ES2348471T3

ES2348471T3 - Promotores de cicatrización de heridas.

Info

Publication number: ES2348471T3
Application number: ES01955679T
Authority: ES
Inventors: Teruo Nishida; Masatsugu Nakamura; Katsuhiko Nakata
Original assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2000-08-10
Filing date: 2001-08-10
Publication date: 2010-12-07
Anticipated expiration: 2021-08-10

Abstract

Uso de un análogo de sustancia P o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un factor de crecimiento de tipo insulina en la fabricación de un 5 agente terapéutico para una herida cutánea.

Description

Campo Técnico [0001] La presente invención se refiere a promotores de cicatrización de heridas que comprenden al menos uno de los análogos de sustancia P y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y un factor de crecimiento de tipo insulina como principios activos.

Antecedentes de la Técnica [0002] Las heridas cutáneas son daños de tejidos de superficie tales como ruptura, abrasión, incisión quirúrgica, úlcera cutánea o quemadura. El tratamiento general de estas heridas cutáneas es proporcionar primeros auxilios a los sitios heridos y después esperar la recuperación espontánea debida al restablecimiento de un cuerpo vivo. [0003] Sin embargo, dicha recuperación espontánea requiere un largo período hasta el restablecimiento y los dolores también continúan. En consecuencia, es conveniente promover la cicatrización definitivamente mediante la administración de agentes terapéuticos para heridas en los sitios heridos. [0004] Puesto que se forman nuevos tejidos epiteliales y tejidos conectivos por migración y proliferación de células en un proceso de curación de heridas, los fármacos que promueven o estimulan la migración, diferenciación y proliferación de células que participan en curación de heridas pueden ser agentes terapéuticos para heridas. El cloruro de lisozima, solcoseril y similares se conocen como estos agentes terapéuticos para heridas. [0005] Sin embargo, los agentes terapéuticos existentes para heridas suponen los problemas de que los agentes no muestran suficientes acciones promotoras en curación de heridas y no pueden recuperar las heridas completamente durante un corto período. Se considera que estos problemas se deben a una pequeña contribución de estos agentes a la recuperación de epidermis, síntesis de colágeno, mejora de la circulación periférica, formación de granulación, angiogénesis o similares, que es un factor importante en el proceso de curación de heridas. [0006] Los análogos de sustancia P son polipéptidos que consisten en de tres a doce aminoácidos que se describen específicamente en la patente de Estados Unidos Nº 3.862.114 y se sabe que estos polipéptidos tienen acciones hipotensoras. La sustancia P, que es uno de los análogos de sustancia P, es un polipéptido liberado y formado desde un terminal nervioso, es un polipéptido que consiste en once aminoácidos representados por la fórmula de Arg-Pro-Lys-ProGln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2 y se sabe que muestra vasodilatación, contracción del músculo liso, promoción de la secreción de glándula salival, una acción diurética y similares. En un campo oftalmológico, se notificó un efecto de la sustancia P en la mejora de la secreción anómala de células caliciformes conjuntivas en trastornos oftalmológicos (documento WO 95/13087), la cinética de la sustancia P en inflamación tal como queratitis (J. Jpn. Ophthalmol. Soc., 91, 982987 (1987), J. Jpn. Ophthalmol. Soc., 92, 448-452 (1988)) y similares. Adicionalmente, la Patente Japonesa abierta a inspección pública con Nº de publicación 17489/1998 describe que Phe-Gly-Leu-Met-NH2 (denominado en lo sucesivo en la presente memoria “FGLM”), que es un tetrapéptido en el extremo C terminal de la sustancia P, tiene un efecto como agente terapéutico para trastornos de la córnea. [0007] Por otro lado, un factor de crecimiento de tipo insulina es uno de los factores que ajustan el crecimiento de células humanas normales tal como un factor de crecimiento epidérmico, un factor de crecimiento de fibroblastos, un factor de crecimiento derivado de plaquetas y un factor de crecimiento transformante y se clasifica en dos grupos, es decir, factor de crecimiento tipo insulina I (denominado en lo sucesivo en la presente memoria “IGF-I”) y factor de crecimiento de tipo insulina II (denominado en lo sucesivo en la presente memoria “IGF–II”). Se notificó que IGF-I estimula la proliferación de células tiroideas (J. Biol. Chem., 264, 1848518488 (1989)), IGF-II ajusta el crecimiento y la diferenciación de músculo (Hum. Mol. Genet., 3, 1117 -1121 (1994)), y similares. [0008] Sin embargo, no ha habido ningún informe relacionado con las acciones de los análogos de sustancia P y los factores de crecimiento tipo insulina en trastornos cutáneos. [0009] A partir de estos hechos, un campo interesante es combinar el análogo de sustancia P con el factor de crecimiento tipo insulina y realizar ensayos farmacológicos en epidermis para estudiar los efectos promotores en la extensión epidérmica y los efectos promotores en la cicatrización de heridas.

Descripción de la invención [0010] Los presentes inventores hallaron mediante los ensayos anteriormente mencionados que cuando un análogo de sustancia P, típicamente sustancia P o FGLM, coexiste con un factor de crecimiento de tipo insulina, típicamente IGF-I, la potenciación de estos fármacos promueve la extensión epidérmica y la cicatrización de heridas notablemente y adicionalmente muestra un excelente efecto en la curación de úlcera cutánea diabética incurable. Concretamente, los promotores de cicatrización de heridas de la presente invención que comprenden al menos uno de los análogos de sustancia P y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y el factor de crecimiento de tipo insulina como principios activos tienen efectos promotores de la cicatrización de heridas tales como ruptura, abrasión, incisión quirúrgica, úlcera cutánea (incluyendo úlcera cutánea diabética) y quemadura y enfermedades tales como gangrena que se originan de estas heridas cutáneas. A los promotores de cicatrización de heridas pueden añadirse ácido ascórbico, ascorbato, una sal de ácido ascórbico, ácido pantoténico, una sal de ácido pantoténico o similares, cuyos efectos en curación de heridas ya se han reconocido. [0011] Son ejemplos de análogos de sustancia P Tyr-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-GlnPhe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2, Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2 (sustancia P), Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2, Tyr-Pro-Gln-GlnPhe-Phe-Gly-Gln-Met-NH2, Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2, Pro-Gln-GlnPhe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2, Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2, Asp-Ala-Phe-TyrGly-Leu-Met-NH2, Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2, Ala-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2, Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH2, Tyr-Phe-Gly-Leu-Met-NH2, Gly-Phe-Gly-Leu-Met-NH2, Phe-Gly-Leu-Met-NH2 (FGLM) y Tyr-Gly-Leu-Met-NH2. Son ejemplos preferidos de los análogos de sustancia P la sustancia P y FGLM. [0012] Existen formas L, formas D y formas DL como estructuras de aminoácidos de los análogos de sustancia P, y se incluyen todas en la presente invención. Son formas preferidas en la presente invención polipéptidos en los que todas las estructuras estéricas son formas L. [0013] Son ejemplos de las sales farmacéuticamente aceptables de los análogos de sustancia P, la sustancia P y FGLM los hidrocloruros, sulfatos, fosfatos, lactatos, maleatos, fumaratos, oxalatos, metanosulfonatos y p-toluenosulfonatos. [0014] Los promotores de cicatrización de heridas de la presente invención pueden prepararse mediante técnicas ampliamente usadas. Son ejemplos de formas de preparación de los mismos pomadas, vaselinas, cataplasmas, aplicaciones, lociones, cremas, pulverizaciones, aerosoles, parches, suspensiones, emulsiones, comprimidos y píldoras y los promotores también pueden usarse como preparaciones líquidas mediante la selección de un disolvente adecuado. Para preparar los promotores de cicatrización de heridas, puede añadirse una carga, un excipiente, una base, un desintegrador, una carga formadora de volumen, un aglutinante, un agente formador de película, un lubricante, un colorante, un ajustador de pH, un solubilizador, un agente de suspensión, un tampón, un estabilizador, un conservante, un antiséptico, un tensioactivo, un antioxidante, un dispersante, un emulsionante, un agente de disolución, un agente de solubilización

o similares dependiendo de sus formas farmacéuticas. [0015] Son ejemplos de vehículos o bases de las preparaciones anteriormente mencionadas la parafina suave blanca, parafina líquida, hidrocarburos fijos, alcohol cetílico, polietilenglicol, gelatina, almidón de maíz, alginato de sodio, metil celulosa, hidroxietil celulosa, carboximetil celulosa, plastibase hidrófila, gelatina, dextrina, alcohol cetílico, alcohol estearílico, polietilenglicol, alcohol polivinílico, copolímeros de metoxietileno-anhídrido maleico, éter de polivinilo, polímeros y copolímeros que comprenden vinilpirrolidona como un componente polimérico, estearato de sodio, estearato de magnesio, cloruro de benzalconio, grasas y aceites tales como aceite de oliva, aceite de camelia y aceite de soja, lactosa y agua. [0016] Cada cantidad del análogo de sustancia P y la sal farmacéuticamente aceptable del mismo contenida en el promotor de cicatrización de heridas es de 0,001 a 10% en peso, preferiblemente 0,005 a 5% en peso. Una cantidad de factor de crecimiento de tipo insulina contenido en el promotor de cicatrización de heridas es de 0,0001 a 5% en peso, preferiblemente 0,001 a 1% en peso. [0017] La presente invención proporciona un método para tratar las heridas cutáneas que comprende la administración a un paciente que lo necesite de una composición que comprende cantidades eficaces para el tratamiento del análogo de sustancia P o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo y el factor de crecimiento de tipo insulina con un aditivo farmacéuticamente aceptable. [0018] La presente invención también proporciona el uso de los análogos de sustancia P o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y los factores de crecimiento de tipo insulina en la fabricación de agentes terapéuticos para heridas cutáneas. [0019] Los promotores de cicatrización de heridas de la presente invención pueden administrarse de diversas formas dependiendo de los sitios de las heridas y los grados de las heridas. Por ejemplo, cuando el promotor se usa como una preparación externa, es deseable directamente pintar, pulverizar o aplicar el promotor en los sitios requeridos (partes afectadas) de la piel.

[0020] La dosificación de los promotores de cicatrización de heridas de la presente invención pueden seleccionarse apropiadamente a la vista de los síntomas, la edad, la forma farmacéutica y similares. Cada dosis diaria usual del análogo de sustancia P y la sal farmacéuticamente aceptable del mismo es de 0,01 5 a 5.000 mg, preferiblemente de 0,1 a 1.000 mg, que se administra en una dosis única o varias dosis divididas, combinado (mezclado) con el factor de crecimiento de tipo insulina. La dosis diaria usual del factor de crecimiento de tipo insulina es de 0,001 a 1.000 mg, preferiblemente 0,01 a 500 mg, que se administra en una dosis única o varias dosis divididas, combinadas (mezcladas) con al menos uno de los

10 análogos de sustancia P y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los promotores de cicatrización de heridas de la presente invención pueden administrarse en una dosis única a cinco dosis por día. [0021] Los ejemplos de preparaciones y resultados de ensayos farmacológicos de la presente invención se muestran a continuación. Estos ejemplos no limitan el

15 campo de la presente invención, pero se pretende que hagan la presente invención más claramente entendible.

Mejor Modo para Llevar a Cabo la Invención Formulación

20: [0022] A continuación se muestran los ejemplos de formulación típica de la

presente invención.

Ejemplo 1 (pomada A-1)

[0023]: En 100 g

Sustancia P: 100 mg

IGF-1: 10 mg

Parafina líquida: 10 g

Parafina suave blanca: c.s.

[0024] Variando la cantidad de sustancia P, pueden prepararse pomadas que 25 tienen concentraciones de 0,2% (p/p) (pomada A-2), 0,5% (p/p) (pomada A-3) y 1,0% (p/p) (pomada A-4).

Ejemplo 2 (pomada B-1)

[0025]

En 100 g

FLGM: 100 mg

IGF-I: 5 mg

Parafina líquida: 10 g

Parafina suave blanca: c.s.

[0026] Variando la cantidad de FGLM, pueden prepararse pomadas que tienen concentraciones de 0,3% (p/p) (pomada B-2), 1% (p/p) (pomada B-3) y 2% (p/p)

(pomada B-4). Ejemplo 3 (pomada C-1)

[0027]

En 100g FGLM IGF-1 Ácido ascórbico Parafina líquida Plastibase hidrófila

50 mg 10 mg 3 mg 10 g c.s.

[0028] Variando la cantidad de FGLM, pueden prepararse pomadas que tienen concentraciones de 0,3% (p/p) (pomada C-2), 1% (p/p) (pomada C-3) y 3% (p/p)

10 (pomada C-4).

Ensayos farmacológicos

(1) Acción de extensión epidérmica [0029] Se administró pentobarbital en exceso a ratas (Sprague-Dawley) y

15 después se prepararon trozos de tejido de la oreja de aproximadamente 2 x 4 mm. Se pusieron en una placa Petri de 60 mm 18 ml de cada medio de cultivo TCM 199 que contenían cada uno de los fármacos de ensayo de la Tabla 1 [sustancia P, FGLM, IGF-I, sustancia P + IGF-I y FGLM + IGF-I] y se añadieron tres trozos de tejido a cada placa Petri (12 muestras: tres secciones por grupo). Los trozos de

20 tejido se cultivaron en un incubador de CO2 (37ºC CO2 5 %) durante 24 horas, se fijaron los trozos de tejido con etanol -ácido acético (relación de volumen 95:5) para preparar tres secciones tisulares por trozo de tejido de acuerdo con el método convencional. Las secciones tisulares se tiñeron con hematoxilina-eosina y después se midió la longitud de una capa celular epidérmica que tenía superficies de corte prolongadas. Los trozos de tejido se cultivaron en las mismas condiciones que se han mencionado anteriormente usando un medio de cultivo que no contenía fármaco de ensayo para preparar controles. Estos resultados se muestran en la Tabla 1. Los valores de la tabla son la media de 12 muestras.

Tabla 1

Fármacos de ensayo: Longitud de extensión de la epidermis (µm)

Control Sustancia P (20 µM) FGLM (20 µM) IGF-I (10 ng/ml) Sustancia P (20 µM) + IGF-I (10 ng/ml) FGLM (20 µM) + IGF-I (10 ng/ml): 63,02 72,57 55,37 50,68 156,04 138,24

10 (2) Acción en cicatrización de heridas [0030] Se inyectó por vía intravenosa estreptozocina (70 mg/kg MC) disuelta en un tampón de ácido cítrico a las colas de ratas (Wistar) con anestesia por inhalación de dietil éter para preparar ratas con diabetes (rata DM) (cinco ratas por grupo). Se inyectó por vía intravenosa una cantidad igual de tampón de ácido cítrico solo a

15 ratas (Wistar) para preparar ratas sin diabetes (rata no DM) (cinco ratas por grupo). Cuatro semanas después de la inyección intravenosa, se afeitó la espalda de todas las ratas con cortadoras de pelo con anestesia por inhalación de dietil éter y se eliminó el pelo con crema de depilación. Después de 24 horas se realizaron cinco heridas de grosor completo (es decir, epidermis y dermis) en la piel de la espalda a

20 intervalos iguales con un trépano para biopsias cutáneas que tiene un diámetro de 5 mm. Tras la confirmación la hemostasis, se aplicó cada pomada de las Tablas 2 y 3 en la herida una vez al día. Justo antes de aplicar la pomada una vez al día, se fotografiaron las heridas de la espalda y se midieron sus áreas. La Tabla 2 muestra los resultados de la medición de áreas de las ratas sin diabetes (rata no DM) y la

25 Tabla 3 muestra los resultados de la medición de áreas para las ratas con diabetes (rata DM). Los valores de estas tablas son las medias de cinco muestras.

Grupo de pomada: Área de herida cutánea de ratas sin diabetes (%)

1er día: Después de 2 días Después de 4 días Después de 6 días

Control (PBS): 100 93 87 64

Sustancia P (2,5 mg/ml): 100 88 74 59

IGF-I (1 µg/ml): 100 81 66 43

Sustancia P (2,5 mg/ml) + IGF-I (1 µg/ml): 100 72 50 32

Tabla 3

Grupo de pomada: Área de herida cutánea de rata con diabetes (%)

1er día: Después de 1 día Después de 4 días Después de 7 días Después de 10 días

Control (PBS): 100 96 91 84 60

Sustancia P (2,5 mg/ml): 100 90 77 68 44

IGF-I (1 µg/ml): 100 89 64 52 27

Sustancia P (2,5 mg/ml) + IGF-I (1 µg/ml): 100 81 50 18 1

5 [0031] La Tabla 1 muestra explícitamente que incluso si los trozos de tejido se cultivan usando cada uno de sustancia P, FGLM e IGF-I solamente, la extensión epidérmica es casi tan larga como la del caso en el que se usa el control (sin aditivos), mientras que cuando los trozos de tejido se cultivan mediante la coexistencia de sustancia P o FGLM con IGF-I, la extensión es de 2 a 2,5 veces

10 más larga que la del caso en el que estos fármacos se usan por separado (efecto sinérgico). La Tabla 2 muestra que la pomada que contiene la sustancia P e IGF-I promueve la cicatrización de heridas más notablemente que el caso en el que la sustancia P o IGF-I se usan por separado. La Tabla 3 muestra que la pomada que contiene sustancia P e IGF-I muestra un efecto excelente en ratas con diabetes

15 incurables (rata DM), también. En consecuencia, la administración de al menos uno de los análogos de sustancia P, típicamente sustancia P y FGLM y sales farmacéuticamente aceptables combinadas (mezcladas) con el factor de crecimiento de tipo insulina, típicamente IGF-I, puede promover la curación eficaz de heridas cutáneas tales como rotura, abrasión, incisión quirúrgica, úlcera cutánea, úlcera cutánea particularmente incurable de pacientes con diabetes y quemadura mediante la potenciación de estos fármacos.

Aplicabilidad Industrial [0032] La presente invención proporciona promotores de cicatrización de heridas que comprenden al menos uno de los análogos de sustancia P y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y un factor de crecimiento de tipo insulina como principios activos.

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

Esta lista de referencias citadas por el solicitante es sólo para la comodidad del lector. No forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha tomado 5 especial cuidado en la compilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la OEP rechaza toda responsabilidad a este respecto.

Documentos de patentes citados en la descripción

10 • US 3862114 A [0006]

•: WO 9513087 A [0006]

•: JP 10017489 A [0006]

Documentos de no patentes citados en la descripción

15

•: J. Jpn. Ophthalmol. Soc., 1987, vol. 91, 982-987 [0006]

•: J. Jpn. Ophthalmol. Soc., 1988, vol. 92, 448-452 [0006]

•: J. Biol. Chem., 1989, vol. 264, 18485-18488 [0007]

• Hum. Mol. Genet., 1994, vol. 3, 1117-1121 [0007] 20

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso de un análogo de sustancia P o una sal farmacéuticamente aceptable

del mismo y un factor de crecimiento de tipo insulina en la fabricación de un 5 agente terapéutico para una herida cutánea.
2. Uso de al menos uno de Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-MetNH2, Phe-Gly-Leu-Met-NH2 y una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos y factor de crecimiento de tipo insulina I en la fabricación de un

10 agente terapéutico para una herida cutánea.