección de anticuerpo, se midió el diferencial de peso y se describió como la media ± el error típico de la media en la Tabla 2. La dosis de 30 microgramos de anticuerpo contra IL-6 disminuía significativamente (p < 0,05) el cambio en la distribución de peso de las patas traseras a 1, 4 y 24 horas frente al tiempo cero (pre-inyección de anticuerpo).

20 Tabla 2

Tiempo después de la inyección de anticuerpo (horas)

Diferencial de peso (gramos) (ΔWG medio ± ETM)

0

33 ± 3

1

17 ± 2*

4

19 ± 2*

24

17 ± 1*

*p < 0,05 frente a tiempo cero (prueba T para procedimiento de Hochberg)

datos emparejados seguida de

Ejemplo 3

El modelo de MIA se realizó como se ha descrito anteriormente en los Materiales y Procedimientos de la forma siguiente: se indujeron ratas con MIA como se ha descrito anteriormente y se les administró 30 µg del anticuerpo 25 contra IL-6 por medio de una inyección intraperitoneal en un volumen de 50 µl de PBS el día 14 después de la inyección de MIA. Se inyectó a ocho ratas a cada dosis. El diferencial del peso (ΔWG) se midió y se describió como el ΔWG medio ± el error típico de la media en la Tabla 3, para los puntos temporales de justo antes de la inyección de anticuerpo, a una hora y 4 horas después de la inyección de anticuerpo. La dosis de 30 microgramos de anticuerpo contra IL-6 no inhibía significativamente el cambio en la distribución de peso de las patas traseras frente

30 al tiempo cero (pre-inyección de anticuerpo).

Tabla 3

Tiempo después de la inyección de anticuerpo (horas)

Diferencial de peso (gramos) (ΔWG medio ± ETM)

0

32 ± 2

1

28 ± 1

4

32 ± 2

LISTA DE SECUENCIAS

5 <110> Warner-Lambert Company LLC Bove, Susan R Kilgore, Kenneth

<120> Procedimientos de Tratamiento de la Artrosis con Antagonistas de IL-6 10

<130> PC32145A

<150> 60/543.814

<151> 15

<160> 12

<170> PatentIn versión 3.3 20 <210> 1

<211> 636

<212> ADN

<213> Mus musculus 25 <400> 1

<210> 2

<211> 211

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 2

<210> 3 5 <211> 636

<212> ADN

<213> Rattus norvegicus

<400> 3 10

<210> 4

<211> 211

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 4

<210> 5

<211> 639

<212> ADN

<213> Ser humano

<400> 5

<210> 6

<211> 212

<212> PRT

<213> Ser humano

<400> 6

<210> 7

<211> 1323

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 7

<210> 8

<211> 364

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 8

<210> 9

<211> 1389

<212> ADN

<213> Rattus norvegicus

<400> 9

<210> 10

<211> 364

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 10

<210> 11

<211> 1407

<212> ADN

<213> Ser humano

<400> 11

<210> 12

<211> 365

<212> PRT

<213> Ser humano

<400> 12

LISTA DE SECUENCIAS

<110> Warner-Lambert Company LLC Bove, Susan R Kilgore, Kenneth

<120> Procedimientos de Tratamiento de la Artrosis con Antagonistas de IL-6

<130> PC32145A

<150> 60/543.814 5 <151>

<150> PCT/IB2005/000240

<151> 10 <160> 12

<170> PatentIn versión 3.3

<210> 1 15 <211> 636

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 1 20

<210> 2

<211> 211

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 2

<210> 3

<211> 636

<212> ADN

<213> Rattus norvegicus

<400> 3

<210> 4

<211> 211

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 4

<210> 5

<211> 639

<212> ADN

<213> Ser humano

<400> 5

<210> 6

<211> 212

<212> PRT

<213> Ser humano

<400> 6

<210> 7

<211> 1323

<212> ADN

<213> Mus musculus

<400> 7

<210> 8

<211> 364

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 8

<210> 9

<211> 1389

<212> ADN

<213> Rattus norvegicus

<400> 9

<210> 10

<211> 364

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 10

<210> 11

<211> 1407

<212> ADN

<213> Ser humano

<400> 11

<210> 12

<211> 365

<212> PRT

<213> Ser humano

<400> 12

Claims (7)

1. REIVINDICACIONES

   1.

   Uso de un anticuerpo anti-IL-6 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la artrosis en mamíferos.

2. 2.

   Uso, de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho medicamento es una composición farmacéutica que

   5 comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo antiIL-6.

3. 3.

   Uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho medicamento está adaptado para ser administrado por vía intraarticular o intravenosa.

4. 4.

   Uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho agente es un anticuerpo monoclonal contra IL-6.

   10 5. Uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que dicho anticuerpo contra IL-6 es un anticuerpo anti-IL-6 humana.

5. 6.

   Uso de acuerdo con la reivindicación 4 o 5, en el que dicha composición medicamentosa está adaptada para ser administrado por vía intraarticular.

6. 7.

   Uso de acuerdo con la reivindicación 4 ó 5, en el que dicho medicamento está adaptado para ser administrado por vía intravenosa.

   15 8. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho medicamento está adaptado para ser administrado con uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en: sal cálcica del ácido 6-(5carboxi-5-metil-hexiloxi)-2,2-dimetil-hexanoico, agentes antiinflamatorios no esteroideos, piroxicam, diclofenaco, naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, ketoprofeno, ibuprofeno, ácido mefenámico, indometacina, sulindaco, apazona, fenilbutazona, aspirina™, corticosteroides, hyalgan y synvisc™.

   20 9. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho medicamento está adaptado para ser administrado con uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en: parecoxib, celecoxib, valdecoxib y etoricoxib.

7. 10. Un anticuerpo anti-IL-6 para su uso en el tratamiento de la artrosis en mamíferos.