ES2346591T3 - Moduladores de la actividad del receptor de quimiocina, formas cristalinas y procedimientos. - Google Patents

Moduladores de la actividad del receptor de quimiocina, formas cristalinas y procedimientos.

Info

Publication number
ES2346591T3
ES2346591T3 ES07799831T ES07799831T ES2346591T3 ES 2346591 T3 ES2346591 T3 ES 2346591T3 ES 07799831 T ES07799831 T ES 07799831T ES 07799831 T ES07799831 T ES 07799831T ES 2346591 T3 ES2346591 T3 ES 2346591T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
mcp
compound
disease
ccr2
amino
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES07799831T
Other languages
English (en)
Inventor
Michael G. Yang
Robert J. Cherney
Martin G. Eastgate
Jale Muslehiddinoglu
Siva Josyula Prasad
Zili Xiao
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bristol Myers Squibb Co
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=38823540&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2346591(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Application granted granted Critical
Publication of ES2346591T3 publication Critical patent/ES2346591T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • C07D207/273—2-Pyrrolidones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/72—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 spiro-condensed with carbocyclic rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)

Abstract

Un compuesto, N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Moduladores de la actividad del receptor de quimiocina, formas cristalinas y procedimientos.
Campo de la invención
La presente invención proporciona N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)
quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-il)ciclohexil)acetamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, que tiene una combinación inesperada de características farmacológicas deseables. También se proporcionan las formas cristalinas de la presente invención. Las composiciones farmacéuticas que contienen las mismas y las mismas para su uso como agentes para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, alérgicas, autoinmunes, metabólicas, cáncer y/o enfermedades cardiovasculares también es un objetivo de la presente invención.
Antecedentes de la invención
Las quimiocinas son citoquinas quimiotácticas, de peso molecular 6-15 kDa, que se liberan mediante una gran variedad de células para atraer y activar, entre otros tipos celulares, macrófagos, linfocitos T y B, eosinófilos, basófilos y neutrófilos (revisado en: Charo y Rasonhoff, New Eng. J. Med. 2006, 354, 610-621; Luster, New Eng. J. Med. 1998, 338, 436-445 y Rollins, Blood 1997, 90, 909-928). Hay dos clases principales de quimiocinas. CXC y CC, dependiendo de si las dos primeras cisteínas en la secuencia de aminoácidos están separadas mediante un único aminoácido (CXC) o son adyacentes (CC). Las quimiocinas CXC, tales como interleucina-8 (IL-8), la proteína activadora de neutrófilos-2 (NAP-2) y la proteína de actividad estimuladora del crecimiento de melanomas (MGSA) son quimiotácticos primariamente para neutrófilos y linfocitos T, mientras que las quimiocinas CC, tales como RANTES, MIP-1\alpha, MIP-1\beta, las proteínas quimiotácticas de monocitos (MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4 y MCP-5) y las eotaxinas (-1 y -2) son quimiotácticas para, entre otros tipos celulares, macrófagos, linfocitos T, eosinófilos, células dendríticas, y basófilos. También existen las quimiocinas linfotactina-1, linfotactina-2 (ambas quimiocinas C) y fractalquina (una quimiocina CX_{3}C) que no se clasifican en ninguna de las subfamilias de quimiocinas principales.
Las quimiocinas se unen a receptores específicos de la superficie celular que pertenecen a la familia de proteínas de siete dominios transmembrana acopladas a proteínas G (revisado en: Horuk, Trends Pharm. Sci. 1994, 15, 159-165) que se denominan "receptores de quimiocinas". En la unión a sus ligandos afines, los receptores de quimiocina transducen una señal intracelular aunque las proteínas G triméricas asociadas, que producen, entre otras respuestas, un rápido aumento en la concentración de calcio intracelular, cambios en la forma celular, expresión aumentada de moléculas de adhesión celular, desgranulación y promoción de la migración celular. Hay al menos diez receptores de quimiocinas humanos que se unen o responden a las quimiocinas CC con los siguientes patrones de características (revisado en Zlotnik y Oshie Immunity 2000, 12, 121): CCR-1 (o "CKR-1" o "CC-CKR-1") [MIP-1\alpha, MCP-3, MCP-4, RANTES] (Ben-Barruch, y col., Cell 1993, 72, 415-425, y Luster, New Eng. J. Med, 1998, 338, 436-445); CCR-2A y CCR-2B (o "CKR-2A7"/"CKR-2B" o "CC-CKR-2A7" "CC-CKR-2B") [MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4, MCP-5] (Charo. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994, 91, 2752-2756, y Luster, New Eng. J. Med. 1998, 338, 436-445); CCR-3 (o "CKR-3" o "CC-CKR-3") [eotaxina-1, eotaxina-2, RANTES, MCP-3, MCP-4] (Combadiere, y col., J. Biol. Chem. 1995, 270, 16491-16494, y Luster, New Eng. J. Med. 1998, 338, 436-445); CCR-4 (o "CKR-4" o "CC-CKR-4") [TARC, MDC] (Power, y col., J. Biol. Chem. 1995, 270,19495-19500, y Luster, New Eng. J. Med. 1998, 338, 436-445); CCR-5 (o "CKR-5" o "CC-CKR-5") [MIP-1\alpha, RANTES. MIP-1\beta] (Sanson, y col., Biochemistry 1996, 35, 3362-3367); CCR-6 (o "CKR-6" o "CC-CKR-6") [LARC] (Baba, y col., J. Biol. Chem. 1997, 272, 14893-14898); CCR-7 (o "CKR-7" o "CC-CKR-7") [ELC] (Yoshie y col., J. Leukoc. Biol. 1997, 62, 634-644); CCR-8
(o "CKR-8" o "CC-CKR-8") [1-309] (Napolitano y col, J. Immunol, 1996, 157, 2759-2763); CCR-10 (o "CKR-10" o "CC-CKR-10") [MCP-1, MCP-3] (Bonini, y col., DNA y Cell Biol. 1997, 16, 1249-1256); y CCR-11 [MCP-1, MCP-2, y MCP-4] (Schweickert, y col., J. Biol. Chem. 2000, 275, 90550).
Además de los receptores de quimiocinas de mamíferos, los citomegalovirus de mamíferos, los herpesvirus y los poxvirus han mostrado que expresan, en células infectadas, proteínas con las propiedades de unión de los receptores de quimiocinas (revisado en: Wells y Schwartz, Curr. Opin. Biotech. 1997, 8, 741-748). Las quimiocinas CC humanas, tales como RANTES y MCP-3, pueden producir movilización rápida del calcio mediante estos receptores codificados viralmente. La expresión de receptores puede ser permisiva para la infección teniendo en cuenta la subversión de la supervivencia y la respuesta normal del sistema inmune frente a la infección. Adicionalmente, los receptores de quimiocinas humanos, tales como CXCR4, CCR2, CCR3, CCR5 y CCR8, pueden actuar como correceptores para la infección de células de mamíferos mediante microbios como con, por ejemplo, los virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).
Las quimiocinas y sus receptores afines se han implicado como mediadores importantes de los trastornos y enfermedades inflamatorios, infecciosos e inmunorreguladores, incluyendo el asma y las enfermedades alérgicas; así como patologías autoinmunes tales como artritis reumatoide y esclerosis múltiple y enfermedades metabólicas, tales como ateroesclerosis y diabetes (revisado en: Charo y Rasonhoff, New Eng. J. Med. 2006, 354, 610-621; Z. Gao y W. A. Metz, Chem. Rev. 2003, 103, 3733; P. H. Carter, Current Opinion in Chemical Biology, 2002, 6, 510; Trivedi, y col., Ann. Reports Med. Chem. 2000, 35, 191; Sanders y Tarby, Drug Disc. Today 1999, 4, 80; Premack y Schall, Nature Medicine 1996,2,1174). Por ejemplo, la quimiocina quimioatractante de monocitos 1 (MCP-1) y su Receptor 2 de Quimiocina CC (CCR-2) desempeñan una función esencial en la atracción de leucocitos a sitios de inflamación y en la posterior activación de estas células. Cuando la quimiocina MCP-1 se une a CCR-2, esto induce un rápido aumento en la concentración de calcio intracelular, expresión aumentada de moléculas de adhesión celular y la promoción de la migración de leucocitos. La demostración de la importancia de la interacción MCP-1/CCR-2 se ha proporcionado mediante experimentos con ratones modificados genéticamente. Los ratones MCP-1 -/- fueron incapaces de reclutar monocitos en sitios de inflamación después de varios tipos diferentes de desafíos inmunes (Bao Lu, y col., J. Exp. Med. 1998, 187, 601). De la misma manera, los ratones CCR-2-/ no fueron capaces de reclutar monocitos o producir interferón-\gamma cuando se les expuso a varios agentes exógenos; además, los leucocitos de ratones nulos para CCR-2 no migraron en respuesta a MCP-1 (Landin Boring, y col., J. Clin. Invest. 1997, 100, 2552), por tanto demostraron la especificidad de la interacción MCP-1/CCR-2. Otros dos grupos tuvieron resultados equivalentes indicados de manera independiente con diferentes cepas de ratones CCR-2 -/- (William A. Kuziel, y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997, 94, 12053, y Takao Kurihara, y col., J. Exp. Med. 1997, 186, 1757). La viabilidad y generalmente la salud normal de animales MCP-1 -/- y CCR-2 -/- es digna de mención, ya que la alteración de la interacción MCP-1/CCR2 no induce la crisis fisiológica. En conjunto, estos datos conducen a la conclusión de que las moléculas que bloquean las acciones de MCP-1/CCR2 serían útiles en el tratamiento de varios trastornos inflamatorios y autoinmunes (revisado en: M. Feria y F. Diaz-Gonzalez, Exp. Opin. Ther. Patents 2006, 16, 49; y J. Dawson. W. Miltz, y C. Wiessner, C. Exp. Opin. Ther. Targets 2003, 7, 35). Esta hipótesis no se ha validado en varios modelos de enfermedad animales diferentes, como se divulga posteriormente.
Se sabe que MCP-1 está sobreregulado en pacientes con artritis reumatoide (Alisa Koch, y col., J. Clin. Invest. 1992, 90, 772 - 779). Además, varios estudios preclínicos han demostrado en valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento de la artritis reumatoide. Una vacuna de ADN que codifica MCP-1 se mostró recientemente que mejoraba la artritis crónica inducida por poliadyuvantes en ratas (Sawsan Youssef, y col., J. Clin. Invest. 2000, 106, 361). De la misma manera, los síntomas de la enfermedad se podrían controlar mediante la administración directa de anticuerpos para MCP-1 para ratas con artritis inducida por colágeno (Hiroomi Ogata, y col., J. Pathol. 1997, 182, 106) o artritis inducida por la pared celular de estreptococos (Ralph C. Schimmer, y col., J. Immunol. 1998, 160, 1466). Quizás lo más significativo, un péptido antagonista de MCP-1, MCP-1 (9-76), mostró tanto prevenir el comienzo de la enfermedad como reducir los síntomas de la enfermedad (dependiendo del tiempo de administración) en el modelo de ratón MRL-lpr de artritis (Jiang-Hong Gong, y col., J. Exp. Med. 1997,186,131). Además se ha demostrado que la administración de pequeñas moléculas antagonistas de CCR2 redujo la puntuación clínica en modelos de roedores de artritis (C. M. Brodmerkel, y col., J. Immunol. 2005, 175, 5370 y M. Xia, y col., Solicitud de Patente de Estados Unidos 0069123, 2006). La administración de un anticuerpo anti-CCR2 tiene efectos variables en CIA murina, dependiendo del tiempo de administración (H. Bruhl, y col., J. Immunol. 2004, 172, 890). Estudios recientes con ratones CCR2 -/- han sugerido que la eliminación de CCR2 puede exacerbar los modelos de artritis de roedores en circunstancias experimentales específicas (M. P. Quinones, y col., J. Clin. Invest. 2004, 113, 856; M. P. Quinones, y col., J. Mol. Med. 2006, 84, 503).
Se sabe que MCP-1 está sobreregulado en lesiones ateroscleróticas, y se ha mostrado que los niveles circulantes de MCP-1 se reducen a través del tratamiento con agentes terapéuticos (Abdolreza Rezaie-Majd, y col., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2002, 22, 1194 -1199). Varios estudios claves han demostrado el valor terapéutico potencial de los antagonistas de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento de la ateroesclerosis. Por ejemplo, cuando los ratones MCP-1 -/- se cruzan con ratones deficientes en el receptor de LDL se observó una reducción del 83% en la deposición aórtica de lípidos (Long Gu, y col., Mol. Cell 1998, 2, 275). De manera similar, cuando MCP-1 se eliminó genéticamente de ratones que ya sobreexpresaban la apolipoproteína B humana, los ratones resultantes estaban protegidos frente a la formación de la lesión aterosclerótica en relación con ratones de control MCP-1 +/+ apoB (Jennifa Gosling, y col., J Clin. Invest. 1999, 103, 773). De la misma manera, cuando los ratones CCR-2 -/- se cruzan con ratones apolipoproteína E -/-, se observó un descenso significativo en la incidencia de lesiones ateroscleróticas (Landin Boring, y col., Nature 1998, 394, 894; T. C. Dawson, y col., Atherosclerosis 1999, 143, 205). Finalmente, cuando se administra a ratones apolipoproteína E -/- un gen que codifica un péptido antagonista de CCR2, entonces el tamaño de lesión se disminuye y la estabilidad de la placa aumenta (W. Ni, y col., Circulation 2001, 103, 2096 - 2101). El trasplante de médula ósea de ratones CCR2 -/- en ratones ApoE3-Leiden inhibió la aterogénesis temprana (J. Guo, y col., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2003, 23, 447), pero tuvo efectos mínimos en las lesiones avanzadas (J. Guo, y col., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2005, 25, 1014).
Los pacientes con diabetes mellitus de tipo 2 típicamente exhiben resistencia a la insulina como una de las características distintivas de la enfermedad. La resistencia a la insulina también se asocia con el agrupamiento de anormalidades conocidas como el "síndrome metabólico" o "síndrome X", que incluye obesidad, aterosclerosis, hipertensión y dislipidemia (revisado en: Eckel, y col., Lancet 2005, 365, 1415). Se reconoce ampliamente que la inflamación desempeña una función en la exacerbación del proceso de enfermedad en diabetes de tipo 2 y las patologías del "síndrome X" (revisado en: Chen, Pharmacological Research 2006, 53, 469; Neels y Olefsky, J. Clin. Invest. 2006, 116, 33; Danadona y Aljada, Am J Cardiol. 2002 90, 27G-33G; Pickup y Crook, Diabetologia 1998, 41, 1241). Se reconoce que MCP-1 desempeña una función en la resistencia a la insulina inducida por obesidad. En cultivo, los preadipocitos humanos expresaron constitutivamente MCP-1 (Gerhardt, Mol. Cell. Endocrinology 2001, 175, 81). El CCR2 se expresa en los adipocitos; la adición de MCP-1 a los adipocitos diferenciados in vitro disminuye el consumo de glucosa estimulado por insulina y la expresión de varios genes adipogénicos (LpL, adipsina, GLU-4), aP2, el receptor adrenérgico \beta3 y PPAR\gamma (P. Sartipy y D. Loskutoff, Proc. Natl. Acad. Sci USA 1999, 96, 6902). Los pacientes con diabetes de tipo 2 tuvieron mayores niveles de MCP-1 circulante que los controles no diabéticos (S. Nomura, y col., Clin. Exp. Immunol. 2000, 121, 437) y la liberación de MCP-1 del tejido adiposo se podría reducir mediante el tratamiento con terapias antidiabéticas tales como metformina o tiazolidinedionas (J. M. Bruun, y col., J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005, 90, 2282). De la misma manera, MCP-1 también se sobreexpresó en modelos experimentales murinos de obesidad y lo produjo de manera primaria el tejido adiposo (Sartipy y Loskutoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2003, 100, 7265). En ratones obesos, la expresión de MCP-1 tanto precedió como ocurrió concurrentemente con el comienzo de las resistencias a la insulina (H. Xu, y col., J. Clin. Invest. 2003, 112, 1821). Otro estudio mostró que la expresión de MCP-1 se correlacionaba positivamente con la masa corporal en el tejido adiposo perigonadal de ratones (Weisberg, y col., J. Clin. Invest. 2003, 112, 1796). Coherente con estos datos, el desarrollo de la resistencia a insulina en ratones db/db mejoró mediante la eliminación genética de MCP- 1 o mediante la expresión inducida por genes de un péptido negativo dominante (H. Kanda, y col., J. Clin. Invest. 2006, 116, 1494). La lógica inversa también se podría demostrar: la sobreexpresión de MCP-1 en el tejido adiposo promovió la resistencia a insulina (N. Kamei, y col., J. Biol. Chem. 2006, 281, 26602). También ha aparecido un resultado conflictivo que muestra que la eliminación genética de MCP-1 no afecta a la resistencia a insulina en el ratón db/db (F. Y. Chow, y col., Diabetologia 2007, 50, 471). Coherente con el dato de MCP-1, los estudios directos con CCR2 (el receptor de MCP-1) han mostrado que desempeña una función en la formación de obesidad y en la resistencia a insulina inducida por obesidad. El mantenimiento de una dieta rica en grasas aumentó los números de monocitos inflamatorios CCR2^{+} circulantes tanto en ratones de tipo silvestre (C. L. Tsou, y col., J. Clin. Invest. 2007, 117, 902) como en ratones ApoE^{-/-} (F. Tacke, y col., J. Clin. Invest. 2007, 117, 185). La eliminación genética de CCR2 redujo los números de los macrófagos activados en tejido adiposo murino (C. N. Lumeng, y col., Diabetes 2007, 56, 16), pero no afectó a la población de macrófagos adiposos M2 que se cree que mantienen el estado "delgado" (C. N. Lumeng, y col., J. Clin. Invest. 2007,117,175). La eliminación genética de CCR2 redujo la obesidad inducida por la dieta y mejoró la sensibilidad a insulina en el modelo de obesidad inducida por la dieta (S. P. Weisberg, y col., J. Clin. Invest. 2006, 116, 115; P Cornelius, RP Gladue, RS Sebastian, patente Nº WO 2006/013427 A2), 2006), dependiendo de las condiciones experimentales (A. Chen, y col., Obes. Res. 2005, 13, 1311). La administración de pequeñas moléculas antagonistas de CCR2 también mejoró la sensibilidad a insulina en este mismo modelo (S. P. Weisberg, y col., J. Clin. Invest. 2006, 116, 115).
Dos estudios describieron la importante función de CCR2 en la inflamación vascular inducida por hipertensión, remodelación e hipertrofia (E Bush y col., Hypertension 2000, 36, 360; M Ishibashi, y col., Circ. Res. 2004, 94,
1203).
Se sabe que MCP-1 está sobreregulado en la esclerosis múltiple humana, y ha mostrado que la terapia eficaz con interferón \beta-1b reduce la expresión de MCP-1 en las células mononucleares de sangre periférica, lo que sugiere que MCP-1 desempeña una función en el progreso de la enfermedad (Carla larlori, y col., J. Neuroimmunol. 2002,123,170 -179). Otros estudios han demostrado el valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR-2 en el tratamiento de la esclerosis múltiple; todos estos estudios se han demostrado en encefalomielitis autoinmune experimental (EAE), el modelo animal convencional para la esclerosis múltiple. La administración de anticuerpos para MCP-1 para animales con EAE disminuyó significativamente la recaída de la enfermedad (K. J. Kennedy, y col., J. Neuroimmunol. 1998, 92, 98). Además, dos informes han mostrado que los ratones CCR-2-/- son resistentes a EAE (B. T. Fife, y col., J. Exp. Med. 2000,192,899; L. Izikson, y col., J. Exp. Med. 2000,192,1075). Un informe posterior extendió estas observaciones iniciales examinando los efectos de la eliminación de CCR2 en ratones de diferentes cepas (S. Gaupp, y col., Am. J. Pathol. 2003, 162, 139). Notablemente, la administración de pequeñas moléculas antagonistas de CCR2 también mitigó el progreso de la enfermedad en ratones C57BL/6 (C. M. Brodmerkel, y col., J. Immunol. 2005, 175, 5370).
Se sabe que MCP-1 está sobreregulado en pacientes que desarrollan el síndrome de la bronquiolitis obliterante después del trasplante de pulmón (Martine Reynaud-Gaubert, y col., J. of Heart y Lung Transplant., 2002, 21, 721-730; John Belperio, y col., J. Clin. Invest. 2001, 108, 547-556). En un modelo murino del síndrome de la bronquiolitis obliterante, la administración de un anticuerpo frente a MCP-1 condujo a la atenuación de la obliteración de las vías respiratorias; de la misma manera, los ratones CCR2 -/- fueron resistentes a la obliteración de las vías respiratorias en este mismo modelo (John Belperio, y col., J. Clin. Invest. 2001, 108, 547-556). Estos datos sugieren que el antagonismo de MCP-1/CCR2 puede ser beneficioso en el tratamiento del rechazo de órganos después del trasplante. Además, los estudios han mostrado que la alteración del eje MCP-1/CCR2 fue capaz de prolongar la supervivencia del trasplante de isletas (I Lee y col., J. Immunol 2003, 171, 6929; R Abdi y col., J Immunol 2004,172, 767). En modelos de injerto en ratas, CCR2 y MCP-1 mostraron que estaban aumentados en injertos que desarrollan vasculopatía de injerto (K Horiguchi y col., J Heart Lung Transplant. 2002, 21, 1090). En otro estudio, la terapia génica anti-MCP-1 atenuó la vasculopatía de injerto (A Saiura y col., Artherioscler Thromb Vase Biol 2004, 24, 1886). Un estudio describió la inhibición de formación neointimal de injerto venoso mediante el bloqueo de MCP-1 (H Tatewaki y col., J Vasc Surg. 2007, 45, 1236).
Otros estudios han demostrado el valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento del asma. El secuestro de MCP-1 con un anticuerpo neutralizante en ratones expuestos a ovoalbúmina dio como resultado una disminución notable en la hiperresponsibidad e inflamación bronquial (Jose-Angel Gonzalo, y col., J. Exp. Med. 1998,188,157). Esto probó que era posible reducir la inflamación de las vías respiratorias alérgica en ratones expuestos a huevos de Schistosoma mansoni a través de la administración de anticuerpos contra MCP-1 (Nicholas W. Lukacs, y col., J. Immunol. 1997, 158, 4398). Coherente con esto, los ratones MCP-1 -/- presentaron una respuesta reducida a la exposición a huevos de Schistosoma mansoni (Bao Lu, y col., J. Exp. Med. 1998, 187, 601).
Otros estudios han demostrado que valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento de la enfermedad renal. La administración de anticuerpos contra MCP-1 en un modelo murino de glomerulonefritis dio como resultado una disminución notable de la formación de la media luna glomerular y la deposición del colágeno de tipo I (Clare M. Lloyd, y col., J. Exp. Med. 1997, 185, 1371). Además, los ratones MCP-1 -/- con nefritis por suero nefrotóxico inducida mostraron un daño tubular significativamente menor que sus equivalentes MCP-1+/+ (Gregory H. Tesch. y col., J. Clin. Invest. 1999, 103, 73).
Varios estudios han demostrado el valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento del lupus sistémico eritematoso. Los ratones CCR2 -/- exhibieron supervivencia prolongada y enfermedad renal reducida en relación con sus equivalentes TS en un modelo murino de lupus sistémico eritematoso (G. Perez de Lema, y col., J. Am. Soc. Neph. 2005, 16, 3592). Estos datos son coherentes con la actividad modificadora de la enfermedad encontrada en estudios recientes en la eliminación genética de MCP-1 (S. Shimizu, y col., Rheumatology (Oxford) 2004, 43, 1121; Gregory H. Tesch, y col., J. Exp. Med. 1999, 190, 1813) o la administración de un péptido antagonista de CCR2 (H. Hasegawa, y col., Arthritis & Rheumatism 2003, 48, 2555) en modelos de roedores de
lupus.
Un aumento notable de 30 veces en linfocitos de la lámina propia CCR2+ se observó en los intestinos delgados de pacientes de Crohn en relación con íleos no enfermos (S. J. Connor, y col., Gut 2004, 53, 1287). También cabe destacar, que había una expansión en el subconjunto de monocitos CCR2^{+}/CD14^{+}/CD56^{+} circulantes en pacientes con enfermedad de Crohn activa en relación con los controles. Varios estudios de roedores han demostrado el valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento de la enfermedad de Crohn/colitis. Se protegieron los ratones CCR-2^{-/-} de los efectos de la colitis inducida por sulfato de dextrano sódico (Pietro G. Andres, y col., J. Immunol. 2000, 164, 6303). La administración de pequeñas moléculas antagonistas de CCR2, CCR5 y CXCR3 (afinidades de unión murinas = 24, 236 y 369 nM, respectivamente) también protegidas frente a la colitis inducida por sulfato de dextrano sódico (H. Tokuyama, y col., Int. Immunol. 2005, 17, 1023). Finalmente, los ratones MCP-1 -/- mostraron daño colónico sustancialmente reducido (tanto macroscópico como histológico) en un modelo de colitis inducida por haptenos (W. I. Khan, y col., Ant. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2006, 291, G803).
Dos informes describieron la sobreexpresión de MCP-1 en las células epiteliales intestinales y la mucosa de intestino de pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino (H. C. Reinecker, y col., Gastroenterology 1995, 108, 40, y Michael C. Grimm, y col., J. Leukoc. Biol. 1996, 59, 804).
Un estudio describió la asociación del polimorfismo de promotores en el gen MCP-1 con esclerodermia (esclerosis sistémica) (S Karrery col., J Invest Dermatol. 2005,124, 92). En modelos relacionados de fibrosis de tejidos, la inhibición del eje CCR2/MCP-1 redujo la fibrosis en la piel (T Yamamoto y K Nishioka, J Invest Dermatol 2003, 121, 510; AM Ferreira y col., J Invest Dermatol. 2006, 126, 1900), pulmón (T Okuma y col., J Pathol. 2004, 204, 594; M Gharaee-Kermani y col., Cytokine 2003, 24, 266), riñón (K Kitagawa y col., Am J Patho/. 2004, 165, 237; T Wada y col., J Am Soc Nephrol 2004, 15, 940), corazón (S Hayashidani y col., Circulation 2003,108, 2134) e hígado (S Tsuruta y col., Int J Mol Med. 2004,14, 837).
Un estudio ha demostrado el valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento de la alveolitis. Cuando las ratas con daño pulmonar de los complejos inmunes de IgA se trataron por vía intravenosa con anticuerpos desarrollados contra MCP-1 de rata (JE), los síntomas de la alveolitis se aliviaron parcialmente (Michael L. Jones, y col., J. Immunol. 1992, 149, 2147).
Varios estudios han mostrado el valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento contra el cáncer (revisado en: M. J. Craig y R. D. Loberg, Cancer Metastasis Rev. 2006, 25, 611; I. Conti y B. Rollins, Seminars in Cancer Biology. 2004, 14, 149; R. Giles y R. D. Loberg, Curr. Cancer Drug Targets 2006, 6, 659). Cuando los ratones inmunodeficientes que portaban células de carcinoma de mama humano se trataron con un anticuerpo anti-MCP-1, se observaron la inhibición de la micrometástasis de pulmón e incrementos de la supervivencia (Rosalba Salcedo, y col., Blood 2000, 96, 34-40). Usando especimenes clínicos de tumores humanos, la expresión de CCR2 se asoció con la progresión del cáncer de próstata (Y. Lu. y col., J. Cell. Biochem. 2007, 101, 676). In vitro, se ha mostrado que la expresión de MCP-1 media el crecimiento e invasión celular del cáncer de próstata (Y. Lu, y col., Prostate 2006, 66, 1311); además, el MCP-1 expresado por células cancerosas prostáticas indujo progenitores de médula ósea humana para la resorción ósea (Y. Lu, y col., Cancer Res. 2007, 67, 3646).
Múltiples estudios han descrito el valor terapéutico potencial del antagonismo de la interacción MCP-1/CCR2 en el tratamiento de la reestenosis. En seres humanos, los niveles de MCP-1 se relacionan directamente con el riesgo de reestenosis (F. Cipollone. y col., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2001, 21, 327). Los ratones deficientes en CCR2 o en MCP-1 mostraron reducciones en el área íntima y en el porcentaje de íntima/media (en relación con camadas silvestres) después de daño arterial (Merce Roque, y col., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2002, 22, 554; A. Schober, y col., Circ. Res. 2004, 95, 1125; W. J. Kim, y col., Biochem Biophys Res Commun. 2003, 310, 936). En ratones, la transfección de un inhibidor negativo dominante de MCP-1 en el músculo esquelético (K. Egashira, y col., Circ. Res. 2002, 90,1167) también redujo la hiperplasia intimal después de un daño arterial. El bloqueo de CCR2 usando un anticuerpo neutralizante redujo la hiperplasia neointimal después de la colocación de endoprótesis vasculares en primates (C. Horvath, y col., Circ. Res. 2002, 90, 488).
Dos informes divulgan la sobreexpresión de ratas MCP-1 con trauma cerebral inducido (J. S. King, y col., J. Neuroimmunol. 1994, 56, 127, y Joan W. Berman, y col., J. Immunol. 1996, 156, 3017). Además, los estudios han mostrado que tanto los ratones CCR2 -/- (O. B. Dimitrijevic, y col., Stroke 2007, 38, 1345) como los 
\hbox{MCP-1 -/-}
(P. M. Hughes, y col., J. Cereb. Blood Flow Metab. 2002, 22, 308) están protegidos parcialmente del daño por isquemia/reperfusión.
Se sabe que los monocitos/macrófagos desempeñan una función importante en el desarrollo del dolor neuropático (Liu T, van Rooijen N, Tracey DJ, Pain 2000, 86, 25). Coherente con este concepto, una función potencial para CCR2 en el tratamiento de tanto el dolor inflamatorio como el neuropático se ha descrito recientemente. Los ratones CCR2 -/- mostraron respuestas alteradas al dolor inflamatorio en relación con sus equivalentes TS, incluyendo el comportamiento de dolor reducido después de la inyección intraplantar de formalina y la alodinia mecánica ligeramente reducida después de la inyección intraplantar de CFA (C. Abbadie, y col., Proc. Natl. Acad. Sci., USA 2003, 100, 7947). Además, los ratones CCR2 -/- no presentaron alodinia mecánica significativa después del daño en el nervio ciático. De la misma manera, una pequeña molécula antagonista de CCR2 redujo la alodinia mecánica al \sim80% de los niveles previos al daño después de la administración oral (C. Abbadie, J. A. Lindia, y H. Wang, documento WO PCT 110376, 2004).
Un estudio describió la función crítica de MCP-1 en la cardiomiopatía isquémica (N. G. Frangogiannis, y col., Circulation 2007, 115, 584). Otros estudio describió la atenuación del fallo cardiaco experimental después de la inhibición de MCP-1 (S Hayashidani y col., Circulation 2003, 108, 2134).
Otros estudios han proporcionado pruebas de que MCP-1 se sobreexpresa en varios estados de enfermedad que no se mencionan anteriormente. Estos informes proporcionan pruebas correlativas de que los antagonistas de MCP-1 podrían ser terapias útiles para tales enfermedades. Otro estudio ha demostrado la sobreexpresión de MCP-1 en aloinjertos cardiacos en roedores, lo que sugiere una función para MCP-1 en la patogénesis de la arteriosclerosis del trasplante (Mary E. Russell, y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90, 6086). Se ha destacado la sobreexpresión de MCP-1 en las células endoteliales pulmonares de pacientes con fibrosis pulmonar idiopática (Harry N. Antoniades, y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992, 89, 5371). De manera similar, la sobreexpresión de MCP-1 se ha sido destacado en la piel de pacientes con psoriasis (M. Deleuran, y col., J. Dermatol. Sci. 1996, 13, 228 y R. Gillitzer, y col., J. Invest. Dermatol. 1993, 101, 127); los hallazgos correlativos con predominancia de células CCR2+ también se han notificado (C. Vestergaard. y col., Acta Derm. Venerol. 2004, 84, 353). Finalmente, un informe reciente ha mostrado que MCP-1 se sobreexpresa en los cerebros y fluido cerebroespinal de pacientes con demencia asociada al VIH-1 (Alfredo Garzino-Demo, documento Nº WO 99/46991).
Además, se ha mostrado que el polimorfismo de CCR2 está asociado con la sarcoidosis al menos un subconjunto de pacientes (P. Spagnolo, y col., Am JRespir Crit Care Med. 2003, 168, 1162).
También debe destacarse que se ha implicado a CCR-2 como un correceptor para algunas cepas de VIH (B. J. Doranz, y col., Cell 1996, 85, 1149). También se ha determinado que el uso de CCR-2 como un correceptor de VIH puede relacionarse con el progreso de la enfermedad (Ruth I. Connor, y col., J. Exp. Med 1997, 185, 621). Este hallazgo es coherente con el hallazgo reciente de que la presencia de un mutante de CCR-2, CCR2-641, se relaciona positivamente con el comienzo tardío de VIH en la población humana (Michael W. Smith, y col., Science 1997, 277, 959). Aunque no se ha implicado a MCP-1 en estos procedimientos, puede ser que los antagonistas de MCP-1 que actúan mediante la unión a CCR-2 puedan tener efectos terapéuticos beneficiosos en el retraso del progreso de la enfermedad a SIDA en pacientes infectados por VIH.
Debe destacarse que CCR2 también es el receptor para las quimiocinas humanas MCP-2, MCP-3 y MCP-4 (Luster, New Eng. J. Med. 1998, 338, 436-445). Puesto que los nuevos compuestos de fórmula (I) descritos en este documento antagonizan con MCP-1 uniéndose al receptor CCR-2, puede ser que estos compuestos de fórmula (I) también sean antagonistas eficaces de las acciones de MCP-2, MCP-3 y MCP-4 mediados por CCR-2. Por consiguiente, cuando se hace referencia en este documento a "antagonismo de MCP-1", debe asumirse que es equivalente a "antagonistas de la estimulación por quimiocinas de CCR-2".
Por consiguiente, los compuestos que modulan la actividad de las quimiocinas podrían demostrar una amplia gama de utilidades en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, alérgicas, autoinmunes, metabólicas, cancerosas y/o cardiovasculares. La Publicación de la Solicitud de Patente de Estados Unidos WO2005021500 A1 (incorporada en este documento por referencia y asignada al presente solicitante) divulga compuestos que modulan la actividad de MCP-1, MCP-2, MCP-3 y MCP-4 mediante CCR2. La referencia también divulga distintos procedimientos para preparar estos compuestos incluyendo síntesis multietapa que incluye la introducción y la posterior retirada de grupos protectores.
Se desea encontrar nuevos compuestos con características farmacológicas mejoradas comparados con los moduladores de quimiocinas conocidos. Por ejemplo, se desea encontrar nuevos compuestos con la actividad inhibidora de CCR-2 y selectividad para CCR-2 mejoradas frente a otros receptores acoplados a proteína G (es decir el receptor 5HT2A). También se desea encontrar compuestos con características ventajosas y mejoradas en una o más de las siguientes categorías:
(a)
propiedades farmacéuticas (es decir solubilidad, permeabilidad, posibilidad de formulaciones de liberación sostenida);
(b)
requerimientos de dosificación (por ejemplo, dosis bajas y/o dosificación una vez por día);
(c)
factores que disminuyan las características pico a valle de la concentración sanguínea (es decir la eliminación y/o volumen de distribución);
(d)
factores que aumentan la concentración de fármaco activo en el receptor (es decir unión de proteínas, volumen de distribución);
(e)
Factores que disminuyen el inconveniente de las interacciones clínicas fármaco-fármaco (inhibición de la enzima del citocromo P450 o inducción, tales como inhibición de CYP 2D6, véase G. K. Dresser, J. D. Spence. D. G. Bailey, Clin. Pharmacokinet. 2000, 38, 41-57, que se incorpora en este documento por referencia);
(f)
factores que disminuyen el potencial para los efectos secundarios adversos (por ejemplo la selectividad farmacológica más allá de los receptores acoplados a proteínas G, la reactividad potencial química o metabólica, la penetración limitada del SNC, la selectividad del canal iónico). Es especialmente deseable encontrar compuestos que tienen una combinación deseable de las características farmacológicas anteriormente mencionadas.
\vskip1.000000\baselineskip
Sumario de la invención
La presente invención proporciona un antagonista nuevo o un agonista parcial/antagonista parcial de la actividad del receptor de MCP-1: N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, que tiene una combinación no esperada de características farmacológicas deseables. Las formas cristalinas de la presente invención también se proporcionan. Las composiciones farmacéuticas que contienen las mismas o las mismas para su uso como agentes para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, alérgicas, autoinmunes, metabólicas, cancerosas y/o cardiovasculares son también un objetivo de la presente invención.
La presente divulgación también proporciona el uso de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias, alérgicas, autoinmunes, metabólicas, cancerosas y/o enfermedades cardiovasculares.
\vskip1.000000\baselineskip
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 divulga los patrones de polvo experimentales y simulados de N-((1R,2S,SR)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, sal del ácido di-bencenosulfónico Forma N-1.
La Figura 2 divulga los patrones de polvo experimentales y simulados de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre Forma N-2.
La Figura 3 divulga los patrones de polvo experimentales y simulados de N-((1 R,2S,SR)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre (mono-etanolato) Forma E-1.
La Figura 4 divulga los patrones de polvo experimentales y simulados de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, sal de HCl (tetrahidrato) Forma H4-1.
La Figura 5 divulga los patrones de polvo experimentales y simulados de N-((1R,2S,SR)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre Forma A-1 (solvato mono-acetona).
La Figura 6 divulga los patrones de polvo experimentales y simulados de N-((1R,2S,SR)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre (solvato mono-diclorometano) Forma DC-1.
La Figura 7 divulga los patrones de polvo experimentales y simulados de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre (solvato monoacetonitrilo) Forma AN-3.
La Figura 8 divulga el análisis por calorimetría diferencial de barrido del N-((1R,2S,SR)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, sal di-besilato Forma
N-1.
La Figura 9 divulga el análisis termogravimétrico de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, sal di-besilato Forma N-1.
\newpage
La Figura 10 divulga el análisis por calorimetría diferencial de barrido de N-((1 R,2S,SR)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre Forma
N-2.
La Figura 11 divulga el análisis termogravimétrico de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre Forma N-2.
La Figura 12 divulga la isoterma de absorción de humedad de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre Forma N-2.
La Figura 13 divulga una estructura de cristal de rayos X de (1R,3R,4S)-3-acetamido-4-((S)-3-(benciloxicarbonila-
mino)-2-oxopirrolidin-1-il)ciclohexilcarbamato de terc-butilo.
Figura 14. Modelo de peritonitis por TG de 4R horas en ratones hCCR2 Kl: Ejemplo 1 de la inhibición de la infiltración de monocitos/macrófagos en la cavidad peritoneal (recuento celular diferencial).
Figura 15. Modelo de peritonitis por TG de 48 horas en ratones hCCR2 KI: Ejemplo 1 de la inhibición de la infiltración de monocitos/macrófagos en la cavidad peritoneal (análisis FACS).
Figura 16. EAE en ratones hCCR2 Kl: puntuación clínica del tratamiento del Ejemplo 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Descripción detallada
La presente invención proporciona un nuevo antagonista o un agonista parcial/antagonista parcial de la actividad del receptor de MCP-1: N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, que tiene una combinación inesperada de características farmacológicas deseables. Las formas cristalinas de la presente invención también se proporcionan. Las composiciones farmacéuticas que contienen las mismas y las mismas para su uso como agentes para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, alérgicas, autoinmunes, metabólicas, cancerosas y/o enfermedades cardiovasculares también son un objetivo de la presente invención.
La N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, demuestra de manera inesperada una combinación deseable de características farmacológicas incluyendo un grado sorprendentemente alto de biodisponibilidad oral en combinación con indicaciones de que es altamente eficaz y tiene excelentes criterios de seguridad.
Los moduladores conocidos de receptores CCR2, tales como aquellos descritos en la publicación de patente WO2005021500 A1 publicada el 10 de marzo, 2005 (Patente de Estados Unidos Nº 7.163.937, emitida el 16 de enero, 2007, asignada al presente Solicitante) que demuestran un grado adecuado de permeabilidad de membrana (un factor crítico para la biodisponibilidad oral), no son suficientemente eficaces, como se mide mediante su capacidad de unión a CCR2 (una medida de eficacia) y/o su carencia de criterios adecuados de seguridad como se indica mediante la selectividad de canales iónicos como se mide mediante los estudios de canales iónicos hERG y Na+.
Por el contrario, como se ilustra mediante los datos presentados en el presente documento en la sección denominada "Características Farmacológicas Comparativas", posteriormente, la molécula relativamente polar, N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida demuestra un grado sorprendentemente alto de permeabilidad de membrana y a pesar de todo todavía mantiene la potente capacidad de unión a CCR2 junto con la excelente selectividad de los canales iónicos.
Por consiguiente, la presente invención proporciona un nuevo modulador de quimiocinas que tiene características farmacológicas mejoradas y que se espera que sea útil en el tratamiento de las enfermedades inflamatorias, alérgicas, autoinmunes, metabólicas, cancerosas y cardiovasculares.
\vskip1.000000\baselineskip
Realizaciones
En una realización, la descripción se refiere a N-((1R,2S,SR)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(tri-
fluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida y sales farmacéuticamente aceptables de la misma.
Otra realización es una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluoro-
metil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre.
Otra realización es una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluoro-
metil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre, comprendiendo dicha forma cristalina la Forma N-2.
Otra realización es la Forma N-2 caracterizada por (o que tiene) parámetros de celdilla unitaria sustancialmente iguales a los siguientes:
Dimensiones celulares:
a = 11,8427(3)
b = 18,1503(7)
c = 12,7923(4)
\alpha = 90
\beta = 105,362(2)
\gamma = 90
Grupo espaciador P2_{1}
Moléculas/celdilla unitaria 2
en la que dicho cristal está a una temperatura de aproximadamente +22ºC (TA).
Otra realización es la Forma N-2 caracterizada por (o que tiene) un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende tres o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados entre 7,2, 8,7, 9,7, 12,5, 12,8, 13,3, 16,0, 16,6, 18,2 y 18,8 a una temperatura de aproximadamente 22ºC.
Otra realización es la Forma N-2 caracterizada por (o que tiene) un patrón de difracción de rayos X en polvo que además comprende cuatro o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados entre el grupo constituido por 7,2, 8,7, 9,7, 12,5, 12,8, 13,3, 16,0, 16,6, 18,2 y 18,8 a una temperatura de aproximadamente 22ºC.
Otra realización es la Forma N-2 caracterizada por (o que tiene) unas coordenadas atómicas fraccionarias sustancialmente como se enumera en la Tabla 7.
Otra realización es la Forma N-2 caracterizada por (o que tiene) un patón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente de acuerdo con la Figura 2.
Otra realización es una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(tri-fluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, sal del ácido di-bencenosulfónico, que comprende la Forma N-1, caracterizada por los parámetros de celdilla unitaria que se encuentran en la Tabla 1; 3 ó 4 o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados de la Tabla 10; coordenadas atómicas fraccionarias sustancialmente como se enumeran en la Tabla 2 y/o un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente de acuerdo con la Figura 1.
Otra realización es una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluoro-
metil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre, que comprende la Forma E-1 (mono-etanolato), caracterizada por los parámetros de celdilla unitaria que se encuentran en la Tabla 1; 3 ó 4 o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados de la Tabla 10; coordenadas atómicas fraccionarias sustancialmente como se enumeran en la Tabla 5, y/o un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente de acuerdo con la Figura 3.
Otra realización es una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(tri-fluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, sal HCl, que comprende la Forma H4-1 (tetrahidrato), caracterizada por los parámetros de celdilla unitaria que se encuentran en la Tabla 1; 3 ó 4 o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados de la Tabla 10; coordenadas atómicas fraccionarias sustancialmente como se enumeran en la Tabla 9 y/o un patrón de difracción de rayos X en polvo de acuerdo con la Figura 4.
Otra realización son patrones de la forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre, que comprende la Forma A-1 (disolvente mono-acetona), caracterizada por los parámetros de celdilla unitaria que se encuentran en la Tabla 1; 3 ó 4 o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados de la Tabla 10; coordenadas atómicas fraccionarias sustancialmente como se enumeran en la Tabla 6 y/o un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente de acuerdo con la Figura 5.
Otra realización es una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(tri-fluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre, que comprende la Forma DC-1 (disolvente mono-diclorometano), caracterizada por los parámetros de celdilla unitaria que se encuentran en la Tabla 1; 3 ó 4 o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados de la Tabla 10; coordenadas atómicas fraccionarias sustancialmente como se enumeran en la Tabla 3 y/o un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente de acuerdo con la Figura 6.
Otra realización es una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(tri-fluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre que comprende la Forma AN-3 (disolvente mono-acetonitrilo), caracterizada por los parámetros de celdilla unitaria que se encuentran en la Tabla 1; 3 ó 4 o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados de la Tabla 10; coordenadas atómicas fraccionarias como se enumeran en la Tabla 8 y/o un patrón de difracción de rayos X en polvo sustancialmente de acuerdo con la Figura 7.
Otra realización es una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(tri-fluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre que comprende la Forma THOO-1 (disolvente mono-tetrahidrofurano), caracterizada por los parámetros de celdilla unitaria que se encuentran en la Tabla 1; 3 ó 4 o más de los valores 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionados de la Tabla 10; y/o coordenadas atómicas fraccionarias sustancialmente como se enumera en la Tabla 4.
Otra realización es una composición farmacéutica, que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de los Ejemplos.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de trastornos seleccionados de la diabetes, obesidad, síndrome metabólico, accidente cerebrovascular, dolor neuropático, cardiomiopatía isquémica, psoriasis, hipertensión, esclerodermia, osteoartritis, aneurisma, fiebre, enfermedad cardiovascular, enfermedad de Crohn, fallo cardiaco congestivo, enfermedades autoinmunes, infección por VIH, demencia asociada al VIH, psoriasis, fibrosis pulmonar idiopática, arteriosclerosis del trasplante, trauma cerebral inducido físicamente o químicamente, enfermedad inflamatoria del intestino, alveolitis, colitis, lupus sistémico eritematoso, nefritis por suero neurotóxico, glomerulonefritis, asma, esclerosis múltiple, ateroesclerosis, vasculitis, placas vulnerables, artritis reumatoide, reestenosis, hiperplasia neointimal venosa, hiperplasia neointimal de inserción de diá-
lisis, hiperplasia intimal de derivación arteriovenosa, trasplante de órganos, nefropatía crónica de aloinjertos y cáncer.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de trastornos seleccionados de diabetes, obesidad, enfermedad de Crohn, psoriasis, fibrosis pulmonar idiopática, arteriosclerosis del trasplante, trauma cerebral inducido físicamente o químicamente, enfermedad inflamatoria del intestino, alveolitis, colitis, lupus sistémico eritematoso, nefritis por suero nefrotóxico, glomerulonefritis, asma, esclerosis múltiple, ateroesclerosis y artritis reumatoide, reestenosis, trasplante de órganos y cáncer.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de trastornos seleccionados de diabetes, obesidad, enfermedad de Crohn, lupus sistémico eritematoso, glomerulonefritis, esclerosis múltiple, ateroesclerosis, reestenosis y trasplante de órganos.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de trastornos seleccionados de esclerosis múltiple, ateroesclerosis, enfermedad de Crohn y diabetes.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de trastornos seleccionados de reestenosis, trasplante de órganos y cáncer.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de la diabetes.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Crohn.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de la esclerosis múltiple.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de la ateroesclerosis.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de los Ejemplos para su uso en el tratamiento de la reestenosis.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto del Ejemplo 1 para su uso en el tratamiento del trasplante de órganos.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto del Ejemplo 1 para su uso en el tratamiento contra el cáncer.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto del Ejemplo 1 para su uso en el tratamiento del cáncer, en el que el cáncer se selecciona del cáncer de mama, cáncer hepático, cáncer prostático y melanoma.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto del Ejemplo 1 para su uso en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, alérgicas, autoinmunes, metabólicas, cancerosas y/o enfermedades cardiovasculares.
Otra realización es una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto del Ejemplo 1 para su uso en el tratamiento de enfermedades que están parcialmente mediadas por CCR-2.
Otra realización es un compuesto del Ejemplo 1 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes, obesidad, síndrome metabólico, accidente cerebrovascular, dolor neuropático, cardiomiopatía isquémica, psoriasis, hipertensión, esclerodermia, osteoartritis, aneurisma, fiebre, enfermedad cardiovascular, enfermedad de Crohn, fallo cardiaco congestivo, enfermedades autoinmunes, infección por VIH, demencia asociada al VIH, psoriasis, fibrosis pulmonar idiopática, arteriosclerosis del trasplante, trauma cerebral inducido físicamente o químicamente, enfermedad inflamatoria del intestino, alveolitis, colitis, lupus sistémico eritematoso, nefritis por suero nefrotóxico, glomerulonefritis, asma, esclerosis múltiple, ateroesclerosis, vasculitis, placas vulnerables, artritis reumatoide, reestenosis, hiperplasia neointimal venosa, hiperplasia neointimal de inserción de diálisis, hiperplasia intimal de derivación arteriovenosa, trasplante de órganos, nefropatía crónica de aloinjerto y cáncer.
Otra realización es un compuesto de los Ejemplos para su uso en la terapia.
La invención puede estar contenida en otras formas específicas sin alejarse del espíritu o los atributos esenciales de la misma. La presente invención también abarca todas las combinaciones de aspectos alternativos y realizaciones de la invención indicados en este documento. Se entiende que cualquiera y todas las realizaciones pueden tomarse junto con cualquier otra realización para describir realizaciones adicionales de la presente invención. Además, se pretende que cualquier elemento de una realización se combine con cualquier y con todos los otros elementos a partir de cualquiera de la realizaciones para describir realizaciones adicionales.
\vskip1.000000\baselineskip
Definiciones
Las siguientes son definiciones de términos usados en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas. La definición inicial proporcionada para un grupo o término en este documento, se aplica a ese grupo o término a través de la memoria descriptiva y reivindicaciones, individualmente o como parte de otro grupo, a no ser que se especifique lo contrario.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" se emplea en este documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que están, dentro del ámbito del buen juicio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de los seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problemas o complicaciones, correspondientes a un porcentaje de beneficio/riesgo razonable.
Como se usa en el presente documento, "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a derivados de los compuestos descritos en los que el compuesto parental se modifica mediante la preparación de sales ácidas o básicas de la misma. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales ácidas minerales u orgánicas de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas o sales orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del compuesto parental formado, por ejemplo, a partir de ácidos no tóxicos inorgánicos u orgánicos. Por ejemplo, tales sales convencionales no tóxicas incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídricos, benceno sulfónicos, bromhídricos, sulfúricos, sulfámicos, fosfóricos, nítricos y similares y la sales preparadas de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etano disulfónico, oxálico, isetiónico, y similares.
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden sintetizar a partir del compuesto parental que contiene un resto básico o ácido mediante procedimientos químicos convencionales. Generalmente, tales sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas ácidas o básicas libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base apropiada o el ácido en agua o un disolvente inorgánico o en una mezcla de los dos; generalmente, un medio no acuoso como éter, etil acetato, etanol, isopropanol o acetonitrilo se prefieren. Las listas de sales adecuadas se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, ed. 17ª, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, pág. 1418, cuya descripción se incorpora en este documento por referencia.
"Compuesto estable" y "estructura estable" pretenden indicar un compuesto que es suficientemente resistente para sobrevivir al aislamiento a un grado útil de pureza de una mezcla de reacción y a la formulación en un agente terapéutico eficaz. La presente invención pretende contener compuestos estables.
"Cantidad terapéuticamente efectiva" pretende incluir una cantidad de un compuesto de la presente invención sola o una cantidad de la combinación de compuestos reivindicada o una cantidad de un compuesto de la presente invención en combinación con otros principios activos eficaces para inhibir MCP-1 o eficaces para tratar o prevenir trastornos como se analiza en este documento.
Como se usa en el presente documento, "tratar" o "tratamiento" cubre un tratamiento de un estado de enfermedad en un mamífero, particularmente en un ser humano e incluye: (a) la prevención de el estado de enfermedad de producirse en un mamífero, en particular, cuando dicho mamífero está predispuesto al estado de enfermedad pero todavía no se ha diagnosticado que la tiene; (b) la inhibición del estado de enfermedad, es decir, la detención de su desarrollo y/o (c) el alivio del estado de la enfermedad, es decir, produciendo la regresión del estado de enfermedad.
Los nombres que se usan en la presente memoria para denominar una forma específica, por ejemplo, "N-2", no deben considerarse limitantes con respecto a otra sustancia cualquiera que posea características física y químicas similares o idénticas, sino más bien debe entenderse que estas denominaciones son meros identificadores que deben interpretarse de acuerdo con la caracterización de la información también presentada en este documento.
La presente invención proporciona formas cristalinas de la base libre de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida como un material nuevo, en particular, en una forma farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones preferidas, las formas cristalinas de las sales están en forma pura sustancialmente. Las realizaciones preferentes de las sales se divulgan en los Ejemplos como en la forma N-1 de la sal del ácido dibencenosulfónico y la forma H4-1 de la sal de HCl.
Como se usa en el presente documento, "polimorfo" se refiere a formas cristalinas que tienen la misma composición química pero distintas configuraciones espaciales de las moléculas, átomos y/o iones que forman el cristal.
Como se usa en el presente documento, "solvato" se refiere a una forma cristalina de una molécula, átomo y/o iones que además contienen moléculas de un disolvente o disolventes incorporadas en la estructura cristalina. Las moléculas de disolvente pueden estar presentes en el solvato en una configuración regular y/o en una configuración no ordenada. El solvato puede comprender una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de las moléculas de disolvente. Por ejemplo, un solvato con una cantidad no estequiométrica de moléculas de disolvente puede ser el resultado de la pérdida parcial de disolvente del solvato.
Como se usa en el presente documento, "amorfo" se refiere a una forma sólida de una molécula, átomo y/o iones que no es cristalina. Un sólido amorfo no presenta un patrón de difracción de rayos X definitivo.
Como se usa en el presente documento, "sustancialmente pura", cuando se usa en referencia a una forma cristalina, significa un compuesto que tiene una pureza mayor del 90% en peso, incluyendo mayor de 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 y 99% en peso, y también incluye igual a aproximadamente el 100% en peso del Compuesto I, basado en el peso del compuesto. El material restante comprende otra/s forma/s del compuesto y/o las impurezas de la reacción y/o las impurezas del procesamiento que surgen de su preparación. Por ejemplo, una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre o sal, puede considerarse sustancialmente pura en que tiene una pureza mayor del 90% en peso, como se mide por medios que se conocen en este momento y son generalmente aceptados en la técnica, en la que el menos de 10% restante de material en peso comprende otra/s forma/s de N-((1 R, 2S, 5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre o sal, y/o impurezas de la reacción y/o impurezas del procesamiento.
Las muestras de las formas cristalinas pueden proporcionarse con homogeneidad de fases sustancialmente pura, lo que indica la presencia de una cantidad dominante de una única forma cristalina y opcionalmente cantidades menores de una o más de otras formas cristalinas. La presencia de más de una forma cristalina en una muestra puede determinarse mediante técnicas tales como la difracción de rayos X en polvo(PXRD) o la espectroscopía de resonancia magnética nuclear de estado sólido (SSNMR). Por ejemplo, la presencia de picos extra en la comparación con un patrón de PXRD medido experimentalmente con un patrón de PXRD estimulado puede indicar más de una forma cristalina en la muestra. El PXRD estimulado puede calcularse a partir de un único dato de rayos X por cristal. Véase Smith, D. K., "A FORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder Diffraction Patterns", Lawrence Radiation Laboratory, Livermore, California, UCRL-7196 (Abril 1963).
Preferiblemente, la forma cristalina tiene una homogeneidad de fases sustancialmente pura como se indica mediante menos del 10%, preferiblemente menos del 5% y más preferiblemente menos del 2% del área de pico total en el patrón de PXRD medido experimentalmente que surge de los picos extras que están ausentes en el patrón PXRD estimulado. Más preferiblemente es una forma cristalina que tiene una homogeneidad de fases sustancialmente pura con menos del 1% del área de pico total en el patrón de PXRD medido experimentalmente que surge de los picos extras que están ausentes en el patrón PXRD estimulado.
Los procedimientos para la preparación de las formas cristalinas se conocen en la técnica. Las formas cristalinas se pueden preparar por una variedad de procedimientos, incluyendo por ejemplo, la cristalización o recristalización de un disolvente adecuado, la sublimación, el desarrollo a partir de un material fundido, la transformación al estado sólido a partir de otra fase, la cristalización de un fluido supercrítico y la pulverización por chorro. Las técnicas para la cristalización o recristalización de formas cristalinas a partir de una mezcla de disolventes incluyen, por ejemplo, la evaporación del disolvente, la disminución de la temperatura de la mezcla de disolventes, la colocación de la mezcla de disolventes supersaturada de la molécula y/o sal en cristales seminales, el secado por congelación de la mezcla de disolventes y la adición de antidisolventes (contradisolventes) a la mezcla de disolventes.
Las formas se pueden caracterizar y distinguir usando una única difracción de rayos X por cristales, que está basada en mediciones celdillas unitarias de un monocristal de una forma a una temperatura analítica fijada. Una descripción detallada de las celdillas unitarias se proporciona en Stout & Jensen, X-Ray Structure Determination: A Practical Guide, Macmillan Co., Nueva York (1968), Capítulo 3, que se incorpora en este documento por referencia. Como alternativa, la única configuración de átomos en la relación espacial dentro de la red cristalina se puede caracterizar de acuerdo con las coordenadas atómicas fraccionales. Otros medios de caracterizar la estructura cristalina son mediante el análisis de la difracción de rayos X en polvo en el que el perfil de difracción experimental u observado se compara con un perfil estimulado que representa el material en polvo puro, ambos ejecutados en la misma temperatura analítica y las medidas para la forma sujeto caracterizadas como series de valores de 2\theta.
Otros medios de caracterizar la forma se pueden usar, tales como la resonancia magnética nuclear de estado sólido (SSNMR), la calorimetría de exploración diferencial y el análisis termogravimétrico. Estos parámetros también se pueden usar en combinación para caracterizar la forma sujeto.
La expresión "pérdida de peso insignificante", como se emplea en este documento, como se caracteriza mediante TGA se indica la presencia de una forma de cristal pura (no solvatada).
La expresión "% de consumo de agua insignificante", como se emplea en este documento, como se caracteriza mediante la isoterma de sorción de humedad indica que la forma ensayada no es higroscópica.
En una realización de la invención, una forma cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre o sal, se proporciona en una forma sustancialmente pura. Esta forma cristalina puede emplearse en composiciones farmacéuticas que pueden incluir opcionalmente uno o más de otros componentes seleccionados, por ejemplo, del grupo constituido por excipientes, transportadores y uno de otros ingredientes farmacéuticamente activos o entidades químicas activas de diferentes estructuras moleculares.
Preferiblemente, la forma cristalina tiene una homogeneidad de fases sustancialmente pura como se indica mediante menos del 10%, preferiblemente menos del 5%, y más preferiblemente menos del 2% del área de pico total en el patrón de PXRD medido experimentalmente que surge de los picos extras que están ausentes en el patrón PXRD estimulado. Más preferiblemente es una forma cristalina que tiene una homogeneidad de fases sustancialmente pura con menos del 1% del área de pico total en el patrón de PXRD medido experimentalmente que surge de los picos extras que están ausentes en el patrón PXRD estimulado.
En otra realización, se proporciona una composición que está constituida esencialmente de las formas cristalinas de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre o sal. La composición de esta realización puede comprender al menos el 90% en peso de la forma, que se basa en su peso en la composición.
La presencia de impurezas de la reacción y/o impurezas del procesamiento puede determinarse mediante técnicas analíticas que se conocen en la técnica, tales como, por ejemplo, cromatografía, espectroscopía de resonancia magnética nuclear, espectroscopia de masas o espectroscopia infrarroja.
Las formas cristalinas se pueden preparar mediante una variedad de procedimientos, incluyendo por ejemplo, la cristalización o recristalización a partir de un disolvente adecuado, la sublimación, el desarrollo a partir de un material fundido, la transformación al estado sólido a partir de otra fase, la cristalización a partir de un fluido supercrítico y la pulverización por chorro. Las técnicas para la cristalización o recristalización de formas cristalinas a partir de una mezcla de disolventes incluyen, por ejemplo, la evaporación del disolvente, la disminución de la temperatura de la mezcla de disolventes, la colocación de una mezcla de disolvente supersaturada de la molécula y/o sal en cristales seminales, el secado por congelación de la mezcla de disolventes y la adición de antidisolventes (contradisolventes) a la mezcla de disolventes. Las técnicas de cristalización de alto rendimiento pueden emplearse para preparar formas cristalinas incluyendo polimorfos.
Los cristales de fármacos, incluyendo polimorfos, procedimientos de preparación y caracterización de los cristales de los fármacos se analizan en Solid-State Chemistry of Drugs, S. R. Byrn. R. R. Pfeiffer y J. G. Stowell, 2ª Edición, SSCI, West Lafayette, Indiana (1999).
Para las técnicas de cristalización que emplean disolventes, la elección de disolvente o disolventes depende típicamente de uno o más factores, tales como la solubilidad de los compuestos, la técnica de cristalización y la presión de vapor del disolvente. Se pueden emplear las combinaciones de disolvente; por ejemplo, el compuesto puede solubilizarse en un primer disolvente para proporcionar una solución, seguido de la adición de un antidisolvente para disminuir la solubilidad del compuesto en la solución y para proporcionar la formación de cristales. Un "antidisolvente" es un disolvente en el que el compuesto tiene baja solubilidad. Los disolventes adecuados para preparar cristales incluyen disolventes polares y no polares.
En un procedimiento para preparar cristales, N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-((-(tri-
fluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre o sal, se suspende y/o se agita en un disolvente adecuado para proporcionar una suspensión, que se puede calentar para promover la disolución. El término "suspensión", como se usa en este documento, significa una solución saturada, que también puede contener una cantidad adicional del sólido para proporcionar una mezcla heterogénea a una temperatura dada. Los disolventes adecuados en este sentido incluyen, por ejemplo, disolventes polares apróticos y disolventes polares próticos y mezclas de dos o más de estos, como se divulga en este documento.
Los cristales seminales se pueden añadir a cualquier mezcla de cristalización para promover la cristalización. Como será evidente para el especialista en la técnica, la siembra se usa como un medio de controlar el crecimiento de una forma cristalina particular o como un medio de controlar la distribución del tamaño de partícula del producto cristalino. Por consiguiente, el cálculo de la cantidad de semillas necesario depende del tamaño de semilla disponible y el tamaño deseado de una partícula media de producto como se divulga, por ejemplo, en "Programmed cooling of batch crystallizes", J. W. Mullin y J. Nyvlt, Chemical Engineering Science (1971)26: 369-377. En general, las semillas de pequeño tamaño se necesitan para controla de manera eficaz el crecimiento de los cristales en el lote. Las semillas de pequeño tamaño se pueden generar mediante el tamizado, la molienda o la micronización de cristales más grandes o mediante microcristalización de soluciones. Se debe tener cuidado de que la molienda o el micronizado de cristales no de cómo resultado ningún cambio en la cristalinidad de la forma cristalina deseada (es decir, cambio al amorfo polimorfo o a otro polimorfo).
Una mezcla enfriada puede filtrarse al vacío, y los sólidos aislados pueden lavarse con un disolvente adecuado, tal como disolvente de recristalización frío, y secarse en una purga de nitrógeno para proporcionar la forma cristalina deseada. Los sólidos aislados pueden analizarse con una técnica espectroscópica o analítica adecuada, tal como RMNES, DSC, PXRD o similar, en una cantidad de más de aproximadamente el 70% en peso de rendimiento aislado, pero preferiblemente más del 90% en peso basándose en el peso de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre o sal, empleada originalmente en el procedimiento de cristalización. El producto puede co-molerse o pasarse a través de un tamiz de malla para desaglomerar el producto, si es necesario.
Pueden prepararse formas cristalinas directamente a partir del medio de reacción de la etapa de proceso final preparando N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre o sal. Esto puede conseguirse, por ejemplo, empleando en la etapa de proceso final un disolvente o mezcla de disolventes a partir de la cual puede cristalizarse el compuesto. Como alternativa, las formas cristalinas pueden obtenerse por técnicas de destilación o de adición de disolvente. Los disolventes adecuados para este propósito incluyen cualquiera de los disolventes descritos en este documento, incluyendo disolventes próticos polares, tales como alcoholes, y disolventes apróticos polares, tales como cetonas.
A modo de directriz general, la mezcla de reacción puede filtrarse para retirar cualquier impureza indeseada, sales inorgánicas, y similares, seguido de lavado con un disolvente de reacción o cristalización. La solución resultante puede concentrarse para retirar el exceso de disolvente o constituyentes gaseosos. Si se emplea destilación, la última cantidad de destilado recogido puede variar, dependiendo de factores de proceso incluyendo, por ejemplo, tamaño del recipiente, capacidad de agitación, y similares. A modo de directriz general, la solución de reacción puede destilarse a aproximadamente 1/10 del volumen original antes de que se realice el reemplazo del disolvente. Pueden tomarse muestras de la reacción y ensayarse para determinar el grado de reacción y el % en peso de producto de acuerdo con técnicas de procesamiento convencionales. Si se desea, puede añadirse o retirarse un disolvente de reacción para optimizar la concentración de la reacción. Preferiblemente, la concentración final se ajusta a aproximadamente el 50% en peso, punto en el que típicamente se forma una suspensión.
Puede ser preferible añadir disolventes directamente al recipiente de reacción sin destilar la mezcla de reacción. Los disolventes preferidos para este propósito son los que participan en último lugar en la estructura reticular cristalina, como se ha analizado anteriormente con respecto al intercambio de disolvente. Aunque la concentración final puede variar dependiendo de la pureza deseada, recuperación y similar, la concentración final de la base libre en solución es preferiblemente de aproximadamente el 4% a aproximadamente el 7%. La mezcla de reacción puede agitarse seguido de adición del disolvente y calentamiento simultáneo. A modo de ilustración, la mezcla de reacción puede agitarse durante aproximadamente 1 hora mientras se caliente a aproximadamente 70ºC. La reacción se filtra preferiblemente mientras permanece caliente y se lava con el disolvente de reacción, el disolvente añadido o una combinación de los mismos. Pueden añadirse cristales seminales a cualquier solución de cristalización para iniciar la cristalización.
Las diversas formas descritas en este documento pueden distinguirse entre sí mediante el uso de varias técnicas analíticas conocidas por un especialista en la técnica. Dichas técnicas incluyen, pero sin limitación, difracción de rayos X en polvo (PXRD), calorimetría diferencial de barrido (DSC) y/o análisis termogravimétrico (TGA). Como alternativa, las formas pueden caracterizarse y distinguirse usando difracción de rayos X de monocristal, que se basa en mediciones de celdillas unitarias de un monocristal de una forma dada a una temperatura analítica fija. Una descripción detallada de celdillas unitarias se proporciona en Stout & Jensen, X-Ray Structure Determination: A Practical Guide, Macmillan Co., Nueva York (1968), Capítulo 3, que se incorpora en este documento como referencia. Específicamente, la disposición única de átomos en relación espacial dentro de la estructura reticular cristalina puede caracterizarse de acuerdo con las coordenadas atómicas fraccionarias observadas. Otro medio para caracterizar la estructura cristalina es por análisis de difracción de rayos X de polvo en el que el perfil de difracción observado se compara con un perfil simulado generado a partir de los datos de la estructura de monocristal. Las mediciones de difracción de rayos X de polvo para la forma objeto se caracterizan como una serie de valores 2\theta (normalmente cuatro o más).
Puede usarse otro medio para caracterizar la forma, tal como espectroscopía por resonancia magnética nuclear en estado sólido (SSNMR), calorimetría diferencial de barrido (DSC), termografía y reconocimiento grueso de la morfología cristalina o amorfa. Estos parámetros también pueden usarse en combinación para caracterizar la forma objeto.
Un especialista en la técnica apreciará que un patrón de difracción de rayos X puede obtenerse con un error de medición que depende de las condiciones de medición empleadas. En particular, generalmente se sabe que las intensidades en un patrón de difracción de rayos X pueden fluctuar dependiendo de las condiciones de medición empleadas y de la forma y morfología del cristal. Debe entenderse también que las intensidades relativas también pueden variar dependiendo de las condiciones experimentales y, por consiguiente, no debe tenerse en cuenta el orden exacto de la intensidad. Además, un error de ángulo de difracción para un patrón de difracción de rayos X convencional es típicamente de aproximadamente 0,2º en valores 2\theta o menos, preferiblemente de aproximadamente 0,1º en valores 2\theta (como se analiza más adelante en este documento), y dicho grado de error de medición debe tenerse en cuenta como concerniente a los ángulos de difracción mencionados anteriormente. Por consiguiente, debe entenderse que las formas de cristal de la presente invención no se limitan a las formas de cristal que proporcionan patrones de difracción de rayos X completamente idénticos a los patrones de difracción de rayos X representados en las Figuras adjuntas descritas en este documento. Cualquier forma de cristal que proporcione patrones de difracción de rayos X sustancialmente de idénticos a los descritos en las figuras adjuntas está dentro del alcance de la presente invención. La capacidad de determinar identidades sustanciales de patrones de difracción de rayos X está dentro del ámbito de un especialista en la técnica.
Ejemplo
El siguiente Ejemplo es una realización de la invención.
En su caso, las reacciones se realizaron en una atmósfera de nitrógeno seco (o argón). Para las reacciones anhidras, se utilizaron disolventes Dri-Solv de EM. Para otras reacciones, se utilizaron disolventes de calidad reactiva o de calidad HPLC. A menos que se indique otra cosa, todos los reactivos que se obtuvieron en el mercado se usaron tal como se recibieron.
Las mediciones de CL/EM se obtuvieron usando un sistema de espectrómetro de masas cuadropolo único híbrido Shimadzu HPLC/Waters ZQ. Los datos para el pico de interés se indican a partir de ionización por electronebulización en modo positivo. Los espectros RMN (resonancia magnética nuclear) se obtuvieron típicamente en instrumentos Bruker o JEOL de 400 MHz y 500 MHz en los disolventes indicados. Todos los desplazamientos químicos se indican en ppm a partir de tetrametilsilano con la resonancia del disolvente como patrón interno. Los datos espectrales RMN ^{1}H se indican típicamente como sigue: desplazamiento químico, multiplicidad (s = singlete, s a = singlete ancho, d = doblete, dd = doblete de dobletes, t = triplete, c = cuadruplete, sept. = septuplete, m = multiplete, ap. = aparente), constantes de acoplamiento (Hz) e integración.
Un especialista en la técnica reconocerá las abreviaturas convencionales utilizadas en este documento. Para facilidad de referencia, las abreviaturas incluyen, pero no se limitan necesariamente a: sat. = saturado, HPLC = cromatografía líquida de alto rendimiento, PA = porcentaje de área, KF = Karl-Fischer, TA = temperatura ambiente (a menos que se especifique otra cosa, TA es una temperatura de aproximadamente 22ºC), mmol = milimoles, EMAR = espectroscopía de masas de alta resolución. TBTU = tetrafluoroborato de O-benzotriazol-2-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio, MTBE = TBME = terc-butil metil éter, EDAC = clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida, EDC = N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida, TEA = trietilamina, DPPA = difenil fosforil azida, IPA = alcohol isopropílico, TFA = ácido trifluoroacético, DCM = diclorometano, THF = tetrahidrofurano, DMF = N,N-dimetilformamida, BOP = hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfonio, EtOAc = acetato de etilo, DMSO = dimetilsulfóxido. ºC = grados Centígrados, equiv. = equivalente o equivalentes, g = gramo o gramos, mg = miligramo o miligramos, ml (o m) = mililitro o mililitros, h = hora u horas, M = molar, N = normal, min = minuto o minutos, MHz = megahercio, tlc = cromatografía de capa fina y v/v = relación volumen a volumen.
"\alpha", "\beta", "R" y "S" son designaciones estereoquímicas familiares para los especialistas en la técnica.
Ejemplo 1 N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida
1
Ejemplo 1, Etapa 1: Se disolvió 2-benciloxicarbonilamino-7-oxo-6-aza-biciclo[3.2.1]octano-6-carboxilato de (1R, 2S, 5R)-terc-butilo (89,6 g, 0,24 mol, véase: P. H. Carter, y col. solicitud PCT WO 2005/021500) en acetato de etilo (1,5 l) y la solución resultante se lavó con NaHCO_{3} sat. (2 x 0,45 l) y NaCl sat. (1 x 0,45 l). La solución se secó (Na_{2}SO_{4}) y después se filtró directamente en un matraz de fondo redondo de 3 l de 3 bocas. La solución se purgó con una inyección de nitrógeno directa antes de cargarse con Pd al 10%/C (13,65 g) en una atmósfera de nitrógeno. El matraz se evacuó y se recargó con hidrógeno; esto se repitió dos veces más. Se burbujeó hidrógeno a través de la solución durante 30 min y después la reacción se agitó en una atmósfera de H_{2} durante 18 h. El matraz se evacuó, se recargó con nitrógeno y se cargó con catalizador fresco (6 g de Pd al 10%/C). Se burbujeó hidrógeno a través de la solución durante 30 min y después la reacción se agitó en una atmósfera de H_{2} durante 18 h. El matraz se evacuó y se recargó con nitrógeno. La mezcla se filtró a través de Celite; después, la capa de filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado (volumen de \sim1,6 l de EtOAc) se diluyó con acetonitrilo (0,3 l) y se cargó secuencialmente con L-N-Cbz-metionina (68 g, 0,24 mol), TBTU (77 g, 0,24 mol) y N,N-diisopropiletilamina (42 ml, 0,24 mol). La reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 4 h, tiempo durante el cual cambió de una suspensión a una solución transparente. La reacción se interrumpió con la adición de NH_{4}Cl sat. (0,75 l) y agua (0,15 l); la mezcla se diluyó adicionalmente con EtOAc (0,75 l). Las fases se mezclaron y se separaron y la fase orgánica se lavó con Na_{2}CO_{3} sat. (2 x 0,9 l) y NaCl sat. (1 x 0,75 l). La solución se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío, dando 2-((S)-2-(benciloxicarbonilamino)-4-(metiltio)butanamido)-7-oxo-6-aza-biciclo[3.2.1]octano-6-carboxilato de (1R,2S,5R)-terc-butilo en forma de un aceite, que se recogió en la siguiente etapa sin purificación adicional. CL/EM para el pico principal: [M-Boc+H]^{+} = 406,3; [M+Na]^{+} = 528,3. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,36 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 4,32 (m, 1H), 4,2 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 2,5-2,7 (m, 3H), 2,25 (m, 1H), 2,11 (s, 3H), 2,05 (m, 4H), 1,9 (m, 1H), 1,7 (m, 2H), 1,54 (s, 9H). También están presentes EtOAc [1,26 (t), 2,03 (s), 4,12 (c)] y N,N,N,N-tetrametilurea [2,83 (s)].
Ejemplo 1, Etapa 2: Una muestra de 2-((S)-2-(benciloxicarbonilamino)-4-(metiltio)butanamido)-7-oxo-6-aza-biciclo[3.2.1]octano-6-carboxilato de (1R,2S,5R)-terc-butilo (0,24 mol supuesto; véase el procedimiento previo) se disolvió en yodometano (1,250 g) y se agitó durante 48 h a la temperatura ambiente. La reacción se concentró al vacío. El residuo se disolvió en diclorometano y se concentró al vacío. Esto se repitió dos veces más. El lodo resultante se disolvió en diclorometano (0,4 l) y se vertió en una solución en agitación rápida de MTBE (4,0 l). Los sólidos amarillos resultantes se recogieron mediante filtración por succión y se secaron a alto vacío, proporcionando la sal sulfonio (179 g). Este material se recogió en la siguiente etapa sin purificación adicional. CL/EM para el pico principal: [M-Me_{2}S+H]^{+} = 458,4; [M]^{+} = 520,4. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,35 (m, 5H), 5,09 (s, 2H), 4,33 (m, 1H), 4,28 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 3,3-3,45 (m, 2H), 2,97 (s, 3H), 2,94 (s, 3H), 2,78 (m, 1H), 2,0-2,3 (m, 4H), 1,7 (m, 2H), 1,52 (s, 9H). También están presentes MTBE [1,18 (s), 3,2 (s)] y trazas de N,N,N,N-tetrametilurea [2,81 (s)].
Ejemplo 1, Etapa 3: Toda la sal sulfonio de la etapa anterior (0,24 mol supuesto) se disolvió en DMSO (2,0 l). La solución resultante se agitó en una atmósfera de nitrógeno a la temperatura ambiente y se cargó en porciones con carbonato de cesio (216 g). La suspensión se agitó a la temperatura ambiente durante 3 h y después se filtró para retirar los sólidos. La solución se dividió en porciones de \sim0,22 l y se trató como sigue: la mezcla de reacción (\sim0,22 l) se diluyó con acetato de etilo (1,5 l) y se lavó sucesivamente con agua (3 x 0,5 l) y salmuera (1 x 0,3 l). La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío. El 2-((S)-3-(benciloxicarbonilamino)-2-oxopirrolidin-1-il)-7-oxo-6-azabiciclo[3.2.1]octano-6-carboxilato de (1R,2S,5R)-terc-butilo deseado (90,8 g, 83%) se obtuvo en forma de una espuma microcristalina, libre de impurezas de tetrametilurea. CL/EM para el pico principal: [M-Boc+H]^{+} = 358,4; [M+Na]^{+} = 480,4. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,35 (m, 5H). 5,12 (s, 2H), 4,35 (m, 2H), 4,2 (m, 1H), 3,6 (m, 1H), 3,3 (m, 1H), 2,64 (m, 1H), 2,28-2,42 (m, 2H), 2,15 (m, 1H), 1,7-2,0 (m, 5H), 1,55 (s, 9H). Si se desea, este material se puede aislar en forma de un sólido mediante disolución en MTBE (1 volumen), adición a heptano (3,3 volúmenes) y recogida del precipitado resultante.
Ejemplo 1, Etapa 4: Una solución en agitación de 2-((S)-3-(benciloxicarbonilamino)-2-oxopirrolidin-1-il)-7-oxo-6-azabiciclo[3.2.1]octano-6-carboxilato de (1R,2S,5R)-terc-butilo (108 g, 0,236 mol) en THF (1 l) se cargó con hidróxido de litio monohidrato (21,74 g, 0,519 mol). Se añadió lentamente agua (0,3 l), de tal manera que la temperatura no excediera de 20ºC. La reacción se agitó a la temperatura ambiente durante una noche y los volátiles se retiraron al vacío. El pH se ajustó a un valor de \sim4 mediante la adición de HCl 1 N (450 ml) y NaH_{2}PO_{4,} Los precipitados blancos resultantes se recogieron por filtración y se lavaron con agua (2 x 1 l). El sólido se disolvió en diclorometano (1,5 l) y agua (1 l). La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc (0,7 l) y la solución resultante se calentó a la temperatura de reflujo durante 1 h. Después de enfriar a la TA, los sólidos se separaron y se recogieron mediante filtración. Estos sólidos se purificaron por recristalización en isopropanol, proporcionando el ácido (1R,2S,5R)-2-((S)-3-(benciloxicarbonilamino)-2-oxopirrolidin-1-il)-5-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexanocarboxílico deseado en forma de un sólido de color blanco (104,5 g, rendimiento del 93%). CL/EM para el pico principal: [M-tBu+H]^{+} = 420,2; [M-Boc+H]^{+} = 376,2; [M+H]^{+} = 476,2. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,35 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 4,35 (m, 2H), 3,71 (m, 1H), 3,45-3,6 (m, 2H), 2,99 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 2,15 (m, 1H), 2,0 (m, 2H), 1,6-1,9 (m, 4H), 1,46 (s, 9H).
Ejemplo 1, Etapa 5: Un matraz de fondo redondo de 3 l se cargó con ácido (1R,2S,5R)-2-((S)-3-(benciloxicarboni-
lamino)-2-oxopirrolidin-1-il)-5-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexanocarboxílico (75,5 g, 0,158 mol), EDC\cdotHCl
(33,5 g, 0,175 mol), 1-hidroxibenzotriazol (23,6 g, 0,175 mol) y diclorometano (1 l). La reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 2 h, tiempo durante cual que cambió de una suspensión blanca a una solución transparente. Se burbujeó amoniaco (gas) a través de la solución hasta que el valor del pH fue fuertemente básico (papel) y la reacción se agitó durante 10 min; esta adición de amoniaco se repitió y la reacción se agitó durante 10 min más. Se añadió agua. Antes de concentrarse al vacío, la fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} sat., NaH_{2}PO_{4} y salmuera. El residuo se suspendió con acetonitrilo (0,5 l) y después se concentró, dando (1R,2S,5R)-2-((S)-3-(benciloxicarbonilamino)-2-oxopirrolidin-1-il)-5-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexanocarboxamida en forma de un sólido de color blanco (75,9 g, \sim100%), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. CL/EM para el pico principal: [M-Boc+H]^{+} = 375,3; [M+H]^{+} = 475,4. [M-tBu+H]^{+} = 419,3, RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,35 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 4,25 (m, 2H), 3,70 (m, 1H), 3,6 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 2,91 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 2,12 (m, 1H), 1,9-2,05 (m, 2H), 1,65-1,9 (m, 4H), 1,46 (s, 9H).
Ejemplo 1, Etapa 6: La reacción se realizó en tres porciones iguales y se combinaron para el tratamiento acuoso. Un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 5 l se cargó con (1R,2S,5R)-2-((S)-3-(benciloxicarbonilamino)-2-oxopirrolidin-1-il)-5-(terc-butoxicarbonilamino)ciclohexanocarboxamida (25,3 g, 53 mmol), acetonitrilo (1,9 l) y 2,6 l de agua/hielo. La mezcla se agitó y se enfrió a 0ºC. Se añadió diacetato de yodobenceno (25,77 g, 80 mmol) y la reacción se agitó durante 2 h; se añadieron otros 0,5 equiv. de diacetato de yodobenceno. La reacción se agitó durante 9 h (temperatura de reacción < 10ºC). La mezcla se cargó con 8 equiv. de N,N-diisopropiletilamina y 2 equiv. de anhídrido acético. Durante los treinta minutos siguientes, se añadieron 4 equiv. de N,N-diisopropiletilamina y 2 equiv. de anhídrido acético cada diez minutos hasta que la reacción se completó (HPLC). El acetonitrilo se retiró al vacío; algo de líquido se separó del residuo y esto se recogió por filtración. El residuo restante se extrajo con diclorometano (3 l, después 1 l). La fase orgánica se lavó secuencialmente con agua, NaHCO_{3} sat. y salmuera. Los sólidos recogidos se añadieron a la fase orgánica, junto con carbón activado (15 g). La mezcla se agitó durante 30 minutos a 40ºC antes de filtrarse y concentrarse al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc (1 l) y la solución resultante se agitó a 75ºC durante 1 h antes de dejarse enfriar a la temperatura ambiente. Se separó un sólido y se recogió por filtración. Este sólido se purificó adicionalmente por recristalización: primero se disolvió en 0,5 l de CH_{2}CI_{2}, después se concentró al vacío y después se recristalizó a partir de 1 l de EtOAc; esto se repitió tres veces. Los sólidos obtenidos a partir de aguas madre de antes se recristalizaron tres veces usando el mismo procedimiento. Los sólidos combinados se recristalizaron dos veces más en acetonitrilo (0,7 l), proporcionando 66 g (84%) de (1R,3R,4S)-3-acetamido-4-((S)-3-(benciloxicarbonilamino)-2-oxopirrolidin-1-il)ciclohexilcarbamato de terc-butilo (con una pureza > 99,5% mediante HPLC). CL/EM para el pico principal: [M+H]^{+} = 489,4; [M-tBu+H]^{+} = 433,3. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,3-7,4 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 4,35 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,04 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,6 (m, 2H), 2,44 (m, 1H), 2,12 (m, 1H), 1,87-2,05 (m, 4H), 1,87 (s, 3H), 1,55-1,7 (m, 2H), 1,46 (s, 9H). La fidelidad estereoquímica de la transposición de Hofmann se confirmó a través del análisis de la estructura de cristal de rayos X de este compuesto, como se muestra en la Figura 1.
Ejemplo 1, Etapa 7: Una solución en agitación de (1R,3R,4S)-3-acetamido-4-((S)-3-(benciloxicarbonilamino)-2-oxopirrolidin-1-il)ciclohexilcarbamato de terc-butilo (66 g, 0,135 mol) en diclorometano (216 ml) se cargó con ácido trifluoroacético (216 ml). La reacción se agitó durante 2 h a la temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en metanol y la solución resultante se concentró al vacío; esto se repitió una vez. Se obtuvo (S)-1-((1S,2R,4R)-2-acetamido-4-aminociclohexil)-2-oxopirrolidin-3-ilcarbamato de bencilo en forma de un aceite y se usó directamente en la Etapa 8 a continuación. CL/EM encontrado [M + H]^{+} = 389,4. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,3-7,4 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,41 (s a, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,00 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 3,8 1 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 3,65 (c, J = 8,4 Hz, 1H), 3,3-3,4 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 1,95-2,24 (m, 5H), 2,00 (s, 3H), 1,6-1,8 (m, 2H).
Ejemplo 1, Etapa 8: Una solución en agitación de (S)-1-((1S,2R,4R)-2-acetamido-4-aminociclohexil)-2-oxopirrolidin-3-ilcarbamato de bencilo (\sim0,135 mol) en metanol (675 ml) se cargó secuencialmente con acetona (37,8 g, 4 equiv.), acetato sódico (33,2 g, 3 equiv.) y cianoborohidruro sódico (16,9 g, 2 equiv.). La mezcla se agitó a la temperatura ambiente durante 6 h y se filtró. El filtrado se disolvió en diclorometano (1 l); esta solución se lavó con NaOH 1 N (1 l). Los sólidos recogidos en la filtración se disolvieron en NaOH 1 N (1 l) a 0ºC y después, se extrajeron con diclorometano (1 l). Los extractos orgánicos se combinaron y se extrajeron con HCl acuoso (200 ml de HCl 1 N + 800 ml de agua). La fase acuosa se basificó con NaHCO_{3} sat. (500 ml) y después con NaOH 1 N (100 ml) hasta alcanzar un valor de pH de 11. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (2 l). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron al vacío, dando (S)-1-((1S,2R,4R)-2-acetamido-4-(isopropilamino)ciclohexil)-2-oxopirrolidin-3-ilcarbamato de bencilo en forma de un aceite. CL/EM encontrado [M + H]^{+} = 431,45. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,3-7,4 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,31 (m, 1H), 4,24 (t, J = 9,4 Hz, 1H), 4,11 (m, 1H), 3,61 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 3,52 (c, J = 8,6 Hz, 1H), 3,04 (s a, 1H), 2,96 (sept, J = 6,3 Hz, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,15 (m, 1H), 1,92 (s, 3H), 1,7-1,9 (m, 5H), 1,65 (m, 1H), 1,12 (dd ap., J = 6,3, 1,1 Hz, 6H).
Ejemplo 1, Etapa 9 (véase a continuación Etapa 9 alternativa): Una solución en agitación de (S)-1-((1S,2R,4R)-2-acetamido-4-(isupropilamino)ciclohexil)-2-oxopirrolidin-3-ilcarbamato de bencilo (\sim115 mmol) en diclorometano (600 ml) se enfrió a 0ºC y se cargó secuencialmente con formaldehído (18,6 g, solución al 37% en peso), trietilamina (23 ml) y triacetoxiborohidruro sódico (28,7 g). La mezcla se agitó a la temperatura ambiente durante 30 minutos y se diluyó con diclorometano (hasta alcanzar un volumen de 1,2 l). Esta solución se lavó tres veces con 500 ml de NaHCO_{3} sat. + NaOH (NaHCO_{3} sat., pH a 11 con NaOH 1 N). La fase orgánica se extrajo con HCl ac. (200 ml de HCl 1 N + 600 ml de agua). La fase acuosa se basificó con NaHCO_{3} sat. (500 ml) y después con NaOH 1 N (100 ml) hasta alcanzar un valor de pH de 11. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (1,2 l). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron al vacío, dando (S)-1-((1S,2R,4R)-2-acetamido-4-(isopropil(metil)amino)ciclohexil)-2-oxopirrolidin-3-ilcarbamato de bencilo en forma de un aceite, que se usó directamente en la Etapa 10 a continuación. CL/EM encontrado [M + H]^{+} = 445,4. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 7,3-7,4 (m, 5H), 5,12 (s, 2H), 4,33 (s a, 1H), 4,25 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 4,11 (s a, 1H), 3,5-3,6 (m, 2H), 2,77 (s muy a, 2H), 2,41 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,0-2,1 (m, 2H), 1,92 (s, 3H), 1,7-1,9 (m, 5H), 1,10 (dd ap., J = 17, 6,4 Hz, 6H).
\newpage
Ejemplo 1, Etapa 10: A una solución de (S)-1-((1S,2R,4R)-2-acetamido-4-(isopropil(metil)amino)-ciclohexil)-2-oxopirrolidin-3-ilcarbamato de bencilo (\sim0,115 mol) en metanol (600 ml) se le añadió Pd al 10%/C (6 g de catalizador al 50% en peso). El matraz se evacuó y se volvió a filtrar con hidrógeno. La mezcla se agitó en una atmósfera de H_{2} durante 2 h y el catalizador se retiró por filtración a través de Celite. El filtrado se concentró al vacío, proporcionando N-((1R,2S,SR)-2-((S)-3-amino-2-oxopirrolidin-1-il)-5-(isopropil(metil)amino)ciclohexil)acetamida en forma de un aceite, que se trató en la siguiente etapa sin purificación adicional. CL/EM encontrado [M + H]^{+} = 311,47. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 4,39 (s a, 1H), 4,00 (m, 1H), 3,3-3,5 (m, 4H), 2,73 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,0-2,2 (m, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,6-1,75 (m, 4H), 1,07 (dd ap., J = 21, 6,4 Hz, 6H).
Ejemplo 1, Etapa 11: A una solución de N-((1R,2S,SR)-2-((S)-3-amino-2-oxopirrolidin-1-il)-5-(isopropil(metil)amino)ciclohexil)acetamida (\sim35 g, 0,115 mol) en isopropanol (600 ml) se le añadió 4-cloro-6-(trifluorometil)quinazolina (32 g, 0,138 mol, 1,2 equiv., véase: P.H. Carter y col., solicitud PCT WO 2005/021500). La mezcla se agitó a la temperatura ambiente durante una noche antes de cargarse con trietilamina (46 g, 0,46 mol, 4 equiv.). La mezcla se agitó a 60ºC durante 10 h. El disolvente se retiró a presión reducida, dando un aceite. Se realizó destilación azeotrópica dos veces con isopropanol. El residuo se disolvió en diclorometano (600 ml) y se extrajo con agua (250 ml, que contenía 4 equiv. de ácido acético). Se añadió diclorometano (600 ml) a los lavados acuosos combinados y la mezcla se enfrió a 0ºC. Se añadió con agitación NaOH acuoso (al 50% en peso) hasta que el valor de pH alcanzó 11. La fase de agua se extrajo dos veces con diclorometano (2 x 600 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron al vacío, dando la base libre amorfa del compuesto del título (pureza del 99% mediante HPLC). CL/EM encontrado [M+H]^{+} = 507,3. RMN ^{1}H (400 MHz, d_{4}-MeOH): \delta 8,82 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,05 (dd, J = 8,8, 1,8 Hz, 1H), 7,9 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5,28 (t, J = 8,6 Hz, 1H), 4,58 (s a, 1H), 4,06 (m, 1H), 3,52-3,68 (m, 2H), 3,43 (m, 1H), 2,76 (s a, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,1-2,3 (m, 3H), 2,0 (s, 3H), 2,0 (m, 1H), 1,65-1,8 (m, 3H), 1,09 (dd ap., J = 24, 6,4 Hz, 6 H).
Ejemplo 1, Etapa 9 alternativa
\vskip1.000000\baselineskip
2 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1, Etapa 9a^{i} alternativa: Se cargaron en un hidrogenador sal 4-toluenosulfonato de (7R,8S-8-((S)-1-fenil-etilamino)-1,4-dioxa-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de etilo 1A (1417 g, 2,8 mol, consúltese: documento
WO2004098516, preparado de forma análoga a la patente de Estados Unidos 6.835.841), etanol (graduación del 100%, 11,4 l) y Pd al 10%/catalizador C (al 50% en peso, 284 g). La mezcla se hizo inerte con nitrógeno, después se presurizó con gas hidrógeno (45 psig) y se agitó vigorosamente a aprox. 40ºC hasta que el material de partida se consumió (HPLC). La suspensión se enfrió, se purgó con gas nitrógeno y el catalizador se retiró por filtración mientras se hacía inerte. El catalizador gastado se lavó con etanol (4,3 l). El filtrado y los lavados se combinaron y se concentraron al vacío hasta un volumen de 2-3 l, manteniendo mientras el lote entre 40º-60ºC. Se cargó acetato de isopropilo (5 l) y la mezcla se concentró hasta un volumen de \sim2 l hasta que la mayoría del etanol se eliminó (< 0,5%) y el contenido en humedad residual fue < 1.000 ppm. El volumen del lote se ajustó a \sim7,5 l mediante la adición de acetato de isopropilo. La mezcla se calentó a 80ºC hasta que se hizo transparente y después se enfrió a 65º-70ºC. Se añadieron cristales seminales de 1 (5 g) y el lote se enfrió a 50ºC durante 2 horas, después se enfrió a 20ºC durante 4 horas más y se mantuvo durante \sim10 horas. La suspensión resultante se filtró y la torta se lavó con acetato de isopropilo (2 l). El producto se secó al vacío a \sim35ºC hasta que los volátiles se redujeron por debajo del \sim1% (LOD). Se obtuvo sal 4-toluenosulfonato de (7R,8S)-8-amino-1,4-dioxa-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de etilo 1 en forma de un sólido cristalino de color blanco (936 g, rendimiento del 83%, pureza mediante HPLC: 99,8%). RMN ^{1}H: (300 MHz, CDCl_{3}) 8,14-7,89 (s a, 3H), 7,75 (d, J 9,0 Hz, 2H), 7,15 (d, J 8,0 Hz, 2H), 4,22-4,04 (m, 2H), 4,01-3,77 (m, 4H), 3,55-3,43 (m, 1H), 3,20-3,13 (m, 1H), 2,40-2,27 (m, 4H), 2,21-1,94 (m, 2H), 1,81-1,51 (m, 3H), 1,23 (t, J 7,0 Hz, 3H); HPLC: Waters Xterra EM C18 4,6 mm x 150 mm d.i., tamaño de partículas de 3,5 \mum, NH_{4}OH al 0,05% (ACN al 5%, H_{2}O al 95%, disolvente A), a NH_{4}OH al 0,05% (ACN al 95%, H_{2}O al 5%, disolvente B), del 5% de B al 20% de B en 10 minutos, cambiado al 95% de B a los 25 minutos y después cambiado al 5% de B al 1 minuto; 11,1 minutos (aminoéster 1).
3 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1, Etapa 9^{ii} alternativa: El aminoéster 1 (63 g, 0,16 M, 1 equiv..; el producto de desprotección reductora de un compuesto conocido - (véase, por ejemplo, R. J. Cherney, documento WO 2004/098516 y G. V. Delucca & S. S. Ko, documento WO 2004/110993) se colocó en un matraz de fondo redondo y se añadió MeCN (500 ml). Después, se añadieron EDAC (33,1 g, 0,17 M, 1,1 equiv.), HOBt-H_{2}O (21,2 g, 0,16 M, 1,0 equiv.) y N-Cbz-L-metionina (46,7 g, 0,17 M, 1,05 equiv.) seguido de TEA (48,0 ml, 0,35 M, 2,2 equiv.). Se observó una exotermia a 38ºC. La masa de reacción se dejó en agitación a TA. Después de 30 min, el análisis por HPLC indicó que la conversión se había completado. La masa de reacción se diluyó con EtOAc (2,5 l) y se lavó con KHCO_{3} (4 x 500 ml, solución ac. al 20% en peso) y salmuera (500 ml). La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El residuo se disolvió en TBME y se reconcentró, dando (7R,8S)-8-{(2S)-2-benciloxicarbonilamino-4-metilsulfanil-butiril-amino}-1,4-di-oxa-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de etilo 2 en forma de un semisólido pegajoso (76,2 g, rendimiento del 98%, pureza 93AP). RMN ^{1}H: (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,36-7,30 (m, 5H), 7,03 (d, J 9,0 Hz, 1H), 5,66 (d, J 8,0 Hz) 1H), 5,10 (s, 2H), 4,35-4,25 (m, 2H), 4,19-4,04 (m, 2H), 3,98-3,86 (m, 4H), 2,87-2,80 (m, 1H), 2,55-2,45 (m, 2H), 2,18 (dd, J 14,0 Hz, 7,0 Hz, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,05-1,67 (m, 6H), 1,26 (t, J 7,0 Hz, 3H). HPLC: YMC-Pack Pro C18 5 \mum 4,6 x 150 mm, TFA al 0,05% (MeOH al 20%, H_{2}O al 80%), al TFA al 0,05% (MeOH al 20%, MeCN al 80%), gradiente de 10 min al 0-100%. 10,01 min (Compuesto 2,93.1 AP). EMAR: m/z 495,2166 [Calc: C_{24}H_{35}N_{2}O_{7}S 495,2165].
\vskip1.000000\baselineskip
4 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1, Etapa 9b alternativa: Se disolvió la metionina amida 2 (75,0 g. 0,15 M) en Mel (225 ml, 3 ml/g) - se apreció algo de gasificación pero no exotermia. La masa de reacción se dejó en agitación en la oscuridad durante 16,5 h. Después de este tiempo, se había formado un precipitado de color amarillo claro espeso. Después, el matraz se evacuó a 200 mmHg y se retiró algo del Mel. El material restante se suspendió en TBME (500 ml), después de 30 min en agitación, la suspensión se filtró y la torta se lavó con TBME (500 ml). El análisis por RMN de este material indicó una pequeña cantidad de Mel restante. La torta se volvió a suspender en TBME (500 ml), se filtró, se lavó con TBME (500 ml) y se secó al vacío, dando yoduro de [(3S)-3-benciloxicarbonilamino-3-{(7R,8S)-7-etoxicarbonil-1,4-di-oxa-espiro[4.5]dec-8-ilcarbamoil}-propil]-dimetilsulfonio 3 en forma de un sólido fluido de color blanquecino (93,5 g, al 97%, pureza al 99% de área). RMNH: (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,75 (d, J 9,0 Hz, 1H), 7,38-7,27 (m, 5H), 6,40 (d, J 7,0 HZ, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,76-4,65 (m, 1H), 4,48-4,39 (m, 1H), 4,14-3,85 (m, 6H), 3,84-7,73 (m, 1H), 3,68-3,55 (m, 1H), 3,21 (s, 3H), 3,12 (s, 3H), 2,90-2,83 (s, 1H), 2,52-1,55 (m, 8H), 1,24 (t, J 7,0 Hz, 3H). HPLC: YMC-Pack Pro C18 5 \mum 4,6 x 150 mm, TFA al 0,05% (MeOH al 20%, H_{2}O al 80%), al TFA al 0,05% (MeOH al 20%, MeCN al 80%), gradiente de 10 min al 0-100%. 2,45 min. (1-), 8,14 min (Compuesto 3,43,6AP, l^{-} 54,6AP), EMAR: m/z 509,2341 [Calc: C_{25}H_{37}N_{2}O_{7}S 509,2321].
5
Ejemplo 1, Etapa 9c alternativa: Se colocó Cs_{2}CO_{3} (61,5 g, 0,19 M, 1,5 equiv.) en un matraz de fondo redondo y se añadió DMSO anhidro (2,4 l). Después, se añadió en porciones la sal sulfonio 3 (80,0 g, 0,13 M, 1,0 equiv.). Una vez que la adición se completó, la masa de reacción se dejó en agitación en la oscuridad durante 20 h. Después, la masa de reacción se dividió por la mitad y cada mitad se trató por separado: la masa de reacción se diluyó con EtOAc (2,0 l) y se lavó con salmuera (2 l) y la fase orgánica se lavó con salmuera (500 ml). Después, las fases ac. combinadas se lavaron con EtOAc (500 ml). Después, las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (3 x 750 ml). La segunda mitad de la masa de reacción se trató de una manera idéntica y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron, dando (7R,8S)-8-{(3S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il}-1,4-dioxa-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de etilo 4 en forma de un aceite ligeramente coloreado (56,5 g, 0,13 M, pureza al 100% de área) puro mediante análisis por RMN. RMNH: (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,38-7,30 (m, 5H), 5,37 (d a, J 4,0 Hz, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,27-4,18 (m, 1H), 4,17-3,82 (m, 8H), 3,32 (t d, J 10,0 Hz, 60,0 Hz, 1H), 3,23 (c, J 5,0 Hz, 1H), 2,63-2,57 (m, 1H), 2,42-2,25 (m, 2H), 1,94-1,68 (m, 5H), 1,25 (t, J 7,0 Hz, 3H). HPLC: YMC-Pack Pro C18 5 \mum 4,6 x 150 mm, TFA al 0,05% (MeOH al 20%, H_{2}O al 80%), al TFA al 0,05% (MeOH al 20%, MeCN al 80%), gradiente de 10 min al 0-100%. 8,99 min (Compuesto 5, producido en una columna, 4,2AP), 9,48 (Compuesto 4, 74,3AP). EMAR: mlz 447,2127 [Calc: C_{23}H_{31}N_{2}O_{7} 447,2131].
6
Ejemplo 1, Etapa 9d alternativa: Se disolvió pirrolidinona 4 (50,0 g, 0,11 M) en acetona (500 ml) y se añadió HCl 1 N (500 ml). Después, la masa de reacción se calentó a 65ºC. Después de 20 min, el análisis por HPLC indicó que la reacción se había completado. La masa de reacción se dejó enfriar a la TA y la acetona se retiró en un evaporador rotatorio. Durante esta destilación, el producto precipitó a partir de la solución en forma de un sólido de color blanco. Esto se aisló por filtración y la torta se lavó con agua. Después, la torta se secó por destilación azeotrópica con tolueno (3 x 300 ml), dando (1R,2S)-2-((3S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-5-oxo-ciclohexanocarboxilato de etilo 5 en forma de un sólido de color blanco (39,8 g, al 88%, pureza al 97% de área). RMN ^{1}H: (300 MHz, CDCI_{3}) \delta 7,37-7,32 (m, 5H), 6,65 (d a, J 4,0 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,54-4,47 (m, 1H), 4,34-4,26 (m, 1H), 4,18 (dc, J 11,0 Hz, 7,0 Hz, 1H), 4,09 (dc, J 11,0 Hz, 7,0 Hz, 1H), 3,36-3,20 (m, 3H), 2,70-2,35 (m, 6H), 2,05-1,96 (m, 1H), 1,81 (quint., J 1 1,0 Hz, 1H), 1,24 (t, J 7,0 Hz, 3H). HPLC: YMC-Pack Pro C 18 5 \mum 4,6 x 150 mm, TFA al 0,05% (MeOH al 20%, H_{2}O al 80%), al TFA al 0,05% (MeOH 20%, MeCN al 80%), gradiente de 10 min al 0-100%. 8,95 min (Compuesto 5). EMAR: mlz 403,1864 [Calc: C_{21}H27N_{2}O_{6} 403,1869].
7
Ejemplo 1, Etapa 9e alternativa: Se colocaron en un matraz de fondo redondo la ciclohexanona 5 (22,5 g, 0,06 M, 1 equiv.), DMSO (30 ml) y Ti(O-iPr)_{4} (33,7 ml, 0,11 M, 2,04 equiv.). Después, se añadió en una porción N-isopropil-N-metilamina (11,6 ml, 0,1 1 M, 2,0 equiv.). La mezcla se dejó en agitación durante 30 min a la temperatura ambiente antes de enfriarse a una temperatura < 3ºC en hielo/agua. Después, se añadió MeOH (30 ml) seguido de la adición en porciones de NaBH_{4} (4,33 g, 0,11 M, 2,04 equiv.) y se mantuvo a una temperatura < 8ºC. 30 min después de que la adición se completara, la masa de reacción se diluyó con cloruro de metileno (300 ml) y después con NaOH (1 N, 40 ml). La suspensión resultante se filtró a través de Celite y la torta se lavó con cloruro de metileno (100 ml). Las aguas madre resultantes se concentraron a presión reducida y el residuo se disolvió en EtOAc (500 ml). Esta solución se extrajo con HCl 1 N (2 x 400 ml), después las fases acuosas combinadas se basificaron con Na_{2}CO_{3}. La extracción con EtOAc (4 x 250 ml) proporcionó una fase orgánica transparente e incolora que se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró, dando un polvo de color blanco (24,6 g, al 96%, 7:1 de p.d.). Después, este material se suspendió durante una noche en hexano (670 ml). El sólido se aisló por filtración y se secó a presión reducida, dando (1R,2S,SR)-2-((3S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-5-(isopropil-metil-amino)-ciclohexanocarboxilato de etilo 6 en forma de un sólido de color blanco (20,9 g, al 81%, 24:1 p.d.). RMN ^{1}H: (300 MHz, CDCI_{3}) \delta 7,37-7,28 (m, 5H), 5,55 (d, J 4,5,1H), 5,10 (s, 2H), 4,42 (c, J 4,5,1H), 4,23-4,12 (m, 1H), 4,08 (dc, J 10,5, 7,0, 1H), 4,02 (dc, J 10,5, 7,0, 1H), 3,84 (t, J 9,0, 1H), 3,46-3,36 (m, 1H), 3,04 (septuplete, J 6,5, 1H), 2,86-2,80 (m, 1H), 2,63-2,48 (m, 2H), 2,17 (s, 3H, Me), 2,10-1,63 (m, 7H), 1,22 (t, J 7,0, 3H), 1,00 (d, J 6,5, 3H), 0,97 (d, J 6,5, 3H). HPLC: YMC-Pack Pro C18 5 \mum 4,6 x 150 mm, NH_{4}O Ac. 0,01 M (20:80 de MeOH:agua) a NH_{4}OAc 0,01 M (20:5:75 de MeOH:agua:MeCN) gradiente de 15 min del 10 al 100%. 8,23 (Compuesto 6), 8,88 (5-epi-Compuesto 6). EMAR: 460,2798 [Calc: C_{25}H_{38}N_{A}O_{5} 460,2811].
8
Ejemplo 1, Etapa alternativa 9f: El aminoéster 6 (9,76 g, 2,12 mmol) se disolvió en HCl 2 N (80 ml) y después se calentó a \sim55ºC en una atmósfera inerte. La reacción se agitó durante 20 h y después se enfrió a la temperatura ambiente. La solución de reacción se lavó dos veces con tolueno (porciones de 25 ml), se neutralizó a un valor de pH de 6-7 mediante la adición de gránulos de KOH y después se extrajo ocho veces con cloruro de metileno (porciones de 100 ml). Los extractos combinados se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a presión reducida hasta alcanzar un volumen total de 50 ml. Después, la solución concentrada se añadió lentamente a terc-butil metil éter de (300 ml) durante 15 min en un embudo de adición con agitación vigorosa. La suspensión blanca resultante se agitó a la temperatura ambiente durante 1 h, después se enfrió a 0ºC y se agitó durante 1 h. El producto se filtró y se lavó dos veces con metil terc-butíl éter (porciones de 25 ml). El agua de la torta húmeda se retiró por destilación azeotrópica con acetonitrilo (300 ml). El producto se secó a presión reducida, proporcionando ácido (1R,2S,5R)-2-((3S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-5-(isopropil-metil-amino)-ciclohexanocarboxílico 7, (7,69 g, rendimiento del 84%) en forma de una espuma de color blanco. RMN ^{1}H: (400 MHz, 50ºC, CDCl_{3}) \delta 7,44-7,32 (m, 5H), 6,10 (s ancho, 1H), 5,19 (s ap., 2H), 4,42 (dd, J = 15,6, 7,8 Hz, 1H), 4,29-4,23 (m, 1H), 3,68-3,60 (m, 2H), 3,33-3,27 (m, 2H), 3,20 (s ancho, 1H), 2,99 (s ancho, 1H), 2,51 (s, 3H), 2,49-2,45 (m, 3H), 2,33-2,31 (m, 1H), 2,00 (ddd, J = 9,0, 8,6, 3,9 1H), 1,95-1,78 (m, 2H), 1,36-1,21 (m, 6H). CLEM: m/z 432,20 [Calc: C_{23}H3_{4}N_{3}O_{5} 432,25].
9
Ejemplo 1, Etapa alternativa 9g: Se disolvió el aminoácido 7 (6,3 g, 14,7 mmol, 1,0 equiv.) en THF (80 ml) en una atmósfera de N_{2} y se añadió en porciones NaH (584 mg, 14,7 mmol, 1,0 equiv., dispersión al 60% en peso en aceite mineral). Cuando la adición se completó y el desprendimiento de gas había cesado, la masa de reacción se concentró a presión reducida y el sólido resultante se destiló azeotrópicamente con tolueno (50 ml), dando un sólido de color blanco (KF al 0,59% en peso). Este sólido se suspendió en tolueno (100 ml) en una atmósfera de N_{2} y se calentó a 90ºC. Se añadió gota a gota DPPA (3,32 ml, 15,3 mmol, 1,05 equiv.) durante 2 min. Después de \sim5 min, todos los sólidos se habían disuelto y después de 10 min se observó la precipitación de un sólido de color blanco. Después de 30 min, el análisis por HPLC indicó que la reacción se había completado. La masa de reacción se dejó enfriar a la TA antes de filtrarse y la torta se lavó con tolueno. Después, los líquidos se añadieron lentamente en solución de AcOH/Ac_{2}O (80/20,168 ml) a 90ºC. Después de 45 min, el análisis por HPLC todavía indicaba algo de isocianato. Después de 1,15 h, la masa de reacción se enfrió a TA y se diluyó con tolueno (100 ml) y agua (100 ml). La fase orgánica se retiró y el tolueno se lavó con HCl 1 N (1 ml). Después, las fases ac. combinadas se basificaron con K_{2}CO_{3}(s) y se llevaron a un valor de pH de 12 con NaOH (IÓN), manteniendo la temperatura por debajo de 20ºC. Después, la fase ac. se extrajo con cloruro de metileno (4 x 150 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre K_{2}CO_{3} y se concentraron, dando (S)-1-((1S,2R,4R)-2-acetamido-4-(isopropil(metil)amino)ciclohexil)-2-oxopirrolidin-3-ilcarbamato de bencilo 8 en forma de una espuma de color blanco (4,5 g, al 70%, pureza 94AP). La RMN ^{1}H fue idéntica al material obtenido a partir de la ruta que se ha descrito anteriormente (Ejemplo 1, Etapa 9). HPLC: YMC-Pack Pro C18 5 \mum 4,6 x 150 mm, TFA al 0,05% (MeOH al 20%, H_{2}O al 80%), al TFA al 0,05% (MeOH al 20%, MeCN al 80%), gradiente de 10 min al 0-100%. 7,20 min (Compuesto 8), 7,85 min (dímero de urea). EMAR: 445,2809 [Calc: C_{24}H_{37}N_{4}O_{4} 4445,2815].
Preparación alternativa del Ejemplo 1
10
Ejemplo 1, Preparación alternativa, Etapa 1: Se combinó sal de 4-toluenosulfonato (7R,8S)-8-amino-1,4-dioxa-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de etilo 1 (450,1 g) con clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)carbodiimida (236,3 g), 1-hidroxi benzotriazol hidrato (171,9 g), N-carbobenciloxi-L-metionina (333,4 g) y acetonitrilo (3,1 l). A la mezcla agitada se le añadió trietilamina (249,5 g) por debajo de 30ºC. Después de que la reacción se completara (HPLC), la mezcla se diluyó con acetato de etilo (8,2 l) y se lavó con solución de bicarbonato potásico acuoso al 25% (2 x 4,5 l) seguido de agua (4,5 l). La fase orgánica se separó y se concentró a presión reducida, obteniendo una solución de (7R,8S)-8-((S)-2-benciloxicarbonilamino-4-metilsulfanil-butirilamino)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-7-carboxilato de etilo 2 (1,4 l). Se añadió yoduro de metilo (2,39 kg), el recipiente se protegió de la luz y la mezcla se mantuvo en agitación lenta durante aprox. 24 h. Al precipitado amarillo espeso se le añadió terc-butil metil éter (2,7 l) y la mezcla se mantuvo durante aprox. 1 h. El producto se aisló por filtración y la torta se lavó con terc-butil metil éter (2 x 1,4 l) y después se secó al vacío, produciendo yoduro de [(S)-3-benciloxi-carbonilamino-3-((7R,8S)-7-etoxicarbonil-1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilcarbamoil)-propil]-dimetilsulfonio 3 (671,4 g, rendimiento de \sim94%) en forma de un sólido de color blanquecino (pureza del 99% por HPLC).
11
Ejemplo 1, Preparación alternativa, Etapa 2: Se combinaron en un reactor equipado con una torre de lavado la sal sulfonio 3 (619,4 g), carbonato de cesio (416,8 g) y dimetilsulfóxido anhidro (6,2 l) para neutralizar los sulfuros volátiles. Se mantuvo en agitación vigorosa hasta que se obtuvo la conversión completa (HPLC). Se añadió acetato de etilo (12,4 l), seguido de salmuera al 20% (3 l). La fase orgánica se separó, se lavó dos veces con salmuera (2 x 3 l) y se evaporó, obteniendo una solución de (7R,8S)-8-((S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-1,4-dioxa-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de etilo 4 en acetato de etilo (\sim0,8 l). Se añadió acetona (2,55 l) seguido de solución acuosa 0,5 M de ácido clorhídrico (2,3 l). Con buen mezclado, la solución se calentó de 50 a 60ºC hasta que se completó la conversión de 4 a (1R,2S)-2-((S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-5-oxo-ciclohexanocarboxilato de etilo 5 (HPLC). La mezcla se concentró a presión reducida mientras permanecía por debajo de 40ºC, se enfrió a \sim30ºC y se añadió agua (4,1 l). La suspensión resultante se enfrió de 5 a 10ºC y se agitó durante \sim1 hora. El producto se filtró y la torta se lavó con agua (2 x 2,5 l). Después de la destilación, la torta se secó a un peso constante por debajo de 40ºC en un horno de vacío. Se obtuvo ciclohexanona 5 (272 g, rendimiento del 70%) (pureza del 98,7% por HPLC).
12
Ejemplo 1, Preparación alternativa, Etapa 3: Se disolvió la ciclohexanona 5 (206 g) en diclorometano (1,1 l) y se cargó en un hidrogenador. Se añadieron tetraisopropóxido de titanio (218,2 g) y N-isopropil N-metilamina (63,64 g) y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente (de 23 a 25ºC) durante al menos 5 h. Se añadió catalizador de platino (Pt al 5%/S/C, 15 g, aprox. al 7,5% con relación a 5) y se realizó la hidrogenación a \sim30 psig durante al menos 6 h, produciendo una mezcla de (1R,2S,5R)-2-((S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-5-(isopropil-metil-amino)-ciclohexanocarboxilato de etilo 6 y su 5-epi-isómero (\sim7%). El catalizador se retiró por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida hasta alcanzar un volumen de aprox. \sim600 ml. Se añadió acetato de etilo húmedo (agua al \sim3%, 2,0 l) con agitación vigorosa durante un periodo de al menos 1,5 h. La agitación se continuó durante al menos 6 h más. La suspensión se filtró. La torta de filtro se lavó con acetato de etilo (1,0 l) y se desechó. El filtrado y los lavados combinados se concentraron hasta alcanzar un volumen de \sim400 ml. Se añadió tolueno (2,0 l) y la solución se lavó con ácido clorhídrico acuoso 2 M (2 x 400 ml). La fase acuosa se calentó de 50º a 60ºC durante aprox. 20 h o hasta que la hidrólisis de 6 se consideró completa (HPLC). Se añadió una solución acuosa de hidróxido sódico hasta ajustar el pH a un valor de \sim10 y la mezcla se extrajo con tolueno (3 x 600 ml). La fase orgánica se descartó y el pH se reajustó a un valor de \sim6 mediante la adición de ácido clorhídrico acuoso. La fase acuosa se concentró hasta alcanzar un volumen de \sim600 ml a presión reducida y se extrajo con cloruro de metileno (al menos 3 x 2,0 l). Las fases de cloruro de metileno combinadas se evaporaron a presión reducida y se reemplazaron continuamente con THF, obteniendo una solución de ácido (1R,2S,5R)-2-((S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-5-(isopropil-metil-amino)-ciclohexano carboxílico 7 (\sim14R g) en THF (\sim4 l). Se añadieron los cristales seminales de 8, seguido de solución de metóxido sódico al 25% en metanol (81,24 g) por debajo de 25ºC. La suspensión se mantuvo en agitación durante al menos 16 h más. El producto se aisló por filtración y la torta se lavó con THF (4 x 200 ml) y se secó hasta alcanzar un peso constante al vacío por debajo de 30ºC. Se obtuvo sal sódica de (1R,2S,5R)-2-((S)-3-benciloxicarbonilamino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-5-(isopropil-metil-amino)-ci-clohexano-carboxilato 8 seco (139 g, rendimiento de \sim60% del 5).
13
Ejemplo 1, Preparación alternativa, Etapa 4: Se combinaron la sal sódica de aminoéster 8 (100 g), fosfato de difenilo (3,86 g), terc-BuOH (1275 ml) y tolueno (225 ml) y se calentaron a reflujo a presión reducida. Se recogieron aprox. 500 ml del destilado y se descartaron mientras se reemplazaba continuamente con una solución de tolueno en terc-BuOH. Se retiró al vacío y el destilado se cambió por inactivó con percolato a través de una columna cargada con tamices moleculares y se dejó regresar al recipiente. Después de que se completara el secado, a la suspensión se le añadió lentamente DPPA (52,4 ml; disuelto en 60 ml de tolueno) a 80ºC. Tras completarse la conversión (HPLC), el terc-BuOH se retiró por destilación al vacío y se reemplazó continuamente con tolueno. La mezcla se enfrió a la temperatura ambiente y se lavó dos veces con K_{2}HPO_{4} acuoso al 10% (1 x 800 ml, 1 x 400 ml) y agua (400 ml). La fase orgánica se calentó y se concentró al vacío hasta alcanzar un volumen de aprox. 270 ml. Se retiró al vacío y se añadió lentamente heptano (1,1 l) a aprox. 80ºC, seguido de cristales seminales de 9 (\sim1 g). La suspensión se enfrió lentamente a la temperatura ambiente y se aisló por filtración {(S)-1-[(1S,2R,4R)-2-terc-butoxicarbonilamino-4-(isopropil-metil-amino)-ciclo-hexil]-2-oxo-pirrolidin-3-il}-carbamato de bencilo 9 en forma de un sólido de color blanco (86,76 g, rendimiento del 78%).
14
Ejemplo 1, Preparación alternativa, Etapa 5: El carbamato de terc-butilo 9 (50 g) se disolvió en Tolueno (500 ml) e i-PrOH (150 ml). Después, la solución resultante se calentó a 60ºC. Se añadió ácido metanosulfónico (19,6 ml) por debajo de 65ºC. Después de que la reacción se completara (HPLC), la mezcla se enfrió a la TA y se añadió lentamente trietilamina (69,4 ml) por debajo de 25ºC. Después, se añadió anhídrido acético por debajo de 25ºC. Después de 1 h, se añadió ácido acético (250 ml) por debajo de 25ºC. La fase de tolueno se descartó y a la fase acuosa se le añadió 2-metil-THF (500 ml). La mezcla se agitó vigorosamente y se basificó con NaOH (solución acuosa al 25%) a un valor de pH de 12. La fase acuosa se descartó y la fase orgánica se lavó con salmuera (250 ml). La fase orgánica se concentró a presión reducida y se reemplazó continuamente con i-PrOH. La solución se enfrió y se filtró, proporcionando {(S)-1-[(1S,2R,4R)-2-acetilamino-4-(iso-propil-metil-amino)-ciclohexil]-2-oxo-pirrolidin-3-il}-carbamato de bencilo 10 en solución de i-PrOH que se usó directamente en la hidrogenación.
Ejemplo 1, Preparación alternativa, Etapa 6: A una solución que contenía la acetamida 10 (\sim61 g) en i-PrOH (\sim625 ml) se le añadió catalizador húmedo Pd al 10%/C (2,5 g) y la suspensión se hidrogenó a 30 psig y aprox. 25ºC durante al menos 2 h. Después de que se completara (HPLC), el catalizador se retiró por filtración y el filtrado se concentró hasta alcanzar un volumen de aprox. 550 ml. Se añadió agua (8,8 ml) seguido de ácido clorhídrico 5,6 N en solución de i-PrOH (69,5 ml). La suspensión resultante se mantuvo a la temperatura ambiente durante una noche. El producto se aisló por filtración y la torta se aclaró con i-PrOH (2 x 100 ml) y se secó al vacío hasta alcanzar un peso constante a \sim50ºC, dando N-[(1R,2S,SR)-2-((S)-3-amino-2-oxo-pirrolidin-1-il)-5-(isopropil-metil-amino)-ciclohexil]-acetamida 11 (55,6 g, rendimiento del 97%) en forma de su sal de ácido clorhídrico (ensayo de base libre al 73,6%, HPLC).
15
Ejemplo 1, Preparación alternativa, Etapa 7: Al 6-trifluorometil-quinazolin-4-ol 12 (20,1 g) en MeCN (400 ml) se le añadió una solución 5,5 M de metóxido sódico en metanol (17,0 ml). La suspensión resultante se destiló a presión reducida y se reemplazó continuamente por MeCN para retirar el metanol. A la suspensión se le añadió DMF (1,4 g), seguido de cloruro de oxalilo (13,0 ml) por debajo de 50ºC. Después de que se completara la reacción (HPLC), el exceso de reactivo se retiró a presión reducida, dando \sim400 ml de la suspensión. La mezcla se enfrió a la temperatura ambiente y se lavó con K_{2}HPO_{4} acuoso al 10% (1 x 1,0 l, 1 x 0,5 l), proporcionando 4-cloro-6-trifluorometil-quinazolina 13 (\sim21,2 g) en aprox. 450 ml de solución húmeda de MeCN, que se usó directamente en la reacción de acoplamiento posterior (pureza del 99,8% por HPLC).
Ejemplo 1, Preparación alternativa, Etapa 8: A una mezcla de acetamida 11 (28,5 g, sal HCl, ensayo de base libre al 73,6%), acetonitrilo (100 ml), N,N,-di-isopropil-N-etilamina (61 ml) a la temperatura ambiente se le añadió una solución de 13 (\sim21,2 g) en MeCN (\sim450 ml). La mezcla homogénea se mantuvo durante una noche. Después que se completara la reacción (HPLC), la mezcla se concentró al vacío hasta alcanzar un volumen de aprox. 125 ml. Se añadió una solución acuosa al 9,5% de ácido acético (240 ml) y la fase acuosa se extrajo con cloruro de metileno. La fase acuosa se separó y se añadió terc-butil metil éter (450 ml), seguido de solución acuosa 2 N de hidróxido de litio para ajustarla a un valor de pH > 11,5. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y se filtró. Aproximadamente, la mitad de la fase de éter se diluyó con terc-butil metil éter (\sim250 ml) y se concentró al vacío. Se añadió lentamente heptano (45 ml) a menos de 60ºC, seguido de cristales seminales del Ejemplo 1 (0,4 g). Se añadió más heptano (125 ml), la mezcla se enfrió lentamente a la temperatura ambiente y la suspensión resultante se mantuvo durante una noche. El producto se aisló por filtración y la torta se lavó con heptano y se secó al vacío hasta peso constante, dando N-((1R,2S,5R)-5-(isopropilamino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)-quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida 14 (15,0 g, rendimiento del 85%).
Procedimientos de cristalización para el Ejemplo 1
Ejemplo 1, Producción de sal de bis-ASB y purificación: La totalidad de la base libre amorfa del ejemplo Ejemplo 1, Etapa 11 se disolvió en metanol (600 ml). La solución resultante se calentó a 60ºC y se cargó con ácido bencenosulfónico (2,5 equiv.). La mezcla se enfrió a la temperatura ambiente y el solidó blanco resultante se recogió por filtración, produciendo la sal del ácido bis-benceno sulfónico del compuesto del título (95 g, al 86%). Este material tenía una pureza > 99% por HPLC. Este material se purificó adicionalmente por recristalización en 80/20 de EtOH/H_{2}O, que proporcionó la sal libre de cualquier metanol residual. pureza por HPLC = 99,8%. RMN ^{1}H (500 MHz, D_{2}0) \delta ppm 8,75 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,25 (1H, d, J = 8,80 Hz), 7,90 (1H, d, J = 8,80 Hz), 7,75 (4H, d, J = 8,25 Hz), 7,43-7,57 (6 H, m), 5,42 (1H, t), 4,33-4,44 (1H, m), 4,09-4,19 (1H, m), 3,83-3,91 (1H, m), 3,74-3,83 (2H, m), 3,61 (1H, t, J = 1 1,55 Hz), 2,75 (3H, d, J = 6,60 Hz), 2,61-2,70 (1H, m), 2,31-2,44 (1H, m), 2,20-2,27 (1H, m), 2,17 (2H, d, J = 12,10 Hz), 1,94-2,04 (1H, m, J = 12,65 Hz), 1,90-1,95 (3H, m), 1,72 -1,91 (2H, m), 1,37 (3H, d, J = 6,05 Hz), 1,29 (3H, d, J = 6,60 Hz). La calorimetría diferencial de barrido utilizó una velocidad de calentamiento 10ºC/min y reveló una endoterma de fusión/descomposición con una temperatura inicial de 297,6ºC y un pico de temperatura a 299,1ºC.
Ejemplo 1, Cristalización de la Base Libre: Una muestra de la base libre amorfa de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida (1 g) se disolvió en diclorometano (5 ml). La solución se cargó con heptano (30 ml) y después se calentó para destilar el diclorometano. La solución se enfrió a 40ºC y precipitó un sólido de color blanco. La suspensión se calentó a 90ºC y se agitó durante 2 h. La suspensión se enfrió a la temperatura ambiente y se filtró, proporcionando la base libre del compuesto del título. No quedó evidencia de ningún disolvente residual por RMN ^{1}H.
Ejemplo 2 Formas cristalinas de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida
Diversas formas de cristal de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, incluyendo la base libre y las formas de sal y solvatos de la misma, se prepararon y se caracterizaron como se divulga a continuación.
Procedimientos de Caracterización de las Formas Datos de un monocristal
Los datos se recogieron en un difractómero Bruker-Nonius (BRUKER AXS, Inc., 5465 East Cheryl Parkway Madison. Documento Wl 53711 Estados Unidos) de serie CAD4. Los parámetros de celdilla unitaria se obtuvieron a través de análisis por mínimos cuadrados de los ajustes del difractrómetro experimental de 25 reflexiones de ángulo elevado. Las intensidades se midieron usando radiación Cu K\alpha (\lambda = 1,5418 \ring{A}) a una temperatura constante con la técnica de barrido variable de \theta-2\theta y se corrigieron sólo para los factores de polarización de Lorentz. Los recuentos de fondo antecedentes se recogieron en los extremos del barrido para la mitad del tiempo del barrido. Como alternativa, se recogieron los datos de un monocristal en un sistema Bruker-Nonius Kappa CCD 2000 usando radiación Cu K\alpha (\lambda = 1,5418 \ring{A}). La indexación y el procesamiento de los datos de intensidad medidos se realizaron con el paquete de software HKL2000 (Otwinowski, Z. & Minor. W. (1997) en Macromolecular Crystallography, eds. Carter, W.C. Jr & Sweet, R.M. (Academic. Nueva York), Vol. 276, pp. 307-326) en el conjunto de programas Collect. (Collect Data collection and processing user interface: Collect: Data collection software, R. Hooft, Nonius B.V., 1998,). Como alternativa, los datos de un monocristal se recogieron en un sistema Bruker-AXS APEX2 CCD usando radiación Cu K\alpha (\lambda = 1,5418 \ring{A}). La indexación y el procesamiento de los datos de intensidad medidos se realizaron con el paquete de software/conjunto de programas APEX2 (APEX2 Data collection and processing user interface: APEX2 User Manual, v1.27; BRUKER AXS, Inc., 5465 East Cheryl Parkway Madison, Wl 5371 Estados Unidos).
Cuando se indicó, los cristales se enfriaron en la corriente fría de un sistema Oxford cryo (Oxford Cryosystems Cry-ostream cooler: J. Cosier and A.M. Glazer, J. Appl. Cryst., 1986, 19, 105) durante la recogida de datos.
Las estructuras se disolvieron mediante procedimientos directos y se refinaron en base a las reflexiones observadas usando el paquete de software SDP (SDP, Structure Determination Package, Enraf-Nonius, Bohemia NY 11716, Factores de dispersión, incluyendo f y f, en el programa SDP se tomaron "InternationalTablasforCrystallography", Kynoch Press, Birmingham, England, 1974; Vol. IV, Tablas 2,2A and 2,3,1) con pequeñas modificaciones locales o los paquetes cristalográficos MAXUS (solución maXus y refinamiento de paquete de software: S. Mackay, C.J. Gilmore, C. Edwards, M. Tremayne, N. Stewart, K. Shankland. maXus: a computer program for la solución and refinement of crystal structures from diffraction data o SHELXTL^{4}. Los parámetros atómicos de derivación (factores de coordinación y temperatura) se refinaron a través de una matriz de mínimos cuadrados completa. La función minimizada en los refinamientos fue \Sigma_{w}(|F_{O}| - |F_{C})^{2}R se definió como \Sigma ||F_{O}| - |F_{C}||/\Sigma |F_{O}| mientras R_{m} = [\Sigma_{w}(|F_{O}| - |F_{C}|)^{2}/\Sigma_{w} |F_{O}|^{2}]^{1/2} en la que w es una función de ponderación apropiada basada en los errores de intensidades observados. Mapas diferentes se examinaron en todas las etapas de refinamiento. Se introducieron hidrógenos en posiciones ideales con factores de temperatura isotrópicos, pero no se variaron los parámetros de hidrógeno.
Datos de Difracción de Rayos X en Polvo (DPXRD)
Los datos PXRD se obtuvieron usando un Bruker C2 GADDS. La radiación era Cu K\alpha (40 KV, 50 mA). La distancia entre la muestra y el detector era de 15 cm. Las muestras en polvo se colocaron en capilares de vidrio sellados de 1 mm o menos de diámetro; el capilar se hizo rotar durante la recogida de datos. Los datos se recogieron durante 3 \leq 2\theta \leq 35º con un tiempo de exposición de muestra de al menos 2000 segundos. Los arcos de difracción bidimensionales resultantes se integraron para crear un patrón PXRD unidimensional con un tamaño de etapa de 0,02 grados 2\theta en el intervalo de 3 a 35 grados 2\theta. Se cargaron aproximadamente 200 mg en un portamuestras de difracción de rayos X en polvo Philips (DPXRD). La muestra se transfirió a una unidad Philips MPD (45 KV, 40 mA, Cu K\alpha). Los datos se recogieron a la temperatura ambiente en el intervalo 2 a 32 2-theta (modo de barrido continuo, intervalo de barrido 0,03 grados/s, divergencia automática y rendijas antidispersión, rendija receptora: 0,2 mm, centrífuga de muestra: conectada)
Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC)
Los experimentos de DSC se realizaron en un Instruments^{TM} TA modelo Q1000 ó 2920. La muestra (aproximadamente 2-6 mg) se pesó en un recipiente de aluminio y se registró con una precisión de una centésima de miligramo y se transfirió al DSC. El instrumento se purgó con gas nitrógeno a 50 ml/min. Los datos se recogieron entre la temperatura ambiente y 300ºC a una velocidad de calentamiento de 10ºC/min. La representación se hizo con los picos endotérmicos orientados hacia abajo.
Análisis Termogravimétrico (ATG)
Los experimentos ATG se realizaron en un Instruments^{TM} TA modelo Q500 ó 2950. La muestra (aproximadamente 10-30 mg) se colocó en un recipiente de platino previamente tarado. El peso de la muestra se midió con precisión y se registró hasta milésimas de miligramo con el instrumento. El horno se purgó con gas nitrógeno a 100 ml/min. Los datos se recogieron entre temperatura ambiente y 300ºC a una velocidad de calentamiento de 10ºC/min.
Preparación y Análisis de las Formas
Los datos de celdilla unitaria y otras propiedades de estos ejemplos se presentan en la Tabla 1. Los parámetros de celdilla unitaria se obtuvieron a partir de análisis cristalográfico por rayos X de un monocristal. Una explicación detallada de celdillas unitarias se puede encontrar en el capítulo 3 de Stout & Jensen, X-Ray Structure Determination: a Practical Guide, (MacMillian, 1968).
Las coordenadas atómicas fraccionarias para los Ejemplos 2a, b, c, d, e, f, g y h, se presentan en las Tablas 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 y 9, respectivamente.
Además, las posiciones características de los picos de difracción de rayos X en polvo (grados 2\theta \pm 0,1) a TA para los Ejemplos 2a, b, d, e, f, g, y h, se presentan en la Tabla 10, todo lo cual está basado en patrones de alta calidad recogidos con un difractrómetro (CuK\alpha) con un capilar para centrífuga con calibrado 2\theta con NIST de otro patrón adecuado.
Finalmente, las Figuras 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 7 presentan patrones de PXRD para los Ejemplos 2a, b, d, e, f, g y h, respectivamente. Las Figuras 8 y 9 divulgan los análisis DSC y ATG, respectivamente, del Ejemplo 2a y las Figuras 10, 11 y 12 divulgan los de DSC, ATG y espectro de Isoterma de Absorción de Humedad del Ejemplo 2f, respectivamente.
Preparación de las Formas, caracterización por XRD, DSC y ATG
Ejemplo 2a, Forma N-1, dibesilato:
N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)
ciclohexil)acetamida, sal del ácido di-benceno sulfónico, se cristalizó a partir de acetato de etilo, etanol, metanol y acetona. La forma N-1, sal dibesilato, es la forma pura (sin moléculas de agua o disolvente) a partir de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida,
sal del ácido di-benceno sulfónico. La forma N-1, dibesilato, se caracterizó por un patrón XRD que coincide con el patrón simulado generado a partir de la estructura de monocristal. La forma N-1, dibesilato, se caracterizó por un termograma DSC que tenía una endotermia de fusión/descomposición ajustada típicamente a aproximadamente 296ºC. La forma N-1, dibesilato, se caracterizó por una curva térmica ATG que tenía una pérdida de peso insignificante (consistente con una forma no solvatada) hasta alcanzar aproximadamente 280ºC.
Ejemplo 2b, Forma DC-1:
Una muestra de base libre oleosa, de tipo gel (amorfa) de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida (aprox. 0,5 g), después de extraerla de una muestra de la sal BSA, se disolvió en diclorometano (aprox. 3 ml). A la solución se le añadieron aprox. 5 ml de heptano y la mezcla oleosa resultante se agitó vigorosamente mediante una barra de agitación magnética en un vaso de precipitados abierto a 20-25ºC. Después de que los disolventes se evaporaran se obtuvo un sólido blanco. El sólido se resuspendió en la mezcla de aprox. 5 ml de heptano y 0,2 ml de diclorometano y se agitó a 25ºC durante 7 días. La suspensión resultante se filtró y se secó al aire, proporcionando N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, Forma DC-1 como base libre. La Forma DC-1 se caracteriza por un mol de diclorometano por un mol de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre. La Forma DC-1, se caracterizó por un patrón XRD que coincide con el patrón de simulación generado a partir de los datos de la estructura de un monocristal.
Ejemplo 2c, Forma THOO-1:
Se disolvió 1 mg de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre, en 80 ul de TNF. El disolvente se retiró mediante Speed-Vac (SpeedVac Plus, SC250DDA, Savant/ThermoElectron Corp) a alto vacío a 22ºC durante 16 horas. Un total de 100 ul de MIBK/Heptano (1/2 en volumen) se cargó a este pocillo. Después de mantenerlo durante 2 semanas a la temperatura ambiente (20-25ºC), se observaron cristales en este pocillo. La Forma THOO se caracteriza por un mol de THF por un mol de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil (metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre.
Ejemplo 2d, Forma E-1:
N-((1R,2S,SR)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)
ciclohexil)acetamida, la base libre se cristalizó en una solución de etanol y heptano. La Forma E-1 se caracteriza por un mol de etanol por un mol de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre. La Forma E-1 se caracterizó por un patrón XRD que coincide con el patrón generado a partir de los datos de estructura de un monocristal.
Ejemplo 2e, Forma A-1:
N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)
ciclohexil)acetamida, base libre, se suspendió en una concentración en exceso de 150 mg/ml en acetona. La suspensión se dejó equilibrar a la temperatura ambiente, proporcionando suspensión un tanto diluida. Parte de la suspensión se filtró y, tanto el filtrado como la suspensión, se refrigeraron a 5ºC, proporcionando cristales de la mono acentona soluto (A-1). La Forma A-1 se caracteriza por un mol de acetona por un mol de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre. La base libre de la Forma A-1 se caracterizó por un patrón XRD que coincide con el patrón de simulación generado a partir de los datos de estructura de monocristal.
Ejemplo 2f, Forma N-2:
Una muestra de la base libre oleosa (amorfa) de tipo gel, de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida (aprox. 0,5 g), extraída de una muestra de la sal BSA, se suspendió en heptano (aprox. 5 ml). El matraz se raspó con una espátula metálica y la suspensión se agitó vigorosamente mediante una barra de agitación magnética a 25ºC. Después de 24 horas de agitación, se obtuvo una suspensión blanca de partículas cristalinas. La suspensión se filtró y la torta húmeda se secó al vacío (40ºC), proporcionando la forma N-2 pura (confirmada por DPXRD) de la base libre. La Forma N-2 se caracterizó por un patrón XRD que coincide con el patrón generado a partir de los datos de la estructura de monocristal. La Forma N-2 es la forma pura (sin moléculas de solvato o sin moléculas de agua o disolvente) de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre. La Forma N-2, se caracterizó por un termograma de DSC que tenía un inicio de endotermia en estado fundido a aprox. 158ºC a aprox. 162ºC. La Forma N-2 se caracterizó por una curva térmica ATG que tenía una pérdida de peso insignificante hasta aproximadamente 145ºC que coincide con los datos de la estructura de un monocristal. La pérdida de peso correspondía al disolvente adventicio. La isoterma de absorción de humedad se caracterizó por una ganancia del 0,15% en peso en el intervalo de aprox. 25% a aprox. 75% de H a 25ºC indicando que la forma N-2 forma era ligeramente higroscópica (1 querría decir muy ligeramente o no higroscópica).
Ejemplo 2g, Forma AN-3:
Una suspensión de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-((6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre, a \sim200 mg/ml, se preparó en acetonitrilo y se dejó equilibrar a la temperatura ambiente, proporcionando una suspensión un tanto diluida. Parte de la suspensión se filtró y, tanto el filtrado como la suspensión, se refrigeraron a 5ºC, proporcionando cristales acetonitrilo solvato (AN-3). La Forma AN-3 se caracteriza por un mol de acetonitrilo por un mol de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, base libre. La Forma AN-3 se caracterizó por un patrón XRD que coincide con el patrón generado a partir de los datos de la estructura de monocristal.
Ejemplo 2h, Forma H4-1, HCl:
Una muestra de la base libre de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida (aprox. 0,2 g) se disolvió en etanol (aprox. 1 ml). A la solución de base libre se le añadieron aprox. 310 \mul de solución de HCl en etanol (concentración aprox. 1,25 M). La solución se sembró con una pequeña cantidad de suspensión de cristales de la sal HCl. A la solución turbia resultante se le añadieron 3 ml de heptano. Una suspensión blanca se desarrolló gradualmente durante 1-2 horas mientras se agitaba a 20-25ºC. La suspensión se agitó a 20ºC durante 12 horas más, se filtró y se lavó con heptano. La torta húmeda se secó al vacío (40ºC), proporcionando la sal HCl tetrahidrato, forma H4-1, HCl. La Forma H4-1, HCl, se caracteriza por tener 4 moles de agua por un mol de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, sal clorhidrato. La Forma H4-1, sal HCl tetrahidrato, se caracterizó por un patrón SRD coincide con el patrón generado a partir de los datos de la estructura de monocristal.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 1 Parámetros de la celdilla unitaria
16 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 1 (continuación) Parámetros de celdilla unitaria
17 
\newpage
Las variables usadas en la Tabla 1 se definen a continuación:
T = temperatura en grados Centrígrados para los datos cristalográficos (TA es temperatura ambiente, que es aproximadamente +22ºC)
V = volumen de celdilla unitaria
Z' = número de moléculas de fármaco por unidad asimétrica
Vm = V (celdilla unitaria)/(Z moléculas de fármaco por celdilla)
ge = Grupo espacial
dcalc = densidad de cristal calculada
TABLA 2
18
19
TABLA 3
20
21 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 4
22
23 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 5
24
25
26 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 6
27
28 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 7
29
30
31
TABLA 8
32
33 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 9
34
35 
\newpage
Posiciones características de los picos de difracción de rayos X en polvo (grados 2\theta \pm 0,1) @ TA para los Ejemplos 2a, b, d, e, f, g y h, basadas en un patrón de alta calidad, recogidas con un difractrómetro (CuK\alpha) con un capilar para centrífuga con calibrado 2\theta con un NIST de otro patrón adecuado.
TABLA 10
36 
\vskip1.000000\baselineskip
Características farmacológicas comparativas
Los ensayos y los datos que comparan las características farmacológicas del Ejemplo 1 y los compuestos que se encuentran en el documento WO2005021500 (que corresponde a la Patente de Estados Unidos Nº 7.163.937 asignado al presente Solicitante) se presentan a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
Unión celular mononuclear de sangre periférica humana ("Unión a CCR2")
Véase también: Yoshimura y col., J. Immunol. 1990, 145, 292. El ensayo de unión a CCR2 humano se estableció con células mononucleares de sangre periférica humana (CMSPh) usando ^{125}I-MCP-1 humana como el ligando indicador. Las CMSPh se aislaron a partir del leukopak humano (Biological Specialty Inc.) usando un protocolo convencional con Ficoll-Hypaque (Mediatech Cellgro). Las CMSPh aisladas se lavaron y diluyeron hasta 1 x 10^{7}/ml en tampón de unión (RPMI-1640, 0,1% de ASB, Hepes 20 mM, pH 7,4). ^{125}I-MCP-1 (NEN/Perk Elmer) se diluyó hasta 0,45 nM en tampón de unión. El compuesto se diluyó en tampón de unión a 3 veces las concentraciones usadas en el ensayo de unión. El ensayo de unión se realizó usando una placa de filtro de 96 pocillos (Millipore). La unión total de ^{125}I-MCP-1 se evaluó de la siguiente manera: a cada reacción de un volumen total de 150 \mul se le añadieron 5 x 10^{5} células, ^{125}I-MCP-1 0,15 nM y compuestos de modo que la concentración final varió desde 0 hasta 100 nM. Se incubó la placa a temperatura ambiente durante 30 minutos seguido de tres lavados con RPMI-1640, 0,1% de ASB, NaCl 0,4 M, Hepes 20 mM, pH 7,4 usando una filtración por colector de vacío (Millipore). Después de lavar, la placa se secó por aire durante 60 minutos a temperatura ambiente. Después de esto, se añadió 25 \mul de Microscint 20 en cada pocillo. Se cerró la placa y se contó en el Trilux durante 1 minuto. La unión no específica se determinó en presencia de MCP-1 frío 300 nM (PeproTech Inc.). El ^{125}I-MCP-1 específico se calculó como la diferencia entre la unión total y la no específica. Todas las condiciones se ensayaron por duplicado. La CI50 se define como la concentración de compuesto competidor que se necesita para reducir la unión específica en el 50%.
\vskip1.000000\baselineskip
Flujo hERG
Se cultivaron las células HEK293 que expresaban establemente los canales hERG (37ºC, al 5% de CO_{2}) en medio de Eagle Modificado por Dulbecco suplementado con el 10% de suero bovino fetal Sigma, aminoácidos no esenciales, L-glutamina 2 mM y 500 \mug/ml de G418, en la incubadora. El tampón de disociación celular se usó para extraer las células de los matraces, que después se sembraron en placas Corning blancas/negras de 384 pocillos recubiertas de poli-D-lisina a una densidad de 2 x 10^{4} células por pocillo (20 \mul) en el 10% de medio de suero y se incubaron durante 15-24 horas a 37ºC en una incubadora con el 5% de CO_{2} hasta que se obtuvo una monocapa de células confluentes.
Una solución madre de colorante BTC-AM 2 mM (Molecular Probes, Eugene, OR) se preparó en el 100% de DMSO y después se añadió 1:1 al 10% de ácido plurónico (p/v) el día del ensayo. Después se diluyó el colorante en tampón externo hERG EP (NaCl 140 mM, KCl 4,0 mM, CaCl_{2} 1,8 mM, MgCl_{2} 1,0 mM), HEPES 10 mM, pH 7,3 y glucosa 10 mM; todos los componentes del tampón se obtuvieron de Sigma Chemical). Esta mezcla de colorante BTC (30 \mul) se añadió a las células y produjo una concentración de carga final 2,5 \muM. Las células se incuban a 21ºC durante 45 minutos.
Los compuestos de ensayo se diluyeron hasta DMSO 10 mM en 60 \mul. Estos compuestos después se diluyeron en serie a una proporción de 1:2 en DMSO en las columnas 1-10 y 11-20 de una placa de 384 pocillos. Las placas de lectura de los ensayos se generaron mediante el estampado de 2,5 \mul de la placa diluida en serie de DMSO, que se preparó en el Velocity 11 BioCel. Las placas acuosas se crearon añadiendo 48 \mul de tampón EP y después se diluyeron 30-45 minutos antes de que se leyera el ensayo en el FLIPR. Después de la carga del colorante, los compuestos en dilución acuosa se añadieron a las células de las tres placas replicadas (10 \mul) produciendo un intervalo de concentración de diez puntos de 80 \muM a 0,156 nM. La concentración final de DMSO en el ensayo es del 1%. Las placas acuosas de lectura del ensayo se prepararon y diluyeron en un manipulador de líquidos Cybio.
Las células cargadas con el colorante se leyeron en el FLIPR384 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA), que excita el colorante usando la longitud de onda de 488 nm de un laser de argón. Se filtró la emisión usando un filtro de paso banda de 540 \pm 30 nm. Los canales hERG se estimulan para abrirse mediante la adición de 20 \mul/pocillo de tampón EP que contiene K_{2}SO_{4} 66 mM y ThSO_{4} 1,3 mM (Sigma/Aldrich). Para cada placa, se recogieron los datos cada segundo durante un periodo de 12 segundos, a los que se añadió el tampón que contiene TI^{+} estímulo. La recogida de datos transcurrió cada segundo durante 48 segundos y después continuó cada tres segundos durante dos minutos adicionales.
El intervalo dinámico del ensayo se determinó a partir de blancos y pocillos totales. Los pocillos totales (columnas 21 y 22) definen la máxima activación de hERG para la placa (sin compuesto de ensayo presente) y los pocillos blancos (columnas 23 y 24) definen el 100% de la inhibición de hERG. Los pocillos blancos contienen 400 nM de los inhibidores convencionales de hERG dofetilida (Ficker y col., 1998) o E-4031. Los puntos de datos sin procesar de cada pocillo de muestra se corrigieron primero para la variación de la célula/señal, en fondo de control negativo (blancos) y se normalizaron a los controles positivos (totales) usando el software en línea FLIPR. Las curvas de respuesta de la concentración de los compuestos de ensayo para el flujo de datos hERG Tl^{+} se ajustaron después usando el Excel Fit (ID Business Solutions Limited, Surrey, Reino Unido) con una ecuación logística de sitio único, Y = A + ((B-A)/1 + ((C/X)^D))) en la que A = máxima inhibición. Se analizaron los datos mediante el ajuste de las amplitudes máximas de cambio en la fluorescencia para el flujo TI^{+} para una condición dada de un compuesto de ensayo. Las potencias (valores de CI_{50}) de los compuestos se calcularon a partir de la media de pocillos triplicados.
\vskip1.000000\baselineskip
Canal de sodio, ensayo de unión al sitio 2
Véase también: W. A. Catterall, y col., J. Biol. Chem. 1981, 256, 8922. El tampón de unión convencional contenía HEPES 50 mM, Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, Cloruro de Colina 130 mM, KCl 5,4 mM, MgCl_{2} 0,8 mM, glucosa 5,5 mM, 40 \mug/ml de LqT. Las reacciones de unión se iniciaron mediante la adición de sinaptosomas (preparado a partir de cerebro de rata Wistar) a la mezcla de reacción que contenía [^{3}H]-Batracotoxina 5 nM en un tampón de unión convencional y el compuesto a ensayar a la concentración deseable. Después se mezclaron las muestras y se incubaron a 37ºC durante 60 minutos. Se pararon las reacciones al añadir tampón de lavado helado que contenía HEPES 50 mM, Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, CaCl_{2} 1,8 mM, MgCl_{2} 0,8mM y 1 mg/ml de albúmina de suero bovino. Los sinaptosomas se recogieron de manera inmediata en filtros de fibra de vidrio y se lavaron tres veces con tampones de lavado. La radiactividad de [^{3}H]-Batracotoxina que permaneció en los filtros se recontó usando espectrómetros de centelleo líquido.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo de Permeabilidad de Membrana Artificial Paralelo (EPMAP)
El ensayo de permeabilidad de membrana artificial paralelo (EPMAP) está constituido por una combinación lipídica basada en lecitina especialmente formulada denominada como el lípido del tracto gastrointestinal (TGI). El lípido de TGI se usa para formar una membrana en un conjunto de placas en sándwich similar a lo usado en los ensayos Caco-2. El lípido de TIG se parece mucho a la composición y funcionamiento de la membrana in vivo como se mide mediante los compuestos patrón que se conoce que se absorben pasivamente en seres humanos. El EPMAP se usa ampliamente como un modelo in vitro para la exploración de la permeabilidad de los compuestos del descubrimiento. El porcentaje de paso de los compuestos a través de la membrana EPMAP se usa para determinar el coeficiente de permeabilidad (Cp), que puede estar relacionado con la permeabilidad pasiva in vivo del compuesto.
El coeficiente de permeabilidad (Cp) de un compuesto particular se examina en un entorno dependiente de pH con pH apical y basolateral de 7,4. Todos los experimentos se realizan en determinaciones por triplicado.
Los compuestos (soluciones madre de 10 mM en el 100% de DMSO) se diluyeron 1:100 en tampón del pocillo donador pH 7,4 (pION CAT Nº110151), proporcionando una solución de ensayo de 100 \muM en el 1% de DMSO. El compuesto diluido en el tampón del pocillo donador se transfirió a una placa Whatman Unifilter y se filtró antes de dispensar 200 \mul en el pocillo donador de la placa de ensayo (plON CAT Nº110163). La membrana EPMAP se formó mediante la toma de 4 \mul con una pipeta de la solución lipídica (plON CAT Nº110169) en la placa de filtro (VWR CAT Nº13503). La membrana después se cubrió con 200 \mul de tampón del pocillo aceptor a pH 7,4 (pION CAT Nº110139). La placa de ensayo EPMAP (lado donador y lado aceptor) se combinó y se permitió incubar a una temperatura ambiente durante 4 horas. La placa después se desmontó y las placas del espectrofotómetro (VWR CAT Nº655801) se rellenaron (150 \mul/pocillo). Las placas donadoras, aceptoras, de referencia y blanco se leyeron en el lector de placas SpectraMax UV. Se recogieron los datos con el software pION, que analiza el espectro y genera valores de Cp.
Quimiotaxis de CCR2
El ensayo de quimiotaxis de CCR2 humano se realizó con la línea celular monolítica humana THP-1. Las células THP-1 se marcaron primero con el colorante fluorescente Calcein-AM en rojo fenol libre, ASB libre RPMI-1640 (pH 7,4) a 37ºC durante 30 minutos con mezclado suave cada 15 minutos. Las células marcadas se lavaron después y se resuspendieron a 1 x 10^{5}/ml en tampón de quimiotaxis (rojo fenol libre RPMI-1640, 0,1% de ASB, pH 7,4). El compuesto de ensayo se diluyó en tampón de quimiotaxis de modo que la concentración final del ensayo variaba desde 0,01 nM a 1 \muM. El ligando MCP-1 (PeproTech Inc.) se diluyó hasta 20 nM en tampón de quimiotaxis. Para realizar el ensayo se mezcló un volumen igual de diluciones de compuestos de ensayo con un volumen igual de células marcadas THP-1 (Mezcla 1) y un volumen igual de diluciones de compuestos de ensayo se mezcló con un volumen igual de ligando MCP-1 (Mezcla 2). Se incubaron ambas mezclas independientemente a 37ºC durante 10 minutos seguido del mezclado suave. La quimiotaxis inducida por MCP-1 se midió después en una placa de quimiotaxis (Becton Dickinson) mediante la colocación de 50 \mul de la Mezcla I en la cámara superior y 225 \mul de Mezcla 2 en la cámara inferior. Se cubrió la placa con una capa y se incubó a 37ºC durante 30 minutos. 30 minutos más tarde, se leyó la placa en un Cytofluor. Se ensayaron todas las condiciones por duplicado. Para la señal de la determinación del ruido se colocaron 50 \mul de células marcadas THP-1 solas (5 x 10^{4}/pocillo) en la cámara superior y 225 \mul de ligando MCP-1 solo se puso en la cámara inferior (concentración final de 10 nM). La inhibición que se consiguió mediante concentraciones diferentes de los compuestos de ensayo se calculó como un porcentaje del control MCP-1 libre de compuesto. La CI50 se define como la concentración de compuesto de ensayo que se necesita para alcanzar el 50% de la inhibición de la quimiotaxis celular.
Pinzamiento Zonal hERG
El pinzamiento zonal celular total se usó para medir directamente las corrientes de hERG en células HEK-293 que expresaban establemente la subunidad \alpha del canal de potasio de hERG clonado. Se ensayó el compuesto en un tampón acuoso con pH 7,4 a temperatura ambiente. Pulsos de ensayo repetitivos (0,05 Hz) se aplicaron a partir de un potencial de reposo de -80 mV hasta +20 mV durante 2 segundos y las corrientes de cola se indujeron después de los pulsos de ensayo mediante el incremento del voltaje hasta -65 mV. Los efectos del compuesto se calcularon midiendo la inhibición de la corriente de cola pico.
Pinzamiento Zonal del Canal de Sodio
El pinzamiento local celular total se usó para medir directamente las corrientes de sodio entrantes en células HEK-293 que expresaban el canal de sodio cardiaco humano, SCN5A. Se ensayó el compuesto en un tampón acuoso libre de proteínas. Para determinar la inhibición en el estado estacionario, las corrientes de sodio se indujeron cada cinco segundos usando el siguiente protocolo de voltaje: las células se mantuvieron a un potencial de -90 mV y se aumentaron hasta -20 mV durante 60 ms. Se calcularon los efectos midiendo la inhibición de la corriente de pico durante el pulso de ensayo hasta -20 mV. La dependencia de la tasa de inhibición se evaluó mediante estimulación a frecuencias de 1 Hz y 4 Hz.
Farmacocinética de dosis única en Ratas
Ratas macho Sprague-Dawley (250-300 g) se usaron para los estudios farmacocinéticos. Se mantuvieron las ratas en ayuno durante una noche antes de la dosificación por vía oral y se alimentaron cuatro horas después de la dosis. Las muestras de sangre (\sim0,3 ml) se recogieron de la vena yugular en tubos que contenían K_{2}EDTA y después se centrifugaron a 4ºC (1500-2000 xg) para obtener plasma. En un estudio de biodisponibilidad oral, 2 grupos de animales (N = 2-3 por grupo) recibieron el compuesto de ensayo como infusión intravenosa (IV) (durante 10 min.) a través de la vena yugular o mediante una sonda oral. Las muestras de sangre en serie se obtuvieron a 0,17 (sólo para IV), 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 h después de la dosis. Las muestras de plasma, que se obtuvieron mediante centrifugación a 4ºC (1500-2000 xg), se almacenaron a -20ºC hasta el análisis por LC/MS/MS.
Farmacocinética de Dosis única en Monos
La farmacocinética de varios compuestos de ensayos se evaluó en monos Cynomolgus en un diseño cruzado. Se mantuvieron en ayuno los monos durante una noche antes de la dosificación por vía oral y se alimentaron 4 h después de la dosis. Un grupo de 1-3 animales (3 a 5 kg) recibieron el compuesto por infusión IV (durante 10 min.) mediante una vena femoral y por sonda oral, con un descanso de 1 semana entre tratamientos. Las muestras de sangre en serie (\sim0,3 ml) se recogieron de una arteria femoral a 0,17 (sólo IV), 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 h después de la dosis y se centrifugaron a 4ºC (1500-2000 xg) para obtener plasma. Las muestras se almacenaron a -20ºC hasta el análisis mediante LC/MS/MS.
Análisis de datos para los ensayos farmacocinéticos
Los parámetros farmacocinéticos se obtuvieron mediante el análisis no compartimental de la concentración de plasma frente a los datos de tiempo (software KINETICA^{TM}, Versión 4,2, InnaPhase Corporation, Filadelfia, PA). La concentración de pico (Cmax) y el tiempo para Cmax se registraron a partir de observaciones experimentales. El área bajo la curva desde el tiempo cero al último tiempo de muestreo (AUC(0-T)) se calculó usando una combinación de las sumas trapezoidales lineales y logarítmicas. El aclaramiento plasmático total (CLTp), el volumen de distribución del estado estacionario (Vss), la semivida de eliminación aparente (T1/2) y el tiempo medio de residencia (TMR) se estimaron después de la administración IV. Las estimaciones del T1/2 se hicieron usando un mínimo de 3 puntos de tiempo con concentraciones cuantificables. La biodisponibilidad oral absoluta (F) se estimó como el porcentaje de valores de AUC de dosis normalizadas después de las dosis orales e IV.
A continuación se pueden encontrar datos para cada compuesto como se mide en los ensayos descritos anteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 11 Datos Comparativos In vitro
37
TABLA 12a Datos Comparativos In vitro Adicionales
39
TABLA 12b Datos Farmacocinéticos Comparativos In vivo en la Rata
40
TABLA 12c Datos Farmacocinéticos Comparativos In vivo en el Mono
41
Utilidad
Se muestra que los compuestos representativos de los ejemplos son moduladores de la actividad del receptor de quimiocinas usando ensayos que conocen aquellos especialistas en la técnica. En esta sección, se divulgan estos ensayos y se dan sus referencias bibliográficas. En este documento se divulgan más ensayos en la sección denominada "Características Farmacológicas Comparativas", anteriormente. Presentando la actividad en estos ensayos del antagonismo de MCP-1, se espera que los compuestos de los ejemplos sean útiles en el tratamiento de las enfermedades humanas asociadas con las quimiocinas y sus receptores afines. La definición de la actividad en estos ensayos es un compuesto que demuestra una CI_{50} de 30 \muM o una concentración menor cuando se mide en un ensayo particular.
Antagonismo de la Unión de MCP-1: a CMSP humana
(Yoshimura y col., J. Immunol. 1990, 145, 292)
Al menos unos compuestos descritos en los ejemplos tienen actividad en el antagonismo de la unión de MCP-1 a las CMSP humanas (células mononucleares de sangre periférica) descritas en este documento.
Las placas de filtro Millipore (NºMABVN 1250) se tratan con 100 \mul de tampón de unión (0,5% de albúmina de suero bovino, tampón HEPES 20 mM y cloruro de magnesio 5 mM en medio RPMI 1640) durante treinta minutos a temperatura ambiente. Para medir la unión 50 \mul de tampón de unión, con o sin una concentración conocida del compuesto, se combina con 50 \mul de MCP-1 humana marcada con ^{125}I (para dar una concentración final de 150 pM de radioligando) y 50 \mul de tampón de unión que contiene 5 x 10^{5} células. Las células que se usan para estos ensayos de unión pueden incluir células mononucleares de sangre periférica humanas aisladas mediante una centrifugación en gradiente Ficoll-Hypaque, monocitos humanos, (Weiner y col., J. Immunol. Methods. 1980, 36, 89) o la línea celular THP-1 que expresa el receptor endógeno. La mezcla de compuesto, células y radioligando se incuba a temperatura ambiente durante treinta minutos. Las placas se colocan en un colector al vacío, se aplica el vacío y las placas se lavan tres veces con tampón de unión que contiene NaCl 0,5 M. Se elimina el faldón de la placa, la placa se permite secar al aire, se perforan los pocillos y se recuentan. El porcentaje de inhibición de la unión se calcula usando los recuentos totales obtenidos en ausencia de cualquier compuesto competidor y la unión de fondo se determina mediante la adición de MCP-1 100 nM en la placa del compuesto de ensayo.
Antagonismo del Flujo de entrada de Calcio Inducido por MCP-1
(Sullivan, y col., Methods Mol. Biol., 114, 125-133(1999)
Al menos unos compuestos descritos en los ejemplos tienen actividad en el antagonismo del ensayo del flujo de entrada de calcio inducido por MCP-1 descrito en este documento.
La mobilización de calcio se mide usando el colorante fluorescente indicador de Ca^{2+}, Fluo-3. Se incuban las células a 8 x 10^{5} células/ml en solución salina tamponada con fosfato que contiene el 0,1% de albúmina de suero bovino, tampón HEPES 20 mM, glucosa 5 mM, 1% de suero bovino fetal, Fluo-3 AM 4 \muM y probenecida a 2,5 mM durante 60 minutos a 37ºC. Las células usadas para estos ensayos de calcio pueden incluir monolitos humanos aislados como divulga Weiner y col., J. Immunol. Methods, 36, 89-97 (1980) o líneas celulares que expresan el receptor endógeno CCR2 tales como THP-1 y la MonoMac-6. Después se lavan las células tres veces en solución salina tamponada con fosfato que contiene el 0,1% de albúmina de suero bovino, HEPES 20 mM, glucosa 5 mM y probenecida 2,5 mM. Se resuspenden las células en solución salina tamponada con fosfato que contiene un 0,5% de albúmina de suero bovino, HEPES 20 mM y probenecida 2,5 mM a una concentración final de 2-4 x 10^{6} células/ml. Se siembran las células en microplacas de pared negra de 96 pocillos (100 \mul/pocillo) y se centrifugan las placas a 200 x g durante 5 minutos. Se añaden distintas concentraciones de compuestos a los pocillos (50 \mul/pocillo) y después de 5 minutos, se añaden 50 \mul/pocillo de MCP-1 para dar una concentración final de 10 nM. La movilización de calcio se detecta usando un lector de placas de imágenes fluorescentes. La monocapa celular se excita con un laser de argón (488 nM) y la fluorescencia asociada a las células se mide durante 3 minutos, (cada segundo durante los primeros 90 segundos y cada 10 segundos durante los siguientes 90 segundos). Se generan los datos como unidades de fluorescencia arbitrarias y el cambio en la fluorescencia para cada pocillo se determina como el diferencial máximo-mínimo. La inhibición dependiente del compuesto se calcula en relación a la respuesta de MCP-1 solo.
Antagonismo de la Quimiotaxis de las CMSP Humanas Inducida por MCP-1
(Bacon y col., Brit, J. Pharmacol. 1988, 95, 966)
Al menos unos compuestos descritos en los ejemplos tienen actividad en el antagonismo del ensayo de quimiotaxis CMSP humana inducida por MCP-1-descrito en este documento.
La cámara de quimiotaxis Neuroprobe MBA96-96-pocillos, placa de 96 pocillos Polyfiltronics MPC y los filtros de 8 micrones de policarbonato libres de polivinilpirrolidona Neuroprobe PFD5 se calientan en una incubadora a 37ºC. Las Células Mononucleares de Sangre Periférica Humanas (CMSP) (Boyum y col., Scand. J. Clin. Lab Invest. Suppl. 1968, 97, 31), recientemente aisladas mediante el procedimiento convencional de separación por densidad ficoll, se suspenden en DMEM a 1 x 10^{7} c/ml y se calientan a 37ºC. Una solución de MCP-1 humana 60 nM también se calienta a 37ºC. Las diluciones de los compuestos de ensayo se hacen 2x la concentración necesaria en DMEM. La suspensión de CMSP y la solución de MCP-1 60 nm se mezclan 1:1 en tubos de polipropileno con DMEM precalentado con o sin una dilución de los compuestos de ensayo. Estas mezclas se calientan en un calentador de tubos a 37ºC. Para empezar el ensayo, añadir la mezcla compuestos/MCP-1 en los pocillos de la placa de 96 pocillos que se ha colocado en la parte inferior de la cámara de quimiotaxis Neuroprobe. El volumen aproximado es 400 \mul a cada pocillo y debe haber un menisco positivo después de la distribución. El filtro de 8 micrones se coloca suavemente en la parte superior de la placa de 96 pocillos, se une una junta de goma a la parte posterior de la cámara de arriba y se monta la cámara. Un volumen de 200 \mul de la mezcla compuestos/suspensión celular se añade a los pocillos adecuados en la cámara de arriba. La cámara de arriba se cubre con un sellador de placas y la unidad montada se pone en una incubadora a 37ºC durante 45 minutos. Después de la incubación, el sellador de placas se elimina y toda la suspensión celular restante se aspira fuera. Se desmonta la cámara y se elimina el filtro suavemente. Mientras que se mantiene el filtro a un ángulo de 90 grados, las células que no han migrado se eliminan usando un chorro de solución salina tamponada con fosfato y la parte de arriba del filtro se seca con la punta de un rodillo exprimidor de goma. Se repite este lavado dos veces más. Se seca el filtro por aire y después se sumerge completamente en tinte Wright Geimsa durante 45 segundos. Después se lava el filtro mediante su empapado en agua destilada durante 7 minutos y después un lavado adicional de 15 segundos en agua destilada fresca. El filtro se seca de nuevo por aire. Las células que han migrado al filtro se cuantifican mediante microscopía visual.
Los receptores de quimiocinas de mamíferos proporcionan una diana que interfiere o promueve la función celular inmune en un mamífero, tal como un ser humano. Los compuestos que inhiben o promueven la función del receptor de quimiocinas son particularmente útiles para modular la función celular inmune para fines terapéuticos. Por consiguiente, la presente invención se dirige a compuestos que son útiles en la prevención y/o tratamiento de una gran variedad de trastornos y enfermedades inflamatorios, infecciosos e inmunoreguladores, incluyendo asma y enfermedades alérgicas, infección por microbios patogénicos (que, por definición, incluyen virus), así como patologías autoinmunes tales como la artritis reumatoide y arterosclerosis.
Por ejemplo, un compuesto presente que inhibe una o más funciones de un receptor de quimiocinas de mamíferos (por ejemplo, un receptor de quimiocinas humanas) puede administrarse para inhibir (es decir, reducir o prevenir) enfermedades inflamatorias o infecciosas. Como resultado, uno o más procedimientos inflamatorios, tales como la emigración de leucocitos, la adhesión, la quimiotaxis, la exocitosis (por ejemplo, de enzimas, histamina) o la liberación de mediadores inflamatorios, se inhibe.
De manera similar, un compuesto presente que inhibe una o más funciones del receptor de quimiocinas de mamíferos (por ejemplo, un receptor de quimiocina humano) como se administra para estimular (inducir o potenciar) una respuesta inmune o inflamatoria, tal como la emigración de leucocitos, la adhesión, la quimiotaxis, la exocitosis (por ejemplo de enzimas, histamina) o la liberación de mediadores inflamatorios, lo que da como resultado una estimulación beneficiosa de los procedimientos inflamatorios. Por ejemplo, se pueden reclutar eosinófilos para combatir las infecciones parasíticas. Además, el tratamiento de las enfermedades inflamatorias, alérgicas y autoinmunes mencionadas anteriormente puede contemplarse también para un compuesto presente que promueve una o más funciones del receptor de quimiocinas de mamíferos si se contempla el suministro de compuesto suficiente para producir la pérdida de la expresión del receptor en células a través de la inducción de la internalización del receptor de quimiocinas o del suministro de compuestos de un modo que da como resultado la mala dirección de la migración celular.
Además de los primates, tales como seres humanos, se puede tratar a una variedad de otros mamíferos de acuerdo con el procedimiento de la presente invención. Por ejemplo, se pueden tratar mamíferos, incluyendo pero sin limitarse a, vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, cobayas, ratas u otras especies bovinas, ovinas, equinas, caninas, felinas, de roedores o murinas. Sin embargo, el procediendo también se puede practicar en otras especies, tales como las especies aviares. El sujeto tratado en los procedimientos anteriores es un mamífero, en macho o hembra, en el que la modulación de la actividad del receptor de quimiocina se desea. "Modulación" como se usa en este documento pretende abarcar antagonismo, agonismo, antagonismo parcial y/o agonismo parcial.
Ensayos de Unión de CCR5 y Funcionales
Derivación celular y cultivo celular: Un grupo de células HT1080 que expresaban establemente el receptor de quimiocinas endógeno CC 5 (CCR5) se desarrollaron usando los procedimientos descritos por Harrimgtom, Sherf, y Rundlett (véanse la patentes de Estados Unidos US 6.361.972 y US 6.410.266). Los clones que tenían más expresión se aislaron usando citometría de flujo repetitiva, seguida de la subclonación. Estas células se cultivaron después en placas de 6 pocillos a 3 x 10^{5} células/pocillos y se transfectaron con vector de ADN que contenía la proteína quimérica G marcada con AH Gqi5 (Molecular Devices; 5 microgramos de vector de ADN linealizado en 15 microlitros de Ex-Gen de Fermentes se usó para la transfección). Dos días después de la transfección, las células se combinaron y se sembraron en placas P 100. Siete días después de sembrarlas, las colonias se eligieron, se expandieron y se analizaron respecto al contenido de Gqi5 mediante transferencia de Western. Un clon (denominado 3559.1.6) que tenía alta expresión de Gqi5 (de la transfección) y de CCR5 (endógeno) se seleccionó y se usó para los experimentos descritos a continuación. Las células HT1080 (clon 3559.1.6) se cultivaron con alfa-MEM suplementado con el 10% de suero bovino fetal dializado, el 2% de penicilina/estreptomicina/glutamina y 500 microgramos/ml de higromicina B (concentración final) a 37ºC con el 5% de CO_{2} en una atmósfera humidificada.
\newpage
Preparación de la Membrana: Un precipitado celular que contenía 1 x 10^{8} células HT 1080 (clon 3559.1.5) se resuspendió en 5 ml de Tampón de Preparación de Membrana helado (HEPES 50 mM, MgCl_{2} 5 mM, CaCl_{2} 1 mM) y se homogeneizó a alta velocidad en el homogeneizador Polytron durante 20 seg en hielo. El homogeneizado se diluyó con otros 25 ml de Tampón de Preparación de Membrana y se centrifugó durante 12 min. (48.000 x g a 4ºC). El precipitado celular se resuspendió en 5 ml de Tampón de Preparación de Membrana antes de su rehomogeneización como se divulga anteriormente. El homogeneizado se diluyó con 5 ml de Tampón de Preparación de Membrana y se ensayó respecto a la concentración de proteína CCR5.
Ensayo de unión: El homogeneizado preparado recientemente a partir de la Preparación de Membrana descrito anteriormente se diluyó en tampón de Unión (HEPES 50 mM, MgCl_{2} 5 mM, CaCl_{2} 1 mM, 0,1% de ASB; una tableta completa de inhibidor de proteasa se añadió antes del ensayo) para conseguir una concentración final de proteínas de 10 microgramos/pocillo (placas sólidas blancas de 96 pocillos de Coming, Inc.). Esta preparación de membrana se mezcló con perlas WGA-SPA (Amerhsam; preempapado en tampón de Unión) para dar una concentración de 200 microgramos/pocillo. La mezcla perlas SPA/membrana (100 microlitros/pocillo) se añadió después a una placa que se había presalpicado con 2 microlitros de DMSO que contenía distintas concentraciones de productos de ensayo (DMSO puro para el control negativo; distintas concentraciones de ejemplos de presente invención para los productos de ensayo; MIP-1 beta 500 nM como un control positivo). El ensayo de unión se inició a través de la adición de 50 microlitros de [^{125}I]-MIP-1 beta (Perkin Elmer; el material se diluyó en tampón de Unión de modo que la adición de 50 microlitros/pocillo da una concentración final de 0,1 nM de [^{125}I]-MIP-1 beta). Se cerró la placa y se permitió estar a temperatura ambiente durante 4-6 h antes de recontarse en un Packard TopCount. El porcentaje de unión para el producto de ensayo se calculó, usando controles negativos y positivos para definir el intervalo para cada experimento.
Ensayo Funcional basado en el Lector de Placa de Imagen Fluorométrica (FLIPR): Las células HT1080 (clon 3559.1.6) se sembraron en placas de 384 pocillos a 10.000 células/pocillo (30 microlitros) (Biocoat PDL de fondo negro/blanco, Beckton Dickinson) y se cargaron con 30 microlitros/pocillo de colorante fluorescente Fluro-4 AM (preparado por disolución de 1 mg de Fluro-4 AM en 440 microlitros de DMSO y diluyendo con 100 microlitros de solución plurónica antes de diluir más con 10 ml de tampón de Hanks). Se incubaron las células a 37ºC con el 5% de CO_{2} durante 30 minutos antes de lavarse tres veces y suspenderse en Tampón de Ensayo (HEPES 20 mM, CaCI_{2} 1,2 mM, MgCI_{2} 5 mM, Probenecida 2,5 mM, 0,5% de ASB, 1x Hanks). El producto de ensayo se diluyó en serie en DMSO y después se diluyó 1:10 con Tampón de Ensayo antes de añadirse a las células (10 microlitros/pocillo). Usando FLIPR, se leyeron las placas (10-70 s.) para la inducción del flujo (es decir la actividad agonista). Se cargaron además las células con Solución de Agonista (30 microlitros/pocillo; se prepararon mediante la dilución de 30 microlitros de MIP-1 beta 100 microMolar en 100 ml de Tampón de Ensayo; este protocolo suministra al ensayo una concentración final de 5 nM de MIP-1 beta) y las placas se leyeron usando FLIPR durante un minuto. La actividad antagonista del producto de ensayo se determinó en relación con el control negativo de 0,4% de DMSO/Tampón.
Las enfermedades o afecciones del ser humano u otras especies que pueden tratase con inhibidores de la función del receptor de quimiocinas, incluyen, pero no se limitan a: enfermedades y afecciones inflamatorias o alérgicas, incluyendo enfermedades alérgicas respiratorias tales como asma, rinitis alérgica, enfermedades pulmonares por hipersensibilidad, neumonitis hipersensible, celulitis eosinofílica (por ejemplo, el síndrome de Well), neumonía eosinofílica (por ejemplo, el síndrome de Loeffler, neumonía eosinofílica crónica), fastitis eosinofílica (por ejemplo, síndrome de Shulman), hipersensibilidad de tipo retardado, enfermedades pulmonares intersticiales (EPI) (por ejemplo, fibrosis pulmonar idiopática o EPI asociada con artritis reumatoide, lupus sistémico eritematoso, espondilitis anquilosante, esclerosis sistémica, síndrome de Sjogren, polimiositis o dermatomiositis); anafilaxis sistémica o respuestas de hipersensibilidad, alergia a medicamentos (por ejemplo, a penicilina, cefalosporinas), síndrome de eosinofilia mialgia debido a la ingesta de triptófano contaminado, alergia a picaduras de insectos; enfermedades autoinmunes, tales como artritis reumatoide, artritis psoriática, esclerosis múltiple, lupus sistémico eritematoso, miastemia gravis, diabetes juvenil; glomerulonefritis, tiroiditis autoinmune, enfermedad de Behcet; rechazo de injertos (por ejemplo, en trasplantes), incluyendo rechazo de aloinjertos o enfermedad del injerto contra huésped; enfermedades inflamatorias del intestino, tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa; espondiloartropatías; esclerodermia; psoriasis (incluyendo psoriasis mediada por linfocitos T) y dermatosis inflamatorias tales como dermatitis, eczema, dermatitis atópica, dermatitis alérgica de contacto, urticaria; vasculitis (por ejemplo, vasculitis necrotizante, cutánea y por hipersensibilidad); miositis eosinofílica, fascitis eosinofílica: cánceres con infiltración de leucocitos de la piel u órganos. Otras enfermedades o afecciones en las que respuestas inflamatorias indeseables deben inhibirse se pueden tratar, incluyendo, pero no limitadas a, vasculitis, placas vulnerables, hiperplasia neointimal venosa, daño por reperfusión, hiperplasia neointimal de inserción de diálisis, hiperplasia intimal de derivación arteriovenosa, ateroesclerosis, ciertos desórdenes hematológicos, toxicidad inducida por citoquinas (por ejemplo, choque séptico, choque endotóxico), polimiositis, dermatomiositis. Las enfermedades o afecciones infecciosas de los seres humanos u otras especies que se pueden tratar con inhibidores de la función del receptor de quimiocina, incluyen, pero no se limitan a, VIH.
Las enfermedades o afecciones del ser humano u otras especies que se pueden tratar con promotores de la función del receptor de quimiocina, incluyen, pero no se limitan a: inmunosupresión, como la de individuos con síndromes de inmunodeficiencia tales como el SIDA u otras infecciones virales, individuos sometidos a terapia de radiación, quimioterapia, terapia para enfermedades autoinmunes o terapia farmacológica (por ejemplo, terapia de corticosteroides), que produce inmunosupresión, inmunosupresión debida a la deficiencia congénita en la función del receptor u otras causas y enfermedades infecciosas, tales como enfermedades parasíticas, incluyendo, pero no limitadas a infecciones por helmintos, tales como nematodos (gusano redondo); (Trichuriasis, Enterobiasis, Ascariasis, Anquilostoma, Estrongiloidiasis, Triquinosis, filariasis); trematodos (duela) (Esquistosomiasis, Clonorquiasis), cestodos (tenia) (Equinococcosis, Taeniasis saginata, Cisticercosis); gusanos viscerales, larva migratoria visceral (por ejemplo, Toxocara), gastroenteritis eosinofílica (por ejemplo, Anisaki sp., Phocanema sp.), larva migratoria cutánea (Ancylostona braziliense, Ancylostoma caninum). Los compuestos de la presente invención son por consiguiente útiles en la prevención y tratamiento de una gran variedad de trastornos y enfermedades inflamatorias, infecciosas e inmunoreguladoras.
Además, el tratamiento de las enfermedades inflamatorias, alérgicas y autoinmunes mencionadas anteriormente también se puede contemplar para promotores de la función de receptores de quimiocinas si se contempla el suministro de compuesto suficiente para provocar la pérdida de la expresión del receptor en células a través de la inducción de la internalización del receptor de quimiocina o suministro del compuesto de un modo que da como resultado la mala dirección de migración celular.
En otro aspecto, la invención presente puede usarse para evaluar los agonistas o antagonistas específicos putativos de un receptor acoplado a proteínas G. La presente invención se dirige al uso de estos compuestos en la preparación y ejecución de ensayos de exploración para compuestos que modulan la actividad de los receptores de quimiocinas. Además, los compuestos de presente invención son útiles en el establecimiento o determinación del sitio de unión de otros compuestos a los receptores de quimiocinas por ejemplo, mediante inhibición competitiva o como una referencia en un ensayo para comparar su actividad conocida frente a un compuesto con una actividad desconocida. Cuando se desarrollan nuevos ensayos o protocolos, los compuestos de acuerdo con la presente invención se pueden usar para ensayar su eficacia. Específicamente, estos compuestos se pueden proporcionar en un kit comercial, por ejemplo, para el uso en la investigación farmacéutica que implica las enfermedades mencionadas anteriormente. Los compuestos de la invención presente también son útiles para la evaluación de moduladores específicos putativos de los receptores de quimiocina. Además, se podrían utilizar compuestos de la presente invención para examinar la especificidad de receptores acoplados a proteínas G que no se cree que sean receptores de quimiocinas, sirviendo como ejemplos de compuestos que no se unen o como variantes estructurales de compuestos activos en estos receptores que pueden ayudar para definir los sitios específicos de interacción.
Los compuestos que se divulgan en este documento son útiles para tratar o prevenir trastornos seleccionados de artritis reumatoide, osteoartritis, choque séptico, ateroesclerosis, aneurisma, fiebre, efectos cardiovasculares, choque hemodinámico, síndrome de sepsis, daño después de una reperfusión isquémica, malaria, enfermedad de Crohn, enfermedades inflamatorias del intestino, infección micobacteriana, meningitis, psoriasis, fallo cardiaco congestivo, enfermedades fibróticas, caquexia, rechazo de injertos, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias de la piel, esclerosis múltiple, daño por radiación, daño alveolar hiperóxico, VIH, demencia por VIH, diabetes mellitus no dependiente de insulina, asma, rinitis alérgica, dermatitis atópica, fibrosis pulmonar idiopática, pemfigoide vesicular, infecciones parasíticas helmínticas, colitis alérgica, eczema, conjuntivitis, trasplante, eosinofilia familiar, celulitis eosinofílica, neumonías eosinofílicas, fascitis eosinofílica, gastroenteritis eosinofílica, eosinofilia inducida por fármacos, fibrosis quística, síndrome de Churg-Strauss, linfoma, enfermedad de Hodgkin, carcinoma del colon, síndrome de Felty, sarcoidosis, uveítis, Alzheimer, Glomerulonefritis y lupus sistémico eritematoso, carcinoma de células escamosas del esófago, dolor neuropático y obesidad.
En otro aspecto, los compuestos son útiles para tratar o prevenir trastornos inflamatorios seleccionados de artritis reumatoide, osteoartritis, ateroesclerosis, aneurisma, fiebre, efectos cardiovasculares, enfermedad de Crohn, enfermedades inflamatorias del intestino, psoriasis, fallo cardiaco congestivo, esclerosis múltiple, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias de la piel.
En otro aspecto, los compuestos se usan para tratar o prevenir trastornos inflamatorios seleccionados de artritis reumatoide, osteoartritis, aterosclerosis. La enfermedad de Crohn, las enfermedades inflamatorias del intestino y la esclerosis múltiple.
En otro aspecto, los ejemplos descritos en este documento pueden ser útiles en el tratamiento de una variedad de cánceres, incluyendo, pero no limitado a, los siguientes:
carcinoma incluyendo el de vejiga (incluyendo el cáncer de vejiga acelerado y metastático), de mama, de colon (incluyendo el cáncer colorrectal), riñón, hígado, pulmón (incluyendo el cáncer de pulmón de células pequeñas y no pequeñas y el adenocarcinoma pulmonar), ovario, próstata, testículos, tracto génito urinario, sistema linfático, del recto, de la laringe, páncreas, (incluyendo carcinoma pancreático exocrino), esófago, estómago, vesícula biliar, cérvix, tiroides y piel (incluyendo el carcinoma de células escamosas);
tumores hematopoyéticos de linaje linfoide incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de linfocitos T, linfoma de Hodgkin, linfoma no-Hodgkin, tricoleucemia, linfoma histiocítico y linfoma de Burketts;
los tumores hematopoyéticos de linaje mieloide incluyen leucemias mielógenas agudas y crónicas, el síndrome mielodiblástico, leucemia mieloide y leucemia promiolítica;
los tumores del sistema nervioso central y periférico incluyen astrocitoma, neurolastoma, glioma y schwannomas;
tumores de origen mesenquimal incluyen fibrosarcoma, rabdomiosarcoma y osteosarcoma; y
otros tumores incluyen melanoma, xerodermia pigmentosa, queratoacantoma, seminoma, cáncer folicular de tiroides y teratocarcinoma.
En otra realización, descrita en este documento están compuestos para su uso en el tratamiento contra el cáncer, en el que el cáncer se selecciona de cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de próstata y melanoma. Adicionalmente, los compuestos descritos en este documento pueden ser útiles en el tratamiento del cáncer de ovarios y el mieloma múltiple.
La presente invención proporciona compuestos para su uso en el tratamiento de una variedad de enfermedades proliferativas no cancerosas.
La terapia combinada para prevenir y tratar enfermedades y trastornos inflamatorios, infecciosos e inmunoreguladores, incluyendo el asma y las enfermedades alérgicas, al igual que la patología autoinmunes tales como artritis reumatoide y arterosclerosis y aquellas patologías indicadas anteriormente se ilustra por la combinación de compuestos de presente invención y otros compuestos que se conocen para dichas utilidades. Por ejemplo, en el tratamiento o prevención de la inflamación, los compuestos presentes se pueden usar junto con un agente antiinflamatorio o analgésico tal como un agonista opiáceo, un inhibidor de lipoxigenasa, un inhibidor de ciclooxigenasa, un inhibidor de interleucina, tal como un inhibidor de interleucina-1, un inhibidor del factor de necrosis tumoral, un antagonista de NMDA, un inhibidor u óxido nítrico o un inhibidor de la síntesis de óxido nítrico, un agente antiinflamatorio no esteroideo, un inhibidor de fosfodiesterasa o un agente antiinflamatorio supresor de citoquina, por ejemplo con un compuesto tal como acetominofeno, aspirina, codeína, fentanilo, ibuprofeno, indometacina, ketorolac, morfina, naproxeno, fenacetina, piroxicam, un analgésico esteroideo, sufentanil, sunlindac, interferón alfa y similares. De manera similar, los compuestos presentes se pueden administrar con un analgésico; un potenciador tal como la cafeína, un antagonista de H2, simeticona, aluminio o hidróxido de magnesio; un descongestivo tal como fenilefrina, fenilpropanolamina, pseudofedrina, oximatazolina, epinefrina, nafazolina, xilometazolina, propilhexedrina o levodesoxiefedrina; un antitusivo tal como la codeína, hidrocodona, caramifen, carbetapentano o dextrametorfano; un diurético; y una antihistamina sedante o no sedante. De la misma manera, los compuestos descritos en este documento pueden usarse en combinación con otros fármacos que se usan en el tratamiento/prevención/supresión o mejora de las enfermedades o trastornos para las que los compuestos de la presente invención son útiles. Estos otros fármacos se pueden administrar, por una vía y en una cantidad comúnmente usada por tanto, contemporáneamente o secuencialmente con un compuesto de la presente invención. Cuando un compuesto se usa contemporáneamente con uno o más de otros fármacos, una composición farmacéutica que contiene tales fármacos se puede usar además del compuesto de la presente invención. Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas incluyen aquellas que también contienen uno o más principios activos, además de un compuesto de la presente descripción.
Los ejemplos de otros principios activos que pueden combinarse con un compuesto de la presente invención, administrado separadamente o en las mismas composiciones farmacéuticas, incluyen, pero no se limitan a: (a) antagonistas de integrinas tales como aquellos para selectinas, ICAM y VLA-4; (b) esteroides tales como beclometasona, metilprednisolona, betametasona, prednisona, dexametasona e hidrocortisona; (c) inmunosupresores tales como ciclosporina, tracolimus, rapamicina y otros inmunosupresores de tipo FK-506; (d) antihistaminas (antagonistas de la histamina H1) tales como bromofeniramina, clorfeniramina, dexclorfeniramina, triprolidina, clemastina, difenhidramina, difenilpiralina, tripelennamina, hidroxizina, methdilazina, prometazina, trimeprazina, azatadina, ciproheptadina, antazolina, feniramina pirilamina, astemizol, terfenadina, loratadina, cetirizina, fexofenadina, descarboetoxiloratadina y similares; (e) antiasmáticos no esteroideos tales como agonistas de b2 (terbutalina, metaproterenol, fenoterol, isoetarina, albuterol, bitolterol y pirbuterol), teofillina, cromolin sódico, atropina, bromuro de ipratropio, antagonistas de leucotrienos (zafirlukast, montelukast, pranlukast, iralukast, pobilukast, SKB-102.203), inhibidores de la biosíntesis de leucotrienos (zileuton, BAY-1005); (f) agentes antiinflamatorios no esteroideos (AINES) tales como los derivados del ácido propiónico (alminoprofeno, benxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, indoprofeno, ketoprofeno, miroprofeno, naproxeno, oxaprozina, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido triaprofénico y tioxaprofeno), derivados del ácido acético (indometacina, acemetacina, alclofenaco, clidanaco, diclofenaco, fenclofenaco, ácido fenclózico, fentiazaco, furofenaco, ibufenaco, isoxepaco, oxpinaco, sulindaco, tiopinaco, tolmetina, zidometacina y zomepiraco), derivados del ácido fenámico (ácido flufenámico, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, ácido niflúmico y ácido tolfenámico), derivados del ácido bifenilcarboxílico (diflunisal y flufenisal), oxicams (isoxicam, piroxicam, sudoxicam y tenoxican), salicilatos (ácido acetil salicílico, sulfasalazina) y las pirazolonas (apazona, bezpiperilón, feprazona, mofebutazona, oxifenbutazona, fenilbutazona); (g) inhibidores de la ciclooxigenasa-2 (COX-2); (h) inhibidores de la fosfodiesterasa de tipo IV (PDE-IV); (i) otros antagonistas de los receptores de quimiocinas; (j) agentes reductores de colesterol tales como los inhibidores de la reductasa HMG-COA (lovastatina, simvastatina y pravastatina, fluvastatina, atorvastatina y otras estatinas), secuestrantes (colestiramina y colestipol), ácido nicotínico, derivados del ácido fenofíbrico (gemfibrozilo, clofibrato, fenofibrato y benzafibrato), y probucol; (k) agentes antidiabéticos tales como insulina, sulfonilureas, biguanidas (metformina), inhibidores de la glucosidasa a (acarbosa) y glitazonas (troglitazona y pioglitazona); (1) preparaciones de interferones (interferón alfa-2a, interferón-2B, interferón alfa-N3, interferón beta-1a, interferón beta-1b, interferón gama-1b); (m) compuestos antivirales tales como efavirenz, nevirapina, indinavir, ganciclovir, lamivudina, famciclovir y zalcitabina; (o) otros compuestos tales como el ácido 5-aminosalicílico y profármacos del mismo, antimetabolitos tales como azatioprina y 6-mercaptopurina y agentes quimioterapéuticos citotóxicos contra el cáncer. El porcentaje de peso del compuesto de la presente invención respecto al segundo principio activo puede ser variado y dependerá de las dosis eficaces de cada ingrediente.
Generalmente, se usará una dosis eficaz de cada uno. Por lo tanto, por ejemplo, cuando un compuesto se combina con un AINES el porcentaje de peso del compuesto de la presente invención respecto al variará generalmente de aproximadamente 1000:1 a aproximadamente 1:1000, o como alternativa de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 1:200. Las combinaciones de un compuesto de la presente invención y otros ingredientes activos también estarán generalmente dentro del intervalo mencionado anteriormente, pero en cada caso, se debería usar una dosis eficaz de cada ingrediente.
En el tratamiento contra el cáncer, una combinación de agentes quimioterapeúticos y/u otros tratamientos (por ejemplo terapia por radiación) es a menudo ventajoso. El segundo (o tercer) agente puede tener el mismo o diferente mecanismo de acción que el primer agente terapéutico. Puede ser especialmente útil emplear combinaciones de fármacos citotóxicos en las que los dos o más fármacos que se administran actúan de diferente modo o en diferente fase de ciclo celular y/o en la que los dos o más fármacos tienen toxicidades o efectos secundarios solapantes y/o en la que el fármaco que se combina tiene una eficacia demostrada en el tratamiento del estado particular de la enfermedad manifestado por el paciente.
Por consiguiente, los compuestos descritos en este documento (u otras fórmulas descritas en este documento) se pueden administrar en combinación con otros agentes y tratamientos anticáncer y citotóxicos útiles en el tratamiento contra el cáncer u otras enfermedades proliferativas. La invención en este documento comprende además el uso de compuestos del presente documento (u otras fórmulas descritas en este documento), en la preparación de medicamentos para el tratamiento contra el cáncer y/o comprende el empaquetado de los compuestos del presente documento junto con instrucciones de que los compuestos se utilizan en combinación con otros agentes y tratamientos anticáncer o citotóxicos para el tratamiento contra el cáncer. La presente invención comprende además combinaciones de los compuestos de y uno o más agentes adicionales en forma de kit, por ejemplo, en el que se empaquetan juntos o se ponen en cajas separadas para venderse juntos como un kit o en el que se empaquetan para formularse juntos.
Los segundos (o más) agentes anticáncer se pueden seleccionar de uno cualquiera o más de los siguientes:
agentes alquilantes, (incluyendo mostazas de nitrógeno, alquilsulfonatos, nitrosoureas, derivados de etileniminas y triazenos); antiangiogénicos (incluyendo inhibidores de metaloproteinasas de matriz); antimetabolitos (incluyendo inhibidores de la desaminasa de adenosina, antagonistas del ácido fólico, análogos de purina y análogos de pirimidina); antibióticos o anticuerpos (incluyendo anticuerpos monoclonales, anticuerpos CTLA-4, antraciclinas); inhibidores de aromatasa;
modificadores de la respuesta del ciclo celular; enzimas; inhibidores de la proteína farnesil transferasa;
agentes hormonales y antihormonales y esteroides (incluyendo análogos sintéticos, glucocorticoides, estrógenos/antiestrógenos [por ejemplo, MSRE], andrógenos/antiandrógenos, progestinas, agonistas de los receptores de progesterona y agonistas y antagonistas de la liberación de la hormona luteinizante [LHRH]); los moduladores del sistema de factor de crecimiento de tipo insulina (IGF)/receptor del factor de crecimiento de tipo insulina (IGFR) (incluyendo los inhibidores IGFR1 I); los inhibidores de la señalización por integrinas; inhibidores de quinasa (incluyendo multiquinasa y/o inhibidores de la quinasa Src o Src/abl, inhibidores de la quinasa dependiente de ciclinas [CDK], anticuerpos panHer, Her-1 y Her-2, inhibidores de VEGF, incluyendo anticuerpos anti-VEGF, inhibidores de EGFR, inhibidores de la proteína activada por mitógeno [MAP], inhibidores de MEK, inhibidores de quinasa Aurora, inhibidores de PDGF y otros inhibidores de tirosina quinasas o inhibidores de serina/treonina quinasas;
agentes disruptores de microtúbulos, tales como ecteinascidinas o sus análogos o derivados: agentes estabilizantes de microtúbulos tales como taxanos y los epotilones que se producen de forma natural y sus análogos sintéticos y semisintéticos;
agentes de unión y desestabilizantes de microtúbulos (incluyendo alcaloides de la vinca) e inhibidores de topoisomerasas; inhibidores de la proteína prenil transferasa; complejos coordinadores de platino; inhibidores de la transducción de la señal; y otros agentes usados como agentes anticáncer y citotóxicos tales como modificadores de la respuesta biológica, factores de crecimiento y moduladores inmunes.
Adicionalmente, los compuestos de la presente invención se pueden formular o coadministrar con otros agentes terapéuticos que se seleccionan por su utilidad al dirigir los efectos secundarios asociados con las afecciones mencionadas anteriormente. Por ejemplo, los compuestos de la invención pueden formularse con agentes para prevenir las náuseas, la hipersensibilidad y la irritación gástrica, tales como antieméticos y antihistamínicos H_{1} y H_{2}.
Los otros agentes terapéuticos anteriores, cuando se emplean en combinación con los compuestos de la presente invención, se pueden usar, por ejemplo, en aquellas cantidades indicadas en el Physicians' Desk Reference (PDR) o como se determina de otra manera por un experto habitual en la materia.
Los compuestos se administran a un mamífero en una cantidad terapéuticamente eficaz. Mediante "cantidad terapéuticamente eficaz" se quiere decir una cantidad de un compuesto de la presente descripción que, cuando se administra solo o en combinación con un agente terapéutico adicional a un mamífero, es eficaz para prevenir o mejorar el estado de la enfermedad o la progresión de la enfermedad.
Dosificación y formulación
Los compuestos de esta descripción se pueden administrar en formas farmacéuticas orales tales como comprimidos, cápsulas (cada una de ellas incluyen formulaciones de liberación prolongada o controlada), píldoras, polvos, gránulos, elixires, tinturas, suspensiones, siropes y emulsiones. También se pueden administrar en forma intravenosa (en embolada o infusión), intraperitoneal, subcutánea o intramuscular, todas usando formas farmacéuticas que conocen bien aquellos expertos habituales en la técnica farmacéutica. Se pueden administrar solos, pero generalmente se administrarán con un vehículo farmacéutico seleccionado en base a la vía de administración elegida y la práctica farmacéutica convencional.
El régimen de dosificación para los compuestos de la presente invención variará, por supuesto, dependiendo de factores conocidos, tales como las características farmacodinámicas del agente particular y su modo y vía de administración; la especie, edad, sexo, salud, condición médica y peso del receptor; la naturaleza y extensión de los síntomas; el tipo de tratamiento concurrente; la frecuencia de tratamiento; la vía de administración, la función hepática y renal del paciente y el efecto deseado. Un médico veterinario puede determinar y prescribir la cantidad eficaz del fármaco que se necesita para prevenir, contrarrestar o detener el progreso del trastorno.
A modo de orientación general, la dosis oral diaria de cada principio activo, cuando se usa para los efectos indicados, variará entre aproximadamente 0,001 a 1000 mg/kg de peso corporal, o entre aproximadamente 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal por día o como alternativa, entre aproximadamente 1,0 a 20 mg/kg/día. Por vía intravenosa, las dosis variarán desde aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg/kg/minuto durante una infusión de velocidad constante. Los compuestos de presente invención pueden administrarse en una dosis diaria única o la dosis diaria total se puede administrar en dosis divididas de dos, tres o cuatro veces al día. En una realización, la dosis oral diaria de el principio activo está entre 3 y 600 mg cuando se administra una vez al día o dividido en dosis administradas dos veces al día. Como alternativa, el principio activo se puede administrar en dosis de 10-20 mg administrados dos veces al día o de 40 a 100 mg administrados una vez al día. Como alternativa, el principio activo se puede administrar una dosis de 12,5 mg dos veces al día o 75 mg una vez al día. Como alternativa, el principio activo se puede administrar en dosis de 3, 10, 30, 100, 300 y 600 mg administrados una o dos veces a día.
Los compuestos de presente invención se pueden administrar en una forma intranasal mediante el uso tópico de vehículos intranasales adecuados o mediante vías transdérmicas, usando parches transdérmicos. Cuando se administra de la forma de un sistema de suministro transdérmico, la dosis de administración será, por supuesto, continuo en lugar de intermitente a través de el régimen de dosificación.
Los compuestos se administran típicamente en una mezcla con diluyentes, excipientes o vehículos farmacéuticamente adecuados (denominados colectivamente en este documento, como vehículos farmacéuticos) seleccionados adecuadamente con respecto a la forma de administración que se pretende, es decir, comprimidos orales, cápsulas, elixires, siropes y similares, y coherentes con las prácticas farmacéuticas convencionales.
Por ejemplo, para la administración oral en forma de un comprimido o cápsula, el componente de fármaco activo se puede combinar con un vehículo oral inerte farmacéuticamente aceptable tal como lactosa, almidón, sacarosa, glucosa, metil celulosa, estearato de magnesio, fosfato de dicalcio, sulfato de calcio, manitol, sorbitol y similares; para la administración oral en forma líquida, los compuestos de fármaco oral se pueden combinar con cualquier vehículo oral inerte farmacéuticamente aceptable, no tóxico, tal como etanol, glicerol, agua, y similares. Además, cuando se desee o sean necesarios, se pueden incorporar a la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes disgregantes y agentes colorantes adecuados. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales o sintéticas tales como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes que se usan en estas formas farmacéuticas incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitación, almidón, metil celulosa, goma de agar, bentonita, goma xantano y similares.
Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar en la forma de sistemas de suministro de liposomas, tales como vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los liposomas pueden formarse a partir de una variedad de fosfolípidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.
Los compuestos de la presente invención también pueden estar asociados con polímeros solubles como vehículos de fármacos dirigibles. Tales polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenol, polihidroxietilaspartamidafenol o polietilenoóxido-poli lisina sustituido con residuos de palmito hilo. Además, los compuestos de la presente invención se pueden asociar a una clase de polímeros biodegradables útiles en conseguir la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poli láctico, ácido poliglicólico, copolímeros del ácido poli láctico y poliglicólico, poliepsilón caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacilatos y copolímeros de bloque entrelazados o antipáticos de
hidrogeles.
Las formas farmacéuticas (composiciones farmacéuticas) adecuadas para la administración pueden contener desde aproximadamente 1 miligramo a aproximadamente 100 miligramos de principio activo por unidad de dosificación. En estas composiciones farmacéuticas el principio activo estará presente habitualmente en una cantidad de aproximadamente 0,5-95% en peso basado en el peso total de las composiciones.
Las cápsulas de gelatina pueden contener el principio activo y vehículos en polvo, tales como derivados de lactosa, almidón, celulosa, estearato de magnesio, ácido esteárico y similares. Se pueden utilizar diluyentes similares para fabricar comprimidos comprimidos. Tanto comprimidos como cápsulas se pueden fabricar como productos de liberación prolongada para proporcionar una liberación controlada de medicación durante un periodo de horas. Los comprimidos comprimidos pueden estar recubiertos por azúcar o recubiertos por una película ,para enmascarar cualquier sabor desagradable y proteger el comprimido de la atmósfera, o recubiertos entéricamente para la desintegración selectiva en el tracto gastrointestinal.
Las formas farmacéuticas líquidas para la administración oral pueden contener colorantes y saborizantes para aumentar la aceptación del paciente.
En general, el agua, un aceite adecuado, solución salina, dextrosa acuosa (glucosa) y soluciones azucaradas relacionadas y glicoles tales como propilenglicol o polietilenglicol son vehículos adecuados para soluciones parenterales. Las soluciones para la administración parenteral pueden contener una sal soluble en agua del principio activo, agentes estabilizantes adecuados, y si es necesario, sustancias tampón. Los agentes antioxidantes tales como el bisulfito de sodio o ácido ascórbico, solos o combinados, son agentes estabilizantes adecuados. También se usan ácido cítrico y sus sales y EDTA de sodio. Además, las soluciones parenterales pueden contener conservantes, tales como cloruro de benzalconio, metil- o propilparabeno y clorobutanol.
Los vehículos farmacéuticos adecuados se divulgan en Remington 's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, un texto de referencia convencional en este campo.
Las formas de dosificación farmacéuticas útiles representativas para la administración de los compuestos de presente invención se pueden ilustrar de la siguiente manera:
Cápsulas
Un gran número de unidades de cápsulas se pueden preparar rellenando cápsulas convencionales de gelatina duras de dos piezas cada una con 100 miligramos de principio activo en polvo, 150 miligramos de lactosa, 50 miligramos de celulosa y 6 miligramos de estearato de magnesio.
Cápsulas de Gelatina Blanda
Una mezcla de principio activo en un aceite digerible tal como el aceite de soja, el aceite de la semilla de algodón o el aceite de oliva se puede preparar e inyectar por medio de una bomba de desplazamiento positivo en la gelatina para formar cápsulas de gelatina blandas que contienen 100 miligramos del principio activo. Las cápsulas se deberían lavar y secar.
Comprimidos
Los comprimidos se pueden preparar mediante procedimientos convencionales de modo que la unidad de dosificación es 100 miligramos de principio activo, 0,2 miligramos de dióxido de silicio coloidal, 5 miligramos de estearato de magnesio, 275 miligramos de celulosa microcristalina, 11 miligramos de almidón y 98,8 miligramos de lactosa. El revestimiento apropiado se puede aplicar para aumentar el buen sabor o retrasar la absorción.
Inyectable
Una composición parenteral adecuada para la administración por inyección se puede preparar agitando el 1,5% en peso del principio activo en el 10% en volumen de propilenglicol y agua. La solución debería hacerse isotónica con cloruro sódico y esterilizarse.
Suspensión
Una suspensión acuosa se puede preparar para la administración oral de modo que cada 5 ml contienen 100 mg de principio activo dividido finamente, 200 mg de carboximetilcelulosa de sodio, 5 mg de benzoato de sodio, 1,0 g de solución de sorbitol, U.S.P. y 0,025 ml de vanilina.
Cuando los compuestos de presente invención se combinan con otros agentes anticoagulantes, por ejemplo, una dosis diaria puede ser aproximadamente de 0,1 a 100 miligramos del compuesto de Fórmula I y aproximadamente de 1 a 7,5 miligramos del segundo anticoagulante, por kilogramo de peso corporal del paciente. Para una forma farmacéutica de comprimido, los compuestos de presente invención generalmente pueden estar presentes en una cantidad de aproximadamente 5 a 10 miligramos por unidad de dosificación y el segundo anticoagulante en una cantidad de aproximadamente 1 a 5 miligramos por unidad de dosificación.
\newpage
Cuando dos o más de los segundos agentes terapéuticos anteriores se administran con el compuesto de los ejemplos, generalmente la cantidad de cada componente en una dosis diaria típica y forma farmacéutica típica se puede reducir en relación a la dosis normal del agente cuando se administra solo, en vista del efecto aditivo o sinérgico de los agentes terapéuticos cuando se administra en combinación.
Particularmente cuando se proporciona como una única unidad de dosificación, el potencial para una interacción química entre los principios activos combinados existe. Por este motivo, cuando el compuesto de los ejemplos y un segundo agente terapéutico se combinan en una única unidad de dosificación se formulan de modo que aunque los principios activos se combinen en una única unidad de dosificación, el contacto físico entre los principios activos se minimiza (es decir, se reduce). Por ejemplo un principio activo puede estar revestido entéricamente. Revistiendo entéricamente uno de los principio activos, es posible no sólo minimizar el contacto entre los principios activos combinados, pero también, es posible controlar la liberación de uno de estos componentes en el tracto gastrointestinal de modo que uno de estos componentes no se libera en el estómago sino más bien se libera en los intestinos. Uno de los principio activos también puede estar revestido con un material que afecte a la liberación prolongada a través del tracto gastrointestinal y también sirve para minimizar el contacto físico entre los principios activos combinados. Además, el componente de liberación prolongada puede estar revestido adicionalmente entéricamente de modo que la liberación de este componente se produce sólo en el intestino. Otros planteamiento implicaría la formulación de un producto de combinación en el que uno de los componentes está revestido con un polímero de liberación prolongada o entérica y el otro componente también está revestido con un polímero tal como hidroxipropil metilcelulosa de bajo grado de (HPMC) u otros materiales adecuados como se sabe en la técnica, para separar más los componentes activos. El revestimiento polimérico sirve para formar una barreara adicional para la interacción con el otro componente.
Estas y otras maneras de minimizar el contacto entre los componentes de los productos de combinación de la presente invención, si se administran en una única forma farmacéutica o se administran en formas separadas pero al mismo tiempo de la misma manera, se pondrán de manifiesto a aquellos especialistas en la técnica, una vez dispongan de la presente descripción.
Adicionalmente, ciertos compuestos descritos en este documento pueden ser útiles como metabolitos de otros compuestos. Por lo tanto, en una realización, los compuestos pueden ser útiles como un compuesto sustancialmente puro, que puede también incorporarse después en una composición farmacéutica o puede ser útil como metabolito que se genera después de la administración del profármaco de ese compuesto. En una realización, un compuesto puede ser útil como un metabolito siendo útil para el tratamiento de trastornos como se divulga en este documento.
"Sustancialmente puro" como se usa en este documento pretende incluir un compuesto que tiene una pureza mayor de aproximadamente el 90 por ciento incluyendo aproximadamente 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 y 100 por ciento.
Como un ejemplo, un compuesto descrito en este documento puede ser sustancialmente puro en tanto que tiene una pureza mayor de aproximadamente el 90 por ciento (en peso), en el que el menos de aproximadamente 10 por ciento restante de material comprende otros metabolitos del compuesto, un profármaco del compuesto y/o reacción y/o impurezas del procesamiento que surgen de su preparación.
Obviamente, numerosas modificaciones y variaciones de la presente invención son posibles en vista de los contenidos anteriores. Debe entenderse por lo tanto que dentro del ámbito de las reivindicaciones adjuntas, la invención debe practicarse de otra manera que se divulga específicamente en este documento.
Ensayos in vivo y eficacia
N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-(S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida (también denominado como "Ejemplo 1") se evaluó en los siguientes ensayos in vivo como se divulga a continuación.
Sección 1
Modelo de exposición intradérmica (ID) de MCP-1 en Procedimientos de monos cynomolgus
La inyección intradérmica de MCP-1 da como resultado la infiltración de células mononucleares al sitio de inyección. Este modelo se desarrolló inicialmente para evaluar el efecto inhibidor de los antagonistas de CCR2 en la infiltración de células mononucleares al tejido de la piel inyectado con MCP-1 humana.
Como se divulga a continuación, se dosificó a cada mono con el Ejemplo I o su vehículo de control (0,5% [p/v] carboximetilcelulosa) una vez al día durante tres días. Inmediatamente después de la dosificación en el Día 3, todos los animales recibieron al menos dos inyecciones intradérmicas de 10 \mug (50 \mul/inyección) de MCP-1 humana (R&D Systems) y al menos 2 inyecciones intradérmicas de su control DPBS (50 \mul/inyección) en sitios separado del tórax dorsal. Las biopsias dérmicas de todos los sitios se tuvieron aproximadamente 18 horas después de la exposición a MCP-1 (o DPBS). Se procesaron las biopsias para la evaluación histológica semicuantitativa. Las secciones representativas de muestras de piel se examinaron mediante microscopía óptica, las lesiones microscópicas y la infiltración celular se apuntaron y sus incidencias se tabularon.
\newpage
En este Estudio 1, Ejemplo I se administró por vía oral a dosis de 0, 6,5, 13 ó 26 mg/kg a grupos de 3 monos cynomolgus (1 ó 2 por sexo por grupo). En el Estudio 2, los animales sin tratamiento previo se usaron para evaluar el Ejemplo 1 a dosis de 0-, 10- ó 30-mg/kg en grupos de 2 ó 4 animales (1/sexo por grupo dosificado con vehículo; 2/sexo por Ejemplo I -grupo dosificado).
Para ambos estudios, además del análisis por biopsias, se recogió sangre y se evaluó para los recuentos totales sanguíneos y diferenciales celulares. También se evaluaron las muestras de plasma para las concentraciones de compuesto y las muestras de suero para los niveles de mediador inflamatorio sistémico.
\vskip1.000000\baselineskip
Resultados
En el primer estudio, el reclutamiento de células mononucleares a la piel de animales de control tratados con vehículos inducido por MCP-1 fue 2,7 \pm 0,3 (en una escala de 0 a 4, Tabla 13). A 26 mg/kg, el Ejemplo I inhibió la infiltración (56%). Dos dosis más bajas de 13 y 6,5 mg/kg consiguieron niveles más bajos de inhibición. El compuesto también inhibió la infiltración de otros tipos celulares tales como eosinófilos y neutrófilos. Las concentraciones de plasma del compuesto a las 18 horas y su relación con los niveles de inhibición y los valores de CI90 de quimiotaxis Cyno se resumen en la Tabla 13.
Se usaron dos procedimientos para determinar la potencia inhibitoria del Ejemplo I en el ensayo de quimiotaxis in vitro. El primero emplea CMSP de monos mientras que el segundo emplea células L 1,2 transfectadas establemente con CCR2 de Cyno. Se descubrió que el primero era altamente variable (CI50 = 5,5 \pm 10 nM), el segundo dio un valor medio más alto, pero más consistente (CI50 = 11,4 \pm 8 nM). Basándose en este segundo valor, la dosis de 26 mg/kg dio como resultado una concentración de plasma libre 18 horas después de la dosificación de 2X la CI90 de quimiotaxis (Tabla 13).
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 13
42 
\newpage
Se realizó un segundo estudio en monos sin tratamiento previo. Comparado con el primer estudio, el Ejemplo I inhibió la infiltración de células mononucleares a un grado mayor (91%) a 30 mg/kg (dosis alta) y dio inhibición del 87% a 10 mg/kg (Tabla 14).
TABLA 14
43 
\vskip1.000000\baselineskip
En ambos estudios, la evaluación de los cambios en los mediadores inflamatorios del suero mostró un aumento (\sim3 veces) en el nivel de MCP-1 en los grupos tratados con Ejemplo 1 en relación con el vehículo de control. Además, el análisis del cuadro hemático completo (CHC) mostró un aumento (\sim3 veces) en neutrófilos en los grupos tratados del Ejemplo 1 en relación al vehículo de control.
Un estudio de ratones hCCR2 Kl se realizó para evaluar el efecto del Ejemplo I en la infiltración de monocitos/macrófagos en el modelo de peritonitis por tioglicolato (TG) con procedimientos basados en el recuento diferencial de células y la citometría de flujo.
\vskip1.000000\baselineskip
Sección 2
Caracterización de Procedimientos de ratones knockin para CCR2 humano (hCCR2 Kl)
El ratón hCCR2 Kl se diseñó genéticamente reemplazando el gen de ratón CCR2 con la secuencia codificante del CCR2 humano. Se obtuvo del Instituto Gladstone de Enfermedades Cardiovasculares de la Universidad de California San Francisco.
Procedimientos de RCP convencional (específicos de genes y cuantitativos) se usaron para distinguir el tipo silvestre (gen CCR2 de ratón) de los alelos dirigidos (gen CCR2 humano) y para determinar el número de copias del gen CCR2 humano y el número de copias del gen CCR2 de ratón con muestras de oreja o cola. El análisis RT-RCP del ARN total aislado de los leucocitos de la sangre también se realizó para determinar el nivel de expresión del ARNm de CCR2 humano y de ratón. El análisis citométrico de flujo se usó para determinar la expresión superficial de proteínas CCR2 humanas o de ratones en los monocitos de la sangre. El análisis FACS de la acumulación de monocitos/macrófagos en la cavidad peritoneal en modelos de peritonitis inducida por TG (véase Sección 3) se usó para determinar la funcionalidad de CCR2 en humanos en estos ratones.
\vskip1.000000\baselineskip
Resultados
El ratón hCCR2 Kl se diseñó genéticamente reemplazando el gen CCR2 de ratón con la secuencia codificante del CCR2 humano. Antes del uso de estos animales para la evaluación in vivo del Ejemplo 1, tanto la caracterización genotípica como la fenotípica de estos ratones se realizó. Los estudios genotípicos basados en la RCP (específicos de genes y cuantitativos) de las muestras de oreja o cola detectaron dos copias del gen CCR2 humano y cantidades variables de producto de la RCP lo que sugiere la presencia de 0 a 2 copias del gen CCR2 de ratón. El ARN celular total aislado de leucocitos de la sangre de estos ratones KI, el análisis de RT-RCP cuantitativo relativo detectó ARNm de CCR2 humano y niveles marginales del producto de la RCP con el conjunto de cebadores diseñado para detectar el ARNm de CCR2 de ratón. Cuando el análisis citométrico de flujo se usó para detectar la expresión de proteínas de CCR2 KI de ratones, CCR2 de humano, pero no CCR2 de ratón, la proteína de superficie se detectó tiñendo los aislados de células de sangre totales con anticuerpos específicos anti-CCR2 humano y anti-CCR2 de ratón, respectiva-
mente.
Los antagonistas selectivos de hCCR2 bloquearon la infiltración de monocitos en estos ratones hCCR2 KI, pero no en ratones de tipo silvestre, cuando los niveles plasmáticos del estado estacionario cubrieron la CI90 para la quimiotaxis de CCR2 humano pero están por debajo de los niveles que se necesitan para inhibir la quimiotaxis CCR2 en ratón. Además, en los ensayos in vitro que imitan la configuración de hCCR2 KI (MCP-1 de ratón/CCR2 humano), el Ejemplo I inhibe la unión de MCP-1 de ratón al CCR2 humano que expresa CMSPh (CI50 = 2,2 \pm 1,2 nM) y la quimiotaxis inducida por MCP-1 de ratón/mediada por CCR2 humano de las células THP-1 (CI50 = 0,6 \pm 0,3 nM).
\vskip1.000000\baselineskip
Sección 3
Modelo de peritonitis inducida por tioglicolato (TG) de 48 horas en ratones hCCR2 KI Procedimientos
Se inyectó intraperitonealmente 1 ml de tioglicolato (TG) (Hardy Diagnostics) a los ratones hCCR2 KI (C57BL/(-SVJ129). Para cada estudio, se usaron ocho ratones macho por grupo. El Ejemplo I se dosificó por vía oral 1 hora antes de la inyección de TG. El vehículo que se usó fue HCl 0,01 N en agua. Cuarenta y ocho horas después de la inyección de TG se realizaron lavados peritoneales inyectando 5 ml PBS/EDTA 10 mM/10% de ASB en la cavidad peritoneal.
Para el estudio de peritonitis por TG de 48 horas, se dosificó el Ejemplo 1 dos veces al día con la primera dosis una hora antes de la inyección de TG. Los recuentos celulares peritoneales totales se obtuvieron en células aisladas mediante un contador celular. Los citocentrifugados se realizaron para determinar los recuentos de leucocitos diferenciales. Se tiñeron las células durante 3 minutos con tinción Wright-Giemsa (Sigma-Aldrich) y después se aclararon con agua desionizada durante 5 minutos. Los recuentos diferenciales se calcularon basándose en un total de 200 células contadas por muestra. También se recogieron la sangre del seno retroorbital al final de cada estudio en EDTA para determinar la concentración de fármaco.
Para el análisis citométrico de flujo, las células exudadas peritoneales (1 x 10^{6}) se lavaron una vez con tampón FACS (PBS/0,5% de ASB) y se resuspendieron en tampón FACS. Se incubaron las células con un anticuerpo bloqueante de Fc (BD Pharmingen) en hielo durante 15 min. seguido de la adición de los siguientes anticuerpos (BD Pharmingen): anti-F4/80 conjugado con FE, anti-Ly6C conjugado con FITC y anti-hCCR2 conjugado con Alexa 647. Después de 45 min. en hielo, se fijaron las células mediante BD Cytofix durante 15 min. en hielo, se lavaron dos veces con tampón FACS y se resuspendieron en 200 \mul de tampón FACS. Los acontecimientos celulares (40.000) se obtuvieron para cada muestra y se analizaron los datos usando el software FloJo (TreeStar). La puerta FSC/SSC se configuró para incluir todos los monocitos (SSC bajo, FSC más alto) mientras que se excluían los granulocitos del análisis. Esta población acotada se analizó después para la expresión de Ly6C (FITC) y F4/80 (PE). Los números de monocitos/macrófagos peritoneales se determinaron multiplicando los recuentos celulares peritoneales totales obtenidos mediante el contador celular y el porcentaje de monocitos/macrófagos identificados mediante células F4/80^{+} de la citometría de flujo. La significancia estadística de las diferencias entre las medias se analizó usando el ensayo t apareado de dos colas con significancia fijada a p-valores por debajo de 0,05.
\vskip1.000000\baselineskip
Resultados
El Ejemplo 1 se evaluó en el modelo de peritonitis por TG de ratón hCCR2 KI para determinar su CE50 en la inhibición de la infiltración de monocitos/macrófagos. Se administró a los ratones tioglicolato y se dosificaron por vía oral con el Ejemplo 1 a 1, 5 ó 25 mg/kg dos veces al día. Durante cuarenta y ocho horas después del tratamiento con TG, se obtuvo el lavado peritoneal para el análisis de infiltración celular. El Ejemplo 1 mostró una reducción dependiente de la dosis en el número de leucocitos peritoneales totales obtenidos mediante el contador celular (Figura 15). Basado en los recuentos de leucocitos diferenciales mediante la evaluación morfológica de las muestras de lavado, el Ejemplo I demostró una inhibición dependiente de dosis del flujo de entrada de monocitos/macrófagos. Las dosis de 1, 5, 25 mg/kg dieron una inhibición del 20%, 62% y 69%, respectivamente. La inhibición estadísticamente significativa se consiguió a 5 y 25 mg/kg (Figura 15). En dos estudios separados, la CE50 media para la inhibición de la infiltración de monocitos/macrófagos se estimó que era 3,0 \pm 0,9 nM.
También se cuantificó el infiltrado de monocitos/macrófagos por citometría de flujo. Para distinguir entre los monocitos/macrófagos reclutados frente a los macrófagos y granulocitos residentes, la tinción de marcadores de superficie tanto F4/80 como Ly6C se usó para definir los monocitos/macrófagos reclutados. Una inhibición dependiente de dosis similar en la infiltración de monocitos/macrófagos se observó por este procedimiento con las tres dosis mostrando una inhibición estadísticamente significativa (Figura 16). Las dosis de 1, 5 y 25 mg/kg dieron una inhibición del 38%, 71% y 86%, respectivamente. En dos estudios separados la CE50 media para la inhibición de la infiltración para monocitos/macrófagos mediante este análisis se estimó que era 2,2 \pm 0,5 nM.
Para evaluar el nivel in vivo de la ocupación de receptores por el Ejemplo 1 en el modelo de peritonitis por tioglicolato de 48 horas usando el ratón knockin de hCCR2, los niveles plasmáticos tanto del Ejemplo I como el ligando de CCR2 de ratón MCP-1 se midieron. La advertencia para esta estimación es que sólo CCR2 y su ligando principal el MCP-1, se tuvieron en cuenta. La ocupación del receptor por un ligando en presencia de un inhibidor competitivo se define por la ecuación de Gaddum:
44
Puesto que el Ejemplo 1 es un inhibidor competitivo de la unión de MCP-1 a CCR2, las cantidades de tanto el complejo receptor MCP-1/CCR2 de ratón como el complejo receptor Ejemplo 1/CCR2 se pueden determinar usando los niveles séricos de tanto el MCP-1 de ratón como de la proteína no unida del Ejemplo I en plasma. La K_{d} para la unión del MCP-1 de ratón a hCCR2 es 0,91 +/- 0,08 nM (n = 8) que se determinó en experimentos de competición de unión de ligando en frío usando ^{125}I-MCP-1 humana. La Ki media para la unión del Ejemplo 1 a hCCR2 es 1,2 nM. La fracción de complejo receptor de MCP-1/CCR2 de ratón se determinó usando la forma de la ecuación descrita anteriormente. Para determinar la fracción de complejos Ejemplo 1/CCR2 la ecuación se redefine como:
45
Finalmente, la cantidad de CCR2 libre se determinó a partir de:
46
Como se muestra en la Tabla 15, el porcentaje de inhibición de la infiltración de monocitos/macrófagos en el peritoneo a las 48 h refleja el porcentaje de complejo receptor del Ejemplo 1/CCR2 (CCR2 ocupado por Ejemplo 1).
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 15
47 
\newpage
Sección 4
Estudios de eficacia crónica Procedimientos
Para estudiar el efecto del Ejemplo 1 en EAE (encefalomielitis autoinmune experimental) un modelo de esclerosis múltiple, se usaron 10 ratones por grupo. En el día 0, los ratones hCCR2 KI se inmunizaron por vía subcutánea con un total de 200 \mul de 300 \mug de glicoproteína de la mielina de los oligodendrocitos (MOG) 35-55 (Genemed Synthesis) mezclado 1:1 con 300 \mug de Mycobacterium tuberculosis (H37Ra) (Becton-Dickinson) en adyuvante de Freund incompleto (AFI) (Sigma-Aldrich). En el día 0 (dos horas después de la inmunización) y día 2, se inyectó intraperitonealmente 100 \mul de 400 ng de toxina pertussis a ratones. La puntuación clínica empezó el día 10, continuó tres veces por semana a lo largo del estudio y se basó en una escala de 0-5: 0, ningún síntoma de enfermedad; 0,5, debilidad parcial de la cola; 1, cola flácida o balanceo del paso con tonicidad de cola; 1,5, balanceo de pato con debilidad parcial de cola; 2, balanceo de paso con cola flácida (ataxia); 2,5 (ataxia con parálisis parcial de miembro); 3, parálisis total de un miembro; 3,5, parálisis total de un miembro con parálisis parcial de un segundo miembro; 4, parálisis de dos miembros; 4,5, moribundo; 5, muerte. La dosificación oral del Ejemplo 1 a 55 mg/kg (dos veces al día) se inició en el día 1
Resultados
En dos de los tres estudios que se realizaron, el Ejemplo 1 redujo significativamente la puntuación clínica
(p < 0,05) (Figura 17). La CI50 es 2,2 nM para el Ejemplo 1 en la unión de ^{125}I MCP-1 de ratón a las células que expresan hCCR2, CMSPh (imitando la configuración de hCCR2 KI). Basándose en este valor de CI50, las dosis de 55 mg/kg dieron como resultado una concentración de valle de plasma libre de \sim2 veces la unión de CI90. La evaluación histológica de la médula espinal el Día 22 no demostró una diferencia significativa en el infiltrado celular inflamatorio total entre ratones tratados con el Ejemplo I frente al vehículo. Un infiltrado de neutrófilos notable se observó en ratones tratados con el compuesto.

Claims (11)

1. Un compuesto, N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto de la reivindicación 1 que es una fórmula cristalina de N-((1R,2S,5R)-5-(isopropil(metil)amino)-2-((S)-2-oxo-3-(6-(trifluorometil)quinazolin-4-ilamino)pirrolidin-1-il)ciclohexil)acetamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. La forma cristalina de la reivindicación 1 o la reivindicación 2 caracterizada por parámetros de celdilla unitaria sustancialmente iguales a los siguientes:
Dimensiones de la celdilla:
a = 11,8427 (3)
b = 18,1503 (7)
c = 12,7923 (4)
\alpha = 90
\beta = 105,362 (2)
\gamma = 90
Grupo espacial P2_{1}, Moléculas/unidad célula 2
en la que dicho cristal está a una temperatura de aproximadamente +22ºC.
4. La forma cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1-3 caracterizada por un patrón de difracción de rayos X en polvo comprendiendo tres o más valores de 2\theta (CuK\alpha \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionado de 7,2, 8,7, 9,7, 12,5, 12,8, 13,3, 16,0, 16,6, 18,2 y 18,8, a una temperatura de aproximadamente 22ºC.
5. La forma cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 además caracterizada por un patrón de difracción de rayos X en polvo comprendiendo cuatro o más valores de 2\theta(CuKa \lambda = 1,541 \ring{A}) seleccionado de un grupo constituido por 7,2, 8,7, 9,7, 12,5, 12,8, 13,3, 16,0, 16,6, 18,2 y 18,8, a una temperatura de aproximadamente 22ºC.
6. La forma cristalina de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 caracterizada por coordienadas atómicos fraccionales sustancialmente como se indica en la Tabla 7.
7. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
8. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para su uso en terapia.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8 para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de diabetes, obesidad, síndrome metabólico, accidente cerebrovascular, dolor neuropático, cardiomiopatía isquémica, psoriasis, hipertensión, esclerodermia, osteoartritis, aneurisma, fiebre, enfermedad cardiovascular, enfermedad de Crohn, fallo cardiaco congestivo, enfermedades autoinmunes, infección por VIH, demencia asociada a VIH, psoriasis, fibrosis pulmonar idiopática, arteriosclerosis de trasplante, trauma cerebral inducido física o químicamente, enfermedad inflamatoria del intestino, alveolitis, colitis, lupus sistémico eritomatoso, nefritis por suero nemotóxico, glomerulonefritis, asma, esclerosis múltiple, aterosclerosis, vasculitis, placas vulnerables, artritis reumatoide, reestenosis, hiperplasia neointimal venosa, hiperplasia neointimal de inserción de diálisis, hiperplasia intimal de derivación arteriovenosa, trasplante de órganos, neuropatía de aloinjerto crónico y cáncer.
10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8 o la reivindicación 9 para su uso en el tratamiento de una enfermedad se selecciona de diabetes, obesidad, enfermedad de Crohn, lupus sistémico eritomatoso, glomerulonefritis, esclerosis múltiple, aterosclerosis, reestenosis y trasplante de órganos.
11. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de esclerosis múltiple, aterosclerosis, enfermedad de Crohn y diabetes.
ES07799831T 2006-07-28 2007-07-26 Moduladores de la actividad del receptor de quimiocina, formas cristalinas y procedimientos. Active ES2346591T3 (es)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US83423506P 2006-07-28 2006-07-28
US834235P 2006-07-28
US89602607P 2007-03-21 2007-03-21
US896026P 2007-03-21
US782704 2007-07-25
US11/782,704 US7671062B2 (en) 2006-07-28 2007-07-25 Modulators of chemokine receptor activity, crystalline forms and process

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2346591T3 true ES2346591T3 (es) 2010-10-18

Family

ID=38823540

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES07799831T Active ES2346591T3 (es) 2006-07-28 2007-07-26 Moduladores de la actividad del receptor de quimiocina, formas cristalinas y procedimientos.

Country Status (29)

Country Link
US (1) US7671062B2 (es)
EP (2) EP2184283A1 (es)
JP (1) JP2009544758A (es)
KR (1) KR20090035036A (es)
CN (1) CN101511822A (es)
AR (1) AR062114A1 (es)
AT (1) ATE471928T1 (es)
AU (1) AU2007279256A1 (es)
BR (1) BRPI0715066A2 (es)
CA (1) CA2659259A1 (es)
CL (3) CL2007002196A1 (es)
CO (1) CO6190527A2 (es)
CY (1) CY1110785T1 (es)
DE (1) DE602007007335D1 (es)
DK (1) DK2049477T3 (es)
EA (1) EA014960B1 (es)
ES (1) ES2346591T3 (es)
HR (1) HRP20100371T1 (es)
IL (1) IL196518A0 (es)
MX (1) MX2009000803A (es)
NO (1) NO20090256L (es)
NZ (1) NZ574656A (es)
PE (1) PE20080838A1 (es)
PL (1) PL2049477T3 (es)
PT (1) PT2049477E (es)
SG (1) SG158925A1 (es)
SI (1) SI2049477T1 (es)
TW (1) TW200823203A (es)
WO (1) WO2008014381A2 (es)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7687508B2 (en) * 2006-07-28 2010-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US8383812B2 (en) 2009-10-13 2013-02-26 Bristol-Myers Squibb Company N-((1R,2S,5R)-5-(tert-butylamino)-2-((S)-3-(7-tert-butylpyrazolo[1,5-A][1,3,5]triazin-4-ylamino)-2-oxopyrrolidin-1-yl)cyclohexyl)acetamide, a dual modulator of chemokine receptor activity, crystalline forms and processes
EP2567959B1 (en) 2011-09-12 2014-04-16 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
ES2904252T3 (es) * 2015-05-21 2022-04-04 Chemocentryx Inc Moduladores de CCR2
SMT202200088T1 (it) * 2017-07-20 2022-03-21 Bristol Myers Squibb Co Procedimento per la preparazione di n-((1r,2s,sr)-5-(tert-butilammino)-2-((s)-3-(7-tert-butilpirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-ilammino)-2-ossopirrolidin-1-il)cicloesil)acetammide
CN118267479A (zh) 2017-09-25 2024-07-02 凯莫森特里克斯股份有限公司 使用趋化因子受体2(ccr2)拮抗剂和pd-1/pd-l1抑制剂的联合治疗
US20190269664A1 (en) 2018-01-08 2019-09-05 Chemocentryx, Inc. Methods of treating solid tumors with ccr2 antagonists
IL275898B2 (en) 2018-01-08 2025-05-01 Chemocentryx Inc Methods for treating solid tumors with CCR2 antagonists
CN115494184B (zh) * 2022-05-09 2023-07-28 浙江海正药业股份有限公司 一种同时检测药物中异丙苯磺酸甲酯、异丙苯磺酸乙酯的方法

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6383082A (ja) 1986-09-26 1988-04-13 Takeda Chem Ind Ltd テトラヒドロフランカルボン酸誘導体の製造法
CA2084800A1 (en) 1991-12-16 1993-06-17 Joseph P. Vacca Hiv protease inhibitors with an internal lactam ring
GB9515411D0 (en) 1995-07-27 1995-09-27 Pharmacia Spa N-(4-substituted-benzyl)-2-aminolactam derivatives
US5827875A (en) 1996-05-10 1998-10-27 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of microsomal triglyceride transfer protein and method
UA51716C2 (uk) 1996-07-08 2002-12-16 Авентіс Фармасьютікалз Продактс Інк. Сполуки, що мають гіпотензивну, кардіопротекторну, анти-ішемічну та антиліполітичну властивості, фармацевтична композиція та способи лікування
US6054579A (en) 1997-06-26 2000-04-25 Leukosite, Inc. Synthesis of substituted lactams
GB9716656D0 (en) 1997-08-07 1997-10-15 Zeneca Ltd Chemical compounds
TR200002182T2 (tr) 1998-01-27 2000-12-21 Aventis Pharmaceuticals Products Inc. İkame edilmiş aksozaherosayklil faktör xa inhibitörleri
US6492553B1 (en) 1998-01-29 2002-12-10 Aventis Pharamaceuticals Inc. Methods for preparing N-[(aliphatic or aromatic)carbonyl)]-2-aminoaetamide compounds and for cyclizing such compounds
PL342254A1 (en) 1998-01-29 2001-06-04 Aventis Pharm Prod Inc Method of obtaining n-[(aliphatic or aromatic substituend)carbonyl)]-2-aminacetamide and cyclised compound
GB9803228D0 (en) 1998-02-17 1998-04-08 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6541208B1 (en) 1998-03-17 2003-04-01 University Of Maryland Biotechnology Institute Diagnostic method for distinguishing HIV-associated dementia from other forms of dementia
WO2001017992A1 (en) 1999-09-09 2001-03-15 Merck & Co., Inc. Inhibitors of prenyl-protein transferase
US6620823B2 (en) 2000-07-11 2003-09-16 Bristol-Myers Squibb Pharme Company Lactam metalloprotease inhibitors
WO2002060859A2 (en) 2000-12-20 2002-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
CA2432908A1 (en) * 2000-12-20 2002-06-27 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Diamines as modulators of chemokine receptor activity
AU2002249103A1 (en) 2001-03-29 2002-10-15 Topo Target Aps Succinimide and maleimide derivatives and their use as topoisomerase ii catalytic inhibitors
GB0114867D0 (en) 2001-06-18 2001-08-08 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
DE10135043A1 (de) 2001-07-11 2003-01-30 Bayer Cropscience Gmbh Substituierte 3-Heteroaryl(amino- oder oxy)-pyrrolidin-2-one, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung als Herbizide oder als Pflanzenwachstumsregulatoren
US7087604B2 (en) * 2002-03-08 2006-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
TW200307667A (en) * 2002-05-06 2003-12-16 Bristol Myers Squibb Co Sulfonylaminovalerolactams and derivatives thereof as factor Xa inhibitors
WO2004022536A1 (en) 2002-09-04 2004-03-18 Glenmark Pharmaceuticals Limited New heterocyclic amide compounds useful for the treatment of inflammatory and allergic disorders: process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
TW200508224A (en) 2003-02-12 2005-03-01 Bristol Myers Squibb Co Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
WO2004071449A2 (en) * 2003-02-12 2004-08-26 Bristol-Myers Squibb Company Lactams as modulators of chemokine receptor activity
US7230133B2 (en) * 2003-05-01 2007-06-12 Bristol-Myers Squibb Company Malonamides and malonamide derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US7291615B2 (en) 2003-05-01 2007-11-06 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US20060205761A1 (en) 2003-06-06 2006-09-14 Catherine Abbadie Ccr-2 antagonists for treatment of neuropathic pain
US7317019B2 (en) * 2003-08-21 2008-01-08 Bristol Myers Squibb Co. N-alkylated diaminopropane derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US20050043392A1 (en) * 2003-08-21 2005-02-24 Carter Percy H. Lactams of alkylated acyclic diamine derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US7863317B2 (en) * 2003-08-21 2011-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Lactams of alkylated acyclic diamine derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US7378409B2 (en) * 2003-08-21 2008-05-27 Bristol-Myers Squibb Company Substituted cycloalkylamine derivatives as modulators of chemokine receptor activity
US7163937B2 (en) 2003-08-21 2007-01-16 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
CA2575612A1 (en) 2004-07-30 2006-02-09 Pfizer Products Inc. Methods of treating ccr2 mediated diseases or disorders
US20060069123A1 (en) * 2004-09-28 2006-03-30 Mingde Xia Substituted dipiperidine CCR2 antagonists

Also Published As

Publication number Publication date
DE602007007335D1 (de) 2010-08-05
EA014960B1 (ru) 2011-04-29
EP2184283A1 (en) 2010-05-12
NO20090256L (no) 2009-02-25
PE20080838A1 (es) 2008-06-14
US20080027083A1 (en) 2008-01-31
BRPI0715066A2 (pt) 2013-05-28
EP2049477B1 (en) 2010-06-23
TW200823203A (en) 2008-06-01
EA200900244A1 (ru) 2009-08-28
HRP20100371T1 (hr) 2010-08-31
AR062114A1 (es) 2008-10-15
PL2049477T3 (pl) 2010-11-30
NZ574656A (en) 2011-12-22
HK1125931A1 (en) 2009-08-21
MX2009000803A (es) 2009-01-29
CL2007002194A1 (es) 2008-02-08
SI2049477T1 (sl) 2010-09-30
ATE471928T1 (de) 2010-07-15
JP2009544758A (ja) 2009-12-17
SG158925A1 (en) 2010-02-26
AU2007279256A1 (en) 2008-01-31
KR20090035036A (ko) 2009-04-08
CL2007002196A1 (es) 2008-05-30
US7671062B2 (en) 2010-03-02
CA2659259A1 (en) 2008-01-31
CY1110785T1 (el) 2015-06-10
EP2049477A2 (en) 2009-04-22
WO2008014381A3 (en) 2008-12-31
WO2008014381A2 (en) 2008-01-31
CN101511822A (zh) 2009-08-19
DK2049477T3 (da) 2010-10-25
CL2007002195A1 (es) 2008-02-08
PT2049477E (pt) 2010-08-27
CO6190527A2 (es) 2010-08-19
IL196518A0 (en) 2009-11-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2346591T3 (es) Moduladores de la actividad del receptor de quimiocina, formas cristalinas y procedimientos.
CN102648201B (zh) N-((1r,2s,5r)-5-(叔丁基氨基)-2-((s)-3-(7-叔丁基吡唑并[1,5-a][1,3,5]三嗪-4-基氨基)-2-氧代吡咯烷-1-基)环己基)乙酰胺,趋化因子受体活性的双重调节剂,晶形及方法
ES2346100T3 (es) Derivados ciclicos como moduladores de la actividad del receptor de quimioquinas.
JP5236643B2 (ja) ケモカイン受容体活性のモジュレーター、結晶形および方法
HK1125931B (en) Modulators of chemokine receptor activity, crystalline forms and process