ES2349736T3 - Derivado de oligosacárido. - Google Patents

Abstract

Un compuesto representado por la fórmula general (I): en la que A representa la fórmula general (A1c), (A2) o (A3): R 1 y R 2 son iguales o diferentes y cada uno representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo hidroximetilo, un grupo alcoximetilo C1-C6 o un grupo haloalquilo C1-C6. R 3 , R 5 y R 6 son iguales o diferentes, y cada uno representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un grupo haloalquilo C1-C6, un grupo amino, pudiendo estar el grupo amino opcionalmente sustituido con uno o dos grupos alquilo C1-C6 o grupos hidroxialquilo C1-C6, un grupo hidroxilo, un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno, R 4 representa un grupo hidroxilo R 7 representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un grupo haloalquilo C1-C6, un grupo hidroxilo o un átomo de hidrógeno, y n representa el número entero 1 ó 2; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

Description

(CAMPO TÉCNICO)

La presente invención se refiere a un derivado de oligosacárido novedoso, a sus sales farmacológicamente aceptables y a sus ésteres farmacológicamente aceptables. La presente invención también se refiere a un derivado de oligosacárido que tiene una serie de actividades que incluye la actividad inhibitoria de la α-amilasa, la actividad reductora de glucosa en sangre y la actividad reductora de lípidos, a sus sales farmacológicamente aceptables y a sus ésteres farmacológicamente aceptables. Además, la presente invención se refiere a un fármaco terapéutico y/o fármaco preventivo para una enfermedad tal como hiperglucemia, hiperglucemia posprandial, intolerancia a la glucosa (IGT), diabetes sacarina, obesidad, hiperlipemia, hígado graso, hepatomegalia, complicaciones diabéticas, neuropatía, arterioesclerosis, cataratas o nefropatía diabética (y, preferentemente, a un fármaco terapéutico y/o fármaco preventivo para hiperglucemia o diabetes sacarina) que contiene como ingrediente activo un derivado de oligosacárido, a sus sales farmacológicamente aceptables o a sus ésteres farmacológicamente aceptables. Además, la presente invención se refiere a un fármaco preventivo o fármaco terapéutico para las enfermedades mencionadas anteriormente que contiene como ingrediente activo el compuesto mencionado anteriormente, a una composición para prevenir o tratar las enfermedades mencionadas anteriormente que contiene como ingrediente activo el compuesto mencionado anteriormente o al uso del compuesto mencionado anteriormente para producir un producto farmacéutico para prevenir o tratar las enfermedades mencionadas anteriormente.

(TÉCNICA ANTERIOR)

En el pasado, como fármacos terapéuticos eficaces para la hiperglucemia se han usado, de hecho, inhibidores de enzimas digestivas tales como Basen (Takeda Pharmaceutical), que contiene voglibosa, y Glucobay (Bayer), que contiene acarbosa. No obstante, debido a que ambos compuestos inhiben la α-glucosidasa, tienen la desventaja de provocar efectos secundarios adversos tales como distensión abdominal, flatulencia, aumento de gases abdominales, heces blandas, diarrea y dolor abdominal. Además, se ha informado que causan trastornos en la función hepática. Por otra parte, se sabe que pueden obtenerse efectos causantes de la inhibición de la absorción de nutrientes inhibiendo no sólo la α-glucosidasa, sino también la α-amilasa y se conocen compuestos que reducen los niveles de glucosa en sangre sin provocar los efectos secundarios adversos exclusivos de los inhibidores de la α-glucosidasa mencionados anteriormente. No obstante, la actividad inhibitoria de la α-amilasa de estos compuestos es débil y no existen compuestos conocidos que tengan una actividad adecuada inhibitoria de la αamilasa. Se han dado a conocer compuestos que tienen una estructura parcial (derivados de azúcar) que es igual que la de los derivados de oligosacáridos de la presente invención que muestran actividad inhibitoria de la α-amilasa (véase, por ejemplo, la publicación internacional WO 00/50434 y la publicación internacional WO 01/94367). No obstante, estos compuestos difieren del compuesto de la presente invención en que no precisan tener un esqueleto de deoxinojirimicina o un esqueleto de hexahidro-3,5,6-trihidroxi-1H-azepina.

(DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN)

Se precisa que los inhibidores de α-amilasa sean resistentes a la degradación en el tracto digestivo (y en particular en el intestino delgado) y muestren una actividad estable. No obstante, debido a que no puede decirse que los inhibidores de α-amilasa divulgados previamente muestren una estabilidad adecuada en el intestino delgado, existe la posibilidad de que no puedan mostrar efectos farmacológicos adecuados de forma estable. Además, esta inestabilidad en el tracto digestivo (y, en particular, en el intestino delgado) se traduce en el riesgo de tener alguna forma de efecto sobre la función hepática provocada por la absorción de sus productos de degradación. Por consiguiente, los inventores de la presente invención llevaron a cabo una investigación extensa con el fin de desarrollar un fármaco terapéutico y/o fármaco preventivo para enfermedades tales como hiperglucemia y diabetes sacarina que tuviera una actividad inhibitoria de la α-amilasa sobresaliente y un estabilidad alta, y encontraron que un derivado de oligosacárido novedoso tiene una actividad inhibitoria de la α-amilasa sobresaliente, actividad reductora de glucosa en sangre y actividad reductora de lípidos, mejora enfermedades tales como hiperglucemia, hiperglucemia posprandial, hiperglucemia, intolerancia a la glucosa (IGT), diabetes sacarina, obesidad, hiperlipemia, hígado graso, hepatomegalia, complicaciones diabéticas, neuropatía, arterioesclerosis, cataratas y nefropatía diabética, y tiene una estabilidad alta, consumando, por consiguiente, la presente invención. Es decir, la presente invención proporciona un derivado de oligosacárido, sus sales farmacológicamente aceptables y sus ésteres farmacológicamente aceptables, que son útiles como fármacos terapéuticos o fármacos preventivos para enfermedades tales como

hiperglucemia, hiperglucemia posprandial, intolerancia a la glucosa (IGT), diabetes sacarina, obesidad, hiperlipemia, hígado graso, hepatomegalia, complicaciones diabéticas (tales como retinopatía, nefropatía y neuropatía), neuropatía, arterioesclerosis, cataratas y nefropatía diabética. La presente invención se refiere a un compuesto representado por la fórmula general (I) siguiente:

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(en la que A representa la fórmula general (A1c), (A2) o (A3) siguiente:

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10 R1 y R2 pueden ser iguales o diferentes y cada uno representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo hidroximetilo, un grupo alcoximetilo C1-C6 o un grupo haloalquilo C1-C6, R3, R5 y R6 pueden ser iguales o diferentes y cada uno representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un grupo haloalquilo C1-C6, un grupo amino (grupo amino que puede estar sustituido con uno o dos grupos alquilo C1-C6 o grupos hidroxialquilo

15 C1-C6), un grupo hidroxilo, un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno, R4 representa un grupo hidroxilo, R7 representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un grupo haloalquilo C1-C6, un grupo hidroxilo o un átomo de hidrógeno y n representa el número entero 1 ó 2), sus sales farmacológicamente aceptables o sus ésteres farmacológicamente aceptables.

20 En la presente invención, un "grupo alquilo C1-C3" se refiere a un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene 1 a 3 átomos de carbono, ejemplos del cual incluyen grupos metilo, etilo, n-propilo e isopropilo. En R1, R2, R3, R4, R5 y R6 el grupo alquilo C1-C3 es preferentemente un grupo metilo.

En la presente invención, un "grupo alquilo C1-C6" se refiere a un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene 1 a 6 átomos de carbono, ejemplos del cual incluyen los grupos indicados como ejemplos del "grupo alquilo C1-C3" mencionado anteriormente, así como grupos n-butilo, isobutilo, s-butilo, terc-butilo, n-pentilo, isopentilo, 2-metilbutilo, neopentilo, 1-etilpropilo, n-hexilo, isohexilo, 4-metilpentilo, 3-metilpentilo, 2-metilpentilo, 1-metilpentilo, 3,3-dimetilbutilo, 2,2dimetilbutilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2,3-dimetilbutilo o 2-etilbutilo. En los sustituyentes de R1, R2, R3, R5, R6, R7 y en los grupos amino de R3, R5 y R6, el grupo alquilo C1-C6 es preferentemente un grupo alquilo que tiene 1 a 3 átomos de carbono y del modo más preferente un grupo metilo. En la presente invención, un “átomo de halógeno” se refiere a un átomo de flúor, un átomo de cloro, un átomo de bromo o un átomo de yodo, y es preferentemente un átomo de flúor en R3, R5, R6, R8, R9 y R11 . En la presente invención, un "grupo haloalquilo C1-C3" o un "grupo haloalquilo C1-C6" se refieren, respectivamente, a grupos en los que el "grupo alquilo C1-C3" o el "grupo alquilo C1C6" mencionado anteriormente está sustituido con el/los “átomo(s) de halógeno” mencionado(s) anteriormente. Ejemplos del "grupo haloalquilo C1-C3" incluyen grupos trifluorometilo, triclorometilo, difluorometilo, diclorometilo, dibromometilo, fluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 2,2,2tricloroetilo, 2-bromoetilo, 2-cloroetilo, 2-fluoroetilo, 2-yodoetilo, 3-cloropropilo y 2,2-dibromoetilo y es preferentemente un grupo fluorometilo en R1, R2, R3, R5, R6, R7 y R10. Ejemplos del "grupo haloalquilo C1-C6" incluyen los ejemplos mencionados anteriormente del "grupo haloalquilo C1C3", así como grupos 4-yodobutilo, 4-fluorobutilo, 4-clorobutilo, 5-yodopentilo, 5-fluoropentilo, 5-cloropentilo, 6-yodohexilo, 6-fluorohexilo y 6-clorohexilo, y es preferentemente un grupo haloalquilo C1-C3 y más preferentemente un grupo fluorometilo en R1, R3, R3, R5, R6, R7 y R10 . En la presente invención, un "grupo hidroxialquilo C1-C3" o un "grupo hidroxialquilo C1-C6" se refiere, respectivamente, a un grupo en el que el "grupo alquilo C1-C3" o el "grupo alquilo C1C6" mencionado anteriormente está sustituido con un grupo hidroxilo. Ejemplos del "grupo hidroxialquilo C1-C3" incluyen hidroximetilo, hidroxietilo e hidroxipropilo, y es preferentemente un grupo hidroximetilo en R3, R5, R6, R7 y R10 . Ejemplos del "grupo hidroxialquilo C1-C6" incluyen los ejemplos mencionados anteriormente del "grupo hidroxialquilo C1-C3" así como grupos hidroxibutilo, hidroxipentilo e hidroxihexilo, y es preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C3, y más preferentemente un grupo hidroximetilo, en R3, R5, R6, R7, R10 y R11 . En la presente invención, un "grupo alcoxi C1-C3" o un "grupo alcoxi C1-C6" se refiere, respectivamente, a un grupo en el que un "grupo alquilo C1-C3" o un "grupo alquilo C1-C6" está unido a un átomo de oxígeno. Ejemplos del "grupo alcoxi C1-C3" incluyen grupos metoxi, etoxi, n-propoxi y isopropoxi. Ejemplos del "grupo alcoxi C1-C6" incluyen los ejemplos mencionados anteriormente de un "grupo alcoxi C1-C3", así como grupos n-butoxi, isobutoxi, s-butoxi, terc-butoxi, n-pentoxi, isopentoxi, 2-metilbutoxi, neopentoxi, n-hexiloxi, 4-metilpentoxi, 3-metilpentoxi, 2-metilpentoxi, 3,3-dimetilbutoxi, 2,2-dimetilbutoxi, 1,1-dimetilbutoxi, 1,2dimetilbutoxi, 1,3-dimetilbutoxi y 2,3-dimetilbutoxi, y es preferentemente un grupo alcoxi C1-C3, y más preferentemente un grupo metoxi, en R3, R5, R6 y R7. En la presente invención, un "grupo alcoximetilo C1-C3" o un "grupo alcoximetilo C1-C6" se refiere, respectivamente, a un grupo en el que el "grupo alcoxi C1-C3" o el "grupo alcoxi C1-C6" mencionado anteriormente está unido a un grupo metilo. Ejemplos del "grupo alcoximetilo C1C3" incluyen grupos metoximetilo, etoximetilo, n-propoximetilo e isopropoximetilo, y es preferentemente un grupo metoximetilo en R1 y R2. Ejemplos de un "grupo alcoximetilo C1-C6" incluyen los ejemplos mencionados anteriormente del "grupo alcoximetilo C1-C3", así como grupos n-butoximetilo, isobutoximetilo, s-butoximetilo, terc-butoximetilo, n-pentoximetilo, isopentoximetilo, 2-metilbutoximetilo, neopentoximetilo, n-hexiloximetilo, 4-metilpentoximetilo, 3-metilpentoximetilo, 2-metilpentoximetilo, 3,3-dimetilbutoximetilo, 2,2-dimetilbutoximetilo, 1,1dimetilbutoximetilo, 1,2-dimetilbutoximetilo, 1,3-dimetilbutoximetilo y 2,3-dimetilbutoximetilo, y es preferentemente un "grupo alcoximetilo C1-C3", y más preferentemente un grupo metoximetilo, en R1 y R2. Los derivados de oligosacáridos que tienen las fórmulas generales (I), (Ia) e (Ib) de la presente invención pueden convertirse en una sal de adición de ácidos en el caso de que tengan un grupo básico según procedimientos ordinarios. Ejemplos de tales sales incluyen sales de hidroácidos halogenados tales como ácido fluorhídrico, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico y ácido yodhídrico; sales de ácidos inorgánicos tales como nitratos, percloratos, sulfatos y fosfatos; sales de ácidos alcanosulfónicos inferiores tales como ácido metanosulfónico, ácido trifluorometanosulfónico y ácido etanosulfónico; sales de ácidos arilsulfónicos tales como ácido bencenosulfónico y ácido p-toluenosulfónico; sales de aminoácidos tales como ácido glutámico y ácido aspártico; y sales de ácidos carboxílicos tales como ácido acético, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido málico, ácido succínico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido ascórbico, ácido láctico, ácido glucónico y ácido cítrico. La sal mencionada anteriormente es preferentemente una sal de un hidroácido halogenado y, del modo más preferente, un clorhidrato. Además, los derivados de oligosacáridos que tienen las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) mencionadas anteriormente pueden convertirse en una sal metálica de acuerdo con procedimientos ordinarios debido a que tienen un grupo hidroxilo. Ejemplos de dichas sales incluyen sales de metales alcalinos tales como litio, sodio y potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como calcio, bario y magnesio y sales de aluminio. La sal metálica mencionada anteriormente es preferentemente una sal de metal alcalino. Los derivados de oligosacáridos que tienen las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) de la presente invención mencionadas anteriormente pueden convertirse en ésteres farmacológicamente aceptables de acuerdo con procedimientos ordinarios. No existen limitaciones particulares sobre dichos ésteres, siempre que puedan usarse médicamente y su aceptabilidad farmacológica sea comparable a la de los derivados de oligosacáridos de las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) mencionadas anteriormente. Ejemplos de residuos de ésteres de derivados de oligosacáridos que tienen las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) de la presente invención mencionadas anteriormente incluyen grupos alquilo C1-C6 (en los que dichos grupos alquilo pueden estar sustituidos con un grupo trialquilsililo), grupos aralquilo C7-C16, grupos alquilo C1-C5 sustituido con grupos alcanoiloxi C1-C6, grupos alquilo C1-C5 sustituido con grupos alquiloxicarboniloxi C1-C6, grupos alquilo C1-C5 sustituidos con grupos cicloalquiloxicarboniloxi C5-C7, grupos alquilo C1-C5 sustituidos con grupos ariloxicarboniloxi C6-C10 y grupos 2-oxi-1,3-dioxolen-4-ilo que tienen un grupo alquilo C1-C6 como sustituyente en la posición 5. En el presente documento, grupos alquilo C1-C6 son preferentemente grupos alquilo lineales o ramificados que tienen 1 a 4 átomos de carbono y, más preferentemente, son grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo o isobutilo y, del modo más preferente, son grupos metilo o grupos etilo. Grupos alquilo C1-C5 se refieren a grupos alquilo lineales o ramificados que tienen 1 a 5 átomos de carbono, preferentemente grupos metilo, etilo, propilo, butilo o isobutilo y, del modo más preferente, grupos metilo o etilo. Grupos cicloalquilo C5-C7 se refiere a grupos hidrocarburo saturado de 5 a 7 miembros, ejemplos de los cuales incluyen grupos ciclopentilo, ciclohexilo y ciclobutilo y, preferentemente, grupos ciclohexilo. Grupos arilo C6-C10 se refiere a grupos hidrocarburo aromático que tienen 6 a 10 átomos de carbono, ejemplos de los cuales incluyen grupos fenilo, indenilo y naftilo y, preferentemente, grupos fenilo. Grupos aralquilo C7-C16 se refieren a grupos en los que el "grupo arilo C6-C10" mencionado anteriormente está unido al "grupo alquilo C1-C6" mencionado anteriormente, ejemplos de los cuales incluyen grupos bencilo, α-naftilmetilo, β-naftilmetilo, indenilmetilo, fenantrenilmetilo, antracenilmetilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, 1-fenetilo, 2-fenetilo, 1-naftiletilo, 2-naftiletilo, 1fenilpropilo, 2-fenilpropilo, 3-fenilpropilo, 1-naftilpropilo, 2-naftilpropilo, 3-naftilpropilo, 1fenilbutilo, 2-fenilbutilo, 3-fenilbutilo, 4-fenilbutilo, 1-naftilbutilo, 2-naftilbutilo, 3-naftilbutilo, 4naftilbutilo, 1-fenilpentilo, 2-fenilpentilo, 3-fenilpentilo, 4-fenilpentilo, 5-fenilpentilo, 1-naftilpentilo, 2-naftilpentilo, 3-naftilpentilo, 4-naftilpentilo, 5-naftilpentilo, 1-fenilhexilo, 2-fenilhexilo, 3fenilhexilo, 4-fenilhexilo, 5-fenilhexilo, 6-fenilhexilo, 1-naftilhexilo, 2-naftilhexilo, 3-naftilhexilo, 4naftilhexilo, 5-naftilhexilo y 6-naftilhexilo. Son preferentemente “grupos aralquilo” en los que el número de carbonos del “grupo alquilo” es 1 a 4 y, más preferentemente, grupos bencilo en R1 y R2. Ejemplos específicos preferentes de residuos de ésteres incluyen grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, bencilo, acetoximetilo, 1-(acetoxi)etilo, propioniloximetilo, 1(propioniloxi)etilo, butiriloximetilo, 1-(butiriloxi)etilo, isobutiriloximetilo, 1-(isobutiriloxi)etilo, valeriloximetilo, 1-(valeriloxi)etilo, isovaleriloximetilo, 1-(isovaleriloxi)etilo, pivaloiloximetilo, 1(pivaloiloxi)etilo, metoxicarboniloximetilo, 1-(metoxicarboniloxi)etilo, etoxicarboniloximetilo, 1(etoxicarboniloxi)etilo, propoxicarboniloximetilo, 1-(propoxicarboniloxi)etilo,

isopropoxicarboniloximetilo,

1-(isopropoxicarboniloxi)etilo, butoxicarboniloximetilo, 1

(butoxicarboniloxi)etilo,

isobutoxicarboniloximetilo, 1-(isobutoxicarboniloxi)etilo, t

butoxicarboniloximetilo,

1-(t-butoxicarboniloxi)etilo, ciclopentanocarboniloximetilo, 1

(ciclopentanocarboniloxi)etilo, ciclohexanocarboniloximetilo, 1-(ciclohexanocarboniloxi)etilo, ciclopentiloxicarboniloximetilo, 1-(ciclopentiloxicarboniloxi)etilo, ciclohexiloxicarboniloximetilo, 1(ciclohexiloxicarboniloxi)etilo, benzoiloximetilo, 1-(benzoiloxi)etilo, fenoxicarboniloximetilo, 1(fenoxicarboniloxi)etilo, (5-metil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo o 2-trimetilsililetilo. Además, los derivados de oligosacáridos que tienen las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) mencionadas anteriormente tienen varios isómeros. Por ejemplo, los isómeros ópticos pueden estar presentes en la porción A y la porción de unión del azúcar en los derivados de oligosacáridos que tienen las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) mencionadas anteriormente. En las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) mencionadas anteriormente, estos estereoisómeros basados en carbonos asimétricos y las mezclas racémicas y no racémicas de estos isómeros se indican todas con una fórmula única. De este modo, la presente invención incluye estos isómeros y mezclas de estos isómeros en varias proporciones. Además, en el caso de los derivados de oligosacáridos que tienen las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) mencionadas anteriormente, sus sales o sus ésteres forman solvatos (por ejemplo, hidratos), la presente invención también los incluye. En la presente invención, (A1c) es la fórmula general siguiente:

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(A2) es preferentemente la fórmula general (A2a) o (A2b) siguiente:

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y más preferentemente la fórmula general (A2c) siguiente:

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(A3) es preferentemente la fórmula general (A3a) siguiente:

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5

R1 es preferentemente un grupo alquilo C1-C6 o un grupo hidroximetilo y, más preferentemente, un grupo metilo o grupo hidroximetilo y, de modo particularmente preferente, un grupo metilo. R2 es preferentemente un grupo alquilo C1-C6 o un grupo hidroximetilo y, más preferentemente, un grupo metilo o grupo hidroximetilo y, de modo particularmente preferente, un grupo

10 hidroximetilo. R3 es preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C6, grupo hidroxilo, átomo de halógeno o átomo de hidrógeno en fórmulas generales (A1c) y (A1a), más preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C3 o átomo de hidrógeno y, de modo particularmente preferente, un átomo de hidrógeno. En las fórmulas generales (A2), (A2a), (A2b) y (A2c), R3 es preferentemente un

15 grupo hidroxialquilo C1-C6, grupo hidroxilo, átomo de hidrógeno o átomo de halógeno, más preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C3 o átomo de hidrógeno y, de modo particularmente preferente, un grupo hidroximetilo. En las fórmulas generales (A3) y (A3a), R3 es preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C6, grupo amino, grupo hidroxilo, átomo de hidrógeno o átomos de halógeno, más preferentemente un grupo hidroximetilo, grupo hidroxilo

20 o grupo amino y, de modo particularmente preferente, un grupo hidroxilo. R4 es un grupo hidroxilo en las fórmulas generales (A1c), (A2), (A2a), (A2b), (A2c), (A3) y (A3a). R5 es preferentemente un grupo hidroxilo, átomo de halógeno, grupo hidroxialquilo C1-C6, grupo haloalquilo C1-C6 o átomo de hidrógeno en la fórmula general (A1c), más preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C6, de modo particularmente preferente un grupo

25 hidroxialquilo C1-C3 y del modo más preferente un grupo hidroximetilo. En las fórmulas generales (A3) y (A3a), R5 es preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C6, grupo hidroxilo, átomo de hidrógeno o grupo amino (y dicho grupo amino puede estar sustituido con uno o dos grupos alquilo C1-C6 o grupos hidroxialquilo C1-C6), más preferentemente un grupo amino (y dicho grupo amino puede estar sustituido con uno o dos grupos alquilo C1-C6 o grupos

5 hidroxialquilo C1-C6) y, de modo particularmente preferente, un grupo amino. R6 es preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C6, grupo amino, grupo hidroxilo, átomo de hidrógeno o átomo de halógeno en las fórmulas generales (A3) y (A3a), más preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C6, de modo particularmente preferente un grupo hidroxialquilo C1C3 y del modo más preferente un grupo hidroximetilo.

10 R7 es preferentemente un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxialquilo C1-C6 o un grupo alquilo C1-C6, más preferentemente un átomo de hidrógeno o grupo metilo y, de modo particularmente preferente, un átomo de hidrógeno. R8 y R9 son preferentemente grupos hidroxialquilo C1-C3, átomos de halógeno, átomos de hidrógeno o grupos hidroxilo y, más preferentemente, átomos de hidrógeno o grupos hidroxilo.

R10

15 es preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C6, más preferentemente un grupo hidroxialquilo C1-C3 y, de modo particularmente preferentemente, un grupo hidroximetilo. R11 es preferentemente un grupo hidroxilo. n es preferentemente 1.

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A es preferentemente la fórmula general (A1c) o (A2) siguiente y preferentemente (A1c). Ejemplos específicos de derivados de oligosacáridos que tienen las fórmulas generales (I), (Ia) y (Ib) de la presente invención mencionadas anteriormente, sus sales farmacológicamente aceptables y sus ésteres farmacológicamente aceptables incluyen los compuestos enumerados

25 a continuación. Además, en las tablas 1 a 5 siguientes, "nPr" indica un grupo n-propilo, "iPr" un grupo i-propilo, "nBu" un grupo n-butilo, "tBu" un grupo t-butilo, "iBu" un grupo i-butilo, "nPn" un grupo n-pentilo y "nHex" un grupo n-hexilo La tabla 1 se refiere a compuestos de fórmula general (I) en la que A representa la fórmula general (A1c) (en el presente documento referida a compuestos de fórmula general (Ia)):

(Tabla 1) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación) (continuación)

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(Tabla 3)

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(continuación) (continuación)

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(Tabla 4)

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(continuación) (continuación) (continuación)

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(Tabla 5)

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(continuación)

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En las tablas anteriores, compuestos preferentes son 1-1, 1-119, 1-155, 1-280, 1-354, 1-547, 1556, 1-557, 3-1, 5-1, 5-3 o 5-22, más preferentes son 4-O-(6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-Dglucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo, 4-O-(6-deoxi-β-Dglucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo, 4-Oβ-D-glucopiranosil-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo, 4O-(6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2hidroximetil-pirrolidin-3-ilo, 4-O-(6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R,2S,3R,4R,5R)-1-amino-2,3-dihidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo, 4-O-(6-metoxi-6-deoxi-βD-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo, 4-O

5 (6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-3,4dihidro-2H-pirrol-3-ilo, sus sales farmacológicamente aceptables y sus ésteres farmacológicamente aceptables. Un compuesto que tiene la fórmula general (I) puede producirse usando, por ejemplo, un compuesto conocido como material de partida bruto de acuerdo con el procedimiento descrito a

10 continuación

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En la fórmula mencionada anteriormente y en la descripción siguiente, A, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 y n son iguales a como se han definido anteriormente. No obstante, en el caso de que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10 o R11 indique un grupo hidroxilo o un grupo

15 que tenga un grupo hidroxilo, dicho grupo hidroxilo puede estar, opcionalmente, protegido. Procedimiento A

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Procedimiento B

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Procedimiento Bb:

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Procedimiento Bc:

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Procedimiento C:

imagen1

En las etapas mencionadas anteriormente y en la descripción siguiente, X1 a X25, Ya1 a Ya5 e Yc1 a Yc3 son iguales o diferentes y cada uno representa un átomo de hidrógeno o un grupo 10 hidroxilo (pudiente estar dicho grupo hidroxilo opcionalmente protegido con un grupo protector),

Yb1

a Yb5 son iguales o diferentes y cada uno representa un átomo de halógeno, átomo de hidrógeno o grupo hidroxilo (dicho grupo hidroxilo puede protegerse estar opcionalmente protegido por un grupo protector), P1 representa un grupo protector de un grupo amino tal como R6 o un grupo alcoxicarbonilo C1-C6 (preferentemente un grupo t-butoxicarbonilo) o un grupo

15 aralquiloxicarbonilo C7-C16 (preferentemente un grupo benciloxicarbonilo), P2 y P3 son iguales

o diferentes y cada uno representa un grupo protector de un grupo amino tal como R7 o un grupo alcoxicarbonilo C1-C6 (preferentemente un grupo t-butoxicarbonilo) o un grupo aralquiloxicarbonilo C7-C16 (preferentemente un grupo benciloxicarbonilo) y L1, L2, L3 y L4 representan un grupo hidroxilo (pudiendo estar dicho grupo hidroxilo opcionalmente protegido con un grupo protector o pudiendo estar el átomo de hidrógeno opcionalmente sustituido con un grupo saliente) o un grupo saliente. No existen limitaciones particulares sobre el grupo protector que se usa para proteger un grupo hidroxilo, a condición de que el grupo se use típicamente para proteger un grupo hidroxilo; ejemplos del mismo incluyen “grupos acilo alifáticos” tales como grupos alquilcarbonilos, por ejemplo grupos formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, pentanoílo, pivaloílo, valerilo, isovalerilo, octanoílo, nonanoílo, decanoílo, 3-metilnonanoílo, 8-metilnonanoílo, 3-etiloctanoílo, 3,7-dimetiloctanoílo, undecanoílo, dodecanoílo, tridecanoílo, tetradecanoílo, pentadecanoílo, hexadecanoílo, 1-metilpentadecanoílo, 14-metilpentadecanoílo, 13,13-dimetiltetradecanoílo, heptadecanoílo, 15-metilhexadecanoílo, octadecanoílo, 1-metilheptadecanoílo, nonadecanoílo, eicosanoílo y heneicosanoílo, grupos alquil carbonilo carboxilados, por ejemplo grupos succinoílo, glutaroílo y adipoílo, grupos halógeno-(alquil inferior)carbonilo, por ejemplo grupos cloroacetilo, dicloroacetilo, tricloroacetilo y trifluoroacetilo, grupos (alcoxi inferior)-(alquil inferior) carbonilo, por ejemplo grupos metoxiacetilo y alquilcarbonilo insaturados, por ejemplo grupos (E)-2-metil-2-butenoílo; "grupos acilo aromáticos" tales como grupos arilcarbonilo, por ejemplo grupos benzoílo, α-naftoílo y β-naftoílo, grupos halogenoaril carbonilo, por ejemplo 2bromobenzoílo y 4-clorobenzoílo, grupos aril carbonilo alquilados con alquilo inferior, por ejemplo grupos 2,4,6-trimetilbenzoílo y 4-toluoílo, grupos aril carbonilo alcoxilados con alcoxi inferior, por ejemplo grupos 4-anisoílo, grupos aril carbonilo carboxilados, por ejemplo grupos 2-carboxibenzoílo, 3-carboxibenzoílo y 4-carboxibenzoílo, grupos aril carbonilo nitrados, por ejemplo grupos 4-nitrobenzoílo y 2-nitrobenzoílo, grupos aril carbonilo (alcoxi inferior)carbonilados, por ejemplo grupos 2-(metoxicarbonil) benzoílo y grupos aril carbonilo arilados, por ejemplo grupos 4-fenilbenzoílo; "grupos tetrahidropiranilo o tetrahidrotiopiranilo" tales como grupos tetrahidropiran-2-ilo, 3-bromotetrahidropiran-2-ilo, 4-metoxitetrahidropiran-4ilo, tetrahidrotiopiran-2-ilo y 4-metoxitetrahidrotiopiran-4-ilo; "grupos tetrahidrofuranilo o tetrahidrotiofuranilo" tales como grupos tetrahidrofuran-2-ilo y tetrahidrotiofuran-2-ilo; "grupos sililo" tales como grupos tri-(alquil inferior) sililo, por ejemplo grupos trimetilsililo, trietilsililo, isopropil dimetilsililo, t-butil dimetilsililo, metil diisopropilsililo, metil di-t-butilsililo y triisopropilsililo y grupos tri-(alquil inferior)sililo sustituidos con 1 a 2 grupos arilo, por ejemplo grupos difenilmetilsililo, difenilbutilsililo, difenilisopropilsililo y fenildiisopropilsililo; "grupos alcoximetilo" tales como grupos (alcoxi inferior)metilo, por ejemplo grupos metoximetilo, 1,1-dimetil-1metoximetilo, etoximetilo, propoximetilo, isopropoximetilo, butoximetilo y t-butoximetilo, grupos (alcoxi inferior)metilo alcoxilados con alcoxi inferior, por ejemplo grupos 2-metoxietoximetilo y grupos halógeno-(alcoxi inferior)metilo, por ejemplo 2,2,2-tricloroetoximetilo y grupos bis(2cloroetoxi)metilo; "grupos etilo sustituidos" tales como grupos etilo alcoxilados con alcoxi inferior, por ejemplo grupos 1-etoxietilo y 1-(isopropoxi)etilo y grupos etilo halogenados, por ejemplo grupos 2,2,2-tricloroetilo; "grupos aralquilo" tales como grupos alquilo inferior sustituidos con 1 a 3 grupos arilo, por ejemplo grupos bencilo, α-naftilmetilo, β-naftilmetilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, α-naftildifenilmetilo y 9-antrilmetilo y grupos alquilo inferior sustituidos con 1 a 3 grupos arilo en los que un anillo de arilo está sustituido con un grupo alquilo inferior, alcoxi inferior, halógeno o ciano, por ejemplo grupos 4-metilbencilo, 2,4,6-trimetilbencilo, 3,4,5trimetilbencilo, 4-metoxibencilo, 4-metoxifenildifenilmetilo, 2-nitrobencilo, 4-nitrobencilo, 4clorobencilo, 4-bromobencilo, 4-cianobencilo, metilo y piperonilo; "grupos alcoxicarbonilo" grupos (alcoxi inferior)carbonilo, por ejemplo grupos metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, tbutoxicarbonilo e isobutoxicarbonilo y grupos (alcoxi inferior)alcoxi sustituidos con halógeno o grupos tri-(alquil inferior) sililo, por ejemplo grupos 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo y 2trimetilsililetoxicarbonilo; "grupos alqueniloxi carbonilo" tales como grupos viniloxicarbonilo y aliloxicarbonilo y "grupos aralquiloxi carbonilo" en los que un anillo de arilo puede o no puede estar sustituido con 1 a 2 grupos alcoxi inferior o nitro, por ejemplo grupos benciloxicarbonilo, 4metoxibenciloxicarbonilo, 3,4-dimetoxibenciloxicarbonilo, 2-nitrobenciloxicarbonilo y 4nitrobenciloxicarbonilo. No existen limitaciones particulares sobre los reactivos que se usan para proteger dioles, siempre que se usen normalmente para proteger dioles y, preferentemente, los ejemplos incluyen derivados de aldehído tales como benzaldehído, derivados de cetona tales como acetona y compuestos dimetoxi tales como 2,2dimetoxipropano y dimetoxibencilo. El procedimiento para producir el Compuesto (I) de la presente invención comprende las tres etapas siguientes.

(1)

La Etapa A es una etapa en la que se produce la porción del lado izquierdo del Compuesto

(I)

en forma de intermedio (iii).

(2)

La Etapa B es una etapa en la que se produce la porción del lado derecho del Compuesto (I) en forma de Intermedio (vii) y puede seleccionarse el procedimiento a, b o c correspondiente al Compuesto (I) deseado.

(3)

La Etapa C es una etapa en la que se produce el Compuesto (I) de la presente invención condensando el Intermedio (iii) obtenido en la Etapa A y el Intermedio (vii) obtenido en la Etapa

B.

A continuación se proporciona una explicación de cada etapa. (Procedimiento A)

El compuesto (i) de material bruto puede producirse protegiendo y desprotegiendo un grupo

hidroxilo de un compuesto conocido de acuerdo con procedimientos conocidos. Además, la protección y desprotección de un grupo hidroxilo también puede realizarse en esta etapa según sea necesario. La protección y desprotección de un grupo hidroxilo puede realizarse según procedimientos conocidos comúnmente tales como el procedimiento descrito en "Protective Groups in Organic Synthesis" por Green-Watts (Wiley-Interscience, EEUU). Además, la desprotección también puede realizarse del modo descrito a continuación. En caso de usar un grupo sililo para el grupo de desprotección del grupo hidroxilo, éste puede eliminarse normalmente tratando bien con un compuesto que forme un anión fluoruro tal como fluoruro de tetrabutilamonio, ácido fluorhídrico, ácido fluorhídrico-piridina o fluoruro de potasio o bien con un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido metanosulfónico, ácido paratoluenosulfónico, ácido trifluoroacético o ácido trifluorometanosulfónico o un ácido inorgánico tal como ácido clorhídrico. Además, en caso de eliminación por un anión fluoruro, la reacción puede promoverse añadiendo un ácido orgánico tal como ácido fórmico, ácido acético o ácido propiónico. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, a condición que disuelva la sustancia de partida hasta un nivel determinado sin inhibir la reacción y ejemplos preferentes incluyen éteres tales como dietil éter, diisopropil éter, tetrahidrofurano, dioxano, dimetoxietano y dietilenglicol dimetil éter; nitrilos tales como acetonitrilo e isobutironitrilo; agua; ácidos orgánicos tales como ácido acético y mezclas de dichos disolventes. No existen limitaciones particulares sobre la temperatura de reacción o el tiempo de reacción y la reacción se lleva a cabo normalmente a 0 ºC a 100 ºC (y preferentemente a 10 ºC a 30 ºC) durante 1 a 24 horas. En caso de que el grupo protector del grupo hidroxilo sea un grupo aralquilo o un grupo aralquiloxicarbonilo, normalmente se usa, de forma preferente, un procedimiento en el que se elimina poniéndolo en contacto con un agente reductor en un disolvente (y preferentemente reducción del contacto a temperatura normal en presencia de un catalizador) o un procedimiento en el que se elimina usando un agente oxidante. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa durante la eliminación por reducción catalítica, siempre que no se implique en la presente reacción y ejemplos preferentes incluyen alcoholes tales como metanol, etanol e isopropanol; éteres tales como dietil éter, tetrahidrofurano y dioxano; hidrocarburos aromáticos tales como tolueno, benceno y xileno; hidrocarburos alifáticos tales como hexano y ciclohexano; ésteres tales como acetato de etilo y acetato de propilo; amidas tales como formamida, dimetilformamida, dimetilacetamida, N-metil2-pirrolidona y hexametilfosforotriamida; ácidos grasos tales como ácido fórmico y ácido acético; agua y mezclas de dichos disolventes, mientras que ejemplos más preferentes incluyen alcoholes, ácidos grasos, disolventes mixtos de alcoholes y éteres, disolventes mixtos de alcoholes y agua y disolventes mixtos de ácidos grasos y agua. No existen limitaciones particulares sobre los catalizadores que se usan, siempre que se usen normalmente en reacciones de reducción catalítica y ejemplos preferentes de catalizadores que se usan incluyen paladio-carbón, paladio blanco, níquel Rainey, óxido de platino, negro de platino, óxido de rodio y aluminio, cloruro de trifenilfosfina y rodio y sulfato de paladio y bario. No existen limitaciones particulares sobre la presión y la reacción se lleva a cabo normalmente a presión de 1.013,25 hPa (1 atm) a 10.132,50 hPa (10 atm) Aunque la temperatura de reacción y el tiempo de reacción varían dependiendo del tipo de sustancia de partida, disolvente, catalizador, etc., normalmente son 0 ºC a 100 ºC (y preferentemente 20 ºC a 70 ºC) y 5 minutos a 48 horas (y preferentemente de 1 hora a 24 horas). No existe limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa durante la eliminación por oxidación, siempre que no se implique en la presente reacción, y son preferentes los disolventes orgánicos que contienen agua. Ejemplos preferentes de tales disolventes orgánicos incluyen cetonas tales como acetona, hidrocarburos halogenados tales como cloruro de metileno, cloroformo y tetracloruro de carbono, nitrilos tales como acetonitrilo, éteres tales como dietil éter, tetrahidrofurano y dioxano, amidas tales como dimetilformamida, dimetilacetamida y hexametilfosforoamida y sulfóxidos tales como sulfóxido de dimetilo. No existen limitaciones particulares sobre el agente oxidante que se usa, siempre que sea un compuesto que se use normalmente para oxidar, y se usan preferentemente persulfato de potasio, persulfato de sodio, nitrato de cerio y amonio (CAN) o 2,3-dicloro-5,6-diciano-pbenzoquinona (DDQ). Aunque la temperatura de reacción y el tiempo de reacción varían dependiendo del tipo de sustancia de partida, disolvente, catalizador, etc., son normalmente de 0 ºC a 150 ºC y de 10 minutos a 24 horas. Además, también puede eliminarse el grupo protector permitiendo actuar un metal alcalino tal como litio metal o sodio metal a -78 ºC a 20 ºC en amoniaco líquido o en un alcohol tal como metanol o etanol. Además, también puede eliminarse usando un haluro de alquil sililo tal como cloruro de aluminio – yoduro de sodio o yoduro de trimetilsililo en un disolvente. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que no se implique en la presente reacción, y se usan preferentemente nitrilos tales como acetonitrilo, hidrocarburos halogenados tales como cloruro de metileno y cloroformo o mezclas de dichos disolventes. Aunque la temperatura de reacción y el tiempo de reacción varían dependiendo del tipo de sustancia de partida, disolvente, etc., la temperatura de reacción y el tiempo de reacción son normalmente de 0 ºC a 50 ºC y de 5 minutos a 3 días. Además, en caso de que el sustrato de reacción tenga un átomo de azufre, se usa preferentemente cloruro de aluminio – yoduro de sodio. En caso de que el grupo protector del grupo hidroxilo sea un grupo acilo alifático, un grupo acilo aromático o un grupo alcoxicarbonilo, éste se elimina tratándolo con base en un disolvente. No existen limitaciones particulares sobre la base que se usa, siempre que no tenga un efecto sobre las otras partes del compuesto, y los ejemplos de bases que se usan preferentemente incluyen alcóxidos metálicos tales como metóxido de sodio, carbonatos de metal alcalino tales como carbonato de sodio, carbonato de potasio y carbonato de litio, hidróxidos de metales alcalinos tales como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de litio e hidróxido de bario y amoniacos tales como amoniaco acuoso y amoniaco concentrado -metanol. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones de hidrólisis; ejemplos preferentes del mismo incluyen agua, disolventes orgánicos tales como alcoholes, por ejemplo metanol, etanol y n-propanol, y éteres como por ejemplo tetrahidrofurano y dioxano y disolventes mixtos de agua y los disolventes orgánicos mencionados anteriormente. Aunque no existen limitaciones particulares sobre la temperatura de reacción y el tiempo de reacción y varían de acuerdo con la sustancia de partida, disolvente, la base que se usa, etc., la reacción se lleva a cabo normalmente de 0 ºC a 150 ºC durante de 1 hora a 10 horas para suprimir reacciones secundarias. En el caso de que el grupo protector del grupo hidroxilo sea un grupo alcoximetilo, un grupo tetrahidropiranilo, un grupo tetrahidrotiopiranilo, un grupo tetrahidrofuranilo, un grupo tetrahidrotiofuranilo o un grupo etilo sustituido, el grupo protector se elimina normalmente tratándolo con ácido en un disolvente. No existen limitaciones particulares sobre el ácido que se usa, siempre que se use normalmente como un ácido de Bronsted o un ácido de Lewis y, aunque los ejemplos preferentes incluyen ácidos de Bronsted tales como cloruro de hidrógeno; ácidos inorgánicos como por ejemplo ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y ácido nítrico; y ácidos orgánicos como por ejemplo ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido metanosulfónico y ácido p-toluenosulfónico; también pueden usarse ácidos de Lewis tales como trifluoruro de boro, una resina de intercambio catiónico fuertemente ácida tal como Dowex 50W.

No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que disuelva la sustancia de partida hasta un nivel determinado sin inhibir la reacción, y los ejemplos preferentes incluyen hidrocarburos alifáticos tales como hexano, heptano, ligroína y éter de petróleo; hidrocarburos aromáticos tales como benceno, tolueno o xileno; hidrocarburos halogenados tales como cloruro de metileno, cloroformo, tetracloruro de carbono, dicloroetano, clorobenceno y ciclorobenceno; ésteres tales como formiato de etilo, acetato de etilo, acetato de propilo, acetato de butilo y carbonato de dietilo; éteres tales como dietil éter, diisopropil éter, tetrahidrofurano, dioxano, dimetoxietano y dietilenglicol dimetil éter; alcoholes tales como metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, terc-butanol, alcohol isoamílico, dietilenglicol, glicerina, octanol, ciclohexanol y metil-cellusorb; cetonas tales como acetona, metil etil cetona, metil isobutil cetona, isoforona y ciclohexanona; agua mezclas de dichos disolventes, mientras que los ejemplos más preferentes incluyen hidrocarburos halogenados, ésteres y éteres. Aunque la temperatura de reacción y el tiempo de reacción varían dependiendo del tipo, concentración, etc. de la sustancia de partida, el disolvente y el ácido que se usan, normalmente son de -10 ºC a 100 ºC (y preferentemente de -5 ºC a 50 ºC) y de 5 minutos a 48 horas (y preferentemente de 30 minutos a 10 horas). En el caso de que el grupo de protección del grupo hidroxilo sea un grupo alqueniloxi carbonilo, la eliminación tiene lugar, normalmente, tratándolo con base en condiciones similares a las de la reacción de eliminación en el caso de que el grupo de protección del grupo hidroxilo sea un grupo acilo alifático, un grupo aromático o un grupo alcoxicarbonilo mencionado anteriormente. Además, en el caso de un grupo aliloxicarbonilo, un procedimiento en el que se elimine usando, en particular, paladio, así como también trifenilfosfina o hexafluorofosfato de bis(metildifenilfosfina) (1,5-ciclooctadieno) iridio (I) es sencillo y puede llevarse a cabo con pocas reacciones laterales. En el caso de que el grupo protector del grupo hidroxilo sea un grupo formilo, se elimina tratándolo con base en un disolvente. No existen limitaciones particulares sobre la base que se usa, siempre que no tenga un efecto sobre otros compuestos y se usa preferentemente un hidrogenocarbonato de metal alcalino tal como hidrogenocarbonato de potasio. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones de hidrólisis y los ejemplos preferentes incluyen agua; disolventes orgánicos tales como alcoholes, por ejemplo metanol, etanol y n-propanol, o éteres, por ejemplo tetrahidrofurano y dioxano y disolventes mixtos de agua y los disolventes orgánicos mencionados anteriormente.

Aunque la temperatura de reacción y el tiempo de reacción varían dependiendo del tipo de sustancia de partida, disolvente y base que se usan y no existen limitaciones particulares sobre los mismos, la reacción se lleva a cabo normalmente a 0 ºC a 150 ºC durante 1 hora a 10 horas para suprimir reacciones colaterales. En el caso de que el grupo protector del grupo hidroxilo sea un grupo acetamida sustituido con halógeno tal como un grupo trifluoroacetamida, éste se elimina tratándolo con base en un disolvente. No existen limitaciones particulares sobre la base que se usa, siempre que no tenga un efecto sobre otras partes del compuesto, y se usa preferentemente una resina básica tal como Dowex 1x4 (OH-). No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que se use en reacciones de hidrólisis, y los ejemplos preferentes incluyen agua y alcoholes tales como metanol, etanol y n-propanol, siendo más preferente el agua. Un grupo de desprotección de un grupo alilo en la posición anómera es preferentemente un catalizador de paladio tal como cloruro de paladio un catalizador de iridio. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones catalíticas y los ejemplos preferentes incluyen disolventes a base de alcohol tales como metanol, disolventes a base de éter tales como tetrahidrofurano y agua, siendo más preferentes metanol y tetrahidrofurano.

(Etapa A1)

Esta etapa es una etapa en la que se produce el compuesto (ii) y se realiza introduciendo un grupo saliente en un grupo hidroxilo en una ubicación deseada, según sea necesario, y llevando a cabo, a continuación, una sustitución nucleófila con un reactivo correspondiente a los grupos R1 y R2 introducidos. En el caso de que el grupo saliente sea un átomo de halógeno, no existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que disuelva la sustancia de partida son inhibir la reacción, y los ejemplos preferentes incluyen éteres tales como dietil éter, tetrahidrofurano y dioxano, amidas tales como dimetilformamida, dimetilacetamida y hexametilfosfotriamida, hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, cloroformo y 1,2dicloroetano, nitrilos tales como acetonitrilo y propionitrilo, ésteres tales como formiato de etilo y acetato de etilo y mezclas de dichos disolventes, siendo ejemplos más preferentes hidrocarburos halogenados y éteres, y siendo ejemplos particularmente preferentes diclorometano y tetrahidrofurano.

No existen limitaciones particulares sobre el agente halogenante que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones entre grupos hidroxilo y átomos de halógeno, ejemplos del cual incluyen haluro de dialquiaminoazufre tales como trifluoruro de dietilaminoazufre (DAST), haluros de tionilo tales como cloruro de tionilo, bromuro de tionilo y yoduro de tionilo, haluros de sulfurilo tales como cloruro de sulfurilo, bromuro de sulfurilo y yoduro de sulfurilo, trihaluros de fósforo tales como tricloruro de fósforo, tribromuro de fósforo y triyoduro de fósforo, pentahaluros de fósforo tales como pentacloruro de fósforo, pentabromuro de fósforo y pentayoduro de fósforo, y oxihaluros de fósforo tales como oxicloruro de fósforo, oxibromuro de fósforo y oxiyoduro de fósforo. La temperatura de reacción es de 0 ºC a la temperatura de calentamiento (punto de ebullición del disolvente en uso) y preferentemente de temperatura ambiente a la temperatura de calentamiento (punto de ebullición del disolvente en uso). El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 5 horas. En el caso de que el grupo saliente sea un grupo sulfonilo, no existen limitaciones particulares sobre el agente de sulfonilación, siempre que éste se use normalmente en reacciones de sulfonilación de grupo hidroxilo, y ejemplos del mismo incluyen haluros de alcanosulfonilo tales como cloruro de etanosulfonilo, haluros de arilsulfonilo tales como cloruro de p-tolueno sulfonilo y anhídridos de ácido sulfónico tales como anhídrido de ácido metano sulfónicos, anhídrido de ácido benceno sulfónico y anhídrido de ácido trifluoruro sulfónico. Ejemplos preferentes incluyen cloruro de metanosulfonilo, cloruro de p-toluenosulfonilo y anhídrido de ácido trifluorometanosulfónico. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida hasta un nivel determinado sin inhibir la reacción, y ejemplos del mismo incluyen hidrocarburos alifáticos tales como hexano, heptano, ligroína y éter de petróleo, hidrocarburos aromáticos tales como benceno, tolueno o xileno, hidrocarburos halogenados tales como cloruro de metileno, cloroformo, tetracloruro de carbono, dicloroetano, clorobenceno y diclorobenceno; ésteres tales como formiato de etilo, acetato de etilo, acetato de propilo, acetato de butilo y carbonato de dietilo; y éteres tales como dietil éter, diisopropil éter, tetrahidrofurano, dioxano, dimetoxietano y dietilenglicol dimetil éter. Los ejemplos preferentes incluyen hidrocarburos halogenados, ésteres y éteres, siendo más preferente el tetrahidrofurano. No existen limitaciones particulares sobre la base que se usa, siempre que se use como base en reacciones normales, y los ejemplos preferentes de la misma incluyen bases orgánicas tales como trietilamina, tripropilamina, tributilamina, diisopropiletilamina, diciclohexilamina, Nmetilpiperidina, piridina, 4-pirrolidinopiridina, picolina, 4-(N,N-dimetilamino) piridina, 2,6-di(tbutil)-4-metilpiridina, quinolina, N,N-dimetilanilina, N,N-dietilanilina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5eno (DBN), 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (DABCO) y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), siendo más preferentes trietilamina y piridina. La temperatura de reacción es de 0 ºC a la temperatura de calentamiento (punto de ebullición del disolvente en uso) y preferentemente de 0 ºC a temperatura ambiente. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 10 minutos a 1 hora. Ejemplos del reactivo que se usa para el reactivo correspondiente a grupos R1 y R2 incluyen agentes reductores y agentes halogenantes comercialmente disponibles. Ejemplos preferentes del agente reductor que se usa incluyen borohidruros de metal alcalino tales como borohidruro de sodio y borohidruro de litio, compuestos de aluminio hidrogenados tales como hidruro de litio y aluminio e hidruro de trietóxido de aluminio y litio, y reactivos de hidruro tales como hidruro de sodio y teluro. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que disuelva la sustancia de partida son inhibir la reacción y, preferentemente, los ejemplos incluyen alcoholes tales como metanol y etanol, éteres tales como éter y tetrahidrofurano, y mezclas de dichos disolventes. No existen limitaciones particulares sobre el agente halogenante que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones de halogenación y, preferentemente, los ejemplos incluyen haluro de dialquiaminoazufre tales como trifluoruro de dietilaminoazufre (DAST), haluros de tionilo tales como cloruro de tionilo, bromuro de tionilo y yoduro de tionilo, haluros de sulfurilo tales como cloruro de sulfurilo, bromuro de sulfurilo y yoduro de sulfurilo, trihaluros de fósforo tales como tricloruro de fósforo, tribromuro de fósforo y triyoduro de fósforo, pentahaluros de fósforo tales como pentacloruro de fósforo, pentabromuro de fósforo y pentayoduro de fósforo, y oxihaluros de fósforo tales como oxicloruro de fósforo, oxibromuro de fósforo y oxiyoduro de fósforo, siendo más preferente el trifluoruro de dietilaminoazufre. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida hasta un nivel determinado sin inhibir la reacción, y los ejemplos incluyen éteres tales como éter y tetrahidrofurano, siendo preferente el tetrahidrofurano. La temperatura de reacción es de 0 ºC a la temperatura de calentamiento (punto de ebullición del disolvente que se usa) y preferentemente de temperatura ambiente a la temperatura de calentamiento (punto de ebullición del disolvente que se usa). El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y, preferentemente, de 1 hora a 5 horas.

. (Etapa A2)

Esta etapa es una etapa en la que se produce el intermedio (iii) y se realiza introduciendo un grupo saliente en la posición 1 del compuesto (ii) siguiendo el procedimiento de la etapa A1.

(Etapa B)

(Procedimiento Ba)

Puede producirse el compuesto (iv) de material bruto siguiendo el procedimiento descrito en el Tetrahedron, Vol. 26, 1985, p. 1469. Además, el compuesto de material bruto (v) puede producirse protegiendo y desprotegiendo un grupo hidroxilo de un compuesto conocido de acuerdo con un procedimiento conocido. Además, la protección y desprotección del grupo hidroxilo también puede llevarse a cabo según sea necesario en la presente etapa de la misma forma que el Procedimiento A. Además, en el caso de tener un átomo de halógeno para un sustituyente, puede introducirse un átomo de halógeno de acuerdo con la reacción de halogenación de la etapa A1.

(Etapa Ba1)

Esta etapa es una etapa en la que se produce un compuesto bicíclico (v) y se realiza reduciendo el grupo azida del compuesto (iv), seguido de calentamiento. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida, y los ejemplos incluyen éteres solubles en agua tales como tetrahidrofurano y dioxano, agua y mezclas de dichos disolventes, siendo preferente un disolvente mixto de agua y tetrahidrofurano. Ejemplos de agentes reductores del grupo azida incluyen fosfinas y amoniaco acuoso. Aunque los ejemplos incluyen trialquil fosfinas tales como trimetil fosfina y trietil fosfinas y amoniaco acuoso y triaril fosfinas tales como trifenil fosfina y amoniaco acuoso, una triaril fosfina tal como trifenil fosfina y amoniaco acuoso son preferentes. Además, también puede usarse un catalizador para el agente reductor. No existen limitaciones particulares sobre el catalizador que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones de reducción catalítica, y los ejemplos incluyen carbonato de paladio, negro de paladio, paladio carbono, hidróxido de paladio, níquel Rainey, óxido de platino, negro de platino, hidróxido de rodio y aluminio, cloruro de trifenil fosfina y rodio y sulfato de paladio y bario, siendo preferentes paladio carbono e hidróxido de paladio. En el caso de usar un catalizador para el agente reductor, no existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida sin inhibir la reacción, y los ejemplos preferentes incluyen alcoholes tales como metanol y etanol, éteres tales como tetrahidrofurano y dioxano, ácidos grasos tales como ácido acético y ésteres tales como acetato de etilo, siendo más preferente el metanol. La temperatura de reacción es de 0 ºC a 50 ºC y preferentemente de 0 ºC a temperatura ambiente. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 5 horas.

(Etapa Ba2)

Esta etapa es una etapa en la que se produce el compuesto (vii) que tiene un grupo amino protegido y se realiza protegiendo el grupo amino del compuesto (v) con un grupo protector adecuado. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida sin inhibir la reacción, y los ejemplos preferentes incluyen éteres tales como tetrahidrofurano, dioxano, dimetoxietano y dietilenglicol, alcoholes tales como metanol y etanol, cetonas tales como acetona y metil etil cetona, amidas tales como N,Ndimetilformamida y N,N.dimetilacetamida y sulfóxidos tales como sulfóxido de dimetilo. No existen limitaciones particulares sobre el reactivo que se usa, siempre que éste se use normalmente en reacciones en las que se introduce un grupo protector en un grupo amino libre, y los ejemplos preferentes incluyen dicarbonato de di-t-butilo, cloruro de benciloxicarbonilo y cloruro de p-nitrobenciloxicarbonilo, siendo más preferente carbonato de di-t-butilo. No existen limitaciones particulares sobre la base que se usa, siempre que se use como base en reacciones normales, y los ejemplos preferentes incluyen carbonatos alcalinotérreos, hidrogenocarbonatos alcalinotérreos y bases orgánicas, siendo más preferentes los hidrogenocarbonatos de metales alcalinos. La temperatura de reacción es de 0 ºC a 50 ºC y preferentemente de 0 ºC a temperatura ambiente. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 10 horas.

(Etapa Ba3)

Esta etapa es una etapa en la que se produce el compuesto pirrolidina (viia) y se realiza abriendo uno de los anillos del compuesto bicíclico (vi), protegiendo el grupo hidroxilo según sea necesario y desprotegiendo el grupo hidroxilo en el sitio que se glucosila con el intermedio (iii). No existen limitaciones particulares sobre el agente reductor que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones de reducción, y los ejemplos incluyen borohidruros de metal alcalino tales como borohidruro de sodio y borohidruro de litio, compuestos de aluminio hidrogenado tales como hidruro de litio y aluminio e hidruro de trietóxido de aluminio y litio y reactivos de hidruro tales como hidruro de sodio y teluro, siendo preferente el borohidruro de sodio. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida hasta un nivel determinado sin inhibir la reacción, y los ejemplos incluyen alcoholes tales como metanol y etanol, éteres tales como dioxano, éter y tetrahidrofurano, agua y mezclas de dichos disolventes, siendo preferentes metanol o tetrahidrofurano. La temperatura de reacción es de 0 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa y preferentemente de 50 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 5 horas. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida son inhibir la reacción, y preferentemente los ejemplos incluyen alcoholes tales como metanol y etanol, éteres tales como éter y tetrahidrofurano, y mezclas de dichos disolventes. La temperatura de reacción es de 0 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa y preferentemente de 50 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 5 horas.

(Procedimiento Bb)

Puede producirse el compuesto (viii) de material bruto de acuerdo con el procedimiento descrito en la publicación Carbohydrate Research, Vol. 169, 1987, p. 23. Además, el compuesto de material bruto (viii) puede producirse protegiendo y desprotegiendo un grupo hidroxilo de un compuesto conocido de acuerdo con un procedimiento conocido. Además, el grupo hidroxilo también puede estar protegido o desprotegido según sea necesario en la presente etapa de la misma forma que en el Procedimiento A. Además, en el caso de tener un átomo de halógeno para un sustituyente, puede introducirse un átomo de halógeno de acuerdo con la reacción de halogenación de la etapa A1.

(Etapa Bb1)

La presente etapa es una etapa en la que se produce el compuesto (ix) y se realiza introduciendo un grupo saliente en la posición 6 del compuesto (viii) de material bruto en las mismas condiciones que en la etapa A1. Además, el grupo saliente puede convertirse, además, en un grupo saliente diferente según sea necesario.

(Etapa Bb2)

La presente etapa es una etapa en la que se produce el compuesto (x) que tiene una olefina terminal y se realiza calentando el compuesto (ix) en un disolvente en presencia de una catalizador. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida sin inhibir la reacción, y los ejemplos preferentes incluyen alcoholes tales como metanol, etanol e isopropanol, agua y mezclas de dichos disolventes, siendo más preferente un disolvente mixto de agua e isopropanol. No existen limitaciones particulares sobre el catalizador que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones en las que se reduce un doble enlace, y los ejemplos incluyen cinc, paladio carbono, platino, níquel Rainey, borohidruros de metales alcalinos tales como borohidruro de sodio y borohidruro de litio, compuestos de aluminio hidrogenados tales como hidruro de litio y aluminio e hidruro de trietóxido de aluminio y litio, y reactivos de hidruro tales como hidruro de sodio y teluro, siendo preferente el cinc. La temperatura de reacción es de 0 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa y preferentemente de 50 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 5 horas.

(Etapa Bb3)

La etapa presente es una etapa en la que se produce el compuesto (xi) que tiene un grupo hidroxilamino y se realiza tratando el compuesto (x) con un clorhidrato de hidroxilamina. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste disuelva la sustancia de partida sin inhibir la reacción, y los ejemplos preferentes incluyen disolventes mixtos de alcoholes tales como metanol, etanol e isopropanol, y bases orgánicas tales como piridina, siendo particularmente preferente un disolvente mixto de etanol y piridina. La temperatura de reacción es de 0 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa y

preferentemente de 0 ºC a 60 ºC. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 5 horas.

(Etapa Bb4)

La etapa presente es una etapa en la que se produce el compuesto bicíclico (xii) y se realiza ciclando el compuesto (xi) por calentamiento en un disolvente. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que sea inactivo, y los ejemplos preferentes incluyen hidrocarburos aromáticos tales como benceno, tolueno y xileno, siendo particularmente preferente el tolueno. La temperatura de reacción es de 0 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa y preferentemente de 50 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 5 horas.

(Etapa Bb5)

La etapa presente es una etapa en la que se produce el compuesto intermedio (viib) y se realiza desprotegiendo el grupo hidroxilo en el sitio que se glucosila con el intermedio (iii) y protegiendo la amina secundaria del compuesto (xi) en condiciones similares a la etapa A1.

(Procedimiento Bc)

Puede producirse el compuesto (xiii) de material bruto de acuerdo con el procedimiento descrito en la publicación Chemical Pharmaceutical Bulletin, Vol. 39, 1991, p. 2807. Además, el compuesto de material bruto (viii) puede producirse protegiendo y desprotegiendo el grupo hidroxilo de un compuesto conocido de acuerdo con un procedimiento conocido. Además, la protección y desprotección del grupo hidroxilo también puede llevarse a cabo según sea necesario en la presente etapa de la misma forma que el Procedimiento A. Además, en el caso de tener un átomo de halógeno para un sustituyente, puede introducirse un átomo de halógeno de acuerdo con la reacción de halogenación de la etapa A1.

(Etapa Bc1)

La etapa presente es una etapa en la que se produce el compuesto intermedio (viic) y se realiza desprotegiendo el grupo protector del grupo hidroxilo del compuesto (xiii) de material

bruto.

(Procedimiento C)

(Etapa C1)

La presente etapa es una etapa en la que se produce el compuesto (I) deseado y se realiza llevando a cabo una reacción de glucosilación con compuestos intermedios (iv) y (vii) y desprotegiendo el grupo hidroxilo y el grupo amino según sea necesario de acuerdo con procedimientos establecidos. Ejemplos preferentes del grupo de desprotección en la posición anómera del compuesto (iv) incluyen flúor, bromo, cloro, imidato de tricloro, fosfato de difenilo, fosfito de dietilo, tiometilo y grupos feniltio. No existen limitaciones particulares sobre el disolvente que se usa, siempre que éste sea inactivo, y los ejemplos preferentes incluyen hidrocarburos halogenados tales como cloruro de metileno y cloroformo, éteres tales como éter y tetrahidrofurano, e hidrocarburos aromáticos tales como benceno, tolueno y xileno, incluyendo ejemplos más preferentes hidrocarburos halogenados y éteres, e incluyendo ejemplos particularmente preferentes cloruro de metileno y éter. No existen limitaciones particulares sobre el catalizador que se usa, siempre que se use normalmente en reacciones de glucosilación, y los ejemplos preferentes incluyen ácido trimetilsilil trifluorometanosulfónico, ácido trifluorometanosulfónico, complejo trifluoruro de boro

– éter, ácido toluenosulfónico, ácido plata trifluorometanosulfónico y yoduro de tetrabutilamonio. La temperatura de reacción es de 0 ºC al punto de ebullición del disolvente que se usa y preferentemente temperatura ambiente. El tiempo de reacción es de 10 minutos a 24 horas y preferentemente de 1 hora a 5 horas. Además, el compuesto (I) también puede producirse desprotegiendo el grupo hidroxilo después de la reacción de glucosilación con compuestos intermedios (iii) y (viic) y después sometiéndolo adicionalmente a condiciones básicas. Además, en el caso de n = 2, el compuesto (I) puede producirse usando un derivado de trisacárido para el compuesto de material bruto en un procedimiento similar a los procedimientos A y C. Además, en el caso de tener un grupo básico, el compuesto (I) deseado puede convertirse en un sal de adición de ácidos, preferentemente un clorhidrato, de acuerdo con procedimientos ordinarios.

Una vez finalizadas las reacciones de cada una de las etapas mencionadas anteriormente, el compuesto deseado se recoge de la muestra de reacción de acuerdo con procedimientos ordinarios. Por ejemplo, el compuesto deseado se obtiene neutralizando adecuadamente la mezcla de reacción, o en el caso de presencia de materia insoluble, eliminando la materia insoluble mediante filtración y añadiendo a continuación agua y un disolvente orgánico no miscible tal como acetato de etilo, lavando con agua, etc, y separando después la fase orgánica que contiene el compuesto deseado, secando con sulfato de magnesio anhidro, por ejemplo y, finalmente, eliminando el disolvente por destilación. El compuesto deseado resultante puede separarse y purificarse según sea necesario combinando adecuadamente procedimientos ordinarios tales como recristalización, reprecipitación u otros procedimientos que se usan normalmente de modo rutinario para la separación y purificación de compuestos orgánicos, ejemplos de los cuales incluyen cromatografía en columna de adsorción, cromatografía en columna de distribución y otros procedimientos que usan un adsorbente sintético, procedimientos que usan cromatografía de intercambio iónico y cromatografía de fase directa y/o inversa que usan gel de sílice o gel de sílice alquilado, seguido de la elución con un eluyente adecuado. Los derivados de oligosacáridos de la presente invención que tienen las fórmulas generales mencionadas anteriormente (I), (Ia) y (Ib), sus sales farmacológicamente aceptables y sus ésteres farmacológicamente aceptables se administran en varias formas. No existen limitaciones particulares sobre la forma de administración y cada tipo de forma de preparación se determina de acuerdo con la formulación, la edad, el sexo y otras condiciones del paciente, el grado de la enfermedad, etc. Ejemplos de formulaciones en el caso de administración oral incluyen comprimidos, pastillas, polvos, gránulos, jarabes, líquidos, suspensiones, emulsiones, gránulos y cápsulas. La administración se realiza intrarrectalmente en el caso de supositorios. La administración se realiza preferentemente de forma oral. Cada una de estas formulaciones puede formularse de acuerdo con procedimientos ordinarios usando coadyuvantes conocidos que pueden usarse normalmente en sectores farmacéuticos conocidos, ejemplos de los cuales incluyen vehículos, aglutinantes, agentes disgregantes, lubricantes, agentes de disolución, antídotos y agentes de recubrimiento. Cuando se forma en forma de comprimidos, puede usarse para el vehículo un amplio abanico de vehículos convencionalmente conocidos en este sector, ejemplos del cual incluyen vehículos tales como lactosa, sacarosa, cloruro de sodio, glucosa urea, almidón, carbonato de calcio, caolín, celulosa cristalina y ácido silícico, aglutinantes tales como agua, etanol, propanol, jarabe sencillo, glucosa líquida, almidón líquido, gelatina líquida, carboximetilcelulosa, goma laca (shellac), metilcelulosa, fosfato de potasio y polivinil pirrolidona, agentes disgregantes tales como almidón seco, alginato de sodio, agar en polvo, laminarina en polvo, bicarbonato de sodio, carbonato de calcio, ésteres de polioxietileno -sorbitán -ácido graso, lauril sulfato de sodio, estearato de monoglicérido, almidón y lactosa, inhibidores de la disgregación tales como sacarosa, estearina, manteca de coco y aceites hidrogenados, promotores de la absorción tales como sales de amonio cuaternario y laurilsulfato de sodio, humectantes tales como glicerina y almidón, adsorbentes tales como almidón, lactosa, caolín, bentonita y ácido silícico coloidal, y lubricantes tales como talco refinado, estearatos, ácido bórico en polvo y polietilenglicol. Además, los comprimidos pueden ser comprimidos provistos de un recubrimiento ordinario según sea necesario, ejemplos de los cuales incluyen comprimidos recubiertos de azúcar, comprimidos sellados con gelatina, comprimidos recubiertos entéricos y comprimidos recubiertos con película, recubiertos provistos de dos capas de recubrimiento o comprimidos multicapa. Cuando se forman en forma de pastillas, puede usarse un amplio abanico de vehículos conocidos convencionalmente en este sector para los vehículos, ejemplos de los cuales incluyen vehículos tales como glucosa, lactosa, almidón manteca de cacao, aceites vegetales endurecidos, caolín y talco, aglutinantes tales como goma arábica en polvo, tragacanto en polvo, gelatina y etanol y agentes disgregantes tales como laminaran, agar. Cuando se moldea en forma de supositorios, se puede usar un amplio abanico de vehículos conocidos convencionalmente en este sector para los vehículos, ejemplos de los cuales incluyen polietilenglicol, manteca de coco, alcoholes superiores, ésteres de alcoholes superiores y glicéridos semisintéticos. Además, también pueden incluirse, según sea necesario, otros productos farmacéuticos tales como colorantes, conservantes, fragancias, aromatizantes y edulcorantes. Aunque no existen limitaciones particulares sobre la cantidad de compuesto ingrediente activo incluido en las preparaciones farmacéuticas mencionadas anteriormente y ésta puede seleccionarse adecuadamente a lo largo de un intervalo amplio, es adecuado que contenga, normalmente, una cantidad de hasta el 70 % en peso y preferentemente del 1 al 30 % en peso de la composición total. Aunque varía de acuerdo con los síntomas, edad, peso corporal, procedimiento de administración, forma farmacéutica, etc., la dosis normal diaria de un adulto tiene un límite inferior de 0,001 mg (preferentemente 0,01 mg y más preferentemente 0,1 mg) y un límite superior de 2.000 mg (preferentemente 200 mg y más preferentemente 100 mg) y esta dosis puede administrarse en una administración única o en múltiples administraciones.

(Mejor forma de llevar a cabo la invención) A continuación, la presente invención se explica en más detalle por medio de los Ejemplos, ejemplos de Referencia, ejemplos de Ensayo y ejemplos de Preparación, pero la presente invención no está limitada a los mismos.

<Ejemplo 1>

4-O-(6-Deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2(hidroximetil)pirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-1)

imagen1

10

(1a) 4-O-(2,3,4,6-Tetra-O-acetil-α-D-glucopiranosil)-2,3,6-tri-O-acetil-D-glucopiranósido de alilo

Se disolvió monohidrato de D-maltosa (36,0 g, 100 mmol) en piridina (200 ml), se añadió anhídrido acético (100 ml) y 4-dimetilaminopiridina (0,6 g, 4,90 mol) y después se agitó la

15 mezcla a temperatura ambiente durante 12 horas La mezcla de reacción se enfrió con hielo y se añadió hielo a la misma (30 g) y después se agitó la mezcla durante 30 minutos. La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (500 ml) y la capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico diluido (1 N, 200 ml), hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (100 ml) y salmuera saturada (100 ml). Después se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el

20 disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en cloruro de metileno (700 ml) y alcohol alílico (34 ml, 500 mol) y se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (18,1 ml, 100 mmol) y, después, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se añadió a hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (1 l) y después se extrajo con cloruro de metileno (500 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada

25 (300 ml) y se secó con sulfato de sodio anhidro, y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (acetato de etilo:hexano, 2:3, V/V) obteniendo el compuesto del epígrafe deseado (30,0 g, rendimiento del 31 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,99 (3H, s), 2,00 (3H, s), 2,01 (6H, s), 2,03 (3H, s), 2,09 (3H,

30 s), 2,14 (3H, s), 3,65-3,69 (1H, m), 3,93-4,14 (4H, m), 4,20-4,26 (2H, m), 4,30 (1H, dd, J=13,2, 5,1 Hz), 4,47 (1H, dd, J=12,4, 2,9 Hz), 4,57 (1H, d, J=8,1 Hz), 4,83-4,87 (2H, m), 5,04 (1H, t, J=9,5 Hz), 5,18-5,28 (3H, m), 5,35 (1H, t, J=9,5 Hz), 5,41 (1H, d, J=3,7 Hz), 5,79-5,88 (1H, m) ; EM (FAB) m/z: 677 (M+H)+, 699 (M+Na)+.

(1b) 4-O-(4,6-O-bencilideno-α-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

El compuesto (17,0 g, 25,1 mmol) sintetizado en el Ejemplos 1 (1a) se disolvió en metanol (250 ml), se añadió metóxido de sodio (2 ml, 9,8 mol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se añadió Dowex 50w x 8 a la mezcla hasta que la mezcla de reacción se volvió neutra y se filtró y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en N,N-dimetilformamida (200 ml), se añadió dimetilacetal de benzaldehído (4,65 ml, 31,0 mmol) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (226 mg, 1,19 mmol) y después se agitó la mezcla a 2,67 kPa y 50 ºC durante 5 horas. Después se añadió trietilamina (1 ml) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:hexano:etanol, 5:5:1, V/V/V), obteniéndose el compuesto del epígrafe deseado (10,0 g, rendimiento del 85 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD): δ 3,16 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,28-3,32 (1H, m), 3,35 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,42 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,47 (1H, dd, J=9,5, 3,6 Hz), 3,54 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,61-3,66 (2H, m), 3,71 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,74-3,81 (2H, m), 4,02-4,07 (1H, m), 4,12 (1H, dd, J=10,3, 5,1 Hz), 4,22-4,29 (2H, m), 5,06 (1H, d, J=10,2 Hz), 5,10 (1H, d, J=4,4 Hz), 5,23 (1H, d, J=17,5 Hz), 5,81-5,91 (1H, m), 7,22-7,24 (3H, m), 7,38-7,40 (2H, m); EM (FAB) m/z: 471 (M+H)+, 493 (M+Na)+.

(1c) 4-O-(4,6-O-Bencilideno-2,3-di-O-bencil-α-D-glucopiranosil)-2,3,6-tri-O-bencil-Dglucopiranósido de alilo

El compuesto (10,0 g, 21,3 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1b) se disolvió en N,Ndimetilformamida (300 ml) y se añadió hidruro de sodio (9,28 g, 213 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla con refrigeración por hielo durante 30 minutos. Después se añadió bromuro de bencilo (25 ml, 213 mmol), se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas, se añadió agua (100 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (500 ml). El extracto se lavó con agua (100 ml) y salmuera saturada (100 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente mediante destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice

(hexano:acetato de etilo, 9:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (18,5 g, rendimiento del 94 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,49-3,68 (4H, m), 3,76-3,90 (3H, m), 3,93-4,03 (2H, m), 4,094,19 (3H, m), 4,42-4,78 (10H, m), 4,84-5,07 (3H, m), 5,23 (1H, t, J=9,8 Hz), 5,35 (1H, dd, J=17,5, 8,8 Hz), 5,54 (1H, d, J=3,9 Hz), 5,74 (1H, dd, J=24,5, 3,9 Hz), 5,92-6,02 (1H, m), 7,177,51 (5H, m); EM (FAB) m/z: 922 (M+H)+, 944 (M+Na)+.

(1d) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-α-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

El compuesto (30,0 g, 32,5 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1c) se disolvió en dietil éter (300 ml) y se añadió cloruro de metileno (150 ml) e hidruro de litio y aluminio (1,85 g, 48,8 mmol) y cloruro de aluminio (III) (6,93 g, 52,0 mmol) y después se calentó la mezcla a reflujo durante 2 horas. Después se diluyó la mezcla de reacción con dietil éter (500 ml), se añadió a la mezcla de reacción solución acuosa de hidróxido de sodio 1 N (5,6 ml) y después se agitó la mezcla durante 1 hora. Después se extrajo con acetato de etilo, se lavó la capa orgánica con solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % (100 ml), solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (150 ml) y salmuera saturada (100 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1-3:1-2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (21,1 g, rendimiento del 71 %) en forma de un sólido amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,40-3,71 (6H, m), 3,74-3,85 (2H, m), 3,90 (2H, m), 3,99-4,07 (1H, m), 4,10-4,20 (3H, m), 4,42-4,70 (7H, m), 4,76-5,08 (6H, m), 5,23 (1H, t, J=10,7 Hz), 5,35 (1H, dd, J=18,6, 8,8 Hz), 5,64 (1H, dd, J=13,7, 3,9 Hz), 5,93-6,02 (1H, m), 7,18-7,34 (30H, m); EM (FAB) m/z: 946 (M+Na)+, 924 (M+H)+.

(1e) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

El compuesto (15,2 g, 16,5 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1d) se disolvió en piridina (300 ml), se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (12,5 g, 66,0 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (2,01 g, 16,4 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 13 horas. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se vertió en solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % (50 ml) y acetato de etilo (200 ml). La capa orgánica se

lavó con solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % (50 ml), solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (20 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-3:1, V/V), obteniéndose tosilato (13,5 g, rendimiento del 76 %) en forma de un aceite amarillo. El tosilato (13,5 g, 12,5 mol) se disolvió en éter dietílico (300 ml), se añadió a la mezcla de reacción hidruro de litio y aluminio (950 mg, 25 mol) y después se calentó la mezcla a reflujo durante 1 hora. Se añadió solución acuosa de NaOH 1 N (1,0 ml) y agua (1,0 ml) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Después se filtró con celite y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (10,2 g, rendimiento del 90 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,08 (3H, d, J=5,8 Hz), 3,01 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,35 (1H, dd, J=9,5, 3,7 Hz), 3,44-3,50 (2H, m), 3,66-3,72 (5H, m), 3,78 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,93 (1H, t, J=9,5 Hz), 4,07 (1H, dd, J=12,8, 5,9 Hz), 4,35 (1H, dd, J=13,1, 5,1 Hz), 4,39-4,57 (7H, m), 4,69 (2H, d, J=11,7 Hz), 4,77-4,88 (3H, m), 5,13 (1H, d, J=10,0 Hz), 5,26 (1H, d, J=16,9 Hz), 5,47 (1H, d, J=3,7 Hz), 5,84-5,92 (1H, m), 7,09-7,26 (30H, m); EM (FAB) m/z: 907 (M+H)+.

(1f) 2,3,6-Tri-O-bencil-D-glucopiranósido de 4-O-(6-deoxi-2,3,4-tri-O-bencil-α-D-glucopiranosilo)

El compuesto (10,2 g, 11,2 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1e) se disolvió en metanol (40 ml), se añadió tetrahidrofurano (100 ml) y cloruro de paladio (II) (400 mg, 2,24 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 horas. Después se sometió la mezcla de reacción a filtración con celite y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-4:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (8,17 g, rendimiento del 84 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,14 (3H, d, J=6,6 Hz), 3,09 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,41-3,47 (2H, m), 3,62-3,81 (4H, m), 3,96-4,05 (2H, m), 4,01-4,14 (1H, m), 4,49-4,68 (6H, m), 4,74-4,78 (2H, m), 4,84-4,96 (4H, m), 5,22 (1H, d, J=3,6 Hz), 5,51 (1H, d, J=3,7 Hz), 7,19-7,34 (30H, m); EM (FAB) m/z: 889 (M+Na)+.

(1g) 3-O-Benzoil-N-benzoiloxicarbonil-2,5-dideoxi-2,5-imino-α-D-lixofuranósido de metilo Se disolvió N-benzoiloxicarbonil-2,5-dideoxi-2,5-imino-α-D-lixofuranósido de metilo (Tetrahedron, 1986, vol. 42, p. 5685-5692) (13,9 g, 49,8 mmol) en cloruro de metileno (200 ml), se añadió piridina (20 ml, 249,0 mmol) y cloruro de benzoílo (11,6 ml, 99,6 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió a la mezcla de reacción ácido clorhídrico 1 N (200 ml) a 0 ºC y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (100 ml), la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (200 ml) y salmuera saturada (200 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (15,82 g, rendimiento del 83 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,42-3,46 (4H, 3s), 3,60 (1H, dd, J=32,2, 10,8 Hz), 4,54 (1H, d, J=34,2 Hz), 4,64 (1H, d ancho, J=7,9 Hz), 4,85 (1H, d, J=36,2 Hz), 5,13-5,22 (2H, m), 5,47 (1H, s), 7,29-7,35 (5H, m), 7,41-7,45 (2H, m), 7,59 (1H, t, J=7,8 Hz), 7,95 (2H, t, J=7,8 Hz); EM (FAB) m/z: 406 (M+Na)+, 384 (M+H)+.

(1h) (2R,3R,4R)-3-Benzoiloxi-4-hidroxi-2-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de bencilo

El compuesto (15,8 g, 41,3 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1g) se disolvió en ácido trifluoroacético:agua (4:1, 160 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se añadió agua a la mezcla de reacción (200 ml) a 0 ºC y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (300 ml), la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (200 ml) y salmuera saturada (200 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en etanol (150 ml), se añadió el compuesto obtenido disolviendo borohidruro de sodio (0,78 g, 20,7 mmol) en agua (15 ml) y después se agitó la mezcla a 0 ºC durante 20 minutos. Después se añadió a la mezcla de reacción cloruro de amonio acuoso saturado (20 ml) a 0 ºC y se retiró el etanol por destilación a presión reducida. Después se añadió agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (100 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (14,2 g, rendimiento del 89%) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,68 (1H, d, J=11,7 Hz), 3,86 (1H, dd, J=11,7, 4,4 Hz), 3,934,04 (2H, m), 4,25-4,32 (2H, m), 5,09-5,32 (3H, m), 7,32-7,46 (7H, m), 7,59 (1H, t, J=7,4 Hz), 7,99 (2H, d, J=8,8 Hz); EM (FAB) m/z: 372 (M+H)+.

(1i) (2R,3R,4R)-4-Benziloxi-2-benciloximetil-3-hidroxipirrolidina-1-carboxilato de bencilo

El compuesto (4,26 g, 11,5 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1h) se disolvió en diclorometano:ciclohexano (1:2, 180 ml), se añadió tricloroacetoimidato de bencilo (10,6 ml, 57,5 mmol) y ácido trifluorometanosulfónico (0,15 ml, 1,7 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Después se añadió hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (10 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml), se lavó con agua (300 ml) y salmuera saturada (300 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 10:1-5:1, V/V), obteniéndose 7,85 g de un aceite amarillo pálido. Los 7,85 g de aceite amarillo pálido obtenidos de este modo se disolvieron en metanol (100 ml) y solución acuosa de carbonato de potasio 1 M (4 ml) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 horas. Después se retiró el metanol por destilación a presión reducida, se añadió agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml) y después se lavó la capa orgánica con salmuera saturada (100 ml). Después se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (4,06 g, rendimiento del 64 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,35 (1H, dd, J=11,7, 3,7 Hz), 3,51-3,72 (1H, m), 3,66-3,89 (4H, m), 4,37-4,52 (5H, m), 4,98-5,07 (2H, m), 7,09-7,26 (15H, m); EM (FAB) m/z: 448 (M+H)+.

(1j) (2R,3R,4R)-4-Benziloxi-2-benciloximetil-3-{[2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranosil]oxi}pirrolidina-1-carboxilato de bencilo (2R,3R,4R)4-Benziloxi-2-benciloximetil-3-{[2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-α-Dglucopiranosil)--D-glucopiranosil]oxi}pirrolidina-1-carboxilato de bencilo

El compuesto sintetizado en el Ejemplo 1 (13,5 g, 15,57 mmol) (1f) se disolvió en cloruro de metileno (250 ml) y tricloroacetonitrilo (10 ml, 134,3 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (2 gotas) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 40 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (13,0 g, 82 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (5,48 g, 12,2 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1i) se disolvió en dietil éter (400 ml) y se añadió imidato (13,0 g, 13,0 mmol). Se añadió una solución de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (222 µl, 1,22 mmol) en dietil éter (2 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Después se añadió trietilamina (1 ml) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 4:1, V/V), obteniéndose el isómero α del compuesto deseado del epígrafe (11,6 g, 56 %) y además el isómero β (3,7 g, 18 %) en forma de un aceite amarillo pálido. isómero α: RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,20 (3H, d, J=5,9 Hz), 3,10-3,22 (2H, m), 3,303,38 (2H, m), 3,42 (1H, t, J=8,8 Hz), 3,50-3,70 (5H, m), 3,76-3,87 (5H, m), 4,01-4,10 (1H, m), 4,26-4,51 (9H, m), 4,61 (1H, d, J=11,0 Hz), 4,69-4,88 (8H, m), 4,96-5,16 (3H, m), 7,19-7,34 (43H, m), 7,43 (2H, d, J=7,3 Hz); EM (FAB) m/z: 1318 (M+Na)+. Isómero β: RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,17 (3H, d, J=6,5 Hz), 3,10 (1H, t, J=9,1 Hz), 3,413,48 (3H, m), 3,54-3,63 (3H, m), 3,69-3,78 (4H, m), 3,81-3,92 (2H, m), 4,02 (1H, s, J=8,79 Hz), 4,25 (1H, d, J=4,39 Hz), 4,40-4,63 (13H,m), 4,73-4,79 (3H,m), 4,86-4,95 (4H,m), 5,09-5,19 (1H,m), 5,53 (1H, d, J=3,67 Hz), 7,18-7,30 (45H,m); EM (FAB) m/z: 1296 (M+H)+.

(1k) 4-O-(6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2(hidroximetil)pirrolidin-3-ilo

El compuesto (5,60 g, 4,32 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1j) se disolvió en metanol (350 ml), se añadió ácido clorhídrico (4,8 ml) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (2,8 g) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. Después se filtró con celite, se añadió agua de amoniaco al 18 % (6 ml) y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó mediante columna de resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8)(agua – agua de amoniaco al 5 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 2:2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,20 g, rendimiento del 63 %) en forma de un sólido incoloro. [ α ]D20 +145,7 (c 0,36, H2O); RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,28 (3H, d, J=6,6 Hz), 2,93 (1H, dd, J=12,4, 3,0 Hz), 3,12-3,20 (3H, m), 3,57-3,65 (4H, m), 3,71-3,87 (6H, m), 3,92-3,98 (2H, m), 4,32-4,34 (1H, m), 5,13 (1H, d,

J=3,6 Hz), 5,34 (1H, d, J=3,0 Hz); RMN de 13C (125,70 MHz, D2O): δ 16,72, 51,62, 60,64, 61,62, 64,84, 68,79, 70,94, 71,07, 72,13, 72,83, 73,48, 74,96, 75,64, 77,13, 84,01, 97,44, 99,88; EM (FAB) m/z: 442 (M+H)+, 464 (M+Na)+.

<Ejemplo 2>

4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2(hidroximetil)pirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-1)

imagen1

10

(2a) 4-O-β-D-Glucopiranosil-D-glucopiranósido de alilo

Se disolvió octaacetato de α-D-celobiosa (48,59 g, 71,6 mmol) en cloruro de metileno (600 ml), se añadió alcohol alílico (29 ml, 0,43 mol) y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (16 ml, 86,0 15 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añadió agua (200 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (200 ml). Después se lavó el extracto con salmuera saturada (100 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en metanol (300 ml), se añadió metóxido de sodio (28 ml, 0,14 mol) con 20 refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió Dowex 50w x 8 hasta que la mezcla de reacción se volvió neutra, se filtró y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 8:2:1, V/V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (24,8 g, rendimiento del 91 %) en

25 forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,20-3,40 (9H, m), 3,40-3,65 (4H, m), 4,00-4,40 (3H, m), 5,18 (1H, d, J= 11,7 Hz), 5,35 (1H, d, J=17,6 Hz), 5,95 (1H, ddd, J=17,6, 11,7, 5,9 Hz); EM (FAB) m/z: 383 (M+H)+.

30 (2b) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3-di-O-bencil-4,6-O-bencilideno-β-D-glucopiranosil)-Dglucopiranósido de alilo

El compuesto (24,8 g, 64,9 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2a) se disolvió en N,Ndimetilformamida (300 ml), se añadió dimetilacetal de benzaldehído (13 ml, 84,4 mmol) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (617 mg, 3,24 mmol) y después se agitó la mezcla a 2,67 kPa y 50 ºC durante 5 horas. Después se añadió trietilamina (900 µl) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. Se añadió agua (100 ml) al residuo y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 5). Después se lavó el extracto con salmuera saturada (100 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en N,N-dimetilformamida (400 ml), se añadió hidruro de sodio (20 g, 0,45 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 10 minutos. Se añadió bromuro de bencilo (54 ml, 0,45 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Se añadió agua (100 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (500 ml). Después se lavó el extracto con agua (100 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 10:1-7:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (46,6 g, rendimiento del 78 %) en forma de un sólido amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,10-5,00 (26H, m), 5,18 (1H, d, J=11,7 Hz), 5,35 (1H, d, J=17,6 Hz), 5,60 (1H, s), 5,95 (1H, ddd, J=17,6, 11,7, 5,9 Hz), 7,20-7,60 (30H, m); EM (FAB) m/z: 922 (M+H)+.

(2c) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

El compuesto (63,0 g, 68,4 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2b) se disolvió en dietil éter (800 ml) y se añadió cloruro de metileno (400 ml) e hidruro de litio y aluminio (10,4 g, 0,27 mmol) y cloruro de aluminio (III) (36,4 g, 0,27 mmol) y después se calentó la mezcla a reflujo durante 1 hora. Después se diluyó la mezcla de reacción con dietil éter (500 ml). Se añadió solución acuosa de hidróxido de sodio 1 N (21,0 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora. Después se extrajo con acetato de etilo, se lavó la capa orgánica con solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % 500 ml), solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (500 ml) y salmuera saturada (300 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1-3:1-2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (37,8 g, rendimiento del 60 %) en forma de un sólido

amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,10-5,00 (29H, m), 5,18 (1H, d, J=11,8 Hz), 5,35 (1H, d, J=22,5 Hz), 5,95 (1H, ddd, J=22,5, 10,8, 5,9 Hz), 7,20-7,60 (30H, m); EM (FAB) m/z: 924 (M+H)+.

(2d) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-toluenosulfonil-β-D-glucopiranosil)-Dglucopiranósido de alilo

El compuesto (37,8 g, 41,0 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2c) se disolvió en piridina (300 ml), se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (15,6 g, 82,0 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (1,0 g, 0,82 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 13 horas. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida, el residuo se vertió en solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % (50 ml) y acetato de etilo (200 ml) y la capa orgánica se lavó con solución acuosa de ácido clorhídrica la 10 % (50 ml), solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (20 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (32,6 g, rendimiento del 74 %) en forma de un aceite amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,35 (3H, s), 3,10-5,00 (28H, m), 5,18 (1H, d, J=10,8 Hz), 5,35 (1H, d, J=22,5 Hz), 5,95 (1H, ddd, J=22,5, 10,8, 5,9 Hz), 7,10-7,65 (34H, m); EM (FAB) m/z: 1078 (M+H)+.

(2e) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

El compuesto (32,6 g, 30,3 mol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2d) se disolvió en dietil éter (600 ml), se añadió hidruro de litio y aluminio (1,72 g, 45,4 mol) y después se calentó la mezcla a reflujo durante 1 hora. Después la mezcla de reacción se diluyó con éter dietílico (200 ml), se añadió solución acuosa de NaOH 1 N (2,0 ml) y agua (2,0 ml) y se agitó la mezcla durante 30 minutos. Después se filtró con celite y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 7:1-6:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (15,0 g, rendimiento del 55 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,20 (3H, d, J=6,0 Hz), 3,10-5,00 (26H, m), 5,20 (1H, d, J=10,8

Hz), 5,35 (1H, d, J=22,5 Hz), 5,95 (1H, ddd, J=22,5, 10,8, 5,9 Hz), 7,10-7,65 (30H, m); EM (FAB) m/z: 908 (M+H)+.

(2f) D-Glucopiranósido de 2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D-glucopiranosilo)

El compuesto (15,0 g, 16,5 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2e) se disolvió en metanol (150 ml), se añadió tetrahidrofurano (30 ml) y cloruro de paladio (II) (586 mg, 3,31 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 horas. Después se sometió la mezcla de reacción a filtración con celite y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-4:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (12,0 g, rendimiento del 84 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,19-1,22 (3H, m), 2,96-3,66 (8H, m), 3,77-4,02 (3H, m), 4,344,37 (2H, m), 4,54-4,89 (10H, m), 5,00-5,19 (2H, m), 7,23-7,45 (30H, m); EM (FAB) m/z: 868 (M+H)+.

(2g) (2R,3R,4R)-4-Benciloxi-2-benciloximetil-3-{[2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranosil]oxi}pirrolidina-1-carboxilato de bencilo

El compuesto (18,8 g, 21,8 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (400 ml) y tricloroacetonitrilo (10,9 ml, 109 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (0,33 ml, 2,18 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (19,8 g, 90 %) de aceite incoloro. El compuesto (9,5 g, 21,2 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1i) se disolvió en dietil éter (480 ml) y se disolvió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (0,38 ml, 2,12 mmol) en dietil éter (20 ml) en atmósfera de nitrógeno y se añadió la mezcla. Se añadió una solución de imidato en dietil éter (100 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después se añadió trietilamina (0,35 ml, 2,54 mmol) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml) y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml) y salmuera saturada (200 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 3:1, V/V),

obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (13,3 g, 47 %) y su isómero β (4,5 g, 16 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,20 (3H, d, J=5,9 Hz), 3,10-3,22 (2H, m), 3,30-3,38 (2H, m), 3,42 (1H, t, J=8,8 Hz), 3,50-3,70 (5H, m), 3,76-3,87 (5H, m), 4,01-4,10 (1H, m), 4,26-4,51 (9H, m), 4,61 (1H, d, J=11,0 Hz), 4,69-4,88 (8H, m), 4,96-5,16 (3H, m), 7,19-7,34 (43H, m), 7,43 (2H, d, J=7,3 Hz); EM (FAB) m/z: 1318 (M+Na)+.

(2h) 4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2(hidroximetil)pirrolidin-3-ilo

El compuesto (13,3 g, 10,3 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2 g) se disolvió en solución en metanol de ácido clorhídrico al 1 % (250 ml), se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (4 g) y se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Después se retiró el catalizador mediante filtración con celite, se añadió agua de amoniaco al 28 % (5 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se pasó a través de una columna de resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8) con agua (200 ml) y se pasó a través agua de amoniaco al 1 % (200 ml). El agua de amoniaco que contenía el compuesto deseado se concentró a presión reducida y se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol.agua 5:2:1-1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,6 g, 35 %) en forma de un sólido incoloro. [ α ]D20 +88,8 (c 0,52, H2O); RMN de 1H (500 MHz, D2O): δ 1,22 (3H, d, J=6,8 Hz), 2,88 (1H, m), 3,07-3,16 (3H, m), 3,21 (1H, dd, J=7,8, 7,8 Hz), 3,36 (1H, dd, J=9,8, 9,8 Hz), 3,42 (1H, m), 3,49-3,55 (2H, m), 3,61-3,72 (5H, m), 3,75-3,83 (2H, m), 3,89 (1H, m), 4,24(1H, m), 4,38 (1H, d, J=7,9 Hz), 5,02 (1H, d, J=3,9 Hz); RMN de 13H (D2O): δ 16,9, 51,7, 60,0, 61,8, 64,7, 71,0, 71,1, 71,6, 72,2, 73,6, 75,0, 75,5, 75,9, 79,2, 84,3, 97,4, 102,7; EM (FAB) m/z: 442 (M+H)+.

<Ejemplo 3>

4-O-β-D-Glucopiranosil-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-3ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-155)

imagen1

(3a) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4,6-tetra-O-bencil-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

Se disolvió octaacetato de α-D-celobiosa (4,15 g, 6,12 mmol) en cloruro de metileno (50 ml), se añadió alcohol alílico (2,09 ml, 30,6 mmol) y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (1,11 ml, 6,12 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 4 horas. Después se añadió agua (20 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (50 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en metanol (40 ml), se añadió metóxido de sodio (2,36 ml, 12,2 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se añadió Dowex 50w x 8 hasta que la mezcla de reacción se volvió neutra, la mezcla se filtró y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en N,N-dimetilformamida (60 ml), se añadió hidruro de sodio (2,67 g, 61,2 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 10 minutos. Se añadió bromuro de bencilo (8,01 ml, 67,3 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió agua (40 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml), la capa orgánica se lavó con agua (40 ml)y salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 20:1-10:1-8:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (4,85 g, rendimiento del 78 %) en forma de un sólido amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 3,29-3,71 (10H, m), 3,80-4,15 (3H, m), 4,36-4,61 (8H, m), 4,674,89 (8H, m), 5,04-5,11 (1H, m), 5,17-5,22 (1H, m), 5,29-5,34 (1H, m), 5,91-5,98 (1H, m), 7,077,41 (35H, m); EM (FAB) m/z: 1014 (M+H)+.

(3b) D-Glucopiranósido de 2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2,3,4,6-tetra-O-bencil-β-D-glucopiranosilo) El compuesto (4,85 g, 4,79 mmol) sintetizado en el Ejemplo 3 (3a) se disolvió en sulfóxido de dimetilo (40 ml), se añadió t-butóxido de potasio (2,15 g, 19,2 mmol) y después se agitó la mezcla a 110 ºC durante 1 hora. Después se añadió agua (30 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (150 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en 1,4-dioxano (36 ml) y se añadió solución acuosa de ácido sulfúrico al 16 % (3 ml) y después se agitó la mezcla de reacción a 100 ºC durante 1 hora. Después se añadió agua (30 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (150 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (3,15 g, rendimiento del 68 %) en forma de un aceite marrón. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,96-3,95 (9H, m), 4,30-4,38 (3H, m), 4,45-4,81 (7H, m), 4,985,10 (1H, m), 7,09-7,32 (35H, m); EM (FAB) m/z: 974 (M+H)+.

(3c) 2,3,6-Tri-0-bencil-4-0-(2,3,4,6-tetra-O-bencil-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-N-benciloxicarbonil-2-benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (537 mg, 0,55 mmol) sintetizado en el Ejemplo 3 (3b) se disolvió en cloruro de metileno (15 ml) y tricloroacetonitrilo (277 µl, 2,76 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (2 gotas) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 40 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (611 mg, 99 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (223 mg, 0,50 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1i) se disolvió en dietil éter (10 ml) y se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (9 µl, 0,05 mmol). Se añadió gota a gota una solución de imidato (611 mg, 0,55 mmol) en dietil éter (4 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Después se añadió trietilamina (4 gotas) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (395 mg, 57 %) en forma de un aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,24-3,86 (17H, m), 4,00-4,10 (2H, m), 4,25-4,54 (11H, m),

4,66-4,87 (8H, m), 4,95-5,12 (3H, m), 7,12-7,39 (50H, m); EM (FAB) m/z: 1402 (M+H)+.

(3d) 4-O-β-D-Glucopiranosil-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil5 pirrolidin-3-ilo

El compuesto (611 mg, 0,55 mmol) sintetizado en el Ejemplo 3 (3c) se disolvió en metanol (8 ml), se añadió acetato de etilo (2 ml) y también solución de ácido clorhídrico y metanol (2 ml) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (400 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura 10 ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. Después de la filtración con celite, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y se añadió metanol (2 ml) y agua de amoniaco al 28 % (300 µl) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 10 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó mediante resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8) columna (agua – agua de

15 amoniaco al 1,4 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (54 mg, 42 %) en forma de material amorfo incoloro. [ α ] D20 +91,9 (c 0,38, D2O) ; RMN de 1H (400 MHz, D2O) : δ 2,90 (1H, dd, J=12,5, 2,2 Hz), 3,11 (1H, dd, J=12,5, 5,1 Hz),

20 3,16-3,22 (2H, m), 3,28-3,43 (3H, m), 3,49-3,82 (10H, m), 3,88-3,91 (1H, m), 4,23-4,27 (1H, m), 4,40 (1H, d, J=8,1 Hz), 5,01 (1H, d, J=4,4 Hz); EM (FAB) m/z: 458 (M+H)+.

<Ejemplo 4>

25

4-O-(6-Fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2hidroximetil-pirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-278)

imagen1

(4a) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D

30 glucopiranósido de alilo

El compuesto (6,43 g, 6,97 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2c) se disolvió en 1,2dimetoxietano (130 ml), se añadió trifluoruro de dietilaminoazufre (2 ml, 20,50 mmol) y después se agitó la mezcla a 60 ºC durante 1 hora. Se añadió metanol (10 ml) a la mezcla de reacción con refrigeración por hielo y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Se añadió acetato de etilo (50 ml) y la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (50 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (5,06 g, rendimiento del 78 %) en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,00-5,20 (28H, m), 5,25 (1H, d, J=8,0 Hz), 5,40 (1H, d, J=16,0 Hz), 6,00 (1H, m), 7,20-7,60 (30H, m); EM (FAB) m/z: 926 (M+H)+.

(4b) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-Dglucopiranósido de alilo

El compuesto (5,06 g, 5,47 mmol) sintetizado en el Ejemplo 4 (4e) se disolvió en metanol (75 ml), se añadió tetrahidrofurano (15 ml) y cloruro de paladio (II) (190 mg, 1,09 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 horas. Después se sometió la mezcla de reacción a filtración con celite y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1-3:1-2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (3,07 g, rendimiento del 63 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,10-5,20 (27H, m), 7,20-7,60 (30H, m); EM (FAB) m/z: 886 (M+H)+.

(4c) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-Dglucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-N-benciloxicarbonil-2-(benciloximetil)pirrolidin-3-ilo

El compuesto (646,0 mg, 0,73 mmol) sintetizado en el Ejemplo 4 (4b) se disolvió en cloruro de metileno (12 ml) y tricloroacetonitrilo (0,38 ml, 3,66 mmol), se añadió 1,8diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (1 gota) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (740,2 mg, 98,5 %) de aceite amarillo. El compuesto (326,7 mg, 0,73 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1i) se disolvió en dietil éter (13 ml) y se disolvió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (6,6 µl, 0,037 mmol) en dietil éter (20 ml) en atmósfera de nitrógeno y se añadió la mezcla. Se añadió una solución de imidato (740,2 mg) en dietil éter (5 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió trietilamina (5,0 µl, 0,036 mmol) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (20 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo que contenía la mezcla α, β se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1, V/V) aislándose la forma α del compuesto deseado del epígrafe (126,0 mg, 13 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,00-5,20 (39H, m), 7,00-7,60 (45H, m) ; EM (FAB) m/z: 1315 (M+H)+.

(4d) 4-O-(6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2hidroximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (126,0 mg, 0,096 mmol) sintetizado en el Ejemplo 4 (4c) se disolvió en metanol (10 ml) que contenía solución acuosa de ácido clorhídrico al 1 %, se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (100 mg) y después se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Después se eliminó el disolvente por filtración con celite, se añadió agua de amoniaco al 28 % (0,5 ml) y después se agitó la mezcla durante 10 minutos. Después el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y la solución acuosa (100 ml) se sometió a resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8); se eluyó con agua de amoniaco al 1 % (100 ml). El agua de amoniaco que contenía el compuesto deseado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol.agua 5:2:1-1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (23,1 mg, 52 %) en forma de material amorfo incoloro. [ α ]D20 +49,6 (c 0,30, H2O); RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 3,00-3,07 (1H, m), 3,20-3,27 (2H, m), 3,30-3,80 (21H, m), 3,95 (1H, s), 4,29 (1H, s ancho), 4,43 (1H, d, J=8,0 Hz), 4,50-4,80 (2H, m), 5,00 (1H, d, J=4,0 Hz); EM (FAB) m/z: 460 (M+H)+.

<Ejemplo 5>

4-O-(6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-6-fluoro-6-deoxi-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-280)

imagen1

5

(5a) 6-O-t-Butildimetilsilil-2,3-di-O-bencil-4-O-(6-O-t-butildimetilsilil-2,3,4-tri-O-bencil-β-Dglucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

El compuesto (7,76 g, 20,30 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2a) se disolvió en N,N

10 dimetilformamida (160 ml), se añadió cloruro de t-butildimetilsililo (7,65 ml, 50,75 mmol) e imidazol (4,15 g, 60,90 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se añadió agua (50 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El

15 residuo se disolvió en N,N-dimetilformamida (120 ml), se añadió hidruro de sodio (4,0 g, 91,67 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 10 minutos. Se añadió bromuro de bencilo (11 ml, 92,48 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después se añadió agua (50 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (150 ml), la capa orgánica se lavó con agua

20 (50 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 12:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (8,67 g, rendimiento del 89 %) en forma de un aceite incoloro.

25 RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 0,00-0,20 (12H, m), 0,90-1,00 (18H, m), 3,00-5,20 (26H, m), 5,20 (1H, d, J=8,0 Hz), 5,35 (1H, d, J=16,0 Hz), 6,00 (1H, m), 7,20-7,60 (25H, m); EM (FAB) m/z: 1062 (M+H)+.

(5b) 2,3-Di-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

30

El compuesto (8,67 g, 8,17 mmol) sintetizado en el Ejemplo 5 (5a) se disolvió en

tetrahidrofurano (150 ml), se añadió una solución de fluoruro de tetrabutilamonio 1,0 M en THF (20 ml, 20 mmol) y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (cloruro de metileno:metanol, 50:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (4,19 g, rendimiento del 62 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,00-5,20 (28H, m), 5,20 (1H, d, J=12,0 Hz), 5,30 (1H, d, J=18,0 Hz), 5,98 (1H, m), 7,20-7,40 (25H, m); EM (FAB) m/z: 833 (M+H)+.

(5c) 2,3-Di-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-4-0-(2,3,4-tri-0-bencil-6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)D-glucopiranósido de alilo

El compuesto (4,19 g, 5,03 mmol) sintetizado en el Ejemplo 5 (5b) se disolvió en 1,2dimetoxietano (85 ml), se añadió trifluoruro de dietilaminoazufre (2,5 ml, 25,61 mmol) y después se agitó la mezcla a 60 ºC durante 1 hora. Se añadió metanol (10 ml) a la mezcla de reacción con refrigeración por hielo y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Se añadió acetato de etilo (50 ml) y la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (50 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-4:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (2,23 g, rendimiento del 53 %) en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,00-5,10 (26H, m), 5,23 (1H, m), 5,33 (1H, m), 5,95 (1H, m), 7,20-7,40 (25H, m); EM (FAB) m/z: 837 (M+H)+.

(5d) 2,3-Di-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-β-Dglucopiranosil)-D-glucopiranósido de alilo

El compuesto (2,23 g, 2,66 mmol) sintetizado en el Ejemplo 5 (5c) se disolvió en ácido acético (20 ml) y agua (1 ml), se añadió cloruro de paladio (II) (0,47 g, 2,65 mmol) y acetato de sodio (0,87 g, 10,61 mmol) y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas. Después se sometió la mezcla de reacción a filtración con celite y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna

ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V) obteniendo el compuesto del epígrafe deseado (0,73 g, rendimiento del 34 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,00-5,10 (25H, m), 7,20-7,60 (25H, m); EM (FAB) m/z: 797 (M+H)+.

(5e) 2,3-Di-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-4-O-(2,3,9-tri-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-β-Dglucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-N-benciloxicarbonil-2(benciloximetil)pirrolidin-3-ilo

El compuesto (730,0 mg, 0,92 mmol) sintetizado en el Ejemplo 5 (5d) se disolvió en cloruro de metileno (13,5 ml) y tricloroacetonitrilo (0,46 ml, 4,60 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (1 gota) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (675,3 mg, 78 %) de aceite amarillo. El compuesto (412,3 mg, 0,92 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1i) se disolvió en dietil éter (13 ml) y se disolvió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (8,3 µl, 0,046 mmol) en dietil éter (20 ml) en atmósfera de nitrógeno y se añadió la mezcla. A continuación, se añadió una solución de imidato (675,3 mg) en dietil éter (5 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió trietilamina (7 µl, 0,050 mmol) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (20 ml). Después, la capa orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo que contenía la mezcla α, β se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1, V/V), aislándose del mismo la forma α del compuesto deseado del epígrafe (122,6 mg, 11 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,00-5,20 (37H, m), 7,00-7,60 (40H, m); EM (FAB) m/z: 1227 (M+H)+.

(5f) 4-O-(6-Fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-6-fluoro-6-deoxi-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (122,6 mg, 0,10 mmol) sintetizado en el Ejemplo 5 (5e) se disolvió en metanol (10 ml) que contenía solución acuosa de ácido clorhídrico al 1 %, se añadió hidróxido de

paladio al 20 %-carbono (100 mg) y después se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Después se retiró el catalizador mediante filtración con celite, se añadió agua de amoniaco al 28 % (5 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Después el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y la solución acuosa (100 ml) se sometió a una

5 columna de resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8); se eluyó con agua de amoniaco al 1 % (100 ml). El agua de amoniaco que contenía el compuesto deseado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua 5:2:1-1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (25,9 mg, 56 %) en forma de un sólido incoloro.

10 RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 3,20-3,90 (22H, m), 4,10 (1H, s), 4,41 (1H, d, J=8,1 Hz), 4,504,80 (4H, m), 5,05 (1H, d, J=6,3 Hz); EM (FAB) m/z: 462 (M+H)+.

<Ejemplo 6>(referencia)

15 4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1S,3R,4R,5S)-1-amino-3-hidroxi-5hidroximetil-ciclopent-4-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 5-28

imagen1

20 (6a) 4,6-O-Bencilideno-3-O-bencil-2-deoxi-D-glucopiranósido de metilo

Se disolvió 2-deoxi-D-glucosa (10,1 g, 61,5 mmol) en metanol (100 ml), se añadió solución de ácido clorhídrico y metanol (50 ml) y después se calentó la mezcla a reflujo durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió trietilamina hasta que la mezcla de

25 reacción se tornó básica y se eliminó el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en N,N-dimetilformamida (100 ml), se añadió dimetilacetal de benzaldehído (12,9 ml, 86,1 mmol) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (585 mg, 3,08 mmol) y después se agitó la mezcla a 2,67 kPa y 50 ºC durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió agua (50 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml).

La capa orgánica se lavó con agua (50 ml) y salmuera saturada (30 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente mediante destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en N,N-dimetilformamida (100 ml), se añadió hidruro de sodio (3,99 g, 92,3 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 10 minutos. Se añadió bromuro de bencilo (11,0 ml, 92,3 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 19 horas. Después se añadió agua (50 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml), la capa orgánica se lavó con agua (50 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 20:1-10:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (16,0 g, rendimiento del 73 %) en forma de un sólido amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,66-1,83 (1H, m), 2,24-2,34 (1H, m), 3,33 (3H, s), 3,65-3,85 (3H, m), 3,98-4,04 (1H, m), 4,22-4,35 (1H, m), 4,66-4,84 (3H, m), 5,60-5,62 (1H, m), 7,23-7,40 (8H, m), 7,49-7,52 (2H, m); EM (FAB) m/z: 357 (M+H)+.

(6b) 3-O-Bencil-2-deoxi-D-glucopiranósido de metilo

El compuesto (2,00 g, 5,62 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6a) se disolvió en ácido acético (15 ml) y agua (5 ml) y la mezcla se agitó a 60 ºC durante 2 horas y 30 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1-1:2, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,33 g, rendimiento del 88 %) en forma de un aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,49-1,64 (1H, m), 2,11 (1H, s ancho), 2,25-2,36 (1H, m), 2,62 (1H, s ancho), 3,33 (3H, s), 3,44-3,65 (2H, m), 3,76-3,87 (3H, m), 4,41-4,52 (1H, m), 4,65-4,71 (1H, m), 4,81-4,82 (1H, m), 7,26-7,37 (5H, m); EM (FAB) m/z: 267 [M-H]+.

(6c) 3-O-Bencil-2-deoxi-6-O-p-toluenosulfonil-D-glucopiranósido de metilo

El compuesto (12,2 g, 45,3 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6b) se disolvió en piridina (100 ml), se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (13 g, 68,0 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (553 mg, 4,53 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla de reacción se vertió en solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % (80 ml) y acetato de etilo

(200 ml), la capa orgánica se lavó con solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % (80 ml), solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (80 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (16,9 g, rendimiento del 88 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,54-1,61 (1H, m), 2,20-2,28 (1H, m), 2,44 (3H, s), 3,27 (3H, s), 3,41-3,48 (2H, m), 3,70-3,76 (2H, m), 4,22-4,41 (2H, m), 4,47-4,57 (1H, m), 4,63-4,68 (1H, m), 4,75-4,76 (1H, m), 7,26-7,36 (7H, m), 7,79-7,84 (2H, m); EM (FAB) m/z: 421 [M-H]+.

(6d) 4-O-Benzoil-3-O-bencil-2-deoxi-6-O-p-toluenosulfonil-D-glucopiranósido de metilo

El compuesto (16,9 g, 40,0 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6c) se disolvió en cloruro de metileno (150 ml), se añadió trietilamina (22 ml, 0,16 mol), cloruro de benzoílo (14 ml, 0,12 mol) y 4-dimetilaminopiridina (489 mg, 4,00 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 18 horas. Después se añadió agua (80 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (100 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (20,8 g, rendimiento del 99 %) en forma de un aceite amarillo. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,71-1,78 (1H, m), 2,26-2,31 (1H, m), 2,33 (3H, s), 3,32 (3H, s), 3,94-4,14 (4H, m), 4,40-4,44 (1H, m), 4,52-4,59 (1H, m), 4,80-4,81 (1H, m), 5,03-5,08 (1H, m), 7,09-7,20 (6H, m), 7,40-7,49 (3H, m), 7,57-7,62 (1H, m), 7,66-7,71 (2H, m), 7,87-7,96 (2H, m); EM (FAB) m/z: 527 (M+H)+.

(6e) 4-O-Benzoil-3-O-bencil-2,6-dideoxi-6-yodo-D-glucopiranósido de metilo

El compuesto (2,53 g, 4,81 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6d) se disolvió en tolueno (30 ml), se añadió yoduro de sodio (3,6 g, 24,0 mmol) y 18-corona-6-éter (254 mg, 0,96 mmol) y después se agitó la mezcla a 100 ºC en atmósfera de nitrógeno durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió agua (30 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (30 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente mediante destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 15:1 -10:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (2,11 g, rendimiento del 91 %) en forma de un aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,72-1,86 (1H, m), 2,31-2,41 (1H, m), 3,17-3,26 (1H, m), 3,333,40 (1H, m), 3,45 (3H, s), 3,69-3,86 (1H, m), 3,99-4,31 (1H, m), 4,44-4,48 (1H, m), 4,57-4,62 (1H, m), 4,90-4,91 (1H, m), 5,03-5,18 (1H, m), 7,13-7,26 (5H, m), 7,43-7,49 (2H, m), 7,58-7,62 (1H, m), 8,02-8,04 (2H, m); EM (FAB) m/z: 483 (M+H)+.

(6f) Oxima de 4-O-benzoil-3-O-bencil-2,5,6-trideoxi-D-xilo-hex-5-enosa

El compuesto (2,11 g, 4,38 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6e) se disolvió en isopropanol (50 ml), se añadió agua (2 ml) y polvo de cinc (2 g) lavado con solución acuosa de ácido clorhídrico al 5 % y después se calentó la mezcla a reflujo durante 25 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, se sometió a filtración con celite y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en etanol (50 ml) y se añadió clorhidrato de hidroxilamina (913 mg, 13,1 mmol) y piridina (1,06 ml, 13,1 mmol) y después la mezcla se agitó a 60 ºC durante 50 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y se añadió agua (20 ml). Después, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1-5:1-4:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,14 g, rendimiento del 77 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,47-2,55 (1H, m), 2,61-2,79 (1H, m), 3,88 (0,5H, dt, J=8,1, 5,1 Hz), 3,94 (0,5H, dt, J=8,1, 4,4 Hz), 4,65 (0,5H, d, J=11,7 Hz), 4,67 (0,5H, d, J=11,7 Hz), 4,74 (0,5H, d, J=11,7Hz), 4,75 (0,5H, d, J=11,7 Hz), 5,33-5,36 (1H, m), 5,41-5,47 (1H, m), 5,74-5,77 (1H, m), 6,01 (1H, ddd, J=16,8, 5,9, 5,1 Hz), 6,84 (0,5H, t, J=5,1 Hz), 7,26-7,33 (5H, m), 7,437,48 (2,5H, m), 7,56-7,60 (1H, m), 8,06-8,08 (2H, m); EM (FAB) m/z: 340 (M+H)+.

(6g) (3aR,4R,5R,6aS)-4-Benzoiloxi-5-benciloxi-hexahidrociclopenta[c]isoxazol (3aS,4R,5R,6aR)-4-benzoiloxi-5-benciloxi-hexahidro-ciclopenta[c]isoxazol

El compuesto (5,0 g, 14,7 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6f) se disolvió en tolueno (100 ml)

y la mezcla se calentó a reflujo durante 40 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1-1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (mezcla) (4,08 g, rendimiento del 82 %) en forma de un aceite color naranja. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,92 (0,3H, ddd, J=10,2, 5,1, 5,1 Hz), 2,00-2,13 (1,4H, m), 2,28-2,35 (0,3H, m), 2,99-3,01 (0,3H, m), 3,37 (0,7H, dd, J=8,8, 7,3 Hz), 3,43-3,49 (0,7H, m), 3,99-4,22 (4,3H, m), 4,63 (0,3H, d, J=11,7 Hz), 4,63 (1,4H, s), 4,67 (0,3H, d, J=9,5 Hz), 5,21 (0,3H, t, J=3,7 Hz), 5,28 (0,7H, d, J=3,7Hz), 7,25-7,35 (5H, m), 7,43-7,47 (2H, m), 7,54-7,60 (1H, m), 7,99-8,08 (2H, m); EM (FAB) m/z: 340 (M+H)+.

(6h) (3aR,4R,5R,6aS)-5-Benciloxi-1-benciloxicarbonil-4-hidroxi-hexahidro-ciclopenta[c]isoxazol

El compuesto (4,08 g, 12,0 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6 g) se disolvió en metanol (40 ml), se añadió metóxido de sodio (696 µl, 3,61 mol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió Dowex 50w x 8 hasta que la mezcla de reacción se volvió neutra, se filtró y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (40 ml) y se añadió solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (20 ml) y cloroformiato de benciloxi (2,4 ml, 16,8 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 1 hora y 30 minutos. La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente mediante destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo,

2:1 -1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (789 mg, rendimiento del 18 %) en forma de un sólido amarillo pálido y su diastereómero (1,62 g, 36 %) en forma de un aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,57-1,63 (1H, m), 2,47 (1H, s ancho), 2,50-2,56 (1H, m), 2,732,77 (1H, m), 3,61-3,69 (2H, m), 3,88-3,92 (1H, m), 4,01 (1H, d, J=8,8 Hz), 4,49 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,48-4,55 (1H, m), 4,60 (1H, d, J=11,7 Hz), 5,18 (2H, s); EM (FAB) m/z: 370 (M+H)+.

(6i) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de (3aR,4R,5R,6aS)-5-benciloxi-1-benciloxicarbonil-hexahidrociclopenta[c]isoxazol-4-ilo El compuesto (751 mg, 0,87 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (15 ml) y tricloroacetonitrilo (435 µl, 4,33 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (2 gotas) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de retirar el disolvente por destilación a presión reducida, se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1-5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (734 mg, 84 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (244 mg, 0,66 mmol) sintetizado en el Ejemplo 0 (0h) se disolvió en dietil éter (12 ml) y se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (12 µl, 0,07 mmol). Se añadió gota a gota una solución de imidato (734 mg, 0,73 mmol) en dietil éter (3 ml) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se añadió trietilamina (4 gotas) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 2:11:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (mezcla α, β) (516 mg, rendimiento del 64 %) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,19 (1,5H, d, J=2,9Hz), 1,20 (1,5H, d, J=2,9 Hz), 1,62-1,68 (0,5H, m), 1,79-1,84 (0,5H, m), 2,39-2,45 (0,5H, m), 2,48-2,53 (0,5H, m), 2,73-2,77 (0,5H, m), 2,85-2,86 (0,5H, m), 3,10-3,60 (8H, m), 3,69-4,02 (6H, m), 4,10-4,14 (1H, m), 4,32-4,64 (8H, m), 4,69-4,87 (7H, m), 5,00 (0,5H, d, J=10,7 Hz), 5,12 (0,5H, d, J=3,9 Hz), 5,18 (1H, d, J=10,7 Hz), 7,18-7,43 (50H, m); EM (FAB) m/z: 1217 (M)+.

(6j) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (3aR,4R,5R,6aS)-5-benciloxi-1-metiloxicarbonil-hexahidrociclopenta[c]isoxazol-4-ilo

El compuesto (516 mg, 0,42 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6i) se disolvió en metanol (6 ml) y tolueno (6 ml), se añadió metóxido de sodio (221 µl, 1,15 mol) y después se agitó la mezcla a 50 ºC durante 40 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió Dowex 50W x 8 hasta que la mezcla de reacción se volvió neutra, se filtró y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:dietil éter, 1,5:1-1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (173 mg, rendimiento del 47 %) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,61-1,69 (1H, m), 2,48-2,55 (1H, m), 2,72-2,78 (1H, m), 3,13 (1H, dd, J=9,5, 8,8 Hz), 3,21 (1H, dd, J=9,5, 5,9 Hz), 3,31 (1H; dd, J=8,1, 7,3 Hz), 3,36-3,54 (5H, m), 3,59-3,62 (1H, m), 3,79 (3H, s), 3,74-3,94 (5H, m), 3,99 (1H, d, J=8,8 Hz), 4,32-4,38 (2H, m), 4,50-4,67 (7H, m), 4,76-5,00 (5H, m), 5,01 (1H, d, J=11,0 Hz), 5,12 (1H, d, J=3,7 Hz), 7,14-7,44

(35H, m); EM (FAB) m/z: 1141 (M)+.

(6k) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (3aR,4R,5R,6aS)-5-benciloxi-hexahidrociclopenta[c]isoxazol-4-ilo

El compuesto (363 mg, 0,32 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6j) se disolvió en metanol (8 ml), se añadió solución acuosa de hidróxido de potasio 1 N (4 ml) y después se agitó la mezcla a 80 ºC durante 8 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió solución acuosa saturada de cloruro de amonio (15 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml). Después, la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (10 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 1,5:1-1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (313 mg, rendimiento del 91 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,20 (3H, d, J=5,9 Hz), 1,56-1,64 (1H, m), 2,26-2,36 (1H, m), 2,76-2,86 (1H, m), 3,13 (1H, dd, J=9,5, 8,8 Hz), 3,19-3,25 (2H, m), 3,32 (1H, dd, J=8,8, 8,1 Hz), 3,43-3,53 (3H, m), 3,67-3,69 (2H, m), 3,81-3,95 (6H, m), 4,35-4,40 (2H, m), 4,51-4,67 (7H, m), 4,74-4,87 (6H, m), 5,01 (1H, d, J=10,3 Hz), 7,15-7,44 (35H, m); EM (FAB) m/z: 1084 (M+H)+.

(6l) 4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1S,3R,9R,5S)-1-amino-3-hidroxi5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo

El compuesto (313 mg, 0,29 mmol) sintetizado en el Ejemplo 6 (6k) se disolvió en metanol (8 ml) y acetato de etilo (4 ml), se añadió ácido clorhídrico (5 gotas) e hidróxido de paladio al 20 %carbono (300 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 6 horas. Después de filtrar con celite, se retiró el disolvente por destilación a presión reducida, se añadió metanol (3 ml) y agua de amoniaco al 28 % (300 µl) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 10 minutos. Después de retirar el disolvente por destilación a presión reducida, se purificó el residuo mediante columna de intercambio iónico (Dowex 50W x 8) (agua – agua de amoniaco al 28 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (107 mg, rendimiento del 81 %) en

forma de un sólido amarillo pálido.

RMN de 1H (500 MHz, D2O): δ 1,19 (1H, d, J=5,9 Hz), 1,53 (1H, dt, J=13,7, 6,8 Hz), 2,18-2,23 (1H, m), 2,27-2,33 (1H, m), 3,07 (1H, dd, J=9,8, 8,8 Hz), 3,19 (1H, dd, J=9,8, 7,8 Hz), 3,34 (1H, dd, J=9,8, 8,8 Hz), 3,37-3,41 (1H, m), 3,47-3,51 (2H, m), 3,58 (1H, dd, J=14,7, 6,8 Hz), 3,663,80 (6H, m), 3,86 (1H, dd, J=6,8, 4,9 Hz), 4,11-4,14 (1H, m), 4,36 (1H, d, J=7,8 Hz), 5,06 (1H,

5 d, J=3,9 Hz); RMN de 13C (125 MHz, D2O): δ 16,89, 38,27, 47,74, 49,85, 59,41, 60,05, 70,97, 71,19, 71,56, 72,22, 73,64, 74,96, 75,45, 75,51, 79,24, 84,26, 97,34, 102,68; EM (FAB) m/z: 456 (M+H)+.

10 <Ejemplo 7>

4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,9R,5R)-2,5-dihidroximetil-4hidroxipirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-557)

imagen1

15 (7a) (1R,3S,4S,6R,7R)-7-Benciloxi-6-hidroximetil-3-metoxi-2-oxa-5-aza-biciclo[2,2,1]heptano

Se disolvió epóxido de azida (Tetrahedron, 26, 1985, 1469) (2,03 g, 6,97 mmol) en etanol (40 ml), se añadió catalizador de Lindlar (0,4 g) y la mezcla se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Después, el catalizador se retiró mediante filtración con celite, se disolvió en

20 etanol (40 ml) y la mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora. Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (cloruro de metileno:etanol, 20:1-10:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,21 g, rendimiento del 65 %) en forma de un sólido marrón. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,15-2,35 (2H, ancho), 3,19 (1H, dd, J=5,8, 5,9 Hz), 3,35 (3H,

25 s), 3,41 (1H, s), 3,65 (1H, dd, J=5,8, 11,7 Hz), 3,73 (1H, dd, J=5,8, 11,7 Hz), 4,11 (1H, s), 4,18 (1H s), 4,54 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,61 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,64 (1H, s), 7,29-7,38 (5H, m); EM (FAB) m/z: 266 (M+H)+.

(7b) Éster bencílico del ácido (1R,3S,4S,6R,7R)-7-hidroxi-6-hidroximetil-3-metoxi-2-oxa-5-aza30 biciclo[2,2,1]heptano-5-carboxílico El compuesto (930 mg, 3,51 mmol) sintetizado en el Ejemplo 7 (7a) se disolvió en metanol (20 ml), se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (280 mg) y se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 6 horas. Después se retiró el catalizador por filtración con celite y se eliminó el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo:solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (2:1, 20 ml), se añadió cloroformiato de bencilo (0,75 ml, 5,27 mmol) y se agitó la mezcla a 0 ºC durante 2 horas. Después se añadió agua (20 ml) a 0 ºC y la mezcla se extrajo con acetato de etilo, la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 1:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (759 mg, rendimiento del 70 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,33 (3H, s), 3,50-4,00 (3H, m), 4,10-4,25 (3H, m), 4,61 (1H, s ancho), 4,60-4,74 (2H, m), 5,10-5,25 (2H, m), 7,25-7,45 (5H, m); EM (FAB) m/z: 310 (M+H)+.

(7c) Éster bencílico del ácido (1R,3S,4S,6R,7R)-7-benciloxi-6-t-butildimetilsililoximetil-3-metoxi2-oxa-5-azabiciclo[2,2,1]heptano-5-carboxílico

El compuesto (152 mg, 0,49 mmol) sintetizado en el Ejemplo 7 (7b) se disolvió en piridina (4 ml), se añadió cloruro de t-butildimetilsililo (82 mg, 0,54 mmol) y después se agitó la mezcla a 0 ºC durante 3 horas. Después se confirmó mediante TLC que ya no había presencia de material bruto, se añadió cloruro de benzoílo (86 µl, 0,74 mmol) y la mezcla se agitó a 0 ºC durante 1 hora. Después se añadió agua (20 ml) a 0 ºC y la mezcla se extrajo con acetato de etilo, la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 10:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (218 mg, rendimiento del 84 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ -0,24--0,04 (6H, m), 0,72 (4,5H, s), 0,77 (4,5H, s), 3,34 (1,5H, s), 3,38 (1,5H, s), 3,67-3,80 (2H, m), 3,91 (0,5H m), 4,10 (0,5H, m), 4,40 (0,5H, s), 4,46 (0,5H, m), 4,66 (0,5H, s), 4,69 (1H, m), 4,78 (0,5H, m), 5,15 (2H, m), 5,44 (1H, m), 7,39-7,36 (5H, m), 7,41 (2H, m), 7,55 (1H, m), 7,95 (2H, m); EM (FAB) m/z: 528 (M+H)+.

(7d) (2R,3R,4R,5R)-N-Benciloxicarbonil-3-benzoil-2,5-dihidroximetil-4-hidroxipirrolidina

El compuesto (997 mg, 1,89 mmol) sintetizado en el Ejemplo 7 (7c) se disolvió en ácido trifluoroacético:agua (4:1, 12 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se añadió agua a la mezcla de reacción (20 ml) a 0 ºC y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (30 ml), la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (20 ml) y salmuera saturada (200 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en etanol (15 ml), se añadió el compuesto obtenido disolviendo borohidruro de sodio (35,7 mg, 0,10 mmol) en agua (15 ml) y después se agitó la mezcla a 0 ºC durante 20 minutos. Después se añadió a la mezcla de reacción cloruro de amonio acuoso saturado (2 ml) a 0 ºC y se retiró el etanol por destilación a presión reducida. Después se añadió agua (15 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (15 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (15 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (643 mg, rendimiento del 85 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,60-3,38 (9H, m), 4,98-5,19 (4H, m), 7,20-7,30 (5H, m), 7,36. (2H, m), 7,50 (1H, m), 7,89 (2H, d, J=7,3 Hz); EM (FAB) m/z: 402 (M+H)+.

(7e) (2R,3R,4R,5R)-N-Benciloxicarbonil-3-hidroxi-2,5-dibenciloximetil-4-benciloxipirrolidina

El compuesto (643 mg, 1,60 mmol) sintetizado en el Ejemplo 7 (7d) se disolvió en diclorometano:ciclohexano (1:2, 18 ml), se añadió tricloroacetoimidato de bencilo (2,7 ml, 14,4 mmol) y ácido trifluorometanosulfónico (29 µl, 0,32 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (5 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se diluyó con acetato de etilo (200 ml), se lavó con agua (30 ml) y salmuera saturada (30 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 20:1-10:1, V/V), obteniéndose 1.080 mg de un aceite incoloro. Los 1.080 mg de aceite incoloro obtenidos de este modo se disolvieron en metanol:tetrahidrofurano (4:1, 25 ml), se añadió carbonato de potasio (44 mg, 0,32 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Después de retirar el metanol por destilación a presión reducida, se añadió agua (15

ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (15 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente mediante destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (715 mg, rendimiento del 78 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,40-3,49 (2H, m), 3,62 (1H, dd, J=4,4, 8,8 Hz), 3,79-4,12 (4H, m), 4,19 (1H, dd, J=3,7, 10,3 Hz), 4,26-4,61 (6H, m), 5,01 (1H, d, J=16,8 Hz), 5,03 (1H, d, J=16,8 Hz), 5,51 (1H, m), 7,15-7,38 (20H, m); EM (FAB) m/z: 568 (M+H)+.

(7f) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R,5R)-N-benciloxicarbonil-2,5-dibenciloximetil-4-benciloxipirrolidin-3-ilo

El compuesto (426 mg, 0,49 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (8 ml) y tricloroacetonitrilo (0,25 ml, 2,45 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (7 µl, 0,05 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (398 mg, 80 %) de aceite incoloro. El compuesto (248 mg, 0,44 mmol) sintetizado en el Ejemplo 7 (7e) se disolvió en dietil éter (8 ml) y se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (7 µl, 44 µmol) en atmósfera de nitrógeno. Se añadió una solución de imidato en dietil éter (5 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después se añadió trietilamina (12 µl, 88 µmol) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (20 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 4:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (218 mg, 31 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δ 1,23 (3H, d, J=5,9 Hz), 2,92-3,19 (4H, m), 3,26-3,73 (13H, m), 3,85 (1H, dd, J=5,1, 5,1 Hz), 3,93 (1H, dd, J=5,1, 5,1 Hz), 4,31 (1H, d, J=8,0 Hz), 5,03 (1H, d, J=3,6 Hz); EM (FAB) m/z: 472 (M+H)+.

(7g) 4-O-(6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R,5R)-2,5-dihidroximetil4-hidroxipirrolidin-3-ilo

El compuesto (218 mg, 0,15 mmol) sintetizado en el Ejemplo 7 (7f) se disolvió en solución en

5 metanol de ácido clorhídrico al 1 % (5 ml), se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (110 mg) y se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Después se eliminó el disolvente por filtración con celite, se añadió agua de amoniaco al 28 % (0,8 ml) y después se agitó la mezcla durante 10 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se pasó a través de una columna de resina de intercambio iónico con

10 agua (30 ml) y se pasó a través agua de amoniaco al 1 % (30 ml). El agua de amoniaco que contenía el compuesto deseado se concentró a presión reducida y se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol.agua 5:2:11:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (47 mg, 64 %) en forma de un sólido incoloro.

15 RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,15 (3H, d, J=5,9 Hz), 2,92-3,19 (4H, m), 3,26-3,73 (13H, m), 3,85 (1H, dd, J=5,1, 5,1 Hz), 3,93 (1H, dd, J=5,1, 5,1 Hz), 4,31 (1H, d, J=8,0 Hz), 5,03 (1H, d, J=3,6 Hz); EM (FAB) m/z: 472 (M+H)+.

20 <Ejemplo 8>

4-O-(6-metoxi-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2hidroximetil-pirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-354

imagen1

25

(8a) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-Dglucopiranósido de alilo

El compuesto (2,19 g, 2,37 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2c) se disolvió en N,N

30 dimetilformamida (45 ml) y se añadió hidruro de sodio (0,12 g, 2,75 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla durante 10 minutos. Se añadió yoduro de bencilo (0,3 ml,

4,82 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Se añadió metanol (5 ml) a la mezcla de reacción con refrigeración por hielo y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Se añadió acetato de etilo (20 ml) y la capa orgánica se lavó con agua (20 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente mediante destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1-5:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,80 g, rendimiento del 81 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,21 (3H, s), 3,30-5,00 (28H, m), 5,10 (1H, m), 5,20 (1H, m), 5,95 (1H, m), 7,20-7,40 (30H, m); EM (FAB) m/z: 938 (M+H)+.

(8b) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-metoxi-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-Dglucopiranósido de alilo

El compuesto (1,80 g, 1,92 mmol) sintetizado en el Ejemplo 8 (8a) se disolvió en metanol (30 ml), se añadió tetrahidrofurano (6 ml) y cloruro de paladio (II) (67,4 mg, 0,38 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 horas. Después se sometió la mezcla de reacción a filtración con celite y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-4:1-3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,43 g, rendimiento del 83%) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,20 (3H, s), 3,25-5,00 (27H, m), 5,10 (1H, m), 7,20-7,40 (30H, m); EM (FAB) m/z: 898 (M+H)+.

(8c) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-metoxi-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-Dglucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-N-benciloxicarbonil-2-(benciloximetil)pirrolidin-3-ilo

El compuesto (762,6 mg, 0,85 mmol) sintetizado en el Ejemplo 8 (8b) se disolvió en cloruro de metileno (14 ml) y tricloroacetonitrilo (0,43 ml, 4,29 mmol), se añadió 1,8diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (1 gota) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (567,8 mg, 64 %) de aceite incoloro. El compuesto (380,8 mg, 0,85 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1i) se disolvió en dietil éter (13

ml) y se disolvió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (8,0 µl, 0,044 mmol) en dietil éter (2 ml) en atmósfera de nitrógeno y se añadió el compuesto. Se añadió una solución de imidato (567,8 mg) en dietil éter (5 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió trietilamina (8,0 µl, 0,057 mmol) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (20 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo que contenía la mezcla α, β se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 3:1, V/V), aislándose la forma α del compuesto deseado del epígrafe (150,1 mg, 13 %) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,20 (3H, s), 3,25-5,20 (39H, m), 7,20-7,40 (45H, m); EM (FAB) m/z: 1327 (M+H)+.

(8d) 4-O-(6-metoxi-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2hidroximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (150,1 mg, 0,11 mmol) sintetizado en el Ejemplo 8 (8c) se disolvió en metanol (10 ml) que contenía solución acuosa de ácido clorhídrico al 1 %, se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (100 mg) y después se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Después se retiró el catalizador mediante filtración con celite, se añadió agua de amoniaco al 28 % (0,5 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Después el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y la solución acuosa (100 ml) se sometió a una columna de resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8); se eluyó con agua de amoniaco al 1 % (100 ml). El agua de amoniaco que contenía el compuesto deseado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua 5:2:1-1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (49,1 mg, 95 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,00-4,20 (19H, m), 3,27 (3H, s), 4,37 (1H, d, J=8,0 Hz), 4,98 (1H, d, J=3,7 Hz); EM (FAB) m/z: 472 (M+H)+.

<Ejemplo 9> (referencia)

4-O-(6-Deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-fluoro-2-hidroximetil

pirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-115)

imagen1

(9a) (2R,3R,4R)-3-Benzoiloxi-N-benciloxicarbonil-2-benciloximetil-4-hidroxi-pirrolidina

5 El compuesto (3,37 g, 9,07 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1h) se disolvió en cloruro de metileno:ciclohexano (1:2, 180 ml), se añadió tricloroacetoimidato de bencilo (2,0 ml, 10,88 mmol) y ácido trifluorometanosulfónico (2,57 ml, 15,3 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se añadió hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se diluyó con acetato de etilo (200

10 ml), se lavó con agua (300 ml) y solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (300 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-2:1, V/V), obteniéndose 4,71 g de un aceite amarillo pálido.

15 RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,50-4,20 (4H, m), 4,45-4,80 (3H, m), 5,00-5,60 (5H, m), 7,327,46 (12H, m), 7,59 (1H, m), 7,99 (2H, m); EM (FAB) m/z: 462 (M+H)+.

(9b) (2R,3R,4S)-3-Benzoiloxi-N-benciloxicarbonil-2-benciloximetil-4-hidroxi-pirrolidina

20 El compuesto (183 mg, 0,40 mmol) sintetizado en el Ejemplo 9 (9a) se disolvió en cloruro de metileno (4 ml), se añadió piridina (96 µl, 1,20 mmol) y anhídrido de ácido trifluorometanosulfónico (0,10 ml, 0,60 mmol) y después se agitó la mezcla a 0 ºC durante 20 minutos. Después se añadió agua (10 ml) a 0 ºC y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno,

25 la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (10 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (92 mg, rendimiento del 50 %) en forma de aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,25-4,20 (4H, m), 4,25-4,75 (3H, m),

30 5,10-5,60 (5H, m), 7,32-7,46 (12H, m), 7,59 (1H, t, J=7,4 Hz), 7,99 (2H, d, J=8,8 Hz); EM (FAB) m/z: 462 (M+H)+.

(9c) (2R,3R,4R)-N-Benciloxicarbonil-2-benciloximetil-4-fluoro-pirrolidina

El compuesto (980 mg, 2,12 mmol) sintetizado en el Ejemplo 9 (9b) se disolvió en 1,2dimetoxietano (20 ml) y se añadió trifluoruro de dietilaminoazufre (0,84 ml, 6,36 mmol) a -20 ºC. La temperatura de la mezcla se elevó gradualmente y la mezcla se agitó a 60 ºC durante 1 hora. Después se añadió solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio a 0 ºC hasta que no hubo formación de espuma, la mezcla se extrajo con acetato de etilo y la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1, V/V), obteniéndose un aceite amarillo pálido (545). El aceite amarillo pálido obtenido de este modo (545 mg) se disolvió en metanol (10 ml) y carbonato de potasio (50 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 20 minutos. Después de retirar el disolvente por destilación a presión reducida, se añadió agua (20 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica después se lavó con salmuera saturada (20 ml). Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (263 mg, rendimiento del 34 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,10-4,20 (4H, m), 4,25-4,75 (3H, m), 4,80-5,20 (5H, m), 7,307,45 (10H, m); EM (FAB) m/z: 360 (M+H)+.

(9d) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-N-benciloxicarbonil-2-benciloximetil-4-fluoropirrolidin-3-ilo

El compuesto (657 mg, 0,76 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1f) se disolvió en cloruro de metileno (12 ml) y tricloroacetonitrilo (0,38 ml, 3,8 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (11 µl, 76 µmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (767 mg, 100 %) de aceite incoloro. El compuesto (263 mg, 0,73 mmol) sintetizado en el Ejemplo 9 (9c) se disolvió en dietil éter (12 ml) y se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (13 µl, 73 µmol) en atmósfera de nitrógeno. Se añadió una solución de imidato en dietil éter (8 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después se añadió trietilamina (20 µl, 146 µmol) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (20 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 4:1, V/V), obteniéndose el isómero α del compuesto deseado del epígrafe (109 mg, 12 %) y su isómero β (52 mg, 6 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,09 (3H, d, J=4,2 Hz), 3,00-5,60 (35H, m), 7,10-7,40 (40H, m); EM (FAB) m/z: 1209 (M+H)+.

(9e) 4-O-(6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-fluoro-2hidroximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (109 mg, 90,2 µmol) sintetizado en el Ejemplo 9 (9d) se disolvió en solución en metanol de ácido clorhídrico al 1 % (5 ml), se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (55 mg) y se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 1 hora. Después se retiró el catalizador mediante filtración con celite, se añadió agua de amoniaco al 28 % (0,2 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se pasó a través de una columna de resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8) con agua (30 ml) y se pasó a través agua de amoniaco al 1 % (30 ml). El agua de amoniaco que contenía el compuesto deseado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua 5:2:1-1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (26 mg, 65 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δ 1,18 (3H, d, J=5,9 Hz), 2,98-3,16 (4H, m), 3,47-3,77 (12H, m), 4,11 (1H, dd, J=4,9, 20,5 Hz), 5,02 (1H, m), 5,23 (1H, m); MS (FAB) m/z: 444 (M+H)+.

<Ejemplo 10>

4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-fluorometilpirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-119)

imagen1

(10a) (2R,3R,4R)-3-Benzoiloxi-N-benciloxicarbonil-2-fluorometil-4-hidroxi-pirrolidina

El compuesto (257 mg, 0,69 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1h) se disolvió en 1,2dimetoxietano (20 ml) y se añadió trifluoruro de dietilaminoazufre (0,84 ml, 0,83 mmol) a -20 ºC. La temperatura de la mezcla se elevó gradualmente y la mezcla se agitó a 60 ºC durante 1 hora. Después se añadió solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio a 0 ºC hasta que no hubo formación de espuma, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (15 ml) y la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (15 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V), obteniéndose un aceite incoloro (113 mg, 44 %)). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,50-4,2 (4H, m), 4,50-5,55 (3H, m), 5,40-5,60 (2H, m), 7,207,50 (7H, m), 7,60 (1H, m), 8,00-8,10 (2H, m); EM (FAB) m/z: 374 (M+H)+.

(10b) (2R,3R,4S)-3-Benzoiloxi-N-benciloxicarbonil-4-benciloxi-2-fluorometil-pirrolidina

El compuesto (344 mg, 0,92 mmol) sintetizado en el Ejemplo 10 (10a) se disolvió en cloruro de metileno:ciclohexano (1:2, 10 ml), se añadió tricloroacetoimidato de bencilo (0,68 ml, 3,68 mmol) y ácido trifluorometanosulfónico (16 µl, 0,18 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 4 horas. Después se añadió hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (1 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se diluyó con acetato de etilo (20 ml), la mezcla se lavó con agua (20 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 8:1-5:1, V/V), obteniéndose un aceite incoloro (307 mg, 68 %)). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,50-5,25 (7H, m), 5,50-5,75 (4H, m), 7,20-7,50 (12H, m), 7,60 (1H, m), 8,00-8,10 (2H, m); EM (FAB) m/z: 464 (M+H)+.

(10c) (2R,3R,4S)-N-Benciloxicarbonil-4-benciloxi-2-fluorometil-pirrolidina

El compuesto (307 mg, 0,66 mmol) sintetizado en el Ejemplo 10 (10b) se disolvió en metanol (6 ml), se añadió metóxido de sodio (27 mg, 0,20 mol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Después de retirar el metanol por destilación a presión reducida, se añadió agua (15 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (15 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (15 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente mediante destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (176 mg, rendimiento del 74 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,35-4,80 (7H, m), 5,50-5,75 (4H, m), 7,20-7,50 (10H, m); EM (FAB) m/z: 360 (M+H)+.

(10d) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-N-benciloxicarbonil-4-benciloxi-2-fluorometil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (398 mg, 0,46 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (8 ml) y tricloroacetonitrilo (0,23 ml, 2,30 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (7 µl, 0,05 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato de aceite incoloro. El compuesto (165 mg, 0,46 mmol) sintetizado en el Ejemplo 10 (10c) se disolvió en dietil éter (8 ml) y se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (8 µl, 46 µmol) en atmósfera de nitrógeno. Se añadió una solución de imidato en dietil éter (4 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Después se añadió trietilamina (13 µl, 92 µmol) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (15 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (15 ml) y salmuera saturada (15 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 4:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (53 mg, 10 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,10 (3H, d, J=4,2 Hz), 3,00-5,60 (35H, m), 7,10-7,40 (40H, m); EM (FAB) m/z: 1209 (M+H)+.

(10e) 4-O-(6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2fluorometil-pirrolidin-3-ilo

5 El compuesto (53 mg, 43,9 µmol) sintetizado en el Ejemplo 10 (10d) se disolvió en solución en metanol de ácido clorhídrico al 1 % (5 ml), se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (30 mg) y se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 3 horas. Después se retiró el catalizador mediante filtración con celite, se añadió agua de amoniaco al 28 % (0,2 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión

10 reducida y el residuo se pasó a través de una columna de resina de intercambio iónico con agua (30 ml) y se pasó a través agua de amoniaco al 1 % (30 ml). El agua de amoniaco que contenía el compuesto deseado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua 5:2:11:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,6 mg, 8 %) en forma de un

15 sólido incoloro. RMN de 1H (500 MHz, CDCl3): δ 1,18 (3H, d, J=4,0 Hz), 2,98-9,25 (16H, m), 4,50 (2H, m), 5,83 (1H, m); EM (FAB) m/z: 444 (M+H)+.

20 <Ejemplo 11> (referencia)

4-O-(6-Deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4S)-4-hidroxi-2(hidroximetil)pirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-1)

imagen1

25 (11a) (2R,3R,4S)-N-Benciloxicarbonil-4-benciloxi-2-benciloximetil-3-hidroxi-pirrolidina

El compuesto (815 mg, 1,77 mmol) sintetizado en el Ejemplo 9 (9b) se disolvió en diclorometano:ciclohexano (1:2, 45 ml), se añadió tricloroacetoimidato de bencilo (0,66 ml, 3,54 mmol) y ácido trifluorometanosulfónico (24 µl, 0,27 mmol) y después se agitó la mezcla a 30 temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después se añadió solución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio (20 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se diluyó con

acetato de etilo (200 ml), la mezcla se lavó con agua (50 ml) y solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1, V/V), obteniéndose un aceite amarillo pálido (866 mg). El aceite amarillo pálido obtenido de este modo (866 mg) se disolvió en metanol (15 ml) y carbonato de potasio (65 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de retirar el disolvente por destilación a presión reducida, se añadió agua (20 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica después se lavó con salmuera saturada (20 ml). Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (233 mg, rendimiento del 30 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,35-4,25 (6H, m), 4,25-4,70 (4H, m), 5,00-5,30 (4H, m), 7,097,26 (15H, m); EM (FAB) m/z: 448 (M+H)+.

(11b) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-N-benciloxicarbonil-2-benciloximetil-4-benciloxipirrolidin-3-ilo

El compuesto (513 mg, 0,59 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1f) se disolvió en cloruro de metileno (10 ml) y tricloroacetonitrilo (0,3 ml, 2,95 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (9 µl, 0,06 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (447 mg, 75 %) de aceite incoloro. El compuesto (233 mg, 0,52 mmol) sintetizado en el Ejemplo 11 (11a) se disolvió en dietil éter (10 ml) y se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (9 µl, 59 µmol) en atmósfera de nitrógeno. Se añadió una solución de imidato en dietil éter (5 ml) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después se añadió trietilamina (16 µl, 118 µmol) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (20 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 5:1-4:1, V/V), obteniéndose el isómero α del compuesto deseado del epígrafe (58 mg, 8 %) y el isómero β (51

mg, 7 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,15 (3H, d, J=5,6 Hz), 3,10-5,20 (36H, m), 1,15 (1H, d, J=6,3 Hz), 7,20-7,39 (45H, m); EM (FAB) m/z: 1297 (M+H)+.

5

(11c) 4-O-(6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4S)-4-hidroxi-2hidroximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (58 mg, 44,7 µmol) sintetizado en el Ejemplo 11 (10b) se disolvió en solución en

10 metanol de ácido clorhídrico al 1 % (5 ml), se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (30 mg) y se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 1,5 horas. Después se retiró el catalizador mediante filtración con celite, se añadió agua de amoniaco al 28 % (0,2 ml) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se pasó a través de una columna de resina de intercambio iónico (Dowex

15 50w x 8) con agua (30 ml) y se pasó a través agua de amoniaco al 1 % (30 ml). El agua de amoniaco que contenía el compuesto deseado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua 5:2:1-1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (13 mg, 68 %) en forma de un sólido incoloro.

20 RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,19 (3H, d, J=4,1 Hz), 2,80-4,60 (17H, m), 5,00 (1H, d, J=3,6 Hz), 5,24 (1H, d, J=3,0 Hz); EM (FAB) m/z: 442 (M+H)+.

<Ejemplo 12>

25 4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-2-hidroximetil-3hidroximetil-pirrolidin-4-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-556)

imagen1

(12a) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido 30 de (2R,3R,4R)-N-benciloxicarbonil-2-dibenciloximetil-3-hidroxipirrolidin-4-ilo

El compuesto (607 mg, 0,70 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (10 ml) y tricloroacetonitrilo (500 µl, 4,98 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (2 gotas) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 40 horas. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (630 mg, 89 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (323 mg, 0,700 mmol) sintetizado en el Ejemplo 9 (9a) se disolvió en dietil éter (10 ml) y se añadió imidato (630 mg, 0,623 mmol). Se añadió gota a gota trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (6,3 µl, 34,8 µmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Después se añadió trietilamina (4 gotas) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 6:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (610 mg, 75 %) en forma de un aceite amarillo pálido. A continuación, el aceite amarillo pálido (610 mg, 0,465 mmol) se disolvió en metanol (10 ml), se añadió solución acuosa de carbonato de potasio (1 M, 1 ml, 1 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (280 mg, rendimiento del 50 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,19 (3H, d, J=5,8 Hz), 2,83 (1H, s ancho), 3,12 (1H, t, J=9,3 Hz), 3,17-3,23 (1H, m), 3,29-3,37 (2H, m), 3,39-3,45 (2H, m), 3,51 (1H, dd, J=9,76, 2,93 Hz), 3,60 (1H, t ancho, J=7,8 Hz), 3,72-4,01 (7H, m), 4,27-4,56 (6H, m), 4,60-4,63 (2H, m), 4,73-4,75 (4H, m ancho), 4,78 (1H, d, J=10,75 Hz), 4,85 (1H, d, J=10,74 Hz), 4,87 (1H, d, J=9,77 Hz), 4,92 (1H, d, J=2,93 Hz), 5,01-5,12 (3H, m), 7,21-7,34 (38H, m), 7,43 (2H, d, J=6,83 Hz); EM (FAB) m/z: 1207 (M+H)+.

(12b) 4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-2-hidroximetil-3hidroxi-pirrolidin-4-ilo

El compuesto (90 mg, 74,6 µmol) sintetizado en el Ejemplo 12 (12a) se disolvió en metanol (10 ml), se añadió ácido clorhídrico (140 µl) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (90 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 2 horas. Después de filtrar con celite, se añadió agua de amoniaco (5 %) hasta que el pH se tornó neutro. Después de retirar el disolvente por destilación a presión reducida, se purificó el residuo mediante columna de intercambio iónico (Dowex 50W x 8) (agua – agua de amoniaco al 5 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (26 mg, rendimiento del 79 %) en forma de un sólido incoloro.

5 RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,32 (3H, d, J=5,8 Hz), 3,17-3,22 (2H, m), 3,30-3,38 (2H, m), 3,44-3,55 (2H, m), 3,60-3,64 (2H, m), 3,74-3,86 (6H, m), 3,92 (1H, d ancho, J=11,72 Hz), 4,13 (1H, s ancho), 4,24 (1H, s ancho), 4,48 (1H, d, J=7,81 Hz), 5,11 (1H, d, J=2,93 Hz); EM (FAB) m/z: 442 (M+H)+.

10 <Ejemplo 13>

4-O-(6-Deoxi-α-D-glucopiranosil)-β-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetilpirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-1)

imagen1

15 La forma del compuesto (60 mg, 46,3 µmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1j) se disolvió en metanol (4 ml) y se añadió ácido clorhídrico (56 µl) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (60 mg) y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. Después se filtró con celite, se añadió agua de amoniaco al 18 % (3 gotas) y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó mediante columna

20 de resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8)(agua – agua de amoniaco al 5 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 3:2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (10 mg, rendimiento del 49 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,29 (3H, d, J=5,8 Hz), 2,93 (1H, dd, J=11,7, 3,6 Hz), 3,15-3,35

25 (4H, m), 3,51-3,65 (5H, m), 3,74-3,80 (5H, m), 3,93-4,00 (2H, m), 4,40 (1H, s ancho), 4,56 (1H, d, J=7,3 Hz), 5,34 (1H, s ancho); EM (FAB) m/z: 464 (M+Na)+, 442 (M+H)+.

<Ejemplo 14>

30

4-O-(6-Deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R,2S,3R,4R,5R)-1-amino-2,3dihidroxi-5-hidroximetilciclopent-4-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 5-1)

imagen1

(14a) 4-O-Benzoil-2,3-di-O-bencil-6-O-p-toluenosulfonil-α-D-glucopiranósido de metilo

5

Se disolvió 2,3-di-O-bencil-6-O-p-toluenosulfonil-α-D-glucopiranósido de metilo (J. Org. Chem., 2001, 66, 5965-5975) (163,9 g, 310 mmol) en cloruro de metileno (1,5 l) y se añadió 4dimetilaminopiridina (43,5 g, 352 mmol) y trietilamina (49,0 ml, 352 mmol). Se añadió gota a gota cloruro de benzoílo (43,2 ml, 372 mmol) y la mezcla se agitó a 0 ºC durante 1 hora. 10 Después se añadió a la mezcla de reacción ácido clorhídrico diluido (1 N, 500 ml) y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (1 l), la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (1 l) y salmuera saturada (1 l), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 1:1, V/V),

15 obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (196 g, rendimiento del 99 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,34 (3H, s), 3,40 (3H, s), 3,58 (1H, dd, J=9,3, 3,4 Hz), 3,984,10 (4H, m), 4,57-4,65 (3H, m), 4,79 (1H, d, J=10,8 Hz), 5,06 (1H, dd, J=9,8, 9,8 Hz), 7,087,10 (5H, m), 7,18 (2H, d, J=7,8 Hz), 7,29-7,35 (5H, m), 7,41-7,45 (2H, m), 7,57-7,61 (1H, m),

20 7,67 (2H, d, J=7,8 Hz), 7,89 (2H, d, J=8,8 Hz); EM (FAB) m/z: 633 (M+H)+.

(14b) 4-O-Benzoil-2,3-di-O-bencil-6-deoxi-6-yodo-α-D-glucopiranósido de metilo

25 El compuesto (196 g, 310 mmol) sintetizado en el Ejemplo 14 (14a) se disolvió en tolueno (2 l), se añadió yoduro de sodio (235 g, 1,57 mmol) y 18-corona-6-éter (16,6 g, 62,8 mmol) y después se agitó la mezcla a 100 ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró y el producto filtrado se lavó con tolueno. El filtrado y el líquido de lavado se lavaron con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado

(1 l) y salmuera saturada (1 l), se secaron con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida, obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (181 g, rendimiento del 99 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,12 (1H, dd, J=11,0, 8,8 Hz), 3,29 (1H, dd, J=11,0, 2,2 Hz), 3,51 (3H, s), 3,64 (1H, dd, J=9,6, 3,7 Hz), 3,82-3,89 (1H, m), 4,06 (1H, dd, J=9,6, 8,8 Hz), 4,604,68 (3H, m), 4,82 (1H, d, J=11,0 Hz), 4,82 (1H, d, J=12,8 Hz), 5,06 (1H, dd, J=9,5, 9,5 Hz), 7,08-7,10 (5H, m), 7,29-7,38 (5H, m), 7,42-7,47 (2H, m), 7,57-7,61 (1H, m), 7,98 (2H, d, J=8,0 Hz); EM (FAB) m/z: 589 (M+H)+.

(14c) Oxima de 4-O-benzoil-2,3-di-O-bencil-5,6-dideoxi-D-xilo-hex-5-enosa

El compuesto (181 g, 307 mmol) sintetizado en el Ejemplo 14 (14b) se disolvió en isopropanol (1,5 l), se añadió agua destilada (50 ml) y polvo de cinc (180 g) lavado con ácido clorhídrico diluido y se agitó la mezcla a 100 ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se sometió a filtración con celite, el producto filtrado se lavó con etanol y el filtrado y el líquido de lavado se retiraron por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en etanol (500 ml), se añadió clorhidrato de hidroxilamina (42,7 g, 615 mmol) y piridina (49,7 ml, 615 mmol) y después la mezcla se agitó a 80 ºC durante 40 minutos. Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (126 g, rendimiento del 92 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,83 (0,7H, dd, J=5,8, 4,9 Hz), 3,99 (0,3H, dd, J=6,2, 3,9 Hz), 4,23 (0,7H, dd, J=7,8, 4,9 Hz), 4,42 (1H, dd, J=11,8, 3,9 Hz), 4,65 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,68-4,76 (3H, m), 4,97 (0,3H, dd, J=5,8, 3,9 Hz), 5,23 (1H, dd, J=10,7, 5,9 Hz), 5,31-5,37 (1H, m), 5,785,94 (2H, m), 7,20-7,38 (9H, m), 7,40-7,48 (3H, m), 7,53-7,59 (1H, m), 8,00-8,07 (2H, m); EM (FAB) m/z: 446 (M+H)+.

(14d) (3aR,4R,5R,6S,6aR)-4-Benzoiloxi-5,6-dibenciloxihexahidro-ciclopenta[c]isoxasol

El compuesto (126 g, 282 mmol) sintetizado en el Ejemplo 14 (14c) se disolvió en tolueno (800 ml) y la mezcla se agitó a 120 ºC durante 8 horas. El disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (59,7 g, rendimiento del 48 %) en forma de un sólido incoloro.

RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,83-2,91 (1H, m), 3,45-3,60 (1H, m), 3,89-3,95 (2H, m), 4,114,18 (1H, m), 4,55 (1H, m), 4,75-4,87 (4H, m), 5,01 (1H, dd, J=7,8, 6,8 Hz), 5,09-5,13 (1H, m), 7,22-7,40 (10H, m), 7,43-7,47 (2H, m), 7,57-7,61 (1H, m), 7,97-8,00 (2H, m); EM (FAB) m/z: 446 (M+H)+.

(14e) (3aR,4R,5S,6S,6aR)-1-Benciloxicarbonil-5,6-dibenciloxi-4-hidroxi-hexahidrociclopenta[c]isoxazol

El compuesto (59,7 g, 134 mmol) sintetizado en el Ejemplo 14 (14d) se disolvió en metanol (1 l), se añadió metóxido de sodio (10 ml, 49 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 horas. Después se añadió solución acuosa saturada de cloruro de amonio (500 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (1,5 l) y la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (50 ml). Se añadió a la capa orgánica a 0 ºC hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (500 ml) y oxicloroformiato de bencilo (22,9 ml, 160 mmol) y la mezcla se agitó a 0 ºC durante 1 hora. Después, la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (500 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (61,3 g, rendimiento del 96 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,30 (1H, d ancho, J=3,7 Hz, OH), 2,91 (1H, ddd, J=8,9, 8,9, 5,7 Hz, H-3a), 3,58 (1H, dd, J=9,0, 5,7 Hz, H-3), 3,73 (1H, dd, J=8,6, 8,4 Hz, H-5), 3,82 (1H, ddd, J=8,9, 8,6, 3,7 Hz, H-4), 3,84 (1H, dd, J=8,4, 5,6 Hz, H-6), 3,98 (1H, d, J=9,0 Hz, H-3), 4,54 (1H, d, J=11,3 Hz), 4,54 (1H, dd, J=8,9, 5,6 Hz, H-6a), 4,63 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,84 (1H, d, J=11,3 Hz), 4,87 (1H, d, J=11,7 Hz), 5,20 (1H, d, J=12,1 Hz), 5,27 (1H, d, J=12,1 Hz), 7,23-7,40 (15H, m). EM (FAB) m/z: 476 (M+H)+.

(14f) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(6-deoxi-2,3,4-tri-O-bencil-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (3aR,4R,5R,6S,6aR)-1-benciloxicarbonil-5,6-dibenciloxi-hexahidro-ciclopenta[c]isoxazol-4-ilo

El compuesto (215 mg, 0,248 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1f) se disolvió en cloruro de metileno (5 ml) y tricloroacetonitrilo (460 µl, 4,61 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (2 gotas) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 40 horas. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina

al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (250 mg, 99 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (100 mg, 0,21 mmol) sintetizado en el Ejemplo 14 (14e) se disolvió en dietil éter (10 ml) y se añadió imidato (250 mg, 0,248 mmol). Se añadió gota a gota trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (3,8 µl, 0,021 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Después se añadió trietilamina (4 gotas) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (55 mg, 17 %) en forma de un aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,15 (3H, d, J=6,8 Hz), 3,01-3,12 (2H, m), 3,14 (1H, dd, J=9,8, 3,9 Hz), 3,50-3,62 (3H, m), 3,64-3,80 (2H, m), 3,80-3,96 (5H, m), 3,99-4,10 (2H, m), 4,43 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,47 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,50-4,62 (7H, m), 4,68-4,93 (8H, m), 5,06 (1H, d, J=11,7 Hz), 5,18-5,29 (3H, m), 5,61 (1H, d, J=3,9 Hz), 7,05-7,41 (45H, m); EM (FAB) m/z: 1324 (M+H)+.

(14g) 4-O-(6-deoxi-α -D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R,2S,3R,4R,5R)-1-amino2,3-dihidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo

El compuesto (53 mg, 40,4 µmol) sintetizado en el Ejemplo 14 (14f) se disolvió en metanol (10 ml), se añadió ácido clorhídrico (10 µl) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (53 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. Después de retirar el disolvente por destilación a presión reducida, se purificó el residuo mediante columna de intercambio iónico (Dowex 50W x 8) (agua – agua de amoniaco al 5 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (5 mg, rendimiento del 26 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,18 (3H, d, J=6,8 Hz), 2,00-2,08 (1H, m), 2,15-2,22 (1H, m), 3,03-3,09 (1H, m), 3,16-3,22 (1H, m), 3,45-3,57 (5H, m), 3,58-3,78 (8H, m), 3,81-3,89 (3H, m), 5,10 (1H, d, J=2,9 Hz), 5,23 (1H, d, J=2,9 Hz); EM (FAB) m/z: 472 (M+H)+.

<Ejemplo 15>

4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R,2S,3R,4R,5R)-1-amino-2,3dihidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 5-1)

imagen1

(15a) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(6-deoxi-2,3,4-tri-O-bencil-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (3aR,4R,5R,6S,6aR)-1-benciloxicarbonil-5,6-dibenciloxi-hexahidro-ciclopenta[c]isoxazol-4-ilo

El compuesto (1,0 g, 1,15 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (30 ml) y tricloroacetonitrilo (460 µl, 4,61 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (2 gotas) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 40 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (970 mg, 84 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (508 mg, 1,06 mmol) sintetizado en el Ejemplo 14 (14e) se disolvió en dietil éter (20 ml) y se añadió imidato (970 mg, 0,97 mmol). Se añadió gota a gota trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (17 µl, 0,097 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Después se añadió trietilamina (4 gotas) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (125 mg, 9 %) en forma de un aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,22 (3H, d, J=6,8 Hz), 2,81-2,87 (1H, m), 3,15 (1H, dd, J=9,8, 8,7 Hz), 3,19-3,24 (1H, m), 3,28-3,36 (2H, m), 3,40-3,45 (1H, m), 3,52 (1H, dd, J=8,8, 3,9 Hz), 3,55-3,59 (1H, m), 3,75 (1H, dd, J=10,7, 3,9 Hz), 3,79-3,84 (2H, m), 3,86-3,91 (1H, m), 3,934,01 (2H, m), 4,31 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,35 (1H, d, J=7,8 Hz), 4,50 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,524,59 (2H, m), 4,60-4,64 (3H, m), 4,70-4,87 (10H, m), 4,89 (1H, d, J=12,7 Hz), 5,00 (1H, d, J=10,7 Hz), 5,07 (1H, d, J=3,9 Hz), 5,21 (1H, d, J=11,7 Hz), 5,28 (1H, d, J= 12,7 Hz), 7,10-7,43 (45H, m); EM (FAB) m/z: 1324 (M+H)+.

(15b) 4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R, 2S, 3R, 4R, 5R)-1-amino2,3-dihidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo El compuesto (115 mg, 86,8 µmol) sintetizado en el Ejemplo 15 (15a) se disolvió en metanol (2,0 ml) y acetato de etilo (1 ml), se añadió ácido clorhídrico (10 µl) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (115 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. Después de retirar el disolvente por destilación a presión reducida,

5 se purificó el residuo mediante columna de intercambio iónico (Dowex 50W x 8) (agua – agua de amoniaco al 5 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (30 mg, rendimiento del 73 %) en forma de un material amorfo incoloro. [ α ]D20 +60,9 (c 0,11, H2O);

10 RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,21 (3H, d, J=6,8 Hz), 2,17-2,25 (1H, m), 3,05-3,10 (1H, m), 3,18-3,27 (2H, m), 3,30-3,92 (14H, m), 4,38 (1H, d, J=7,8 Hz), 5,08-5,10 (1H, m); EM (FAB) m/z: 472 (M+H)+.

<Ejemplo 16>

15 4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R,2S,3R,4R,5R)-1-(2-hidroxi-1hidroximetil-etilamino)-2,3-dihidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo (Compuesto de ejemplo Nº 522)

imagen1

20 (16a) (3aR,4R,5R,6S,6aR)-4-Benzoiloxi-5,6-dibenciloxi-1-(1,3-dihidroxiprop-2-il)-hexahidrociclopenta[c]isoxazol

El compuesto (3,07 g, 6,89 mmol) sintetizado en el Ejemplo 14 (14d) se disolvió en metanol (10

ml), se añadió tetrahidrofurano (10 ml) y 1,3-dihidroxiacetona (1,86 g, 20,7 mmol) y ácido 25 acético (1 ml) y después se agitó la mezcla a 70 ºC durante 30 minutos. Se añadió

cianoborohidruro de sodio (1,30 g, 20,67 mmol) y la mezcla se agitó a 70 ºC durante 10 horas.

El disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando

cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (cloruro de metileno:metanol, 20:1, V/V),

obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,20 g, rendimiento del 33 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,35 (1H, dd, J=6,8, 4, Hz), 2,39 (1H, t, J=5,9 Hz), 2,77-2,82 (1H, m), 2,93-3,00 (1H, m), 3,74-3,84 (3H, m), 3,88-3,94 (1H, m), 3,96-4,08 (3H, m), 4,21-4,26 (2H, m), 4,74-4,86 (4H, m), 5,05 (1H, d, J=7,8, 5,9 Hz), 7,26-7,38 (10H, m), 7,45-7,50 (2H, m), 7,59-7,64 (1H, m), 7,98-8,02 (2H, m); EM (FAB) m/z: 520 (M+H)+.

(16b) (3aR,4R,5S,6S,6aR)-5,6-Dibenciloxi-1-(2,2-dimetil-[1,3]dioxan-5-il)-4-hidroxi-hexahidrociclopenta[c]isoxazol

El compuesto (1,20 g, 2,31 mmol) sintetizado en el Ejemplo 16 (16a) se disolvió en acetona (30 ml), se añadió 2,2-dimetoxipropano (2,27 ml, 18,5 mmol) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (660 mg, 3,47 mmol) y después la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se añadió solución acuosa saturada de cloruro de amonio (50 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml) y la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (50 ml). El disolvente se eliminó por destilación a la presión reducida y el residuo se disolvió en metanol. Se añadió metóxido de sodio (0,4 ml, 1,96 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Después se añadió cloruro de amonio acuoso saturado (50 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (5º0 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (840 mg, rendimiento del 80 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,39 (3H, s), 1,47 (3H, s), 2,06 (1H, d, J=3,9 Hz), 2,85-2,96 (2H, m), 3,49 (1H, dd, J=9,8, 6,8 Hz), 3,67-3,72 (1H, m), 3,75-3,85 (6H, m), 3,89-3,97 (2H, m), 4,67 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,68 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,76 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,85 (1H, d, J=11,7 Hz), 7,26-7,38 (10H, m); EM (FAB) m/z 456: (M+H)+

(16c) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(6-deoxi-2,3,9-tri-O-bencil-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (3aR,4R,5S,6S,6aR)-5,6-dibenciloxi-1-(2,2-dimetil-[1,3]dioxan-5-il)-hexahidrociclopenta[c]isoxazol-4-ilo

El compuesto (600 mg, 0,692 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (20 ml) y tricloroacetonitrilo (277 µl, 2,76 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (2 gotas) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 40 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (550 mg, 80 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (230 mg, 0,501 mmol) sintetizado en el Ejemplo 16 (16b) se disolvió en dietil éter (10 ml) y se añadió imidato (550 mg, 0,551 mmol). Se añadió gota a gota trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (45 µl, 0,250 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Después se añadió trietilamina (4 gotas) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (140 mg, rendimiento del 20 %) en forma de aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,22 (3H, d, J=5,8 Hz), 1,43 (3H, s), 1,49 (3H, s), 2,70-2,80 (2H, m), 3,11-3,17 (1H, m), 3,19-3,27 (1H, m), 3,30-3,54 (6H, m), 3,61-3,95 (12H, m), 4,34 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,38 (1H, d, J=7,3 Hz), 4,52 (1H, d, J=12,5 Hz), 4,58-4,73 (5H, m), 4,73-4,90 (8H, m), 5,00 (1H, d, J=3,7 Hz), 5,03 (1H, d, J=11,0 Hz), 7,17-7,38 (38H, m), 7,43-7,47 (2H, m). EM (FAB) m/z: 1304 (M+H)+.

(16d) 4-0-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R,2S,3R,4R,5R)-1-(2-hidroxi1-hidroximetiletilamino)-2,3-dihidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo

El compuesto (146 mg, 113 µmol) sintetizado en el Ejemplo 16 (16c) se disolvió en ácido acético (10 ml) y agua destilada (2,5 ml) y la mezcla se agitó a 50 ºC durante 1 hora. Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 1:1, V/V), obteniéndose diol (128 mg, 101 µmol) en forma de un cristal incoloro. El diol (118 mg, 93,3 µmol) se disolvió en metanol (20 ml) y acetato de etilo (1 ml), se añadió ácido clorhídrico (30 µl) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (118 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. Después de retirar el disolvente por destilación a presión reducida, se purificó el residuo mediante columna de intercambio iónico (Dowex 50W x 8) (agua – agua de amoniaco al 5 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (43 mg, rendimiento del 84 %) en forma

de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,32 (3H, d, J=6,8 Hz), 2,34-2,41 (1H, m), 2,88-2,94 (1H, m), 3,16-3,22 (1H, m), 3,29-3,38 (2H, m), 3,42-3,50 (1H, m), 3,49-3,97 (16H, m), 4,48 (1H, d, J=7,8 Hz), 5,18 (1H, d, J=7,8 Hz);

5 RMN de 13C (100 MHz, D2O) : δ 16,9, 44,0, 58,5, 58,7, 60,0, 60,1, 60,6, 61,3, 70,9, 71,3, 71,6, 72,2, 73,6, 75,0, 75,5, 79,1, 79,2, 80,5, 81,9, 97,8, 102,7; EM (FAB) m/z: 546 (M+H)+.

<Ejemplo 17> (referencia)

10

4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R,2S,3S,4R,5R)-1-amino-2-fluoro-3hidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 5-9)

imagen1

(17a) 2-Deoxi-2-fluoro-D-glucopiranósido de metilo

15

Se disolvió´1,3,4,6-tetra-O-acetil-2-deoxi-2-fluoro-β-D-glucopiranosa (Carbohydr. Res., 153, 1986, 168-170) (13,4 g, 38,3 mmol) en metanol (150 ml), se añadió Dowex 50w x 8 (19 g) y la mezcla se agitó a 80 ºC durante 12 horas. La mezcla de reacción se sometió a filtración con celite y el producto filtrado se lavó con metanol. El filtrado y el líquido de lavado se combinaron

20 y se retiraron por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (cloruro de metileno:metanol, 10:1-5:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (3,37 g, rendimiento del 45 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD): δ 3,32-3,36 (1H, m), 3,43 (1,5H, s), 3,52-3,64 (2H, m), 3,54

25 (1,5H, s), 3,65-3,70 (1H, m), 3,80-3,92 (2,5H, m), 4,16-4,29 (0,5H, m), 4,43 (0,5H, dd, J=7,8, 2,9 Hz), 4,88 (0,5H, d, J=3,9 Hz). EM (FAB) m/z: 197 (M+H)+.

(17b) 4,6-O-Bencilideno-2-deoxi-2-fluoro-D-glucopiranósido de metilo El compuesto (3,5 g, 17,9 mmol) sintetizado en el Ejemplo 17 (17a) se disolvió en dimetilformamida (70 ml), se añadió dimetilacetal de benzaldehído (13 ml, 25,0 mmol) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (170 mg, 0,892 mmol) y después la mezcla se agitó a 50 ºC durante 2 horas a presión reducida. Después se añadió trietilamina (2 ml) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (3,36 g, rendimiento del 66 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,42-3,58 (1H, m), 3,48 (2H, s), 3,60 (1H, s), 3,70-3,90 (1,33H, m), 3,98-4,08 (0,66H, m), 4,16-4,40 (2H, m), 4,48-4,54 (1H, m), 4,94 (0,66H, d, J=4,4 Hz), 5,025,06 (0,33H, m), 5,52-5,54 (1H, m), 7,36-7,41 (3H, m), 7,46-7,51 (2H, m); EM (FAB) m/z: 285 (M+H)+.

(17c) 4-O-Benzoil-3-O-bencil-2-deoxi-2-fluoro-6-O-p-toluenosulfonil-D-glucopiranósido de metilo

El compuesto (3,36 g, 11,8 mmol) sintetizado en el Ejemplo 17 (17b) se disolvió en dimetilformamida (50 ml) y se añadió hidruro de sodio (741 mg, 17,7 mmol) en atmósfera de nitrógeno y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se enfrió con hielo, se añadió bromuro de bencilo (1,68 ml, 14,1 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió solución de cloruro de amonio acuoso saturado (50 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (100 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. Se añadió al residuo ácido acético (16 ml) y agua destilada (4 ml) y la mezcla se agitó a 60 ºC durante 3 horas. El disolvente se retiró por destilación a presión reducida y la mezcla de reacción se destiló azeotrópicamente con tolueno. El residuo se disolvió en piridina (10 ml), se añadió cloruro de ácido p-toluenosulfónico (1,75 g, 9,20 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (101 mg, 0,83 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla de reacción se enfrío con hielo y se añadió ácido clorhídrico diluido (2 N, 80 ml). Después, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml), la capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en cloruro de metileno (40 ml) y 4-dimetilaminopiridina (1,28 g, 10,5 mmol), se añadieron cloruro de benzoílo (1,30 ml, 11,2 mmol) y trietilamina (1,46 ml, 10,5

mmol) con refrigeración por hielo y la mezcla se agitó a 0 ºC durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrío con hielo y se añadió ácido clorhídrico diluido (2 N, 80 ml). Después, la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (100 ml), la capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml) y salmuera saturada (100 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (4,16 g, rendimiento del 65 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,35 (3/2H, s), 2,36 (3/2H, s), 3,47 (3/2H, s), 3,55 (3/2H, s), 3,79-3,88 (1H, m), 4,01-4,15 (3H, m), 4,28-4,62 (3,5H, m), 4,77 (1H, dd, J=11,7, 5,1 Hz), 4,91 (0,5H, d, J=4,4 Hz), 5,05-5,12 (1H, m), 7,06-7,10 (5H, m), 7,18-7,22 (2H, m), 7,42-7,48 (2H, m), 7,58-7,65 (1H, m), 7,66-7,71 (2H, m), 7,89-7,93 (2H, m); EM (FAB) m/z: 545 (M+H)+.

(17d) 4-O-Benzoil-3-O-bencil-2,6-dideoxi-2-fluoro-6-yodo-D-glucopiranósido de metilo

El compuesto (3,83 g, 7,03 mmol) sintetizado en el Ejemplo 17 (17c) se disolvió en tolueno (120 ml), se añadió yoduro de sodio (5,27 g, 39,2 mmol) y 18-corona-6-éter (370 mg, 1,40 mmol) y después se agitó la mezcla a 100 ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró y el producto filtrado se lavó con tolueno. El filtrado y el líquido de lavado se lavaron con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (100 ml) y salmuera saturada (100 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (3,38 g, rendimiento del 96 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,12-3,21 (1H, m), 3,27-3,32 (1H, m), 3,57-3,62 (1H, m), 3,58 (3/2H, s), 3,65 (3/2H, s), 3,82-3,91 (1H, m), 4,38-4,68 (5/2H, m), 4,79 (1H, dd, J=11,7, 6,8 Hz), 4,99 (1/2H, dd, J=3,9 Hz), 5,06-5,13 (1H, m), 7,07-7,18 (5H, m), 7,43-7,48 (2H, m), 7,59-7,64 (1H, m), 7,95-8,00 (2H, m); EM (FAB) m/z: 501 (M+H)+.

(17e) Oxima de 4-O-benzoil-3-O-bencil-2-fluoro-2,5,6-trideoxi-D-xilo-hex-5-enosa

El compuesto (3,37 g, 6,74 mmol) sintetizado en el Ejemplo 17 (17d) se disolvió en isopropanol

(40 ml) y agua destilada (1,3 ml), se añadió polvo de cinc (4 g) lavado con ácido clorhídrico diluido y se agitó la mezcla a 100 ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se sometió a filtración con celite, el producto filtrado se lavó con etanol y el filtrado y el líquido de lavado se retiraron por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en etanol (80 ml), se añadió clorhidrato de hidroxilamina (1,18 g, 17,1 mmol) y piridina (1,06 ml, 17,1 mmol) y después la mezcla se agitó a 60 ºC durante 40 minutos. Después, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,31 g, rendimiento del 54 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,87-3,94 (0,7H, m), 4,13-4,22 (0,3H, m), 4,64-4,82 (2H, m), 5,22 (0,7H, ddd, J=46,9, 6,8, 4,9 Hz), 5,34-5,55 (2H, m), 5,75-5,88 (1,3H, m), 5,98-6,07 (1H, m), 7,24-7,62 (8H, m), 8,03-8,08 (2H, m); EM (FAB) m/z: 358 (M+H)+.

(17f) (3aR,4R,5S,6S,6aR)-4-Benciloxi-5-benciloxi-6-fluoro-hexahidro-ciclopenta[c]isoxazol

El compuesto (1,31 g, 3,66 mmol) sintetizado en el Ejemplo 17 (17e) se disolvió en tolueno (30 ml) y la mezcla se agitó a 120 ºC durante 8 horas. El disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (965 mg, rendimiento del 74 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,91-2,98 (1H, m), 3,50-3,58 (1H, m), 4,00-4,10 (1H, m), 4,214,28 (1H, m), 4,54 (1H, d ancho, J=7,8 Hz), 4,72 (1H, d, J=12,7 Hz), 4,83 (1H, d, J=12,7 Hz), 4,84 (1H, ddd, J=52,7, 7,8, 5,8 Hz), 4,98-5,02 (1H, m), 5,11-5,15 (1H, m), 7,28-7,36 (5H, m), 7,45-7,49 (2H, m), 7,59-7,63 (1H, m), 7,97-8,00 (2H, m); EM (FAB) m/z 358: (M+H)+

(17g) (3aR,4R,5S,6S,6aR)-5-Benciloxi-1-benciloxicarbonil-6-fluoro-4-hidroxi-hexahidrociclopenta[c]isoxazol

El compuesto (950 mg, 2,66 mmol) sintetizado en el Ejemplo 17 (17f) se disolvió en metanol (10 ml), se añadió metóxido de sodio (270 µl, 1,30 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 horas. Después se añadió solución de cloruro de amonio acuoso saturado (50 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml), la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de

sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 ml), se añadió hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml) y oxocloroformiato de metilo (570 µl, 4,00 mmol) a 0 ºC y después se agitó la mezcla a 0 ºC durante 1 hora. La capa orgánica se lavó con salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente mediante destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,00 g, rendimiento del 97 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,29 (1H, d ancho, J=3,3 Hz, OH), 2,92-2,99 (1H, m, H-3a), 3,60 (1H, dd, J=9,0, 5,8 Hz, H-3), 3,82-3,91 (2H, m, H-5, H-4), 3,98 (1H, d, J=8,8 Hz, H-3), 4,61 (1H, d, J=12,7 Hz, CH2Ph), 4,62-4,70 (1H, m, H-6a), 4,72-4,76 (1/2H, m, H-6), 4,84 (1H, d, J=12,7 Hz, CH2Ph), 4,82-4,86 (1/2H, m, H-6), 5,21 (2H, s), 7,23-7,40 (10H, m); EM (FAB) m/z: 388 (M+H)+.

(17h) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(6-deoxi-2,3,4-tri-O-bencil-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (3aR,4R,5S,6S,6aR)-5-benciloxi-1-benciloxicarbonil-6-fluoro-hexahidrociclopenta[c]isoxazol-4-ilo

El compuesto (840 mg, 0,969 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (10 ml) y tricloroacetonitrilo (460 µl, 4,61 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (2 gotas) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 40 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (830 mg, 85 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (300 mg, 0,756 mmol) sintetizado en el Ejemplo 17 (17g) se disolvió en dietil éter (15 ml) y se añadió imidato (830 mg, 0,832 mmol). Se añadió gota a gota trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (13 µl, 0,0756 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Después se añadió trietilamina (4 gotas) a la mezcla de reacción y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (86 mg, 9 %) en forma de un aceite amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 1,20 (3H, d, J=5,9 Hz), 2,87-2,94 (1H, m), 3,10-3,16 (1H, m), 3,19-3,24 (1H, m), 3,28-3,38 (3H, m), 3,42-3,46 (1H, m), 3,51 (1H, dd, J=9,8, 3,9 Hz), 3,55-3,59 (1H, m), 3,74 (1H, dd, J=10,7, 3,9 Hz), 3,79-3,84 (2H, m), 3,84-3,89 (1H, m), 3,94 (1H, d, J=9,8

Hz), 4,00-4,06 (1H, m), 4,31 (1H, d, J=12,7 Hz), 4,35 (1H, d, J=7,8 Hz), 4,49 (1H, d, J=12,7 Hz), 4,58-4,88 (13H, m), 5,01 (1H, d, J=10,8 Hz), 5,05 (1H, d, J=3,9 Hz), 5,18-5,26 (2H, m), 7,157,43 (40H, m); EM (FAB) m/z: 1236 (M+H)+.

(17i) 4-O-(6-Deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (1R,2S,3S,4R,5R)-1-amino-2fluoro-3-hidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo

El compuesto (85 mg, 68,8 µmol) sintetizado en el Ejemplo 17 (17h) se disolvió en metanol (20 ml) y acetato de etilo (1 ml), se añadió ácido clorhídrico (30 µl) e hidróxido de paladio al 20 %carbono (85 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. Después de filtrar con celite, se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo mediante columna de intercambio iónico (Dowex 50W x 8) (agua – agua de amoniaco al 5 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (28 mg, 86 %) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 1,21 (3H, d, J=5,9 Hz), 2,23-2,30 (1H, m), 3,04-3,10 (1H, m), 3,18-3,25 (2H, m), 3,28-3,61 (6H, m), 3,64-3,80 (5H, m), 3,86-3,91 (1H, m), 4,11-4,18 (1H, m), 4,37 (1H, d, J=8,8 Hz), 4,41-4,46 (1/2H, m), 4,52-4,57 (1/2H, m), 5,06-5,08 (1H, m); RMN de 13C (100 MHz, D2O): δ 16,9, 44,0, 58,5, 58,7, 60,0, 60,1, 60,6, 61,3, 70,9, 71,3, 71,6, 72,2, 73,6, 75,0, 75,5, 79,1, 79,2, 80,5, 81,9, 97,8, 102,7; EM (FAB) m/z: 474 (M+H)+.

<Ejemplo 18>

4-O-(6-Deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil3,4-dihidro-2H-pirrol-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 3-1)

imagen1

30 (18a) 4-Deoxi-3-O-formil-4-trifluoroacetamido-α-D-arabinósido de 1,2-O-bencilo

Se disolvió 4-deoxi-3-O-formil-4-trifluoroacetamido-D-arabinósido de 2-O-bencilo (Chem. Pharm. Bull., 1991, 39, 2807-2812) (0,80 g, 2,20 mmol) en cloruro de metileno (50 ml), se añadió tricloroacetoimidato de bencilo (0,82 ml, 4,40 mmol) y ácido trifluorometanosulfónico (40 µl, 0,22 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después se añadió hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (30 ml) a la mezcla de reacción a 0 ºC y la mezcla se diluyó con acetato de etilo (100 ml), la mezcla se lavó con agua (50 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1, V/V), obteniendo el compuesto deseado del epígrafe (0,73 g, rendimiento del 74 %) en forma de material amorfo amarillo pálido. RMN de 1H (CDCl3) δ: 3,55 (1H, dd, J=12,5, 2,2 Hz), 3,63 (1H, dd, J=10,3, 3,7 Hz), 4,13 (1H, d, J=13,9 Hz), 4,50 (1H, d, J=11,0 Hz), 4,53 (1H, d, J=12,5 Hz), 4,61 (1H, d, J=11, Hz), 4,62 (1H, s ancho), 4,75 (1H, d, J=12,5 Hz), 4,90 (1H, d, J=2,9 Hz), 5,44 (1H, dd, J=10,3, 4,4 Hz), 6,69 (1H, d, J=7,33 Hz), 7,13-7,38 (10H, m), 8,00 (1H, s); EM (FAB) m/z: 476 (M+Na)+.

(18b) 4-Deoxi-4-trifluoroacetamido-α-D-arabinósido de 1,2-di-O-bencilo

El compuesto (0,73 g, 1,61 mmol) sintetizado en el Ejemplo 18 (18a) se disolvió en metanol (30 ml) y agua (5 ml), se añadió hidrogenocarbonato de potasio (1,00 g, 10,0 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 horas. Se añadió acetato de etilo (50 mL) y la capa orgánica se lavó con salmuera saturada (20 ml). Después se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1, V/V), obteniendo el compuesto deseado del epígrafe (205 mg, rendimiento del 41 %) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (CDCl3) δ: 2,84 (1H, d, J=2,2Hz), 3,44 (1H, dd, J=9,5, 2,9 Hz), 3,76 (1H, dd, J=12,5, 1,5 Hz), 3,92 (1H, dd, J=12,5, 1,5 Hz), 4,20-4,28 (2H, m), 4,47 (1H, d, J=11,7 Hz), 5,53 (2H, s), 4,72 (1H, d, J=12,5 Hz), 4,91 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,67 (1H, d ancho, J=5,86 Hz), 7,12-7,38 (10H, m); EM (FAB) m/z: 426 (M+H)+, 448 (M+Na)+.

(18c) 4-Deoxi-4-trifluoroacetamido-3-O-{2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2, 3, 4-tri-O-bencil-6-deoxi-β-D

glucopiranosil)-α-D-glucopiranosil}-α-D-arabinósido de 1,2-di-O-bencilo

El compuesto (0,70 g, 0,81 mmol) sintetizado en el Ejemplo 2 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (20 ml) y tricloroacetonitrilo (1,00 ml, 10,0 mmol), se añadieron 2 gotas de 1,8diazabiciclo[5.4.0]-7-undeceno y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (0,75 g, 92 %) de aceite incoloro. El compuesto (205 mg, 0,48 mmol) sintetizado en el Ejemplo 18 (18b) e imidato (0,75 g, 0,74 mmol) se disolvieron en dietil éter (30 ml), se añadió trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (8,7 µl, 0,074 mmol) en atmósfera de nitrógeno y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Después se añadió trietilamina (0,1 ml) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (30 ml) y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (20 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:dietil éter, 3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (185 mg, 31 %) y su isómero β (250 mg, 41 %) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (CDCl3) δ: 1,17 (3H, d, J=5,9 Hz), 3,12 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,19-3,25 (1H, m), 3,36 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,44-3,50 (2H, m), 3,54-3,64 (3H, m), 3,75 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,81-3,98 (4H, m), 4,19 (1H, dd, J=8,8, 4,4 Hz), 4,35-4,39 (3H, m), 4,45 (1H, d, J=11,7 Hz), 4,49-4,54 (3H, m), 4,59-4,61 (2H, m), 4,67-4,80 (6H, m), 4,84 (1H, d, J=11,0 Hz), 4,90 (1H, d, J=1,0 Hz), 4,94 (1H, d, J=11,7 Hz), 5,02 (1H, d, J=11,0 Hz), 5,18 (1H, d, J=3,7 Hz), 6,88 (1H, d ancho, J=7,3 Hz), 7,10-7,40 (40H, m); EM (FAB) m/z: 1296 (M+Na)+.

(18d) D-Arabinósido de 4-deoxi-4-trifluoroacetamido-3-O-{4-O-(6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-Dglucopiranosilo}

El compuesto (180 mg, 0,14 mmol) sintetizado en el Ejemplo 18 (18c) se disolvió en metanol (10 ml), se añadió hidróxido de paladio al 20 %-carbono (120 mg) y se agitó la mezcla en atmósfera de hidrógeno durante 3 horas. Después se retiró el catalizador por filtración con celite y se eliminó el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol, 4:1, V/V) obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (69 mg, rendimiento del 88,5%) en forma de

un sólido incoloro.

RMN de 1H (D2O) δ: 1,32 (3H, d, J=5,9 Hz), 3,19 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,30-3,34 (2H, m), 3,46 (1H, t, J=9,5 Hz), 3,52 (1H, t ancho, J=7,4 HZ), 3,59-3,67 (3H, m), 3,72-3,88 (3H, m), 3,97-4,07 (2H, m), 4,19-4,29 (1H, m), 4,48 (1H, d, J=8,0 Hz), 4,58-4,66 (2H, m), 5,24 (1H, s ancho); EM (FAB) m/z: 576 (M+Na)+.

5

(18e) 4-O-(6-Deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-Glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2

hidroximetil-3,4-dihidro-2H-pirrol-3-ilo

El compuesto (47 mg, 0,085 mmol) sintetizado en el Ejemplo 18 (18b) se disolvió en agua(10

10 ml), se añadió resina de intercambio iónico Dowex-1X4 (OH-) (3,0 g) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1,5 horas. La resina de intercambio iónico se eliminó y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (cloroformo:metanol:agua, 6:4:1, V/V), obteniendo el compuesto deseado del epígrafe (8,0 mg, rendimiento del 21,4 %) en forma de

15 material amorfo incoloro. RMN de 1H (D2O) δ: 1,32 (3H, d, J=5,9 Hz), 3,16-3,21 (1H, m), 3,31-3,33 (1H, m), 3,45-3,52 (2H, m), 3,63-3,69 (2H, m), 3,80-3,96 (5H, m), 4,08 (1H, s ancho), 4,25 (1H, d, J=4,9 Hz), 4,49 (1H, d, J=6,8 Hz), 4,94 (1H, d, J=4,9 Hz), 5,17 (1H, d, J=4,0 Hz), 7,68 (1H, s ancho); EM (FAB) m/z: 462 (M+Na)+.

20

<Ejemplo 19>

4-O-{4-O-(β-D-Glucopiranosil)-β-D-glucopiranosil}-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo

25 (Compuesto de ejemplificación Nº 1-547)

imagen1

(19a) 4-O-Acetil-2,3,6-tri-O-bencil-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-Nbenciloxicarbonil-2-benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

30 Se disolvió glucopiranósido de 4-O-acetil-2,3,6-tri-O-bencilo (Agric. Biol. Chem, 1986, 50, 22612272) (2,21 g, 4,49 mmol) en cloruro de metileno (45 ml), se añadió tricloroacetonitrilo (2,3 ml, 22,44 mmol) y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7-undeceno (65 µl, 0,44 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (2,06 g, 72,0%) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (2,00 g, 4,47 mmol) sintetizado en el Ejemplo 1 (1i) se disolvió en dietil éter (100 ml) y se añadió imidato (2,06 g, 3,23 mmol). Se añadió una solución de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (40 µl, 0,22 mmol) en dietil éter (2 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió trietilamina (50 µl) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (10 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo que contenía la mezcla α, β se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1, V/V) aislándose la forma α del compuesto deseado del epígrafe (1,93 g, 46,6 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 1,82 (3H, s), 3,20-5,20 (26H, m), 7,10-7,40 (30H, m); EM (FAB) m/z: 922 (M+H)+.

(19b) 2,3,6-Tri-O-bencil-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-N-benciloxicarbonil-2benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (1,57 g, 1,70 mmol) sintetizado en el Ejemplo 19 (19a) se disolvió en metanol (30 ml), se añadió carbonato de potasio (235 mg, 1,70 mol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (10 ml) y salmuera saturada (10 ml). Después, la capa orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (1,41 g, rendimiento del 94,0 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,40-5,20 (26H, m), 7,10-7,40 (30H, m); EM (FAB) m/z: 880 (M+H)+.

(19c) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-(2,3,4,6-tetra-O-bencil-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de

alilo

El compuesto (4,0 g, 10,46 mmol) sintetizado en el Ejemplos 2 (2a) se disolvió en piridina (30 ml), se añadió cloruro de benzoílo (12,1 ml, 104,24 mmol) con refrigeración por hielo y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 horas. La mezcla de reacción se vertió en solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % (20 ml) y acetato de etilo (20 ml), la capa orgánica se lavó con solución acuosa de ácido clorhídrico al 10 % (20 ml), solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio (20 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó con sulfato de sodio anhidro y después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 5:1-5:2, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (8,10 g, rendimiento del 70 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,71-4,27 (6H, m), 9,49-4,51 (1H, m), 4,58-4,63 (1H, m), 4,72 (1H, d, J=6,4Hz), 4,93-5,81 (10H, m), 7,17-8,11 (35H, m); EM (FAB) m/z: 1111 (M+H)+.

(19d) D-Glucopiranósido de 2,3,6-tri-O-benzoil-4-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoil-β-D-glucopiranosilo)

El compuesto (8,10 g, 7,29 mmol) sintetizado en el Ejemplo 19 (19c) se disolvió en metanol (75 ml), se añadió tetrahidrofurano (15 ml) y cloruro de paladio (II) (258 mg, 1,45 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 horas. Después se sometió la mezcla de reacción a filtración con celite y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 3:1-2:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (5,10 g, rendimiento del 66 %) en forma de un sólido amarillo pálido. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2,96-3,13 (1H, m), 3,79-3,92 (2H, m), 4,05-4,25 (2H, m), 4,334,40 (1H, m), 4,47-4,50 (1H, m), 4,60-4,63 (1H, m), 4,89-6,15 (7H, m), 7,21-8,01 (35H, m); EM (FAB) m/z: 1071 (M+H)+.

(19e) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-{2,3,6-tri-O-benzoil-4-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoil-β-Dglucopiranosil)-β-D-glucopiranosil}-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-Nbenciloxicarbonil-2-benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (414,4 mg, 0,39 mmol) sintetizado en el Ejemplo 19 (2f) se disolvió en cloruro de metileno (8 ml) y tricloroacetonitrilo (200 µl, 1,99 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7

undeceno (6 µl, 0,04 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 2:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (255,1 mg, 53,8 %) en forma de material amorfo incoloro. El compuesto (185,3 mg, 0,21 mmol) sintetizado en el Ejemplo 19 (19b) se disolvió en dietil éter (8 ml) y se añadió imidato (225,1 mg, 0,21 mmol). Se añadió una solución de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (38 µl, 0,21 mmol) en dietil éter (2 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió trietilamina (0,35 µl) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (10 ml). Después, la capa orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1-3:1, V/V), aislándose el compuesto deseado del epígrafe (295,8 mg, rendimiento del 72,9 %) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,20-5,60 (40H, m), 7,10-7,40 (65H, m); EM (FAB) m/z: 1932 (M+H)+.

(19f) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-{4-O-(β-D-glucopiranosil)-β-D-glucopiranosil}-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-N-benciloxicarbonil-2-benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (295,8 mg, 0,15 mmol) sintetizado en el Ejemplo 19 (19e) se disolvió en metanol (6 ml), se añadió carbonato de potasio (20 mg, 0,14 mol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (10 ml) y salmuera saturada (10 ml). La mezcla se neutralizó con metanol-ácido clorhídrico y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (cloruro de metileno:metanol, 30:1-20:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (100,7 mg, rendimiento del 55,8 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD): δ 3,20-5,60 (40H, m), 7,10-7,40 (30H, m); EM (FAB) m/z: 1204 (M+H)+.

(19g) 4-O-{4-O-(β-D-glucopiranosil)-β-D-glucopiranosil}-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (100,7 mg, 0,084 mmol) sintetizado en el Ejemplo 19 (19f) se disolvió en metanol (10 ml), se añadió ácido clorhídrico al 36 % (280 µl) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (100 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno 5 durante 4 horas. Después se filtró con celite, se añadió agua de amoniaco al 18 % (1 ml) y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó mediante columna de resina de intercambio iónico (Dowex 50w x 8) (agua – agua de amoniaco al 1 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 5:2:1-1:1:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (10,0

10 mg, rendimiento del 19,2 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 3,00-3,95 (25H, m), 4,38 (1H, d, J=8,1 Hz), 4,42 (1H, d, J=8,0 Hz), 5,00 (1H, d, J=2,6 Hz); EM (FAB) m/z: 620 (M+H)+.

15 <Ejemplo 20>

4-O-{4-O-(β-D-Glucopiranosil)-β-D-glucopiranosil}-α-D-galactopiranósido de (2R,3R,4R)-4hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo (Compuesto de ejemplificación Nº 1-547)

imagen1

20

(20a) 4-O-Acetil-2,3,6-tri-O-bencil-α-D-galactopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-Nbenciloxicarbonil-2-benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

Se disolvió D-galactopiranósido de 4-O-acetil-2,3,6-O-tri-bencilo (Agric. Biol. Chem, 1989, 62,

25 3549-3566) (1,60 g, 3,25 mmol) en cloruro de metileno (30 ml), se añadió tricloroacetonitrilo (1,6 ml, 15,96 mmol) y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7-undeceno (50 µl, 0,33 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y el residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose

30 imidato (1,37 g, 66 %) en forma de un aceite amarillo. El compuesto (0,96 g, 2,01 mmol)

sintetizado en el Ejemplo 1 (1i) se disolvió en dietil éter (50 ml) y se añadió imidato (1,37 g, 2,15 mmol). Se añadió una solución de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (20 µl, 0,11 mmol) en dietil éter (2 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió trietilamina (10 µl) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (10 ml). Después se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, el disolvente se retiró por destilación a presión reducida y el residuo que contenía la mezcla α, β se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 6:1-4:1, V/V), aislándose el isómero α del compuesto deseado del epígrafe (0,98 g, 50 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 2;02 (3H, s), 5,15-3,38 (25H, m), 5,61 (1H, m), 7,16-7,35 (30H, m); EM (FAB) m/z 922(M+H)+:

(20b) 2,3,6-Tri-O-bencil-α-D-galactopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-N-benciloxicarbonil-2benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (0,98 g, 1,06 mmol) sintetizado en el Ejemplo 20 (20a) se disolvió en metanol (20 ml), se añadió carbonato de potasio (147 mg, 1,06 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (10 ml) y salmuera saturada (10 ml). Después, la capa orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (772,4 mg, rendimiento del 83 %) en forma de un aceite incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 2,70-2,81 (1H, m), 3,46-5,15 (26H, m), 7,15-7,37 (30H, m); EM (FAB) m/z: 880 (M+H)+.

(20c) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-{2,3,6-tri-O-benzoil-4-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoil-β-Dglucopiranosil)-β-D-glucopiranosil}-α-D-galactopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-Nbenciloxicarbonil-2-benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (516,8 mg, 0,48 mmol) sintetizado en el Ejemplo 20 (20d) se disolvió en cloruro

de metileno (10 ml) y tricloroacetonitrilo (240 µl, 2,39 mmol), se añadió 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7undeceno (7,5 µl, 0,05 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1, trietilamina al 1 %, V/V), obteniéndose imidato (376,9 mg, 65 %) en forma de material amorfo incoloro. El compuesto (270,0 mg, 0,31 mmol) sintetizado en el Ejemplo 20 (20b) se disolvió en dietil éter (15 ml) y se añadió imidato (376,9 mg, 0,31 mmol). Se añadió una solución de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (56 µl, 0,31 mmol) en dietil éter (2 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después se añadió trietilamina (50 µl) a la mezcla de reacción y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida, el residuo se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml) y salmuera saturada (10 ml). Después, la capa orgánica se secó con sulfato de sodio anhidro y se retiró el disolvente por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice (hexano:acetato de etilo, 4:1-3:1, V/V), aislándose el compuesto deseado del epígrafe (390,8 mg, rendimiento del 65 %) en forma de material amorfo incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 3,20-5,70 (40H, m), 7,10-7,40 (65H, m); EM (FAB) m/z: 1932 (M+H)+.

(20d) 2,3,6-Tri-O-bencil-4-O-{4-O-(β-D-glucopiranosil)-β-D-glucopiranosil}-α-Dgalactopiranósido de (2R,3R,4R)-4-benciloxi-N-benciloxicarbonil-2-benciloximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (390,8 mg, 0,20 mmol) sintetizado en el Ejemplo 20 (20c) se disolvió en metanol (8 ml), se añadió carbonato de potasio (27,6 mg, 0,20 mmol) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 6 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (10 ml) y la mezcla se lavó con hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (10 ml) y salmuera saturada (10 ml). La mezcla se neutralizó con metanol-ácido clorhídrico y el disolvente se retiró por destilación a presión reducida. El residuo se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (cloruro de metileno:metanol, 30:1-20:1, V/V), obteniéndose el compuesto deseado del epígrafe (146,5 mg, rendimiento del 61 %) en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CD3OD): δ 1,13 3,20-4,70 (37H, m), 4,97 (1H, d, J=3,6 Hz), 5,07 (2H, s), 7,23-7,39 (30H, m); EM (FAB) m/z: 1226 (M+Na)+.

(20e) 4-O-{4-O-(β-D-glucopiranosil)-β-D-glucopiranosil}-α-D-galactopiranósido de (2R,3R,4R)4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo

El compuesto (146,5 mg, 0,12 mmol) sintetizado en el Ejemplo 20 (20d) se disolvió en metanol (15 ml), se añadió ácido clorhídrico al 36 % (420 µl) e hidróxido de paladio al 20 %-carbono (150 mg) y después se agitó la mezcla a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. Después de filtrar con celite, se añadió agua de amoniaco al 18 % (1 ml), se retiró el disolvente por destilación a presión reducida y se purificó el residuo mediante columna de intercambio iónico (Dowex 50W x 8) (agua – agua de amoniaco al 1 %). Además, se purificó usando cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice (acetato de etilo:metanol:agua, 5:2:1-1:1:1, V/V), obteniéndose acetato (23,6 mg, rendimiento del 32 %) del compuesto deseado del epígrafe en forma de un sólido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 3,17-3,87 (22H, m), 4,01 (1H, s), 4,11 (1H, s), 4,36 (1H,m), 4,38 (1H, d, J=8,0 Hz), 4,56 (1H, d, J=8,0 Hz), 5,04 (1H, s); EM (FAB) m/z: 620 (M+H)+.

<Ejemplo de ensayo 1>

Acción inhibitoria de la α-amilasa

(1)

Preparación de una solución de α-amilasa humana

Se usó "Caribzyme AMY" (International Reagents) para la α-amilasa pancreática (HPA). Se añadió agua purificada a la HPA disponible comercialmente y se disolvió a una concentración de 200 IU/l para preparar una solución de α-amilasa. La actividad de la α-amilasa se midió usando un reactivo de ensayo de α-amilasa disponible comercialmente ("Neo-Amylase Test Daiichi", Daiichi Pure Chemicals).

(2)

Preparación de soluciones inhibitorias

(3)

Medición de la actividad inhibitoria de la α-amilasa humana de soluciones inhibitorias

Cada compuestos de ensayo se preparó con agua destilada a una concentración final de 0,1 a 30 µg/ml, respectivamente.

Se añadieron de 3,78 a 3,9 ml de agua destilada y de 0 a 120 µl de solución inhibitoria a 100 µl de solución de HPA y se ajustó a un volumen total de 4 ml. Después de incubar durante 10 minutos a 37 ºC, se añadió un comprimido de almidón azul ("Neo-Amylase Test Daiichi", Daiichi Pure Chemicals) y después se agitó durante aproximadamente 10 segundos con un mezclador 5 y se calentó durante 30 minutos a 37 ºC. A continuación, se añadió 1,0 ml de solución acuosa 0,5 N de hidróxido de sodio y después se agitó hasta que se detuvo la reacción, después de lo cual se centrifugó la mezcla (1.500 G, 5 minutos) y se midió la absorbancia del sobrenadante resultante a 620 nm. Como control, se usó una mezcla a la que no se había añadido solución inhibidora. Además, se añadió agua destilada en vez de α-amilasa para usar como blanco. La

10 tasa de inhibición se calculó según la fórmula siguiente y la concentración final del compuesto de ensayo requerida para inhibir la actividad de la solución de HPA en un 50 % (µg/ml) se aceptó que era el valor de CI50. Esos valores se muestran en la Tabla 6.

Tasa de inhibición (%) = [1-{(Absorbancia del control) -(absorbancia del

15 blanco)}/{(absorbancia cuando se ha añadido inhibidor) -(absorbancia del blanco)}] x 100

(Tabla 6)

Ejemplo Nº

CI50 (µg/ml)

1

7x10-1

2

2x10-1

3

4x10-1

4

3x10-1

5

7

7

4

8

4x10-1

9 (ref)

3x10

11 (ref)

1x10

13

4

14

1

15

6x10-1

17 (ref)

3x10

18

2x10-3

19

6x10-1

Se encontró en la Tabla 6 que los compuestos de la presente invención tienen una acción inhibitoria de la α-amilasa superior.

<Ejemplo de ensayo 2>

Acción inhibitoria de la hiperglucemia posprandial

(1)

Animales de ensayo

Ratones normales disponibles comercialmente (ratones ddY, machos, 8 semanas de edad en el momento del ensayo, suministrados por Japan SLC).

(2)

Procedimientos experimentales y resultados

Para el grupo de administración, se mezclaron bien un compuesto de ensayo y almidón de maíz disponible comercialmente con carboximetilcelulosa al 5 % para preparar una suspensión que se administró oralmente a 0,3 mg (compuesto de ensayo)/2 g (almidón de maíz)/kg (peso corporal) a cinco ratones que habían ayunado anteriormente durante 20 horas. Se administró al grupo de control una suspensión similar de la misma manera, con la excepción de que no contenía el compuesto de ensayo.

Se recogieron muestras de sangre de la vena de la cola de los ratones antes de la administración y 0,5, 1, 2 y 3 horas después de la administración y después se realizaron las mediciones de los niveles de glucosa en sangre y los cálculos de la tasa de inhibición (%) según la fórmula siguiente del área bajo la curva (AUC) del aumento de los niveles de glucosa en sangre (área bajo la curva del cambio en el aumento de los niveles de glucosa en sangre, mg/dlxh). Los niveles de glucosa en sangre se midieron usando un analizador de glucosa (Glucoloader GXT, A & T).

Tasa de inhibición (%) = [1-(AUC del grupo de administración/AUC del aumento de glucosa en sangre del grupo de control)] x 100

(Tabla 7)

Ejemplo Nº

Tasa de inhibición (%)

2

64

Según la Tabla 7, se determinó que los compuestos de la presente invención tienen una acción superior en la inhibición del aumento de los niveles de glucosa en sangre. De este modo, se considera que los compuestos de la presente invención son útiles como agentes terapéuticos para la hiperglucemia posprandial.

<Ejemplo de ensayo 3>

Acción reductora de glucosa en sangre

(1)

Animales de ensayo

Ratones genéticamente obesos diabéticos, disponibles comercialmente (ratones C57BL/KsJdb/db, machos, de 16 de edad en el momento del ensayo, suministrados por Clea Japan).

(2)

Procedimientos experimentales y resultados

Se mezcló un compuesto de ensayo en la dieta refinada de animales de laboratorio (contenido en carbohidratos: 65,95 % (w/w), Oriental Yeast) a una concentración de compuesto de ensayo del 0,005 % (w/w) y se permitió la ingesta libre durante 1 semana por parte de ratones diabéticos en grupos de 5 ratones por grupo. Se permitió a un grupo de control un acceso no restringido similar al mismo alimento con la excepción de que éste no contenía compuesto de ensayo.

Se midieron los niveles de glucosa antes de comenzar la administración y una semana después de comenzar la administración. Se recogieron muestras de sangre de la vena de la cola y se midieron los niveles de glucosa en sangre usando un analizador de glucosa en sangre (Glucoloader GXT, A & T) para calcular la tasa reductora de glucosa en sangre (%) según la fórmula siguiente.

Tasa de reducción de glucosa en sangre (%) = [1-(nivel de glucosa en sangre del grupo de administración del compuesto/nivel de glucosa en sangre del grupo de control)] x 100

(Tabla 8)

Ejemplo Nº

Tasa de reducción de glucosa en sangre (%)

2

47

Según la Tabla 8, se determinó que los compuestos de la presente invención tienen una acción reductora de la glucosa en sangre superior. De este modo, se considera que los compuestos de la presente invención son útiles como agentes terapéuticos para la diabetes sacarina.

<Ejemplos de preparación>

(1) Cápsulas Compuesto de Ejemplo 1 10 mg Lactosa 110 mg Almidón de maíz 58 mg Estearato de magnesio 2 mg

Total 180 mg

Se mezclaron bien todos los ingredientes enumerados anteriormente en polvo (la malla del tamiz se basó en la malla de Tyler). Se pesaron 180 mg del polvo resultantes y se rellenaron con el cápsulas de gelatina (Nº 3) para elaborar preparaciones en cápsula.

(2) Comprimidos Compuesto de Ejemplo 1 10 mg Lactosa 85 mg Almidón de maíz 34 mg Celulosa cristalina 20 mg Estearato de magnesio 1 mg

Total 150 mg

Se mezclaron bien todos los ingredientes enumerados anteriormente en polvo y se comprimieron y se moldearon en comprimidos que tenían un peso de 150 mg cada uno. Estos comprimidos pueden recubrirse con azúcar o una película según sea necesario.

(3) Gránulos Compuesto de Ejemplo 1 10 mg Lactosa 839 mg Almidón de maíz 150 mg Hidroxipropilcelulosa 1 mg

Total 1000 mg

Se mezclaron bien los ingredientes enumerados anteriormente en polvo, se humedecieron con agua purificada y se granularon con un granulador de tipo cesta y después se secaron, obteniéndose gránulos.

5 (APLICABILIDAD INDUSTRIAL)

Los compuestos de la presente invención en forma de un derivado de oligosacárido novedoso, sus sales farmacológicamente aceptables y sus ésteres farmacológicamente aceptables demuestran una acción inhibitoria de la α -amilasa, una acción reductora de la glucosa en 10 sangre y una acción reductora de lípidos superiores y son útiles como fármacos terapéuticos y/o fármacos preventivos contra hiperglucemia, hiperglucemia posprandial, la intolerancia a la glucosa, diabetes sacarina, obesidad, hiperlipemia, hígado graso, hepatomegalia, complicaciones diabéticas, neuropatía, arterioesclerosis, cataratas o nefropatía diabética (y preferentemente como fármacos terapéuticos y/o fármacos preventivos contra hiperglucemia o

15 diabetes sacarina).

Claims (22)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto representado por la fórmula general (I):

   imagen1

   en la que A representa la fórmula general (A1c), (A2) o (A3):

   imagen1

   10 R1 y R2 son iguales o diferentes y cada uno representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo hidroximetilo, un grupo alcoximetilo C1-C6 o un grupo haloalquilo C1-C6. R3, R5 y R6 son iguales o diferentes, y cada uno representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un grupo haloalquilo C1-C6, un grupo amino, pudiendo estar el grupo amino opcionalmente sustituido con uno o dos grupos alquilo C1-C6 o

   15 grupos hidroxialquilo C1-C6, un grupo hidroxilo, un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno, R4 representa un grupo hidroxilo R7 representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un grupo haloalquilo C1-C6, un grupo hidroxilo o un átomo de hidrógeno, y n representa el número entero 1 ó 2;

   20 una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.
2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R1 y R2 son iguales o diferentes

   y cada uno representa un grupo alquilo C1-C3, un grupo hidroximetilo, un grupo alcoximetilo C125 C3 o un grupo haloalquilo C1-C3; un sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.
3. 3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que R3, R5 y R6 son iguales o diferentes y cada uno representa un grupo alquilo C1-C3, un grupo hidroxialquilo

   5 C1-C3, un grupo haloalquilo C1-C3, un grupo amino, pudiendo estar el grupo amino opcionalmente sustituido con uno o dos grupos hidroxialquilo C1-C6, un grupo hidroxilo, un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno, una sal del mismo farmacológicamente aceptable

   o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

   10 4. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R7 representa un átomo de hidrógeno; o una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.
4. 5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que A representa la fórmula general 15 (A1c):

   imagen1

   en la que R7 representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoxi C1-C6, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un grupo haloalquilo C1-C6, un grupo hidroxilo o un átomo de hidrógeno,

   20 R5 representa un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo hidroxialquilo C1-C6 o un grupo haloalquilo C1-C6, R3 representa un grupo hidroxilo, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno, y R4 representa un grupo hidroxilo;

   25 o una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.
5. 6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5, en el que R1 es un grupo alquilo C1-C3, un

   grupo hidroximetilo, un grupo alcoximetilo C1-C3 o un grupo haloalquilo C1-C3; una sal del 30 mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

6. 7.

   Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en el que R1 es un grupo metilo o un grupo hidroximetilo; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

7. 8.

   Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que R2 es un grupo hidroximetilo o un grupo haloalquilo C1-C3; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

8. 9.

   Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8, en el que R2 es un grupo hidroximetilo; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

9. 10.

   Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, en el que R7 es un átomo de hidrógeno; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

10. 11.

    Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10, en el que R5 es un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxialquilo C1-C3 o un grupo haloalquilo C1-C3; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

11. 12.

    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11, en el que R5 es un grupo hidroxialquilo C1-C3; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

12. 13.

    Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 12, en el que R3 representa un grupo hidroxilo o un átomo de hidrógeno; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

13. 14.

    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, representado por la fórmula general (Ib):

    en la que R1 y R2 son iguales o diferentes, y cada uno representa un grupo alquilo C1-C6, un grupo alcoximetilo C1-C6 o un grupo haloalquilo C1-C6, R11 representa un grupo hidroxilo, un grupo hidroxialquilo C1-C6, un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno, y n representa el número entero 1 ó 2; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

14. 15.

    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 14, en el que R11 es un grupo hidroxilo; una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

15. 16.

    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 14 ó 15, en el que R1 es un grupo alquilo C1-C3, R2 es un grupo hidroximetilo y n es 1; una sal del mismo farmacológicamente aceptable

    imagen1

    o un éster del mismo farmacológicamente aceptable.

16. 17.

    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, siendo dicho compuesto 4-O-(6-deoxi-αD-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,9R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo, 4O-(6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetilpirrolidin-3-ilo, 4-O-β-D-glucopiranosil-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2hidroximetil-pirrolidin-3-ilo, 4-O-(6-fluoro-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo, 4-O-(6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-Dglucopiranósido de (1R,2S,3R,4R,5R)-1-amino-2,3-dihidroxi-5-hidroximetil-ciclopent-4-ilo, 4-O(6-metoxi-6-deoxi-β-D-glucopiranosil)-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetilpirrolidin-3-ilo o 4-O-(6-deoxi-α-D-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi2-hidroximetil-3,4-dihidro-2H-pirrol-3-ilo, una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un

    éster del mismo farmacológicamente aceptable.

17. 18.

    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, siendo dicho compuesto 4-O-(6-deoxi-βD-glucopiranosil)-α-D-glucopiranósido de (2R,3R,4R)-4-hidroxi-2-hidroximetil-pirrolidin-3-ilo.

18. 19.

    Una composición farmacéutica que comprende un compuesto, una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17.

19. 20.

    Un compuesto, una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, para usar como inhibidor de la α-amilasa.

20. 21.

    Un compuesto, una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, para usar como agente hipoglucémico.

21. 22.

    Una composición farmacéutica para prevenir o tratar la hiperglucemia, la hiperglucemia posprandial o la diabetes sacarina, que comprende un compuesto, una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17.

22. 23.

    Uso de un compuesto, una sal del mismo farmacológicamente aceptable o un éster del mismo farmacológicamente aceptable de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la diabetes sacarina.