ES2346882T3 - Elevacion del nivel de adenosina mediante la expresion inducida por citocina de cd73. - Google Patents
Elevacion del nivel de adenosina mediante la expresion inducida por citocina de cd73. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2346882T3 ES2346882T3 ES04721913T ES04721913T ES2346882T3 ES 2346882 T3 ES2346882 T3 ES 2346882T3 ES 04721913 T ES04721913 T ES 04721913T ES 04721913 T ES04721913 T ES 04721913T ES 2346882 T3 ES2346882 T3 ES 2346882T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- ifn
- adenosine
- expression
- baselineskip
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 title claims abstract description 115
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 title claims abstract description 114
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 title description 100
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 title description 50
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 title description 50
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 29
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims abstract description 14
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 claims abstract description 9
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 7
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims abstract description 6
- LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N adenosine monophosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(OP(O)(O)=O)C1O LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims abstract description 5
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 claims description 8
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 claims description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 46
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 102000004008 5'-Nucleotidase Human genes 0.000 description 17
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 17
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 17
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 17
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 15
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 15
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 15
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 15
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 15
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 15
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 12
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 12
- 208000007525 plasmablastic lymphoma Diseases 0.000 description 12
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 11
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 9
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 9
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 8
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 7
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 6
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 5
- OLCWZBFDIYXLAA-IOSLPCCCSA-N adenosine 5'-methylenediphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)CP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O OLCWZBFDIYXLAA-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- AEOBEOJCBAYXBA-UHFFFAOYSA-N A2P5P Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1OP(O)(O)=O AEOBEOJCBAYXBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 108050000203 Adenosine receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000009346 Adenosine receptors Human genes 0.000 description 3
- 229940093764 Adenylate kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 3
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100032534 Adenosine kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020000543 Adenylate kinase Proteins 0.000 description 2
- 101150051188 Adora2a gene Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 101150112014 Gapdh gene Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- MWWSFMDVAYGXBV-FGBSZODSSA-N (7s,9s)-7-[(2r,4s,5r,6s)-4-amino-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-6,9,11-trihydroxy-9-(2-hydroxyacetyl)-4-methoxy-8,10-dihydro-7h-tetracene-5,12-dione;hydron;chloride Chemical compound Cl.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MWWSFMDVAYGXBV-FGBSZODSSA-N 0.000 description 1
- ZNQVEEAIQZEUHB-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxyethanol Chemical compound CCOCCO ZNQVEEAIQZEUHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093475 2-ethoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- KJDSORYAHBAGPP-UHFFFAOYSA-N 4-(3,4-diaminophenyl)benzene-1,2-diamine;hydron;tetrachloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 KJDSORYAHBAGPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 1
- 108010060263 Adenosine A1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000030814 Adenosine A1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 1
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002022 anti-cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000009799 cystectomy Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000037041 intracellular level Effects 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 230000002530 ischemic preconditioning effect Effects 0.000 description 1
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000003975 mesenteric artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- MRWXACSTFXYYMV-FDDDBJFASA-N nebularine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC=C2N=C1 MRWXACSTFXYYMV-FDDDBJFASA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- -1 phosphates Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000018767 positive regulation of catalytic activity Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002212 purine nucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 238000012755 real-time RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003134 recirculating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
- A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
- A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
- A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
El uso de una citocina que es capaz de inducir la expresión del CD73 endotelial, en que dicha citocina es el interferón beta, en combinación con una cantidad eficaz de monofosfato de adenosina, para la fabricación de una composición farmacéutica útil para la prevención o el tratamiento de una enfermedad o trastorno, que es un trauma tisular; una lesión por reperfusión que resulta de un infarto de miocardio o un accidente cerebrovascular, trasplantes de órganos u otra operación quirúrgica; cáncer o metástasis cancerosa, o un estado inflamatorio.
Description
Elevación del nivel de adenosina mediante la
expresión inducida por citocina de CD73.
Este invento se refiere a métodos para el
tratamiento o la prevención de enfermedades o trastornos que se
benefician de un elevado nivel de adenosina, como se define en la
Reivindicación 1.
La interacción entre linfocitos y células
endoteliales es un proceso de múltiples etapas. Para poder penetrar
en la pared vascular y alcanzar el sitio diana, las células
circulantes usan un conjunto muy finamente regulado de moléculas de
adhesión. Una adhesión potenciada al endotelio y la subsiguiente
transmigración de leucocitos recirculantes al tejido a través del
revestimiento endotelial de la pared vascular son características de
la inflamación. Además, en los sitios de inflamación tiene lugar la
liberación de citocinas proinflamatorias y antiinflamatorias en un
grado elevado. Esas citocinas son potentes reguladores de la
expresión de moléculas de adhesión.
CD73
(ecto-5'-nucleotidasa) es una
molécula de 70 kDa de la superficie celular, anclada a
glicosil-fosfatidil-inositol, con
actividad ectoenzimática. Se expresa abundantemente en el endotelio
vascular y con bajo nivel en ciertas subpoblaciones de linfocitos
humanos. Es parte de la ruta de recuperación de purinas al degradar
nucleósido-5'-monofosfatos (AMP e
IMP) hasta nucleósidos como adenosina e inosina (1).
La adenosina, un producto nucleosídico de purina
de la actividad enzimática de CD73, se une a receptores específicos
de la superficie celular. Se ha comunicado que la adenosina
desempeña un papel en muchos procesos fisiológicos y patológicos.
Hasta ahora, se han clonado cuatro subtipos diferentes de receptores
de adenosina acoplados a proteína G, A1R, A2aR, A2bR y A3R. A causa
de la diversidad de receptores y de su abundante localización en
diferentes tejidos, la interacción
adenosina-receptor de adenosina conduce a diversas
respuestas fisiológicas. La adenosina, al unirse a los receptores
A1 y A2, regula consecuencias patológicas de la inflamación al
controlar la unión de leucocitos al endotelio y, al unirse a los
receptores A2 y A3, actúa como un agente antiinflamatorio a través
de la inhibición de la desgranulación de los neutrófilos (2). La
adenosina también disminuye la migración de eosinófilos por medio
de la activación del receptor A3. Este efecto activador del
5'-AMP está mediado por CD73 y va seguido de un
aumento del cAMP intracelular. Recientemente, se ha mostrado un
papel crítico del receptor A2a en la disminución de respuestas
inflamatorias sistémicas y tisularmente específicas in
vivo.
La adenosina previene el daño celular durante
las isquemias cardiaca y nerviosa central (3-5). La
actividad ecto-5'-nucleotidasa
aumenta después de una hipoxia debido a un fenómeno conocido como
preacondicionamiento. Esto da lugar a la liberación de grandes
cantidades de adenosina, lo que conduce a una resistencia aumentada
de las células al infarto en, por ejemplo, una hipoxia cardiaca.
Hasta ahora, no se sabe casi nada acerca de la
regulación de la expresión y la función del CD73 endotelial. Sin
embargo, en la inflamación, puede haber ciertos agentes inductores
secretados que controlen específicamente in vivo la
expresión del CD73 endotelial.
Puesto que la adenosina, que tiene un efecto
antiinflamatorio y celularmente protector, desempeña un papel
importante en el control de la extensión y las consecuencias de la
inflamación, se diseñó este trabajo para identificar factores
responsables de la regulación de la expresión de CD73 así como de la
producción de adenosina mediada por
ecto-5'-nucleotidasa.
Como tal, la adenosina podría ser administrada a
pacientes aquejados de estados inflamatorios o estados que, en caso
de no ser tratados, probablemente desembocarían en una inflamación
tisular. Sin embargo, un inconveniente importante de la
administración directa de adenosina es la rápida eliminación de la
adenosina in vivo. Por lo tanto, este trabajo presenta un
nuevo modo de conseguir niveles elevados de adenosina durante un
tiempo prolongado.
El objeto principal del presente invento es
proporcionar un método para aumentar el nivel de adenosina en un
individuo y para mantener el nivel elevado de adenosina durante un
periodo prolongado de tiempo y, de este modo, prevenir o tratar
estados inflamatorios o estados que, en caso de no ser tratados,
desembocarían en una inflamación tisular.
Por consiguiente, este invento se refiere al uso
de una citocina que es capaz de inducir la expresión de CD73
endotelial, en que dicha citocina es el interferón beta, en
combinación con una cantidad eficaz de monofosfato de adenosina,
para la fabricación de una composición farmacéutica útil para la
prevención o el tratamiento de una enfermedad o trastorno, que es
un trauma tisular; una lesión por reperfusión que resulta de un
infarto de miocardio o un accidente cerebrovascular, trasplantes de
órganos u otra operación quirúrgica; cáncer o metástasis cancerosa,
o un estado inflamatorio.
La Figura 1 es una presentación gráfica que
muestra que la inducción de la expresión superficial de CD73 en
HUVEC por IFN-\alpha depende tanto del tiempo como
de la dosis. En el Gráfico (a), se expusieron HUVEC a 1000 U/ml de
IFN-\alpha durante los periodos de tiempo
indicados. En el Gráfico (b), se cultivaron HUVEC con
IFN-\alpha en diferentes concentraciones durante
72 horas. Se muestran las medias relativas de la intensidad media
de fluorescencia (MFI; del inglés, mean fluorescence
intensity) \pm el error estándar de la media (SEM; del
inglés, standard error of mean) de
3-9 experimentos. La expresión testigo es la
expresión de CD73 sin IFN-\alpha en cada punto
temporal. Se resta el fondo (tinción testigo negativo). *P <
0,05; **P < 0,01.
La Figura 2 es una fotografía microscópica que
demuestra que la inducción de CD73 con IFN-alfa
conduce a una expresión aumentada en lugar de a cambios en su
distribución. Se cultivaron HUVEC en medio o se sometieron a
inducción con IFN-alfa durante 72 horas, y se
detectó la expresión de CD73 en la superficie celular con el
anticuerpo monoclonal (mAb; del inglés, monoclonal
antibody) 4G4 contra CD73 y un anticuerpo
anti-IgG de ratón, conjugado con FITC. (a) En HUVEC
testigo, el CD73 se expresa en la superficie celular siguiendo un
patrón en forma de puntos. (b) Después de la inducción con
IFN-\alpha, el CD73 aparece más intenso pero su
distribución superficial es similar a la de las HUVEC testigo.
Tinción con un anticuerpo testigo negativo, 3G6, sobre HUVEC
testigo (c) y después de la inducción con
IFN-\alpha (d). Ampliación original: 400x; escala
gráfica: 10 \mum.
La Figura 3 es una presentación gráfica de la
expresión relativa de mRNA de CD73 en HUVEC. Se incubaron HUVEC con
y sin IFN-alfa durante 72 horas. Se llevaron a cabo
análisis por RT-PCR en tiempo real con TaqMan. La
figura representa la expresión relativa de mRNA de CD73 entre
células testigo y células tratadas con IFN-alfa. Se
llevó a cabo una normalización utilizando el gen doméstico GAPDH.
Los datos presentan los valores medios de tres experimentos
realizados por duplicado \pm SEM, *P < 0,05.
La Figura 4 es un gráfico que muestra que la
regulación de la expresión del CD73 linfoide difiere de la de las
células endoteliales. Se cultivaron células U266B1 y PBL en el medio
con y sin 100 U/ml de IFN-\alpha durante
diferentes períodos. No se ven cambios significativos en los PBL
(barras blancas) ni las U266B1 (barras negras) cuando se exponen a
IFN-\alpha durante los períodos indicados de
tiempo, en comparación con las células testigo no tratadas. Se
muestran los valores medios relativos de MFI \pm SEM de
3-6 experimentos/punto temporal.
La Figura 5 es un resumen del análisis
semicuantitativo de tinciones inmunohistoquímicas de muestras de
vejiga urinaria procedentes de áreas sanas (Gráfico a) y tumorales
(Gráfico b), antes y después del tratamiento con IFN.
En la Figura 6 se muestran fotografías
microscópicas que demuestran el efecto de
IFN-\alpha sobre la expresión de CD73 en
carcinoma de vejiga. (a) Una muestra de cáncer de vejiga teñida con
un mAb anti-CD73, 4G4, antes del tratamiento con
IFN-\alpha. Algunos vasos expresan CD73 ligera o
moderadamente. (b) El mismo tumor teñido con el mAb
anti-CD73, 4G4, después del tratamiento con
IFN-alfa. Los vasos expresan CD73 moderada o
abundantemente. (c) Tinción con un anticuerpo testigo negativo,
3G6. (d, e) Un ejemplo de un tumor (t) que expresa CD73, antes (d)
y después (e) del tratamiento con IFN-alfa. También
en este caso, IFN-alfa aumentaba la expresión de
CD73 en células endoteliales. (f) Tinción testigo negativo. Se
señalan ciertos vasos con flechas. Ampliación original: 100x;
escala gráfica: 20 \mum.
En la Figura 7 se muestra que
IFN-\alpha aumenta la actividad
ecto-5'-nucleotidasa de la
superficie celular. Se pretrataron HUVEC (a) y PBL (b) durante 48
horas sin (barras claras) y con (barras oscuras) 1000 U/ml de
IFN-\alpha. Se ensayó la actividad
ecto-5'-nucleotidasa utilizando 300
micromoles/l de [^{3}H]AMP, actividad que se expresa en
ordenadas como nanomoles de sustrato desfosforilado por 10^{6}
células por hora (media \pm SEM; n = 4-5). *P
< 0,05 en comparación con las células testigo. (c) Gráfico de la
velocidad de hidrólisis de [^{3}H]AMP por HUVEC testigo
(círculos oscuros) y tratadas con IFN-\alpha
(círculos claros), frente a la concentración de sustrato. Los
valores de expresan como la media \pm SEM de dos experimentos
independientes. Los parámetros cinéticos (V_{max} y K_{m}) se
calcularon a partir de las curvas presentadas y se resumen en el
texto.
En la Figura 8 se muestra el efecto de
IFN-\alpha sobre la permeabilidad de monocapas de
HUVEC. a) Se sembraron HUVEC en una membrana porosa de
poliestireno (tamaño de poro de 0,4 \mum) y se cultivaron hasta
confluencia. Las HUVEC se cultivaron en medio o se trataron con 100
U/ml de IFN-\alpha durante 72 horas. Quince
minutos después de la adición de AMP, se analizó la función de la
membrana midiendo con un fluorómetro el flujo de
FITC-dextrano de 70kDa a la cámara inferior a través
de la monocapa de HUVEC. Se midió el flujo de
FITC-dextrano durante hasta 100 minutos. Los valores
son las medias \pm SEM; n = 3. *P < 0,05 en comparación con
las células tratadas con IFN-\alpha. b) Se
expusieron monocapas confluentes a AMPCP (100 \muM), un inhibidor
específico de la
ecto-5'-nucleotidasa, 30 minutos
antes de la adición del FITC-dextrano. Los datos
mostrados son valores medios \pm SEM; n = 3. *P < 0,05 en
comparación con las células tratadas con
IFN-\alpha.
La Figura 9 son histogramas representativos que
describen la suprarregulación de CD73 en células endoteliales
umbilicales humanas después de una incubación con
IFN-\beta e IFN-\gamma. Durante
20 horas de incubación, el IFN-\beta aumentaba la
intensidad media de fluorescencia (MFI) de 26 a 50, mientras que,
durante 48 horas de incubación, el IFN-\gamma
suprarregulaba la MFI de 26 a 94. El eje X es la intensidad de
fluorescencia en una escala logarítmica, y el eje Y es el número
relativo de células.
En la Figura 10 se muestran rutas metabólicas
que regulan los niveles de adenosina. Se representan las reacciones
enzimáticas que conducen a la formación y la degradación de
adenosina. La cantidad de adenosina puede ser elevada 1)
suprarregulando/aumentando la cantidad de CD73, 2) proporcionando
más AMP, 3) inhibiendo la adenilato cinasa, y 4) inhibiendo la
adenosina desaminasa, o mediante combinaciones de los puntos
anteriores.
En la Figura 11 se muestran tinciones, con
hematoxilina/eosina, de secciones, fijadas con formol y embebidas
en parafina, de pulmones de las ratas con fallo multiorgánico sin
tratamiento (A) o con tratamiento con IFN-beta y
AMP (B).
\vskip1.000000\baselineskip
Esta descripción se basa en la exploración de
una diversidad de posibles mediadores y en el hallazgo de que
IFN-alfa, beta y gamma son potentes activadores de
la expresión de CD73. Se escogió el IFN-alfa para
estudios más detallados. IFN-\alpha producía
in vitro una suprarregulación específica, dependiente del
tiempo y la dosis, de la expresión de CD73 en el endotelio pero no
en PBL, e, incluso más importantemente, suprarregulaba in
vivo la expresión de CD73 en vasos tumorales de pacientes con
carcinoma de vejiga. La suprarregulación del CD73 endotelial
después de la inducción con IFN-\alpha era
enzimáticamente funcional, produciéndose adenosina a partir de
5'-AMP, lo que conducía a una función potenciada de
barrera en las células endoteliales. Además, se halló una
diferencia, específica del tipo celular, en la regulación de los
CD73 endotelial y linfocítico.
Los resultados de los distintos efectos de
IFN-\alpha sobre los CD73 endotelial y linfocítico
demuestran además la diferencia entre los tipos celulares para
regular la expresión de CD73. En este contexto, es digno de mención
que la cantidad de CD73 varía acusadamente entre linfocitos y
células endoteliales. Sólo del 10 al 15% de los linfocitos expresan
CD73, y el nivel de expresión es bajo en comparación con, por
ejemplo, las HUVEC, que son todas positivas para CD73. Este tipo de
diferencias celularmente específicas en la cantidad y la regulación
de CD73 puede ser fundamental para la apropiada actuación de los
linfocitos, cuyo papel es desaminar activamente la adenosina
existente y hacer que se extravase a tejidos linfoides o a sitios de
inflamación. Por contraste, la adenosina es necesaria para que las
células endoteliales mantengan su función de barrera.
En conclusión, este trabajo demuestra cómo se
puede suprarregular CD73 tanto in vitro como in vivo
mediante citocinas, especialmente mediante interferones. Puesto que
la adenosina es de naturaleza muy antiinflamatoria, la manipulación
de su producción endógena por medio de la suprarregulación de CD73
puede ser un posible modo de tratar estados inflamatorios nocivos
tales como, por ejemplo, los daños por reperfusión en relación con
el infarto de miocardio y el accidente cerebrovascular, trasplantes
de órganos y diversos traumas y daños tisulares.
\vskip1.000000\baselineskip
Con el término "mediador", como aquí se
utiliza, se quiere incluir cualquier factor soluble que ejerce un
efecto en el escenario de la inflamación. Con el término
"inductor", como aquí se usa, se quiere significar además un
factor que aumenta la expresión y potencia la función de ciertas
moléculas.
Se debe entender que el término
"tratamiento" incluye la curación completa de una enfermedad o
trastorno, así como la mejoría o el alivio de dicha enfermedad o
trastorno.
Se debe entender que el término
"prevención" incluye la prevención completa, la profilaxis así
como la reducción del riesgo de un individuo a caer enfermo con
dicha enfermedad o trastorno. Se debe entender también que este
término incluye el preacondicionamiento del tejido al elevar el
nivel de adenosina de acuerdo con este invento en una fase muy
precoz (por ejemplo, antes de operaciones, antes de un diagnóstico
completo en pacientes con accidente cerebrovascular e infarto) con
objeto de prevenir daños en el tejido.
El término "individuo" se refiere a un
sujeto humano o animal.
Con la expresión "cantidad eficaz" se
quiere incluir cualquier cantidad de un agente de acuerdo con el
presente invento que es suficiente para causar un resultado
terapéutico deseado, especialmente tras la administración a un
sujeto animal o humano.
La expresión "nivel elevado de adenosina"
debe ser interpretada como un nivel de adenosina que es al menos 2%
mayor, preferiblemente al menos 20% mayor, muy preferiblemente al
menos 30% mayor, que el nivel tisular normal que habría sin las
medidas tomadas de acuerdo con este invento.
La expresión "enfermedad o trastorno que
requiere, o se beneficia de, una elevación del nivel de
adenosina" significa que la prevención o el tratamiento de dicha
enfermedad o trastorno se ve facilitado por un nivel elevado de
adenosina.
Con la expresión "estado inflamatorio" se
quiere incluir cualquier respuesta inflamatoria nociva e indeseada
en un tejido de un individuo, en que dicho estado inflamatorio puede
ser el resultado de un estado agudo, tal como un trauma tisular,
una lesión por reperfusión que resulta de un infarto de miocardio o
un accidente cerebrovascular, trasplantes de órganos u otra
operación quirúrgica, o de un estado crónico, incluyendo estados
alérgicos, enfermedades autoinmunes y enfermedades
inflamatorias.
En este invento, el tratamiento de traumas
tisulares o daños por reperfusión debe ser particularmente entendido
como prevención de unos estados inflamatorios que muy probablemente
aparecerán si se quedan sin tratar dichos traumas o dichos daños
por reperfusión.
\vskip1.000000\baselineskip
Aunque se puede inducir un nivel elevado de
adenosina en un individuo al administrar la proteína CD73
recombinante, o mediante una citocina u otro factor capaz de
inducir la expresión de CD73 endotelial, o mediante una combinación
de ambas terapias, en muchos casos sería preferible el uso de una
citocina u otro factor con una capacidad similar. Sin embargo, en
traumas graves, sería útil, como una alternativa o como una terapia
adicional, la administración de la proteína CD73 recombinante con
objeto de alcanzar rápidamente una producción aumentada de
adenosina.
Un agente adecuado para ser utilizado en este
invento es el interferón beta, que suprarregula la transcripción
del gen CD73.
Las enfermedades o trastornos típicos que
requieren, o se benefician de, una elevación de los niveles de
adenosina del individuo son: trauma tisular; lesiones por
reperfusión que resultan de un infarto de miocardio o un accidente
cerebrovascular, trasplantes de órganos u otras operaciones
quirúrgicas; cáncer o metástasis cancerosa; y estados inflamatorios
que resultan de los susodichos traumas o lesiones por reperfusión o
de estados crónicos que incluyen estados alérgicos, enfermedades
autoinmunes y enfermedades inflamatorias. Como ejemplos de dichos
estados crónicos se pueden mencionar la artritis, estados alérgicos
tales como el asma, estados inflamatorios tales como la enfermedad
inflamatoria intestinal y un estado inflamatorio de la piel,
psoriasis, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer,
enfermedades autoinmunes, diabetes de tipo I o tipo II,
aterosclerosis, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, y
reacciones de rechazo debidas a trasplantes de órganos.
De acuerdo con el invento, la administración de
interferón beta, opcionalmente combinado con proteína CD73
recombinante, es combinada con la administración de monofosfato de
adenosina (AMP; del inglés, adenosine mono-
phosphate) con objeto de salvaguardar la fuente para la adenosina que se va a producir como resultado del nivel elevado de CD73, obtenido por expresión elevada o por administración directa de la proteína CD73 recombinante.
phosphate) con objeto de salvaguardar la fuente para la adenosina que se va a producir como resultado del nivel elevado de CD73, obtenido por expresión elevada o por administración directa de la proteína CD73 recombinante.
Una realización preferible es la administración
combinada de interferón beta, y opcionalmente proteína CD73
recombinante, con AMP y un inhibidor de la adenilato cinasa, que
evita la conversión de AMP en difosfato de adenosina (ADP; del
inglés, adenosine diphosphate) o trifosfato de
adenosina (ATP; del inglés, adenosine
triphosphate)
Aún otra realización preferida es la
administración combinada de interferón beta, y opcionalmente
proteína CD73 recombinante, con AMP y un inhibidor de la adenosina
desaminasa, que evita la descomposición de la adenosina. También
puede ser posible una combinación opcional más con un inhibidor de
la adenilato cinasa.
En la Figura 10 se muestran las rutas
metabólicas que regulan los niveles de adenosina.
De acuerdo con otra realización preferible, la
administración del interferón beta, opcionalmente combinado con la
proteína CD73 recombinante, en combinación con la administración de
monofosfato de adenosina se inicia tan pronto como se empieza a
atender al paciente con trauma o al paciente con infarto o accidente
cerebrovascular, opcionalmente incluso si el diagnóstico final no
está totalmente aclarado. De este modo, el nivel de adenosina puede
ser aumentado lo más rápidamente posible. En el caso de operaciones
quirúrgicas, puede ser útil iniciar dicha administración ya antes
de la operación, por ejemplo, 12 horas antes del inicio de la
operación. Además, en estos casos, se podría administrar un
inhibidor de la adenilato cinasa y/o un inhibidor de la adenosina
desaminasa además de los agentes antes mencionados.
La cantidad terapéuticamente eficaz de los
componentes de acuerdo con esta descripción, que se va a administrar
a un paciente que necesita dicho tratamiento, puede depender de
diversos factores, incluyendo, por ejemplo, la edad y el peso del
paciente, el estado concreto que requiere el tratamiento y su
gravedad, y la vía de administración. La cantidad exacta dependerá
finalmente del juicio del médico que atiende al paciente. De esta
manera, la práctica de la presente descripción puede implicar
cualquier dosis, combinación con otros fármacos terapéuticamente
eficaces, formulación farmacéutica o sistema de distribución para
administración oral, tópica, parenteral o por inhalación.
Las cantidades y los regímenes para la
administración de los agentes de acuerdo con la presente descripción
pueden ser fácilmente determinados por quienes tienen una
experiencia normal en la técnica para tratar trastornos
relacionados con la inflamación, tales como lesiones por
reperfusión, accidentes cerebrovasculares, trasplantes de órganos,
traumas, cánceres o metástasis cancerosas, y enfermedades
inflamatorias crónicas.
Basándose en esta descripción, se puede suponer
que, por ejemplo, citocinas subcutánea, intramuscular, intravenosa
o transdérmicamente administradas, tales como interferones, u otros
factores inducen la suprarregulación de CD73 y aumentan por ello la
concentración local de adenosina, que es un agente antiinflamatorio.
Esto solventa los problemas relacionados con el uso de adenosina,
que tiene una semivida muy corta y, por lo tanto, no es óptima para
uso terapéutico.
De acuerdo con el presente invento, el
interferón beta puede ser preferiblemente administrado por infusión
o por inyección. Las infusiones intravasculares se llevan
normalmente a cabo usando disoluciones parenterales contenidas en
una bolsa o botella para infusiones que puede ser conectada a
diferentes sistemas para controlar la velocidad de administración
de la disolución parenteral. De acuerdo con el presente invento, el
interferón beta puede ser alternativamente administrado en forma de
aerosol.
Las formulaciones preferidas para infusión o
inyección pueden incluir vehículos, tal como albúmina sérica
humana, sales farmacéuticamente aceptables, tampones tales como
fosfatos, y/o otros excipientes farmacéuticamente aceptables. El
ingrediente activo puede ser proporcionado en cantidades que varían,
por ejemplo, de 1 a 50 x 10^{6} UI por ml. La formulación puede
ser preferiblemente proporcionada como un polvo liofilizado en una
forma de dosificación que, antes de la administración, ha de ser
preparada mediante la adición de agua u otras disoluciones
adecuadas para inyección.
Se puede administrar el interferón beta a los
pacientes aquejados de, o que presentan riesgo de padecer,
inflamaciones. Los tipos de los estados inflamatorios son, por
ejemplo, lesiones por reperfusión tras isquemia durante el
accidente cerebrovascular y el infarto de miocardio. Además, los
transplantes de órganos y los traumas son procesos a menudo
asociados con componentes inflamatorios importantes. Debido a sus
características únicas, las diferentes citocinas tienen sus dianas
morbosas preferentes: los interferones beta son los interferones
más adecuados para las lesiones por reperfusión tras isquemia en el
accidente cerebrovascular y el infarto de miocardio.
En el caso de que se administre además la
proteína CD73 recombinante, una vía de administración adecuada sería
la infusión o inyección. Una dosis diaria adecuada está en el
intervalo de 0,1 a 5,0 mg/kg de peso corporal.
El monofosfato de adenosina puede ser
administrado, por ejemplo, subcutánea, intramuscular, intravenosa o
transdérmicamente. Una dosis diaria típica puede estar en el
intervalo de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal.
Además, se puede administrar un inhibidor de la
adenosina desaminasa o un inhibidor de la adenilato cinasa
opcionalmente utilizado, por ejemplo, subcutánea, intramuscular,
intravenosa o transdérmicamente. Una dosis diaria típica de dichos
inhibidores puede estar en el intervalo de 0,1 a 100 mg/kg de peso
corporal.
\vskip1.000000\baselineskip
En los ejemplos siguientes, proporcionados para
describir adicionalmente el invento con detalle, se utilizaron los
materiales y métodos siguientes.
Células, anticuerpos y reactivos. Se
aislaron células endoteliales humanas de vena umbilical (HUVEC; del
inglés, human umbilical vein
endothelial cells) y se cultivaron en medio completo
en matraces para cultivo celular revestidos con gelatina. Se
aislaron linfocitos de sangre periférica (PBL; del inglés,
peripheral blood lymphocytes) humanos de
voluntarios sanos utilizando Ficoll-Hypaque
(Histopaque-1077; Pharmacia, Uppsala, Suecia). Se
cultivaron PBL, la línea celular U266B1 y la línea de células
endoteliales HEC (equivalente a EaHy-926) en medio
RPMI 1640 que contenía FCS al 10%, L-glutamina 4
mM, 100 U/ml de penicilina y 100 \mug/ml de estreptomicina. Como
anticuerpos testigo negativo se usaron el mAb 4G4
anti-CD73 (IgG1 de ratón), el mAb 5C3
anti-ICAM-1 (IgG1) y el mAb 3G6
(IgG1 de ratón) contra células T de gallina. La
\alpha,\beta-metilenoadenosina-5'-difosfato
(AMPCP) y la
adenosina-5'-monofosfato
(5'-AMP) eran de Sigma (Sigma Chemical Co., St.
Louis., Missouri, EE.UU.).
Inducciones y tinciones para
inmunofluorescencia. En la Tabla 1 se indican detalles acerca de
las inducciones. Para cada punto temporal, se incubó un matraz
testigo con inductores.
Para las tinciones por inmunofluorescencia se
utilizaron tres protocolos diferentes:
- A)
- Para estudiar el efecto de un grupo de diferentes inductores sobre la expresión superficial de CD73, se llevaron a cabo análisis por inmunofluorescencia. En resumen, se trataron HUVEC con y sin inductores y se despegaron con tripsina-EDTA 5 mM. Para cada tinción, se incubaron 5 x 10^{5} células con los mAb 3G6 (testigo negativo), 4G4 (anti-CD73) y 5C3 (anti-ICAM-1) en concentraciones saturantes, como sobrenadantes de hibridomas o como anticuerpos purificados (concentración final: 10 \mug/ml), durante 20 minutos a 4ºC, y se lavaron dos veces. Las células se incubaron luego durante 20 minutos a 4ºC con un mAb (Sigma) de cordero anti-IgG de ratón, conjugado con FITC y diluido 1:100, que contenía suero AB al 5%. Finalmente, las células fueron lavadas dos veces y fueron fijadas con paraformaldehído al 1%. Todas las incubaciones y los lavados se llevaron a cabo con disolución salina tamponada con fosfato (PBS; del inglés, phosphate buffered saline) que contenía FCS al 2% y NaN_{3} 1 mM. Luego se detectó la fluorescencia utilizando un separador de células activado por fluorescencia (FACS; del inglés, fluorescence activated cell sorter; Becton-Dickinson, San Jose, California, EE.UU.). La diferencia entre las células testigo y las tratadas se calculó mediante:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
- B)
- Para la detección del CD73 intracelular, se permeabilizaron los linfocitos antes de las tinciones para inmunofluorescencia incubándolos durante 2 minutos en acetona a -20ºC. Las células fueron luego lavadas con medio RPMI 1640 que contenía FCS al 5% y fueron teñidas y analizadas por FACS del modo descrito en A).
- C)
- Para estudiar la distribución de CD73 en HUVEC o PBL, las células fueron primero teñidas como en A) y fueron luego centrifugadas en un portaobjetos de vidrio utilizando 1000 rpm durante 5 minutos, fijadas con formaldehído y montadas con Fluoromount-G (Southern Biotechnology Associates, Inc., Birmingham, Alabama, EE.UU.). Alternativamente, se cultivaron monocapas de HUVEC en portaobjetos de vidrio revestidos con gelatina, se tiñeron para CD73, ICAM-1 o testigo negativo incubando las células con mAbs en concentraciones saturantes del modo descrito en A), y se analizaron con un microscopio de fluorescencia (Olympus BX60).
\vskip1.000000\baselineskip
Análisis de RNA de CD73. Se cultivaron
HUVEC hasta confluencia en matraces para cultivo celular y se
aislaron PBL antes de las inducciones utilizando
Ficoll-Hipaque. Se incubaron 1 x 10^{7} células
tanto de HUVEC como de PBL con 1000 U/ml de
IFN-alfa en medio de cultivo. Se dejó sin tratar un
número similar de células. Se aisló RNA usando el sistema de
aislamiento de RNA Ultraspec^{TM}-II (Biotecx
Laboratories, Inc., Houston, Texas, EE.UU.) de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. Se trataron 1-2 \mug
de RNA total con DNasa I (calidad para multiplicación, Gibco BRL,
Life Technologies, Gaithersburg, Maryland, EE.UU.). Se preparó cDNA
utilizando la transcriptasa inversa Superscript II (Gibco BRL, Life
Technologies) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Antes de la medición por RT-PCR en tiempo real, las
muestras fueron tratadas con RNasa H (Gibco BRL, Life
Technologies). Como testigos internos, se utilizaron cebadores y
sondas para el gen doméstico GAPDH. Se diseñaron cebadores y sondas
para CD73 utilizando el programa informático Primer Express (PE
Biosystems, Foster City, California, EE.UU.). Se utilizaron los
cebadores 5'CTG GGA GCT TAC GAT TTT GCA3' y 5'CCT CGC TGG TCT GCT
CCA3' para CD73 y la sonda 5'CCA ACG ACG TGC ACA GCC GG3' para CD73
(MedProbe, St. Hanshaugen, Noruega). Las mediciones por
RT-PCR en tiempo real se llevaron a cabo utilizando
la mezcla magistral para PCR universal TaqMan® (Applied Biosystems,
Branchburg, New Jersey, EE.UU.) y el detector de secuencias ABI
PRISM 7700 (Applied Biosystems). Se usó la expresión del gen
doméstico GAPDH como una referencia para la normalización y se
calculó el aumento relativo de expresión de mRNA de CD73 entre las
células testigo y las tratadas con
IFN-\alpha.
Ensayo de
ecto-5'-nucleotidasa. Se ensayó
la actividad ecto-5'-nucleotidasa
por cromatografía en capa fina (TLC; del inglés, thin
layer chromatography) de la manera previamente
descrita (19). En resumen, el ensayo enzimático estándar contenía,
en un volumen final de 120 \mul de RPMI 1640, 4-6
x 10^{4} HUVEC (o 1 x 10^{5} células linfoides) despegadas, 5
milimoles/l de \beta-glicerofosfato y las
concentraciones indicadas de 5'-AMP con el trazador
[^{2-3}H]AMP (actividad específica de 6,88
x 10^{11} Bq/milimol; Amersham). Se escogieron unos tiempos de
incubación para asegurar la linealidad de la reacción con el tiempo,
de modo que la cantidad del AMP convertido no excedió del
7-10% del sustrato inicialmente introducido. Se
aplicaron partes alícuotas de la mezcla a hojas Alugram SIL G/UV254
para TLC (Macherey-Nagel) y se sometieron a
separación con isobutanol/alcohol
isoamílico/2-etoxietanol/amoniaco/H_{2}O
(9:6:18:9:15) como disolvente. El AMP marcado con ^{3}H y sus
derivados nucleosídicos desfosforilados fueron visualizados con luz
UV y fueron cuantificados usando un espectrómetro \beta
Wallac-1409.
Ensayos de permeabilidad. Para evaluar la
función de barrera de monocapas confluentes, se sembraron HUVEC
(50.000 células/inserto) en insertos filtrantes de policarbonato
Transwell (6,5 mm de diámetro, 0,4 \mum de tamaño de poro;
Costar, Cambridge, Massachussets, EE.UU.). Los filtros fueron
tratados durante 1-2 horas con fibronectina y
fueron dejados secar al aire antes de sembrar las células
endoteliales. Típicamente, las monocapas se estudiaron
4-5 días después de la siembra. Las HUVEC fueron
inducidas con IFN-\alpha (100 U/ml) durante 72
horas antes de los estudios sobre la permeabilidad de las monocapas
o fueron cultivadas en medio sin IFN-\alpha. Se
evaluó el transporte a través de las monocapas endoteliales midiendo
el flujo de dextrano marcado con FITC (500 \mug/ml; peso
molecular de 70.000). Antes de que se iniciara el transporte del
FITC-dextrano, las monocapas endoteliales fueron
pretratadas con AMP (50 \muM) durante 15 minutos. Para evaluar el
papel de la actividad enzimática de CD73 sobre la permeabilidad de
las células endoteliales, se midió el flujo de
FITC-dextrano en presencia y ausencia de un
inhibidor específico de la
ecto-5'-nucleotidasa, AMPCP (100
\muM). En ciertos experimentos, se añadió AMPCP a las cámaras
superior e inferior 30 minutos antes de que se iniciara el
transporte añadiendo dextrano marcado con FITC. Se separaron los
insertos de la cámara inferior (Visiplate, Perkin Elmer Life
Sciences) en los puntos temporales de 10 minutos, 20 minutos, 30
minutos, 40 minutos y 100 minutos y se midió directamente el
dextrano marcado con FITC de las cámaras inferiores en un
fluorómetro (aparato lector de fluorescencia TECAN Ultra, Tecan,
Austria) utilizando 485 y 535 nm como longitudes de onda de
excitación y emisión, respectivamente.
Análisis estadístico. Los datos se
presentan como media \pm SEM de experimentos individuales. Las
comparaciones estadísticas se hicieron usando la prueba T de
Student, y los valores de P < 0,05 fueron considerados
significativos. Los datos de los experimentos cinéticos fueron
sometidos a análisis informáticos utilizando la ecuación de
Michaelis-Menten para determinar los valores de
K_{m} y V_{max} (GraphPad Prism^{TM}, versión 3.0, San Diego,
California, EE.UU.).
\vskip1.000000\baselineskip
Este trabajo fue diseñado para encontrar
potentes reguladores de la expresión de CD73 o de la actividad
enzimática ecto-5'-nucleotidasa
basada en CD73. De esta manera, se expusieron células endoteliales a
una gran variedad de inductores bien conocidos de diversas
moléculas (Tabla 1). Los inductores incluían, por ejemplo,
interferones y LPS. La presencia de interferones
(IFN-\alpha, IFN-\beta e
IFN-\gamma) condujo a una acusada suprarregulación
de la expresión de CD73 en HUVEC con dosis > 200 U/ml después de
una inducción de 20-24 horas (Figuras 1 y 9).
Este ejemplo muestra que la expresión de CD73 en
células endoteliales es suprarregulada con interferones. Puesto que
IFN-\alpha es utilizado bastante ampliamente en la
medicina clínica, sus efectos fueron evaluados con mayor
detalle.
Casi todas las HUVEC no activadas llevan CD73 en
su superficie cuando son analizadas mediante FACS. Por lo tanto,
para medir el aumento de la expresión de moléculas de CD73 en la
superficie celular, se analizó la intensidad media de fluorescencia
(MFI) de las HUVEC.
Para estudiar más la cinética de la
suprarregulación por IFN-\alpha, se incubaron
monocapas confluentes de HUVEC utilizando diferentes dosis de
IFN-\alpha durante los periodos de tiempo
indicados. La expresión de CD73 resultó aumentada casi dos órdenes
de magnitud (92,4 \pm 11,5%; n = 9), dependientemente del tiempo,
después de 72 horas con 1000 U/ml de IFN-\alpha
(Figura 1a). Una exposición más prolongada de las HUVEC a
IFN-\alpha no causó un aumento significativo
adicional en la expresión de CD73 (datos no mostrados). Se vio un
patrón similar de suprarregulación de CD73 después de la inducción
con IFN-\beta e IFN-\gamma
(Figura 9). La suprarregulación de la expresión de CD73 también
dependía de la dosis ya que, en concentraciones que variaban de 10
a 1000 U/ml, el máximo aumento de intensidad se observó con 1000
U/ml (Figura 1b).
Las tinciones para inmunofluorescencia seguidas
de la microscopía de fluorescencia revelaron que el tratamiento con
IFN-\alpha no induce cambios significativos en la
distribución ni la polarización de CD73 en la superficie de las
HUVEC. En vez de ello, el CD73 está más intensamente, aunque
similarmente, distribuido en la superficie celular (Figura 2).
Este ejemplo muestra que
IFN-\alpha aumenta la expresión del CD73
endotelial de un modo dependiente del tiempo y la dosis.
\vskip1.000000\baselineskip
A continuación, se determinó si el aumento de la
expresión de CD73 es mediado por un aumento de la expresión de RNA
de CD73. Después de 72 horas de inducción de HUVEC con 1000 U/ml de
IFN-\alpha, el nivel de RNA de CD73 era 3,4 \pm
0,5 (media de la expresión relativa \pm SEM; n = 3) en comparación
con las células testigo después de la normalización con respecto a
GAPDH (Figura 3).
Esto confirma que, en realidad, el aumento de
expresión de CD73 observado en el Ejemplo 1 es mediado por una
expresión aumentada de RNA.
\vskip1.000000\baselineskip
A pesar de la similitud estructural de los CD73
endotelial y linfoide, el IFN-\alpha provoca
diferentes efectos en estos dos tipos celulares. Después del
hallazgo de que la expresión de CD73 en células endoteliales es
inducible por IFN-\alpha, se determinó si el CD73
de los linfocitos también actuaría similarmente en las mismas
condiciones. 1000 U/ml de IFN-\alpha no aumentaban
significativamente la expresión de CD73 en PBL (Figura 4). Incluso
con un tiempo de inducción más prolongado, de hasta 48 horas, se
observaron cambios menores en la expresión de CD73 en la superficie
de los linfocitos. Para excluir la posibilidad de que linfocitos
recién aislados no sobrevivan bien en las condiciones de cultivo y,
por lo tanto, no consigan suprarregular CD73, también se trató con
IFN-\alpha la línea celular linfoide U266B1 que
expresa CD73. Estas células también fueron incapaces de
suprarregular su expresión de CD73 incluso después de 48 ó 72 horas
de inducción. En vez de ello, hubo una disminución en el punto
temporal de 48 horas después del tratamiento con
IFN-\alpha en comparación con las células testigo
(MFI relativa de 82,1 \pm 5,6% frente a 100%; n = 3) (Figura
4).
Para elucidar si también hay suprarregulación en
el nivel intracelular de la proteína CD73, se permeabilizaron PBL y
HUVEC con acetona antes de la tinción para inmunofluorescencia
después de la inducción con IFN-\alpha. En los
PBL no se pudo observar suprarregulación alguna de la expresión
intracelular de CD73. Se obtuvieron resultados similares cuando se
hicieron los análisis con FACS y microscopía de fluorescencia. En
las HUVEC se vio una tinción intracelular ligeramente aumentada con
un mAb anti-CD73 después de la inducción con
IFN-\alpha (datos no
mostrados).
mostrados).
\vskip1.000000\baselineskip
Para investigar si IFN-\alpha
también regularía la expresión de CD73 in vivo, muestras
tisulares de cánceres epiteliales superficiales de vejiga fueron
recogidas antes y después de un tratamiento con
IFN-\alpha2b, teñidas y analizadas.
Doce pacientes que tenían cáncer epitelial
superficial de vejiga fueron evaluados para operación de una a tres
semanas antes de la operación real. En relación con la visita de
evaluación, se tomaron biopsias de la zona normal de la vejiga y
del tumor. Los pacientes recibieron 50 millones de unidades de
IFN-\alpha2b (IntronA,
Schering-Plough) instiladas en la vejiga un día
antes de la operación. Se llevó la cistectomía a cabo, y los
pacientes sufrieron una ureteroenterocutaneostomía,
enterocistoplastia o ureteroenteroumbilicostomía convencional como
operación reconstructiva. Tres pacientes no recibieron
IFN-\alpha antes de la operación. Dos de ellos
recibieron 100 mg de epirrubicina (Pharmorubicin, Pharmacia)
instilados en la vejiga un día antes de la operación, y uno no
recibió nada. Se analizaron sus tumores antes (biopsia) y después de
la operación y se usaron como testigos. Todos los pacientes eran
varones caucásicos. Las características de los pacientes aparecen en
la Tabla 2.
Las muestras de vejiga fueron rápidamente
congeladas en nitrógeno líquido y cortadas en secciones de 5 \mum.
Posteriormente, se tiñeron las secciones con el mAb 4G4
anti-CD73 o el mAb 3G6 (testigo negativo) como
anticuerpos primarios y se usó IgG anti-ratón,
generada en conejo y conjugada con peroxidasa (DAKO A/S, Glostrup,
Dinamarca), como anticuerpo de segunda fase. Se desarrolló la
reacción añadiendo tetrahidrocloruro de
3,3'-diaminobencidina (Polysciences Inc.,
Warrington, Pennsylvania, EE.UU.) en PBS. Todas las incubaciones
fueron de 20 minutos con mAb en concentraciones saturantes,
seguidas de dos lavados con PBS. Se contó el número de vasos
positivos/campo microscópico (x200) y se evaluó
semicuantitativamente la intensidad de la tinción. Se dio a cada
muestra una calificación combinada de 0 a 3. Se asignó una
calificación de 0 a las muestras sin vasos sanguíneos positivos y
una calificación de 3 a las muestras con una tinción igual a la de
una tonsila inflamada. Se ajustaron las calificaciones 1 y 2 para
cubrir los patrones de tinción intermedios. Todas las muestras se
leyeron de forma ciega.
En dos tumores, las células malignas eran
positivas para CD73, lo que refleja el hecho de que también algunas
células epiteliales son positivas para CD73.
IFN-\alpha producía una evidente suprarregulación
in vivo de CD73 en el endotelio vascular tanto de los vasos
testigo como de los cancerosos en comparación con los niveles de
expresión en las muestras testigo antes y después del tratamiento
(Figura 5). Sin embargo, no se detectó suprarregulación de CD73
entre los pocos linfocitos normales presentes en los tumores.
Similarmente, el nivel de expresión de las células tumorales
permanecía constante durante el tratamiento con
IFN-\alpha2b en aquellos tumores que eran
positivos para CD73 (Figura 6). Tres pacientes, que no recibieron
IFN-\alpha y fueron utilizados para controlar la
posible suprarregulación de CD73 causada por la biopsia y la propia
operación, no mostraron ningún aumento significativo en su
expresión de CD73 (un paciente no mostró cambio alguno y dos
pacientes presentaron un aumento de 0,5 en la expresión del CD73
endotelial en el tejido tumoral. De esta manera, el cambio medio de
los pacientes testigo era 0,3 y el de los pacientes tratados era 1,3
(P = 0,02).
Este experimento muestra claramente que el CD73
resulta suprarregulado en los sujetos humanos como resultado de la
administración de IFN-\alpha en cantidades
clínicamente posibles.
\vskip1.000000\baselineskip
Para determinar si el aumento de la expresión de
CD73 en HUVEC inducido por IFN-\alpha va
acompañado de la concomitante inducción de actividad
ecto-5'-nucleotidasa, se aplicó un
ensayo radioquímico para la medición directa de la conversión de
[^{3}H]AMP en [^{3}H]adenosina. El pretratamiento
de monocapas de HUVEC con IFN-\alpha (1000 U/ml
durante 48 horas) causó un aumento significativo de la velocidad de
hidrólisis del [^{3}H]AMP (Figura 7a), mientras que no se
detectó activación significativa alguna de la actividad enzimática
después del tratamiento de PBL con IFN-\alpha
(Figura 7b).
Para elucidar adicionalmente el mecanismo de la
activación de la
ecto-5'-nucleotidasa, se llevó a
cabo un análisis cinético de la hidrólisis de [^{3}H]AMP
por HUVEC testigo y tratadas con IFN, y estas curvas de saturación
se pueden ver en la Figura 7c. Un análisis estadístico reveló que
IFN-\alpha aumentaba significativamente la
velocidad de hidrólisis máxima (V_{max}) de la
5'-nucleotidasa en comparación con las células no
tratadas (525 \pm 30 frente a 350 \pm 29 nanomoles/10^{6}
células/hora), sin modificación alguna de la afinidad de la enzima
(Km \sim 50-60 micromoles/l). Estos datos sugieren
que IFN-\alpha, más que inducir cambios
conformacionales en el sitio catalítico de la enzima, aumenta el
número de moléculas de 5'-nucleotidasa
enzimáticamente activas en la superficie endotelial.
Es interesante reseñar que el uso del mismo
planteamiento con otro nucleótido, [^{3}H]ATP, no reveló
cambios significativos en las actividades hidrolizantes de ATP
después del tratamiento de las HUVEC con
IFN-\alpha (datos no mostrados), lo que confirma
la especificidad de la inducción de
ecto-5'-nucleotidasa. Para asegurar
que los linfocitos no secretan continuamente CD73 al sobrenadante
del cultivo celular para producir una actividad enzimática
aumentada, se analizó la conversión de [^{3}H]AMP en
[^{3}H]adenosina en medios de cultivo celular procedentes
de linfocitos inducidos con IFN-\alpha y células
testigo no tratadas. No se halló cambio significativo alguno en la
actividad enzimática de los medios de cultivo celular entre las
células testigo y las tratadas con IFN-\alpha
(datos no mostrados).
Estos experimentos muestran que el interferón
\alpha aumenta la actividad
ecto-5'-nucleotidasa de las células
endoteliales.
\vskip1.000000\baselineskip
Para estudiar si la expresión de CD73
suprarregulada por IFN-\alpha y el aumento de
producción de adenosina mediado por CD73 pueden regular la función
de la membrana de HUVEC, se midió el flujo de dextrano marcado con
FITC a través de monocapas endoteliales confluentes que crecen en
pocillos con insertos permeables. En todos los puntos temporales
examinados, había una diferencia significativa (P < 0,05) en las
permeabilidades de las HUVEC tratadas con
IFN-\alpha (100 U/ml) durante 3 días en
comparación con las de las HUVEC no tratadas, según viene indicado
por un flujo disminuido de FITC-dextrano (Figura
8a). El pretratamiento de las monocapas de HUVEC con un inhibidor
específico de la enzima CD73, AMPCP, invirtió la disminución de
permeabilidad asociada con el tratamiento con
IFN-\alpha, como se demostró por el flujo
aumentado de FITC-dextrano (Figura 8b).
Estos resultados confirman que
IFN-\alpha aumenta la función de membrana de HUVEC
en presencia de AMP; sugieren acusadamente que, al aumentar la
expresión de CD73 y, por lo tanto, el nivel de adenosina, disminuye
la permeabilidad vascular, lo que conduce a una extravasación
disminuida de células inflamatorias a los tejidos.
Los interferones producen una suprarregulación
de CD73 de larga duración, dependiente del tiempo y la dosis, en
células endoteliales pero no en linfocitos, tanto a nivel de
proteína como de RNA. Además, la producción de adenosina mediada
por CD73 aumenta en las células endoteliales después del tratamiento
con IFN-\alpha, lo que da lugar a una disminución
de la permeabilidad de estas células.
\vskip1.000000\baselineskip
Modelo: Se provocó a las ratas (250 g de peso)
un fallo multiorgánico al comprimir la arteria mesentérica durante
30 minutos con una abrazadera. A continuación, el tiempo de
reperfusión fue dos horas. A las ratas del grupo de tratamiento se
les inyectó subcutáneamente 10.000 unidades de
IFN-beta 18-20 horas antes de la
compresión de la arteria con la abrazadera. A lo largo del
experimento real, los animales recibieron 37,5 mg de AMP en 3 ml de
disolución salina como infusión intravenosa continua. Ratas con
fallo multiorgánico inducido pero sin tratamiento sirvieron como
testigos. Al final del experimento, se analizó la histología de los
pulmones, que es uno de los principales órganos diana en este
modelo experimental.
Resultados: Los pulmones de las ratas testigo
sin tratamiento mostraban un espacio alveolar colapsado, como se
puede ver en la Figura 11 (A), mientras que las ratas que habían
recibido IFN-beta y AMP no mostraron un colapso
acusado del espacio alveolar (B). De esta manera, el tratamiento con
IFN-beta y AMP protege de las complicaciones del
fallo multiorgánico.
En conjunto, estos resultados sugieren que las
citocinas, y especialmente los interferones, son relevantes
reguladores in vivo de CD73 en el microambiente de células
endoteliales-leucocitos y, por lo tanto, tienen un
papel fundamental en el control del grado de inflamación a través de
la producción de adenosina, dependiente de CD73.
1. Thompson, L. F., Ruedi, J. M.,
Glass, A., Moldenhauer, G., Moller, P.,
Low, M. G., Klemens, M. R., Massaia, M., y
Lucas, A. H. 1990. Production and characterization of
monoclonal antibodies to the glycosyl
phosphatidylinositol-anchored lymphocyte
differentiation antigen
ecto-5'-nupleotidase (CD73).
Tissue Antigens 35: 9-19.
2. Bouma, M. G., Jeunhomme, T. M.
M. A., Boyle, D. L., Dentener, M. A., Voitenok,
N. N., van den Wildenberg, F. A J. M., y Buurman, W.
A. 1997. Adenosine inhibits neutrophil degranulation in
activated human whole blood: involvement of adenosine A2 and A3
receptors. J. Immunol. 158: 5400-5408.
3. Olah, M. E., y Stiles, G. L.
1995. Adenosine receptor subtypes: characterization and
therapeutic regulation. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 35:
581-606.
4. Heurteaux, C., Lauritzen, I.,
Widmahn, C., y Lazdunski, M. 1995. Essential
role of adenosine, adenosine A1 receptors, and
ATP-sensitive K+ channels in cerebral ischemic
preconditioning. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:
4666-4670.
5. Linden, J. 2001. Molecular
approach to adenosine receptors: receptor-mediated
mechanisms of tissue protection. Annu. Rev. Pharmacol.
Toxicol. 41: 775-787.
<110> Jalkanen, Sirpa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Método para tratar o prevenir
estados por elevación del nivel de adenosina en un individuo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 3100-101
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> Patentin, versión 3.0
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipctgggagctt acgattttgc a
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcctcgctggt ctgctcca
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipccaacgacgt gcacagccgg
\hfill20
Claims (3)
1. El uso de una citocina que es capaz de
inducir la expresión del CD73 endotelial, en que dicha citocina es
el interferón beta, en combinación con una cantidad eficaz de
monofosfato de adenosina, para la fabricación de una composición
farmacéutica útil para la prevención o el tratamiento de una
enfermedad o trastorno, que es un trauma tisular; una lesión por
reperfusión que resulta de un infarto de miocardio o un accidente
cerebrovascular, trasplantes de órganos u otra operación
quirúrgica; cáncer o metástasis cancerosa, o un estado
inflamatorio.
2. El uso de acuerdo con la Reivindicación 1, en
que la enfermedad o trastorno es un trauma tisular; una lesión por
reperfusión que resulta de un infarto de miocardio o un accidente
cerebrovascular, cáncer o metástasis cancerosa, o un estado
inflamatorio, y en que la administración de la citocina se inicia
tan pronto como el paciente comienza a ser atendido.
3. El uso de acuerdo con la Reivindicación 1, en
que la enfermedad es una lesión por reperfusión que resulta de
trasplantes de órganos u otra operación quirúrgica, y la
administración de la citocina se inicia antes de la operación
quirúrgica.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI20030467 | 2003-03-28 | ||
| FI20030467A FI20030467A0 (fi) | 2003-03-28 | 2003-03-28 | Menetelmä tulehdustilojen hoitamiseen |
| US51542503P | 2003-10-30 | 2003-10-30 | |
| US515425P | 2003-10-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2346882T3 true ES2346882T3 (es) | 2010-10-21 |
Family
ID=8565887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES04721913T Expired - Lifetime ES2346882T3 (es) | 2003-03-28 | 2004-03-19 | Elevacion del nivel de adenosina mediante la expresion inducida por citocina de cd73. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4809762B2 (es) |
| DK (1) | DK1608400T3 (es) |
| ES (1) | ES2346882T3 (es) |
| FI (1) | FI20030467A0 (es) |
| PT (1) | PT1608400E (es) |
| SI (1) | SI1608400T1 (es) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102007015394A1 (de) | 2007-03-28 | 2008-10-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Schalldämmendes Schottteil zum Abdichten eines Hohlraumes |
| FI20070795A0 (fi) * | 2007-10-24 | 2007-10-24 | Faron Pharmaceuticals Oy | Uusi biomarkkeri sairauksien kehittämisen tarkkailuun ja terapioiden tehon arviointiin |
| CA3103356A1 (en) * | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Biogaia Ab | Therapeutic methods using bacterial strains which are capable of increasing adenosine levels |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1221976A4 (en) * | 1999-09-28 | 2003-12-03 | Amarillo Biosciences Inc | IFN-GAMA IN LOW DOSAGE FOR TREATING DISEASES |
| DE60129472T2 (de) * | 2001-04-03 | 2008-04-17 | U-Cytech B.V. | Behandlung von hypoxya/ischaemia blutflusswiderstand mit beta-interferon |
-
2003
- 2003-03-28 FI FI20030467A patent/FI20030467A0/fi unknown
-
2004
- 2004-03-19 JP JP2006505622A patent/JP4809762B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-19 SI SI200431498T patent/SI1608400T1/sl unknown
- 2004-03-19 PT PT04721913T patent/PT1608400E/pt unknown
- 2004-03-19 ES ES04721913T patent/ES2346882T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-03-19 DK DK04721913.4T patent/DK1608400T3/da active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4809762B2 (ja) | 2011-11-09 |
| JP2006522075A (ja) | 2006-09-28 |
| SI1608400T1 (sl) | 2010-10-29 |
| PT1608400E (pt) | 2010-08-18 |
| DK1608400T3 (da) | 2010-09-27 |
| FI20030467A0 (fi) | 2003-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20090269303A1 (en) | Method for treating or preventing conditions by elevation of the adenosine level in an individual | |
| Tang et al. | A simple self-assembly nanomicelle based on brain tumor-targeting peptide-mediated siRNA delivery for glioma immunotherapy via intranasal administration | |
| Dionne et al. | Cell cycle-independent death of prostate adenocarcinoma is induced by the trk tyrosine kinase inhibitor CEP-751 (KT6587). | |
| ES2668874T3 (es) | Anticuerpos anti-CEACAM1 y métodos de uso de los mismos | |
| US20090093412A1 (en) | Methods for the modulation of neovascularization and/or the growth of collateral arteries and/or other arteries from preexisting arteriolar connections | |
| KR20170078689A (ko) | 췌장암을 치료하기 위한 펩타이드 기반 방법 | |
| Ma et al. | Enhanced immunotherapy of SM5-1 in hepatocellular carcinoma by conjugating with gold nanoparticles and its in vivo bioluminescence tomographic evaluation | |
| AU2015360903B2 (en) | Methods for upregulating immune responses using combinations of anti-RGMB and anti-PD-1 agents | |
| BR112020019611A2 (pt) | Conjugados de anticorpo anti-antígeno de membrana específico da próstata (amep) humanizado e fármaco | |
| BR112014008893B1 (pt) | Anticorpo monoclonal ou fragmento de antígeno do mesmo, polinucleotídeo isolado que codifica o referido anticorpo, bem como composições farmacêutica e diagnóstica compreendendo o mesmo, plasmídeo e usos do referido anticorpo ou fragmento de antígeno do mesmo | |
| WO2021050986A1 (en) | Lnp-formulated mrna therapeutics and use thereof for treating human subjects | |
| Zhang et al. | Grateloupia longifolia polysaccharide inhibits angiogenesis by downregulating tissue factor expression in HMEC-1 endothelial cells | |
| US20170028080A1 (en) | Targeted Drug Conjugates | |
| ES2431040T3 (es) | Detección y modulación de la angiogénesis mediada por Slit y Roundabout (Robo), y sus usos | |
| Hu et al. | Serinc2 deficiency exacerbates sepsis-induced cardiomyopathy by enhancing necroptosis and apoptosis | |
| ES2288979T3 (es) | Diagnostico y tratamiento del cancer de prostata. | |
| Guo et al. | Tumor-derived nanovesicles enhance cancer synergistic chemo-immunotherapy by promoting cGAS/STING pathway activation and immunogenetic cell death | |
| Zhou et al. | A novel tri‐functional liposome Re‐educates “Cold Tumor” and abrogates tumor growth by synergizing autophagy inhibition and PD‐L1 blockade | |
| JP2010503680A (ja) | ヒトｉｌ−１８による調節ｔ細胞のモジュレーション | |
| ES2346882T3 (es) | Elevacion del nivel de adenosina mediante la expresion inducida por citocina de cd73. | |
| WO2007072221A2 (en) | Surface marker-directed cancer therapeutics | |
| Kurokawa et al. | Chondroitin sulfate proteoglycan 4: An attractive target for antibody-based immunotherapy | |
| WO2024050023A1 (en) | Compositions and methods for treating cancer that demonstrates decreasing levels of ctdna in a subject | |
| He et al. | Decitabine/paclitaxel co-delivery systems modified with anti-PD-L1 antibodies mediate chemoimmunotherapy for Triple negative breast cancer | |
| US20040022870A1 (en) | Immunogenic TLP composition |