ES2345066T3

ES2345066T3 - Compuestos de triazolopirazina utiles para el tratamiento de enfermedades degenerativas e inflamatorias.

Info

Publication number: ES2345066T3
Application number: ES07729660T
Authority: ES
Inventors: Martin James Inglis Andrews; Paul Edwards; Mark Stuart Chambers; Wolfgang Schmidt; Juha Andrew Clase; Gregory Bar; Kim Louise Hirst; Angus Macleod
Original assignee: Galapagos NV
Current assignee: Galapagos NV
Priority date: 2006-05-31
Filing date: 2007-05-30
Publication date: 2010-09-14
Anticipated expiration: 2027-05-30

Abstract

Un compuesto según la fórmula III: **(Ver fórmula)** en la que R1 es H, o alquilo sustituido o no sustituido; y cada uno de R8 y R9 se selecciona independientemente de cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los mismos.

Description

Compuestos de triazolopirazina útiles para el tratamiento de enfermedades degenerativas e inflamatorias.

La presente invención se refiere a una clase de compuestos de triazolopirazina capaces de unirse al sitio activo de una serina/treonina cinasa, cuya expresión está implicada en la ruta que da como resultado la degradación de la matriz extracelular (ECM), la degeneración articular y enfermedades que implican tal degradación y/o inflamación.

Las enfermedades que implican la degradación de la matriz extracelular incluyen, pero no se limitan a, artritis psoriásica, artritis juvenil, artritis precoz, artritis reactiva, osteoartritis, espondilitis anquilosante, osteoporosis, enfermedades musculoesqueléticas como tendinitis, y enfermedad periodontal, metástasis de cáncer, enfermedades de las vías respiratorias (COPD, asma), fibrosis renal y hepática, enfermedades cardiovasculares como aterosclerosis e insuficiencia cardíaca, y enfermedades neurológicas como neuroinflamación y esclerosis múltiple. Las enfermedades que implican principalmente la degeneración articular incluyen, pero no se limitan a, artritis psoriásica, artritis juvenil, artritis precoz, artritis reactiva, osteoartritis, y espondilitis anquilosante.

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad degenerativa crónica de las articulaciones, caracterizada por inflamación y destrucción de las estructuras articulares. Cuando la enfermedad no se vigila, conduce a una sustancial discapacidad y dolor debido a la pérdida de funcionalidad articular, e incluso a muerte prematura. Por lo tanto, el objetivo de una terapia contra la AR no es ralentizar la enfermedad sino lograr la remisión a fin de detener la destrucción articular. Además de la gravedad del resultado de la enfermedad, la elevada prevalencia de AR (\sim 0,8% de adultos están afectados a nivel mundial) representa un elevado impacto socioeconómico. (Para repasos sobre AR, refiérase a Smolen y Steiner (2003); Lee y Weinblatt (2001); Choy y Panayi (2001); O'Dell (2004) y Firestein (2003)).

Aunque se acepta ampliamente que la AR es una enfermedad autoinmunitaria, no hay consenso en cuanto a los mecanismos precisos que conducen a la "etapa de iniciación" de la enfermedad. Lo que se sabe es que el desencadenante o desencadenantes iniciales median, en un hospedante predispuesto, una cascada de sucesos que conducen a la activación de diversos tipos celulares (células B, células T, macrófagos, fibroblastos, células endoteliales, células dendríticas y otras). Concomitantemente, se observa en las articulaciones y tejidos que rodean a la articulación una producción incrementada de diversas citocinas (por ejemplo, TNF-\alpha, IL-6, IL-1, IL-15, IL-18 y otras). Cuando la enfermedad avanza, la activación celular y la cascada de producción de citocinas se autoperpetúan. En esta etapa temprana, ya es muy clara la destrucción de las estructuras articulares. El treinta por ciento de los pacientes tienen signos radiográficos de erosión ósea en el momento del diagnóstico, y esta proporción aumenta hasta 60 por ciento después de dos años.

El análisis histológico de las articulaciones de los pacientes con AR evidencia claramente los mecanismos implicados en los procesos degradativos asociados con AR. Este análisis muestra que el efector principal responsable de la degradación articular asociada con AR es el paño sinovial, en el que el fibroblasto sinovial, produciendo diversas enzimas proteolíticas, es el conductor principal de la erosión ósea y del cartílago. Una articulación contiene clásicamente dos huesos adyacentes que se articulan sobre una capa de cartílago rodeada por la membrana sinovial y la cápsula articular. En el paciente con AR avanzada, el sinovio de la articulación aumenta de tamaño para formar el paño sinovial, debido a la proliferación de los fibroblastos sinoviales y la infiltración de células mononucleares tales como células T, células B, monocitos, macrófagos y neutrófilos. El paño sinovial media la degradación del cartílago adyacente, conduciendo al estrechamiento del espacio articular, y tiene el potencial de invadir el hueso y cartílago adyacentes. Puesto que los tejidos óseo y de cartílago están compuestos principalmente de colágeno tipo I o II, respectivamente, las propiedades destructivas e invasivas del paño sinovial están mediadas por la secreción de proteasas colagenolíticas, principalmente las metaloproteinasas de la matriz (MMP). La erosión del hueso bajo y adyacente al cartílago también es parte del proceso de la AR, y resulta principalmente de la presencia de osteoclastos en la interfaz de hueso y paño sinovial. Los osteoclastos son células multinucleadas que, al adherirse al tejido óseo, forman un compartimiento cerrado, dentro del cual los osteoclastos segregan proteasas (catepsina K, MMP9) que degradan el tejido óseo. La población osteoclástica en la articulación está anormalmente incrementada por la formación de osteoblastos a partir de células precursoras indu-
cidas por la secreción del ligando de unión al Receptor Activador de NF\kappaB (RANKL) por SF y células T activados.

Diversos tipos de colágeno tienen un papel clave definiendo la estabilidad de la matriz extracelular (ECM). El tipo I de colágeno y el tipo II de colágeno, por ejemplo, son los componentes principales del hueso y cartílago, respectivamente. Las proteínas de colágeno típicamente se organizan en estructuras multiméricas denominadas como fibrilos de colágeno. Los fibrilos de colágeno nativo son muy resistentes a la escisión proteolítica. Se ha dado a conocer que sólo unos pocos tipos de proteínas que degradan la ECM tienen la capacidad para degradar el colágeno nativo: las MMP y las catepsinas. Entre las catepsinas, la mejor caracterizada es la catepsina K, que es activa principalmente en osteoclastos. Entre las MMP, se sabe que MMP1, MMP2, MMP8, MMP13 y MMP14 tienen propiedades colagenolíticas. La correlación entre una expresión incrementada de MMP1 por fibroblastos sinoviales (SF) y la progresión de la enfermedad artrítica está bien probada, y es predictiva de procesos erosivos de las articulaciones (Cunnane et al., 2001). Por lo tanto, en el contexto de AR, MMP1 representa una proteína degradante de colágeno muy apropiada. In vitro, el tratamiento de SF cultivados con citocinas apropiadas en la patología de AR (por ejemplo, TNF-\alpha e IL1\beta) incrementará la expresión de MMP1 por estas células (Andreakos et al., 2003). Por lo tanto, la monitorización de los niveles de MMP1 expresada por los SF es una lectura apropiada en el campo de AR, puesto que es indicativa de la activación de los SF con respecto a un fenotipo erosivo que, in vivo, es responsable de la degradación del cartílago. La inhibición de la expresión de MMP1 por los SF representa un enfoque terapéutico valioso para el tratamiento de AR.

La actividad de las proteínas degradantes de ECM también puede ser causal o se puede correlacionar con la progresión de diversas enfermedades distintas de AR, por ejemplo otras enfermedades que implican la degradación de las articulaciones. Estas enfermedades incluyen, pero no se limitan a, artritis psoriásica, artritis juvenil, artritis precoz, artritis reactiva, osteoartritis y espondilitis anquilosante. Otras enfermedades que se pueden tratar con los compuestos identificados según la presente invención y que usan las dianas implicadas en la expresión de las MMP como se describe aquí son osteoporosis, enfermedades musculoesqueléticas como tendinitis y enfermedad periodontal (Gapski et al., 2004), metástasis de cáncer (Coussens et al., 2002), enfermedades de las vías respiratorias (COPD, asma) (Suzuki et al., 2004), fibrosis pulmonar y renal (Schanstra et al., 2002), fibrosis hepática asociada con hepatitis C crónica (Reiff et al., 2005), enfermedades cardiovasculares como aterosclerosis e insuficiencia cardíaca (Creemers et al., 2001), y enfermedades neurológicas como neuroinflamación y esclerosis múltiple (Rosenberg, 2002). Los pacientes que sufren tales enfermedades se pueden beneficiar de la estabilización de la ECM (protegiéndola de la degradación).

La serina/treonina cinasa de 471 aminoácidos identificada como proteína cinasa 5 activada por proteína cinasas activadas por mitógenos (MAPKAPK5 o PRAK) es expresada en un amplio panel de tejidos. La proteína contiene su dominio catalítico en el extremo N-terminal, y tanto una señal de localización nuclear (NLS) como una señal de exportación nuclear (NES) en su extremo C-terminal. La MAPKAPK5 endógena está presente predominantemente en el citoplasma, pero el estrés o la activación de las células por citocinas media su translocación al núcleo (New et al., 2003). Este suceso depende de la fosforilación de MAPKAPK5. Tr182 es el sitio de fosforilación regulador de MAPKAPK5. Aunque la p38\alpha cinasa es capaz de fosforilar MAPKAPK5 en un escenario de sobreexpresión, los experimentos con MAPKAPK5 endógena no apoyan esta hipótesis (Shi et al., 2003). Se han generado ratones a los que se les ha suprimido el gen de MAPKAPK5 que son viables y fértiles. El fenotipo de estos ratones es bastante diferente del de los ratones deficientes para MAPKAPK2, una cinasa relacionada con MAPKAPK5 que está regulada por p38\alpha (Shi et al., 2003). Esto indica que la función de cada proteína es distinta, y que ninguna de estas cinasas puede compensar la actividad de la otra. Tomadas juntas, MAPKAPK5 y MAPKAPK2 representan dianas distintas con un papel no redundante. MAPK6 (también denominada como ERK3) se ha identificado recientemente como un sustrato fisiológicamente apropiado para MAPKAPK5, definiendo una nueva ruta de transducción de señales (Seternes et al., 2004).

Antecedentes de la invención

Los NSAID (fármacos antiinflamatorios no esteroideos) se usan para reducir el dolor asociado con AR, y mejorar la calidad de vida de los pacientes. Sin embargo, estos fármacos no frenarán la destrucción articular asociada con AR.

Se encontró que los corticosteroides disminuyen la progresión de AR según se detectó radiográficamente, y se usan a dosis bajas para tratar a parte de los pacientes con AR (30 a 60%). Sin embargo, efectos secundarios graves están asociados con el uso prolongado de corticosteroides (adelgazamiento de la piel, osteoporosis, cataratas, hipertensión, hiperlipidemia).

Los DMARD (fármacos antirreumáticos que modifican la enfermedad) sintéticos (por ejemplo, metotrexato, leflunomida, sulfasalacina) abordan principalmente el componente inmunoinflamatorio de AR. Como desventaja principal, estos fármacos sólo tienen una eficacia limitada (la destrucción articular sólo se ralentiza pero no es bloqueada por los DMARD, de forma que la progresión de la enfermedad a largo plazo continúa). La falta de eficacia está indicada por el hecho de que, de media, sólo el 30% de los pacientes logran una puntuación de ACR40 después de un tratamiento de 24 meses con metotrexato. Esto significa que, según el American College of Rheumatology, sólo el 30% de los pacientes logra una mejora del 50% de sus síntomas (O'Dell et al., 1996). Además, a menudo no está claro el mecanismo preciso de acción de los DMARD.

Los DMARD biológicos (Infliximab, Etanercept, Adalimumab, Rituximab, CTLA4-Ig) son proteínas terapéuticas que inactivan citocinas (por ejemplo TNF-\alpha) o células (por ejemplo células T o células B) que tienen un papel importante en la patofisiología de la AR (Kremer et al., 2003; Edwards et al., 2004). Aunque la terapia de combinación de bloqueadores de TNF-\alpha (Infliximab, Etanercept, Adalimumab) y metotrexato es el tratamiento más eficaz contra la AR actualmente disponible, es llamativo que incluso esta terapia sólo logra una mejora del 50% (ACR40) en los síntomas de la enfermedad en el 50-60% de los pacientes después de una terapia de 12 meses (St Clair et al., 2004). Existen algunas advertencias de sucesos adversos para fármacos anti-TNF-\alpha, arrojando luz sobre los efectos secundarios asociados con este tipo de fármacos. Se ha descrito un aumento del riesgo de infecciones (tuberculosis), sucesos hematológicos y trastornos desmielinizantes para los bloqueadores de TNF-\alpha (véase también Gomez-Reino et al., 2003). Además de los graves efectos secundarios, los bloqueadores de TNF-\alpha también comparten las desventajas generales de la clase biológica de compuestos terapéuticos, que son la manera desagradable de administrarlos (inyecciones frecuentes acompañadas de reacciones en el sitio de infusión) y el elevado coste de producción. Los agentes más recientes en fase de desarrollo tardía seleccionan como dianas a moléculas coestimulantes de células T y a células B. Se espera que la eficacia de estos agentes sea similar a la de los bloqueadores de TNF-\alpha. El hecho de que una variedad de terapias escogidas tengan eficacias similares pero limitadas sugiere que hay una multiplicidad de factores patógenos para la AR. Esto también es indicativo de las deficiencias en nuestra comprensión de los sucesos patógenos que tienen que ver con la AR.

Las terapias actuales para AR no son satisfactorias debido a la eficacia limitada (no existe terapia adecuada para el 30% de los pacientes). Esto exige estrategias adicionales para lograr la remisión. La remisión es necesaria puesto que la enfermedad residual conlleva el riesgo de un daño articular progresivo y de este modo una discapacidad progresiva. La inhibición del componente inmunoinflamatorio de la enfermedad de la AR, que representa la diana principal de fármacos usados actualmente para el tratamiento de AR, no da como resultado un bloqueo de la degradación articular, el sello principal de la enfermedad.

El documento US 2005/0009832 describe imidazolo[1,2-a]pirazin-8-il-aminas sustituidas como moduladores para proteína cinasas, incluyendo MAPKAPK5. El documento W002/056888 describe inhibidores de MAPKAPK5 como moduladores de TNF capaces de regular la expresión de ciertas citocinas. Ninguna de estas referencias de la técnica anterior describe ningún compuesto dentro del alcance de la clase de compuestos descritos aquí más abajo.

Sumario de la invención

La presente invención se basa en el descubrimiento de que las funciones de MAPKAPK5 en la ruta que da como resultado la expresión de MMP1, y de que los inhibidores de la actividad de MAPKAPK5, tales como los compuestos de la presente invención, son útiles para el tratamiento de enfermedades que implican la expresión anormalmente elevada de la actividad de las MMP.

Los compuestos de la presente invención se pueden describir generalmente como as [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il-aminas sustituidas en la posición 5 con un grupo arilo y heteroarilo, y en la posición 8 con un grupo arilamino o heteroarilamino.

Más particularmente, la presente invención se refiere a compuestos que tienen propiedades inhibidoras de las metaloproteinasas de la matriz en una célula de mamífero, según la fórmula III:

1

en la que

: R^{1} es H, o alquilo sustituido o no sustituido; y cada uno de R^{8} y R^{9} se selecciona independientemente de cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de ciclopentilo sustituido o no sustituido, ciclohexilo, fenilo sustituido o no sustituido, piridilo sustituido o no sustituido, pirimidina sustituida o no sustituida, y pirazina sustituida o no sustituida, pirrol sustituido o no sustituido, pirazol sustituido o no sustituido, e imidazol sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{1} es H, Me, Et, i-Pr o CF_{3}.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{1} es H.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a compuestos según la fórmula IVa, IVb, IVc, o IVd:

2

y en las que L es un enlace, -CO-, -O(CH_{2})_{m1}-, -CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o -NHCO-; el subíndice m1 se selecciona de 1-4; el anillo P es heterocicloalquilo sustituido o no sustituido; el subíndice n se selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, carbamoílo, CHO, y halo; y R^{9} se selecciona independientemente de arilo y heteroarilo sustituido o no sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-IVd, R^{9} es arilo sustituido o no sustituido. En otra realización, R^{9} es fenilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-IVd, R^{9} es heteroarilo sustituido o no sustituido. En otra realización, R^{9} es piridilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-IVd, R^{9} se selecciona de fenilo sustituido o no sustituido, indolilo, isoindolilo, pirrolilo, furanilo, tienilo, pirazolilo, oxazolilo, y tiazolilo.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de triazolopirazina de la invención, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéutico. En este aspecto de la invención, la composición farmacéutica puede comprender uno o más de los compuestos descritos aquí. Además, los compuestos de la presente invención útiles en las composiciones farmacéuticas y métodos de tratamiento descritos aquí son todos farmacéuticamente aceptables según se preparan y se usan.

Otro aspecto de esta invención se refiere al uso del presente compuesto en un método terapéutico, a una composición farmacéutica, y a la fabricación de tal composición, útil para el tratamiento de enfermedades que implican inflamación, degradación del colágeno, y en particular enfermedades características de una actividad anormal de las metaloproteinasas de la matriz (MMPI) y/o de la proteína cinasa 5 activada por proteína cinasas activadas por mitógenos (MAPKAPK5), de las cuales la artritis reumatoide (AR) es una enfermedad particular de tales enfermedades. Esta invención también se refiere a procedimientos para la preparación de los presentes compuestos.

Otros objetos y ventajas serán manifiestos para los expertos en la técnica a partir de la consideración de la descripción detallada que sigue, que transcurre con referencia a los siguientes dibujos ilustrativos.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1. Este diagrama muestra las llamativas diferencias histológicas entre una articulación sana y aquella de un paciente con AR.

Figura 2. Esta gráfica muestra el aumento de expresión de MMP1 en fibroblastos sinoviales activados con citocinas implicadas en la patología de la artritis reumatoide.

Figura 3. Esta gráfica muestra la inhibición, dependiente de la dosis, de la expresión de MMP1, inducida por la "activación a base de TNF-\alpha", mediante los SF por un compuesto antiinflamatorio conocido.

Figura 4. Este gel muestra la reducción, a nivel proteico, de la expresión de MAPKAPK5 en los SF mediante infección de las células con un virus de Ad-siRNA dirigido contra MAPKAPK5.

Figura 5. Esta gráfica muestra la reducción de los niveles, inducidos por el "activador complejo", de la expresión de MMP1 mediante los SF por un virus de Ad-siRNA dirigido contra MAPKAPK5.

Descripción detallada de la invención Definiciones

A la hora de describir los compuestos, las composiciones farmacéuticas que contienen tales compuestos, y los métodos de uso de tales compuestos y composiciones, los siguientes términos tienen los siguientes significados, excepto que se indique de otro modo.

"Alcoxi" significa alquil-O-. Los alcoxi ejemplares incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, y heptoxi. Los grupos alcoxi preferidos son alcoxi inferior.

"Alquilo" significa un hidrocarburo alifático lineal o ramificado que tiene 1 a alrededor de 20 átomos de carbono. El alquilo preferido tiene 1 a alrededor de 12 átomos de carbono. Es más preferido el alquilo inferior. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior, tal como metilo, etilo o propilo, está unido a la cadena de alquilo lineal.

"Alquilamino" significa alquil-NH. El alquilamino preferido es alquilamino de (C_{1}-C_{6}). El alquilamino ejemplar incluye metilamino y etilamino.

"Aminoalcanoílo inferior" significa NH_{2}-R-CO-, en la que R es alquileno inferior. Los grupos preferidos incluyen aminoetanoílo y aminoacetilo.

"Carbamoilalquilo inferior" significa el radical NH_{2}CO-alquilo inferior. Grupos preferidos incluyen carbamoiletilo y carbamoilmetilo.

"Éster de alquilo inferior de carboxi" significa un éster de alquilo inferior de un radical carboxi, -COO-grupo.

"Compuestos de la presente invención", y expresiones equivalentes, abarcan compuestos de Fórmula (III) como se describe aquí anteriormente, expresión la cual incluye los profármacos, las sales farmacéuticamente aceptables, y los solvatos, por ejemplo hidratos, cuando así lo permita el contexto. De forma similar, la referencia a intermedios, ya sea que se reivindiquen por sí mismos o no, abarcan sus sales, y solvatos, cuando así lo permita el contexto.

"Expresión" significa expresión endógena.

"Halo" o "halógeno" significa fluoro, cloro, bromo, o yodo.

"Hidrógeno" significa, en el contexto de un sustituyente, que -H está presente en la posición del compuesto, y también incluye su isótopo, el deuterio.

"Alcanoilamino inferior" significa un grupo amino con un grupo funcional orgánico R-CO-, en el que R representa un grupo alquilo inferior.

"Alquilo inferior" significa 1 a alrededor de 6 átomos de carbono en una cadena de alquilo lineal que puede ser lineal o ramificada.

"Alcoxi inferior" significa 1 a alrededor de 6 átomos de carbono en una cadena de alquilo lineal que puede ser lineal o ramificada, y que está enlazada mediante un átomo de oxígeno.

"Alquilsulfonamida inferior" se refiere a una alquilamida inferior de sulfonamida de la fórmula -SO_{2}NR*R*, en la que R* es hidrógeno o alquilo inferior, y al menos uno de R* es alquilo inferior.

"Profilaxis" significa una medida tomada para la prevención de una enfermedad.

"Solvato" significa una asociación física de un compuesto útil en esta invención con una o más moléculas de disolvente. Esta asociación física incluye el enlace de hidrógeno. En ciertos casos, el solvato se podrá aislar, por ejemplo cuando se incorporan una o más moléculas de disolvente en la red cristalina del sólido cristalino. "Solvato" engloba solvatos tanto en fase de disolución como aislables. Los compuestos de la invención se pueden preparar por ejemplo en forma cristalina y se pueden solvatar o hidratar. Los solvatos adecuados incluyen solvatos farmacéuticamente aceptables, tales como hidratos, y además incluyen tanto solvatos estequiométricos como solvatos no estequiométricos. Por lo tanto, los disolventes convencionales incluyen agua, etanol, ácido acético, y similares, y los solvatos representativos incluyen hidratos, etanolatos y metanolatos.

"Sustituido" significa que un átomo o grupo de átomos en una molécula está sustituido por otro átomo o grupo.

"Sulfonamida" se refiere a un grupo de compuestos que contienen el grupo químico -SO_{2}NH_{2}.

"Cantidad terapéuticamente eficaz" significa aquella cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto que es buscada por un médico o internista. La "cantidad terapéuticamente eficaz" puede variar dependiendo del compuesto, la enfermedad y su gravedad, y la edad, peso, etc., del sujeto a tratar. En particular, con respecto a tratar una afección caracterizada por la degradación de la matriz extracelular, la expresión "cantidad eficaz inhibidora de las metaloproteasas de la matriz" quiere decir aquella cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención que provocará una disminución biológicamente significativa en la producción de MMP1 en los tejidos afectados por la enfermedad del sujeto, de forma que se reduce significativamente la degradación de la matriz extracelular. Un compuesto que tiene propiedades inhibidoras de las metaloproteasas de la matriz, o un "compuesto inhibidor de las metaloproteasas de la matriz", significa un compuesto de la presente invención que, proporcionado a una célula en cantidades eficaces, es capaz de provocar una disminución biológicamente significativa en la producción de MMP-1 en tales células.

"Arilo" se refiere a un grupo hidrocarbonato aromático monovalente derivado de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un único átomo de carbono de un sistema de anillo aromático parental. Los grupos arilo típicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benceno, criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleyadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno y similares. Particularmente, un grupo arilo comprende de 6 a 14 átomos de carbono.

"Arilo sustituido" incluye aquellos grupos citados en la definición de "sustituido" de esta memoria, y se refiere particularmente a un grupo arilo que se puede sustituir opcionalmente con uno o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, particularmente 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alquenilo, alquenilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)_{2}- y aril-S(O)_{2}-.

"Bicicloarilo" se refiere a un grupo hidrocarbonado aromático monovalente derivado de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un único átomo de carbono de un sistema anular bicicloaromático parental. Los grupos bicicloarílicos típicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de indano, indeno, naftaleno, tetrahidronaftaleno, y similares. Particularmente, un grupo arilo comprende de 8 a 11 átomos de carbono.

"Bicicloheteroarilo" se refiere a un grupo bicicloheteroaromático monovalente derivado de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un único átomo de un sistema anular bicicloheteroaromático parental. Los grupos bicicloheteroarílicos típicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de benzofurano, bencimidazol, bencindazol, benzdioxano, cromeno, cromano, cinolina, ftalacina, indol, indolina, indolicina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, benzotiazol, benzoxazol, naftiridina, benzoxadiazol, pteridina, purina, benzopirano, benzpiracina, piridopirimidina, quinazolina, quinolina, quinolicina, quinoxalina, benzomorfano, tetrahidroisoquinolina, tetrahidroquinolina, y similares. Preferiblemente, el grupo bicicloheteroarilo es un bicicloheteroarilo entre 9-11 miembros, siendo particularmente preferido el heteroarilo de 5-10 miembros. Los grupos bicicloheteroarílicos particulares son aquellos derivados de benzotiofeno, benzofurano, benzotiazol, indol, quinolina, isoquinolina, bencimidazol, benzoxazol y benzdioxano.

"Carbamoílo" se refiere al radical -C(O)N(R^{42})_{2}, en el que cada grupo R^{42} es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo, como se define aquí, que puede estar opcionalmente sustituido como se define aquí. En una realización específica, el término "carbamoílo" se refiere a -C(O)-NH_{2}.

"Cicloalquilo" se refiere a grupos hidrocarbílicos cíclicos que tienen de 3 a alrededor de 10 átomos de carbono y que tienen un solo anillo cíclico o múltiples anillos condensados, incluyendo sistemas anulares condensados y en puente, que opcionalmente pueden estar sustituidos con 1 a 3 grupos alquilo. Tales grupos cicloalquilo incluyen, a título de ejemplo, estructuras de un solo anillo tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclooctilo. 1-metilciclopropilo, 2-metilciclopentilo, 2-metilciclooctilo, y similares, y estructuras de múltiples anillos, tales como adamantanilo, y similares.

"Cicloalquilo sustituido" incluye aquellos grupos citados en la definición de "sustituido" de esta memoria, y particularmente se refiere a un grupo cicloalquilo que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y particularmente de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)_{2}- y aril-S(O)_{2}-.

"Sustituido" se refiere a un grupo en el que uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen cada uno independientemente por el mismo o diferente sustituyente o sustituyentes. Los sustituyentes típicos incluyen, pero no se limitan a, -X, -R^{46}, -O-, =O, -OR^{46}, -SR^{46}, -S-, =S, -NR^{46}R^{47}, =NR^{46}, -CX_{3}, -CF_{3}, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO_{2}, =N_{2},
-N_{3}, -S(O)_{2}O-, -S(O)_{2}OH, -S(O)_{2}R^{46}, -OS(O_{2})O-, -OS(O)_{2}R^{46}, -P(O)(O^{-})_{2}, -P(O)(OR^{46})(O^{-}), -OP(O)(OR^{46})(OR^{47}),
-C(O)R^{46}, -C(S)R^{46}, -C(O)OR^{46}, -C(O)NR^{46}R^{47}, -C(O)O-, -C(S)OR^{46}, -NR^{48}C(O)NR^{46}R^{47}, -NR^{48}C(S)NR^{46}R^{47}, -NR^{49}C(NR^{48})NR^{46}R^{47} y -C(NR^{48})NR^{46}R^{47}, en los que cada X es independientemente un halógeno; cada R^{46}, R^{47}, R^{48} y R^{49} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, heteroarilalquilo sustituido, -NR^{50}R^{51}, -C(O)R^{50} o
-S(O)_{2}R^{50}, u opcionalmente R^{50} y R^{51}, junto con el átomo al que ambos están unidos, forman un anillo de cicloheteroalquilo o de cicloheteroalquilo sustituido; y R^{50} y R^{51} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, arilalquilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroarilalquilo, o heteroarilalquilo sustituido.

Los ejemplos de arilos sustituidos representativos incluyen los siguientes

3

En estas formulas, uno de R^{52} y R^{53} puede ser hidrógeno y al menos uno de R^{52} y R^{53} se selecciona cada uno independientemente de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloheteroalquilo, alcanoílo, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, alquilamino, arilamino, heteroarilamino, NR^{54}COR^{55}, NR^{54}SOR^{55}, NR^{54}SO_{2}R^{57}, COOalquilo, COOarilo, CONR^{54}R^{55}, CONR^{54}OR^{55}, NR^{54}R^{55}, SO_{2}NR^{54}R^{55}, S-alquilo, S-alquilo, SOalquilo, SO_{2}alquilo, S-arilo, SOarilo, SO_{2}arilo; o R^{52} y R^{53} se pueden unir para formar un anillo cíclico (saturado o insaturado) de 5 a 8 átomos, que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos seleccionados del grupo N, O o S. R^{54}, R^{55}, y R^{56} son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, perfluoroalquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroalquilo sustituido o o similar.

"Hetero", cuando se usa para describir un compuesto o un grupo presente en un compuesto, significa que uno o más átomos de carbono en el compuesto o grupo se han sustituido por un heteroátomo de nitrógeno, oxígeno, o azufre. Hetero se puede aplicar a cualquiera de los grupos hidrocarbilo descritos anteriormente, tales como alquilo, por ejemplo heteroalquilo, cicloalquilo, por ejemplo cicloheteroalquilo, arilo, por ejemplo heteroarilo, cicloalquenilo, por ejemplo cicloheteroalquenilo, y similares, que tienen de 1 a 5, y especialmente 1 a 3 heteroátomos.

"Heteroarilo" se refiere a un grupo heteroaromático monovalente derivado de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un único átomo de un sistema anular heteroaromático parental. Los grupos heteroarílicos típicos incluyen, pero no se limitan a, grupos derivados de acridina, arsindol, carbazol, \beta-carbolina, cromano, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno, y similares. Preferiblemente, el grupo heteroarílico es heteroarilo entre 5-15 miembros, siendo particularmente preferido heteroarilo de 5-10 miembros. Los grupos heteroarílicos particulares son aquellos derivados de tiofeno, pirrol, benzotiofeno, benzofurano, indol, piridina, quinolina, imidazol, oxazol y pirazina.

Ejemplos de heteroarilos representativos incluyen los siguientes:

4

en los que cada Y se selecciona de carbonilo, N, NR^{58}, O, y S; y R^{58} es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o similar.

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Como se usa aquí, el término "cicloheteroalquilo" se refiere a un anillo no aromático heterocíclico estable y anillos condensados que contienen uno o más heteroátomos seleccionados independientemente de N, O y S. Un sistema de anillo heterocíclico condensado puede incluir anillos carbocíclicos, y sólo necesita incluir un anillo heterocíclico. Los ejemplos de anillos heterocíclicos incluyen, pero no se limitan a, piperazinilo, homopiperazinilo, piperidinilo y morfolinilo, y se muestran en los siguientes ejemplos ilustrativos:

5

500

en los que cada X se selecciona de CR^{58}_{2}, NR^{58}, O y S; y cada Y se selecciona de NR^{58}, O y S; y R^{58} es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o similar. Estos anillos cicloheteroalquílicos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)_{2}- y aril-S(O)_{2}-. Los grupos sustituyentes incluyen carbonilo o tiocarbonilo, que proporcionan, por ejemplo, derivados de lactama y de urea.

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Los ejemplos de cicloheteroalquenilos representativos incluyen los siguientes:

6

en los que cada X se selecciona de CR^{58}_{2}, NR^{58}, O y S; y cada Y se selecciona de carbonilo, N, NR^{58}, O y S; y R^{58} es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o similar.

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Los ejemplos de arilo representativo que tienen heteroátomos que contienen sustitución incluyen los siguientes:

7

en los que cada X se selecciona de C-R^{58}_{2}, NR^{58}, O y S; y cada Y se selecciona de carbonilo, NR^{58}, O y S; y R^{58} es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo o similar.

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Una persona que tenga pericia normal en la técnica de síntesis orgánica reconocerá que el número máximo de heteroátomos en un anillo heterocíclico estable, químicamente factible, tanto si es aromático como no aromático, está determinado por el tamaño del anillo, el grado de insaturación y la valencia de los heteroátomos. En general, un anillo heterocíclico puede tener uno a cuatro heteroátomos en tanto que el anillo heteroaromático sea químicamente factible y estable.

"Farmacéuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno Federal o de un Estado o listada en la Farmacopea de los Estados Unidos de América u otra farmacopea generalmente reconocida para uso en animales, y más particularmente en seres humanos.

\newpage

"Sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a las sales de adición de ácidos inorgánicos y orgánicos, y sales de adición de bases, no tóxicas, de compuestos de la presente invención, en particular son farmacéuticamente aceptables y poseen la actividad farmacológica deseada del compuesto parental. Estas sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento y purificación final de los compuestos útiles en la presente invención. Tales sales incluyen: (1) sales de adición de ácidos, formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares; o formadas con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 1,2-etanodisulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido 4-clorobencenosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido 4-toluenosulfónico, ácido canfosulfónico, ácido 4-metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-en-1-carboxílico, ácido glucoheptónico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetilacético, ácido terc-butilacético, ácido laurilsulfúrico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucónico, y similares; o (2) sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto parental se sustituye por un ion metálico, por ejemplo un ion de metal alcalino, un ion de metal alcalinotérreo, o un ion de aluminio; o se coordina con una base orgánica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, N-metilglucamina, y similares. Las sales incluyen además, sólo a título de ejemplo, sales de sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetraalquilamonio, y similares; y cuando el compuesto contiene una funcionalidad básica, las sales de ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxicos, tales como hidrocloruro, hidrobromuro, tartrato, mesilato, acetato, maleato, oxalato y similares. La expresión "catión farmacéuticamente aceptable" se refiere a un contraion catiónico aceptable, no tóxico, de un grupo funcional ácido. Tales cationes se ejemplifican mediante cationes de sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetraalquilamonio, y similares.

"Vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o portador con el que se administra un compuesto de la invención.

"Prevenir" o "prevención" se refiere a una reducción en el riesgo de adquirir una enfermedad o trastorno (es decir, que hace que al menos uno de los síntomas clínicos de la enfermedad no se desarrolle en un sujeto que puede estar expuesto a o predispuesto a la enfermedad, pero que todavía no experimenta o presenta síntomas de la enfermedad).

"Profármacos" se refiere a compuestos, incluyendo derivados de los compuestos de la invención, que tienen grupos escindibles y se convierten, mediante solvolisis o en condiciones fisiológicas, en los compuestos de la invención que son farmacéuticamente activos in vivo. Tales ejemplos incluyen, pero no se limitan a, derivados de éster de colina y similares, ésteres de N-alquil-morfolina y similares.

"Sujeto" incluye seres humanos. Los términos "ser humano", "paciente" y "sujeto" se usan aquí de forma intercambiable.

"Tratar" o "tratamiento" de cualquier enfermedad o trastorno se refiere, en una realización, a mejorar la enfermedad o trastorno (es decir, detener o reducir el desarrollo de la enfermedad, o al menos uno de sus síntomas clínicos). En otra realización, "tratar" o "tratamiento" se refiere a mejorar al menos un parámetro físico, que puede ser no discernible por el sujeto. Todavía en otra realización, "tratar" o "tratamiento" se refiere a modular la enfermedad o trastorno, ya sea físicamente (por ejemplo, estabilización de un síntoma discernible) fisiológicamente (por ejemplo, estabilización de un parámetro físico), o ambos. Todavía en otra realización, "tratar" o "tratamiento" se refiere a retrasar el comienzo de la enfermedad o trastorno.

Otros derivados de los compuestos de esta invención tienen actividad tanto en su forma ácida como en su forma de derivado de ácido, pero la forma sensible a ácidos a menudo ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad tisular, o liberación retrasada en el organismo del mamífero (véase, Bundgard, H., Design of Prodrugs, p. 7-9, 21-24, Elsevier, Ámsterdam 1985). Los profármacos incluyen derivados de ácidos bien conocidos por los practicantes de la técnica, tales como, por ejemplo, ésteres preparados mediante reacción del ácido parental con un alcohol adecuado, o amidas preparadas mediante reacción del compuesto ácido parental con una amina sustituida o no sustituida, o anhídridos de ácido, o anhídridos mixtos. Los ésteres, amidas y anhídridos alifáticos o aromáticos simples, derivados de grupos ácidos que cuelgan en los compuestos de esta invención, son profármacos preferidos. En algunos casos es deseable preparar profármacos del tipo de ésteres dobles, tales como ésteres de (aciloxi)alquilo o ésteres de ((alcoxicarbonil)oxi)alquilo. Se prefieren los ésteres alquílicos de C_{1} a C_{8}, alquenílicos de C_{2}-C_{8}, arílicos, arílicos sustituidos de C_{7}-C_{12}, y arilalquílicos de C_{7}-C_{12} de los compuestos de la invención.

Como se usa aquí, la expresión "variante isotópica" se refiere a un compuesto que contiene proporciones no naturales de isótopos en uno o más de los átomos que constituyen tal compuesto. Por ejemplo, una "variante isotópica" de un compuesto puede contener uno o más isótopos no radiactivos, tales como, por ejemplo, deuterio (^{2}H o D), carbono 13 (^{13}C), nitrógeno-15 (^{15}N), o similares. Se entenderá que, en un compuesto en el que se realiza tal sustitución isotópica, los siguientes átomos, cuando están presentes, pueden variar, de forma que, por ejemplo, cualquier hidrógeno puede ser ^{2}H/D, cualquier carbono puede ser ^{13}C, o cualquier nitrógeno puede ser ^{15}N, y que la presencia y situación de tales átomos puede ser determinada dentro de la pericia de la técnica. Igualmente, la invención puede incluir la preparación de variantes isotópicas con radioisótopos, en el caso por ejemplo en el que los compuestos resultantes se pueden usar para estudios de distribución tisular de fármacos y/o sustratos. Los isótopos radioactivos tritio, es decir, ^{3}H, y carbono-14, es decir, ^{14}C, son particularmente útiles para este fin en vista de su fácil incorporación y su fácil medio de detección. Además, se pueden preparar compuestos que están sustituidos con isótopos emisores de positrones, tales como ^{11}C, ^{18}F, ^{15}O y ^{13}N, y serían útiles en estudios de Topografía de Emisión de Positrones (PET), para examinar la ocupación del receptor del sustrato.

Todas las variantes isotópicas de los compuestos proporcionadas aquí, sean radiactivas o no, están destinadas a estar englobadas en el alcance de la invención.

También se entiende que los compuestos que tienen la misma fórmula molecular pero difieren en la naturaleza o secuencia de enlace de sus átomos o la disposición de sus átomos en el espacio se denominan "isómeros". Los isómeros que difieren en la disposición de sus átomos en el espacio se denominan "estereoisómeros".

Los estereoisómeros que no son imágenes especulares uno del otro se denominan "diastereómeros", y aquellos que son imágenes especulares no superponibles entre sí se denominan "enantiómeros". Cuando un compuesto tiene un centro asimétrico, por ejemplo está enlazado a cuatro grupos diferentes, es posible un par de enantiómeros. Un enantiómero se puede caracterizar mediante la configuración absoluta de su centro asimétrico, y se describe por las reglas de secuenciación R y S de Cahn y Prelog, o por la manera en la que la molécula gira el plano de luz polarizada y se denomina como dextrorrotatorio o levorrotatorio (es decir, como isómeros (+) o (-), respectivamente). Un compuesto quiral puede existir como un enantiómero individual o como una mezcla de los mismos. Una mezcla que contiene proporciones iguales de los enantiómeros se denomina una "mezcla racémica".

"Tautómeros" se refiere a compuestos que son formas intercambiables de una estructura de un compuesto particular, y que varían en la colocación de los átomos de hidrógeno y los electrones. De este modo, dos estructuras pueden estar en equilibrio a través del movimiento de los electrones \pi y un átomo (habitualmente H). Por ejemplo, los enoles y cetonas son tautómeros debido a que se interconvierten rápidamente mediante tratamiento con un ácido o una base. Otro ejemplo de tautomería es las formas aci y nitro del fenilnitrometano, que igualmente se forman mediante tratamiento con un ácido o una base.

Las formas tautómeras pueden ser apropiadas para el logro de la reactividad química y actividad biológica óptimas de un compuesto de interés.

Los compuestos de esta invención pueden poseer uno o más centros asimétricos; por lo tanto, tales compuestos se pueden producir como estereoisómeros (R) o (S) individuales, o como mezclas de los mismos. Excepto que se indique de otro modo, la descripción o nomenclatura de un compuesto particular en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones pretenden incluir tanto enantiómeros individuales como mezclas, racémicas o de otro modo, de los mismos. Los métodos para la determinación de la estequiometría y la separación de estereoisómeros son bien conocidos en la técnica.

Los compuestos

La presente invención se basa en el descubrimiento de que las funciones de MAPKAPK5 en la ruta que da como resultado la expresión de MMP1, y de que los inhibidores de la actividad de MAPKAPK5, tales como los compuestos de la presente invención, son útiles para el tratamiento de enfermedades que implican la expresión anormalmente elevada de la actividad de MMP.

Los compuestos de la presente invención se pueden describir generalmente como [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il-aminas sustituidas en el grupo en la posición 5, y en la posición 8.

La presente invención se refiere a compuestos según la fórmula III:

8

en la que R^{1} es H, o alquilo sustituido o no sustituido; y cada uno de R^{8} y R^{9} se selecciona independientemente de cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los mismos.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{1} es H.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de cicloalquilo sustituido o no sustituido.

En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de ciclohexilo o ciclopentilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de heterocicloalquilo sustituido o no sustituido.

En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de piperidinilo, morfolinilo o pirrolidinilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de fenilo, piridilo o pirimidina sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} se selecciona de fenilo sustituido, piridilo sustituido, y pirimidina sustituida; y la sustitución es

-L-R^{8d},

y en la que

: L se selecciona de un enlace, alquileno, heteroalquileno, -O-, -N(R^{8e})-, -CO-, -CO_{2}-, -SO-, -SO_{2}-, -CON(R^{8e})-, -SO_{2}N(R^{8e}), -N(R^{8e})CO-, -N(R^{8e})SO_{2}-, -N(R^{8e})CON(R^{8e})-, N(R^{8e})SO_{2}N(R^{8e})-; y

: R^{8d} se selecciona de alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, aralquilo sustituido o no sustituido, heteroarilalquilo sustituido o no sustituido, y aminoalquilo sustituido o no sustituido; y

: R^{8e} se selecciona de H, alquilo sustituido o no sustituido, y cicloalquilo sustituido o no sustituido.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es

9

en los que L y R^{8d} son como se describen en el párrafo anterior; el subíndice n se selecciona de 1-4; y cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y el subíndice n es 1, y R^{8a} es Me, Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe, o CF_{3}. En otra realización, R^{8a} está en la posición 2-(orto con respecto a -L). En aún otra realización, R^{8a} es 2-Cl, 2-F, 2-Me o 2-CF_{3}.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente y

L es un enlace, -O-, -CO-, -CON(R^{8e})-, o -N(R^{8e})CO-;

R^{8d} se selecciona de alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, aralquilo sustituido o no sustituido, heteroarilalquilo sustituido o no sustituido, y aminoalquilo sustituido o no sustituido; y

R^{8e} se selecciona de H, alquilo sustituido o no sustituido.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y

L es un enlace, -O-, -CO-, -CON(R^{8e})-, o -N(R^{8e})CO-; y

R^{8d} se selecciona de H, alquilaminoetilo, dialquilaminoetilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilalquilo, y heteroarilalquilo.

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L es un enlace, -O-, -CO-, -CON(R^{8e})-, o -N(R^{8e})CO-; y

R^{8d} se selecciona de metilaminoetilo, etilaminoetilo, dimetilaminoetilo, dietilaminoetilo, pirrolidinilo sustituido o no sustituido, bencilo y piridilmetilo.

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L es un enlace, -CO-, SO_{2}, -(CH_{2})_{m1}-, -O(CH_{2})_{m1}-, -NH(CH_{2})_{m1}-, -CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o -SO_{2}NH(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 se selecciona de 1-4; y R^{8d} es

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10

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en el que el anillo P es heterocicloalquilo sustituido o no sustituido. En otra realización, L es un enlace, -CO-, -O(CH_{2})_{m1}-, -CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o -NHCO-;

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente; L es un enlace; y el anillo P es heterocicloalquilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente; L es un enlace; y el anillo P es piperidina sustituida o no sustituida, piperazina sustituida o no sustituida, y piperidina sustituida o no sustituida, morfolina.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente; L es CO; y el anillo P es heterocicloalquilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente; L es CO; y el anillo P es piperidina sustituida o no sustituida, piperazina sustituida o no sustituida, y piperidina sustituida o no sustituida, morfolina.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente; L es -(CH_{2})_{m1}-, -O(CH_{2})_{m1}-, o -NH(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 se selecciona de 1-4; y el anillo P es heterocicloalquilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente; L es -(CH_{2})_{m1}-, -O(CH_{2})_{m1}-, o -NH(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 es 2 ó 3; y el anillo P es piperidina sustituida o no sustituida, piperazina sustituida o no sustituida, y piperidina sustituida o no sustituida, morfolina.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente; L es -CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o -NHCO(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 se selecciona de 1-4; y el anillo P es heterocicloalquilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente; L es -CON(H)(CH_{2})_{m1}-; el subíndice m1 es 2 ó 3; y el anillo P es piperidina sustituida o no sustituida, piperazina sustituida o no sustituida, y piperidina sustituida o no sustituida, morfolina.

\newpage

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según la fórmula IVa, IVb, IVc, o IVd:

11

en las que L y el anillo P son como se describen anteriormente; el subíndice n se selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo; y R^{9} se selecciona independientemente de arilo sustituido o no sustituido y heteroarilo; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco del mismo, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros del mismo.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es un enlace.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es metileno, etileno, propileno, y butileno.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es -CO-.

Un compuesto según la reivindicación 9, en el que L es -CO-.

Un compuesto según la reivindicación 9, en el que L es -NHCO- o -CONN-.

Un compuesto según la reivindicación 9, en el que L es -CON(H)-CH_{2}-CH_{2}-, o -N(H)-CO-CH_{2}-CH_{2}-.

Un compuesto según la reivindicación 9, en el que L es -OCH_{2}-CH_{2}- o -NHCH_{2}-CH_{2}-.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es -SO_{2}.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es -CON(H)-CH_{2}-CH_{2}-, o -SO_{2}NH-CH_{2}-CH_{2}.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, L es -OCH_{2}-CH_{2}- o -NHCH_{2}-CH_{2}-.

En una realización preferida, L es un enlace.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, el anillo P es piperidina sustituida o no sustituida, morfolina o piperazina.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, L y el anillo P son como se describe anteriormente; el subíndice n es 4 y cada R^{8a} es H.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, L y el anillo P son como se describe anteriormente; el subíndice n es 1 y R^{8a} es Me, Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe, o CF_{3}. En otra realización, R^{8a} está en la posición 2-(orto con respecto a -L). En aún otra realización, R^{8a} es 2-Cl, 2-F, 2-Me o 2-CF_{3}.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es

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en las que el anillo P es heterocicloalquilo sustituido o no sustituido; el subíndice n se selecciona de 1-4; y cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y el anillo P es piperidina sustituida o no sustituida, morfolina o piperazina.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y el subíndice n es 4, y cada R^{8a} es H.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y el subíndice n es 1, y R^{8a} es Me, Et, Pr, iso-Pr, Cl, F, CN, OMe, o CF_{3}. En otra realización, R^{8a} está en la posición 2-(orto con respecto al N-anillo P). En aún otra realización, R^{8a} es 2-Cl, 2-F, 2-Me o 2-CF_{3}.

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13

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en las que el subíndice n se selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo; R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no sustituido; R^{8c} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, y el subíndice x se selecciona de 1-8.

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14

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en las que el subíndice n se selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo; R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no sustituido; R^{bc} es hidrógeno o Mc.

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En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es

15

en las que el subíndice n se selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo.

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16

en las que el subíndice n se selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo; y R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no sustituido.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y R^{8b} es H.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y R^{8b} es cicloalquilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CH_{2}CF_{3}, CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, ciclopropilo o ciclopropilmetilo.

En una realización particular, con respecto a los compuestos de fórmula III, R^{8} es como se describe anteriormente, y R^{8b} es i-Pr.

En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, carbamoílo, CHO, y halo. En una realización, R^{8a} es H, Me, F, o Cl. En una realización preferida, R^{8a} es H.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas IVa-IVd, el compuesto es según las fórmulas Va, Vb, Vc, Vd, Ve, o Vf:

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17

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en las que R^{9} es como se describe para la fórmula III, y R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no sustituido.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es H.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es cicloalquilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CH_{2}CF_{3}, CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, ciclopropilo o ciclopropilmetilo.

En una realización particular, con respecto a los compuestos de fórmulas Va-Vf, R^{8b} es i-Pr.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es arilo sustituido o no sustituido. En otra realización, R^{9} es fenilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es heteroarilo sustituido o no sustituido. En otra realización, R^{9} es piridilo sustituido o no sustituido.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} se selecciona de fenilo sustituido o no sustituido, indolilo, isoindolilo, pirrolilo, furanilo, tienilo, pirazolilo, oxazolilo, y tiazolilo.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es

18

y cada uno de A^{1}, A^{2} y A^{3} se selecciona independientemente de S, O, N, NR^{9a}, y CR^{9a}; cada uno de R^{9a} es independientemente H o alquilo sustituido o no sustituido; y R^{9b} es CONH_{2}, CONHMe, o CN.

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En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es

19

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En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es

20

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21

en la que el subíndice m se selecciona de 1-4, y cada R^{9d} es independientemente H, alquilo sustituido o no sustituido, o halo.

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22

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23

en las que el subíndice m se selecciona de 1-3, y cada R^{9d} es independientemente H, alquilo sustituido o no sustituido, o halo.

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En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es como se describe anteriormente; y cada R^{9d} es H.

En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmulas III-Vf, R^{9} es como se describe anteriormente; m es 1 ó 2, y cada R^{9d} es independientemente Me, Cl o F.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas VIa, VIb, VIc, VId, VIe o VIf:

24

2400

y R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no sustituido.

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En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es H.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es cicloalquilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es ciclopropilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIa-VIf, R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas VIIa, VIIb, VIIc, VIIc, VIId, VIIe o VIIf:

25

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En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIa-VIId, R^{8b} es H.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIa-VIIf, R^{8b} es cicloalquilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIa-VIIf, R^{8b} es ciclopropilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIa-VIIf, R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIa-VIIf, R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas VIIIa, VIIIb, VIIIc, VIIId, VIIIe o VIIIf:

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26

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27

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En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIIa-VIIIf, R^{8b} es H.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIIa-VIIIf, R^{8b} es cicloalquilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIIa-VIIIf, R^{8b} es ciclopropilo.

\newpage

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIIa-VIIIf, R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas VIIIa VIIIf, R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas IXa, IXb, IXc, IXd, IXe, o IXf:

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28

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En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es H.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es cicloalquilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es ciclopropilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas IXa-IXf, R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.

\newpage

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas Xa, Xb, Xc, Xd, Xe, o Xf:

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29

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290

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En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es H.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es cicloalquilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es ciclopropilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas Xa-Xf, R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilmetilo.

\newpage

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XIa, XIb, XIc, XId, XIe o XIf:

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30

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y R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o cicloalquilo sustituido o no sustituido; y R^{9e} es hidrógeno, Me, o CN.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{9e} es H.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{9e} es Me.

En una realización, con respecto a los compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{9e} es CN.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es H.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es cicloalquilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es ciclopropilo.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

En una realización adicional, con respecto a los compuestos de fórmulas XIa-XIf, R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2} o ciclopropilmetilo.

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XIIa, XIIb, XIIc o XIId:

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31

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XIIIa, XIIIb, XIIIc o XIIId:

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XIVa, XIVb, XIVc o XIVd:

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33

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En una realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto es según las fórmulas XVa, XVb, o XVc:

34

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y L es un enlace o -O-CH_{2}CH_{2}-; el anillo P es

35

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y R^{8b} es H, Me, i-Pr, t-Bu, CH_{2}CONH_{2}, ciclopropilmetilo, o CH_{2}CF_{3}.

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En una realización particular, con respecto a los compuestos de fórmulas XVa-XVc, L es un enlace. En otra realización particular, L es -O-CH_{2}CH_{2}-.

En una realización particular, con respecto a los compuestos de fórmulas XVa-XVc, el anillo P es

36

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En una realización más particular, con respecto a los compuestos de fórmulas XVa-XVc, el anillo P es

37

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En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto se selecciona de la Tabla 1.

En otra realización, con respecto a los compuestos de fórmula III, el compuesto se selecciona de la Tabla 2.

En ciertos aspectos, la presente Solicitud también describe profármacos y derivados de los compuestos según las fórmulas anteriores. Los profármacos son derivados de los compuestos de la invención, que tienen grupos metabólicamente escindibles y se convierten, mediante solvolisis o en condiciones fisiológicas, en los compuestos de la invención, que son farmacéuticamente activos, in vivo. Un profármaco puede ser inactivo cuando se administra a un sujeto, pero se convierte in vivo en un compuesto activo de la invención. "Profármacos farmacéuticamente aceptables", como se usa aquí, se refiere a aquellos profármacos de los compuestos útiles en la presente invención que son, dentro del alcance del juicio médico acertado, adecuados para uso en contacto con los tejidos de pacientes sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica en proporción con una relación beneficio/riesgo razonable, y eficaces para su uso pretendido de los compuestos de la invención. El término "profármaco" significa un compuesto que se transforma in vivo para producir un compuesto eficaz útil en la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato o solvato del mismo. La transformación puede ocurrir mediante diversos mecanismos, tal como mediante hidrólisis en la sangre. Los compuestos que poseen grupos metabólicamente escindibles tienen la ventaja de que pueden mostrar una biodisponibilidad mejorada como resultado de una solubilidad y/o tasa de absorción potenciadas conferidas al compuesto parental en virtud de la presencia del grupo metabólicamente escindible; de este modo, tales compuestos actúan como profármacos. En Design of Prodrugs, H. Bundgaard, ed., Elsevier (1985); Methods in Enzymology; K. Widder et al, Ed., Academic Press, 42, 309-396 (1985); A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen y H. Bandaged, ed., Capítulo 5; "Design and Applications of Prodrugs" 113-191 (1991); Advanced Drug Delivery Reviews, H. Bundgard, 8 , 1-38, (1992); J. Pharm. Sci., 77,285 (1988); Chem. Pharm. Bull., N. Nakeya et al, 32, 692 (1984); Prodrugs as Novel Delivery Systems, T. Higuchi y V. Stella, 14 A.C.S. Symposium Series, y Bioreversible Carriers in Drug Design, E.B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, 1987, que se incorporan aquí como referencia, se proporciona una discusión a conciencia. Tales ejemplos incluyen, pero no se limitan a, derivados de éster de colina y similares, ésteres de N-alquilmorfolina y similares.

Otros derivados de los compuestos de esta invención tienen actividad tanto en su forma ácida como en su forma de derivado de ácido, pero la forma sensible a ácidos a menudo ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad tisular, o liberación retrasada en el organismo del mamífero (véase, Bundgard, H., Design of Prodrugs, p. 7-9, 21-24, Elsevier, Ámsterdam 1985). Los profármacos incluyen derivados de ácido bien conocidos por los practicantes de la técnica, tales como, por ejemplo, ésteres preparados mediante reacción del ácido parental con un alcohol adecuado, o amidas preparadas mediante reacción del compuesto ácido parental con una amina sustituida o no sustituida, o anhídridos de ácido, o anhídridos mixtos. Los ésteres, amidas y anhídridos alifáticos o aromáticos simples, derivados de grupos ácidos que cuelgan de los compuestos de esta invención, son profármacos preferidos. En algunos casos es deseable preparar profármacos del tipo de ésteres dobles, tales como ésteres de (aciloxi)alquilo o ésteres de ((alcoxicarbonil)oxi)alquilo. Se prefieren los ésteres de alquilo de C_{1} a C_{8}, de alquenilo de C_{2}-C_{8}, de arilo, de arilo sustituido de C_{7}-C_{12}, y de arilalquilo de C_{7}-C_{12} de los compuestos de la invención.

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Composiciones farmacéuticas

Cuando se emplean como fármacos, los compuestos de esta invención se administran típicamente en forma de una composición farmacéutica. Tales composiciones se pueden preparar de manera bien conocida en la técnica farmacéutica, y comprende al menos un compuesto activo.

Generalmente, los compuestos de esta invención se administran en una cantidad farmacéuticamente eficaz. La cantidad del compuesto realmente administrada estará determinada físicamente por el médico, a la luz de las circunstancias pertinentes, incluyendo la afección a tratar, la vía elegida de administración, el compuesto real administrado, la edad, peso, y respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente, y similar.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención se pueden administrar por una variedad de vías, incluyendo la oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular, e intranasal. Dependiendo de la vía pretendida de suministro, los compuestos de esta invención se formulan preferiblemente como composiciones orales o inyectables, o como pomadas, como lociones o como parches, todos para administración transdérmica.

Las composiciones para administración oral pueden tomar la forma de disoluciones o suspensiones líquidas a granel, o polvos a granel. Sin embargo, más habitualmente, las composiciones se presentan en formas de dosificación unitaria para facilitar la dosificación exacta. La expresión "formas de dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un excipiente farmacéutico adecuado. Las formas de dosificación unitaria típicas incluyen ampollas o jeringuillas previamente llenadas, previamente medidas, de las composiciones líquidas, o pastillas, comprimidos, cápsulas, o similares, en caso de composiciones sólidas. En tales composiciones, el compuesto de ácido furanosulfónico es habitualmente un componente minoritario (desde alrededor de 0,1hasta alrededor de 50% en peso, o preferiblemente desde alrededor de 1 hasta alrededor de 40% en peso), siendo el resto diversos vehículos o portadores y auxiliares del procesamiento útiles para formar la forma de dosificación deseada.

Las formas líquidas adecuadas para administración oral pueden incluir un vehículo acuoso o no acuoso adecuado con tampones, agentes de suspensión y dispersantes, colorantes, sabores y similares. Las formas sólidas pueden incluir, por ejemplo, cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidón o lactosa, un agente disgregante tal como ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato de magnesio; un agente de deslizamiento tal como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente saborizante tal como menta piperita, salicilato de metilo, o sabor a naranja.

Las composiciones inyectables se basan típicamente en disolución salina estéril inyectable o disolución salina tamponada con fosfato u otros portadores inyectables conocidos en la técnica. Como antes, el compuesto activo en tales composiciones es típicamente un componente minoritario, siendo a menudo desde alrededor de 0,05 hasta 10% en peso, siendo el resto el portador inyectable y similar.

Las composiciones transdérmicas se formulan típicamente como un ungüento o crema tópico que contiene el ingrediente o ingredientes activos, generalmente en una cantidad que oscila desde alrededor de 0,01 hasta alrededor de 20% en peso, preferiblemente desde alrededor de 0,1 hasta alrededor de 20% en peso, preferiblemente desde alrededor de 0,1 hasta alrededor de 10% en peso, y más preferiblemente desde alrededor de 0,5 hasta alrededor de 15% en peso. Cuando se formulan como un ungüento, los ingredientes activos se combinarán típicamente con una base parafínica o una base para ungüento miscible con agua. Como alternativa, los ingredientes activos se pueden formular en una crema con, por ejemplo, una base para crema de aceite en agua. Tales formulaciones transdérmicas son bien conocidas en la técnica, y generalmente incluyen ingredientes adicionales para potenciar la penetración dérmica o estabilidad de los ingredientes activos o la formulación. Tales formulaciones e ingredientes transdérmicos conocidos están incluidos dentro del alcance de esta invención.

Los compuestos de esta invención también se pueden administrar mediante un dispositivo transdérmico. En consecuencia, la administración transdérmica se puede lograr usando un parche ya sea del tipo depósito o del tipo de membrana porosa, o de una variedad de matriz sólida.

Los componentes descritos anteriormente para las composiciones administrables oralmente, inyectables o administrables tópicamente son meramente representativos. Otros materiales, así como las técnicas de procesamiento y similares, se exponen en la Parte 8 de Remington's Pharmaceutical Sciences, 17ª edición, 1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, que se incorpora aquí como referencia.

Los compuestos de esta invención también se pueden administrar en formas de liberación sostenida o a partir de sistemas de suministro de fármacos de liberación sostenida. En Remington's Pharmaceutical Sciences se puede encontrar una descripción de materiales de liberación sostenida representativos.

Los siguientes ejemplos de formulación ilustran composiciones farmacéuticas representativas de esta invención. Sin embargo, la presente invención no está limitada a las siguientes composiciones farmacéuticas.

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Formulación 1

Comprimidos

Un compuesto de la invención se mezcla como un polvo seco con un aglutinante de gelatina seco, en una relación en peso aproximada de 1:2. Como lubricante, se añade una cantidad minoritaria de estearato de magnesio. La mezcla se conforma en comprimidos de 240-270 mg (80-90 mg de compuesto de amida activo por comprimido) en una prensa para comprimidos.

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Formulación 2

Cápsulas

Un compuesto de la invención se mezcla como un polvo seco con un diluyente de almidón en una relación en peso aproximada de 1:1. La mezcla se introduce en cápsulas de 250 mg (125 mg de compuesto de amida activo por cápsula).

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Formulación 3

Líquido

Un compuesto de la invención (125 mg), sacarosa (1,75 g) y goma de xantana (4 mg) se mezclan, se hacen pasar a través de un tamiz U.S. malla nº 10, y entonces se mezclan con una disolución previamente obtenida de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa sódica (11:89, 50 mg) en agua. Se diluye benzoato de sodio (10 mg), sabor, y color con agua, y se añaden con agitación. Entonces se añade suficiente agua para producir un volumen total de 5 ml.

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Formulación 4

Comprimidos

Un compuesto de la invención se mezcla como un polvo seco con un aglutinante de gelatina seco en una relación en peso aproximada de 1:2. Como lubricante, se añade una cantidad minoritaria de estearato de magnesio. La mezcla se conforma en comprimidos de 450-900 mg (150-300 mg de compuesto de amida activo) en una prensa de comprimidos.

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Formulación 5

Inyección

Un compuesto de la invención se disuelve o suspende en un medio acuoso inyectable de disolución salina estéril tamponada, hasta una concentración de aproximadamente 5 mg/ml.

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Formulación 6

Tópica

Se funden alcohol estearílico (250 g) y una vaselina blanca (250 g) a alrededor de 75ºC, y después se añade una mezcla de un compuesto de la invención (50 g), metilparabeno (0,25 g), propilparabeno (0,15 g), laurilsulfato de sodio (10 g), y propilenglicol (120 g) disueltos en agua (370 g), y la mezcla resultante se agitó hasta que se coagula.

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Métodos de tratamiento

Los presentes compuestos se usan como agentes terapéuticos para el tratamiento de afecciones en mamíferos que están relacionadas casualmente o son atribuibles a actividad aberrante de MMP1 y/o MAPKAPK5. En consecuencia, los compuestos y composiciones farmacéuticas de esta invención encuentran uso como compuestos terapéuticos para prevenir y/o tratar enfermedades inflamatorias en mamíferos, incluyendo seres humanos.

Esta invención también se refiere al uso de los presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una afección prevenida, mejorada o eliminada mediante administración de un inhibidor de la proteína cinasa 5 activada por proteína cinasas activadas por mitógenos, o una afección caracterizada por actividad anormal de colagenasa, o una afección asociada con degradación de la ECM, o una afección seleccionada de enfermedades que implican inflamación, lo más preferible para el tratamiento de artritis reumatoide.

Como un aspecto adicional de la invención, se proporcionan los presentes compuestos para uso como un fármaco especialmente en el tratamiento o prevención de las siguientes afecciones:

: una afección asociada con la degradación de la matriz extracelular (ECM), en particular artritis, y más particularmente artritis reumatoide;

: una afección asociada con una expresión celular anormal de ECM;

: una afección caracterizada por actividad anormal de las metaloproteinasas de la matriz;

: enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado inflamación, tal como, por ejemplo, artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunitarios, uveítis y aterosclerosis; picazón/prurito, tal como, por ejemplo, psoriasis; y trastornos renales;

: una afección caracterizada por actividad anormal de colagenasa, o una afección asociada con degradación de la ECM, o una afección seleccionada de enfermedades que implican inflamación, lo más preferible para el tratamiento de artritis reumatoide.

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También se proporciona aquí el uso de los presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una de las afecciones y enfermedades mencionadas anteriormente.

Se describe un método que comprende la administración a un sujeto que sufre una enfermedad o afección caracterizada por inflamación de una cantidad eficaz inhibidora de metaloproteasas de la matriz de un compuesto de la presente invención durante un período de tiempo suficiente para reducir los niveles anormales de la degradación de la matriz extracelular en el paciente, y preferiblemente terminar los procesos que se autoperpetúan responsables de dicha degradación. Una realización especial del método comprende administrar una cantidad eficaz inhibidora de metaloproteasas de la matriz de un compuesto de la presente invención a un paciente que sufre o es susceptible al desarrollo de artritis reumatoide, durante un período de tiempo suficiente para reducir o prevenir, respectivamente, la degradación de colágeno y ósea en las articulaciones de dicho paciente, y preferiblemente terminar los procesos que se autoperpetúan responsables de dicha degradación.

Los niveles de las dosis de inyección oscilan desde alrededor de 0,1 mg/kg/hora hasta al menos 10 mg/kg/hora, todo durante un tiempo desde alrededor de 1 hasta alrededor de 120 horas, y especialmente 24 a 96 horas. También se puede administrar un bolo de precarga de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg o más para lograr niveles de estado estacionario adecuados. No se espera que la dosis total máxima supere alrededor de 2 g/día para un paciente humano de 40 a 80 kg.

Para la prevención y/o tratamiento de afecciones a largo plazo, tal como afecciones inflamatorias y autoinmunitarias, el régimen de tratamiento habitualmente se extiende durante muchos meses o años, y en consecuencia se prefiere una dosificación oral por conveniencia y tolerancia del paciente. Con la dosificación oral, los regímenes representativos son una a cinco, y especialmente dos a cuatro, y típicamente tres dosis orales por día. Usando estos patrones de dosificación, cada dosis proporciona desde alrededor de 0,01 hasta alrededor de 20 mg/kg del compuesto de la invención, proporcionando cada una de las dosis preferidas desde alrededor de 0,1 hasta alrededor de 10 mg/kg y especialmente alrededor de 1 a alrededor de 5 mg/kg.

Las dosis transdérmicas generalmente se seleccionan para proporcionar niveles sanguíneos similares o inferiores a los que se logran usando dosis de inyección.

Cuando se usan para evitar el comienzo de una afección inflamatoria, los compuestos de esta invención se administrarán a un paciente con riesgo de desarrollar la afección, típicamente bajo el consejo y la supervisión de un médico, a los niveles de dosificación descritos anteriormente. Los pacientes con riesgo de desarrollar una afección particular generalmente incluyen aquellos que tienen antecedentes familiares de la afección, o aquellos que han sido identificados mediante ensayo o identificación genética por ser particularmente susceptibles a desarrollar la afección.

Los compuestos de esta invención se pueden administrar como el único agente activo, o se pueden administrar en combinación con otros agentes, incluyendo otros compuestos que demuestran la misma actividad terapéutica o una similar, y que se determina que son seguros y eficaces para tal administración combinada.

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Procedimientos sintéticos generales

Los compuestos de triazolo[1,5-a]piridilo de esta invención se pueden preparar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles usando los siguientes métodos y procedimientos generales. Se apreciará que, aunque se dan condiciones típicas o preferidas del procedimiento (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, relación en moles de agentes reaccionantes, disolventes, presiones, etc.), también se pueden usar otras condiciones del procedimiento, excepto que se establezca de otro modo. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los agentes reaccionantes particulares o disolvente usados, pero tales condiciones se pueden determinar por un experto en la técnica mediante procedimientos de optimización habituales.

Adicionalmente, como será manifiesto para los expertos en la técnica, pueden ser necesarios grupos protectores convencionales para evitar que ciertos grupos funcionales sufran reacciones indeseadas. La elección de un grupo protector adecuado para un grupo funcional particular, así como las condiciones adecuadas para la protección y desprotección, son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Segunda Edición, Wiley, New York, 1991, y referencias citadas allí, se describen numerosos grupos protectores, y su introducción y eliminación.

Los siguientes métodos se presentan con detalles en cuanto a la preparación de bicicloheteroarilos representativos que se han enumerado aquí anteriormente. Los compuestos de la invención se pueden preparar a partir de materiales de partida y reactivos conocidos o comercialmente disponibles por un experto en la técnica de síntesis orgánica.

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Ruta sintética general

38

General

Todos los reactivos fueron de grado comercial y se usaron como se recibieron, sin purificación adicional, excepto que se señale de otro modo. Para reacciones llevadas a cabo en una atmósfera inerte, se usaron disolventes anhidros comercialmente disponibles. En todos los otros casos se usaron disolventes de grado reactivo, excepto que se especifique de otro modo. La cromatografía en columna se llevó a cabo sobre gel de sílice 60 (35-70 \mum). La cromatografía de capa fina se llevó a cabo usando placas de gel de sílice prerrevestidas F-254 (grosor 0,25 mm). Los espectros de RMN ^{1}H se registraron en un espectrómetro de RMN Bruker DPX 400 (400 MHz). Los desplazamientos químicos (\delta) para los espectros de RMN ^{1}H se dan en partes por millón (ppm) con relación a tetrametilsilano (\delta 0,00) o el pico de disolvente residual apropiado, es decir CHCl_{3} (\delta 7,27), como patrón interno. Las multiplicidades se dan como singlete (s), doblete (d), triplete (t), cuartete (q), multiplete (m) y ancho (br). Las constantes de acoplamiento (J) se dan en Hz. Los espectros de MS mediante electropulverización se obtuvieron en un espectrómetro de LC/MS de Micromass platform. La columna usada para todos los análisis de LCMS: Waters Acquity UPLC BEH C18 1,7 \mum, 2,1 mm ID x 50 mm L (artículo nº 186002350)). HPLC preparativa: Waters XBridge Prep C18 5 \mum ODB 19 mm ID x 100 mm L (artículo nº 186002978). Todos los métodos usan gradientes de MeCN/H2O. H2O contiene 0,1% de TFA o 0,1% de NH3.

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Síntesis Representativa de Compuestos de la Invención

Compuesto 1

(4-Morfolin-4-ilfenil)-[5-(1H-pirazol4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

Etapa 1

N'-(3,6-dibromo-pirazin-2-il)-N,N-dimetilformamidina

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39

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Una mezcla de 3,6-dibromo-pirazin-2-ilamina (15,37 g, 60,80 mmoles) y acetal dimetílico de la N,N-dimetilforma-
mida (10,1 ml, 76,00 mmoles), suspendida en etanol (150 ml), se puso a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se evaporó a vacío proporcionando el compuesto del título (18,6 g). RMN ^{1}H (400MHz, CDCl_{3}) \delta (ppm) 3,20 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 7,93 (s, 1H), 8,48 (s, 1H). LCMS: Rt 3,81 min. (99,1%), m/z (APCI) 307 (M+H)^{+}.

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Etapa 2

N-(3,6-dibromo-pirazin-2-il)-N'-hidroxiformamidina

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40

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A una disolución de N-(3,6-dibromo-pirazin-2-il)-N,N-dimetilformamidina (18,6 g, 60,80 mmoles) en metanol (200 ml) se añadió hidrocloruro de hidroxilamina (5,91 g, 85,12 mmoles) en una porción. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. El disolvente se evaporó, y el residuo sólido se trató con agua fría (enfriamiento con hielo), y se recogió mediante filtración. El precipitado se lavó dos veces con agua y éter de petróleo y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (17,45 g) como un sólido blanco.

RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 7,82 (1H, br s), 8,21 (1H, s), 8,34 (1H, m), 11,17 (1H, br s). LCMS: Rt 3,17 min. (98,7%), m/z (APCI) 295 (M+H)^{+}.

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Etapa 3

5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina

41

Se trató N-(3,6-dibromo-pirazin-2-il)-N'-hidroxiformamidina (17,4 mg, 58,80 mmoles) con ácido polifosfórico (150 g) durante una hora a 50ºC y después durante 1,75 horas a 70ºC. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, se añadió agua a la mezcla de reacción. La suspensión resultante se llevó hasta pH 8 mediante adición cuidadosa de NaHCO_{3} sólido en pequeñas porciones. El precipitado formado se recogió mediante filtración, se lavó una vez con NaOH 1N, tres veces con agua y se secó a vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo y NaOH 1N, y la fase orgánica se lavó una vez más con NaOH 1N y una vez con salmuera. La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó para dar el compuesto del título (10,15 g) como un sólido blanco. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 8,43 (s, 1H), 8,92 (s, 1H). LCMS: Rt 2,73 min. (94,2%), m/z (APCI) 277 (M+H)^{+}.

Etapa 4

(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina

42

Una mezcla de 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (123 mg, 443 \mumoles), 4-(4-morfolino)anilina (118 mg, 0,664 mmoles) y N-etildiisopropilamina (116 ml, 0,664 mmoles) se calentó a reflujo en 2-propanol (3 ml) durante 4,5 horas. La mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad, y el residuo se repartió entre diclorometano y ácido cítrico (10%). La fase orgánica se lavó una vez con agua y con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó para proporcionar el compuesto del título (156 mg, 94%) como un sólido amarillo. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,11 (m, 4H), 3,78 (m, 4H), 6,97 (d, 2H), 7,82 (d, 2H), 7,87 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,93 (br s, 1H). LCMS, Rt 3,32 min. (96,8%) m/z (APCI) 375 (M+H)^{+}.

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Etapa 5

(4-Morfolin-4-ilfenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

43

Una suspensión de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina (220 mg, 0,586 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (171 mg, 0,879 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (68 mg, 59 \mumoles) y NaO'Bu (225 mg, 2,34 mmoles) en 4 ml de DMF/agua (3:1) se desgasificó durante 5 min. en un tubo cerrado herméticamente. La mezcla de reacción se calentó en el tubo cerrado herméticamente a 90ºC toda la noche. Después de la evaporación de los disolventes, el residuo se recogió mediante filtración, se lavó con agua (3x) y con éter (2x), y se secó a vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, DCM/MeOH 96:4) produciendo el compuesto del título (76 mg, 36%) como un sólido amarillo. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,11 (4H, m), 3,79 (4H, m), 6,98 (2H, d), 7,90 (2H, d), 8,17 (1H, s), 8,35 (1H, br s), 8,64 (1H, br s), 8,75 (1H, s), 9,73 (1H, br s). LCMS: Rt 2,68 min. (97,7%) m/z (APCI) 363 (M+H)^{+}.

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Compuesto 4

4-(8-(4-(4-metilpiperazin-1-il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5a]pirazin-5-il)piridin-2(1H)-ona

Etapa 1

(5-(2-metoxi-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina

44

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (80 mg, 0,206 mmoles), ácido 2-metoxipiridin-4-borónico (63 mg, 0,412 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (0,052 mmoles) y Na_{2}CO_{3} 1,5N (1,1 ml, 1,65 mmoles) en DMF/dioxano 2:1 (2,2 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, usando DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:4, y las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se evaporaron para proporcionar el compuesto del título (40 mg, 47%). HPLC (254 nm): Rt 2,26 min. (65%).

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Etapa 2

45

Una disolución de [5-(2-metoxi-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (40 mg, 0,096 mmoles) e hidrocloruro de piridina (55 mg, 0,48 mmoles) en agua (1 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con 96:4 DCM:NH_{3} (7M en MeOH). Se aisló el compuesto del título (23 mg, 60%).

Se disolvieron 11 mg (0,0273 mmoles) del compuesto de la base libre en la mínima cantidad de MeOH/DCM, (que se puso a reflujo hasta disolución), y se añadió ácido metanosulfónico 0,1 M (0,273 ml) en MeOH. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se trituró varias veces con una mezcla 1:1 de acetato de etilo-éter dietílico y DCM-éter dietílico, se filtró y se secó a vacío para proporcionar el compuesto diana como una sal de mesilato (13 mg, 99%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,21 (3H, s), 2,91 (3H, s, MsOH), 3,00 (2H, t), 3,18-3,26 (2H, m), 3,58 (2H, d), 3,90 (2H, d), 6,83 (1H, s), 7,07 (2H, d), 7,25 (1H, s), 7,53 (1H, d), 7,93 (2H, d), 8,14 (1H, s), 8,76 (1H, s), 9,69 (1H, br s), 10,21 (1H, s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Rt 1,71 min. (97,5%), m/z (APCI) 403 (M+H)^{+}.

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Compuesto 6

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico

Etapa 1

(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina

46

Una mezcla de 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (2 g, 7,20 mmoles), 4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamina (1,65 g, 8,64 mmoles) y N-etildiisopropil-amina (1,5 ml, 8,64 mmoles) se calentó a 80ºC en 2-propanol (50 ml) durante 8 horas. La mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad, y el residuo se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se evaporaron para proporcionar el compuesto del título (1,41 g) como un sólido gris. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,27 (3H, s), 2,54 (4H, m), 3,14 (4H, m), 6,97 (2H, d), 7,80 (2H, d), 7,87 (1H, s), 8,72 (1H, s), 9,92 (1H, br s). LCMS: Rt 2,07 min. (77,4%), m/z (APCI) 388 (M+H)^{+}.

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Etapa 2

Amida del ácido 4-bromo-tiofen-2-carboxílico

47

Una disolución de ácido 4-bromo-tiofen-2-carboxílico (2,0 g, 9,66 mmoles), hidrocloruro de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (2,04 g, 10,63 mmoles) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (1,44 g, 10,63 mmoles) en DMF (20 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió entonces hasta 0ºC, y se añadió NH_{3} ac. (1 ml, 17,3 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas adicionales, después se añadió agua a la mezcla de reacción, y el precipitado resultante se recogió mediante filtración y se lavó con NaOH 1M, H_{2}O y éter de petróleo. El compuesto del título se aisló como un sólido blanco (1,56 g, 78%).

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Etapa 3

Amida del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxílico

48

La amida del ácido 4-bromo-tiofen-2-carboxílico (1,3 g, 6,34 mmoles), el bis(pinacolato)diboro (3,22 g, 12,7 mmoles), PdCl_{2}dppf (0,26 g, 0,318 moles) y KOAc (1,87 g, 19,10 mmoles) se suspendieron en dioxano (20 ml), se purgaron con nitrógeno durante 5 minutos y después se calentaron a 90ºC toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se filtraron a través de MgSO_{4} y se evaporaron. El producto del título se cristalizó en EtOAc-éter de petróleo (2,135 g, 77% puro mediante LCMS).

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Etapa 4

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico

49

Una suspensión de 5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (100 mg, 258 mmoles), amida del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxílico (130 mg, 516 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (74 mg, 64,5 mmoles) en Na_{2}CO_{3} acuoso (1,37 ml, 1,5 M, 2,06 mmoles) y DMF/dioxano 2/1 (2,75 ml) se desgasificó durante 5 min. en un tubo de reacción. El tubo se cerró herméticamente, y la mezcla de reacción se calentó a 90ºC toda la noche. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. El precipitado se recogió mediante filtración y se lavó con agua (1x) y éter (2x) y se secó a vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice, DCM/MeOH/NH_{3} 96:4) produciendo el compuesto del título (43 mg) como un sólido amarillo. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,26 (3H, s), 2,50 (4H, m), 3,15 (4H, m,), 6,99 (2H, d), 7,60 (1H, br s), 7,88 (2H, d), 8,10 (2H, m), 8,48 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,79 (1H, s), 9,97 (1H, br s). LCMS: Rt 1,99 min. (97,6%), m/z (APCI) 435 (M+H)^{+}.

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Compuesto 9

Amida del ácido 5-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico

Etapa 1

Amida del ácido 5-bromo-tiofen-2-carboxílico

50

Una disolución de ácido 5-bromo-tiofen-2-carboxílico (4,51 g, 21,78 mmoles), hidrato de 3-hidroxibenzotriazol (3,24 g, 23,96 mmoles), 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (4,6 g, 23,96 mmoles) en DMF (70 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió entonces hasta 0ºC, y se añadió NH_{3} ac. al 35% (2,2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con NaHCO_{3} 1N, y salmuera. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para proporcionar el compuesto del título (3,78 g, 84%). HPLC (254 nm): Rt 2,46 min. (96,5%).

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Etapa 2

Amida del ácido 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxílico

51

Se suspendieron amida del ácido 5-bromo-tiofen-2-carboxílico (0,5 g, 2,426 mmoles), bis(pinacolato)diboro (678 mg, 2,669 mmoles), PdCl_{2}dppf (59 mg, 0,072 mmoles) y KOAc (0,714 g, 7,28 mmoles) en dioxano (5 ml), se purgaron con nitrógeno durante 5 minutos, y después se calentaron a 85ºC toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se filtraron a través de MgSO_{4} y se evaporaron a vacío para proporcionar el compuesto del título (417 mg, 68%).

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Etapa 3

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52

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (100 mg, 0,258 mmoles), amida del ácido 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxílico (130 mg, 0,516 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (74 mg, 0,0645 mmoles) en Na_{2}CO_{3} acuoso 1,5M (1,37 ml, 2,06 mmoles) y dioxano (2,75 ml). Después de la evaporación del disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:6 para proporcionar el compuesto del título (23 mg, 21%). LCMS: Rt 1,94 min. (97,9%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,26 (3H, s), 2,49 (4H, m), 3,14 (4H, m), 6,98 (2H, d), 7,51 (1H, br s), 7,85-7,89 (2H, m), 8,03 (2H, d), 8,10 (1H, br s), 8,38 (1H, s), 8,82 (1H, s), 10,10 (1H, s). LCMS: Rt 1,94 min.,(97,9%), m/z (APCI) 435 (M+H)^{+}.

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Compuesto 12

5-(5-metil-1H-pirazol-4-il)-N-(4-morfolinofenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

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53

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (0,2 g, 0,53 mmoles), 5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (222 mg, 1,06 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (0,154 mg, 0,134 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (2,84 ml, 4,26 mmoles) y dioxano (8,5 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 y 97:3 para dar el compuesto del título (15 mg, 7,5%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (0,398 ml) proporcionó el compuesto del título (15 mg) como un sólido verde pálido. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,41 (3H, s, MsOH), 2,46 (3H, s), 3,20 (4H, m), 3,71 (4H, m), 7,11 (2H, d), 7,74 (1H, s), 7,97 (2H, d), 8,15 (1H, s), 8,69 (1H, s), 9,88 (1H, s). LCMS: Rt 2,41 min. (98,3%), m/z (APCI) 377 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 15

Amida del ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico

54

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (0,2 g, 0,53 mmoles), amida del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxílico (0,27 mg, 1,06 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (0,15 mg, 0,133 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (2,84 ml, 4,26 mmoles) y dioxano (10 ml). La mezcla de reacción se repartió entre agua y acetato de etilo. Se formó un precipitado, se recogió mediante filtración y se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM:MeOH 95:5 para dar el compuesto del título (84,1 mg, 37,4%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,13 (4H, m), 3,79 (4H, m), 7,01 (2H, d), 7,60 (1H, br s), 7,91 (2H, d), 8,10 (2H, s), 8,48 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,79 (1H, s), 9,96 (1H, s). LCMS: Rt 2,61 min. (97,1%), m/z (APCI) 422 (M+H)^{+}.

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Compuesto 16

5-(5-metil-1H-pirazol-4-il)-N-(4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

Etapa 1

5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol

55

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 86, etapa 2, usando 4-bromo-5-metil-1H-pirazol (3 g, 18,6 mmoles), bis(pinacolato)diboro (8,52 g, 33,5 mmoles), PdCl_{2}dppf (913 mg, 1,118 mmoles) y KOAc (5,49 mg, 55,9 mmoles) en dimetilsulfóxido (30 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 7:3 seguido de 1:1 para proporcionar 5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (3,87 g, 100%).

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Etapa 2

56

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (132 mg, 0,340 mmoles), 5-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (141 mg, 0,68 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (98 mg, 0,085 mmoles) y Na_{2}CO_{3} 1,5N (1,81 ml, 2,72 mmoles) en dioxano (5,4 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 95:5, seguido de trituración con éter dietílico y con éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título (9 mg, 7%) como un sólido verde pálido. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,27 (3H, s), 2,38-2,49 (7H, m), 3,14 (4H, m), 6,97 (2H, d), 7,70 (1H, s), 7,88 (2H, d), 7,99 y 8,43 (1H, br s), 8,68 (1H, s), 9,71 (1H, s), 12,92 y 12,98 (1H, br s).

La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1 M (0,231 ml) produjo el compuesto diana (11 mg). LCMS: Rt 1,78 min. (86%), m/z (APCI) 390 (M+H)^{+}.

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Compuesto 17

(3-Fluoro-4-morfolinofenil)-5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-alpirazin-8-amina

Etapa 1

(5-Bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(3-fluoro-4-morfolin-4-il-fenil)-amina

57

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,5 g, 1,799 mmoles), 3-fluoro-4-morfolin-4-il-fenilamina (0,53 g, 2,70 mmoles), y DIPEA (0,470 ml, 2,70 mmoles) en 2-propanol (6 ml). La mezcla de reacción se repartió entre disolución acuosa de ácido cítrico al 10% y DCM. La fase orgánica se separó y se lavó con agua y con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto del título (697 mg, 98%), que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional. LCMS: Rt 3,52 min. (98,2%).

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Etapa 2

N-(3-fluoro-4-morfolinofenil)-5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

58

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(3-fluoro-4-morfolin-4-il-fenil)-amina (100 mg, 0,254 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (99 mg, 0,51 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (73 mg, 0,063 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,36 ml, 2,03 mmoles) y dioxano (4 ml). El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 y mediante trituración con éter dietílico y con éter de petróleo para producir el compuesto diana (43 mg, 44%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,01 (4H, m), 3,79 (4H, m), 7,08 (1H, t), 7,79 (1H, d), 8,06 (1H, d), 8,26 (1H, s), 8,38 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,79 (1H, s), 10,03 (1H, s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Rt 2,83 min. (99%), m/z (APCI) 381 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 19

5-(5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolinobenzamida

Etapa 1

5-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il-benzamida

59

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (250 mg, 0,90 mmoles), 5-amino-2-morfolin-4-ilbenzamida (299 mg, 1,35 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,24 ml, 1,35 mmoles) en 2-propanol (7 ml). La trituración con ^{i}PrOH y Et_{2}O proporcionó el compuesto del título (273 mg, 73%).

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Etapa 2

60

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 5-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il-benzamida (140 mg, 0,33 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (130 mg, 0,67 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4}, (96 mg, 0,083 mmoles) en K_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,93 ml) y dioxano (3,44 ml). El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1, después 97:3 y después 95:5 para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (40,5 mg, 30%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,96 (4H, m), 3,79 (4H, m), 7,28 (2H, d), 7,45 (1H, m), 7,54 (1H, br s), 8,01-8,09 (1H, dd), 8,25 (1H, s), 8,50 (1H, d), 8,69 (1H, br s), 8,78 (1H, s), 9,98 (1H, s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Rt 2,23 min. (96,9%), m/z (APCI) 406 (M+H)^{+}.

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Compuesto 21

4-(8-(4-(2-morfolinoetoxi)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofen-2-carboxamida

61

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-amina (113 mg, 0,27 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxamida (136 mg, 0,537 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (78 mg, 0,067 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,44 ml, 2,16 mmoles) y dioxano (4,3 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3 para producir el compuesto del título (65 mg, 52%). LCMS: Rt 1,98 min. (98,9%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (1,1385 ml) proporcionó el compuesto del título (50 mg, 95%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,37 (3H, s, MsOH), 3,21-3,64 (6H, m), 3,76 (2H, t), 4,05 (2H, d), 4,40 (2H, m), 7,09 (2H, d), 7,61 (1H, br s), 8,02 (2H, d), 8,11 (2H, s), 8,48 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,82 (1H, s), 9,91 (1H, br s), 10,09 (1H, s). LCMS: Rt 1,98 min. (97,7%), m/z (APCI) 466 (M+H)^{+}.

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Compuesto 22

5-(8-(4-(2-morfolinoetoxi)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofen-2-carboxamida

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62

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-amina (118 mg, 0,28 mmoles), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxamida (142 mg, 0,56 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (81 mg, 0,07 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,5 ml, 2,24 mmoles) y dioxano (4,5 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3 para producir el compuesto del título (33 mg, 25%). LCMS: Rt 2,66 min. (99%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (0,569 ml) proporcionó el compuesto del título (24 mg, 86%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,37 (3H, s, MsOH), 3,25 (2H, m), 3,50-3,64 (4H, m), 3,76 (2H, t), 4,05 (2H, d), 4,40 (2H, m), 7,09 (2H, d), 7,51 (1H, br s), 7,87 (1H, d), 7,99-8,05 (3H, m), 8,11 (1H, br s), 8,37 (1H, s), 8,84 (1H, s), 9,92 (1H, br s), 10,21 (1H, s). LCMS: Rt 1,95 min. (98,8%), m/z (APCI) 466 (M+H)^{+}.

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Compuesto 23

(4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(2H-pirazol-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amina

Etapa 1

1-(Tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol

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63

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Se disolvió 1H-pirazol (14,3 g, 0,21 moles) en 3,4-dihidro-2H-pirano (26,74 g, 0,32 moles) en presencia de una cantidad catalítica de TFA (0,1 ml, 1,3 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 95ºC durante 5 horas, se enfrió y después se paralizó usando NaH (0,2 g, 5 mmoles). El disolvente se eliminó para dar el compuesto del título como un aceite marrón (33,3 g, 99%), que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

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Etapa 2

Ácido 1H-pirazol-2-borónico

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64

A una disolución enfriada (-78ºC) de 1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol (7,6 g, 52 mmoles) en THF (50 ml), se añadieron gota a gota nBuLi (33 ml, 2,5M en hexano, 82,5 mmoles) y triisopropilborano (12,7 ml, 55 mmoles), manteniendo la temperatura a -70ºC. La mezcla de reacción se agitó a -70ºC durante una hora, y después se dejó alcanzar temperatura ambiente durante 4 horas. Después de paralizar la reacción con HCl 2M, el disolvente se eliminó a vacío, y el pH se ajustó hasta pH 6 usando NaOH 1M. Se formó un precipitado, se recogió mediante filtración, y se lavó con tolueno y con éter de petróleo. La trituración con acetato de etilo proporcionó el compuesto diana como un sólido blanco (2,7 g, 48%), que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

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Etapa 3

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65

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(morfolin-4-il)-fenil]-amina (100 mg, 0,267 mmoles), ácido 1H-pirazol-2-borónico (60 mg, 0,535 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (93 mg, 0,08 mmoles) y Na_{2}CO_{3} (88 mg, 0,80 mmoles) en DMF (2 ml). La mezcla de reacción se colocó en un tubo aplastado y se agitó a 100ºC durante 18 horas. Después de enfriar, la mezcla se diluyó con disolución de NaHCO_{3} y se extrajo con EtOAc (4x). La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó para proporcionar un producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:4. El compuesto del título se aisló después de la trituración con éter dietílico (12,4 mg, 13%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M (0,342 ml, 0,0342 mmoles) da el compuesto diana (10 mg, 81%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,34 (3H, s, MsOH), 3,14 (4H, m), 3,81 (4H, m), 7,04 (2H, d), 7,27 (1H, m), 7,92 (3H, m), 8,24 (1H, s), 8,76 (1H, s), 9,92 (1H, s). LCMS: Rt 2,45 min. (97,6%), m/z (APCI) 363 (M+H)^{+}.

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Compuesto 28

4-(8-(4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofen-2-carboxamida

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66

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 5-bromo-N-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (100 mg, 0,24 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-tiofen-2-carboxamida (121 mg, 0,48 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (69 mg, 0,059 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,28 ml, 1,92 mmoles) y dioxano (3,84 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM y DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3 para producir el compuesto del título (68 mg, 61%) como un sólido verde pálido. La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (1,47 ml, 0,147 mmoles), seguido de trituración con DCM y éter dietílico, proporcionó el compuesto del título (67 mg, 98,5%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,35 (6H, d), 2,34 (3H, s, MsOH), 3,00 (2H, t), 3,22-3,25 (2H, m), 3,56-3,61 (3H, m), 3,89 (2H, d), 7,09 (2H, d), 7,60 (1H, br s), 7,97 (2H, d), 8,10 (2H, s), 8,48 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,81 (1H, s), 9,23 (1H, br s), 10,03 (1H, s). LCMS: Rt 2,13 min. (98,4%), m/z (APCI) 463 (M+H)^{+}.

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Compuesto 29

5-(8-(4-morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)furan-3-carboxamida

Etapa 1

Éster terc-butílico del ácido [5-(4-carbamoil-furan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico

67

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 35, etapa 3, usando éster terc-butílico del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestannanil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-carbámico (137 mg, 0,199 mmoles), 5-bromo-furan-3-carboxamida (76 mg, 0,4 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (23 mg, 0,020 mmoles) en DMF (1 ml). La purificación de la mezcla de reacción eluyendo con DCM:MeOH 98:2 y DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:4 proporcionó el compuesto del título (33 mg, 33%).

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Etapa 2

68

Una disolución de éster terc-butílico del ácido [5-(4-carbamoil-furan-2-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico (33 mg, 0,065 mmoles) en una mezcla 1:1 de DCM:TFA (2 ml) (2 gotas de agua) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de la adición de Na_{2}CO_{3} sat., se formó un precipitado, se recogió mediante filtración y se lavó con agua, con éter dietílico y con éter de petróleo. Tras secar a vacío, se aisló el compuesto del título (20 mg, 76%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M en MeOH (0,444 ml) produjo el compuesto del título (19 mg, 100%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,36 (3H, s, MsOH), 3,22 (4H, m), 3,82-3,89 (4H, m), 7,13 (2H, d), 7,36 (1H, br s), 7,86 (1H, s), 7,95 (3H, m), 8,17 (1H, s), 8,40 (1H, s), 8,84 (1H, s), 10,17 (1H, s). LCMS: Rt 2,60 min. (96,9%), m/z (APCI) 406 (M+H)^{+}.

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Compuesto 33

5-(8-(4-morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1-ona

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69

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (1,0 g, 2,67 mmoles), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (véase la descripción para el Compuesto 79) (1,03 g, 4,01 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (0,77 g, 0,67 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (14,3 ml) y dioxano (40 ml). La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 96:4 proporcionó el compuesto del título (0,895 g, 79%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,12 (4H, m), 3,79 (4H, m), 4,51 (2H, s), 7,01 (2H, d), 7,84 (1H, d), 7,92 (2H, d), 8,01 (1H, s), 8,09 (1H, d), 8,23 (1H, s), 8,72 (1H, s), 8,73 (1H, s), 10,02 (1H, s). LCMS: Rt 2,51 min. (97,8%), m/z (APCI) 428 (M+H)^{+}.

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Compuesto 34

4-(8-(4-morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)furan-2-carboxamida

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70

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (78 mg, 0,16 mmoles), amida del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-furan-2-carboxílico (100 mg, 0,34 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (60 mg, 0,052 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,1 ml, 1,68 mmoles), y dioxano (3 ml). La mezcla de reacción se repartió entre agua y acetato de etilo, el compuesto del título precipitó y se recogió mediante filtración. La purificación del sólido mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM y DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 95:5, proporcionó el compuesto del título (42 mg, 65%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M (0,82 ml) dio un sólido que se trituró con éter dietílico para proporcionar el compuesto del título (30,5 mg). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,19 (3H, s, MsOH), 3,03-3,07 (4H, m), 3,67 (4H, m), 6,99 (2H, br s), 7,43 (1H, d), 7,74-7,82 (4H, m), 8,06 (1H, br s), 8,59 (1H, br s), 8,64 (1H, s), 9,91 (1H, br s). LCMS: Rt 2,64 min. (98,1%), m/z (APCI) 406 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 35

6-(8-(4-morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-3,4-dihidroisoquinolin-1(2H)-ona

Etapa 1

Éster terc-butílico del ácido (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico

71

Una disolución de 5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(morfolin-4-il)-fenil]-amina (300 mg, 0,800
mmoles), dimetilaminopiridina (10 mg, 0,08 mmoles) y dicarbonato de di-terc-butilo (523 mg, 2,4 mmoles) en diclorometano (5 ml) se agitó a 50ºC toda la noche. La mezcla de reacción se repartió entre DCM y agua, y la capa orgánica se lavó con NaOH 1N y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar un compuesto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con DCM:MeOH 98:2 produjo el compuesto del título (352 mg, 93%). LCMS: Rt 3,45 min. (97,8%).

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Etapa 2

Éster terc-butílico del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestannanil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-carbámico

72

A una disolución enfriada (-78ºC) de éster terc-butílico del ácido (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico (370 mg, 0,78 mmoles) en THF (12 ml) se añadió cloruro de isopropilmagnesio 2M en THF (0,78 ml, 1,56 mmoles), y, después de agitar 5 minutos, se añadió cloruro de tributilestaño (0,42, 1,56 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 15 minutos y a temperatura ambiente durante 15 minutos adicionales. Tras eliminar el disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 5:1, seguido de éter de petróleo:acetato de etilo 1:1. Se aisló el compuesto del título (105 mg, 20%).

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Etapa 3

Éster terc-butílico del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-(5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-carbámico

73

A una disolución desgasificada de éster terc-butílico del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestannanil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-carbámico (100 mg, 0,15 mmoles) y 6-bromo-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona en DMF (1 ml) se añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (17 mg, 0,015 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a 90ºC toda la noche. Después de eliminar el disolvente a vacío, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con éter de petróleo:acetato de etilo 1:1 y acetato de etilo proporcionó el compuesto diana como un sólido amarillo (30 mg, 37%).

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Etapa 4

6-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona

74

Una disolución de éster terc-butílico del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-carbámico (30 mg, 0,055 mmoles) en una mezcla 1:1 de TFA:DCM (1 gota de H_{2}O) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre acetato de etilo y NaHCO_{3} sat. (ac.). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2x). Las capas orgánicas se combinaron y se evaporaron para proporcionar un residuo purificado mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo. El compuesto del título se aisló (18 mg, 75%) y se convirtió en la sal de mesilato (16,6 mg, 97%) usando ácido metanosulfónico 0,1M (0,317 ml) en MeOH.

RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,36 (3H, s MsOH), 3,04 (2H, t), 3,21 (4H, m), 3,47 (2H, t), 3,83 (4H, m), 7,11 (2H, d), 7,95-8,02 (6H, m), 8,05 (1H, s), 8,74 (1H, s), 10,09 (1H, brs). LCMS: Rt 2,81 min. (97,9%), m/z (APCI) 442 (M+H)^{+}.

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Compuesto 36

5-(8-(4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1-ona

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75

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 5-bromo-N-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (0,6 g, 1,44 mmoles), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (0,56 g, 2,16 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (0,416 g, 0,36 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (7,7 ml) y dioxano (23 ml). La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 proporcionó el compuesto del título (0,36 g, 53%) que se convirtió en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 1M en MeOH (0,77 ml). Tras la trituración con éter dietílico y DCM, el compuesto del título se aisló como un sólido (0,410 g). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,35 (6H, d), 2,35 (3H, s, MsOH), 3,04 (2H, t), 3,20-3,27 (2H, m), 3,56-3,63 (3H, m), 3,89 (2H, d), 4,52 (2H, s), 7,09 (2H, d), 7,85 (1H, d), 7,95-8,01 (3H, m), 8,10 (1H, d), 8,24 (1 H, s), 8,72 (1H, s), 8,74 (1H, s), 9,27 (1H, br s), 10,07 (1H, s). LCMS: Rt 2,93 min. (97,9%), m/z (ES^{+}) 469 (M+H)^{+}.

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Compuesto 37

{5-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-2-morfolinofenil}metanol

Etapa 1

(2-Morfolin-4-il-5-nitro-fenil)-metanol

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76

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A una disolución enfriada (0ºC) de 2-morfolin-4-il-5-nitro-benzaldehído (0,8 g, 3,39 mmoles) en MeOH (5 ml) se añadió NaBH_{4} (0,125 g, 3,39 mmoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de paralizar la reacción con agua, el disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para proporcionar el compuesto del título (870 mg), que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

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Etapa 2

(5-amino-2-morfolin-4-il-fenil)-metanol

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77

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A una disolución de (2-morfolin-4-il-5-nitro-fenil)-metanol (870 mg) en etanol (40 ml) se añadió hidróxido de paladio (87 mg), y la mezcla se agitó en un aparato Parr a una presión de hidrógeno (10 bares) durante 4 horas. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite 521, se lavó con etanol y se concentró a vacío para dar el compuesto del título (640 mg, 83%).

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Etapa 3

3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenilamina

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78

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Una disolución de (5-amino-2-morfolin-4-il-fenil)-metanol (640 mg, 3,07 mmoles), cloruro de terc-butildimetilsi-
lilo (509 mg, 3,38 mmoles) e imidazol (250 mg, 3,68 mmoles) en dimetilformamida (20 ml) se agitó a temperatura ambiente toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre agua y acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para proporcionar un producto bruto. La purificación, usando cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM seguido de una mezcla 95:5 de DCM:MeOH, proporcionó el compuesto del título como un sólido rosa (390 mg, 27%).

\newpage

Etapa 4

(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenil]-amina

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79

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Una mezcla de 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,391 g, 1,41 mmoles), 3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenilamina (0,5 g, 1,55 mmoles) y N-etildiisopropil-amina (0,27 ml, 1,55 mmoles) se calentó a 90ºC en 2-propanol (10 ml) durante 8 horas. La mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad, y el residuo se repartió entre diclorometano y agua. La fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del título (335 mg, 46%).

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Etapa 5

[5-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il-fenil]-metanol

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80

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Una disolución de 5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-morfolin-4-il-fenil]-amina (285 mg, 0,549 mmoles) en disolución 1M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (0,63 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con disolución al 10% de ácido cítrico y con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para proporcionar el compuesto del título como un sólido de color crema (100 mg, 45%).

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Etapa 6

{5-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo{1,5-a]pirazin-8-ilamino]-2-morfolinofenil}metanol

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81

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando [5-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-morfolin-4-il-fenil]-metanol (85 mg, 0,21 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (81 mg, 0,42 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (60 mg, 0,052 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,12 ml) y dioxano (2,0 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 95:3 seguido de purificación mediante HPLC preparativa de fase inversa. El compuesto del título se obtuvo como un sólido marrón claro (10 mg, 12%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,87 (4H, m), 3,77 (4H, m), 4,63 (2H, d), 5,12 (1H, t), 7,11 (1H, d), 7,84 (1H, d), 8,12 (1H, s), 8,21 (1H, s), 8,39 (1H, s), 8,69 (1H, s), 8,77 (1H, s), 9,78 (1H, s), 13,29 (1H, br s). LCMS: Rt 2,45 min. (96,3%), m/z (APCI) 393 (M+H)^{+}.

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Compuesto 41

(6-[morfolin-4-il]piridin-3-il)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

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82

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos tales como se describen para el Compuesto 120, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)amina en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,80 min. (95%), m/z (ESI) 364 (M+H)^{+}.

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Compuesto 42

[6-(4-[ciclopropilmetil]piperazin-1-il)piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

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83

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos descritos para el Compuesto 120, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-[ciclopropilmetil]piperazin-1-il)piridin-3-il]amina en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,80 min. (95%), m/z (ESI) 417 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 43

[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

84

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 120, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,77 min. (95%), m/z (ESI) 405 (M+H)^{+}.

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Compuesto 44

[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-{6-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]piridin-3-il}amina

85

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 120, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{6-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]-piridin-3-il}amina en la etapa 4.
LCMS: Rt = 0,95 min. (95%), m/z (ESI) 445 (M+H)^{+}.

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Compuesto 46

{4-[4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il]fenil}-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

86

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 120, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{4-[4-ciclopropilmetil)piperazin-1-il]fenil}amina. LCMS: Rt = 1,02 (95%), m/z (ESI) = 444 (M+H)^{+}.

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Compuesto 47

Amida del ácido 4-[8-(6-[morfolin-4-il]piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]tiofen-2-carboxílico

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87

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 167, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)amina en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,85 min. (95%), m/z (ESI) 423 (M+H)^{+}.

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Compuesto 48

(5-benzo[b]tiofen-3-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina

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88

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 120, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina y 4,4,5,5-tetrametil-2-benzo[b]tiofen-3-il-[1,3,2]dioxaborolano en la etapa 4. LCMS: Rt 0,84 min. (95%), m/z (ESI) 402 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 50

(4-morfolin-4-ilfenil)-(5-tiofen-3-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)amina

89

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 120, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-ilfenil)amina y 4,4,5,5-tetrametil-2-tiofen-3-il-[1,3,2]dioxaborolano en la etapa 4. LCMS: Rt 1,19 min. (95%), m/z (ESI) 379 (M+H)^{+}.

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Compuesto 51

[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil]-(5-tiofen-3-il-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)amina

90

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 50, usando (5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina en la etapa final. LCMS: Rt = 1,11 min. (95%), m/z (ESI) 420 (M+H)^{+}.

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Compuesto 52

5-(5-etil-1H-pirazol-4-il)-N-(4-morfolinofenil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

Etapa 1

3-etil-1H-pirazol

91

A una disolución agitada de 1-trimetilsilanil-pent-1-in-3-ona (0,5 g, 3,25 mmoles) y sal de sulfato de hidrazina (0,56 g, 4,33 mmoles) en etanol (15 ml) se añadió Na_{2}CO_{3} sat. (0,52 g, 4,87 mmoles), y la mezcla se puso a reflujo a 90ºC durante 5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua y salmuera, y se extrajo usando éter dietílico (3x). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para proporcionar un producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con éter de petróleo:acetato de etilo 90:10 proporcionó el compuesto del título (0,1196 g, 36%).

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Etapa 2

4-bromo-5-etil-1H-pirazol

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92

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A una disolución agitada de 3-etil-1H-pirazol (0,114 g, 1,186 mmoles) en ácido acético (2 ml) se añadió bromo (0,061 ml, 1,186 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se basificó con NaHCO_{3} sat., y se extrajo usando acetato de etilo (3x). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para dar el compuesto del título (0,180 g, 87%). El compuesto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

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Etapa 3

4-bromo-5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol y 4-bromo-3-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol

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93

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Se disolvió 4-bromo-5-etil-1H-pirazol (0,179 g, 1,032 mmoles) en 3,4-dihidro-2H-pirano (0,28 ml, 3,098 mmoles) en presencia de una cantidad catalítica de TFA (0,001 ml, 0,00103 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 90ºC durante 3 horas, se enfrió y después se paralizó usando NaH (1,5 mg, 0,0061 mmoles). Después de eliminar el disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla 90:10 de éter de petróleo-acetato de etilo. Las fracciones que contenían los compuestos deseados se recogieron y concentraron a vacío para proporcionar los compuestos del título (175 mg, 66%).

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Etapa 4

5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol y 3-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol

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94

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 86, etapa 2, usando 4-bromo-5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol y 4-bromo-3-etil-1-(tetrahidropiran-2-il)-1H-pirazol (168 mg, 0,65 mmoles), bis(pinacolato)diboro (331 mg, 1,3 mmoles), PdCl_{2}dppf (53 mg, 65 \mumoles) y KOAc (190 mg, 1,95 mmoles) en dimetilsulfóxido (2 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 90:10 para proporcionar los compuestos del título (61,1 mg, 31%).

\newpage

Etapa 5

{5-[5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il]-{1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina y {5-{3-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina

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95

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (0,032 g, 0,085 mmoles), 5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol y 3-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-
tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (0,52 mg, 0,17 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (0,025 mg, 0,021 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac) (0,45 ml, 0,6 mmoles) y dioxano (2 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 1:1 seguido de éter de petróleo:acetato de etilo 1:4 para producir el compuesto del título (45 mg).

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Etapa 6

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96

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Una disolución de {5-[5-etil-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina y {5-[3-etil-1-(tetrahidropiran-2-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (40 mg, 0,077 mmoles) y HCl conc. (0,3 ml) en MeOH (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Después de eliminar el disolvente, el residuo sólido se repartió entre acetato de etilo y NaHCO_{3} sat. El sólido no disuelto se recogió mediante filtración, se lavó con agua, con éter dietílico y con éter de petróleo, y se secó para proporcionar el compuesto del título (5 mg, 17%). La conversión en la sal de mesilato usando ácido metanosulfónico 0,1M (0,128 ml) proporcionó el compuesto del título (5,6 mg, 89%) como un sólido. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,13 (3H, m), 2,29 (3H, s, MsOH), 2,74 (2H, m), 3,29 (4H, m), 3,77 (4H, m), 7,06 (2H, m), 7,62 (1H, s), 7,89 (2H, d), 8,00 (1H, s), 8,61 (1H, s), 9,83 (1H, s). LCMS: Rt 2,69 min. (98,4%), m/z (APCI) 391 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 53

6-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-1,1-dioxo-1,2-dihidro-1\lambda^{6}-benzo[d]isotiazol-3-ona

Etapa 1

1,1-Dioxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidro-1\lambda^{6}-benzo[d]isotiazol-3-ona

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97

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 86, etapa 2, usando 6-bromo-1,1-dioxo-1,2-dihidro-1\lambda_{6}-benzo[d]isotiazol-3-ona (0,5, 1,9 mmoles), bis(pinacolato)diboro (0,53 g; 2,1 mmoles), PdCl_{2}dppf (0,047 g, 0,058 mmoles) y KOAc (0,56 g, 5,7 mmoles) en dioxano (10 ml). El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre DCM y agua. La capa orgánica se lavó con NaHCO_{3} sat. y HCl 2M, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó para proporcionar el compuesto del título (990 mg, 169%), usado en la siguiente etapa sin purificación adicional.

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Etapa 2

Éster terc-butílico del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1,1,3-trioxo-2,3-dihidro-1H-1\lambda_{6}-benzo[d]isotiazol-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-carbámico

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98

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando el éster terc-butílico del ácido (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico (170 mg, 0,36 mmoles), 1,1-dioxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1,2-dihidro-1\lambda_{6}-benzo[d]isotiazol-3-ona (374 mg, 0,72 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (100 mg, 0,082 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (2 ml, 3 mmoles) y dioxano (6 ml). La purificación de la mezcla de reacción mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de petróleo:acetato de etilo 1:1 proporcionó un compuesto todavía impuro. Una segunda cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:MeOH 10:1 proporcionó el compuesto del título (91 mg, 44%).

\newpage

Etapa 3

6-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-1,1-dioxo-1,2-dihidro-1\lambda_{6}-benzo[d]isotiazol-3-ona

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99

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Una suspensión de éster terc-butílico del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1,1,3-trioxo-2,3-dihidro-1H-1\lambda^{6}-benzo[d]isotiazol-6-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-carbámico (100 mg, 0,173 mmoles) en HCl 4M (2,5 ml) en dioxano se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se trituró con DCM, éter dietílico y éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título (84 mg, 100%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,25 (4H, m), 3,85 (4H, m), 7,20 (2H, d), 7,88 (2H, d), 8,16 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,58 (1H, d), 8,82 (2H, s), 8,96 (1H, s), 10,31 (1H, s). LCMS: Rt 2,31 min. (95,7%), m/z (APCI) 478 (M+H)^{+}.

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Compuesto 54

Amida del ácido 4-{8-[6-(4-[ciclopropilmetil]piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}tiofen-2-carboxílico

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100

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos descritos para el compuesto 120, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-[ciclopropilmetil]piperazin-1-il)piridin-3-il]amina en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,85 min. (95%), m/z (ESI) 476 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 55

Amida del ácido 4-{8-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}tiofen-2-carboxílico

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101

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 167, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,82 min. (95%), m/z (ESI) 464 (M+H)^{+}.

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Compuesto 56

Amida del ácido 4-(8-{6-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]-piridin-3-ilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofen-2-carboxílico

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102

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 167, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{6-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]-piridin-3-il}amina en la etapa 4.
LCMS: Rt = 0,99 min. (95%), m/z (ESI) 504 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 57

Amida del ácido 4-(8-{4-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]-fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofen-2-carboxílico

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103

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 58, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-{4-[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]fenil}amina. LCMS: Rt = 1,07 min. (95%), m/z (ESI) 503 (M+H)^{+}.

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Compuesto 58

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-(ciclopropilmetil)piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}tiofen-2-carboxílico

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104

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 46, usando ácido 2-(aminocarbonil)tiofen-4-borónico. LCMS: Rt = 0,93 (95%), m/z (ESI) 475 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 59

[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

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105

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 46, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina. LCMS: Rt = 0,84 (95%), m/z (ESI) 402 (M+H)^{+}.

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Compuesto 60

[6-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

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106

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos descritos para el Compuesto 120, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,76 min. (95%), m/z (ESI) 403 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 61

Amida del ácido 4-[8-(4-morfolin-4-ilfenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]tiazol-2-carboxílico

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107

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 73, usando amoniaco (7 M en McOH) como se usa en la etapa 3. LCMS: Rt = 1,00 min. (95%), m/z (ESI) 423 (M+H)^{+}.

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Compuesto 62

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}tiazol-2-carboxílico

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108

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 61, usando (5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina en la etapa final. LCMS: rt = 0,96 min. (95%), m/z (ESI) 464 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 63

Amida del ácido 4-(8-{4-[1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il]fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofen-2-carboxílico

Etapa 1

1-trifluoroacetil-4-(4-nitrofenil)piperidina

109

Se agitaron trietilamina (1,0 ml, 7,3 mmoles) y 4-(4-nitrofenil)piperidina (1,0 g, 4,8 mmoles) en DCM (25 ml) a 0ºC en N_{2}, y se añadió anhídrido trifluoroacético (0,81 ml, 5,8 mmoles). La mezcla se agitó durante tres días, dejando que la temperatura se calentara hasta rt. La disolución se diluyó entonces con DCM (50 ml) y se lavó con agua (2 x 15 ml), NaHCO_{3} (50% sat. ac., 2 x 15 ml) y salmuera (15 ml). El disolvente se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para proporcionar el compuesto deseado (1,46 g, 4,66 mmoles).

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Etapa 2

1-(2,2,2-tritluoroetil)-4-(4-nitrofenil)piperidina

110

Una disolución de 1-trifluoroacetil-4-(4-nitrofenil)piperidina (1,42 g, 4,7 mmoles) en THF (15 ml) se agitó en un matraz de 2 bocas de 25 ml al que se le ajusta un condensador y embudo de adición igualador de la presión. El sistema se inundó con N_{2}, se añadió NaBH_{4} (210 mg, 5,6 mmoles), y el matraz se enfrió hasta 0ºC. Se añadió entonces gota a gota una disolución de yodo (600 mg, 2,3 mmoles) en THF (5 ml) durante 20 minutos, después de lo cual se retiró el embudo de adición y la mezcla se calentó a reflujo toda la noche. La suspensión amarilla clara resultante se enfrió hasta rt, y se añadió MeOH (1,5 ml) con cuidado, provocando el desprendimiento vigoroso de un gas. La evaporación de los disolventes proporcionó el compuesto del título, que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 3

4-(1-(2,2,2-tritluoroetil)piperidin-4-il]fenilamina

111

Se añadieron formiato de amonio (1,38 g, 22 mmoles) y Pd al 10%/C (230 mg, 0,2 mmoles) a una disolución de 1-(2,2,2-trifluoroetil)-4-(4-nitrofenil)piperidina (1,26 g, 4,4 mmoles) en EtOH (10 ml) y EtOAc (10 ml). La suspensión se calentó a reflujo durante 24 horas, añadiendo porciones adicionales de formiato de amonio (2 g) después de 4 h y 8 h. La mezcla se filtró a través de celita y se evaporó para proporcionar un sólido naranja. Este sólido se repartió entre DCM (40 ml) y agua (20 ml), y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 20 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron a presión reducida para proporcionar N-{4-[1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il]fenil}formamida como un sólido naranja pálido (980 mg).

Una disolución de la formamida en MeOH (20 ml) se agitó a rt y se añadió HCl (conc., 1 ml). La disolución de color violeta intenso se calentó a reflujo durante 1 h, se enfrió y se evaporó el MeOH. El residuo se agitó con agua (20 ml), y se añadió NaHCO_{3} (sat. ac.) hasta que cesó el burbujeo. La mezcla se extrajo con DCM (20 ml, 2 x 10 ml), y los extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron a presión reducida para proporcionar el compuesto del título como un sólido naranja (870 mg).

Este material se usó para preparar la amida del ácido 4-(8-{4-[1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il]fenilamino}-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)tiofen-2-carboxílico usando métodos análogos a los usados para el Compuesto 89.

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112

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LCMS: Rt 2,11 min. (100%), m/z (ESI) 502 (M+H)^{+}.

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Compuesto 65

5-(8-(4-(2-morfolinoetoxi)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1-ona

Etapa 1

(5-Bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-amina

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113

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Según el procedimiento descrito para el Compuesto 6, etapa 1, se agitaron 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,5 g, 1,799 mmoles), 4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenilamina (0,6 g, 4,5 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,47 ml, 2,7 mmoles) en 2-propanol (6 ml) a 95ºC toda la noche. Después de la evaporación del disolvente, el residuo se disolvió en DCM y se lavó con agua (2x) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar un aceite que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con una mezcla 97:3 de DCM:MeOH da el compuesto del título (650 mg 86%) como un sólido amarillo claro. LCMS: Rt 2,06 min. (97,7%).

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Etapa 2

5-(8-(4-(2-morfolinoetoxi)fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1-ona

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114

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-amina (80 mg, 0,19 mmoles), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (74 mg, 0,29 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (55 mg, 0,047 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (1,02 ml, 1,53 mmoles) y dioxano (3 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM y una mezcla 97:3 de DCM:NH_{3} (7M en MeOH). Tras la trituración usando éter dietílico, el compuesto del título se aisló como un sólido (61,9 mg, 69%). La conversión del material en la sal de mesilato, usando ácido metanosulfónico 1M (0,134 ml) en MeOH, proporcionó el compuesto del título (57,1 mg). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,40 (3H, s, MsOH), 3,25-3,38 (2H, m), 3,60-3,78 (4H, m), 3,84 (2H, t), 4,09 (2H, d), 4,45 (2H, m), 4,56 (2H, s), 7,14 (2H, d), 7,90 (1H, d), 8,05-8,19 (4H, m), 8,28 (1H, s), 8,76 (1H, br s), 8,79 (1H, s), 10,00 (1H, br s), 10,16 (1H, s). LCMS: Rt 1,98 min. (99,1%), m/z (APCI) 472 (M+H)^{+}.

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Compuesto 67

N-(2-fluoro-4-morfolinofenil)-5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina

Etapa 1

(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(2-fluoro-4-morfolin-4-il-fenil)-amina

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115

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,105 g, 0,89 mmoles), 2-fluoro-4-morfolin-4-il-fenilamina (93 mg, 0,474 mmoles), DIPEA (0,123 ml, 0,706 mmoles) y 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octano (53 mg, 0,472 mmoles) en 2-propanol (2 ml). La mezcla de reacción se repartió entre DCM y disolución al 10% de ácido cítrico (ac.), la capa orgánica se separó y se lavó con disolución al 10% de ácido cítrico, agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. El compuesto del título se aisló como un sólido rojo pálido (77 mg, 42%) y se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS: Rt 3,48 min. (89%).

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Etapa 2

116

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-(2-fluoro-4-morfolin-4-il-fenil)-amina (80 mg, 0,203 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (79 mg, 0,406 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (59 mg, 0,051 mmoles) en
Na_{2}CO_{3} 1,5N (1,09 ml, 1,62 mmoles) y dioxano (3,25 ml). La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se evaporaron a vacío para proporcionar un sólido que se trituró con éter dietílico y con éter de petróleo para producir el compuesto del título (29 mg, 38%). LCMS: Rt 2,90 min. (96%).

La conversión en la sal de mesilato usando disolución 0,1 M de ácido metanosulfónico en MeOH (0,762 ml, 0,076 mmoles) proporcionó el compuesto del título (35 mg). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 2,36 (3H, s, MsOH), 3,19 (4H, m), 3,79 (4H, m), 6,84-6,94 (2H, m), 7,54 (1H, t), 8,08 (1H, s), 8,48 (2H, s), 8,76 (1H, s), 9,31 (1H, s). LCMS: Rt 2,91 min. (95,4%), m/z (APCI) 381 (M+H)^{+}.

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Compuesto 70

(4-(8-(4-morfolinofenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)-1H-pirazol-5-il)metanol

Etapa 1

4-bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1H-pirazol

117

Una disolución de (4-bromo-2H-pirazol-3-il)-metanol (0,64 mg, 3,63 mmoles), cloruro de terc-butildimetilsililo (0,82 g, 5,45 mmoles) e imidazol (0,42 g, 6,18 mmoles) en N,N-dimetilformamida (20 ml) se agitó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla de reacción se diluyó con una mezcla 50:50 de éter dietílico:acetato de etilo y se lavó con agua (3x). Las capas orgánicas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 80:20 para proporcionar el compuesto del título (1,035 g, 98%).

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Etapa 2

4-bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol y 4-bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol

118

Se disolvió 4-bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1H-pirazol (1 g, 3,45 mmoles) en 3,4-dihidro-2H-pirano (0,944 ml, 10,34 mmoles) en presencia de una cantidad catalítica de TFA (0,0026 ml, 0,035 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 90ºC durante 18 horas, se enfrió y después se paralizó usando NaH (4,69 mg, 0,206 mmoles). Después de eliminar el disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con una mezcla 95:5 de éter de petróleo-acetato de etilo, seguido de éter de petróleo-acetato de etilo 90:10. Las fracciones que contenían los compuestos deseados se recogieron y se concentraron a vacío para proporcionar 4-bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol y 4-bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol (724 mg, 56%).

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Etapa 3

Éster terc-butílico del ácido {5-[5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico y éster terc-butílico del ácido {5-{3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-carbámico

119

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 35, etapa 3, usando éster terc-butílico del ácido (4-morfolin-4-il-fenil)-(5-tributilestannanil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-carbámico (210 mg, 0,30 mmoles), 4-bromo-3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol y 4-bromo-5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazol (170 mg, 0,45 mmoles) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (35 mg, 0,030 mmoles) en DMF (4 ml). El compuesto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo 7:3 y después 3:7 para proporcionar los compuestos del título (62,5 mg).

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Etapa 4

120

Una disolución de {5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidro-piran-3-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina y {5-[5-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-1-(tetrahidropiran-3-il)-1H-pirazol-4-il]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina (53,6 mg, 0,077 mmoles) y HCl conc. (0,27 ml) en MeOH (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de eliminar el disolvente, el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se lavó con acetato de etilo (3x), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. El residuo se disolvió en HCl 4M en dioxano, se concentró a vacío y después se repartió entre acetato de etilo y NaHCO_{3} sat. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar un compuesto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. El compuesto del título se aisló eluyendo con EtOAc y una mezcla 95:5 de DCM:MeOH (5,4 mg, 18%).

RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,11 (4H, m), 3,79 (4H, m), 4,65 (2H, d), 5,25 y 5,53 (1H, br s), 6,99 (2H, m), 7,84 y 8,51 (1H, br s), 7,92 (2H, d), 8,12 (1H, d), 8,70 (1H, s), 9,74 (1H, s), 13,12 y 13,23 (1H, br s). LCMS: Rt 2,26 min. (96,2%), m/z (APCI) 393 (M+H)^{+}.

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Compuesto 73

Metilamida del ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico

Etapa 1

2,4-dibromotiazol

121

Se mezclaron en nitrógeno como sólidos tiazolidinona (3,43 g, 29,32 mmoles) y POBr_{3} (25 g, 87,96 mmoles, 3 equiv.). La mezcla de reacción se calentó entonces hasta 110ºC con agitación durante 3 h provocando la formación de un sirope negro. La mezcla de reacción se dejó entonces enfriar hasta la temperatura ambiente y se añadió con mucha cuidado una mezcla de agua/hielo (200 ml). La suspensión gris resultante se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml), las capas orgánicas se combinaron, se filtraron a través de un tapón de sílice y se evaporaron para proporcionar el compuesto del título como un aceite naranja (4 g, 57%), que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional.

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Etapa 2

Éster etílico del ácido 4-bromotiazol-2-carboxílico

122

A una disolución de dibromotiazol (1 g, 4,15 mmoles) en THF (15 ml) a 0ºC se añadió gota a gota una disolución de iPrMgCl en THF (2 M, 2,3 ml, 4,57 mmoles, 1,10 equiv.). La reacción se agitó a 0ºC durante 0,25 h. A la disolución naranja resultante se añadió, vía una cánula, carbonato de dietilo (3 ml) en THF (5 ml). La disolución verde resultante se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 0,5 h, en cuyo momento la reacción se paralizó añadiendo NH_{4}Cl saturado. El compuesto del título se purificó mediante LC usando ciclohexano/DCM 6/4 como eluyente, para proporcionar 514,2 mg (52%) del compuesto del título como un sólido pulverulento amarillo claro.

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Etapa 3

Metilamida del ácido 4-bromotiazol-2-carboxílico

123

Se disolvió éster etílico del ácido 4-bromotiazol-2-carboxílico (500 mg, 2,13 mmoles) en metanol (1 ml), y se añadió metilamina en metanol (10 ml). La mezcla se agitó toda la noche a temperatura ambiente. La evaporación del disolvente a presión reducida proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo. LCMS: Rt 0,92 min. (100%) m/z (ESI) 219/221 (M+H)^{+}.

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Etapa 4

124

La metilamida del ácido 4-bromotiazol-2-carboxílico se convirtió en el boronato de una manera análoga a la descrita para el Compuesto 6, Etapa 3. El compuesto del título se preparó entonces usando métodos según se describen para el Compuesto 120'', etapa 4. LCMS: Rt = 1,06 min. (95%), m/z (ESI) 437 (M+H)^{+}.

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Compuesto 79

5-(8-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1-ona

Etapa 1

Éster metílico del ácido 4-bromo-2-bromometil-benzoico

125

Se disolvió ácido 4-bromo-2-metil-benzoico (4,6 g, 21,39 mmoles) en HCl 2M en MeOH y se puso a reflujo durante 3 horas. El disolvente se evaporó para dar el éster metílico del ácido 4-bromo-2-metil-benzoico (4,24 g, 86%). Este intermedio (18,51 mmoles) se disolvió en tetracloruro de carbono (100 ml), y se añadió N-bromosuccinimida (NBS) (5,57 g, 24,06 mmoles). Después se añadió AIBN (122 mg, 740 \mumoles), y la mezcla se purgó con nitrógeno durante 5 min. La mezcla de reacción se puso a reflujo entonces durante 4 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró, y el filtrado se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, éter de petróleo/acetato de etilo 2:1) para dar el compuesto del título (3,42 g, 60%).

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Etapa 2

5-bromo-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

126

El éster metílico del ácido 4-bromo-2-bromometil-benzoico (0,5 g, 16,2 mmoles) se trató con amoniaco metanólico (10 ml, NH_{3} 7N en MeOH) durante 5 minutos a 90ºC. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, se formó un precipitado, se recogió mediante filtración y se lavó con una pequeña cantidad de metanol para proporcionar el compuesto del título como un sólido incoloro (224 mg, 65%). RMN ^{1}H (400 MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 4,41 (2H, s), 7,64 (1H, d), 7,70 (1H, d), 7,87 (1H, s), 8,67 (1H, br s). LCMS: Rt 2,49 min, (99,6%), m/z (APCI) 212 (M+H)^{+}.

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Etapa 3

5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

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127

Se suspendieron 5-bromo-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (230 mg, 1,08 mmoles), bis(pinacolato)diboro (300 mg, 1,18 mmoles), PdCl_{2}dppf (25 mg, 31 \mumoles) y KOAc (320 mg, 3,26 mmoles) en dioxano (4 ml), se purgaron con nitrógeno durante 5 minutos y después se calentaron a 85ºC toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x), y las fases orgánicas combinadas se lavaron una vez con salmuera, se filtraron a través de MgSO_{4} y se evaporaron. El residuo sólido se trituró con hexano y se secó a vacío para producir el compuesto del título (185 mg, 66%) como un sólido gris. RMN ^{1}H (400MHz, CDCl_{3}) \delta (ppm) 1,37 (12H, s), 4,45 (2H, s), 6,38 (1H, br s), 7,87 (1H, d), 7,93 (2H, m).

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Etapa 4

1-isopropil-4-(5-nitro-piridin-2-il)-piperazina

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128

A una disolución de 2-cloro-5-nitropiridina (2,5 g, 15,7 mmoles) en THF (25 ml) se añadieron 1-isopropilpiperazina (2,01 g, 15,7 mmoles) y K_{2}CO_{3} (3,25 g, 23,6 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a 50ºC durante 4 horas y después a 70ºC toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el sólido naranja resultante se trituró usando éter de petróleo-éter dietílico 10:1. El compuesto aislado (3,7 g, 94%) se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

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Etapa 5

6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-il-amina

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129

Se disolvió 1-isopropil-4-(5-nitro-piridin-2-il)-piperazina (0,9 g, 3,6 mmoles) en MeOH (20 ml), y se añadió dicloruro de estaño (II) dihidratado (4 g, 18 mmoles). La mezcla se enfrió usando un baño de agua, y se añadió HCl conc. (4 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. Después de eliminar el metanol, la disolución amarilla clara resultante se basificó usando NaOH conc. (pH 11), y se formó un precipitado blanco. El sólido se recogió mediante filtración, y el agua se extrajo con éter dietílico (5x). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y se concentraron a vacío para proporcionar un aceite naranja que cristaliza al dejar reposar para proporcionar un sólido naranja (0,68 g, 86%).

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Etapa 6

5-bromo-8-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-amina

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130

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,188 g, 0,68 mmoles), 6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamina (0,180 g, 0,816 mmoles) y N-etildiisopropil-amina (0,20 ml, 1,02 mmoles) en 2-propanol (2 ml). La purificación del material bruto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, usando DCM seguido de DCM:MeOH 95:5, proporcionó el compuesto del título como un sólido marrón claro (260 mg, 92%).

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Etapa 5

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131

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 5-bromo-N-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (50 mg, 0,12 mmoles), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (56 mg, 0,216 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (35 mg, 0,03 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (0,64 ml) y dioxano (2 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:MeOH 95:5 seguido de DCM:MeOH 90:10. El compuesto del título se obtuvo tras la trituración con una mezcla 10:1 de n-hexano:DCM (19 mg, 34%). La conversión en la sal de mesilato, usando ácido metanosulfónico 0,1M (0,35 ml), dio el compuesto del título como un sólido amarillo (20 mg, 69%).

RMN ^{1}H (400 MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,34 (6H, d), 2,36 (6H, s, 2xMsOH), 3,16-3,21 (5H, m), 3,57 (2H, m), 4,45 (2H, d), 4,52 (2H, s), 7,11 (1H, d), 7,86 (1H, d), 8,01 (1H, s), 8,10 (1H, d), 8,24-8,29 (2H, m), 8,72 (1H, s), 8,76 (1H, s), 8,82 (1H, d), 9,39 (1H, br s), 10,21 (1H, s). LCMS: Rt 1,92 min. (98,5%), m/z (APCI) 470 (M+H)^{+}.

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Compuesto 80

Amida del ácido 3-[8-(4-morfolin-4-ilfenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-benzo[b]tiofen-7-carboxílico

Etapa 1

1-bromo-2-(2-etoxivinilsulfanil)benceno

132

A una disolución de 2-bromotiofenol (10,50 g, 55,87 mmoles) en DMF seca (50 ml) en nitrógeno se añadió carbonato de potasio (9,2 ml, 61,46 mmoles, 1,10 equiv.) con cuidado. Una vez se calmó el burbujeo, se añadió a la mezcla 2-bromo-1,1-dietoxietano (8,46 g, 61,46 mmoles, 1,10 equiv.) y se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. La suspensión resultante se vertió en 200 ml de agua helada, y se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} para proporcionar, tras la eliminación del disolvente, el compuesto del título como un aceite naranja viscoso, que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 2

7-bromobenzo(b]tiofeno

133

Se disolvió 1-bromo-2-(2-etoxivinilsulfanil)benceno en clorobenceno (50 ml), y la disolución se calentó hasta 70ºC. Se añadió entonces PPA (10,5 ml) con cuidado, y la mezcla bifásica se calentó a 150ºC toda la noche. El sirope oscuro resultante se dejó enfriar, y el disolvente sobrenadante se eliminó mediante una pipeta. Se añadió clorobenceno (15 ml) al residuo y se calentó hasta 150ºC durante 30 min. El disolvente se eliminó de nuevo, y el residuo se lavó con pequeñas cantidades de diclorometano hasta que los lavados fueron transparentes. Las fracciones orgánicas se combinaron y se filtraron a través de celita para proporcionar una disolución amarilla clara. La concentración a vacío seguido de LC usando ciclohexano como eluyente proporcionó el compuesto del título como un aceite incoloro viscoso (1,21 g, 35%).

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Etapa 3

Éster etílico del ácido benzo[b]tiofen-7-carboxílico

134

Se disolvió 7-bromobenzo[b]tiofeno (500 mg, 2,36 mmoles) en THF seco (5,0 ml) en nitrógeno. Se añadieron limaduras de magnesio (530 mg, 2,83 mmoles, 1,20 equiv.), y la mezcla resultante se calentó a reflujo hasta que se produjo la disolución del magnesio. La disolución resultante amarilla turbia se dejó enfriar hasta rt, y se añadió carbonato de dietilo (2 ml, exceso), y la agitación se continuó durante una hora, momento en el que se añadió cloruro de amonio (10% ac.). La mezcla resultante se repartió entre DCM y agua, y la capa acuosa se extrajo con DCM. Las fracciones orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se adsorbieron sobre sílice. La purificación mediante LC usando ciclohexano/diclorometano 8/2 como eluyente proporcionó el compuesto del título como un aceite naranja pálido (346,2 mg, 71%).

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Etapa 4

Ácido benzo[b]tiofen-7-carboxílico

135

A una disolución de éster etílico del ácido benzo[b]tiofen-7-carboxílico (1,0 g, 48 mmoles) en metanol (10 ml) y agua (10 ml) se añadió hidróxido de sodio (5 g, exceso). La disolución se agitó a temperatura ambiente durante 30 min., momento en el cual todo el éster se había consumido. La mezcla de reacción se ajustó hasta pH 1 añadiendo disolución 6M de HCl, y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas combinadas se filtraron a través de un tapón de sílice para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (505,2 mg, 59%).

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Etapa 5

Amida del ácido benzo[b]tiofen-7-carboxílico

136

Una disolución de ácido benzo[b]tiofen-7-carboxílico (505 mg, 2,84 mmoles) en diclorometano (10 ml) se agitó a rt, y se añadió cloruro de tionilo (669 mg, 5,68 mmoles, 2,0 equiv.), seguido de DMF (0,06 ml), provocando desprendimiento de gas. La disolución resultante se agitó a rt durante 1 hora. Después, a la mezcla se añadió con cuidado amoniaco acuoso (10 ml), provocando desprendimiento vigoroso de gas. La mezcla resultante se diluyó entonces con agua (50 ml), y el pH se llevó a neutro añadiendo NaHCO_{3} saturado (ac.). La capa acuosa se extrajo con DCM, y las capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente a presión reducida proporcionó el compuesto del título (81% puro) como un sólido amarillo (500 mg, 98%) que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 6

Amida del ácido 3-bromobenzo[b]tiofen-7-carboxílico

137

Una disolución de amida del ácido benzo[b]tiofen-7-carboxílico (500 mg, 2,82 mmoles) en diclorometano (5 ml) se agitó a rt, y se añadió ácido acético (5 ml) seguido de NBS (750 mg, 4,23 mmoles, 1,5 equiv.). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, en cuyo momento el análisis mediante LC-MS mostró la conversión completa del material de partida en el compuesto deseado (79%) y material dibromado (21%). La reacción se diluyó con agua (50 ml), y se neutralizó con disulfito de potasio acuoso, seguido de bicarbonato de sodio. La capa acuosa se extrajo entonces con diclorometano, y las capas orgánicas resultantes se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporaron. El material bruto se purificó mediante LC usando DCM como eluyente para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (300 mg, 41%).

\newpage

Etapa 7

Amida del ácido 3-(4,4,5,5-tetrametil[1,3,2]dioxaborolan-2-il)benzo[b]tiofen-7-carboxílico

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138

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Una disolución de amida del ácido 3-bromobenzo[b]tiofen-7-carboxílico (300 mg, 1,18 mmoles) en dioxano (5 ml) se agitó en nitrógeno. Se añadieron Pd(dppf)Cl_{2} (29 mg, 3% en moles), acetato de potasio (230 mg, 2,35 mmoles, 2,0 equiv.) y bispinacolatodiboro (450 mg, 1,77 mmoles, 1,5 equiv.), y la reacción se calentó hasta 80ºC y se agitó toda la noche. La suspensión naranja resultante se diluyó con DCM, se filtró a través de celita y se concentró a vacío para proporcionar un aceite que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

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Etapa 8

Amida del ácido 3-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-benzo[b]tiofen-7-carboxílico

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139

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 120, Etapa 4. RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,19 (4H, br s), 3,76 (4H, br s), 5,70 (1H, d), 7,12 (2H, m), 7,43 (1H, t), 7,63 (1H, br s), 7,76-7,80 (2H, m), 7,92 (1H, d), 8,03 (1H, d), 8,21 (1H, s), 8,28 (1H, s), 8,6 (1H, s), 10,09 (1H, s). LCMS: Rt = 1,01 min. (95%), m/z (ESI) 472 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 81

Amida del ácido 3-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}benzo[b]tiofen-7-carboxílico

140

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 80, usando (5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina en la etapa final. LCMS: rt = 0,94 min. (95%), m/z (ESI) 513 (M+H)^{+}.

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Compuesto 83

(4-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}piridin-2-il)metanol

Etapa 1

1-óxido de 4-bromo-2-metilpiridina

141

Una disolución de 4-bromo-2-metilpiridina (5 g, 29 mmoles) en DCM (20 ml) se enfrió hasta 0ºC, y se añadió m-CPBA (7,55 g, 43,87 mmoles, 1,5 equiv.) en porciones durante 30 min. Después, el baño de hielo se retiró, y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 3 horas. La disolución resultante se diluyó con bicarbonato de sodio (sat. ac.) y se extrajo con DCM. Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con bicarbonato de sodio (sat. ac.), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del título como un aceite naranja pálido que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 2

Éster 4-bromopiridin-2-ilmetílico del ácido acético

142

A una disolución de 1-óxido de 4-bromo-2-metilpiridina (4,00 g, 21,40 mmoles) en DCM (20 ml) se añadió anhídrido acético (6 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se calentó a reflujo toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el producto bruto se filtró a través de un tapón de sílice, eluyendo con DCM para proporcionar el compuesto del título como un aceite naranja (815 mg).

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Etapa 3

Éster 4-(4,4,5,5-tetrametil-(1,3,2]dioxaborolan-2-il)piridin-2-ilmetílico del ácido acético

143

Una disolución de éster 4-bromopiridin-2-ilmetílico del ácido acético (800 mg, 3,49 mmoles) en dioxano (5 ml) se agitó en nitrógeno. Se añadieron Pd(dppf)Cl_{2} (85 mg, 3% en moles), acetato de potasio (1,03 g, 10,5 mmoles, 3,0 equiv.) y bispinacolatodiboro (1,33 g, 5,24 mmoles, 1,5 equiv.), y la reacción se calentó a 80ºC toda la noche. La suspensión naranja resultante se diluyó con DCM, se filtró a través de celita y se concentró a vacío para proporcionar un aceite que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

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Etapa 4

Éster 4-{8-(4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-piridin-2-ilmetílico del ácido acético

144

Una suspensión de (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)fenil]amina (300 mg, 0,723 mmoles) y Pd(dppf)Cl_{2} (59 mg, 10% en moles) en dioxano/agua 4/1 (5 ml) se agitó a rt, y se añadieron carbonato de potasio (200 mg, 1,45 mmoles, 2,0 equiv.) y éster 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)piridin-2-ilmetílico del ácido acético (300 mg, 1,08 mmoles, 1,5 equiv.). La mezcla resultante se calentó a 85ºC toda la noche. La disolución resultante se repartió entre diclorometano y agua, y la capa orgánica se concentró sobre sílice y se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH 98/2) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo. LCMS: Rt = 0,78 min. (100%), m/z 445 (M+H)^{+}.

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Etapa 5

(4-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}piridin-2-il)metanol

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145

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Se agitó a temperatura ambiente toda la noche éster 4-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}piridin-2-ilmetílico del ácido acético en 10 ml de una disolución 1,5 M de carbonato de potasio en metanol. El pH se llevó entonces hasta neutro mediante adición de ácido cítrico acuoso al 10%, y la mezcla se extrajo con DCM. La purificación mediante LC usando DCM/NH_{3} (2M en MeOH) 98/2 como eluyente proporciona el compuesto del título como un polvo amarillo (40,3 mg, 12,5% a lo largo de 2 etapas). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,02 (6H, m), 2,33 (1H, m), 2,60 (4H, br m), 3,10 (4H, br m), 4,65 (2H, d), 5,51 (1H, t), 6,96 (2H, d), 7,84-7,89 (3H, m), 8,11 (1H, s), 8,17 (1H, m), 8,61 (1H, d), 8,73 (1H, m), 10,08 (1H, s). LCMS: Rt = 0,78 min. (100%), m/z (ESI) 445 (M+H)^{+}.

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Compuesto 84

[4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

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146

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 92, usando ácido pirazol-4-borónico en la etapa 4. LCMS: Rt 0,89 min. (100%) m/z (ESI) 403 (M+H)^{+}.

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Compuesto 86

4-(8-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)furan-2-carboxamida

Etapa 1

Amida del ácido 4-bromo-furan-2-carboxílico

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147

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A una disolución de ácido 4,5-dibromo-furan-2-carboxílico (7,79 g, 28,85 mmoles) en NH_{4}OH (100 ml) se añadió polvo de cinc (2,29 g, 34,62 mmoles) en pequeñas porciones. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7 minutos, después se filtró a través de celita y se lavó con agua y HCl 2M. El filtrado se acidificó hasta pH 1 usando HCl conc., y se extrajo con acetato de etilo (3x). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para dar un aceite (4,96 g) que solidificó al dejar reposar para dar un sólido blanco, que se usó sin purificación adicional.

El sólido (4,93 g, 25,81 mmoles) se disolvió en cloruro de tionilo (44,2 ml) y se puso a reflujo durante 1 hora. Después de eliminar el disolvente a vacío, el residuo se disolvió en diclorometano (75 ml), y se añadió una disolución 0,5M de NH_{3} en dioxano (52 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después se añadió NH_{3} ac. al 33% (5 ml), y la reacción se agitó durante 2 horas adicionales. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se recogió con una disolución de NaHCO_{3} sat. La disolución básica se extrajo usando acetato de etilo (3x), las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con una mezcla (50:49:1) de acetato de etilo:éter de petróleo:ácido acético, proporcionó el compuesto del título (1,2 g, 22%).

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Etapa 2

Amida del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)furan-2-carboxílico

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148

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Se suspendieron la amida del ácido 4-bromo-furan-2-carboxílico (1,2 g, 6,32 mmoles), bis(pinacolato)diboro (1,76 g, 6,94 mmoles), PdCl_{2}dppf (0,154 g, 189 moles) y KOAc (1,85 g, 18,94 mmoles) en dioxano (20 ml), se purgaron con nitrógeno durante 5 minutos y después se calentaron a 90ºC toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo, y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se filtraron a través de MgSO_{4} y se evaporaron. El residuo sólido se trituró con hexano y se secó a vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido (0,984 g, 66%).

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Etapa 3

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149

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 5-bromo-8-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (60 mg, 0,144 mmoles), amida del ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-furan-2-carboxílico (59 mg, 0,26 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4}
(42 mg, 0,036 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (0,8 ml, 1,15 mmoles) y dioxano (2 ml). Después de la evaporación del disolvente, el material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97,5:2,5 y 95:5. El compuesto del título se obtuvo como un sólido amarillo (30 mg, 47%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,05 (6H, d), 2,54-2,59 (4H, m), 2,70-2,74 (1H, m), 3,47 (4H, m), 6,90 (1H, d), 7,60 (1H, br s), 7,91 (1H, s), 7,99 (1H, br s), 8,12 (1H, dd), 8,19 (1H, s), 8,68 (1H, s), 8,75 (1H, s), 8,81 (1H, s), 10,03 (1H, s). LCMS: Rt 2,64 min. (98,1%), m/z (APCI) 406 (M+H)^{+}. LCMS: Rt 2,74 min. (93%), m/z (ES+) 448 (M+H)^{+}.

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Compuesto 88

4-(8-(4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)furan-2-carboxamida

Etapa 1

1-isopropil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina

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150

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A una disolución de 4-fluoronitrobenceno (5 g, 35,4 mmoles) en THF (50 ml) se añadieron 1-isopropilpiperazina (4,54 g, 35,4 mmoles) y K_{2}CO_{3} (7,35 g, 53,2 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se repartió entre EtOAc y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró. El compuesto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1 y 98:2 para dar el compuesto del título (8,2 g, 94%).

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Etapa 2

4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamina

151

Se disolvió 1-isopropil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina (8,3 g, 33,2 mmoles) en MeOH (120 ml), y se añadió dicloruro de estaño (II) dihidratado (37,4 g, 0,165 moles). La mezcla se enfrió usando un baño de agua, y se añadió HCl conc. (36 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. Después de eliminar el metanol, la disolución resultante se basificó usando NaOH conc. (pH 11). La fase acuosa se extrajo con éter dietílico (3x), y las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del título (6,4 g, 88%).

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Etapa 3

(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-amina

152

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (2 g, 7,20 mmoles), 4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamina (1,89 g, 8,62 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (1,88 ml, 10,8 mmoles) en 2-propanol (30 ml) se agitaron a 95ºC toda la noche. El compuesto del título se aisló tras la trituración con éter dietílico y con éter de petróleo como un sólido gris (2,59 g, 87%).

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Etapa 4

4-(8-(4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5il)furan-2-carboxamida

153

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 5-bromo-N-(6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-amina (80 mg, 0,21 mmoles), amida del ácido 4-(,4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-furan-2-carboxílico (101 mg, 0,42 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (62 mg, 0,053 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,143 ml, 1,71 mmoles), y dioxano (4 ml). El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM y DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 97:3. El compuesto del título se aisló tras la trituración con éter dietílico (35,4 mg, 42%). La conversión en la sal de mesilato usando
ácido metanosulfónico 1M en MeOH (0,0793 ml) proporcionó el compuesto del título como un sólido (35 mg).

RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,35 (6H, d), 2,35 (3H, s, MsOH), 3,01 (2H, t), 3,22-3,35 (2H, m), 3,58 (3H, m), 3,88 (2H, d), 7,09 (2H, d), 7,61 (1H, br s), 7,94 (2H, m), 8,00 (1H, br s), 8,22 (1H, s), 8,76 (1H, s), 8,82 (1H, s), 9,27 (1H, br s), 10,02 (1H, s). LCMS: Rt 2,02 min. (98,9%), m/z (APCI) 447 (M+H)^{+}.

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Compuesto 89

Amida del ácido 4-{8-[4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico

154

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 92, usando ácido 2-(aminocarbonil)tiofen-4-borónico en la etapa 4. LCMS: Rt 0,94 min. (100%) m/z (ESI) 462 (M+H)^{+}.

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Compuesto 90

(4-{8-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}piridin-2-il)metanol

155

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 83, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[6-(4-isopropilpiperazin-1-il)piridin-3-il]amina en la etapa 4. LCMS: Rt = 0,71 min. (95%), m/z (ESI) 446 (M+H)^{+}.

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Compuesto 92

5-{8-[4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoindol-1-ona

Etapa 1

1-isopropil-4-(4-nitrofenil)piperidina

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156

Se agitaron 4-(4-nitrofenil)piperidina (250 mg, 1,21 mmoles), K_{2}CO_{3} (170 mg, 1,21 mmoles) y 2-yodopropano (240 \mul, 2,4 mmoles) en acetonitrilo (3 ml) en un tubo cerrado herméticamente a 120ºC durante 45 min. La mezcla se enfrió, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se repartió entre DCM (20 ml) y agua (5 ml), las capas se separaron, y el DCM se lavó con agua (5 ml) y con salmuera (5 ml) y se secó sobre MgSO_{4}. La evaporación del disolvente proporcionó el compuesto del título (300 mg) que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 2

4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenilamina

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Se añadieron hidrazina (35% en peso en agua, 0,67 ml, 7,2 mmoles) y Pd al 10%/C (38 mg, 0,03 mmoles) a una disolución de 1-isopropil-4-(4-nitrofenil)piperidina (180 mg, 0,72 mmoles) en EtOH (10 ml), y la mezcla se calentó a reflujo durante 3 h. Después de enfriar, la mezcla se filtró a través de celita, y el disolvente se evaporó. El residuo es redisolvió en DCM (25 ml), se secó sobre MgSO_{4}, y el disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto deseado como un sólido amarillo pálido (113 mg, 0,52 mmoles) que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 3

(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5]pirazin-8-il-[4-isopropilpiperidin-4-il]amina

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158

Se añadió N,N-diisopropiletilamina (200 \mul, 1,2 mmoles) a una mezcla de 4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenilamina (220 mg, 1,0 mmoles) y 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (280 mg, 1,0 mmoles) en ^{i}PrOH (5 ml), y se calentó a reflujo durante 48 h. La mezcla se enfrió, y el disolvente se evaporó a presión reducida para proporcionar un sólido naranja-amarronado. El sólido se repartió entre DCM (50 ml) y agua (20 ml), y las capas se separaron. La fase orgánica se lavó con ácido cítrico (10% ac., 3 x 25 ml). Los lavados combinados se extrajeron con DCM (25 ml) y después se hicieron básicos mediante adición de NaHCO_{3} (s). La mezcla se extrajo con DCM (3 x 25 ml), y los extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice, eluyendo con 5%-10% de MeOH en DCM para proporcionar el compuesto deseado, contaminado con la anilina de partida. Aquel se recristalizó en MeOH para proporcionar el compuesto del título puro (110 mg).

Este material se puede usar para preparar 5-{8-[4-(1-isopropilpiperidin-4-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoindol-1-ona de una manera análoga a la etapa 4 como se describe para el Compuesto 79.

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159

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LCMS: Rt 0,91 min. (100%) m/z (ESI) 468 (M+H)^{+}.

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Compuesto 100

1-(4-(5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)fenil)piperazin-2-ona

Etapa 1

Éster terc-butílico del ácido 4-(4-amino-fenil-3-oxo-piperazina-1-carboxílico

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160

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Una suspensión de p-yodo-anilina (918 mg, 4,8 mmoles), éster terc-butílico del ácido 3-oxo-piperazin-1-carboxílico (960 mg, 4,2 mmoles) (1R,2R)-ciclohexano-1,2-diamina (0,05 ml, 0,42 mmoles), yoduro de cobre (I) (14,9 mg, 0,0042 mmoles) y K_{2}CO_{3} (1,19 g, 2,04 mmoles) en dioxano (4 ml) se purgó con nitrógeno durante 5 min. en un tubo de reacción. El tubo se cerró herméticamente, y la mezcla de reacción se calentó a 119ºC durante 15 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró a través de un cartucho de sílice, lavando con acetato de etilo (40 ml). El filtrado se concentró a vacío para proporcionar el compuesto del título como un líquido marrón (1,06 g, 87%). LCMS: Rt 0,88 min. (91%).

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Etapa 2

1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-piperazin-2-ona

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161

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,283 g, 1,00 mmoles), éster terc-butílico del ácido 4-(4-amino-fenil)-3-oxo-piperazin-1-carboxílico (0,300 g, 1,00 mmoles) y N-etildiisopropil-amina (0,20 ml, 1,02 mmoles) en 2-propanol (1 ml). La purificación del material bruto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, eluyendo con DCM seguido de DCM:MeOH 98:2, proporcionó el éster terc-butílico del ácido 4-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-piperazin-1-carboxílico como un sólido blanco (0,252 g, 51%).

Una disolución del éster terc-butílico del ácido 4-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-piperazin-1-carboxílico (0,252 mg, 0,6 mmoles) en DCM:TFA 2:1 (4,8 ml) se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó entonces con DCM y se basificó con NaHCO_{3} sat. La capa acuosa se extrajo con DCM (3x), y las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para proporcionar el compuesto del título como un sólido (180 mg, 78%).

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Etapa 3

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162

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 1, etapa 5, usando 1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-piperazin-2-ona (70 mg, 0,18 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (64 mg, 0,33 mmoles), Pd(PPh_{3})_{4} (21 mg, 18 \mumoles) y NaO'Bu (70 mg, 0,72 mmoles) en 2 ml de DMF/agua 3:1. La mezcla de reacción se concentró a vacío, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1 hasta 90:10. El compuesto del título se aisló como un sólido verde pálido (13 mg, 19%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,05 (2H, m), 3,42 (2H, s), 3,62 (2H, m), 7,32 (2H, d), 8,07 (2H, d), 8,26 (1H, s), 8,39 (1H, br s), 8,67 (1H, br s), 8,81 (1H, s), 10,05 (1H, s), 13,32 (1H, br s). LCMS: Rt 6,98 min. (92,4%), m/z (APCI) 376 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 102

5-{8-[4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

Etapa 1

1-terc-butil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina

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163

A una disolución de 1-fluoro-4-nitro-benceno (314 mg, 2,23 mmoles) y 4-terc-butilpiperazina (1 g, 3,34 mmoles) en dioxano (15 ml) se añadió K_{2}CO_{3} (1,65 mg, 11,9 mmoles), y la reacción se agitó a 130ºC toda la noche. El disolvente se evaporó a vacío, y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para dar un compuesto bruto. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1 proporcionó el compuesto del título (348 mg, 55,4%). LCMS: Rt 3,87 min. (99%).

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Etapa 2

4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenilamina

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164

Se disolvió 1-terc-butil-4-(4-nitro-fenil)-piperazina (348 mg, 1,32 mmoles) en MeOH (10 ml), y se añadió dicloruro de estaño (II) dihidratado (1,08 g, 4,79 mmoles). La mezcla se enfrió usando un baño de agua, y se añadió HCl conc. (3 ml). La reacción se agitó a 40ºC toda la noche. Después de eliminar el metanol, la disolución resultante se basificó usando NaOH conc. (pH 11). La fase acuosa se extrajo con éter dietílico (3x), y las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del título (308 mg, 99%), que se usó en la etapa siguiente sin purificación adicional. LCMS: Rt 2,16 min. (87%).

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Etapa 3

(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenil]-amina

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165

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (0,308 g, 1,107 mmoles), 4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenilamina (0,310 g, 1,33 mmoles) y N-etildiisopropil-amina (0,289 ml, 1,66 mmoles) en 2-propanol (5 ml). La mezcla de reacción se repartió entre DCM y NaOH 1N, la capa orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La trituración del residuo con éter dietílico y con éter de petróleo proporcionó el compuesto del título (440 mg, 92%) como un sólido de color crema. LCMS: Rt 2,25 min. (96%).

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Etapa 4

5-{8-[4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}2,3-dihidro-isoindol-1-ona

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166

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-terc-butil-piperazin-1-il)-fenil]-amina (100 mg, 0,232 mmoles), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (90 mg, 0,32 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (67 mg, 0,058 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,24 ml), y dioxano (3,7 ml). La mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo y salmuera, la capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se evaporó a vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 95:5 para dar un sólido que se trituró con éter dietílico y con éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título (71 mg, 63%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,43 (9H, s), 2,36 (3H, s, MsOH), 3,02 (2H, m), 3,19-3,26 (2H, m), 3,67 (2H, d), 3,90 (2H, d), 4,52 (2H, s), 7,10 (2H, d), 7,86 (1H, d), 7,96-8,01 (3H, m), 8,10 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,72 (1H, s), 8,75 (1H, s), 9,09 (1H, br s), 10,09 (1H, s). LCMS: Rt 2,07 min. (99%), m/z (APCI) 483 (M+H)^{+}.

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Compuesto 105

5-{8-[4-(2-oxo-piperazin-1-il)fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

Etapa 1

Éster terc-butílico del ácido 3-oxo-4-{4-(5-(1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-piperazin-1-carboxílico

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167

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando éster terc-butílico del ácido 4-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-3-oxo-piperazin-1-carboxílico (115 mg, 0,24 mmoles), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (92 mg, 0,35 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (83 mg, 0,072 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,3 ml, 1,92 mmoles), y dioxano (2,5 ml). La mezcla de reacción se diluyó con salmuera, después se añadió tolueno, y se formó un precipitado y se recogió mediante filtración. El sólido resultante se disolvió en DCM y se filtró a través de un cartucho de sílice para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (60 mg, 47%).

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Etapa 2

5-{8-[4-(2-oxo-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

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168

Una disolución de éster terc-butílico del ácido 3-oxo-4-{4-[5-(1-oxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-piperazin-1-carboxílico (59 mg, 0,1 mmoles) en DCM:TFA 3:1 (1,2 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con DCM y se basificó con NaHCO_{3} sat. La capa acuosa se extrajo con DCM (3x), y las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (38 mg, 86%). RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 3,07 (2H, m), 3,44 (2H, s), 3,64 (2H, m), 4,50 (2H, s), 7,32 (2H, d), 7,83 (1H, d), 8,04-8,10 (4H, m), 8,22 (1H, s), 8,70 (1H, br s), 8,74 (1H, s), 10,25 (1H, s). LCMS: Rt 7,17 min. (93,7%), m/z (APCI) 441 (M+H)^{+}.

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Compuesto 108

7-Fluoro-5-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoindol-1-ona

Etapa 1

Éster metílico del ácido 4-bromo-2,6-difluorobenzoico

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169

A una suspensión de ácido 4-bromo-2,6-difluoro-benzoico (5 g, 21 mmoles) en DCM (10 ml) se añadió cloruro de tionilo (15 ml) y DMF (0,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 h. Ésta se enfrió entonces hasta 0ºC, y se añadió con cuidado MeOH (20 ml) provocando desprendimiento vigoroso de HCl. Tras agitar durante 0,5 h adicionales, la disolución transparente se repartió entre DCM (50 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica se lavó con NaHCO_{3} saturado, con salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y el disolvente se eliminó a vacío para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo pálido que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 2

Éster metílico del ácido 4-bromo-2-fluoro-6-(nitrometil)benzoico

170

Se añadió con cuidad nitrometano (10 ml, 169 mmoles, 8 equiv.) a una suspensión de hidruro de sodio (4,05 g, 169 mmoles, 8 equiv.) y MgSO_{4} (40 g) en DMSO (100 ml) a rt, y la suspensión resultante se agitó durante 0,25 h. A la suspensión amarilla resultante se añadió éster metílico del ácido 4-bromo-2,6-difluorobenzoico (5,3 g, 21 mmoles), y la mezcla se agitó a rt durante 3 días, en cuyo momento todo el material de partida se había consumido. Se añadió agua (200 ml) y HCl 6M (50 ml), seguido de DCM (200 ml). Se añadió más agua (500 ml) para producir un sistema bifásico transparente. La capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 100 ml), las capas de DCM se combinaron entonces, se lavaron con NaHCO_{3} saturado y salmuera, y se secaron sobre MgSO_{4}. La evaporación del disolvente proporcionó un sólido naranja que contiene 64% del material deseado, que se usó sin purificación adicional. LCMS; Rt = 1,27 min. (64%).

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Etapa 3

5-bromo-7-fluoro-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

171

El éster metílico del ácido 4-bromo-2-fluoro-6-(nitrometil)benzoico bruto procedente de la etapa anterior se disolvió en MeOH (100 ml). A esta disolución naranja clara se añadió polvo de cinc (3,35 g, 51,3 mmoles, 3 equiv.) seguido de formiato de amonio (3,23 g, 51,3 mmoles, 3 equiv.), lo que da como resultado una reacción exotérmica. Tras 0,3 h, se añadió NH_{3} 7M en MeOH (50 ml), y la mezcla se agitó toda la noche a temperatura ambiente. La mezcla resultante se filtró a través de celita, y el filtrado amarillo se adsorbió sobre sílice y se limpió a conciencia mediante LC usando DCM/NH_{3} (7M en MeOH) 94/6. La eliminación del disolvente proporcionó un sólido bronceado que se redisolvió en DCM, se lavó con NaOH al 10%, y se concentró a presión reducida para dejar un sólido blanco, que se trituró adicionalmente con pequeñas cantidades de DCM para proporcionar el compuesto del título. LCMS: Rt 0,96 min. (100%) m/z 230/232 (M+H)^{+}.

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Etapa 4

7-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxabrolan-2-il)-2,3-dihidroisoindol-1-ona

172

Una disolución de 5-bromo-7-fluoro-2,3-dihidroisoindol-1-ona (531 mg, 2,31 mmoles) en dioxano (5 ml) se agitó en nitrógeno. Se añadieron Pd(dppf)Cl_{2} (94 mg, 5% en moles), acetato de potasio (453 mg, 4,62 mmoles, 2,0 equiv.) y bispinacolatodiboro (1,17 g, 4,62 mmoles, 2 equiv.), y la reacción se calentó a 80ºC durante 3 h. La suspensión naranja resultante se diluyó con DCM, se filtró a través de celita y concentró a vacío para proporcionar un aceite que se redisolvió en un mínimo de DCM. Se añadió lentamente éter dietílico para proporcionar el compuesto del título como un sólido bronceado. LCMS: Rt 1,18 min. (100%) m/z 277/279 (M+H)^{+}.

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Etapa 5

173

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 91, usando el boronato anterior. LCMS: Rt = 0,90 min. (95%), m/z 487 (M+H)^{+}.

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Compuesto 112

5-(8-(4-(4-isopropil-2-oxopiperazin-1-il)fenilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il)isoindolin-1-ona

Etapa 1

1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-4-isopropil-piperazin-2-ona

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174

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A una disolución de 1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-piperazin-2-ona (ejemplo 31, etapa 2) (180 mg, 0,47 mmoles) en MeOH (4 ml) se añadieron ácido acético (0,03 ml, 0,47 mmoles), NaOAc (38 mg, 0,47 mmoles) y acetona (0,2 ml, 1,18 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se añadió NaCNBH_{3} (60 mg, 0,94 mmoles), y la mezcla se agitó a 40ºC toda la noche. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se acidificó con HCl conc. (pH 1) y se concentró a vacío. El residuo se repartió entre NaOH 6N y DCM. La capa acuosa se extrajo con DCM (3x), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío para proporcionar un compuesto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con DCM y DCM:MeOH 98:2 proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo (45 mg, 25%).

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Etapa 2

175

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 1-[4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-fenil]-4-isopropil-piperazin-2-ona (40 mg, 0,09 mmoles), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (37 mg, 0,14 mmoles), y Pd(PPh_{3})_{4} (31 mg, 0,027 mmoles) en Na_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (0,5 ml, 0,75 mmoles), y dioxano (1,2 ml). La mezcla de reacción se diluyó con salmuera, después se añadió tolueno y se formó un precipitado y se recogió mediante filtración. El filtrado se lavó con éter dietílico, éter de petróleo y MeOH, y después se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice. La elución con DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1 seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 y 95:5 proporcionó el compuesto del título como un sólido amarillo (24 mg, 55%).

RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 1,08 (6H, d), 2,73-2,87 (3H; m), 3,27 (2H, s), 3,62-3,68 (2H, m), 4,52 (2H, s), 7,36 (2H, d), 7,84 (1H, d), 8,07-8,10 (4H, m), 8,25 (1H, s), 8,70 (1H, br s), 8,77 (1H, s), 10,28 (1H, s). LCMS: Rt 1,94 min. (95,2%), m/z (APCI) 483 (M+H)^{+}.

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Compuesto 114

5-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-3,3-dimetil-2,3-dihidroisoindol-1-ona

Etapa 1

5-bromo-2-(4-metoxibencil)-3,3-dimetil-2,3-dihidroisoindol-1-ona

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176

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Una suspensión de hidruro de sodio (130 mg, dispersión al 60% en aceite mineral, 3,2 mmoles) y yoduro de tetra-butilamonio (243 mg, 0,68 mmoles) en THF (20 ml) se agitó a rt, y se añadió una disolución de 5-bromo-2,3-dihidroisoindol-1-ona (675 mg, 3,2 mmoles) en THF (20 ml) y DMF (4 ml). Después de 75 min., se añadió bromuro de 4-metoxibencilo (460 \mul, 3,2 mmoles), y la agitación se continuó durante 4 h. Entonces se añadió hidruro de sodio (635 mg, dispersión al 60% en aceite mineral, 15,9 mmoles), y la agitación se continuó durante 30 min. antes de añadir yodometano (1,19 ml, 19 mmoles), y la mezcla se calentó hasta 70ºC durante 30 min. Después de enfriar, se añadió NH_{4}Cl (sat. ac.), y la mezcla se diluyó con acetato de etilo (120 ml). Las capas se separaron, la fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, y los disolventes se eliminaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre sílice, eluyendo con 5% hasta 10% de acetato de etilo en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo (640 mg, 1,78 mmoles).

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Etapa 2

5-bromo-3,3-dimetil-2,3-dihidroisoindol-1-ona

177

Una disolución de 5-bromo-2-(4-metoxibencil)-3,3-dimetil-2,3-dihidroisoindol-1-ona (640 mg, 1,78 mmoles) y nitrato amónico cérico (2,91 g, 5,33 mmoles) en acetonitrilo (11 ml) y agua (5 ml) se agitó a 0ºC durante 45 min. La disolución se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con salmuera (40 ml). Los disolventes orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre sílice, eluyendo con 10% hasta 50% de acetato de etilo en éter de petróleo, para proporcionar el compuesto del título (367 mg, 1,53 mmoles).

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Etapa 3

5-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-3,3-dimetil-2,3-dihidroisoin-dol-1-ona

178

El 5-bromo-3,3-dimetil-2,3-dihidroisoindol-1-ona se convirtió en el boronato correspondiente de una manera análoga a la del Compuesto 6, Etapa 3. Éste se usó entonces para preparar el compuesto del título a partir de (5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-fenil]amina usando métodos como se describen para el Compuesto 120, Etapa 4. LCMS: Rt = 0,92 (100%), m/z = 497 (M+H)+.

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Compuesto 118 4-(5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-(piridin-3-ilmetil)benzamida

Etapa 1

Éster metílico del ácido 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-benzoico

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179

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 1, usando 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (250 mg, 0,90 mmoles), éster metílico del ácido 4-aminobenzoico (163 mg, 1,08 mmoles) y N-etildiisopropilamina (0,19 ml, 1,08 mmoles) en 2-propanol (2,5 ml). El compuesto del título se obtuvo tras la trituración con 2-propanol como un sólido marrón (148 mg, 47%).

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Etapa 2

Ácido 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-benzoico

180

Se suspendió éster metílico del ácido 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-benzoico (460 mg, 1,32 mmoles) en THF (11 ml), y se añadió una disolución de monohidrato de hidróxido de litio (554 mg, 13,2 mmoles) en agua (11 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, después se añadió metanol (11 ml), y la mezcla se agitó a 50ºC durante 24 horas. La mezcla se repartió entre agua y DCM, la fase acuosa se acidificó con HCl 2M (pH 2), y se formó un precipitado amarillo. El precipitado se recogió mediante filtración, se lavó con agua y con éter dietílico y se secó para proporcionar el compuesto del título (215 mg, 49%).

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Etapa 3

4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-piridin-3-ilmetil-benzamida

181

Una disolución de ácido 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-benzoico (0,230 g, 0,69 mmoles), 3-hidroxi-benzotriazol (0,103 g, 0,76 mmoles), hidrato de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbodiimida (0,146 g, 0,76 mmoles) en DMF (5 ml) y 3-picolilamina (0,077 ml, 0,76 mmoles) se agitó a temperatura ambiente durante 21 horas. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se trituró con éter dietílico, acetato de etilo y diclorometano. Se obtuvo un sólido amarillo pálido, se lavó con agua y se secó para proporcionar el compuesto del título (241 mg, 82%).

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Etapa 4

4-(5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-(piridin-3-ilmetil)benzamida

182

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-piridin-3-ilmetil-benzamida (100 mg, 0,24 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (93 mg, 0,48 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (70 mg, 0,06 mmoles) en K_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,4 ml) y dioxano (2,5 ml). El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 después 96:4 y después 90:10 para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (19,6 mg, 20%).

RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 4,52 (2H, d), 7,40 (1H, m), 7,78 (1H, d), 7,93 (2H, d), 8,18 (2H, d), 8,32 (1H, s), 8,48-8,62 (4H, m), 8,82 (1H, s), 9,01 (1H, t), 10,21 (1H, br s), 13,3 (1H, br s). LCMS: Rt 1,86 min. (93%), m/z (ES^{+}) 412 (M+H)^{+}.

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Compuesto 119

4-(5-(2-oxo-1,2-dihidropiridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-(piridin-3-ilmetil)benzamida

Etapa 1

4-[5-(2-metoxi-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida

183

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 6, etapa 4, usando 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-N-piridin-3-ilmetil-benzamida (120 mg, 0,28 mmoles), ácido 2-metoxipiridin-4-borónico (87 mg, 0,57 mmoles) y Pd(PPh_{3})_{4} (81 mg, 0,07 mmoles) en K_{2}CO_{3} 1,5M (ac.) (1,6 ml) y dioxano (2,9 ml). El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 99:1 después 97:3 y después 95:5 para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (92,6 mg, 73%).

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Etapa 2

184

Una mezcla de 4-[5-(2-metoxi-piridin-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida (71,5 mg, 0,16 mmoles) e hidrocloruro de piridinio (91 mg, 0,79 mmoles) en agua (0,5 ml) en un tubo cerrado herméticamente se calentó a 150ºC durante 25 minutos. Después de este período de tiempo, el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con DCM seguido de DCM:NH_{3} (7M en MeOH) 98:2 y 90:10, y las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se evaporaron. El compuesto del título se aisló como un sólido amarillo (34,5 mg, 49%).

RMN ^{1}H (400MHz, d_{6}-DMSO) \delta (ppm) 4,52 (2H, d), 6,82 (1H, m), 7,22 (1H, s), 7,38 (1H, m), 7,51 (1H, d), 7,78 (2H, d), 8,18-8,23 (3H, m), 8,51 (1H, d), 8,62 (1H, s), 8,82 (1H, s), 9,01 (1H, t), 10,58 (1H, br s), 11,8 (1H, br s). LCMS: Rt 1,72 min. (97%), m/z (ES^{+}) 439 (M+H)^{+}.

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Compuesto 120

2-metoxi-N-(6-metilpiridin-3-il)metil-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida

Etapa 1

2-metoxi-N-(6-metilpiridin-3-il)metil-4-nitrobenzamida

185

Se disolvió ácido 2-metoxi-4-nitrobenzoico (293 mg, 1,49 mmoles) en DMF (2 ml), y se añadieron 4-metilmorfolina (220 \mul, 3,0 mmoles) y TBTU (1,79 g, 1,7 mmoles). La mezcla se agitó a rt durante 30 min., y se añadió C-(6-metilpiridin-3-il)metilamina (400 mg, 3,27 mmoles). La agitación se continuó a rt durante 12 h. Se añadió DCM (10 ml), y la fase orgánica se lavó con Na_{2}CO_{3} (5% ac.), HCl (3% ac.) y agua, y después se secó sobre Na_{2}SO_{4}. Después de la evaporación de los disolventes, el residuo se trituró con éter-hexano para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco.

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Etapa 2

4-amino-2-metoxi-N-[(6-metilpiridin-3-il)metil]benzamida

186

Se agitó una disolución de 2-metoxi-N-(6-metilpiridin-3-il)metil-4-nitrobenzamida (448 mg, 1,49 mmoles) en EtOH y EtOAc (8 ml cada uno), y se añadieron formiato de amonio (375 mg, 6 mmoles) y Pd al 10%/C (100 mg). La mezcla se calentó a reflujo durante 20 min., se enfrió, se filtró a través de celita, el sólido se lavó con EtOH, y los disolventes combinados se evaporaron para proporcionar el compuesto del título.

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Etapa 3

4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-hidroxi-N-[(6-metil-piridin-3-il)metil]benzamida

187

Se agitaron 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (285 mg, 1,03 mmoles) y 4-amino-2-metoxi-N-[(6-metilpiridin-3-il)metil]benzamida (280 mg, 1,03 mmoles) en ^{i}PrOH (5 ml), y se añadió HBr (48% ac., 380 \mul). La mezcla se calentó a reflujo durante 24 horas. La suspensión enfriada se vertió en NaHCO_{3} (sat. ac., 25 ml) y agua (25 ml), y se extrajo con CHCl_{3} (4 x 30 ml). Los extractos se secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna, eluyendo con 10% de CH_{2}Cl_{2}/MeOH. Las fracciones que contienen el producto se evaporaron, y el residuo se trituró con MeOH para proporcionar el compuesto del título como un sólido marrón.

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Etapa 4

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188

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Se pesaron ácido pirazol-4-borónico (19 mg, 0,17 mmoles), 4-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-2-hidroxi-N-[(6-metil-piridin-3-il)metil]benzamida (40 mg, 0,085 mmoles), K_{2}CO_{3} (24 mg, 0,17 mmoles) y Pd(dppf)Cl_{2}CH_{2}Cl_{2} (4 mg, 0,005 mmoles) en un tubo que se puede cerrar herméticamente. El tubo se inundó con nitrógeno, y se añadió dioxano-agua (4:1, 4 ml). El tubo se cerró herméticamente, se colocó en un baño ultrasónico bajo un caudal de gas nitrógeno durante 30 segundos y después se colocó en un baño de aceite a 85ºC. La reacción se agitó durante 28 horas, añadiendo porciones adicionales de ácido borónico (10 mg) y catalizador (2 mg) después de 2 h y 18 h. La mezcla bruta se absorbió sobre SiO_{2} y se purificó mediante cromatografía en columna, eluyendo con 1%-10% de MeOH/DCM. El producto obtenido se redisolvió en MeOH/DCM (4:1, 10 ml), y se añadió MsOH 0,1 M/MeOH (2 eq.), los disolventes se evaporaron, y el residuo se recogió en agua y se liofilizó para proporcionar el compuesto del título como su sal de bis-mesilato (38 mg). LCMS: Rt 0,92 min. (93,9%) m/z (ESI) 455 (M+H)^{+}.

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Compuesto 122

N-bencil-2-metoxi-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida

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189

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos descritos para el Compuesto 120, usando bencilamina en la etapa 1. LCMS: Rt 1,62 min. (100%) m/z (ESI) 440 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 124

N-piridin-2-ilmetil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]benzamida

190

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 129, usando 2-piridilmetilamina en la etapa 5. LCMS: Rt = 0,84 min. (100%), m/z (ESI) 412 (M+H)^{+}.

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Compuesto 127

(4-isopropilpiperazin-1-il)-{3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]fenil}metadona

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191

Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 129, usando 4-isopropilpiperazina en la etapa 5. LCMS: Rt = 0,84 min. (100%), m/z (ESI) 432 (M+H)^{+}.

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Compuesto 129

N-etil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]benzamida

Etapa 1

Éster etílico del ácido 3-(5-bromo-[1,2,4]triazol[l,5-a]pirazin-8-ilamino)benzoico

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192

Se agitaron 5,8-dibromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazina (1,39 g, 5,00 mmoles) y 3-aminobenzoato de etilo (0,93 g, 5,60 mmoles) en ^{i}PrOH (10 ml), y se añadió HBr (48% ac., 1,14 ml, 10 mmoles). La mezcla se calentó a 85ºC durante 4 h, y después se enfrió hasta rt y se paralizó con NaHCO_{3} (sat. ac., 25 ml). La suspensión resultante se enfrió hasta 0ºC, y el sólido blanco se recogió mediante filtración por succión y se lavó con agua (10 ml). El producto bruto se recogió en EtOH, y el disolvente se evaporó para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanquecino (1,79 g, 4,9 mmoles) que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 2

Éster etílico del ácido 3-[(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-terc-butoxicarbonil-amino]benzoico

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193

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Una disolución de éster etílico del ácido 3-(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)benzoico (1,79 g, 4,93 mmoles) en DCM (20 ml) se agitó en N_{2} a rt, y se añadieron BOC_{2}O (1,34 g, 6,16 mmoles) y DMAP (0,30 g, 2,46 mmoles). La agitación se continuó durante 2 h, momento en el que la LCMS indica la conversión completa del material de partida. La mezcla se filtró, y el filtrado se lavó con ácido cítrico diluido (pH 6, 5 ml) y con salmuera (5 ml), y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente proporcionó el compuesto del título como un aceite amarillo (1,87 g, 4,0 mmoles) que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 3

Éster etílico del ácido 3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amino}ben-zoico

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194

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Se burbujeó nitrógeno a través una mezcla de éster etílico del ácido 3-[(5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-terc-butoxicarbonilamino]benzoico (0,58 g, 1,25 mmoles), 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (0,49 g, 2,50 mmoles), K_{2}CO_{3} (0,35 g, 2,50 mmoles) y Pd(dppf)Cl_{2}DCM (102 mg, 0,125 mmoles) en dioxano (37,5 ml) y agua (9,6 ml). Se ajustó un condensador al matraz, el sistema se evacuó y se purgó con N_{2} (g), y después se calentó a 115ºC durante 25 min. Se retiró el baño de calentamiento, y se añadió CO_{2} (s) para enfriar y tamponar el sistema. El disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía sobre sílice, eluyendo con 10% hasta 50% de acetato de etilo en DCM, para proporcionar el compuesto del título como un aceite naranja (0,61 g, > 100%) que se usó sin purificación adicional.

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Etapa 4

Ácido 3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amino}benzoico

195

Se disolvió éster etílico del ácido 3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amino}benzoico impuro (0,61 g, 1,25 mmoles) en THF (2,5 ml), y se añadió KOH (2M ac., 2,5 ml, 5 mmoles), y la mezcla se calentó a 60ºC toda la noche. La disolución se enfrió y se filtró a través de celita, aclarando con agua. El filtrado se vertió en ácido cítrico (2M ac., 2,5 ml) y se agitó a 0ºC. El sólido resultante se recogió mediante filtración por succión, lavando con agua y se secó mediante suspensión en EtOH y evaporación a presión reducida, para proporcionar una goma marrón (280 mg).

Se obtuvo producto adicional mediante extracción del filtrado con DCM, para proporcionar un total combinado de 352 mg del compuesto del título. Éste se usó sin purificación adicional.

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Etapa 5

N-etil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]benzamida

196

Se agitaron ácido 3-{terc-butoxicarbonil-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]-amino}benzoico (42 mg, 0,10 mmoles), etilamina (12 M ac., 42 \mul, 0,50 mmoles), y trietilamina (28 \mul, 0,20 mmoles) en DMF (0,30 ml), y se añadió PyBOP (57 mg, 0,11 mmoles). La agitación se continuó toda la noche. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc (7 ml) y NaHCO_{3} (sat. ac., 7 ml), y las capas se separaron. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 5 ml) y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente proporcionó un aceite que se disolvió en MeOH (0,3 ml) que contiene HCl (12 M ac., 0,15 ml) y se agitó toda la noche. Se añadieron trietilamina (0,25 ml) y EtOH (2 ml), y los disolventes se eliminaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (7 mg). RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta = 13,29 ppm (s, 0,8 H); 10,01 (s, 0,9 H); 8,77 (s, 1,0 H); 8,65 (s, 1,0 H); 8,52 (s, 1,1 H); 8,41-8,37 (m, 2,1 H); 8,25 (s, 1,0 H); 8,08 (d, 1,0 H); 7,47 (d, 1,0 H); 7,41 (t, 1,1 H); 7,04-7,03 (m, 0,5 H); 3,32 (s, 29,2 H (agua)); 1,14 (t, 3,5 H). LCMS: Rt = 0,95 min. (100%), m/z (ESI) 349 (M+H)^{+}.

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Compuesto 131 N-(4-hidroxibencil)-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]benzamida

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197

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 129, usando 4-hidroxibencilamina en la etapa 5. LCMS: Rt = 0,98 min. (100%), m/z (ESI) 427 (M+H)^{+}.

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Compuesto 134 N-bencil-N-metil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]benzamida

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198

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 129, usando N-metilbencilamina en la etapa 5. LCMS: Rt = 1,15 min. (100%), m/z (ESI) 425 (M+H)^{+}.

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Compuesto 167

Amida del ácido 4-[8-(6-fenilacetilamino-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico

Etapa 1

N-(5-nitropiridin-2-il)-2-fenilacetamida

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199

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Una disolución de 2-amino-5-nitropiridina (4,17 g, 30 mmoles) en piridina (30 ml) se agitó a rt, y se añadió gota a gota una disolución de cloruro de fenilacetilo (4,64 g, 30 mmoles) en THF (30 ml). La mezcla se agitó durante 24 h y después se vertió en agua con hielo (250 ml) para proporcionar un sólido marrón, que se usó sin purificación adicional.

Este material se usó para preparar N-[5-(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-piridin-2-il]-2-fenilacetamida de una manera análoga a las etapas 2 y 3 de los métodos como se describen para el Compuesto 120.

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Etapa 4

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200

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 120, etapa 4, usando N-[5-(5-bromo[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino)-piridin-2-il]-2-fenilacetamida y ácido 2-(aminocarbonil)tiofen-4-borónico. LCMS: Rt 1,06 min. (100%) m/z (ESI) 471 (M+H)^{+}.

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Compuesto 169 2-(4-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-ilamino]fenil}-piperidin-1-il)acetamida

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201

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 84, usando 2-bromoacetamida en la etapa 1. LCMS: Rt = 0,81 min. (100%), m/z (ESI) 418 (M+H)^{+}.

\newpage

Compuesto 170

5-{8-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-3-trifluorometilfenilamino]-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoin-dol-1-ona

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202

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto GB15, usando 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-2,3-dihidroisoindol-1-ona. LCMS: Rt = 0,99 min. (95%), m/z (ESI) 537 (M+H)^{+}.

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Compuesto 171

[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-3-trifluorometilfenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il]amina

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203

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Este compuesto se puede preparar usando los métodos como se describen para el Compuesto 46, usando (5-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropilpiperazin-1-il)-3-trifluorometilfenil]amina. LCMS: Rt= 0,99 (95%), m/z (ESI) 472 (M+H)^{+}.

Otros ejemplos de compuestos de la invención, preparados mediante los procedimientos anteriores, se describen aquí más abajo.

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Condiciones de Purificación y Caracterización

De forma habitual, tras la síntesis, todos los compuestos se pueden purificar usando HPLC de fase inversa usando un sistema de HPLC preparativa de Gilson (bomba 322, detector UV/VIS 155, y un manipulador de líquidos 215). El Gilson 215 actúa tanto como un aparato de toma de muestras automático como un colector de fracciones. Los compuestos también se pueden purificar mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice.

Los compuestos se caracterizan mediante espectrometría de masas usando instrumentación cuadripular individual, con una fuente de electropulverización.

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Ensayos Biológicos que Demuestran la Utilidad de los Compuestos Ejemplo 1 Ensayo de MAPKAP-K5

Las reacciones de MAPKAP-K5 se llevaron a cabo en un formato FlashPlate usando 0,1 ó 0,2 \muCi de 33P-ATP; 0,6 \muM de ATP; 1 mU de MAPKAP-K5; 3 \muM de sustrato peptídico de MAPKAP-K5, incubado a temperatura ambiente durante 30 minutos.

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Ensayo de FlashPlate

La reacción de MAPKAP-K5 cinasa se lleva a cabo en una placa de polipropileno de 384 pocillos (Matrix Technologies), y entonces se transfiere a flashplate de 384 pocillos revestida con estreptavidina (Perkin-Elmer).

A los pocillos, que contienen 2 \mul de compuesto de ensayo o de inhibidor estándar, se añaden 13 \mul de mezcla enzimática o de diluyente, usando un aparato Hydra (Robbins Scientific).

Las reacciones comienzan por adición de 10 \mul de [2,5x] cóctel de sustrato usando un Multidrop (Thermo-Labsystems), para dar concentraciones finales en el ensayo de:

1 mU de MAPKAP-K5

3 \muM de sustrato peptídico de MAPKAP-K5

0,6 \muM de ATP

0,004 \muCi de [33P]-\gamma-ATP/\mul

1x tampón de reacción

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Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos.

Las reacciones se terminaron por adición de 25 \mul de EDTA (50 mM) a cada pocillo usando un Micro-fill (Biotek).

Las reacciones se transfirieron a una flashplate revestida con estreptavidina usando un sistema robótico Zymark. Las placas se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente.

Todos los pocillos se lavaron 3 veces con 100 \mul de disolución salina tamponada con fosfato usando un lavador de placas Tecan.

La radioactividad se determinó contando por centelleo la flashplate (pocillos vacíos) en un contador Packard TopCount.

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Mezcla Enzimática Enzima

50 mM de Tris HCl (pH 7,5)

0,1 mM de EGTA

2 mM de DTT

1 mg/ml de BSA

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Tampón de reacción

50 mM de Tris HCl (pH 7,5)

0,1 mM de EGTA

10 mM de acetato de magnesio

2 mM de DTT

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Los siguientes compuestos se han preparado o se pueden preparar según los métodos sintéticos descritos anteriormente. Para los fines de la Tabla 1 y Tabla 2 a continuación, la actividad de cada compuesto, que se puede determinar usando el método de ensayo de MAPKAPK5 descrito en el Ejemplo 1, se expresa según lo siguiente:

++++: el compuesto mostró una IC_{50} de 1-100 nM de MAPKAPK5

+++: el compuesto mostró una IC_{50} de 101-500 nM de MAPKAPK5

++: el compuesto mostró una IC_{50} de 501-1000 nM de MAPKAPK5

+: el compuesto mostró una IC_{50} de >1000 nM de MAPKAPK5

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TABLA 1 Estructura y actividad de compuestos ejemplares

204

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TABLA 2 Estructura y actividad de compuestos de benzamida ejemplares

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Ejemplo 2 Desarrollo de un ensayo para la identificación de reguladores de la expresión de MMP1 mediante fibroblastos sinoviales primarios activados

Para identificar compuestos que disminuyen la actividad degradante de la ECM de las células, la actividad degradante de la ECM de las células se puede inducir para permitir la detección apropiada de esta actividad, y para lograr una lectura más clara. En el contexto de AR, las células de elección son fibroblastos sinoviales de mamífero, y los desencadenantes que se pueden usar para inducir la actividad degradante de la ECM son citocinas apropiadas en el campo de la artritis: por ejemplo, TNF-\alpha, IL1\beta, IL6, OSM, IL17, y MIF1-\alpha. Esta lista no es detallada debido a la plétora de citocinas implicadas potencialmente en la patogénesis de la AR (Smolen y Steiner, 2003). Para construir un ensayo in vitro que sea tan similar como sea posible a la complejidad de la patología, el desencadenante aplicado debe ser una mezcla de factores generados poniendo en contacto células productoras de citocinas apropiadas en el campo de la artritis, tales como monocitos, macrófagos, células T, y células B, con un desencadenante. Las células productoras de citocinas responderán al contacto produciendo un complejo y una mezcla estimada de factores. Si la célula productora de citocinas usada también se encuentra en un paño sinovial, y si la citocina aplicada para producir este desencadenante se encuentra en el fluido sinovial de pacientes con artritis reumatoide, la mezcla de factores producida finalmente contendrá parte de los factores que están presentes en las articulaciones de pacientes con artritis.

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Principio del "ensayo de MMP"

Las metaloproteasas de la matriz (MMP) poseen diversos papeles fisiológicos, como por ejemplo la maduración de otras proteasas, factores de crecimiento, y la degradación de los componentes de la matriz extracelular. La MMP1 es uno de los miembros de la familia de las MMP que es capaz de degradar colágeno nativo, el principal componente del hueso y del cartílago. Una expresión incrementada de MMP1 por fibroblastos sinoviales (SF) es un diagnóstico para la progresión de la enfermedad artrítica, y predice procesos erosivos en la articulación (Cunnane et al., 2001). La expresión de MMP1 por los SF se puede incrementar mediante la activación de los SF con desencadenantes apropiados para la artritis reumatoide, como citocinas como TNF-\alpha o IL1\beta (Andreakos et al., 2003). Tomado en conjunto, la medida de los niveles de MMP1 producida por los SF activados es una lectura que es muy apropiada en el contexto de AR puesto que este suceso refleja el nivel de activación de los SF con respecto a un fenotipo erosivo como se observa en el paño sinovial. Si una expresión reducida de una diana farmacéutica candidata en los SF activados conduce a la reducción de la expresión de MMP1 por estas células, entonces se demuestra que la diana farmacéutica está implicada en la regulación de la expresión de MMP1 y de este modo se considera apropiada para el desarrollo de estrategias terapéuticas para el tratamiento de AR.

En los siguientes ejemplos, el desarrollo de un ensayo, denominado posteriormente como "ensayo de MMP", monitoriza la producción de MMP1 por fibroblastos sinoviales (SF) en respuesta a diversos desencadenantes activadores (Ejemplo 2.1). El uso de este ensayo se describe entonces para la validación de productos génicos que se consideran dianas farmacéuticas para el desarrollo de terapias contra la AR (Ejemplo 2.2). La validación de las dianas farmacéuticas se realiza usando adenovirus recombinantes, denominados posteriormente como virus reductores de la expresión o Ad-siRNA, que median la expresión en células de shRNA que reducen los niveles de expresión de genes seleccionados como dianas mediante un mecanismo a base de ARNi (ARN de interferencia) (véase el documento WO 03/020931). En la Tabla 3 se describe entonces la identificación de compuestos que modulan la actividad de las dianas farmacéuticas validadas. El uso del "ensayo de MMP" para ensayar compuestos que modulan la actividad de las dianas farmacéuticas identificadas se describe posteriormente más abajo.

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Ejemplos de Ensayo Virus de control usados

Los virus de control usados en estos estudios se enumeran a continuación. Se generaron adenovirus dE1/dE2A a partir de estos plásmidos adaptadores mediante cotransfección del plásmido auxiliar pWEAd5AfIII-rITR.dE2A en células de empaquetamiento PER.E2A, como se describe en el documento WO 99/64582.

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Virus de control negativo

: Ad5-eGFP_KD: secuencia diana: GCTGACCCTGAAGTTCATC (SEC ID NO: 1). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.

: Ad5-Luc_v13_KD: secuencia diana GGTTACCTAAGGGTGTGGC (SEC ID NO: 2). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.

: Ad5-M6PR_v1_KD: secuencia diana CTCTGAGTGCAGTGAAATC (SEC ID NO: 3). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.

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Virus de control positivo

: Ad5-MMP1_v10_KD: secuencia diana ACAAGAGCAAGATGTGGAC (SEC ID NO: 4). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.

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Virus usados para la validación de la diana

: Ad5-MAPKAPK5_v13_KD: secuencia diana CGGCACTTTACAGAGAAGC (SEC ID NO: 5). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.

: Ad5-MAPKAPK5_v12_KD: secuencia diana ATGATGTGTGCCACACACC (SEC ID NO: 6). Clonado usando sitios Sap1 en vector y virus generado como se describe en el documento WO 03/020931.

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Ejemplo 2.1

Desarrollo del ensayo de MMP

Para la medida de MMP1 se desarrolló un ELISA en formato de 384 pocillos. Se ensayaron diversos anticuerpos primarios, así como diversos protocolos de ELISA. El siguiente protocolo se desarrolló y validó para medir los niveles de MMP1 en sobrenadante de SF en placas de 384 pocillos: placas blancas de 384 pocillos Lumitrac 600 (Greiner) se revisten con 2 \mug/ml de anticuerpo anti-MMP1 MAB1346 (Chemicon). El anticuerpo se diluyó en tampón 40 (1,21 g de base Tris (Sigma), 0,58 g de NaCl (Calbiochem) y 5 ml de NaN_{3} al 10% (Sigma) en 1 l de agua milliQ, y se ajustó hasta pH 8,5). Después de la incubación durante toda la noche a 4ºC, las placas se lavaron con PBS (80 g de NaCl, 2 g de KCl (Sigma), 11,5 g de Na_{2}HPO_{4}.7H_{2}O y 2 g de KH_{2}PO_{4} en 10 l de milliQ: pH 7,4), y se bloquearon con 100 \mul/pocillo de tampón de caseína (caseína al 2% (VWR International) en PBS). Al siguiente día, el tampón de caseína se eliminó de las placas de ELISA y se sustituyó por 50 \mul/pocillo de tampón de EC (4 g de caseína, 2,13 g de Na_{2}HPO_{4} (Sigma), 2 g de albúmina bovina (Sigma), 0,69 g de NaH_{2}PO_{4}.H_{2}O (Sigma), 0,5 g de CHAPS (Roche), 23,3 g NaCl, 4 ml de 0,5 M de EDTA pH 8 (Invitrogen), 5 ml de NaN_{3} al 10% en 1 l de milliQ, y se ajustó hasta pH 7,0). A las placas de muestras descongeladas se añadieron 0,25 mM de DTT (Sigma). Tras la eliminación del tampón de EC, se transfirieron 20 \mul de muestra a las placas de ELISA. Tras la incubación toda la noche a 4ºC, las placas se lavaron dos veces con PBS y una vez con PBST (PBS con 0,05% de Tween-20 (Sigma)) y se incubaron con 35 \mul/pocillo de disolución de anticuerpo anti-MMP1 biotinilado (R&D). Este anticuerpo secundario se diluyó en tampón C (0,82 g de NaH_{2}PO_{4}.H_{2}O, 4,82 g de Na_{2}HPO_{4}, 46,6 g NaCl, 20 g de albúmina bovina y 4 ml de 0,5M de EDTA pH 8 en 2 l de milliQ y se ajustó hasta pH 7,0) a una concentración de 5 \mug/ml. Después de 2 h de incubación a RT, las placas se lavan como se describe anteriormente y se incuban con 50 \mul/pocillo de conjugado de estreptavidina-HRP (Biosource). El conjugado de estreptavidina-HRP se diluyó en tampón C a una concentración de 0,25 \mug/ml. Después de 45 min., las placas se lavaron como se describe anteriormente y se incubaron durante 5 minutos con 50 \mul/pocillo de sustrato de ELISA BM Chem (Roche). La lectura se realiza en el luminómetro Luminoscan Ascent (Labsystems), con un tiempo de integración de 200 ms, o con un lector Envision (Perkin Elmer).

El incremento de la expresión de MMP1 mediante los SF al tratarlos con citocinas apropiadas en el campo de AR TNF-\alpha, IL1\beta y OSM), o una combinación de las mismas, se muestra en la Figura 2 como barras blancas. Para este experimento, se siembran los SF en placas de 96 pocillos, 3.000 células/pocillo. 24 h más tarde, el medio se cambia a medio M199 suplementado con 1% de FBS. Un día después del cambio de medio, se añaden las citocinas o sus combinaciones a los cultivos, añadiéndose cada citocina a una concentración final de 25 ng/ml. 72 h después de la adición de las citocinas, el sobrenadante se recogió y se procesó en el ELISA de MMP1 como se describe en el protocolo dado anteriormente. En paralelo con este experimento, los SF se activan, usando el mismo protocolo, con el sobrenadante de células THP1 (diluidas 2 veces en M199 + 1% de FBS) tratadas con las mismas citocinas o combinaciones de citocinas durante 48 h en medio M199 + 1% de FBS. Los niveles de MMP1 para estas muestras se muestran en la Figura 2 como barras grises. La inducción de la expresión de MMP1 por los SF activados con los sobrenadantes de células THP1 tratadas con TNF-\alpha es más fuerte (inducción de >4,5 veces) en comparación con los SF accionados con TNF-\alpha recombinante sola (inducción de 3 veces), y casi iguala a la inducción de 5 veces obtenida mediante una mezcla de 3 citocinas purificadas (TNF-\alpha, IL1\betab y OSM). Este resultado indica que el sobrenadante de células THP1 inducidas por TNF-\alpha contiene, además de TNF-\alpha, factores proinflamatorios adicionales que activan los SF con respecto a la expresión de MMP1. Puesto que el papel de TNF-\alpha en la patogénesis de la AR está validado (los bloqueadores de TNF-\alpha tales como Infliximab y Etanercept muestran cierta eficacia en el tratamiento de pacientes con AR) y las células de THP-1 son representativas de monocitos/macrófagos presentes en la articulación de los pacientes con AR, la mezcla desencadenante a base de TNF-\alpha, preparada poniendo en contacto células THP-1 con TNF-\alpha, contendrán factores presentes en las articulaciones de pacientes con AR, y subsiguientemente es apropiada para AR. Este desencadenante complejo a base de TNF-\alpha, denominado posteriormente como el "desencadenante complejo", se usará posteriormente como base para el "ensayo de MMP".

La inhibición de la activación de SF por el "desencadenante complejo" se muestra usando dexametasona, un potente agente antiinflamatorio que también reduce enormemente la artritis inducida por colágeno en roedores (Yang et al., 2004) (Figura 3). La desametasona demuestra reducir, de forma dependiente de la dosis, cantidades de MMP1 producida por los SF activados por el desencadenante complejo. Los SF se siembran a una densidad de 3000 células/pocillo en placas de 96 pocillos. 24 h después de la siembra, se añaden a las células concentraciones crecientes de dexametasona. Tras la incubación durante la noche, el medio de cada pocillo se renueva a sobrenadante de células THP-1 tratadas con TNF-\alpha (diluidas al 50% en M199 + 0,5% de FBS), y el día anterior se añade la misma concentración de dexametasona. 48 h después del tratamiento, el sobrenadante se recoge y se somete al ELISA de MMP1 descrito anteriormente. La adición de dexametasona reduce claramente la expresión de MMP1 por los SF, con un valor de IC_{50} de alrededor de 1 nM (véase la Figura 3). Estos datos muestran que la expresión de MMP1 por los SF activados se puede reducir mediante la adición de un inhibidor fisiológicamente apropiado, y representa una prueba de principio para el "ensayo de MMP".

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Ejemplo 2.2

MAPKAPK5 Modula la Expresión de MMP1 Inducida por el "Desencadenante Complejo" de SF (A) El Virus Ad-siRNA Funciona Reduciendo la Expresión de MAPKAPK5

Los adenovirus recombinantes que median la expresión de los siRNA dirigidos a MAPKAPK5 y eGFP se generan según el procedimiento descrito en el documento WO 03/020931. La secuencia diana usada en el adenovirus recombinante es CGGCACTTTACAGAGAAGC (SEC ID NO: 5) así como ATGATGTGTGCCACACACC (SEC ID NO: 6). La secuencia diana dentro del ARNm de eGFP usada en el adenovirus recombinante es: GCTGACCCT
GAAGTTCATC (SEC ID NO: 1). Estas secuencias se clonan en el plásmido adaptador usando los sitios Sap1. Los adenovirus dE1/dE2A se generan a partir de estos plásmidos adaptadores mediante cotransfección del plásmido auxiliar pWEAd5AfIII-rITR.dE2A en células de empaquetamiento PER.E2A, como se describe en el documento WO 99/64582.

La funcionalidad de un adenovirus dirigido a MAPKAPK5 se ensayó según lo siguiente. Estos adenovirus se usan para infectar SF humanos primarios cultivados en cápsulas de Petri según lo siguiente. En el primer día, se siembran 500.000 SF por cápsula de Petri. Un día más tarde, las células se infectan con Ad5-MAPKAPK5-v13_KD (1,6E9 VP/ml) o Ad5-eGFP-v5_KD (1,3E10 VP/ml) a una MOI de 4000 (basado en los títulos (número de partículas víricas por ml) definidos por los virus mediante Q-rt-PCR). En el 7º día, las células se despegan de la cápsula de Petri según procedimiento estándar usando una disolución de EDTA con tripsina. La tripsina se neutraliza entonces mediante adición de medio de crecimiento DMEM suplementado con 10% de FBS. Las células se recogen entonces mediante una etapa de centrifugación (1000 rpm, 5 min.). El pelete se lisa en 100 \mul de tampón RIPA reciente (50 mM de Tris pH 7,5, 150 mM de NaCl, 1% de desoxicolato, 1% de Triton X100, 0,1% de SDS). Las muestras se tratan entonces con ultrasonidos durante 10 segundos. La concentración proteica de las muestras se determina entonces usando el kit BCA (Pierce, Catálogo nº 23227) como se describe por el proveedor, usando BSA como patrón. A 30 \mug de lisado celular, diluido hasta 19,5 \mul en tampón de RIPA, se añadieron 3,5 \mul de agente reductor (agente reductor NuPage nº 10, Invitrogen NP0004) y 7,5 \mul de tampón de muestra (tampón de muestra NuPage LDS, Invitrogen NP0007). La muestra de 30 \mul se hierve entonces durante 5 minutos y se carga en un gel de poliacrilamida al 10% (Invitrogen NP0301). Para permitir la estimación del nivel de reducción de la expresión proteica, también se cargaron en el gel 15 \mug, 7,5 \mug y 3,75 \mug del lisado de las células infectadas con Ad5-eGFP-v5_KD. El gel se hizo pasar entonces durante 2 horas a 100V en 1x de tampón MOPS/SDS NuPage (Invitrogen NP001). Para estimar el tamaño de la proteína en el gel, se usaron 10 \mul de Seablue Plus Prestained estándar (Invitrogen LC5925). Las proteínas en el gel se transfirieron entonces sobre una membrana de PVDF (Invitrogen LC2002) mediante un procedimiento de transferencia en húmedo usando un tampón de transferencia preparado mezclando 100 ml de tampón de transferencia Nupage 20* (NP0006-1), 400 ml de metanol y 1500 ml de agua Milli Q. Antes de la transferencia, la membrana se empapó primeramente en metanol y en tampón de transferencia. La transferencia se realiza a 100V durante 90 minutos. La membrana se bloqueó entonces empapando durante 30 minutos en tampón de bloqueo (2% de polvo de bloqueo (Amersham, RPN 2109) preparado en PBST (PBS suplementado con 0,1% de Tween 20 (Sigma, P1379)). Después del bloqueo, la inmunodetección se llevó a cabo usando un anticuerpo monoclonal de ratón frente a MAPKAPK5 (BD Biosciences, Catálogo nº 612080) diluido 250 veces en tampón de bloqueo. Después de la incubación durante toda la noche con este anticuerpo primario, la membrana se lavó 3 veces con PBST y se incubó 1 h con el anticuerpo secundario (anticuerpo anti-Ig de ratón de cabra policlonal, conjugado con HRP (DAKO PO447), diluido 50000 veces en tampón de bloqueo. La transferencia se lavó entonces 3 veces en PBST, y la detección se realizó con el ECL advance (RPN2109, Amersham) en un Kodakimager según las instrucciones del fabricante. La transferencia Western reveló un menor nivel de expresión de MAPKAPK5 en las células infectadas con Ad5-MAPKAPK5-v13_KD, en comparación con las células infectadas con el virus de control negativo Ad5-eGFP-v5_KD. La comparación con las muestras diluidas infectadas con Ad5-eGFP-v5_KD permitió estimar que la reducción de la expresión era de 2 veces. Se demuestra una carga igual de las muestras de 30 \mug mediante inmunodetección de \beta-actina tras la eliminación del anticuerpo anti-MAPKAPK5 mediante un "procedimiento de extracción" (ebullición durante 5 minutos de la membrana en PBST). La inmunodetección de \beta-actina se realiza según el método descrito para la detección de MAPKAPK5, pero usando un anticuerpo policlonal de cabra contra \beta-actina (Santa Cruz, Catálogo nº SC-1615) a una dilución de 1000 veces como el anticuerpo primario, y un anticuerpo anti-de cabra de conejo a una dilución de 50000 veces como anticuerpo secundario. Los resultados de este experimento se dan en la Figura 4. Tomado en conjunto, este experimento demostró la funcionalidad del virus Ad-siRNA producido para reducir los niveles de expresión de MAPKAPK5 en los SF humanos primarios.

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(B) Ad-siRNA Reductor de la Expresión de MAPKAPK5 Reduce la Expresión de MMP1 Inducida por SF

La eficacia del virus Ad5-MAPKAPK5-v13_KD en el "ensayo de MMP" se ensayó según lo siguiente. El primer día, los SF (paso 9 a 10) se siembran en placas de 96 pocillos a una densidad de 3000 células por pocillo en medio de crecimiento sinovial completo (Cell Applications). Un día más tarde, las células se infectan con cantidades crecientes (3, 6, 9, 12 ó 15 \mul) de los siguientes virus: Ad5-eGFP-v5_KD, Ad5-MAPKAPK5-v12_KD, Ad5-MAPKAPK5-v13_KD, Ad5-MMP1-v10_KD. La carga viral se corrige mediante adición del virus neutro Ad5-Luc-v13_KD para llevar el volumen vírico final en las células a 15 \mul en cada pocillo. Esa corrección garantiza que los efectos observados no resultan de la carga vírica aplicada a las células. Las células se incuban entonces durante 5 días antes de la etapa de activación. Esta etapa implica la sustitución, en cada pocillo, del medio de crecimiento por 75 \mul de medio M199 suplementado con 25 \mul de "desencadenante complejo". 48 horas después de la etapa de activación, el sobrenadante se recoge y se somete al ELISA de MMP1 como se describe en el Ejemplo 1. Los resultados del experimento se muestran en la Figura 5. La calidad del experimento se demuestra mediante la eficacia del virus Ad-siRNA dirigido contra la propia MMP1. Este virus de control positivo reduce fuertemente la expresión de MMP1 mediante los SF, mientras que el virus de control negativo, diseñado para seleccionar como diana la expresión de luciferasa, no influye en los niveles de expresión de MMP1. Dos virus usados para validar la diana de MAPKAPK5 (Ad5-MAPKAPK5-v12_KD y Ad5-MAPKAPK5-v13) también condujeron a una reducción clara de la expresión de MMP1 inducida por el desencadenante complejo mediante los SF humanos primarios. Se puede concluir, a partir de este experimento, que MAPKAPK5 representa una diana farmacéutica valiosa que demuestra modular la expresión de MMP1 en los SF. De forma similar, se espera que la inhibición de la actividad enzimática de MAPKAPK5 mediante un compuesto de pequeña molécula reduzca la expresión de MMP1 inducida por la "citocina compleja" en el "ensayo de MMP". También se predice que la inhibición de la actividad enzimática de MAPKAPK5 mediante un compuesto de pequeña molécula reduce la degradación de la articulación asociada con AR.

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(C) Evaluación del "Ensayo de MMP" in vitro de Compuestos que Inhiben MAPKAPK5

Los compuestos que inhiben la actividad de MAPKAPK5 en el ensayo bioquímico (es decir, célula libre, usando enzima purificada) se ensayan en el "ensayo de MMP" según el siguiente protocolo.

Las disoluciones madre de los compuestos (todas a una concentración de 10 mM en 100% de DMSO) se diluyen 10 veces en agua (agua destilada, GIBCO, libre de ADNasa y ARNasa) para obtener un lote de trabajo intermedio de 1 mM en 10% de DMSO. Este lote de trabajo intermedio se diluye adicionalmente 3 veces (o 10 veces) en 10% de DMSO para obtener un lote de trabajo intermedio de 333 \muM (o 100 \muM) de concentración, respectivamente, en 10% de DMSO. Los lotes de trabajo intermedios de 1 mM así como de 333 \muM (o 100 \muM) se diluyen entonces adicionalmente 10 veces en 1,1% de DMSO para obtener los 10x lotes de trabajo a 100 \muM y 33,3 \muM (o 10 \muM) de concentración en 2% de DMSO. Este 10x lote de trabajo se diluye entonces 10 veces en medio M199 suplementado con 1% de FBS para obtener la "preparación de compuesto 1x" final que contiene los compuestos a 10 \muM y 3,33 \muM (o 1 \muM) así como 0,2% de DMSO. Estas son las condiciones finales a las que los compuestos se ensayan en las células. Paralelamente, la disolución de trabajo 10x se diluye 10 veces en "desencadenante complejo" (es decir, el sobrenadante de células THP1 tratadas con TNF-\alpha producidas como se describe en el Ejemplo 1) que se diluye 2 veces en M199 suplementado con 1% de FBS para producir las "preparaciones de compuesto 1x en desencadenante complejo al 50%".

En el 1^{er} día, se siembran RASF en placas de 96 pocillos (fondo plano, tratadas con cultivo de tejido, Greiner) a una densidad de 3000 células/pocillo en medio de crecimiento sinovial completo (Cell Applications). En el día 5, los compuestos se añaden a las células cultivadas según lo siguiente. El medio se elimina completamente de las células y se sustituye por 75 \mul de las "preparaciones de compuesto 1x" que contienen los compuestos a 10 \muM o 3,33 \muM (o 1 \muM) en medio M199 suplementado con 1% de FBS y 0,2% de DMSO. Después de un período de incubación de 2 horas, que permite que los compuestos se equilibren y entren en las células, se añaden 25 \mul de las "preparaciones de compuesto 1x en desencadenante complejo al 50%" a los pocillos en la parte superior de la "preparación de compuesto 1x", en los pocillos que contienen los compuestos correspondientes a la concentración correspondiente. De esta manera, finalmente se aplica a las células un desencadenante complejo diluido 8 veces. Entonces se lleva a cabo una incubación de 48 h, y entonces se procesan 20 \mul del sobrenadante celular en el ELISA de MMP1 como se describe anteriormente, proporcionando datos en bruto (RLU: unidades de luminiscencia relativas). En los experimentos se incluyen controles. Se añade un control de señal máxima, en el que las células son activadas por el desencadenante complejo pero sólo el vehículo de 0,2% de DMSO (y de este modo sin compuesto). Este control indica el nivel máximo de MMP1 que se puede lograr en el ensayo. También se incluye en estos experimentos un control de señal mínima. Aquí, las células no están activadas. El medio de las células se cambia entonces a 100 \mul de medio M199 suplementado con 1% de FBS en el 5º día. Este control vuelve los niveles de MMP1 basales producidos por los RASF. El porcentaje de inhibición de la expresión de MMP1 logrado por los compuestos se calcula entonces basándose en los datos de RLU devueltos por el ELISA, con la siguiente fórmula: [[(niveles de MMP1 máximos - niveles de MMP1 mínimos) - (compuesto X de nivel MMP1 a la concentración Y - niveles de MMP1 mínimos)]/(niveles de MMP1 máximos - niveles de MMP1 mínimos)] x 100.

La toxicidad de los compuestos se evalúa según lo siguiente. En el 1^{er} día, los SF se siembran en placas blancas de 96 pocillos tratadas con cultivo tisular, a una densidad de 3000 células por pocillo en 100 \mul de medio de crecimiento sinovial completo. La manipulación de los compuestos, la adición de los compuestos a las células, así como la activación de las células se lleva a cabo posteriormente como se describe anteriormente en este ejemplo para la determinación de los niveles de MMP1. Después del período de incubación de 48 horas, el medio se elimina de los pocillos, y se sustituye por 50 \mul de medio M199 reciente suplementado con 1% de FBS. Entonces se añaden a los pocillos 50 \mul de sustrato (kit de viabilidad celular Promega Celltiter Glow). Después de un período de incubación de 10 minutos, se mide la señal de luminiscencia. Una reducción de la señal de luminiscencia en más de 50%, en comparación con los pocillos de control máximo, se considera que refleja una toxicidad significativa. No se observó toxicidad para los compuestos ensayados en el "ensayo de MMP".

Se entenderá que factores tales como la capacidad de penetración celular diferencial de los diversos compuestos puede contribuir a las discrepancias entre la actividad de los compuestos en los ensayos bioquímicos y celulares in vitro de MMP.

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Para los fines de la Tabla 3 y Tabla 4 a continuación, la EC_{50} de MMP1 de cada compuesto, que se puede determinar usando el método de ensayo descrito aquí, se expresa según lo siguiente:

****: el compuesto mostró una EC_{50} de MMP1 1-100 nM

***: el compuesto mostró una EC_{50} de MMP1 101-500 nM

**: el compuesto mostró una EC_{50} de MMP1 501-1000 nM

*: el compuesto mostró una EC_{50} de MMP1 >1000 nM

TABLA 3

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TABLA 4

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Ejemplo 3 Ensayo para evaluar el efecto de los compuestos sobre la liberación de citocinas por PBMC humanas

Se aislaron células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) a partir de "capas leucocíticas" preparadas de sangre de voluntarios sanos, aisladas esencialmente según el método de Boyum (1984). De forma breve, la capa leucocítica se diluyó 1:1 con 1x PBS (Gibco) y se pusieron 30 ml con cuidado sobre la parte superior de 20 ml de Lymphoprep^{TM} (Lucron Bioproducts) en tubos Falcon de 50 ml. Tras la centrifugación (35 min., 400 g, 18ºC), las células mononucleares se recogieron de la interfase blanca y se lavaron 3 veces con 1x PBS mediante resuspensión y centrifugación (10 min., 200 g). Las PBMC aisladas se resuspendieron finalmente en RPMI 1640 (número de Catálogo 21875, Gibco) que se suplementó con 10% de FBS inactivado por calor (Hyclone).

Para el ensayo, las PBMC se sembraron a 2,5E6 células/ml en 160 \mul en placas de 96 pocillos (Nunc). Se realiza una dilución en serie de los compuestos de ensayo en primer lugar en DMSO (Sigma), y después se diluyen 50 veces en medio M199 (Gibco) que contiene 1% de FBS inactivado por calor. Los compuestos se diluyen posteriormente 1/10 en las placas de ensayo para obtener una concentración final de DMSO de 0,2%. Las células se preincuban con los compuestos durante 1 h a 37ºC, 5% de CO_{2}. Después, las células se estimulan con LPS (Escherichia coli serotipo 026:B6, número de Catálogo L2654, Sigma), y se añade en un velocidad de 20 \mul hasta una concentración final de 1 \mug/ml, y las células se cultivan posteriormente durante 24 h. Las placas se centrifugan, y el sobrenadante se recoge y se almacena a -80ºC hasta el análisis de las diluciones apropiadas en los ELISA.

Se desarrolló el siguiente protocolo de ELISA quimioluminiscente de 384 pocillos para medir los niveles de TNF\alpha en el sobrenadante: placas blancas de 384 pocillos Lumitrac 600 (Greiner) se revisten con anticuerpo de captura anti-TNF\alpha (40 \mul/pocillo) (número de Catálogo 551220, BD Pharmingen) que se diluye hasta 1 \mug/ml en 1x PBS (Gibco). Tras la incubación durante toda la noche a 4ºC, las placas se lavaron con 1x PBS (80 g de NaCl, 2 g de KCl (Sigma), 11,5 g de Na_{2}HPO_{4}.7H_{2}O y 2 g de KH_{2}PO_{4} en 10 l de milliQ; pH 7,4) y se bloquearon con 100 \mul/pocillo de tampón B (1 x PBS que contiene 1% de BSA (Sigma), 5% de sacarosa (Sigma) y 0,05% de NaN_{3} (Sigma)). Después de una incubación durante 4 h a RT, el tampón de bloqueo se eliminó y las placas se lavaron una vez con PBST (1x PBS con 0,05% de Tween-20 (Sigma)). Después, se transfirieron 40 \mul de muestra a las placas de ELISA, y las placas se incubaron a 4ºC. Al día siguiente, las placas se lavaron 3 veces (dos veces con PBST y una vez con PBS), y se añadieron 35 \mul/pocillo de anticuerpo anti-TNF\alpha biotinilado (número de Catálogo 554511, BD Pharmingen) diluido en primer lugar hasta una concentración de 250 ng/ml en tampón D (1x PBS con 1% de BSA). Después de 2 h de incubación a RT, las placas se lavaron como se describe anteriormente, y se añaden 35 \mul/pocillo de una dilución 1/2000 de conjugado de estreptavidina-HRP (número de Catálogo SNN2004, Biosource) en tampón D. Después de 45 minutos, las placas se lavan como se describe anteriormente y se incuban durante 5 minutos con 50 \mul/pocillo de BM Chemiluminescence ELISA Substrate POD (Roche). La lectura se realiza en el luminómetro Luminoscan Ascent (Labsystems), con un tiempo de integración de 100 milisegundos, proporcionando datos sin tratar (RLU: unidades de luminiscencia relativas). Los siguientes controles incluyen los experimentos, un control de señal máxima, en el que las células se activan mediante LPS pero sólo se añade el vehículo de DMSO al 0,2% (y de este modo no se añade compuesto). Este control indica el nivel máximo de TNF\alpha que se puede lograr en el ensayo. También se incluye en estos experimentos un control de señal mínima. Aquí, las células no son activadas. Este control da los niveles de TNF\alpha basales producidos por las PBMC. El porcentaje de inhibición (PIN) de la liberación de TNF\alpha, logrado por los compuestos, se calcula entonces basándose en los datos de RLU devueltos por el ELISA, con la siguiente fórmula: 100 - [((compuesto X del nivel de TNF\alpha a la concentración Y - niveles de TNF\alpha mínimos)/(niveles de TNF\alpha máximos - niveles de TNF\alpha mínimos)) x 100]. Cuando los compuestos se ensayan a 8 concentraciones (dilución en serie de 1/3), los valores de EC50 se pueden calcular mediante ajuste de curvas de las medias de los datos de PIN logrados para un compuesto en cada concentración de ensayo.

Para ensayar el efecto de los compuestos sobre la liberación de IL1 e IL6 mediante cultivos de PBMC estimulados con LPS, se pueden medir diluciones apropiadas del sobrenadante usando el mismo protocolo de ELISA como se describe d. Se pueden usar anticuerpos emparejados para ELISA de IL1 e IL6 (todos del R&D Systems) según lo siguiente: anticuerpo de captura anti-IL1 (número de Catálogo MAB601) usado a 0,5 \mug/ml, anticuerpo de detección anti-IL1 biotinilado (número de Catálogo BAF201) usado a 50 ng/ml; anticuerpo de captura anti-Il6 (número de Catálogo MAB206) usado a 1 \mug/ml; anticuerpo de detección anti-IL6 biotinilado (número de Catálogo BAF206) usado a 50 ng/ml.

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Para los fines de la Tabla 5 a continuación, la EC_{50} de PBMC de cada compuesto, que se puede determinar usando el método de ensayo descrito aquí, se expresa según lo siguiente:

\alm{4}: el compuesto mostró una EC_{50} de PBMC 1-100 nM

\alm{3}: el compuesto mostró una EC_{50} de PBMC 101-500 nM

\alm{2}: el compuesto mostró una EC_{50} de PBMC 501-1000 nM

#: el compuesto mostró una EC_{50} de PBMC >1000 nM

TABLA 5

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254

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La presente Solicitud describe un método de tratamiento o prevención de enfermedades inflamatorias, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite un inhibidor terapéuticamente eficaz de cantidad inhibidora de proteína cinasa 5 activada por proteína cinasas activadas por mitógenos de un compuesto según la fórmula 1.

Otro aspecto de la presente Solicitud se refiere a un método de tratamiento o profilaxis de una afección caracterizada por una actividad anormal de las metaloproteinasas de la matriz, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto inhibidor de las metaloproteinasas de la matriz según la Fórmula 1.

Un aspecto adicional de la presente Solicitud es un método de tratamiento o profilaxis de una afección seleccionada de enfermedades que implican la degradación de la matriz extracelular, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz inhibidora de las metaloproteinasas de la matriz de un compuesto según la Fórmula 1.

Todavía un aspecto adicional de la presente Solicitud es un método o profilaxis de una afección seleccionada de enfermedades que implican una expresión celular anormal de MMP1, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz inhibidora de las metaloproteinasas de la matriz de un compuesto según la Fórmula 1.

Una realización especial de la Solicitud es un método de tratamiento o prevención de artritis reumatoide, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según la Fórmula 1.

Esta invención también se refiere al uso de los presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una afección prevenida, mejorada o eliminada por administración de un inhibidor de proteína cinasa 5 activada por proteína cinasas activadas por mitógenos, o una afección caracterizada por actividad anormal de colagenasa, o una afección seleccionada de enfermedades que implican inflamación, lo más preferible para el tratamiento de artritis reumatoide.

La administración del compuesto de la presente invención al sujeto paciente incluye tanto la autoadministración como la administración por otra persona. El paciente puede necesitar tratamiento para una enfermedad o afección médica existente, o puede desear un tratamiento profiláctico para prevenir o reducir el riesgo de enfermedades y afecciones médicas afectadas por una perturbación en el metabolismo óseo. El compuesto de la presente invención se puede suministrar al paciente sujeto de forma oral, transdérmica, vía inhalación, inyección, nasalmente, rectalmente, o vía una formulación de liberación sostenida.

Un régimen preferido del presente método comprende la administración a un sujeto que sufre una afección caracterizada por inflamación con una cantidad eficaz inhibidora de las metaloproteinasas de la matriz de un compuesto de la presente invención durante un período de tiempo suficiente para reducir los niveles anormales de degradación de la matriz extracelular en el paciente, y preferiblemente terminar los procesos que se autoperpetúan responsables de dicha degradación. Una realización especial del método comprende administrar una cantidad eficaz inhibidora de las metaloproteinasas de la matriz de un compuesto de la presente invención a un paciente sujeto que sufre de o es susceptible al desarrollo de artritis reumatoide, durante un período de tiempo suficiente para reducir o prevenir, respectivamente, la degradación del colágeno y del hueso en las articulaciones de dicho paciente, y preferiblemente terminar los procesos que se autoperpetúan responsables de dicha degradación.

La toxicidad y la eficacia terapéutica de tales compuestos se pueden determinar mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal al 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La relación de dosis entre los efectos tóxico y terapéutico es el índice terapéutico, y se puede expresar como la relación LD50/ED50. Se prefieren compuestos que muestran índices terapéuticos elevados. Aunque se pueden usar compuestos que presentan efectos secundarios tóxicos, se debería tener cuidado en diseñar un sistema de suministro que dirija tales compuestos al sitio del tejido afectado, a fin de minimizar el daño potencial a las células no infectadas y, de ese modo, reducir los efectos secundarios.

Los datos obtenidos de los ensayos con cultivos celulares y estudios con animales se pueden usar para formular un intervalo de dosificaciones para uso en seres humanos. La dosificación de tales compuestos está preferiblemente dentro de un intervalo de concentraciones circulantes que incluye la ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. Para cualquier compuesto usado en el método de la invención, la dosis terapéuticamente eficaz se puede estimar inicialmente a partir de ensayos con cultivos celulares. Se puede formular una dosis en modelos con animales para lograr un intervalo de concentración plasmática circulante que incluya la IC50 (es decir, la concentración del compuesto de ensayo que logra una inhibición semimáxima de los síntomas) como se determina en cultivo celular. Tal información se puede usar para determinar de forma más exacta las dosis útiles en seres humanos. Los niveles en plasma se pueden medir, por ejemplo, mediante cromatografía de líquidos de altas prestaciones.

Una cantidad terapéuticamente eficaz preferida del compuesto de la presente invención a administrar a un paciente sujeto es alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg, administrada de una a tres veces al día. Por ejemplo, un régimen eficaz del presente método puede administrar alrededor de 5 mg a alrededor de 1000 mg de dicho compuesto de la presente invención desde una a tres veces al día. Sin embargo, se entenderá que la cantidad de dosis específica para cualquier paciente sujeto particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, vía de administración, tasa de excreción, combinación farmacéutica, y la gravedad de la afección inflamatoria particular. Una consideración de estos factores está dentro del alcance del médico normalmente experto con el fin de determinar la cantidad de dosificación terapéuticamente eficaz o profilácticamente eficaz necesaria para prevenir, contrarrestar o detener el avance de la afección.

Los compuestos de la invención se pueden incorporar en composiciones farmacéuticas adecuadas para administración. Tales composiciones comprenden típicamente al menos un compuesto de la invención y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se usa aquí, la expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye vehículos sólidos tales como lactosa, estearato de magnesio, yeso, sacarosa, talco, ácido esteárico, gelatina, agar, pectina, goma arábiga, o similar; y líquidos tales como aceites vegetales, aceite de cacahuete y agua estéril, o similar, cualesquiera y todos los disolventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y que retrasan la absorción, y similares, compatibles con la administración farmacéutica. Este listado de vehículos farmacéuticamente aceptables no se debe de interpretar como limitante. El uso de tales medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica. Excepto que en tanto en cuanto cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se contempla su uso en las composiciones. También se pueden incorporar en las composiciones compuestos activos suplementarios.

Una composición farmacéutica de la invención se formula para ser compatible con su vía pretendida de administración. Los ejemplos de vías de administración incluyen la administración parenteral, por ejemplo intravenosa, intradérmica, subcutánea, oral (por ejemplo, inhalación), transdérmica (tópica), transmucosal, y rectal. Las disoluciones o suspensiones usadas para la aplicación parenteral, intradérmica o subcutánea pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril tal como agua para inyección, disolución salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabenos; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito sódico; agentes quelantes tales como ácido etilendiaminotetraacético; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos, y agentes para el ajuste de la tonicidad, tales como cloruro de sodio o dextrosa. El pH se puede ajustar con ácidos o bases, tales como ácido clorhídrico o hidróxido sódico. La preparación parenteral se puede encerrar en ampollas, jeringuillas desechables, o viales de múltiples dosis hechos de vidrio o de plástico.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen disoluciones acuosas estériles (cuando son solubles en agua) o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de disoluciones o dispersiones inyectables estériles. Para la administración intravenosa, los vehículos adecuados incluyen disolución salina fisiológica, agua bacteriostática, Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, NJ) o disolución salina tamponada con fosfato (PBS). En todos los casos, la composición debe ser estéril y debe ser fluida en el grado en el que exista una facilidad para aplicarla mediante una jeringa. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento, y se debe de preservar frente a la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido, y similar), y sus mezclas adecuadas. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un revestimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño requerido de partículas en el caso de dispersión, y mediante el uso de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos se puede lograr por diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, y similar. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede provocar incluyendo en la composición un agente que retrasa la absorción, por ejemplo monoestearato de aluminio y gelatina.

Las disoluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando el compuesto activo (por ejemplo, un compuesto según una realización de la invención) en la cantidad requerida en un disolvente apropiado con uno o una combinación de ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de la esterilización mediante filtración. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de disoluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secado a vacío y liofilización, que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional de una disolución filtrada previamente de forma estéril del mismo.

Las composiciones orales generalmente incluyen un diluyente inerte o un vehículo comestible. Se pueden encerrar en cápsulas de gelatina, o se pueden comprimir en comprimidos. Para los fines de la administración terapéutica oral el compuesto activo se puede incorporar con excipientes y se puede usar en forma de comprimidos, trociscos, o cápsulas. Las composiciones orales también se pueden preparar usando un vehículo fluido para uso como un colutorio, en el que el compuesto en el vehículo fluido se aplica oralmente y se agita y se expectora o se traga.

Los agentes aglutinantes farmacéuticamente compatibles, y/o los materiales adyuvantes, se pueden incluir como parte de la composición. Los comprimidos, pastillas, cápsulas, trociscos y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidón o lactosa, un agente disgregante tal como ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato de magnesio o Sterotes; un agente deslizante tal como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente saborizante tal como menta piperita, salicilato de metilo, o sabor a naranja.

Para la administración mediante inhalación, los compuestos se suministran en forma de una pulverización de aerosol desde un recipiente o dispensador a presión que contiene un propelente adecuado, por ejemplo un gas tal como dióxido de carbono, o un nebulizador.

La administración sistémica también se puede realizar por medio transmucosal o transdérmico. Para la administración transmucosal o transdérmica, en la formulación se usan agentes penetrantes apropiados a la barrera a permear. Tales agentes penetrantes son generalmente conocidos en la técnica, e incluyen, por ejemplo, para administración transmucosal, detergentes, sales biliares, y derivados de ácido fusídico. La administración transmucosal se puede lograr mediante el uso de pulverizadores nasales o supositorios. Para la administración transdérmica, los compuestos activos se formulan en ungüentos, pomadas, geles, o cremas como se conoce generalmente en la técnica.

Los compuestos también se pueden preparar en forma de supositorios (por ejemplo, con bases convencionales para supositorios, tales como manteca de cacao u otros glicéridos), o enemas de retención para el suministro rectal.

En una realización, los compuestos activos se preparan con vehículos que protegerán al compuesto frente a la eliminación rápida del organismo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de suministro microencapsulados. Se pueden usar polímeros biodegradables, biocompatibles, tales como etileno-acetato de vinilo, polianhídridos, poliácido glicólico, colágeno, poliortoésteres, y poliácido láctico. Los métodos para la preparación de tales formulaciones serán manifiestos para los expertos en la técnica. Los materiales también se pueden obtener comercialmente a partir de Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals, Inc. Como vehículos farmacéuticamente aceptables, también se pueden usar suspensiones liposómicas (incluyendo liposomas dirigidos a células infectadas, con anticuerpos monoclonales para antígenos víricos). Estas se pueden preparar según métodos conocidos por los expertos en la técnica.

Es especialmente ventajoso formular composiciones orales o parenterales en forma de dosificación unitaria por facilidad de administración y uniformidad de dosificación. La forma de dosis unitaria como se usa aquí se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto a tratar, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación para las formas de dosificación unitaria de la invención está dictada y depende directamente de las características únicas del compuesto activo y del efecto terapéutico particular a lograr, y las limitaciones inherentes en la técnica de formulación de compuestos de tal compuesto activo para el tratamiento de individuos.

Las composiciones farmacéuticas se pueden incluir en un recipiente, envase, o dispensador, junto con instrucciones para la administración.

Un compuesto según una realización de la invención se puede proporcionar como una sal, preferiblemente como una sal farmacéuticamente aceptable de compuestos de fórmula III. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos incluyen las derivadas de ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido fenilacético, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico y ácido p-toluenosulfónico, ácidos minerales tales como ácido clorhídrico y sulfúrico, y similares, que dan metanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato, hidrocloruro y sulfato, y similar, respectivamente, o las derivadas de bases tales como bases orgánicas e inorgánicas. Los ejemplos de bases inorgánicas adecuadas para la formación de sales de compuestos para esta invención incluyen los hidróxidos, carbonatos, y bicarbonatos de amonio, litio, sodio, calcio, potasio, aluminio, hierro, magnesio, cinc, y similares. Las sales también se pueden formar con bases orgánicas adecuadas. Tales bases adecuadas para la formación de sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables con compuestos de la presente invención incluyen bases orgánicas que no son tóxicas y son suficientemente fuertes para formar sales. Tales bases orgánicas ya son bien conocidas en la técnica y pueden incluir aminoácidos tales como arginina y lisina, mono-, di- o trihidroxialquilaminas tales como mono-, di- y trietanolamina, colina, mono-, di- y trialquilaminas, tales como metilamina, dimetilamina, y trimetilamina, guanidina; N-metilglucosamina; N-metilpiperazina; morfolina; etilendiamina; N-bencilfenetilamina; tris(hidroximetil)aminometano; y similares.

Las sales de compuestos según una realización de la invención se pueden preparar de manera convencional usando métodos bien conocidos en la técnica. Las sales de adición de ácidos de dichos compuestos básicos se pueden preparar disolviendo los compuestos en forma de bases libres según los aspectos primero o segundo de la invención en disolución acuosa o alcoholicoacuosa u otros disolventes adecuados que contienen el ácido requerido. Cuando un compuesto de la invención contiene una función ácida, se puede preparar una sal de base de dicho compuesto haciendo reaccionar dicho compuesto con una base adecuada. La sal de ácido o de base se puede separar directamente o se puede obtener concentrando la disolución, por ejemplo mediante evaporación. Los compuestos de esta invención también pueden existir en formas solvatadas o hidratadas.

Se apreciará por los expertos en la técnica que la descripción anterior es de naturaleza ejemplar y explicativa, y está destinada a ilustrar la invención y sus realizaciones preferidas. Mediante experimentación normal, el experto reconocerá modificaciones y variaciones manifiestas que se pueden hacer sin separarse del espíritu de la invención. De este modo, la invención está destinada a ser definida no por la descripción anterior sino por las siguientes reivindicaciones.

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Referencias

Choy EH, Panayi GS. (2001). N Engl J Med. 344: 907-16.

Firestein GS. (2003). Nature. 423:356-61.

Smolen JS, Steiner G. (2003). Nat Rev Drug Discov. 2: 473-88.

Lee DM, Weinblatt ME (2001). Lancet. 358: 903-11.

Kremer J. M., Westhovens R., Leon M., Di Giorgio E., Alten R., Steinfeld S., Russell A., Dougados M., Emery P., Nuamah I. F., Williams G. R., Becker J.-C., Hagerty D. T., Moreland L. W. (2003) N Engl J Med. 349:1907-1915.

Edwards J. C.W., Szczepanski L., Szechinski J., Filipowicz-Sosnowska A., Emery P., Close D. R., Stevens R. M., Shaw T. (2004) N Engl J Med. 350:2572-2581.

O'Dell JR, Leff R, Paulsen G, Haire C, Mallek J, Eckhoff PJ, Fernandez A, Blakely K, Wees S, Stoner J, Hadley S, Felt J, Palmer W, Waytz P, Churchill M, Klassen L, Moore G. (2002) Arthritis Rheum. 46:1164-70.

St Clair EW, van der Heijde DM, Smolen JS, Maini RN, Bathon JM, Emery P, Keystone E, Schiff M, Kalden JR, Wang B, Dewoody K, Weiss R, Baker D; (2004) Combination of infliximab y methotrexate therapy for early rheumatoid arthritis: a randomized, controlled trial. Arthritis Rheum. 50:3432-43.

Gomez-Reino JJ, et al. (2003). Arthritis Rheum. 48: 2122-7.

O'Dell JR. (2004) Therapeutic strategies for rheumatoid arthritis. N Engl J Med. 350(25):2591-602.

New L, Jiang Y, Han J. (2003) Regulation of PRAK subcellular location by p38 MAP kinases. Mol Biol Cell. 14(6): 2603-16.

Shi Y, Kotlyarov A, Laabeta K, Gruber AD, Butt E, Marcus K, Meyer HE, Friedrich A, Volk HD, Gaestel M. (2003) Elimination of protein kinase MK5/PRAK activity by targeted homologous recombination. Mol Cell Biol. 23:7732-41.

Seternes OM, Mikalsen T, Johansen B, Michaelsen E, Armstrong CG, Morrice NA, Turgeon B, Meloche S, Moens U, Keyse SM. (2004) Activation of MK5/PRAK by the atypical MAP kinase ERK3 defines a novel signal transduction pathway. EMBO J. 23:4780-91.

Andreakos E, et al. (2003). Arthritis Rheum. 48: 1901-12.

Cunnane G, et al. (2001). Arthritis Rheum 44: 2263-74.

Coussens LM, et al. (2002). Science 295: 2387-92.

Creemers EE, et al. (2001). Circ Res. 2001 89:201-10

Gapski R, et al. (2004). J Periodontol. 75:441-52.

Reif S, Somech R, Brazovski E, Reich R, Belson A, Konikoff FM, Kessler A. (2005) Digestion. 71:124-130. Rosenberg GA. (2002). Glia. 39:279-91.

Schanstra JP, et al. (2002). J Clin Invest. 110:371-9.

Suzuki R, et al. (2004). Treat Respir Med. 3:17-27.

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A partir de la descripción anterior, los expertos en la técnica idearán diversas modificaciones y cambios en las composiciones y métodos de esta invención. Todas las citadas modificaciones que proceden dentro del alcance de las reivindicaciones anejas están destinadas a estar incluidas en ellas.

Se debería entender que factores tales como la capacidad de penetración celular diferencial de los diversos compuestos pueden contribuir a discrepancias entre la actividad de los compuestos en los ensayos bioquímicos y celulares in vitro.

Los nombres químicos de los compuestos de la invención dados en esta Solicitud se generan usando la herramienta MDL's ISIS Draw Autonom Software, y no se verifican. Preferiblemente, en el caso de una inconsistencia, prevalece la estructura representada.

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<110> Galapagos N.V.

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Andrews, Martin J I

\hskip1cm

Edwards, Paul

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Chambers, Mark S

\hskip1cm

Schmidt, Wolfgang

\hskip1cm

Clase, Juha A

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Bar, Gregory

\hskip1cm

Hirst, Kim L

\hskip1cm

Angus, MacLeod

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<120> COMPUESTOS DE TRIAZOLOPIRAZINA ÚTILES PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES DEGENERATIVAS E INFLAMATORIAS

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<130> GAL-033-WO-PCT

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<150> US 60/803.552

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<151> 2006-05-31

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<150> US 60/

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<151> 2007-05-25

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<150> US 60/

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<151> 2007-05-25

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<150> US 60/

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<151> 2007-05-25

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<150> US 60/

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<151> 2007-05-29

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<160> 6

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<170> PatentIn versión 3.4

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<210> 1

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<211> 19

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<212> ADN

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<213> artificial

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<220>

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<223> Secuencia diana

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<400> 1

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\hskip1cm

255

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<210> 2

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<211> 19

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<212> ADN

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<213> Artificial

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<220>

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<223> Secuencia diana

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<400> 2

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\hskip1cm

256

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<210> 3

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<211> 19

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<212> ADN

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<213> Artificial

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<220>

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<223> Secuencia diana

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<400> 3

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257

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<210> 4

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<211> 19

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<212> ADN

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<213> Artificial

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<220>

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<223> Secuencia diana

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<400> 4

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258

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<210> 5

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<211> 19

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<212> ADN

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<213> Artificial

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<220>

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<223> Secuencia Diana

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<400> 5

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\hskip1cm

259

\newpage

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<210> 6

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<211> 19

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<212> ADN

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<213> Artificial

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<220>

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<223> Secuencia diana

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<400> 6

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260

Claims

1. Un compuesto según la fórmula III:

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261

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en la que

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2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{8} se selecciona de ciclopentilo sustituido o no sustituido, ciclohexilo, fenilo sustituido o no sustituido, piridilo sustituido o no sustituido, pirimidina sustituida o no sustituida, y pirazina sustituida o no sustituida, pirrol sustituido o no sustituido, pirazol sustituido o no sustituido, e imidazol sustituido o no sustituido.

3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{8} se selecciona de fenilo sustituido, piridilo sustituido, y pirimidina sustituida; y la sustitución es

-L-R^{8d},

en la que

: L se selecciona de un enlace, alquileno, heteroalquileno, -O-, -N(R^{8e})-, -CO-, -CO_{2}-, -SO-, -SO_{2}-, -CON(R^{8e})-, -SO_{2}N(R^{8e})-, -N(R^{8e})CO-, -N(R^{8e})SO_{2}-, -N(R^{8e})CON(R^{8e})-, -N(R^{8e})SO_{2}N(R^{8e})-; y

: R^{8e} se selecciona de H, alquilo sustituido o no sustituido y cicloalquilo sustituido o no sustituido.

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4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{8} es

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262

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en las que L, y R^{8d} son como se describe en la reivindicación 3; el subíndice n se selecciona de 1-4; y cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo.

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5. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que L es un enlace, -O-, -CO-, -CON(R^{8e})-, o -N(R^{8e})CO-; R^{8d} se selecciona de alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, aralquilo sustituido o no sustituido, heteroarilalquilo sustituido o no sustituido, y aminoalquilo sustituido o no sustituido; y R^{8e} se selecciona de H, alquilo sustituido o no sustituido.

6. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que L es un enlace, -CO-, -O(CH_{2})_{m1}-, -CON(H)(CH_{2})_{m1}-, o -NHCO-; el subíndice m1 se selecciona de 1-4; y R^{8d} es

263

en la que el anillo P es heterocicloalquilo sustituido o no sustituido.

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7. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es según las fórmulas IVa, IVb, IVc, o IVd:

264

en las que L y el anillo P son como en la reivindicación 6; el subíndice n se selecciona de 1-4; cada R^{8a} se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi, ciano, y halo; y R^{9} se selecciona independientemente de arilo sustituido o no sustituido y heteroarilo; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato de los mismos, y estereoisómeros, variantes isotópicas y tautómeros de los mismos.

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8. Un compuesto según la reivindicación 7, en el que L es un enlace.

9. Un compuesto según la reivindicación 7, en el que L es -NHCO- o -CONH-.

10. Un compuesto según la reivindicación 7, en el que L es -OCH_{2}-CH_{2}- o -NHCH_{2}CH_{2}-.

11. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 6-10, en el que el anillo P es piperidina sustituida o no sustituida, morfolina o piperazina.

12. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es según las fórmulas Va, Vb, Vc, Vd, Ve, o Vf:

265

2650

en las que R^{9} es como en la reivindicación 1 y R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o cicloalquilo sustituido o no sustituido.

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13. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{9} se selecciona de arilo sustituido o no sustituido.

14. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{9} se selecciona de heteroarilo sustituido o no sustituido.

15. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{9} se selecciona de fenilo sustituido o no sustituido, piridilo, indolilo, isoindolilo, pirrolilo, furanilo, tienilo, pirazolilo, oxazolilo, y tiazolilo.

16. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es

266

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17. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es

267

18. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es

268

2680

19. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es

269

en la que el subíndice m se selecciona de 1-4 y cada R^{9d} es independientemente H, alquilo sustituido o no sustituido o halo.

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20. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que R^{9} es

270

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21. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es según las fórmulas VIIIa, VIIIb, VIIIc, VIIId, VIIIe o VIIIf:

271

272

y R^{8b} es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido o cicloalquilo sustituido o no sustituido.

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22. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es según las fórmulas IXa, IXb, IXc, IXd, IXe, o IXf:

273

\newpage

23. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es según las fórmulas Xa, Xb, Xc, Xd, Xe, o Xf:

\vskip1.000000\baselineskip

274

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24. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es H.

25. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es cicloalquilo.

26. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es ciclopropilo.

27. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es alquilo sustituido o no sustituido.

28. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 21-23, en el que R^{8b} es Me, Et, Pr, i-Pr, t-Bu, i-Bu, CF_{3}, CH_{2}CF_{3}, CH_{2}CONH_{2}, o ciclopropilometilo.

\newpage

29. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es según las fórmulas XIIa, XIIb, XIIc o XIId:

275

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30. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es según las fórmulas XVa, XVb, o XVc:

276

y L es un enlace, -CO-, o -O-CH_{2}CH_{2}-; el anillo P es

277

y R^{8b} es H, Me, i-Pr, t-Bu, CH_{2}CONH_{2}, ciclopropilometilo, o CH_{2}CF_{3}.

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31. Un compuesto según la reivindicación 30, en el que L es un enlace y el anillo P es

278

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32. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto se selecciona de

(4-Morfolin-4-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

4-{8-[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida;

4-{8-[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-1H-piridin-2-ona;

4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzamida;

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

2-Fluoro-4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida;

3-Fluoro-4-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida;

Amida del ácido 5-{8-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

3-Fluoro-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzamida;

2-Fluoro-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzamida;

[5-(5-Metil-1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;

Amida del ácido 5-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;

2,6-Difluoro-4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzamida;

Amida del ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;

[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(5-metil-1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

(3-Fluoro-4-morfolin-4-il-fenilo)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

(3-Cloro-4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

[4-(2-Morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

Amida del ácido 4-{8-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 5-{8-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

(4-Morfolin-4-il-fenil)-[5-(2H-pirazol-3-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

Amida del ácido 4-{8-[4-((2R,6S)-2,6-dimetil-morfolin-4-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

(4-Morfolin-4-il-3-trifluorometil-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

2,6-Difluoro-4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzamida;

Amida del ácido 4-[8-(4-piperazin-1-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 5-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-furan-3-carboxílico;

Amida del ácido 5-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-3-carboxílico;

[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-((2S,5R)-2,4,5-trimetil-piperazin-1-il)-fenil]-amina;

Amida del ácido 4-{8-[4-((2S,5R)-2,4,5-trimetil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-
tiofen-2-carboxílico;

5-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidroisoindol-1-ona;

Amida del ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-furan-2-carboxílico;

6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona;

5-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

{2-Morfolin-4-il-5-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanol;

[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona;

(4-Piperazin-1-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

(6-Morfolin-4-il-piridin-3-il)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

[6-(4-Ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-{6-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-il]-piridin-3-il}-ami-
na;

[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-{4-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-il]-fenilo}-amina;

[4-(4-Ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

Amida del ácido 4-[8-(6-morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;

(5-Benzo[b]tiofen-3-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenilo)-amina;

(5-Benzo[b]tiofen-3-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilo]-amina;

(4-Morfolin-4-il-fenil)-(5-tiofen-3-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-amina;

[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-(5-tiofen-3-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-amina;

[5-(5-Etil-1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;

6-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-1,1-dioxo-1,2-dihidro-1\lambda^{6}-benzo[d]isotiazol-
3-ona;

Amida del ácido 4-{8-[6-(4-ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-(8-{6-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-il]-piridin-3-ilamino}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-(8-{4-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-il]-fenilamino}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-ciclopropilmetil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

[4-(4-Ciclopropil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

[6-(4-Ciclopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

Amida del ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiazol-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-(8-{4-[1-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperidin-4-il]-fenilamino}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;

[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-{4-[1-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperidin-4-il]-fenil}-amina;

5-{8-[4-(2-Morfolin-4-il-etoxi)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

(5-Benzotiazol-6-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;

(2-Fluoro-4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

(2-Cloro-4-morfolin-4-il-fenil)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

1-{5-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-il}-etanona;

{4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2H-pirazol-3-il}-metanol;

6-{4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol-[1,5-a]pirazin-5-il]-fenil)-4,5-dihidro-2H-piridazin-3-ona;

(5-Benzo[1,2,5]oxadiazol-5-il-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;

Metilamida del ácido 4-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiazol-2-carboxílico;

Metilamida del ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiazol-2-carboxílico;

5-[8-(2-Fluoro-4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

5-[8-(2-Cloro-4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

5-{8-[2-Cloro-4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

[5-(2-Amino-pirimidin-5-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;

5-{8-[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoindol-1-
ona;

Amida del ácido 3-[8-(4-morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-benzo[b]tiofen-7-carboxílico;

Amida del ácido 3-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-benzo[b]tiofen-7-carboxílico;

{4-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-piridin-2-il}-metanol;

(4-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-piridin-2-il)-metanol;

[4-(1-Isopropil-piperidin-4-il)-fenil]-[5-(1H-piazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]piazin-8-il]-amina;

{5-[4-(2-amino-tiazol-4-il)-fenil]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il}-(4-morfolin-4-il-fenilo)-amina;

Amida del ácido 4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-2-carboxílico;

5-[8-(6-Morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-furan-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-{8-[4-(1-isopropil-piperidin-4-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-tiofen-2-carboxílico;

(4-{8-[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-piridin-2-il)-metanol;

[5-(2-Fluorometil-piridin-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-amina;

5-{8-[4-(1-Isopropil-piperidin-4-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

[5-(1H-Indazol-6-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;

Amida del ácido 4-[8-(6-morfolin-4-il-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-furan-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-5-metil-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-{8-[6-(4-isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-5-metil-tiofen-2-carboxílico;

4-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

4-{8-[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidroisoindol-1-
ona;

5-[8-(2-Morfolin-4-il-pirimidin-5-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

1-{4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-piperazin-2-ona;

5-{8-[2-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-pirimidin-5-ilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

5-{8-[4-(4-terc-Butil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

[4-(4-terc-Butil-piperazin-1-il)-fenil]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

[5-(1H-Indazol-5-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-(4-morfolin-4-il-fenil)-amina;

5-{8-[4-(2-Oxo-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

[5-(1H-Indazol-6-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenil]-amina;

[6-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-piridin-3-il]-(5-{(E)-1-[4-metilen-2,4-dihidro-pirazol-(3E)-ilidenmetil]-propenil}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il)-amina;

7-Fluoro-5-{8-[4-(4-isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-
1-ona;

6-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

(3-Metilaminometil-4-morfolin-4-il-fenilo)-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-5,6-dihidro-furo[2,3-a]pirrol-4-ona;

5-{8-[4-(4-Isopropil-2-oxo-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-2,3-dihidro-isoindol-1-
ona;

2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-4,5-dihidro-tien[2,3-c]pirrol-6-ona;

5-{8-[4-(4-Isopropil-piperazin-1-il)-fenilamino]-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il}-3,3-dimetil-2,3-dihidro-isoin-
dol-1-ona;

5-(8-Ciclohexilamino-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il)-2,3-dihidroisoindol-1-ona;

5-[8-(Tetrahidro-piran-4-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona;

[4-(4-terc-Butil-piperazin-1-il)-fenilo]-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-il]-amina;

2-[8-(4-Morfolin-4-il-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-4,5-dihidro-tien[2,3-c]pirrol-6-ona; y

5-[8-(4-Fluoro-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-2,3-dihidro-isoindol-1-ona.

\vskip1.000000\baselineskip

33. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto se selecciona de:

4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida;

4-[5-(2-Oxo-1,2-dihidro-piridin-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-3-ilmetil-benzamida;

2-Metoxi-N-(6-metil-piridin-3-ilmetil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

\newpage

Amida del ácido 4-(8-{3-Metoxi-4-[(6-metil-piridin-3-ilmetil)-carbamoil]-fenilamino}-[1,2,4]triazol[1,5-a]pira-
zin-5-il)-tiofen-2-carboxílico;

N-Bencil-2-metoxi-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]tiazol-[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-Bencil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

3-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-piridin-2-ilmetil-benzamida;

N,N-Dietil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

{3-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-pirrolidin-1-ilmetanona;

(4-Isopropil-piperazin-1-il)-{3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;

3-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-Etil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-Ciclohexilmetil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-(4-Hidroxi-bencil)-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

Amida del ácido 4-[8-(4-bencilcarbamoil-3-metoxi-fenilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;

Amida del ácido 4-[8-(6-benzoilamino-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico;

N-Bencil-N-metil-3-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-{5-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-piridin-2-il}-benzamida;

Metilamida del ácido 1-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-piperidine-4-carboxílico;

4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-(2-piridin-4-il-etil)-benzamida;

(4-Etil-piperazin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;

N-(1-Etil-pirrolidin-2-ilmetil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

(2,5-Dihidro-pirrol-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;

[4-(2-Etoxi-etil)-piperazin-1-il]-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil)-metanona;

N-Ciclopropilmetil-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]-triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-Metil-N-(1-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol-[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-pirrolidin-3-il)-acetamida;

[4-(4-Fluoro-bencil)-piperazin-1-il]-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-meta-
nona;

(4-Fenil-piperazin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;

((S)-2-Metoximetil-pirrolidin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-meta-
nona;

N-((R)-1-Bencil-pirrolidin-3-il)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

{4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-(4-piridin-2-il-piperazin-1-il)-metanona;

N-(1-Metoximetil-propil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

[4-(2-Metoxi-etil)-piperazin-1-il]-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;

N-[2-(4-Hidroxi-fenil)-etil]-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

(4-sec-Butil-piperazin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;

N-[4-(4-Metil-piperazin-1-il)-fenil]-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

Éster etílico del ácido (bencil-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil}-amino)-acético;

N-Isopropil-2-(4-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzoil)-piperazin-1-il)-acetamida;

N-(2-Metoxi-etil)-N-metil-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-Etil-N-(2-metoxi-etil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

4-[5-(1H-Pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-N-(tetrahidro-furan-2-ilmetil)-benzamida;

(3,6-Dihidro-2H-piridin-1-il)-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;

N-(2-Metilsulfanil-etil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-(2,2-Dimetil-[1,3]dioxolan-4-ilmetil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-(2-Diisopropilamino-etil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-((S)-1-Etil-pirrolidin-2-ilmetil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

N-Isobutil-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida;

[1,4']Bipiperidinil-1'-il-{4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-fenil}-metanona;

N-(2-Hidroxi-etil)-4-[5-(1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-8-ilamino]-benzamida; y

Amida del ácido 4-[8-(6-fenilacetilamino-piridin-3-ilamino)-[1,2,4]triazol[1,5-a]pirazin-5-il]-tiofen-2-carboxílico.

\vskip1.000000\baselineskip

34. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 33.

35. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 33, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una afección caracterizada por degeneración de la ECM.

36. El uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 33, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una afección seleccionada de enfermedades que implican inflamación.

37. El uso de un compuesto según la reivindicación 36, en el que dicha enfermedad es artritis reumatoide.