ES2346116T3

ES2346116T3 - Epitopos artificiales de celulas t ayudadoras como estimuladores inmunes para peptidos sinteticos inmunogenos.

Info

Publication number: ES2346116T3
Application number: ES99928826T
Authority: ES
Inventors: Chang Yi Wang
Original assignee: United Biomedical Inc
Current assignee: United Biomedical Inc
Priority date: 1998-06-20
Filing date: 1999-06-21
Publication date: 2010-10-08
Anticipated expiration: 2019-06-21
Also published as: HK1143950A1; AU763543B2; BRPI9912177B8; CA2329772A1; JP2002518463A; JP3993605B2; DE69942225D1; BRPI9912177B1; TWI229679B; HK1037860A1; DK1089760T3; AU4580899A; CN1201819C; DK2181715T3; US6713301B1; ATE510563T1; WO1999066957A2; BR9912177A; EP1089760A4; CN1306439A

Abstract

Un epítope de célula asistente T seleccionado del grupo caracterizado porque consiste de SEC. DE IDENT. NO: 6 o 15.

Description

Epítopos artificiales de células T ayudadoras como estimuladores inmunes para péptidos sintéticos inmunógenos.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a un inmunógeno peptídico que comprende un epítope novedoso artificial de célula asistente T (Th) unido covalentemente a un sitio objetivo antigénico deseado que comprende epítopes de células B y opcionalmente una secuencia general inmuno estimuladora. El epítope artificial Th imparte al inmunógeno peptídico la capacidad de inducir respuestas inmunes fuertes mediadas por células asistentes T y la producción de anticuerpos dirigidos en contra de "el sitio objetivo antigénico". La invención también proporciona el reemplazo ventajoso de proteínas portadoras y sitios de células asistentes T derivados de patógeno en inmunógenos peptídicos establecidos por los epítopes novedosos artificiales de células asistentes T para mejorada inmunogenicidad.

Se han desarrollado muchas reglas para predecir las secuencias de aminoácidos de los epítopes de las células T. Sin embargo, debido a que no existe una teoría unificante central sobre como o que hace a una secuencia de aminoácidos particular útil como epítope de células T, las reglas son empíricas y no son universalmente aplicables. Estando enterados de estás reglas, se desarrollaron los epítopes novedosos artificiales de células asistentes T de la presente invención, sin embargo, por investigación empírica.

Los inmunógenos peptídicos de la presente invención son útiles para evocar respuestas anticuerpo en un huésped inmunizado a un sitio objetivo antigénico deseado, que incluye sitios tomados de organismos patogénicos y sitios tomados de autoantígeno normalmente inmuno silenciosos y objetivos asociados con tumores. En consecuencia, los péptidos de la invención son útiles en diversas aplicaciones médicas y veterinarias, tales como: vacunas para proporcionar inmunidad protectora de enfermedades infecciosas; inmunoterapias para tratar trastornos que resultan del mal funcionamiento de los procesos fisiológicos normales; inmunoterapias para tratar cáncer y como agentes para intervenir en procesos fisiológicos normales para producir resultados deseables.

Por ejemplo, los epítopes novedosos artificiales de células asistentes T de la presente invención proporcionan inmunógenos peptídicos cortos novedosos que producen anticuerpos seleccionados para la hormona que libera la hormona luteinizante (LHRH) y son útiles para anticoncepción, control de tumores dependientes de hormona, prevención de mancha de puerco sin castrar, e inmunocastración. Los epítopes novedosos artificiales de Th de la presente invención se han encontrado que provocan una respuesta inmune cuando se combinan con epítopes de células B objetivo de diversos microorganismos/proteínas/ péptidos. Además de la LHRH, los epítopes artificiales de Th de la presente invención se ha encontrado que son útiles cuando se enlazan a otros sitios antigénicos objetivo que incluyen somatostatina para la promoción del crecimiento en animales de granja; IgE para el tratamiento de alergia; el receptor CD4 de las células asistentes T para el tratamiento y prevención de la infección por VIH y trastornos inmunes; y proteína de capsida del virus de la enfermedad de pie y boca para la prevención de la enfermedad de pie y boca; epítopes virion VIH para la prevención y tratamiento de la infección VIH; el antígeno de circunesporozoito de Plasmodium falciparum para la prevención y tratamiento de arteriosclerosis.

Antecedentes de la invención

Se sabe que la mayoría de las respuestas inmunes del anticuerpo son mediadas por células, que requieren la interacción cooperativa entre células que presentan antígeno, células B (células que producen anticuerpos las cuales también funcionan como células que presentan antígenos), y células asistentes T (Th). Consecuentemente, la producción de una respuesta del anticuerpo efectiva requiere que las células B reconozcan el sitio antigénico objetivo (epítope de células B) de un sujeto inmunógeno y que las células asistentes T reconozcan un epítope de Th. Generalmente, el epítope de asistentes T sobre un sujeto inmunógeno es diferente de su epítope o epítopes de células B (Babbitt et al., Nature, 1985; 317:359-361). El epítope de células B es un sitio sobre el objetivo deseado reconocido por las células B las cuales en respuestas producen anticuerpos hacia el sitio objetivo deseado. Se entiende que la conformación natural del objetivo determina el sitio al cual se enlaza el anticuerpo directamente. El reconocimiento de proteínas por las células asistentes T es, sin embargo, mucho más complejo y menos bien entendido. (Cornette et al., Methods in Enzymology, vol 178, Academic Press, 1989, pp 611-634).

Bajo las teorías presentes, la evocación de una respuesta de células Th requiere que el receptor de las células asistentes T reconozca no el objetivo deseado si no un complejo sobre la membrana de la célula que presenta el antígeno formado entre un fragmento peptídico procesado de la proteína objetivo y un complejo de histocompatibilidad principal clase II asociado (MHC). Así, el procesamiento peptídico de la proteína objetivo y un reconocimiento de tres formas se requiere para la respuesta de la célula asistente T. El complejo de tres partes es particularmente difícil de definir puesto que los residuos de contacto MHC clase II críticos se ubican variablemente dentro de diferentes péptidos de enlace MHC (epítopes Th) y estos péptidos son de longitudes variables con diferentes secuencias de aminoácidos (Rudensky et al., Nature, 1991; 353:622-627). Además, las moléculas de MHC clase II en si mismas son altamente diversas dependiendo del carácter genético del huésped. La inmuno responsividad a un epítope Th particular se determina de esta forma en parte por los genes MHC del huésped. De hecho, se ha demostrado que ciertos péptidos solamente se enlazan a los productos de alelos MHC clase II particulares. Así, es difícil identificar epítopes Th promiscuos, es decir, aquellos que son reactivos a través de las especies y a través de los individuos de una especie
sencilla. Se ha encontrado que la reactividad de los epítopes Th es diferente aún entre individuos de una población.

Los múltiples y variados factores para cada una de las etapas componentes del reconocimiento de células T: el procesamiento peptídico apropiado por la célula que procesa el antígeno, la presentación del péptido por una molécula MHC clase II genéticamente determinada y el reconocimiento del complejo molecular de MHC/péptido por el receptor sobre las células asistentes T ha hecho difícil determinar los requerimientos para los epítopes Th promiscuos que proporcionan amplias responsividad (Bianchi et al., EP 0427347; Sinigaglia et al., chapter 6 in Inmunological Recognition of Peptides in Medicine and Biology, ed., Zegers et al., CRC Press, 1995, pp 79-87).

Es claro que para la inducción de anticuerpos, el inmunógeno debe comprender el determinante de las células B y el determinante o los determinantes de células mixtas Th. Comúnmente, para incrementar la inmunogenicidad de un objetivo, la respuesta Th se proporciona por el acoplamiento del objetivo a una proteína portadora. Las desventajas de esta técnica son muchas. Es difícil fabricar conjugados de proteína portadores de péptidos bien definidos, seguros, y efectivos por las siguientes razones:

1. El acoplamiento químico son reacciones al azar que introducen heterogeneidad de tamaño y composición, por ejemplo, conjugación con glutaraldehído (Borras-Cuesta et al., Eur J Immunol, 1987; 17: 1213-1215);

2. la proteína portadora introduce un potencial para respuestas inmunes indeseables tales como reacciones alérgicas y autoinmunes (Bixler et al., WO 89/06974);

3. la gran proteína portadora de péptido produce respuestas inmunes irrelevante predominantemente mal dirigidas hacia la proteína portadora más que al sitio objetivo (Cease et al., Proc Natl Acad Sci USA, 1987; 84: 4249-4253); y

4. la proteína portadora también introduce un potencial para la supresión epitópica en un huésped el cual se ha inmunizado previamente con un inmunógeno que comprende la misma proteína portadora. Cuando un huésped se inmuniza subsecuentemente con otro inmunógeno en donde la misma proteína portadora se acopla a un diferente hapteno, la respuesta inmune resultante se mejora para la proteína portadora pero se inhibe para el hapteno (Schutze et al., J Immunol, 1985; 135: 2319-2322).

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Para evitar estos riesgos, es deseable reemplazar las proteínas portadoras. La célula asistente T puede suministrarse a un péptido antígeno objetivo por enlace covalente a un determinante Th promiscuo bien caracterizado. Los Th promiscuos conocidos se derivan de los antígenos de los agentes patogénicos potentes tales como la proteína F del virus del sarampión (Greenstein et al., J Immunol, 1992; 148: 3970-3977) y el antígeno de superficie del virus de hepatitis B (Partidos et al., J Gen Virol 1991; 72: 1293-1299). Los inventores presentes han mostrado que muchos de los Th promiscuos conocidos son efectivos para potenciar un péptido pobremente inmunogénico, tal como el decapéptido hormonal de la hormona que libera la hormona luteinizante (LHRH) (Patente Norteamericana 5,759,551). Se han desarrollado otros péptidos quiméricos que comprenden epítopes Th promiscuos conocidos con péptidos sintéticos pobremente inmunogénicos para generar inmunógenos potentes (Borras-Cuesta et al., 1987). Los péptidos quiméricos epítopes de células B/Th promiscuos bien diseñados son capaces de producir respuestas mixtas Th con respuestas anticuerpo resultante seleccionadas para el sitio de la célula B en la mayoría de los miembros de una población genéticamente diversa (Patente Norteamericana 5,759,551).

Una revisión de los epítopes Th promiscuos conocidos muestra que varían en tamaño desde aproximadamente 15 hasta 50 residuos de aminoácidos (Patente Norteamericana 5,759,551) y frecuentemente comparten características estructurales comunes con secuencias de marca específicas. Por ejemplo, una característica común es la presencia de hélices anfipáticas. Estas son estructuras de alfa hélice con residuos de aminoácidos hidrofóbicos dominando una cara de la hélice y residuos cargados y polares dominando las caras que rodean (Cease et al., 1987). Los epítopes Th promiscuos conocidos contienen también frecuentemente patrones de aminoácidos primarios adicionales tales como un residuo cargado, -Gly-, seguido por dos a tres residuos hidrofóbicos, seguido a su vez por un residuo polar o cargado (Rothbard and Taylor, EMBO J, 1988; 7:93-101). Los epítopes Th con estos patrones son llamados secuencias de Rothbard. También se ha encontrado que los epítopes Th promiscuos frecuentemente obedecen la regla de 1, 4, 5, 8, en donde un residuo positivamente cargado está seguido por residuos hidrofóbicos en las posiciones cuarta, quinta y octava, consistente con una hélice anfipática teniendo las posiciones 1, 4, 5 y 8 ubicadas sobre la misma cara. Este patrón de aminoácidos hidrofóbicos y cargados y polares puede repetirse dentro de un epítope Th sencillo (Partidos et al., J Gen Virol, 1991; 72:1293-99). La mayoría de, si no todos, de los epítopes de células T promiscuos conocidos contienen al menos una de las periodicidades descritas anteriormente.

Los epítopes Th promiscuos derivados de patógenos incluyen los epítopes de superficie de hepatitis B y epítopes del núcleo antígeno de células T asistentes epítopes (HBsAg Th y HBc Th), epítopes de la toxina de tosferina de las células T asistentes (PT Th), epítopes de la toxina del tétano de las células T asistentes (TT Th), los epítopes de la proteína F del virus del sarampión de células T asistentes (MVF Th), epítopes de la proteína de la membrana externa principal de Chlamydia trachomatis de células T asistentes (CT Th), epítopes de la toxina de difteria de células T asistente (DT Th), epítopes de circumesporozoito de Plasmodium falciparum de células T asistentes (PF Th), epítopes de triosa fosfato isomerasa de Schistosoma mansoni de células T asistentes (SM Th), y los epítopes de TraT de Escherichia coli de células T asistentes (TraT Th). Las secuencias de estos epítopes de Th derivados de patógenos pueden encontrarse en la Patente Norteamericana 5,759,551 como SEC. DE IDENT. NOS: 2-9 y 42-52 en el mismo; en Stagg et al., Immunology, 1993; 79;1-9; y en Ferrari et al., J Clin Invest, 1991; 88: 214-222.

El uso de tales sitios derivados de patógenos para la inmuno-potenciación de sitios peptídicos de células B para la aplicación a LHRH se ha descrito en la Patente Norteamericana 5,759,551, para VIH en Greenstein et al. (1992), para malaria en EP 0 427,347, para rotavirus en Borras-Cuesta et al. (1987), y para sarampión en Partidos et al.
(1991).

Shaw, M.D. et al. (Molecular Immunology, Volúmen 30, No. 11, pág. 961-968, 1993) presentó un informe acerca de un epítope de célula asistente T comprendiendo la secuencia LSEIGKVIVHRLEGV, y un péptido quimérico sintético inmunógeno donde un epítope de célula B y un epítope de célula T están enlazadas convalentemente. El péptido quimérico inmunógeno está sintetizado por el método de fase sólida sintética utilizando la química Fmoc.

Los epítopes Th útiles también pueden incluir epítopes Th combinatorios. En Wang et al. (WO 95/11998), se describe una clase particular de epítopes Th combinatorios, "Structured Synthetic Antigen Library" (SSAL). Los epítopes SSAL comprenden una multitud de epítopes Th con secuencias de aminoácidos organizadas alrededor de una estructura de construcción de residuos sin variación con sustituciones en posiciones específicas. Las secuencias de la SSAL se determinan al retener residuos relativamente sin variación a la vez que se varían otros residuos para proporcionar el reconocimiento de los diversos elementos de restricción MHC. Esto puede lograrse alineando la secuencia de aminoácidos primaria de un Th, promiscuo, seleccionando y reteniendo como la estructura esquelética los residuos responsables para la estructura única del péptido Th, y variando los residuos restantes de acuerdo con los elementos de restricción MHC conocidos. Están disponibles las listas de las posiciones sin variación y variables con los aminoácidos preferidos de los elementos de restricción MHC para obtener motivos que enlazan MHC. Estos pueden consultarse al diseñar epítopes Th SSAL (Meister et al., Vaccine, 1995; 13:581-591).

Los miembros de la SSAL pueden producirse simultáneamente en una síntesis peptídica de fase sólida sencilla en tándem con el epítope seleccionado de célula B y otras secuencias. Las secuencias de biblioteca del epítope Th se diseñan para mantener los motivos estructurales de un epítope Th promiscuo y al mismo tiempo, acomodar la reactividad para un rango más amplio de haplotipos. Por ejemplo, el epítope Th degenerado "SSAL1 TH1" (WO 95/11998), se modeló después de que se tomó un epítope promiscuo de la proteína F del virus del sarampión (Partidos et al., 1991). El TH1 SSAL1 se diseño para usarse en tándem con un antígeno objetivo, LHRH. Como el epítope del sarampión del cual se derivó, el TH1 SSAL1 se diseñó para seguir la secuencia de Rothbard y las reglas 1, 4, 5, 8: y es una mezcla de cuatro péptidos:

1

Un residuo cargado de Glu o Asp se agrega en la posición uno para incrementar la carga que rodea la cara hidrofóbica del Th. La cara hidrofóbica de la hélice anfipática se mantiene después por residuos hidrofóbicos en 2, 5, 8, 9, 10, 13 y 16. Las posiciones en 2, 5, 8, 9, 10, y 13 se varían para proporcionar un frente con la capacidad de enlazarse a un amplio rango de elementos de restricción MHC. El efecto neto sobre la característica SSAL es agrandar el rango de responsividad inmune del Th artificial (WO 95/11998).

Se han hecho otros intentos para diseñar "epítopes Th artificiales idealizados" que incorporan todas las propiedades y características de los epítopes Th promiscuos conocidos. También se han construido diversos inmunógenos peptídicos que comprenden estos epítopes Th promiscuos artificiales incluidos aquellos en la forma de SSAL. Los sitios Th artificiales se han combinado con secuencias peptídicas tomadas de autoantígenos y antígenos extraños para proporcionar respuestas del anticuerpo mejoradas para sitios objetivo específicos (WO 95/11998 Alexander et al., Immunity, 1994, 1:751; Del Guercio et al., Vaccine, 1997, 15:441) que se han descrito como altamente efectivos. Tales inmunógenos peptídicos se prefieren para proporcionar respuestas del anticuerpo efectivas y seguras y por su inmunopotencia, que surge de una responsividad ampliamente reactiva impartida por el sitio Th promiscuo idealizado descrito.

Breve descripción de la invención

La presente invención proporciona un epítope de célula asistente T seleccionado del grupo caracterizado porque consiste de SEC. DE IDENT. NO: 6 ó 15. El epítope de célula asistente T de la presente invención es útil para la preparación una composición peptídica inmunogénica que comprende un epítope de célula asistente T artificial promiscuo enlazado a un epítope de célula B peptídico sintético "sitio antigénico objetivo". El péptido inmunogénico comprende un epítope de células asistentes T artificiales (Th) y un sitio antigénico objetivo que contiene epítopes de células B y, opcionalmente, una secuencia general inmuno estimuladora. La presencia de un epítope Th artificial en el péptido inmunogénico imparte a eso una capacidad para inducir una respuesta inmune fuerte mediada por células asistentes T con la producción de un alto nivel de anticuerpos dirigido en contra del "sitio antigénico objetivo". La presente invención proporciona adicionalmente la reposición ventajosa de proteínas portadoras y sitios de células asistentes T derivados de patógenos para establecer inmunógenos peptídicos con epítopes de células asistentes T artificiales diseñados específicamente para mejorar su inmunogenicidad. Los inmunógenos péptidos cortos novedosos con los epítopes Th artificiales de la presente invención producen un alto nivel de anticuerpos seleccionados para la hormona que libera la hormona luteinizante (LHRH) útil para la anticoncepción, el control de los tumores dependientes de hormonas, la prevención de mancha de cerdo sin castrar, y la inmunocastración.

Los epítopes Th artificiales se desarrollaron empíricamente, atentos a las reglas conocidas para predecir epítopes de células T promiscuas. En la ausencia de una teoría unificante que explique el mecanismo de los epítopes Th, estás reglas "de predicción" sirven meramente como guías para diseñar epítopes Th artificiales efectivos. Los epítopes Th artificiales de la presente invención se han encontrado útiles cuando se enlazan a sitios antigénicos objetivo y opcionalmente con una secuencia inmunoestimuladora. Los péptidos inmunogénicos de la presente invención puede representarse por las fórmulas:

2

en donde: A es un aminoácido o una secuencia inmunoestimuladora general, por ejemplo, el dominio invasina (Inv) (SEC. DE IDENT. NO: 78) en donde n es más de uno, las A individuales pueden ser las mismas o diferentes;

B se selecciona del grupo que consiste de aminoácidos, -NHCH(X)CH2SCH2CO-, -NHCH(X)CH2SCH2CO(\varepsilonN)Lys-, -NHCH(X)CH2S-succinimidil(\varepsilonN)Lys-, y -NHCH(X)CH2S-(succinimidil)-;

Th es un epítope artificial de células T de asistentes seleccionados del grupo que consiste de SEC. DE IDENT. NO: 6 y 15;

"Sitio antigénico objetivo" es un epítope de célula B deseado, un hapteno peptídico o, un análogo inmunológicamente reactivo del mismo;

X es un aminoácido \alpha-COOH o -CONH2;

n es de 1 hasta 10;

m es de 1 hasta 4; y

o es de 0 hasta 10.

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Un ejemplo de un hapteno peptídico como un sitio antigénico objetivo es LHRH (SEC. DE IDENT. NO: 77).

Las composiciones de la presente invención comprenden péptidos capaces de evocar respuestas de anticuerpo en un huésped inmunizado para un sitio antigénico objetivo deseado. El sitio antigénico objetivo puede derivarse de organismos patógenos y normalmente autoantígenos inmuno silenciosos y objetivos asociados a tumor tales como LHRH.

En consecuencia, las composiciones de la presente invención son útiles en muchas y diversas aplicaciones médicas y veterinarias. Estas incluyen vacunas para proporcionar inmunidad protectora de enfermedades infecciosas, inmunoterapias para el tratamiento de trastornos resultantes del mal funcionamiento de los procesos fisiológicos normales, inmunoterapias para el tratamiento de cáncer, y agentes para intervenir deseablemente y modificar los procesos fisiológicos normales.

Algunos de los antígenos objetivo que pueden enlazarse covalentemente a los epítopes Th de la presente invención incluyen: LHRH para anticoncepción, el control de tumores dependientes de hormonas e inmuno castración; somatostatina para la promoción del crecimiento de animales de granja; IgE para el tratamiento de alergias; el receptor CD4 de células asistentes T para el tratamiento y prevención de la infección VIH y trastornos inmunes; proteína de capside del virus de la enfermedad de pie-y-boca como una vacuna para la prevención de la enfermedad de pie-y-boca; el antígeno CS de Plasmodium para la prevención de malaria; CETP para la prevención y tratamiento de la arteriosclerosis; y los epítopes virion VIH para la prevención y tratamiento de infección VIH.

Descripción detallada de la invención

Se proporcionan epítopes Th artificiales idealizados. Estos están modelados sobre dos epítopes Th naturales conocidos y prototipos peptídicos SSAL, descritos en W0 95/11998. Los SSALS incorporan motivos de enlace de moléculas MHC combinatoriales (Meister et al., 1995) que intentan producir respuestas inmunes amplias entre los miembros de una población genéticamente diversa. Los prototipos peptídicos SSAL se diseñaron basados en los epítopes Th de los antígenos del virus del sarampión y el virus de hepatitis B, modificados al introducir motivos de enlace MHC múltiples. El diseño de los otros epítopes Th se modelaron después de otros epítopes Th conocidos al simplificar, agregar, y/o modificar, los motivos de enlace a MHC múltiples para producir una serie de epítopes Th artificiales novedosos. Los sitios Th artificiales promiscuos recientemente adaptados se incorporaron dentro de inmunógenos peptídicos sintéticos llevando una diversidad de sitios antigénicos objetivos. Los péptidos quiméricos resultantes fueron capaces de estimular respuestas anticuerpo efectivas a los sitios antigénicos objetivo.

El epítope prototipo artificial de células T asistente (Th) que se muestra en la Tabla 1a como "SSAL1 TH1" (SEC. DE IDENT. NOS: 2, 3, 4, 5) es un epítope Th idealizado modelado de un epítope Th promiscuo de la proteína F del virus del sarampión (Partidos et al. 1991). El modelo de epítope Th, que se muestra en la Tabla 1a como "MVF Th" (SEC. DE IDENT. NO: 1) corresponde a los residuos 288-302 de la proteína F del virus del sarampión. El Th MVF (SEC. DE IDENT. NO: 1) se modificó en el prototipo Th1 SSAL1 (SEC. DE IDENT. NOS: 2, 3, 4, 5) al agregar un residuo cargado Glu/Asp en la posición 1 para incrementar la carga que rodea la cara hidrofóbica del epítope; agregando o reteniendo un residuo cargado o Gly en las posiciones 4, 6, 12 y 14; y agregando o reteniendo un residuo cargado o Gly en las posiciones 7 y 11 de acuerdo con la "Regla de Rothbard". La cara hidrofóbica del epítope Th comprende residuos en las posiciones 2, 5, 8, 9, 10, 13 y 16. Los residuos hidrofóbicos comúnmente asociados con los epítopes promiscuos se sustituyeron en estas posiciones para proporcionar los epítopes Th SSAL combinatorios, Th1 SSAL1 (SEC. DE IDENT. NOS: 2, 3, 4, 5). Los residuos hidrofóbicos que se conforman a la regla de secuencias de Rothbard se muestran en negritas (Tabla 1a, SEC. DE IDENT. NO: 1). Las posiciones en la secuencia que obedecen la regla 1, 4, 5, 8 se subrayan. Otra característica significativa del prototipo Th1 SSAL1 (SEC. DE IDENT. NOS: 2, 3, 4, 5) es que las posiciones 1 y 4 se repiten imperfectamente como un palíndroma a cada lado de la posición 9, para imitar un motivo de enlace a MHC. Ese patrón palindrómico "1, 4, 9" de Th1 SSAL1 se modificó adicionalmente en la SEC. DE IDENT. NO: 3 (Tabla 1a) para reflejar más cercanamente la secuencia del modelo Th original MVF (SEC. DE IDENT. NO: 1). También, la hidrofobicidad del prototipo Th1 SSAL1 (SEC. DE IDENT. NOS. 2, 3, 4, 5) se moduló en la SEC. DE IDENT. NO: 6 por la adición de los residuos de metionina en posiciones variables 1, 12, y 14. Los datos experimentales, muestran que la SEC. DE IDENT. NO: 6 acoplada a un sitio antigénico objetivo, mejora la respuesta de anticuerpo en los animales inmunizados en los sitios antigénicos objetivo.

Se encontró que la inmunogenicidad de la SEC. DE IDENT. NO: 6 puede mejorarse al extender la N terminal con un aminoácido no cargado no polar y uno polar, Ile y Ser, y extendiendo la C terminal por un amoniácido cargado e hidrofóbico, Lys y Phe. Esto se muestra en la Tabla 1a como SEC. DE IDENT. NO: 15. Los inmunógenos peptídicos que comprenden un sitio antigénico objetivo y un epítope Th de SEC. DE IDENT. NO: 15 presentaron inmunogenicidad mejorada.

Cada uno de los epítopes Th artificiales novedosos, SEC. DE IDENT. NO. 6 y 15 se acoplaron a una diversidad de sitios antigénicos objetivo para proporcionar inmunógenos peptídicos. Los sitios antigénicos objetivo incluyen las hormonas peptídicas, LHRH y somatostatina, epítopes de células B de inmunoglobulina IgE, el receptor CD4 de la célula T, y la proteína capside de VP1 del virus de la enfermedad de pie-y-boca; el antígeno cs de plasmodium falciparum; y la proteína de transporte colestéril éster (CETP); y los epítopes de célula B del VIH. Los resultados muestran que se producen anticuerpos de sitio anti-objetivo efectivos de reacción cruzada en un grupo diverso de autoantígenos y antígenos extraños. Lo más importante, las respuestas anticuerpo se dirigen a los sitios antigénicos objetivo y no a los epítopes Th novedosos. Los resultados para los inmunógenos peptídicos novedosos para LHRH se muestran en las Tablas 2 y 3. Los resultados de inmunogenicidad también muestran que los anticuerpos producidos son efectivos en contra de LHRH pero no en contra de los epítopes Th en sí mismos. Se enfatiza que LHRH es un sitio antigénico objetivo desprovisto de epítopes de célula T (Sad et al., Inmunology, 1992; 76: 599-603 y Patente Norteamericana 5,759,551). Así, los epítopes Th artificiales novedosos de la presente invención representan una nueva clase de epítopes promiscuos de asistente T.

Los epítopes Th artificiales de la presente invención son secuencias contiguas de aminoácidos (aminoácidos naturales o no naturales) que comprenden un sitio de enlace a la molécula MHC clase II. Son suficientes para mejorar o estimular una respuesta anticuerpo al sitio antigénico objetivo. Puesto que un epítope Th puede consistir de segmentos de aminoácidos continuos o discontinuos, no todos los aminoácidos del epítope Th se involucran necesariamente con el reconocimiento del MHC.

Los epítopes Th promiscuos de la invención se unen covalentemente al N- o C- terminal del sitio antigénico objetivo, para producir inmunógenos peptídicos quiméricos de sitio Th/célula B. El término "inmunógeno peptídico" como se usa en la presente se refiere a moléculas que comprenden epítopes Th unidos covalentemente a un sitio antigénico objetivo, ya sea a través de enlaces peptídicos convencionales para formar un péptido más grande sencillo, o a través de otras formas de enlace covalente, tal como un tioéster. En consecuencia, los epítopes Th (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 6 y 15) se unen covalentemente al sitio antigénico objetivo (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 77) ya sea por medio de acoplamiento químico o por medio de síntesis directa. Los epítopes Th pueden unirse directamente al sitio objetivo a través de un espaciador, por ejemplo, Gly-Gly o (\varepsilon-N)Lys. Además de separar físicamente el epítope Th del epítope de células B (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NOS: 41-64, 77-76, 84-90, 92-94, 96-102, 103, 104, 106, 126-129, y 135-153), el espaciador puede desorganizar cualquier estructura secundaria de artefacto creada por el enlace del epítope Th o su homólogo funcional con el sitio antigénico objetivo y eliminar con eso cualquier interferencia con las respuestas Th y/o célula B. Un gozne espaciador flexible que mejore la separación de los dominios Th e IgE también puede ser útil. Las secuencias de gozne flexible son frecuentemente ricas en prolina. Un gozne flexible particularmente útil se proporciona por la secuencia Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro (SEC. DE IDENT. NO: 79) modelado de la región de gozne flexible encontrada en las cadenas pesadas de inmunoglobulina. El Xaa en el mismo es cualquier aminoácido, preferentemente ácido aspártico. La separación conformacional proporcionada por el espaciador (Ver SEC. DE IDENT. NOS: 80 y 82) permite interacciones más eficientes entre el inmunógeno peptídico presentado y las células Th y las células B apropiadas. Así, las respuestas inmunes al epítope Th se aumenta para proporcionar reactividad inmune mejorada.

Los inmunógenos conjugados peptídicos de la invención pueden también opcionalmente comprender una secuencia peptídica inmunoestimuladora general. Por ejemplo, un dominio de una proteína invasina (Inv) de la bacteria Yersinia spp (Brett et al., Eur J Inmunol, 1993, 23: 1608-1614). Esta propiedad inmunoestimuladora resulta de la capacidad de este dominio de invasina para interactuar con las moléculas de integrina \beta1 presentes en las células T, particularmente células T de memoria o inmunoactivadas. Una modalidad preferida del dominio de invasina (Inv) para enlace a un epítope Th promiscuo se ha descrito previamente en la Patente Norteamericana 5,759,551. El dominio de Inv tiene la secuencia:

3

o es un homólogo inmunoestimulador del mismo de la región que corresponde en otra proteína invasina de la especie Yersinia. Tales homólogos pueden contener así sustituciones, eliminaciones o inserciones de residuos de aminoácido para acomodar la variación de cepa a cepa, con la condición de que los homólogos retengan las propiedades inmunoestimuladoras. La secuencia general inmunoestimuladora puede unirse opcionalmente al epítope Th con una secuencia espaciadora.

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Los conjugados peptídicos de esta invención, es decir, inmunógenos peptídicos que comprenden los epítopes Th artificiales descritos pueden representarse por las fórmulas:

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4

400

en donde: A es opcional y es un aminoácido o una secuencia general inmunoestimuladora, en donde n>1, cada A puede ser la misma o diferente;

B se selecciona del grupo que consiste de aminoácidos, -NHCH(X)CH2SCH2CO-, -NHCH(X)CH2SCH2CO(\varepsilon-N)Lys-, -NHCH(X)CH2S-succinimidil(\varepsilon-N)Lys-, y -NHCH(X)CH2S-(succinimidil)-;

Th es un epítope de célula T asistente artificial (SEC. DE IDENT. NOS: 6 y 15) o un homólogo que mejora inmunidad o un segmento del mismo;

"Sitio antigénico objetivo" es un epítope de célula B deseado o un hapteno peptídico, o un análogo del mismo);

X es un aminoácido \alpha-COOH o -CONH2;

n es de 1 hasta 10;

m es de 1 hasta 4; y

o es de 0 hasta 10.

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Los inmunógenos peptídicos de la presente invención comprenden de aproximadamente 25 hasta aproximadamente 100 residuos de aminoácido, de preferencia de aproximadamente 25 hasta aproximadamente 80 residuos de aminoácido.

Cuando A es una aminoácido, puede ser cualquier aminoácido que ocurre no naturalmente o que ocurre naturalmente. Los aminoácidos que no ocurren naturalmente incluyen, pero no se limitan a, D-aminoácidos, \beta-alanina, ornitina, norleucina, norvalina, hidroxiprolina, tiroxina, ácido \gamma-aminobutírico, homoserina, citrulina y similares. Los aminoácidos que ocurren naturalmente incluyen alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteina, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina. Además, cuando n es más grande que uno, y dos o más de los grupos A son aminoácidos, entonces cada aminoácido puede ser independientemente el mismo o diferente.

Cuando A es una secuencia de dominio de invasina, es preferentemente un epítope inmunoestimulador de la proteína invasina de una especie de Yersinia descrito aquí como SEC. DE IDENT. NO: 77.

En una modalidad en donde n es 3, cada A es a su vez una secuencia de invasina (Inv), glicina y glicina.

B es opcional y es un espaciador que comprende uno o más aminoácidos que ocurren naturalmente o que no ocurren naturalmente. En (B)O, en donde O>1, cada B puede ser la misma o diferente. B puede ser Gly-Gly o Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro (SEC. DE IDENT. NO: 79) o \varepsilonNLys o -NHCH(X)CH2SCH2CO-, -NHCH(X)CH2SCH2CO(\varepsilon-NLys)-, -NHCH(X)CH2S-succinimidil-\varepsilonNLys-, y -NHCH(X)CH2S-(succinimidil)-, donde Xaa es un aminoácido.

Th es un epítope de célula asistente T promiscuo seleccionado del grupo de las SEC. DE IDENT. NOS: 6 y 15.

En un péptido inmunogéno preferencial de la presente invención, el sitio antigénico objetivo es el repetitivo antigénico plasmodium falciparum (Asn-Ala-Asn-Pro)p (SEC. DE IDENT. NO. 103), donde p=4.

En un adicional péptido inmunogéno preferencial conforme de la presente invención, el péptido inmunogéno es seleccionado del grupo caracterizado porque consiste en la SEC. DE IDENT. NO: 104 y 152.

Los inmunógenos peptídicos de esta invención, pueden hacerse por métodos químicos bien conocidos para el artesano comúnmente experto. Ver, por ejemplo, Fields et al., Chapter 3 in Synthetic Peptides: A User's Guide, ed. Grant, W.H. Freeman & Co., New York, NY, 1992, p.77. Los péptidos pueden sintetizarse utilizando la síntesis peptídica de fase sólida Merrifield automatizada con t-Boc o Fmoc para proteger el \alpha-NH2 o los aminoácidos de cadena secundaria. El equipo para la síntesis peptídica está comercialmente disponible. Un ejemplo es un Applied Biosystems Peptide Synthesizer Model 430A o 431.

Después del ensamble completo del inmunógeno peptídico deseado, la resina se trata de acuerdo a los procedimientos estándar para desdoblar el péptido de la resina y desbloquear los grupos funcionales sobre las cadenas secundarias de aminoácidos. El péptido libre se purifica por CLAP y se caracteriza bioquímicamente, por ejemplo, por análisis de aminoácidos, por secuenciación, o por espectometría de masas. Los métodos de purificación y caracterización peptídica son bien conocidos a alguien con habilidad común en la técnica.

Otros medios químicos para generar inmunógenos peptídicos que comprenden los epítopes Th de la invención incluyen la ligación de péptidos haloacetilados y cisteinilados a través de la formación de un enlace "tioéter". Por ejemplo, una cisteína puede agregarse a la C terminal de un péptido que contiene Th y el grupo tiol de la cisteína puede usarse para formar un enlace covalente para un grupo electrofílico tal como un grupo N\alpha cloroacetilo modificado o una maleimida-\alpha-derivada o \varepsilon-NH2 de un residuo de lisina, el cual a su vez se une al N terminal de un péptido de sitio antigénico objetivo. En esta forma pueden obtenerse conjugados de sitio epítope Th/Célula B.

El sujeto inmunógeno también puede polimerizarse. La polimerización puede lograrse por ejemplo por reacción entre los grupos glutaraldehído y -NH2 de los residuos de lisina usando metodología rutinaria. Por otro método, el inmunógeno de sitio Th/Célula B puede polimerizarse o copolimerizarse por la utilización de una cisteína adicional agregada a la N-terminal de las construcciones lineales. El grupo tiol de la cisteína N-terminal puede usarse para la formación de un enlace "tioéter" con un grupo haloacetil-aminoácido modificado o una maleimida-\alpha derivada- o \varepsilon-NH2 de un residuo de lisina que se une a la N-terminal de una molécula de núcleo poli-lisil ramificada (por ejemplo, K2K, K4K2K o K8K4K2K). El sujeto inmunógeno también puede polimerizarse como una estructura ramificada a través de la síntesis de la construcción peptídica deseada directamente sobre una resina de núcleo poli-lisil ramificada (Wang, et al., Science, 1991; 254:285-288).

Los conjugados peptídicos sintéticos más grandes pueden sintetizarse alternativamente por técnicas de clonación de ácido nucleico bien conocidas. Cualquier tecnología de clonación manual o molecular estándar proporciona protocolos detallados para producir péptidos que comprenden los epítopes Th de la invención por la expresión de DNA y RNA recombinante. Para construir un gen que expresa un Th/péptido de sitio antigénico objetivo de esta invención (por ejemplo, SEC. DE IDENT. NOS: 36-64, 106, 71-76 y 80-82), la secuencia del aminoácido se traduce inversamente en una secuencia de ácido nucleico, usando preferentemente codones optimizados para el organismo en el cual se expresará el gen. Después, se hace típicamente un gen que codifica el péptido al sintetizar oligonucleótidos que se traslapan los cuales codifican el péptido y los elementos regulatorios necesarios. El gen sintético se ensambla e inserta dentro del vector de expresión deseado. La secuencias de ácido nucleico sintéticas comprendidas en esta invención incluyen aquellas que codifican los epítopes Th de la invención y los péptidos que comprenden aquellos epítopes Th, los homólogos inmunológicamente funcionales de los mismos, y las construcciones de ácido nucleico caracterizadas por cambios en la secuencia de no codificación que no alteran las propiedades inmunogénicas del péptido o el epítope Th codificado con el mismo. El gen sintético se inserta dentro de un vector de clonación adecuado y los recombinantes se obtienen y caracterizan. Los epítopes Th y los péptidos que comprenden los epítopes Th se expresan después bajo condiciones apropiadas para el sistema de expresión seleccionado y el huésped. El epítope Th o péptido se purifica y caracteriza por métodos estándar.

Los inmunógenos peptídicos de la invención pueden usarse solos o en combinación para producir respuestas anticuerpo a la Hormona que Libera la Hormona Luteinizante. La Hormona que Libera la Hormona Luteinizante (LHRH) o la hormona que libera Gonadotropina (GnRH) es una hormona maestra para la regulación de la reproducción sexual en machos y hembras. La LHRH regula la liberación de LH y FSH las cuales a su vez controlan la espermatogénesis, ovulación y estro, desarrollo sexual. La LHRH finalmente controla la secreción de las hormonas de macho andrógeno y testosterona, y la secreción de las hormonas hembra, estrógeno y progesterona, las cuales en sí mismas son esenciales para la fertilidad en machos y hembras, respectivamente. (Basic and Clinical Endocrinology, eds. FS Greenspan y JD Baxter, Appleton & Lange:Norwalk CT. 1994).

Desde hace mucho se conoce que la inmunización activa en contra de la LHRH ejerce efectos múltiples en machos que incluye disminución de suero y LH y FSH de pituitaria, reducción de suero de testosterona, supresión de la espermatogénesis y atrofia reversible de las gonadas y órganos sexuales accesorios (Ver, por ejemplo, Fraser et al., J. Endocrinol., 1974; 63:399-405; Giri et al., Exp. Molec. Pathol., 1991; 54:255-264; Ladd et al., J. Reprod. Inmunol., 1989; 15:85-101; y referencias citadas en la misma). La Inmunización en contra de la LHRH ha probado ser útil como un anticonceptivo en machos y tiene potencial como un tratamiento para el cáncer de próstata (Thau, Scand J Inmunol, 1992; 36 Suppl 11:127-130; y US 5,759,551).

La Inmuno intervención sobre el eje gonadal hipotalo-pituitaria por la inmunización activa en contra de la LHRH también puede usarse para inhibir las hormonas sexuales en hembras. Puesto que la LHRH regula la producción del FSH por la pituitaria anterior la cual a su vez regula la producción de estrógeno por los ovarios, bloquear la acción de la LHRH es una terapia para las enfermedades dependientes de hormonas sexuales en mujeres. Por ejemplo, el desarrollo ectópico y el mantenimiento de tejidos endometriales fuera de la musculatura uterina se medía por estrógenos. Por lo tanto, bloquear la acción de la LHRH es útil como un tratamiento para la endometriosis. Además, por analogía al cáncer de próstata, los tumores de mama impulsados por estrógeno también deben ser responsivos a la inmunoterapia de LHRH. Realmente, una vacuna que induce anti-LHRH ha mostrado reducir efectivamente los niveles de suero de LH y FSH en mujeres, una ilustración del potencial de este método para realizar la anticoncepción y el tratamiento de trastornos dependientes de hormonas (Gual et al., Fertility y Sterility, 1997; 67: 404-407).

Además de proporcionar tratamiento para un número de enfermedades importantes e infertilidad reversible en hombres y mujeres, la inmunoterapia basada en LHRH proporciona un medio para la anticoncepción reversible en animales machos y hembras (por ejemplo perros, gatos, caballos y conejos) así como mitigar el comportamiento indeseable impulsado por andrógeno tal como calor, señalamiento territorial y agresión.

Finalmente, la castración inmunológica (por ejemplo, la inhibición de la acción de LHRH basada en anticuerpos) tiene aplicación en la industria del ganado. La carne de los animales macho no se procesa en los cortes más escogidos debido a la presencia de un aroma y sabor ofensivo, conocido como mancha de cerdo sin castrar. La mancha de cerdo sin castrar se elimina convencionalmente por castración mecánica; sin embargo, la castración de animales alimenticios macho ya no se considera humana. Además, la castración mecánica resulta en un funcionamiento de crecimiento más pobre y lesiones en la parte del cuerpo, también referidas como cualidades de res muestra, en comparación con animales no castrados. Mientras que el funcionamiento del crecimiento y las cualidades de res muerta de los animales inmunocastrados son menos afectados que aquellos de los animales castrados (Bonneau et al., J Anim Sci, 1994; 72: 14-20 y Patente Norteamericana 5,573,767). Por lo tanto, la castración inmunológica es preferible a la castración mecánica.

La LHRH (o GnRH) es una automolécula que debe enlazarse a un componente Th para generar anticuerpos anti-LHRH (Sad et al., Inmunology, 1992; 76: 599-603). Tales diversas formas inmunogénicas de LHRH se han probado. Por ejemplo, los inmunógenos LHRH se han producido por la conjugación a proteínas portadoras o se enlazan por síntesis peptídicas a sitios Th potente derivados de organismos patógenos (WO 94/07530, Patente Norteamericana 5,759,551, Sad et al., 1992). Los inmunógenos peptídicos de LHRH mejorados que comprenden epítopes de LHRH y Th artificiales se ejemplifican en los Ejemplos 1-3.

Esta invención también proporciona composiciones que comprenden sistemas de suministro farmacéuticamente aceptables para la administración de los inmunógenos peptídicos. Las composiciones comprenden una cantidad inmunológicamente efectiva de uno o más de los inmunógenos peptídico de esta invención. Cuando se formulan así, las composiciones de la presente invención que comprenden LHRH o un homólogo del mismo como un sitio antigénico objetivo, se usan para el tratamiento de cáncer de próstata, prevención de mancha de cerdo sin castrar, inmunocastración de animales, el tratamiento de endometriosis, cáncer de mama y otros cánceres ginecológicos afectados por las hormonas esteroide de gonada1, y para la anticoncepción en machos y hembras. La utilidad para los péptidos de la invención tienen sitios antígenos objetivo diferentes a LHRH variarán de acuerdo con la especificidad del sitio antigénico objeto.

Los inmunógenos peptídicos de la invención pueden formularse como composiciones inmunogénicas que usan adyuvantes, emulsificadores, portadores farmacéuticamente aceptables u otros ingredientes rutinariamente proporcionados en composiciones de vacuna. Los adyuvantes o emulsificadores que pueden usarse en esta invención incluyen alumbre, adyuvante incompleto de Fround (IFA), liposina, saponina, escualeno, L121, emulsígeno, monofosforil lípido A (MPL), bromuro de dimetildioctadecilamonio (DDA), QS21, e ISA 720, ISA 51, ISA 35 o ISA 206 así como los otros adyuvantes y emulsificadores eficaces. Tales formulaciones se determinan fácilmente por alguien con habilidad común en la técnica y también incluyen las formulaciones para liberación inmediata y/o para liberación sostenida. Las vacunas presentes pueden administrarse por cualquier ruta conveniente que incluye subcutánea, oral, intramuscular, intraperitoneal, u otra ruta parenteral o entérica. Similarmente los inmunógenos pueden administrarse en una dosis sencilla o dosis múltiple. Los itinerarios de inmunización se determinan fácilmente por el artesano comúnmente experto.

La composición de la invención presente contiene una cantidad efectiva de uno o más de los inmunógenos peptídicos de la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable. Tal composición en una forma de dosificación unitaria adecuada generalmente contiene aproximadamente 0.5 g hasta aproximadamente 1 mg del inmunógeno peptídico por kg de peso corporal. Cuando se suministra en dosis múltiples, puede dividirse convenientemente en una cantidad apropiada por dosis. Por ejemplo, la dosis, 0.2-2.5 mg; de preferencia 1 mg, puede administrarse por inyección, de preferencia intramuscularmente. Esto puede seguirse por dosis repetida (impulsor). La dosificación dependerá de la edad, peso y salud general del sujeto como es bien conocido en las técnicas terapéuticas y de vacuna.

Las vacunas que comprenden mezclas de los inmunógenos peptídicos sujetos, particularmente las mezclas que comprenden sitios Th derivados de Th MVF, es decir, SEC. DE IDENT. NOS: 6 y 15 pueden proporcionar inmunoeficiencia aumentada en una población más amplia y proporcionar así una respuesta inmune mejorada a LHRH u otro sitio antigénico objetivo.

La respuesta inmune a conjugados peptídicos de Th/LHRH u otros conjugados de sitio antigénico Th/objetivo pueden mejorarse por suministro a través de la captura en o sobre micropartículas biodegradables del tipo descrito por O'Hagan et al. (Vaccine, 1991; 9:768). Los inmunógenos pueden encapsularse con o sin un adyuvante, y tales micropartículas pueden portar un adyuvante inmunoestimulador. Las micropartículas también pueden coadministrarse con los inmunógenos peptídicos para potenciar las respuestas inmunes.

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Como un ejemplo específico, la invención proporciona un método para inducir anticuerpo anti-LHRH al administrar composiciones farmacéuticas que comprenden inmunógenos peptídicos Th/LHRH a un mamífero durante un tiempo y bajo condiciones para producir un estado infértil en el mamífero. Como se usa en la presente un estado infértil es ese estado que previene la concepción. La infertilidad puede medirse por métodos conocidos en la técnica, por ejemplo la evaluación de espermatogénesis u ovulación, así como por modelado estadístico de datos experimentales de animales. Otros indicadores de infertilidad en machos incluyen la reducción de suero de testosterona hasta niveles de castración e involución de los testículos. La dosis apropiada de la composición es aproximadamente 0.5 \mug hasta aproximadamente 1 mg de cada péptido por kg de peso corporal. Esta dosificación puede dividirse convenientemente en cantidades apropiadas por dosis cuando se suministra en dosis múltiples.

Similarmente, las modalidades LHRH de esta invención se refieren a un método para tratar carcinoma dependiente de andrógeno al administrar las composiciones peptídicas sujetos al mamífero durante un tiempo y bajo condiciones para prevenir el crecimiento adicional del carcinoma. La dosis unitaria apropiada es aproximadamente 0.5 \mug hasta aproximadamente 1 mg de cada péptido por kg de peso corporal. Esto se divide convenientemente en las cantidades apropiadas por aplicación cuando se administra en dosis múltiples.

Adicionalmente, las modalidades LHRH se refieren a un método para mejorar las cualidades organolépticas y suavidad de la carne de animales domésticos macho a la vez que se mantiene el funcionamiento de crecimiento ventajoso de machos intactos. Las hormonas esteroide androgénicas de machos intactos son responsables del crecimiento rápido pero su presencia se acompaña por esteroides no androgénicos (por ejemplo, 5\alphaandrostenona) y escatol (un producto del metabolismo microbiano de triptófano) el cual imparte sabor y aroma desagradable a la carne. Esta condición, conocida como mancha de cerdo sin castrar en el caso de cerdos, retrae la calidad de la carne. Sin embargo, por la inmunización activa de machos jóvenes con composiciones que comprenden péptidos LHRH de la invención, sobre un Plan que efectúa la inmunocastración en la semanas justo antes de la matanza, pueden retenerse muchas de las ventajas de crecimiento de machos no castrados a la vez que se proporciona carne con sabor y suavidad
mejorada.

La eficiencia de la composición peptídica de la presente invención comprende el sitio antigénico objetivo, LHRH, puede probarse por el procedimiento descrito en los Ejemplos 1-3.

Otros sitios antigénicos objetivo que han también tenido que ser utilizados en inmunogenes de péptido de la presente invención se describen en los Ejemplos 4-9. Las composiciones de inmunógeno de péptido son útiles para la respuesta inmune inducida en mamíferos contra los antígenos objeto específicos y proporcionar para la prevención o tratamiento de la enfermedad o intervenir en las condiciones fisiológicas normales útilmente modificadas.

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Ejemplo 1 Inmunización de ratas con inmunógenos peptídicos que contienen LHRH

Los péptidos listados en las Tablas 2a y 2b se sintetizaron y probaron como se describe posteriormente.

A. Síntesis peptídica. Los péptidos listados en las Tablas 2a y 2b se sintetizaron individualmente por la técnica de síntesis de fase sólida de Merrifield sobre sintetizadores peptídicos automatizados Applied Biosystems (Modelos 430, 431 y 433A) usando química Fmoc. La preparación de construcciones peptídicas que comprenden bibliotecas de antígenos sintéticos estructurados (SSALs), por ejemplo, el sitio Th artificial designado SEC. DE IDENT. NO: 6-8, se logró al proporcionar una mezcla de los aminoácidos deseados seleccionados para una posición dada. Después del ensamble completo del péptido deseado o péptidos combinatoriales, la resina se trató de acuerdo al procedimiento estándar usando ácido trifluoroacético para desdoblar el péptido de la resina y desbloquear los grupos protectores sobre las cadenas secundarias de aminoácido.

Los péptidos desdoblados, extraídos y lavados se purificaron con CLAP y se caracterizaron por espectrometría de masa y CLAP de fase inversa.

Los péptidos se sintetizaron para tener el péptido antigénico objetivo LHRH (SEC. DE IDENT. NO: 77) en tándem con cada uno de los epítopes Th como se lista en las Tablas 2a y 2b. Los epítopes Th son aquellos que se muestran en las Tablas 1a y 1b (SEC. DE IDENT. NOS: 6, 12-19, 105, 20-22 y 31-35). Para propósitos de comparación, los inmunógenos peptídicos de la técnica anterior que comprende sitios Th modelo (SEC. DE IDENT. NOS: 36 y 65), y sitios Th prototipo (SEC. DE IDENT. NOS: 37-40 y 66-70) y un conjugado de proteína péptido/portador, KLH-LHRH (Tabla 2b) también se probó y sintetizó. Las construcciones peptídicas Th/LHRH e Inv/Th/LHRH se sintetizaron con gly-gly como un espaciador entre el sitio antigénico objetivo y el epítope Th, y con o sin gly-gly como un espaciador entre el epítope Th y la secuencia inmunoestimuladora Inv. Además, las SEC. DE IDENT. NOS: 80-82 se sintetizaron con la SEC. DE IDENT. NO: 79 como un espacio entre el sitio Th y el sitio antigénico objeto. Los resultados para los inmunógenos peptídicos SEC. DE IDENT. NOS: 80-82 no están aún disponibles.

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B. Protocolos para inmunización. Los Inmunógenos peptídicos LHRH mostrados en las Tablas 2a y 2b se evaluaron en grupos de 5 a 10 ratas como se especificó por el protocolo de inmunización experimental resumido posteriormente y por pruebas serológicas para la determinación de inmunogenicidad en muestras de suero:

Animales:: ratas macho Sprague-Dawley

Tamaño de grupo:: 5-10 ratas/grupo

Inmunógeno:: inmunógeno peptídico individual

Dosis:: cantidad en \mug como se especificó, en 0.5 mL

Adyuvantes:: (1) Adyuvante Incompleto de Freund (IFA); o

\quad: (2) Alumbre (hidróxido de Aluminio);

\quad: Un adyuvante por inmunógeno por grupo

Plan de dosis:: 0, 3, y 6 semanas o 0, 3 semanas como se especificó

Ruta:: intramuscular

La sangre se recolectó y procesó en suero y se almacenó antes de ELISA y radioinmunoensayo (RIA) para la determinación de los valores de testosterona en suero.

C. Método para la determinación de inmunogenicidad. Las actividades de anticuerpo se determinaron por ELISA (pruebas inmunosorbentes enlazadas a enzima) usando placas microtítulo de fondo plano de 96 pozos las cuales se recubrieron con el péptido LHRH (SEC. DE IDENT. NO: 77) como inmunosorbente. Las alícuotas (100 \muL) de la solución de inmunógeno peptídico a una concentración de 5 \mug/mL se incubaron durante 1 hora a 37ºC. Las placas se bloquearon por otra incubación a 37ºC durante 1 hora con una solución de 3% de gelatina/PBS. Las placas bloqueadas se secaron después y se usaron para la prueba. Las alícuotas (100 \muL) de la prueba de suero inmune, iniciaron con una dilución 1:100 en un regulador de dilución de muestra y posteriormente diluciones en serie de diez veces, se agregaron a las placas recubiertas de péptido. Las placas se incubaron durante 1 hora a 37ºC.

Las placas se lavaron seis veces con 0.05% de Tween® en PBS. 100 \muL de peroxidasa de rábano marcada en anticuerpo ganti-rata IgG de cabra se agregó a las diluciones apropiadas en regulador de dilución conjugado (regulador de Fosfato conteniendo 0.5M de NaCl, y suero normal de cabra). Las placas se incubaron durante 1 hora a 37ºC antes de lavarse como anteriormente. Se agregaron después alícuotas (100 \muL) de solución de substrato de o-fenilenediamina. El color se dejó desarrollar durante 5-15 minutos antes que la reacción enzimática colorida se detuviera por la adición de 50 \muL de H2SO4 2N. La A492 nm de los contenidos de cada pozo se leyó en un lector de placa. Los títulos de ELISA se calcularon basados en análisis de regresión lineal de las absorbencias, con corte A492nm fijado a 0.5. Este valor de corte fue riguroso puesto que los valores para las muestras control normales diluidas corridas con cada prueba fueron menos de 0.15.

D. Determinación de eficiencia de inmunógeno. Los inmunógenos se evaluaron por eficiencia por RIA para valores de testosterona en suero. Los niveles de testosterona en suero se midieron usando un equipo RIA de Diagnostic Products (Los Angeles, CA) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. El límite de detección inferior para la testosterona varió de 0.01 a 0.03 nmol/L. Cada muestra se analizó por duplicado. Las muestras de suero se contaron como estando a nivel de castración cuando el nivel de testosterona estuvo abajo de los límites de detección y tan "cerca de la castración" como < 0.1 nMol/L. Los resultados se verificaron por comparación con los niveles de testosterona en suero de ratas castradas mecánicamente.

E. Resultados. Los resultados de las muestras de suero colectadas en las semanas 10 ó 12 se presentan en las Tablas 2a y 2b. (Los péptidos de las Tablas se ordenan por derivación de sus epítopes Th, como se hizo en las Tablas 1a y 1b). Los datos de ELISA (no mostrados) demostraron que la inmunización de todos los inmunógenos listados resultaron en respuestas de anticuerpo en todos los animales. La eficiencia de las respuestas de anticuerpo anti-péptido, consecuentes con la reactividad cruzada a la LHRH natural, se estableció al determinar los niveles de testosterona en suero. Esos resultados se resumen en la columna derecha de las Tablas 2a y 2b como el número de animales que tienen nivel de castración de testosterona en suero por animales totales en el grupo.

Los resultados muestran que los péptidos de la invención, ya sea con un adyuvante fuerte IFA y administrado 3 veces a dosis alta, o con un adyuvante débil Alumbre y administrado dos veces a dosis baja fueron efectivos para producir inmunocastración. La inmunogenicidad de los sitios Th SEC. DE IDENT. NOS: 6, 9 y 15 se mejoraron por la adición de la secuencia de dominio Inv. Ver comparaciones entre SEC. DE IDENT. NOS: 41.44 y 45 y SEC. DE IDENT. NOS: 53 y 60. Aunque, la adición de la secuencia de dominio Inv no resultó siempre en la mejora de la inmunogenicidad, por ejemplo, comparar SEC. DE IDENT. NOS: 51 y 52, SEC. DE IDENT. NOS: 61 y 62, y, SEC. DE IDENT. NOS: 74 y 75. Dos péptidos de la invención (SEC. DE IDENT. NOS: 50 y 76) se probaron solamente a dosis baja con el adyuvante débil y fallaron en causar inmunocastración, pero los resultados con otros péptidos, por ejemplo, SEC. DE IDENT. NO: 73, indican que hubieran sido efectivos a una dosis más alta con un adyuvante fuerte. Muchos de los inmunógenos peptídicos LHRH de la presente invención fueron significativamente más efectivos para inducir inmunocastración que el conjugado de KLH/proteína portadora peptídica LHRH o los inmunógenos peptídicos que tienen Th HbsAg (SEC. DE IDENT. NOS: 65 y 66-70). Ver Tabla 2b.

También, los inmunógenos peptídicos de la presente invención fueron más fácilmente sintetizados que el péptido/proteína conjugada portadora o los inmunógenos peptídicos que tienen los epítopes Th prototipos más complejos de la técnica anterior (SEC. DE IDENT. NOS: 2-5 ó 26-30). Todavía, se obtuvo inmunogenicidad de equivalente mejorada con menos y más bajas dosis con los inmunógenos peptídicos que comprende los epítopes Th artificiales de la presente invención.

Un análisis serológico de las respuestas anticuerpo de ratas que habían recibido los péptidos LHRH de la invención demostró que las respuestas anticuerpo a los péptidos se dirigió específicamente al sitio antigénico objetivo y no a los sitios Th artificiales novedosos. Esta es una ventaja única de estos inmunógenos peptídicos sobre los conjugados convencionales de péptido/proteína portadora. Las muestras de suero de ratas que habían sido inmunizadas con los inmunógenos peptídicos mostrados en la Tabla 3, con dosis de 25 \mug sobre Alumbre a 0 y 3 semanas, se compararon por reactividades al sitio objetivo LHRH y al epítope Th por ELISA usando el péptido LHRH (SEC. DE IDENT. NO: 77) y el epítope Th apropiado (SEC. DE IDENT. NO: 15 y 18, 31 ó 34) como substratos de fase sólida en ELISA basada en péptido. Los resultados para estas ELISA se presentan en la Tabla 3 los cuales muestran que a pesar de la responsividad de alto título a la porción LHRH de los conjugados peptídicos Th/LHRH, las reactividades para los sitios Th artificiales estuvieron a niveles básicos.

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Ejemplo 2 Mezcla peptídica LHRH para inducción de inmunocastración mas amplia en ratas

Se establecieron las eficacias relativas de las diversas construcciones artificiales de epítope Th/LHRH como se mostró anteriormente en el Ejemplo 1, permitió la selección de los más efectivos para ensamblarse dentro de una mezcla peptídica de inmunogenicidad aumentada. Una mezcla de Inmunógenos peptídicos Th/LHRH es más eficaz que cualquier péptido individual dentro de la mezcla (Patente Norteamericana 5,795,551). Además, una mezcla de construcciones individuales portando epítopes Th promiscuos derivados de Th MVF (SEC. DE IDENT. NO: 1) y Th HBsAg (SEC. DE IDENT. NOS: 23-25) proporciona una respuesta más amplia en una población genéticamente diversa que una composición peptídica que tuviera epítopes Th derivados de solamente un epítope Th promiscuo. Por lo tanto, una composición peptídica que comprende una mezcla de péptidos de la invención derivados de Th MVF y HbSAg Th se ensambló y la eficiencia de la mezcla se probó y comparó a las composiciones que comprenden los péptidos individuales de la mezcla.

Los grupos de 6 u 8 ratas macho se inmunizaron con dosis de 25 \mug (dosis total) de las composiciones peptídicas indicadas en la Tabla 4. Los péptidos en la mezcla se combinaron en proporciones equimolares. Los péptidos se formularon con 0.4% de Alumbre y se administraron intramuscularmente en las semanas 0 y 3. Los niveles de testosterona en suero se siguieron durante 22 semanas y los resultados se contaron como número de animales con nivel de castración de testosterona por número total de animales en el grupo. Estos resultados se presentan en la Tabla 4. Se muestra que las dosis bajas de composiciones peptídicas, dadas con un adyuvante relativamente inefectivo, lograron niveles de castración de testosterona por la semana 5, y que esta respuesta se mantuvo hasta la semana 22. Además, la mezcla peptídica se desempeñó significativamente mejor que una de las composiciones peptídica que comprenden un péptido individual. Puede suponerse que la mezcla habría mostrado inmunogenicidad mejorada sobre la otra composición peptídica individual si los números de animales experimentales hubieran sido más grandes y más representativos de una población verdadera.

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Ejemplo 3 Mezcla peptídica LHRH y formulaciones para la inmunocastración de cerdo

Un grupo de animales de prueba han mostrado ser más ampliamente responsivo a una mezcla de inmunógenos peptídicos con diferentes epítopes Th que a una composición que contiene un inmunógeno peptídico sencillo. Sin embargo, para la prevención de mancha de cerdo, es necesario que los inmunógenos peptídicos LHRH inmunopotentes sean suficientemente potentes para producir la respuesta deseada en la mayoría de los animales mientras que es aceptable para uso en animales alimenticios. Es importante que no exista efecto inmediato adverso a la velocidad de crecimiento y que ningún residuo de inmunógeno peptídico o el adyuvante se deje en la carne o cause lesiones en las partes comerciales de la res muerta.

Para evaluar la inmunogenicidad útil de una mezcla de péptidos LHRH de la invención, la mezcla se administró al cerdo en tres formulaciones ya sea en 0.4% de Alumbre, IFA, o ISA 206/DDA. ISA 206/DDA es una emulsión de aceite/agua en la cual bromuro de dimetidioctadecilamonio (DDA) se dispersa en MONTANIDE® ISA 206 a 30 mg/ml (MONTANIDE® ISA 206 es una solución aceitosa metabolizable suministrada por SEPPIC Inc. de Fairfield, NJ). La suspensión en aceite se emulsificó después a una relación en volumen 1:1 dentro de una solución peptídica acuosa la cual se había ajustado para una concentración peptídica para proporcionar la dosis deseada de péptido en 0.5 mL de la preparación final.

Protocolo de la inmunización

Animales:: machos cerdos híbridos Yorkshire Hampshire Cross Swine,

\quad: 3-4 semanas de edad no castrados

Tamaño de grupo:: 2-3 animales/grupo

Inmunógeno:: Mezcla Equimolar de SEC. DE IDENT. NOS: 5758, 71 y 75,

Dosis:: 400 \mug de péptido(s) en 0.5 mL

Adyuvantes:: (1) 0.4% de alumbre,

\quad: (2) IFA,

\quad: (3) ISA 206/DDA

Plan:: 0,4, y 13 semanas o 0,4 semanas,

Ruta:: Intramuscular

La eficiencia de las formulaciones inmunógeno peptídicas se monitoreo probando las muestras de suero de cerdo recolectadas a través del curso del estudio, los resultados se presentan gráficamente en las Figuras 1-3. Las pruebas incluyen un RIA para la determinación de la presencia de anticuerpos de reacción cruzada a la LHRH nativa en solución como se describe posteriormente, y un RIA para testosterona como se describió en el Ejemplo 1. Además, el área de la sección transversal de testículos promedio se determinó por palpitación con un calibrador.

El antisuero para el anti-LHRH RIA se diluyó 1:100 en 1% de albúmina de suero bovino (BSA), pH 7.4. Un volumen igual de suero diluido se agregó a 100 \muL de [125I]-LHRH (New England Nuclear Company, Boston, MA) diluyó en 1% de BSA para contener aproximadamente 15,000 cpm para 5.25 pg LHRH. La solución se incubó toda la noche a temperatura ambiente y el anticuerpo unido a LHRH se precipitó con 400 \muL de 25% de polietilenglicol (Peso Molecular 8,000) en solución reguladora salina de fosfato 0.01 M (PBS), pH 7.6, y 200 \muL de 5 mg/mL de gamaglobulina bovina en PBS. Las concentraciones de anticuerpo Anti-LHRH se expresan como nmol iodinados unidos a LHRH por litro de suero (Ladd et al., 1988, Am J Reprod Immunol, 17:121-127).

Los resultados se representan gráficamente en las Figuras 1-3 para las tres pruebas. Los intervalos a los cuales se administraron los inmunógenos se muestran por filas en el fondo de las gráficas. Las determinaciones para los animales experimentales individuales en cada figura se representan por los círculos, triángulos, y cuadrados sólidos. El cerdo respondió inmunológicamente a las tres formulaciones, como se muestra por la presencia de anticuerpo anti-LHRH y la supresión concomitante de testosterona.

La preparación de alumbre (Figura 1) fue menos efectiva para producir un nivel menor de respuestas de anticuerpo. Un animal de este grupo no logró el nivel de castración de testosterona hasta la semana 11 y ambos animales en este grupo no manifestaron la completa involución de los testículos. Los animales del grupo de alumbre no recibieron inmunizaciones en la semana 13, y los efectos del tratamiento se invirtieron.

Los animales del grupo IFA (Fig. 2) exhibieron niveles más altos de respuestas anticuerpo, con dos de tres alcanzando y manteniendo un nivel de castración de testosterona por la semana 6. Sin embargo, con la administración de una dosis impulsora en la semana 13, el cerdo menos respondiente de los tres falló en responder y revirtió a un nivel normal de testosterona y a testículos no involucionados. Los dos animales responsivos de este grupo lograron completa involución de los testículos por la semana 23.

Ambos cerdos del grupo ISA 206/DDA (Fig. 3) proporcionaron niveles altos y relativamente uniformes de respuestas anticuerpo. Los niveles de inmunocastración de testosterona en este grupo se lograron por la semana 9 y se mantuvieron establemente a través de la semana 12. Ambos animales fueron responsivos al impulso en la semana 13 y mantuvieron niveles de castración de testosterona. Los testículos de ambos animales fueron indetectables por la semana 23.

De los resultados obtenidos de la formulación ISA 206/DDA, así, más preferida para la prevención de mancha de cerdo. Efectos altos y uniformes sobre los dos animales se lograron con la formulación ISA 206/DDA. Además, la formulación es más aceptable en cerdo en comparación con la formulación IFA la cual causó lesiones debido aparentemente a que la formulación IFA no se metaboliza prontamente.

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Ejemplo 4 Inmunógenos de somatostatina para la promoción del crecimiento en animales de granja

Los inmunógenos de la invención pueden usarse solos o en combinación para producir anticuerpos para somatostatina. La somatostatina es un inhibidor principal del crecimiento somático total. Es una hormona peptídica típica de 14 aminoácidos (SEC. DE IDENT. NO: 80, Tabla 5) y su estructura se conserva a través de las especies. La somatostatina inhibe la liberación de muchas hormonas gastrointestinales así como también inhibe la liberación de la hormona de crecimiento, insulina, y hormonas tiroideal afectando con eso la habilidad del animal para absorber nutrientes y su subsecuente habilidad para dirigir estos nutrientes dentro del crecimiento de tejido. La neutralización de somatostatina. Por inmunización a mostrado estimular el crecimiento en ovejas, cabras pollos y puercos (Spencer, Dom Anim Endocr, 1986; 3:55; Spencer et al., Reprod Nutr Develop, 1987; 27(2B):581; Laarveld et al., Can J Anim Sci, 1986, 66:77), and Cattle (Lawrence et al., J Anim Sci, 1986, 63(Suppl): 215).

Además de estimular la velocidad de crecimiento y conducir aún 20% de reducción en el tiempo de crianza (Spencer, 1986; Spencer et al., 1987) la inmunización activa en contra de somatostatina también tiene un efecto beneficiosos sobre la eficiencia de la conversión de alimento es decir, además de ahorrar en la alimentación por virtud de crecimiento más rápido, los animales actualmente utilizan su alimento más eficientemente durante el periodo de crecimiento, al menos parcialmente como un resultado de cambios en la movilidad del intestino (Fadlalla et al., J Anim Sci, 1985, 61:234). El tratamiento no tiene ningún efecto marcado sobre la composición de la red muerta (Spencer et al., 1987) pero hubo indicaciones que, cuando se mata a pesos iguales, los animales tratados pueden ser menos grasosos y magros. Tomados todos los datos experimentales juntos, la inmunización activa efectiva para somatostatina (como se evidencia por la presencia de anticuerpos antisomatostatina) es una herramienta poderosa, segura, y efectiva para mejorar el crecimiento (Spencer, 1986).

Sin embargo, la somatostatina es un péptido corto y un autoantígeno y es no inmunogénico por si mismo (ver Tabla 5). No obstante, diversas formas inmunogénicas de somatostatina se han diseñado y probado como se reporta en la literatura. Por ejemplo, la somatostatina se ha conjugado con portadores de proteína para mejorar la inmunopotencia, sin embargo, los portadores de proteína son demasiados caros para el uso económico en animales de granja. Además, la inmunización efectiva con somatostatina es latamente dependiente de cómo se conjuga el portador a la somatostatina. En la mayoría de los casos, se emplea glutaraldehído como el portador para acoplar con los residuos de glicina presentes sobre la somatostatina y el glutaraldehído. Las dos lisina sobre la somatostatina disponibles para el acoplamiento residen dentro de una ondulación funcional de 12-mer. La conjugación de estas lisinas puede resultar en pérdidas significativas de la estructura de somatostatina nativa. Como un resultado, se reduce la reactividad cruzada a la somatostatina natural con los anticuerpos. Además, con los portadores de proteína, la mayoría de las respuestas inmunes se dirigen al portador más que a la somatostatina (la masa de la molécula(s) portadora es mucho más grande que la de la somatostatina). La inmunización con un conjugado portador de péptido pequeño a conducido frecuentemente a la supresión inmune inducida por portador (Schutz et al., J Immunol, 1985, 135:2319). En consecuencia, existe una necesidad para una forma diferente de mejorar la inmunogenicidad que sea más adecuada par el uso de animales de granja. La vacuna debe ser barata y capaz de estimular una respuesta inmune temprana y fuerte a la somatostatina y evita la supresión inducida por portador.

Los inmunógenos peptídicos o somatostatina/epítope Th mostrados en la Tabla 5 se sintetizarón y administraron a ratas. El efecto de la inmunización se determino por ELISA peptídica como se describió en el Ejemplo 1. Se uso somatostatina ciclizada en uno de los inmunógenos peptídicos (SEC. DE IDENT. NO: 80) probados y en la prueba como el sustrato de fase sólida en ELISA. Para ciclizar completamente la somatostatina, el péptido desdoblado se disolvió en 15% de DMSO en agua durante 48 horas para facilitar la formación del enlace intradisulfuro.

De los resultados mostrados en la Tabla 5, es claro que la somatostatina sola está desprovista de inmunogenesidad mientras que los inmunógenos peptídicos de la presente invención produjeron altos títulos de anticuerpos específicos para somatostatina en los huéspedes inmunizados. Las respuesta antisomatostatina generadas para SEC. DE IDENT. NO: 81-83, SEC. DE IDENT. NO: 84-86 y SEC. DE IDENT. NO: 87, con epítopes Th (SEC. DE IDENT. NOS: 6, 7, 8 y 31) muestra la efectividad de los epítopes Th. Sin embargo, una comparación cercana de los títulos de anticuerpos para inmunogenesidad muestra que es preferible colocar el epítope Th sobre el C-terminal. Los resultados para SEC. DE IDENT. NOS: 84-86, con el epítope Th como SEC. DE IDENT. NOS: 6, 7, 8 muestra que se produjo un nivel más temprano más alto de anticuerpos. Los resultados de la Tabla 5 ilustran la fuerte respuesta anticuerpo a la inmunización con las composiciones de Th/somatostatina artificiales, estableciendo con eso la utilidad de estos péptidos de está invención para la promoción del crecimiento en animales de granja.

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Ejemplo 5 Composición peptídica para la prevención para la infección VIH

Los inmunogénicos peptídicos comprenden sitios Th artificiales idealizados de la presente invención y un sitio antigénico objetivo de reacción cruzada a un complejo de célula huésped receptor/correceptor para VIH puede usarse para producir anticuerpos para ese complejo de célula huésped en el huésped inmunizado. El complejo el cual se localiza sobre la superficie de los linfocitos del huésped que expresan CD 4 comprenden CD4 asociados con un dominio receptor de quimiocina. Este complejo es el receptor primario para la entrada de VIH dentro de las células T. Los anticuerpos dirigidos a este complejo CD4 bloquean las interacciones entre VIH y su receptor, y las interacciones entre las células T que expresan CD4 y CD-4 Clase romano II y otras células T activadas. Así, los anticuerpos dirigidos a este complejo tiene amplias actividades neutralizantes en contra de aislados primarios de VIH-1 VIH-2, y SIV e intervienen en la inmunosupresión de las respuestas inmunes mediadas por células CD4+ (WO 97/46697).

Los inmunogénicos peptídicos relevantes al sitio antigénico complejo CD4 pueden formularse sencillamente o en combinación para la generación, por inmunización activa en mamíferos que incluyen humanos, altos títulos de anticuerpos en suero para el complejo CD4 estos anticuerpos son útiles para la prevención y tratamiento de la infección del virus de inmunodeficiencia así como para el tratamiento de respuesta inmunes indeseables tales como rechazo de transplante, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, y psoriasis.

Se diseño un inmunógeno péptido epítope Th/sitio antigénico objetivo artificial con una secuencia modificada del dominio parecido a CDR2- de CD4 como el sitio antigénico objetivo. El sitio modificado comprende una secuencia peptídica tomada del dominio parecido a CDR2 de humanos CD4 (aminoácidos 39-66 de acuerdo con el sistema de numeración de Maddon et al., Cell, 1985; 42:93; y Littman et al., Cell, 1988; 55:541) modificado como sigue: (1) la inserción de residuo cisteina al lado N-terminal de la posición 39 de la secuencia CD4 que ocurra naturalmente, (2) la inserción de un residuo cisteina en el lado C-terminal en la posición 66 del mismo, y (3) la formación de un enlace disulfuro entre la cisteina insertada para producir una estructura cíclica. Se proporciona el sitio optimizado y modificado (es decir, ciclizado) para CD4-CDR2 de las siguientes secuencias:

5

Para completa la ciclización, el péptido modificado se disolvió en 15% de DMSO en agua durante 48 horas para facilitar la formación del enlace intra-disulfuro entre la cisteina la SEC. DE IDENT. NO: 84 se incorporó dentro del inmunógeno peptídico:

6

La inmunogenicidad en cobayos de SEC. DE IDENT. NO: 85 formulados en ISA 206/DDA, 100 \mug/dosis, dada en la semana 0, 3, 6, se evaluó. La inmunogenicidad se determino por ELISA peptídica como se describo en el EJEMPLO 1 Usado el péptido de sitio antigénico objetivo ciclizado como el sustrato de fase sólida en la ELISA. El conjugado marcado fue específico para cobayo y IgG. Seis de seis cobayos fueron exitosamente seroconvertidos por la reactividad de ELISA obtenida. Es significativo que SEC. DE IDENT. NO: 85 se haya encontrado ser altamente inmunogénica y es funcional en un animal grande.

Una composición inmunogénica que comprende SEC. DE IDENT. NO: 85 se formulo en IFA, 300 \mug/dosis, y se administro a un cerdo por inyección intramuscular por en la semana 0, 3, y 6. El cerdo seroconvertido y el suero de la semana 8 se probó por actividad de neutralización en contra de un aislado primario de VIH-1. La actividad de neutralización se probó sobre VIH-1 VL135, un aislado primario del subtipo B, por Prueba de Neutralización en Microplaca de MT-2 (Hanson et al., J Clin Microbiol, 1990; 28:2030; WO 97/46697). La muestra de suero de cerdo proporciono 50% de neutralización de virus a una dilución de 1:249, y 90% de neutralización a 1:97. Por lo tanto, la inmunización de un animal huésped grande con una composición de inmunógeno peptídico de la presente invención produce anticuerpos que se enlazan al receptor de la célula huésped que comprende CD4 y neutraliza
VIH.

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Ejemplo 6 Composición peptídica para el tratamiento de alergia

Los inmunógenos peptídicos que comprenden los sitios Th artificiales idealizados de la invención y un sitio antigénico objetivo de reactividad cruzada con un sitio vector sobre el tercer domino constante (CH3) de la cadena pesada epsilón (\varepsilon) de IgE se proporciona. Los inmunógenos pueden usarse para producir anticuerpos para el sitio efector IgE en el huésped inmunizado. Ese sitio efector IgE-CH3 se modifica de un segmento del domino CH3 de la cadena pesada epsilón de IgE humana (aminoácidos 413-435 (Dorrington and Bennich, 1978; 41:3). Se modifica de esas secuencia IgE que ocurre naturalmente como sigue: (1) inserción de un residuo cisteína en el lado de N-terminal en la posición 413 (2) sustitución de la cisteina nativa en la posición 418 de la secuencia IgE nativa porcerina, (3) inserción de cisteina en el lado del C-terminal en la posición 435, y (4) formación de un enlace disulfuro entre la cisteinas en los términos N- y C- para producir una estructura cíclica. Por este proceso el sitio antígeno objetivo para IgE humana se optimiza.

7

Las sustituciones de aminoácidos de la secuencia natural se muestran en negritas. Los resultados muestran que los anticuerpos policlonados producidos tienen especificidad para el sitio del sector CH3 de IgE en el huésped inmunizado. Evitan la sensibilización de células mast y basófilos por IgE, evitando con eso el disparo y activación de células mast/basofilos y conduce a la regulación a la baja de la síntesis de IgE. Además, los anticuerpos producidos por péptidos mostrados en la Tabla 6 con que comprenden este sitio antigénico objetivo son de reactividad cruzada con IgE humana, y estos anticuerpos son seguros y no anafilactogénicos. Además, los anticuerpos no reticulan el enlace IgE al receptor celular de alta afinidad para inducir desgranulación.

Los conjugados peptídicos relevantes al sitio antigénico IgE-C3 pueden formularse sencillamente o en combinación y usarse para inmunizar mamíferos que incluyen humanos para generar altos títulos de anticuerpos en suero, los cuales son útiles para la prevención y tratamiento de síntomas alérgicos.

Los inmunogénicos peptídicos que incorporan el sitio objetivo IgE-CH3 modificado (SEC. DE IDENT. NO: 92) se muestran en la Tabla 6 como SEC. DE IDENT. NOS: 87-90. Estos inmunógenos peptídicos se usaron para inmunizar grupos de 3 cobayos usando 100 \mug/dosis, formulados en CFA en la semana 0, IFA en la semana 3 y 6, y administrados intramuscularmente. Para comparación, se inmunizo un grupo de 2 animales con un conjugado de proteína portadora peptído/KLH a 200 \mug/dosis, similarmente administrada. Los resultados de ELISA de muestras de suero recolectadas en la semana 8 se muestran. En la ELISA se uso una proteína de mieloma IgE humano (American Biosystem, Inc. cat. no. A113) como el inmunoabsorbente de fase sólida. El procedimiento usado fue idéntico a las ELISA basadas en péptido descritas previamente, excepto que se uso el mieloma IgE como el inmunoabsorbente de fase sólida. Así, los resultados demuestran reactividad cruzada con IgE humana. Los resultados de ELISA también demostraron que y todas las construcciones fueron inmunogénicas con reactividad cruzada para IgE humana, con los inmunógenos peptídicos de la presente invención proporcionando superior inmunogenicidad. La inclusión de la secuencia de dominio Inv (SEC. DE IDENT. NO: 78) aumentaron la inmunogenicidad, como se muestra por la inmunogenicidad aumentada SEC. DE IDENT. NO: 99 sobre SEC. DE IDENT. NO: 98.

Para probar los anticuerpos IgE antihumanos en pruebas para actividad y seguridad biológica, se produjo suero hiperinmune de cobayo en contra de SEC. DE IDENT. NO: 98 y 99. El procedimiento es como se describió anteriormente, excepto que los animales también recibieron una dosis impulsora del inmunógeno peptídico en IFA en la semana 10. Los anticuerpos IgE de cobayo se purificaron y la habilidad de los anticuerpos purificados para inhibir la sensibilización de basofilos humanos por alergenos-IgE específicos se determino como sigue:

Los anticuerpos IgG de cobayo se purificaron por cromatografía de afinidad de Proteína A (ImmunoPure® Immobilized Recomb® Protein A, Pierce) de suero recolectado en las semanas 8 y 12. El suero de los animales inmunizados con SEC. DE IDENT. NOS: 98, 99 se reunió. Los anticuerpos eluidos se prepararon a una concentración estándar de 8 mg/mL en 25 mM de regulador PIPES, 0.15M NaCl, pH 7.2. Se preparó una preparación de anticuerpos control del suero reunido de cobayo inmunizados con un inmunógeno peptídico irrelevente. Estos anticuerpos se usaron en pruebas que midieron la reducción en la sensibilización mediada por Ige de basofilos humanos. Los basofilos humanos se prepararon de la sangre venosa de voluntarios usando centrifugación a través de gradientes de densidad de Percoll (MacGlashan. J Allergy Clin Immunol, 1993; 91:605-615). Las bandas de leucositos, se recolectaron, lavaron, y resuspendieron en 0.1 mL de regulador de PAGCM como se describe (MacGlashan, 1993) excepto que el regulador PAGCM usado para suspender las células se hizo con agua que contiene 44% de D20. El IgE usado para la prueba fue alergeno especófico, ya sea IgE específico BPO humano o IgE humano quimérico que tiene dominios variables insertados con especificidad para glicoproteína gp120 VIH. El IgE alergeno específico a 0.25 \mug/mL se pre-encubó durante 15 minutos a 37ºC con un volumen igual del, anticuerpo purificado a 8 mg/mL. El volumen total fue 0.1 mL. La mezcla de anticuerpos se agrego a él y se incubó durante 20 minutos para permitir la sensibilización de los basófilos por IgE no complejado. Lo sensibilizado se estimuló después por la adición del alergeno, ya sea BPO21-HSA o un polipéptido gp120 como se describió. (MacGlashan. 1993). Después de un periodo de incubación apropiado (usualmente 45 minutos), los basofilos se separaron del sobrenadante y el sobrenadante se probó por contenido de histamina por una técnica fluorimetrica automatizada (Siraganian, Anal Biochem, 1974; 57: 383-394). Todas las reacciones se realizaron por duplicado. El por ciento de liberación de histamina se calculó de la relación de la muestra a la histamina total menos ambas de las cantidades de liberación de histamina de espontánea. La liberación de histamina por anticuerpos experimentales para la liberación de histamina por el anticuerpo control de especificidad irrelevante se comparó y se obtuvo la relación. (Las pruebas de liberación de histamina sobre basofilos humanos se realizó gentilmente bajo condiciones codificadas por el Dr. Donald W. MacGlashan, The Johns Hopkins University School of Medicine, Johns Hopkins Asthma and Allergy Center, Baltimore). La inhibición específica de la liberación de histamina por la anti-IgE de sitio específico
fue de 61% y 71% para los anticuerpos purificados de las sangrías tomadas en las semanas 8 y 12, respectivamente.

Estos anticuerpos policlonales inducidos activamente se probaron después adicionalmente por seguridad. Se probaron por la habilidad o inhabilidad para reticular IgE enlazada al receptor e inducir la liberación espontánea de histamina en la ausencia de alergeno. Esto establece y son o no son anticuerpos anti-IgE no anafilactogenicos. Una preparación de anti-SEC. DE IDENT. NO: 98 de cobayo se probó por reto directo de basofilos sensibilizados a IgE-en ausencia de alergeno, para evaluar su habilidad para reticular IgE enlazada al receptor e inducir la desgranulación. La liberación de histamina por anti-SEC. DE IDENT. NO: 98 fue equivalente al nivel de liberación de histamina espontanea por las células donadoras. Basadas en este resultado, se concluyo que el anticuerpo de especificidad para el sitio antigénico objetivo de SEC. DE IDENT. NO: 98, es decir, SEC. DE IDENT. NO: 92, no es anafilactogénico.

La preparación anti-SEC. DE IDENT. NO: 98 de 12 semanas también se evaluó para especificidad de IgE para determinar el potencia de estos anticuerpos para inmunosupresión especificación de isotipo. La reactividad cruzada de anti-SEC. DE IDENT. NO: 98 de anticuerpos de cobayo IgE humana y para IgG se comparo por ELISA. El procedimiento se describe para IgG humana. Para ELISA IgG humana, se uso IgG humana como el inmunosorbente de fase sólida.

Las placas de ELISA IgE se recubrieron con el mieloma IgE humano a 5 \mug/mL. Para la ELISA IgG, las placas se recubrieron con IgG purificada humana (reactivo Sigma grado humano IgG), también a 5 \mug/mL. La anti-SEC. DE IDENT. NO: 98 de cobayo purificado se probó por reactividad en ambas ELISAs a concentraciones de 0.5 y 0.1 \mug/mL. Los resultados se compararon a los anticuerpos purificados de fuero de cobayo control y a un control "no anticuerpo". Los valores de A490 obtenidos para anti-SEC. DE IDENT. NO: 98 anticuerpo sobre IgE fueron 1.126 a 0.5 \mug/mL y 0.344 a 0.1\mug/mL. Los valores de A490 obtenidos para anticuerpo SEC. DE IDENT. NO: 98 sobre IgG fueron iguales al anticuerpo control y valores antecedentes. Esto muestra que no hubo reactividad cruzada de la anti-SEC. DE IDENT. NO: 98 de cobayo a IgG humana.

La composición inmunogénica peptídica de la presente invención no produce anticuerpos que reconocen anticuerpos IgG, y por lo tanto son isotipo específicos para IgE. Así, puede concluirse que la inmunización activa con inmunógenos de sitio antigénico objetivo mixtas Th/IgE de la invención producen anticuerpos anti-IgE no anafilafilactogénicos seguros. Los anticuerpos fueron efectivos para inhibir la sensibilización mediada por IgE, y presentaron un potencial inmunosupresivo específico para los anticuerpos de isotipo Ige.

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Ejemplo 7 Composición peptídica para la prevención de la enfermedad de pie y boca

Los inmunógenos peptídicos que comprenden sitios Th artificiales idealizados de la invención y un sitio antigénico objetivo de reacción cruzada al "Ondulación G-H" sobre la proteína de capside VP1 del virus de la enfermedad de pie y boca (FMDV), puede usarse para producir anticuerpos neutralizantes para FMDV.

La enfermedad de pie y boca (FMD) es la enfermedad más económicamente importante del ganado doméstico. Las especies de pata hendida que incluyen ganado, cerdos, ovejas y cabras son susceptibles. Se han descrito siete distintos serotipos: A, O, C, Asia, y los tipos Sudáfricanos SAR-1, 2, y 3 cada uno de los cuales puede subdividirse en múltiples subtipos. Los virus de serotipos A, O, y Asia-1 son los más comunes. Los virus del serotipo A son los más variables, teniendo más de 30 subtipos. No existe protección cruzada entre los serotipos de manera que los animales recuperados de la infección con o vacunados en contra de un virus de un serotipo aún son susceptibles a la infección con virus de los restantes seis serotipos. Además, el grado de variación antigénica de un serotipo es tal que una vacuna hecha en contra de un subtipo puede no ser protectora para otro subtipo dentro del mismo serotipo (Brown, Vaccine, 1992; 10:1022-1026).

Los péptidos específicos para serotipos que corresponden a la región 141-160 (la ondulación G-H) de las proteínas de capside VP1 de aislados que pertenecen a todos los siete serotipos FMDV han mostrado producir niveles protectores de anticuerpos neutralizantes de tipo específico en cobayos (Francis et al., Immunology, 1990; 69171-176). Claramente esta región contiene un sitio inmunogénico dominante el cual también lleva la especificidad de serotipo del virus. Las observaciones iniciales de inmugenicidad para estos péptidos 141-160 VP1 se logró usando péptidos sintéticos conjugados a la proteína portadora KLH (hemocianina de lapa ranurada),un procedimiento que niega la ventaja de fabricar un inmunógeno sintético bien definido. Sin embargo, el desarrollo de los inmunógenos sintéticos VP1 se desarrolló por DiMarchi y Brook (Patente Norteamericana No. 4,732,971) que mostró que las dos secuencias VP1 de un aislado de subtipo O, unido en una construcción quimérica 200-213 Pro-Pro-Ser-141-158-Pro-Cys-Gly (SEC. DE IDENT. NO: 100) protegieron al ganado en contra del reto. No obstante, la eficiencia de este efecto se limitó por la baja inmunogenicidad del inmunógeno peptídico y por su estrecha especificidad de serotipo. La aplicación práctica demanda que una formulación de vacuna proporcione protección de la exposición homotípica y heterotípica, con pequeñas cantidades de inmunógeno peptídico.

El sitio inmunodominante ondulación G-H optimizado para inmunogenicidad y capacidad para inducir anticuerpos ampliamente neutralizante se incorpora como un sitio antigénico objetivo dentro de los inmunógenos peptídicos de la presente invención. EL sitio es homologo a las posiciones de aminoácidos 134-169 sobre la proteína FMDV VP1 de la sepa A12 (Robertson et al, J Virol, 1985; 54:651-660) y se extiende más allá del extremo de la ondulación G-H. El sitio objetivo se modificó adicionalmente por: (1) substitución de Asp en la posición 134 y Gln en la posición 157 con cisteínas, (2) formación de un enlace disulfuro entre las cisteínas sustituyentes para producir una estructura cíclica, y (3) construcción de una SSAL de la misma usando las secuencias VP1 correspondientes de una selección de subtipos. Los sitios antígenos objetivo optimizados para la FMDV VP1 se ejemplifican por los péptidos en listados en la Tabla 7. Los dos inmunógenos peptídicos, SEC. DE IDENT. NO: 101 y SEC. DE IDENT. NO: 102, son sitios antigénicos objetivos SSAL compilados de sepas de serotipos o FMDV y Asia respectivamente. Los sitios antigénicos objetivos ambos serotipo I y Asia se acoplaron a los epítopes Rh de la presente invención SEC. DE IDENT. NO: 31. Las secuen-
cias de dominio mixtas (SEC. DE IDENT. NO: 78) también se incorporó dentro de la SEC. DE IDENT. NO: 102.

Estos inmunógenos peptídicos SSAL se sintetizaron y usaron para hiperinmunizar grupos de tres cobayos (Duncan Hartley (de hembras de 9 semanas edad, 450 gm, libres de virus). Cada animal se inmunizó con 100 \mug por dosis de la construcción sintética indicada emulsificada en CFA en la semana 9 o IFA en las semanas 3 y 6. Los animales se sangraron en la semanas 0, 5 y 10 para prueba.

Las muestras de suero se obtuvieron de sangrías de cinco y 10 semanas y se reunieron de cada grupo. El suero reunido se evaluó por reactividad al epítope que neutraliza VP1 por péptido basado en ELISA usando un péptido que tiene las secuencias para el epítope que neutraliza (VP1 134-169) como el inmuno absorbente de fase sólida. Su capacidad para neutralizar sepas FMDV A1 A12FP, AFL, A23, O-1JH, O-1P2, y Asia-1 también se determinó. La actividad que neutraliza el virus de una dilución 1:100 de una muestra de suero se determinó observando la neutralización sobre una serie de cargas virales de entrada crecientes, usando alícuotas (10,000 MPD50) de las sepas del virus nombradas anteriormente. Los resultados se muestran en la Tabla 7. El método de prueba realizado (Morgan and Moore, Am J Vet Res, 1990; 51:40-45), demostró que la inmunización con los antígenos peptídicos de la presente invención proporcionan suero el cual redujo en 2.5 log10 microplacas FMDV a una dilución de 1:100. Los resultados también son altamente predictivos de la inmunidad protectora en contra de la infección de FMDV.

Como se muestra en la Tabla 7, los títulos antipeptídicos altos en contra de los sitios antigénicos objetivo (>5 Log10) se produjeron en la semana 5. Se observó la neutralización amplia y efectiva de todas las siete sepas probadas que pertenecen a los tres diferentes serotipos de FMDV (es decir, A, O, Asia) a pesar de las amplias variaciones entre las sepas y serotipos.

Esto demuestra adicionalmente la eficiencia de los epítopes Th artificiales de la presente invención para estimular respuestas anticuerpo efectivas en contra de un epítope de un patógeno extraño.

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Ejemplo 8 Composición peptídica de una vacuna de esporozoito de malaria

Se proporcionan inmunógenos peptídicos que comprenden lo sitios Ph artificiales idealizados y un antígeno objetivo de circumesporozoito (CS) de Plasmodium falciparum, un parásito de la malaria humana. La proteína CS es el antígeno de superficie principal de la etapa de esporozoito del parásito. Los estudios inmunológicos y los datos de secuencias de un gran numero de genes CS de plasmodio humano, de simio, y roedor se han documentado mostrando que todas las proteínas CS contienen un región central, que consiste de una serie de repeticiones en tándem, abarcan copias
múltiples de un epítope de célula B inmunodominante. En P. falciparum el epítope que se repite se representa como

8

Los anticuerpos dirigidos en contra de las repeticiones de la proteína CS de los parásito de malaria humana, P. falciparum y P vivax, inhiben la invasión de hepatocitos por esporozoitos y anula su inefectividad. Por lo tanto, las repeticiones del epítope CS han sido el antígeno objetivo de las vacunas subunitarias usadas en diversas pruebas de vacuna de malaria humana (Nussenzweig et al., Adv. Inmunol., 1989, 45:283; Hoffman et al., Science, 1991, 252:520). Sin embargo, una de las desventajas de las diversas vacunas de malarias sintéticas corrientemente en las pruebas clínicas es su baja inmunogenicidad. Así, una vacuna de malaria potencial permanece a ser desarrollada. (Calvo-Calle et al., J Inmunol, 1994, 150:1403)

Para superar el problema de inmugenicidad asociado con las repeticiones de la proteína CS de P. falciparum, los epítopes Th artificiales mostrados en la Tabla 1 se incorporan dentro de los inmunógenos peptídicos CS. por ejemplo, la construcción peptídica

9

se sintetiza y usa como el inmunógeno clave en una vacuna de malaria para producir anticuerpos protectores potentes en animales pequeños, primates (por ejemplo, Babuinos) y humanos en contra de P. falciparum sporozoites.

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Ejemplo 9 Composición peptídica para la prevensión y tratamiento de ateroesclerois y enfermedad cardiovascular

La proteína de transporte colesteril éster (CETP) medía la transferencia de colesteril ésteres de HDL a lipoproteínas ricas en TG tales como VLDL y LDL, y también el intercambio de recíproco de TG de VLDL y LDL (Tall, J Internal Med, 1995, 237:5-12; Tall, J Lipid Res, 1993, 34:1255; Hesler et al., J Biol Chem, 1987, 262:2275; Quig et al., Ann Rev Nutr, 1990, 10:169). La CETP puede jugar un papel en la modulación de los niveles de colesteril ésteres y triglicéridos asociados con diversas clases de lipoproteínas. Se ha correlacionado una alta actividad de transferencia de colesteril éster CETP con niveles crecientes de colesterol asociado a LDL y colesterol asociado a VDLD, lo cual a su vez se correlaciona con el riesgo creciente de enfermedad cardiovascular (ver, por ejemplo Tato et al., Arterioscler Thromb Vascular Biol, 1995, 15:112).

La CETP aislada de plasma humano es una glicoproteína hidrofóbica que tiene 476 aminoácidos. Una CETP humana que codifica ADNc se ha clonado y secuenciado (Drayna et al., Nature, 1987, 237:632). Un anticuerpo monoclonal TP2 (anteriormente designado 5C7) el cual, inhibe completamente la actividad de transferencia del triglicérido y colesteril éster de CETP y a un grado menor, la actividad de transferencia de fosfolípidos (Hesler et al., J Biol Chem, 1998, 263:5020). El epítope de TP2 se localizó en el carboxilo terminal de 26 aminoácidos, es decir, los aminoácidos de Arg451 a Ser476 de CETP humana (ver, Hesler et al., 1988):

10

se reportó que la TP2 inhibe la actividad de CETP humana y de conejo in vitro y CETP de conejo in vivo (Yen et al., J Clin Invest, 1989, 83:2018). El análisis adicional de la región de CETP unida por Tp2 reveló que los aminoácidos entre Phe463 y Leu475

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son necesarios para el enlace de TP2 y para neutralizar la actividad de transferencia y enlace de lípidos neutros de CETP (ver, Wang et al., J Biol Chem, 1992, 270:612).

Un numero de estudio in vivo que utilizan modelos animales o humanos han indicado que la actividad de CETP puede afectar el nivel de colesterol circulante que contiene HDL. La creciente actividad de transferencia de colesteril éster CETP puede producir una disminución en los niveles de HDL-C relativo a los niveles de LDLC y/o VLDLC y bajo HDL lo cual a su vez se correlaciona con una creciente susceptibilidad a la arteriosclerosis. Por lo tanto, el descubrimiento de compuestos y métodos para controlar la actividad de CETP serán ventajosos para prevenir o tratar la enfermedad cardiovascular.

Rittershaus et al., WO 96/34888, propone el uso de una composición peptídica que comprende un epítope de célula T asistente inmunogénico "universal" o "de amplio rango" enlazado, preferente y covalentemente a una porción epítope de célula B tal como la encontrada en la porción carboxilo terminal de la CETP humana involucrada en un enlace de lípidos neutros o actividad de transferencia de CETP. Para mejorar la inmunogenicidad del sitio funcional de la CETP humana, es decir, se sintetizaron los aminoácidos carboxilo terminal de CETP humana (SEC. DE IDENT. NOS: 96 y 97) y análogos peptídicos de los mismos enlazados a los péptidos antigénicos que comprenden epítopes Th artificiales de la Tabla 1 y péptidos antígeno objetivo CETP. Estos antígenos peptídicos, mostrados en la Tabla 8, se usan para producir anticuerpos para CETP en animales pequeños, primates y humanos. Los anticuerpos anti CETOP controlan CETP. Por lo tanto, se espera que los péptidos antigénicos CETP causen acumulación reducida en plasma de colesterol asociado a LDL proporcione protección y tratamiento de arteriosclerosis y enfermedad coronaria del corazón.

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Ejemplo 10 Composición peptídica como componente de la vacuna VIH para la producción de anticuerpos de neutralización en contra de VIH

El progreso en el desarrollo de una vacuna efectiva para VIH-1 se ha evaluado en gran parte al medir la capacidad para inducir anticuerpos de neutralización y linfocitos T citotóxicos CD8+ específicos para virus (CTLs). Los indicadores líderes de una respuesta inmune protectora. Se observó una fuerte correlación entre la protección en contra de la infección y los niveles Abs de neutralización en primates no humanos infectados con VIH-1 y VIH de simio (SHIV). Sin embargo, se ha hecho progreso para generar anticuerpos de neutralización durante las décadas pasadas. Parte del problema es la débil respuesta anticuerpo de neutralización generada por las vacunas VIH-1 candidatas. Un artículo reciente intitulado "Toward an VIH Type 1 vaccine that generates potent, broadly cross-reactive neutralizing antibodies" por Montefiori et al (AIDS Res and Hum Retrovir, 1999, 15:689-698) proporciona una revisión del estado de la técnica de las dificultades encontradas en el desarrollo de la vacuna VIH.

En un esfuerzo para mejorar la respuesta anticuerpo de neutralización en contra de VIH, nos embarcamos en diseños de antígeno sintético dirigido para producir anticuerpos de neutralización potentes. Los antígenos sintéticos emplean epítopes Th artificiales especialmente diseñados como el elemento inmuno estimulador de la construcción unida covalentemente a los epítopes de células B que neutralizan VIH (por ejemplo, Korber et al, VIH Mol Immunol Database 1997, Part III Antibody Binding Sites) o nimétopes de neutralización (por ejemplo, Scala et al, J Immunol 1999, 162: 6155-6161) reconocidos previamente por anticuerpos monoclonales o policlonales.

Entre los epítopes de células B que neutralizan VIH, se diseñó una secuencia de consenso V3 artificial (SEC. DE IDENT. NO: 125) que comprende una estructura óptima del determinante de neutralización principal V3 de VIH gp120 (Wang, C.Y., US 5,763,160). Estos incluyen los aminoácidos más frecuentes para una cada de las posiciones de aminoácidos dentro de la estructura basada en el análisis de la secuencias de aminoácidos de alrededor de 1,000 aislados de VIH de los subtipos A a G, junto con la secuencia derivada de epítopes lineales o conformacionales de las regiones VIH gp120/gp41 mostradas aquí en las Tablas 9 y 10 en SEC. DE IDENT. NOS: 125, 126-129, 148-153. Los mimétopes de neutralización de Scala et al (SEC. DE IDENT. NOS: 130-135) también se sintetizan como péptidos de la invención, SEC. DE IDENT. NOS: 136-147, como se muestra en la Tabla 9.

Las construcciones peptídicas inmunogénicas de la invención mostradas en la Tabla 10 son completamente sintéticas y se sintetizaron por el método de fase sólida delineado en el ejemplo 1. Estas construcciones peptídicas inmunogénicas ilustran adicionalmente la utilidad del Ph artificial de la presente invención en el desarrollo de vacunas de VIH.

Cada péptido en la Tabla 10 puede representarse por la fórmula (A)n-(Th)m -(B)o-(epítope de neutralización B VIH)-X o (epítope de neutralización VIH)-(B)o-(Th)m-(A)n-X. Los epítopes que neutralizan VIH incluyen SEC. DE IDENT. NOS: 125 y 130-135. Los péptidos inmunogénicos comprenden uno o más de los sitios Th derivados de Th artificial (como se muestra en la Tabla 1). Cada péptido de este ejemplo tiene espaciadores Gly-Gly o (\varepsilon-N)Lys entre los elementos inmunogénicos, pero los péptidos de la invención pueden tener otros espaciadores o ningún espaciador.

Los péptidos de estos ejemplos pueden comprender un sitio inmunoestimulador Inv opcional (SEC. DE IDENT. NO: 27). Se entiende sin embargo que la invención no se limita al uso de Inv como un elemento inmunoestimulador adicional.

Las construcciones peptídicas representativas de la invención como se enlistan en la Tabla 10 (SEC. DE IDENT. NOS: 148-153) se sintetizaron, desdoblaron, ciclizaron y purificaron como se describió en el ejemplo 1. Cada construcción peptídica se formuló para inmunización dentro de animales pequeños tales como cobayos, o dentro de animales más grandes tales como cerdos o Babuino para la evaluación de su inmunogenicidad, cada uno de los péptidos se suspendió en un volumen de 0.5 mL que contiene emulsificadores representativos y adyuvantes tales como ISA51, ISA720, DDA o monofosforil lípido A (MPL). La dosis fue 100 \mug de péptido para cobayos o 300 \mug de péptido para cerdos o Babuinos y los animales se inmunizaron intramuscularmente.

Los animales recibieron inyecciones en la semana 0, 3 y 6 como se especifica en la Tabla 10. Las sangrías de prueba a las 5, 8, 10 y 11 semanas después de la inmunización inicial se evaluaron para las reactividades con epítopes objetivo por el ELISA peptídica de epítope de célula B como se describió en el ejemplo 1, y se probó adicionalmente por su capacidad para neutralizar VIH-1 como se describió en detalle en el ejemplo 5.

Todos los péptidos probados produjeron reactividades cruzadas dirigidas al sitio fuerte al péptido objetivo correspondiente, como se muestra por lo títulos Log10 en las ELISAs peptídicas de epítope anti B mayores de 4. la neutralización de VIH-1 también se observó para el suero inmune obtenido de cobayos y Babuinos. Esta reactividad funcional por el suero de Babuino es digna de mención puesto que la neutralización del VIH humano por el suero de Babuino es casi un sistema humano. Los resultados son fuertes indicadores de la eficiencia de una construcción peptídica de la invención como un agente para la prevención y/o inmunoterapia de la infección VIH por inmunización activa.

TABLA 1

Modelo, Prototipo, y Epítopes Th Artificiales Idealizados

a. Epítopes Th y Th MVF derivados de los mismos

12

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b. HBsAg Th, Prototipo y derivados *

14

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TABLA 2 Inmunogenicidad de Péptidos LHRH

a. Derivativo MVF Th

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TABLA 2 (continuación)

16

TABLA 2 (continuación)

17

TABLA 2 (continuación)

18

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b. HBsAg Th Derivativo *

19

\newpage

TABLA 2 (continuación)

20

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TABLA 3 Evaluación de Especificidad de Anticuerpo para el Sitio Antigénico Objetivo

21

22

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TABLA 4 Evaluación de Composiciones Peptídicas Th/LHRH Artificiales que Incluyen Mezcla

23

TABLA 5 Inmunogenicidad de Péptidos Antigénicos de Somatostatina

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TABLA 6 Inmunogenicidad de Péptidos Antigénicos IgE-CH3

25

TABLA 7 * Péptidos Antigénicos Th y SSAL Artificiales para Mejorada Inmunogenicidad y Amplitud de Nutralización FMDV

26

TABLA 8 Péptidos antigénicos CETP

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28

29

30

31

(1) INFORMACIÓN GENERAL:

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(i): SOLICITANTE: UNITED BIOMEDICAL INC., ET AL.

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(ii): TITULO DE LA INVENCIÓN: EPÍTOPES ARTIFICIALES DE CÉLULAS ASISTENTES T COMO INMUNO ESTIMULADORES PARA INMUNÓGENOS PEPTÍDICOS SINTÉTICOS QUE INCLUYEN PÉPTIDOS LHRH INMUNOGENICOS

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(iii): NUMERO DE SECUENCIAS: 151

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(iv): DIRIGIR LA CORRESPONDENCIA:

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(A): DESTINATARIO: Morgan & Finnegan, L.L.P.

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(B): CALLE: 345 Park Avenue

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(C): CIUDAD: New York

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(D): ESTADO: NY

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(E): PAÍS: EUA

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(F): CÓDIGO POSTAL: 10154-0054

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(v): FORMA DE LECTURA EN LA COMPUTADORA:

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(A): TIPO DE MEDIO: Disco flexible

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(B): COMPUTADORA: compatible con una PC IBM

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(C): SISTEMA OPERATIVO: PC Windows

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(D): SOFTWARE: Word 97

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(vi): DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:

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(A): NUMERO DE SOLICITUD: A SER ASIGNADO

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(B): FECHA DE PRESENTACIÓN: 21 de junio de 1999

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(C): CLASIFICACIÓN:

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(vii): DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR:

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(A): NUMERO DE SOLICITUD.: 09/100,414

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(B): FECHA DE PRESENTACIÓN: 20 de junio de 1998

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(viii): INFORMACIÓN DEL APODERADO/AGENTE:

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(A): NOMBRE: Maria H. Lin

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(B): NUMERO DE REGISTRO: 29,323

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(C): REFERENCIA/NUMERO DE EXPEDIENTE: 1151-4157PC1

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(ix): INFORMACIÓN DE LA TELECOMUNICACIÓN:

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(A): TELÉFONO: 212-758-4800

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(B): TELEFAX: 212-751-6849

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 1:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

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(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

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(B): TIPO: aminoácido

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(D): TOPOLOGÍA: lineal

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

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(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 1:

32

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 2:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 2:

\vskip1.000000\baselineskip

33

\hskip3.5cm

34

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 3:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): TOPOLOGÍA: LINEAL

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 3:

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35

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 4:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

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(C): TOPOLOGÍA: LINEAL

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

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(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 4:

36

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 5:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

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(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

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(B): TIPO: aminoácido

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(C): TOPOLOGÍA: LINEAL

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

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(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 5:

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37

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 6:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

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(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

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(B): TIPO: aminoácido

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(D): TOPOLOGÍA: lineal

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

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(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 6:

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38

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 7:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

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(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

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(B): TIPO: aminoácido

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(D): TOPOLOGÍA: lineal

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

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(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 7:

39

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 8:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

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(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

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(B): TIPO: aminoácido

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(D): TOPOLOGÍA: lineal

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

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(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 8:

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40

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 9:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

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(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

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(B): TIPO: aminoácido

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(D): TOPOLOGÍA: lineal

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(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

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(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 9:

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41

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(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 10:

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(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 10:

42

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 11:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 11:

\vskip1.000000\baselineskip

43

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 12:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 12:

\vskip1.000000\baselineskip

44

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 13:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 13:

45

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 14:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 14:

\vskip1.000000\baselineskip

46

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 15:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 15:

\vskip1.000000\baselineskip

47

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 16:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 16:

48

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 17:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 17:

\vskip1.000000\baselineskip

49

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 18:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 18:

\vskip1.000000\baselineskip

50

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 19:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 19:

51

\hskip4cm

52

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 20:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 20:

\vskip1.000000\baselineskip

53

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 21:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 21:

\vskip1.000000\baselineskip

54

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 22:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 22:

55

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 23:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 23:

\vskip1.000000\baselineskip

56

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 24:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 24:

\vskip1.000000\baselineskip

57

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 25:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 14 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 25:

58

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 26:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 26:

\vskip1.000000\baselineskip

59

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 27:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 27:

\vskip1.000000\baselineskip

60

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 28:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 28:

61

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 29:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 29:

\vskip1.000000\baselineskip

62

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 30:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 30:

\vskip1.000000\baselineskip

63

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 31:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 31:

64

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 32:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 17 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 32:

\vskip1.000000\baselineskip

65

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 33:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 33:

\vskip1.000000\baselineskip

66

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 34:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 34:

67

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 35:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 35:

68

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 36:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 36:

69

70

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 37:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 28 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 37:

\vskip1.000000\baselineskip

71

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 38:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 28 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 38:

\vskip1.000000\baselineskip

72

73

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 39:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 28 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 39:

74

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 40:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 28 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 40:

\vskip1.000000\baselineskip

75

\hskip3.8cm

76

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 41:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 41:

77

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 42:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 42:

\vskip1.000000\baselineskip

78

79

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 43:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 43:

80

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 44:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 44:

\vskip1.000000\baselineskip

81

82

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 45:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 45 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 45:

83

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 46:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 45 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 46:

\vskip1.000000\baselineskip

84

\hskip3.7cm

85

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 47:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 47:

86

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 48:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 48:

87

88

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 49:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 49:

89

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 50:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 50:

90

\hskip3.7cm

91

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 51:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 51:

92

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 52:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 45 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 52:

93

94

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 53:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 53:

\vskip1.000000\baselineskip

95

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 54:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 54:

\vskip1.000000\baselineskip

96

97

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 55:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 55:

98

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 56:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 56:

99

\hskip3.7cm

100

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 57:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 49 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 57:

101

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 58:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 49 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 58:

102

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 59:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 59:

\vskip1.000000\baselineskip

103

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 60:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 47 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 60:

\vskip1.000000\baselineskip

104

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 61:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 61:

105

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 62:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 49 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 62:

\vskip1.000000\baselineskip

106

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 63:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 47 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 63:

107

108

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 64:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 64:

\vskip1.000000\baselineskip

109

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 65

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 27 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 65

110

\hskip3.7cm

111

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 66

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 66

112

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 67

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 67

113

\hskip4cm

114

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 68

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 68

115

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 69

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 69

116

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 70

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 70

117

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 71:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 71:

\vskip1.000000\baselineskip

118

119

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 72:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 72:

120

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 73:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 73:

121

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 74:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 28 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 74:

122

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 75:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 46 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 75:

123

124

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 76:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 76:

125

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 77:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 10 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 77:

\vskip1.000000\baselineskip

126

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 78:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 78:

\vskip1.000000\baselineskip

127

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 79:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 6 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 79:

\vskip1.000000\baselineskip

128

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 80:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 14 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 80:

\vskip1.000000\baselineskip

129

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 81:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 81:

\vskip1.000000\baselineskip

130

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 82:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 82:

\vskip1.000000\baselineskip

131

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 83:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 83:

132

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 84:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 84:

\vskip1.000000\baselineskip

133

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 85:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 85:

134

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 86:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 86:

135

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 87:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 34 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 87:

136

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 88:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 88:

137

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 89:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 47 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 89:

138

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 90:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 47 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 90:

\vskip1.000000\baselineskip

139

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 91:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 47 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 91:

\vskip1.000000\baselineskip

140

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 92:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 25 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 92:

141

142

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 93:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 46 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 93:

143

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 94:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 46 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 94:

144

145

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 95:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 42 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 95:

\vskip1.000000\baselineskip

146

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 96:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 42 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 96:

147

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 97:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 42 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 97:

148

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 98:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 45 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 98:

149

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 99:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 63 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 99:

150

151

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 100:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 38 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 100:

\vskip1.000000\baselineskip

152

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 101:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 56 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 101:

\vskip1.000000\baselineskip

\hskip3.5cm

153

154

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 102

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 72 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 102

\vskip1.000000\baselineskip

155

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 103

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 4 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 103

\vskip1.000000\baselineskip

156

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 104

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 36 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 104

157

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 105

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 36 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 105

158

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 106

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 26 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 106

159

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 107

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 107

\vskip1.000000\baselineskip

160

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 108

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 108

\vskip1.000000\baselineskip

161

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 109

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 26 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 109

\vskip1.000000\baselineskip

162

163

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 110

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 46 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 110

\vskip1.000000\baselineskip

164

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 111

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 46 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 111

\vskip1.000000\baselineskip

165

166

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 112

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 36 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 112

167

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 113

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 36 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 113

\hskip3.5cm

168

169

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 114

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 35 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 114

170

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 115

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 36 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 115

\hskip3.7cm

171

172

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 116

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 36 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 116

173

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 117

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 36 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 117

\vskip1.000000\baselineskip

174

\hskip4cm

175

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 118

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 46 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 118

176

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 119

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 46 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 119

177

\hskip4cm

178

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 120:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 35 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 120:

179

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 121:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 35 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 121:

\vskip1.000000\baselineskip

180

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 122:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 34 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 122:

181

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 123:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 123:

182

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 124:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 124:

183

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 125:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 125:

\vskip1.000000\baselineskip

184

185

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 126:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 51 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 126:

\vskip1.000000\baselineskip

186

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 127:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 51 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 127:

\vskip1.000000\baselineskip

187

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 128:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 51 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 128:

188

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 129:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 51 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 129:

\vskip1.000000\baselineskip

189

\hskip3.5cm

190

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 130:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 9 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 130:

191

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 131:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 9 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 131:

192

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 132:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 10 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 132:

193

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 133:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 9 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 133:

194

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 134:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 9 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 134:

\vskip1.000000\baselineskip

195

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 135:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 11 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 135:

\vskip1.000000\baselineskip

196

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 136:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 136:

\vskip1.000000\baselineskip

197

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 137:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 137:

\vskip1.000000\baselineskip

198

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 138:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 138:

\vskip1.000000\baselineskip

199

\hskip3.5cm

200

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 139:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 139:

\vskip1.000000\baselineskip

201

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 140:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 11

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 140:

\vskip1.000000\baselineskip

202

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 141:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 30 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 11

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 141:

\vskip1.000000\baselineskip

203

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 142:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 142:

\vskip1.000000\baselineskip

204

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 143:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 143:

\vskip1.000000\baselineskip

205

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 144:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 144:

206

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 145:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 29 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 145:

207

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 146:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 12

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 146:

208

209

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 147:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 31 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 12

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 147:

\vskip1.000000\baselineskip

210

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 148:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 52 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 148:

211

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 149:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 52 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 149:

\vskip1.000000\baselineskip

212

213

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 150:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 50 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 150:

\vskip1.000000\baselineskip

214

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. IDENT. NO: 151:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 50 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: péptido

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Sitio modificado

\vskip0.500000\baselineskip

(B): UBICACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(C): OTRA INFORMACIÓN: /nota= "(\varepsilon-N)Lys"

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. IDENT. NO: 151:

215

Claims

1. Un epítope de célula asistente T seleccionado del grupo caracterizado porque consiste de SEC. DE IDENT. NO: 6 o 15.

2. Un inmunógeno peptídico representado por las fórmulas

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216

\vskip1.000000\baselineskip

en donde:

A es un aminoácido o una secuencia inmunoestimuladora general, en donde n es más de uno, las A' s individuales pueden ser las mismas o diferentes;

B se selecciona del grupo que consiste de aminoácidos, -HCH(X)CH2SCH2CO-, -NHCH(X)CH2SCH2CO(\varepsilon-N)Lys-, -NHCH(X)CH2S-succinimidil(\varepsilon-N)Lys-, y -NHCH(X)CH2S-(succinimidil)-;

Th es un epítope de célula T asistente artificial seleccionado del grupo que consiste de SEC. DE IDENT. NO: 6 o 15;

"Sitio antigénico objetivo" es un epítope de célula B, un hapteno peptídico, o un análogo inmunológicamente reactivo de los mismos;

X es un aminoácido \alpha-COOH o -CONH2;

n es de 1 hasta aproximadamente 10;

m es de 1 hasta aproximadamente 4; y

o es de 0 hasta aproximadamente 10.

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3. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la secuencia inmunoestimuladora es SEC. DE IDENT. NO: 78.

4. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque B se selecciona del grupo que consiste de Gly-Gly, (\varepsilon-N)Lys-, Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro, -NHCH(X)CH2SCH2CO-, -NHCH(X)CH2SCH2-
CO(\varepsilon-N)Lys-, -NHCH(X)CH2S-succinimidil(\varepsilon-N)Lys-, y -NHCH(X)CH2S-(succinimidil)-.

5. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque B es Gly-Gly.

6. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque B es (\varepsilon-N)Lys.

\newpage

7. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 2, 3, 4, 5 ó 6, caracterizado porque el sitio antígeno objetivo es el antígeno de repetición de

217

en donde p=4.

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8. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque se seleccionado del grupo que consiste de SEC. DE IDENT. NOS: 104 y 152.

9. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 2, 3, 4, 5, ó 6, caracterizado porque el sitio Antígeno Objetivo se selecciona del grupo que consiste de SEC. DE IDENT. NOS: 106, 107, 108 y 109, un epítope de CETP.

10. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 10, seleccionado del grupo que consiste de SEC. DE IDENT. NOS: 110, 112, 116 y 118.

11. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 2, 3, 4, 5, ó 6, caracterizado porque el sitio Antígeno Objetivo se selecciona del grupo que consiste de SEC. DE IDENT. NOS: 125, 131, 132, 133, 134 y 135 un epítope de VIH.

12. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de SEC. DE IDENT. NOS: 126, 136, 138, 140, 142, 144, 146 y 148.

13. El inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 12, comprendiendo SEC. DE IDENT. NO: 148.

14. Un método para producir un inmunógeno peptídico al enlazar covalentemente un epítope de célula asistente T de la reivindicación 1 a un sitio antigénico objetivo seleccionado del grupo que consiste de epítopes de células B de un antígeno y un hapteno peptídico.

15. El método para producir un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque enlaza adicionalmente el epítope de célula asistente T enlazado covalentemente y un sitio antigénico objetivo a una secuencia inmunoestimuladora.

16. El método para producir un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la secuencia inmuestimuladora es la SEC. DE IDENT. NO: 78.

17. El método para producir un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque B se selecciona del grupo que consiste de Gly-Gly, (\varepsilon-N)Lys, Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro, -NHCH(X)CH2SCH2CO-, -NHCH(X)CH2SCH2CO(\varepsilon-N)Lys-, -NHCH(X)CH2S-succinimidil(\varepsilon-N)Lys-, and -NHCH(X)CH2S-(succinimidil)-

18. El método para producir un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque B es Gly-Gly.

19. El método para producir un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque B es (\varepsilon-N)Lys.

20. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad comprende el célula asistente T con la reivindicación 1.

21. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 2.

22. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 3.

23. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 4.

24. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 5.

25. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 6.

26. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 7.

27. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 8.

28. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 9.

29. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 10.

30. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 11.

31. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 12.

32. El método para inducir una respuesta de célula asistente T in vitro al emplear un inmunógeno peptídico de conformidad con la reivindicación 13.