ES2360746T3 - Expresión híbrida de proteínas e neisseriales. - Google Patents
Expresión híbrida de proteínas e neisseriales. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2360746T3 ES2360746T3 ES08075111T ES08075111T ES2360746T3 ES 2360746 T3 ES2360746 T3 ES 2360746T3 ES 08075111 T ES08075111 T ES 08075111T ES 08075111 T ES08075111 T ES 08075111T ES 2360746 T3 ES2360746 T3 ES 2360746T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- image
- artificial sequence
- dna
- oligonucleotide
- prt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 76
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 73
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims abstract description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 187
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 133
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 7
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000007977 PBT buffer Substances 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007330 chocolate agar Substances 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 2
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 229940016590 sarkosyl Drugs 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000588654 Neisseria cinerea Species 0.000 description 1
- 241000588649 Neisseria lactamica Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100038645 Streptomyces griseus rppA gene Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000626900 Trieres chinensis Uncharacterized 5.5 kDa protein in ccsA-rps6 intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012777 commercial manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000001516 effect on protein Effects 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 108010094020 polyglycine Proteins 0.000 description 1
- 229920000232 polyglycine polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Una proteína híbrida de fórmula NH 2-A-B-COOH, en la que A comprende la proteína ΔG287 de Neisseria, y B comprende la proteína 961 de Neisseria, y en la que la secuencia de aminoácidos de la proteína híbrida es la descrita en SEQ ID NO:8, o es una secuencia que tiene más de 70% de identidad de secuencia con ésta.
Description
Campo técnico
La presente invención pertenece al campo de la expresión de proteínas. En particular, se refiere a la expresión heteróloga de proteínas de Neisseria (por ejemplo, N. gonorrhoeae o, preferiblemente, N. meningitidis).
Las solicitudes de patente internacional WO99/24578, WO99/35544, WO99/57280 y WO00/22430 divulgan proteínas de Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae. Estas proteínas se describen, de forma típica, expresadas en E. coli (es decir, una expresión heteróloga) como fusiones con GST N-terminales o como fusiones con marcador de His C-terminales, aunque también se describen otros sistemas de expresión, incluyendo la expresión en Neisseria nativa.
Gruiller et al., Biotecnología aplicada, 1996, vol. 13, nº 4, págs. 271-275 divulga una proteína de fusión de la proteína
Un objeto de la presente invención es proporcionar estrategias alternativas y mejoradas para la expresión heteróloga de estas proteínas. Estas estrategias afectan, de modo típico, al nivel de expresión, la facilidad de purificación, la localización celular de la expresión y/o las propiedades inmunológicas de la proteína expresada.
Divulgación de la invención
Según la invención, se expresan dos proteínas de la invención como una única proteína híbrida. Se prefiere no
utilizar un compañero de fusión que no provenga de Neisseria (por ejemplo, GST o poli-His).
Esto ofrece dos ventajas. En primer lugar, una proteína que puede ser inestable, o que se expresa poco por sí sola,
puede mejorarse añadiendo un compañero de hibridación adecuado que solucione el problema.
En segundo lugar, se simplifica la fabricación comercial, ya que sólo es necesario emplear una expresión y
purificación para producir dos proteínas útiles por separado.
Así, la invención proporciona un procedimiento para la expresión heteróloga simultánea de dos proteínas de la
invención, en el que dichas dos o más proteínas de la invención están fusionadas (es decir, se traducen como una
sóla cadena polipeptídica).
El procedimiento incluirá de forma típica las etapas de obtener un primer ácido nucleico que codifique una primera
proteína de la invención; obtener un segundo ácido nucleico que codifique una segunda proteína de la invención;
ligar el primer y el segundo ácido nucleico. El ácido nucleico resultante puede insertarse en un vector de expresión, o
puede ser ya parte de un vector de expresión.
La proteína híbrida puede representarse con la fórmula NH2-A-B-COOH. A comprende la proteína 287 y B
comprende la proteína 961.
287 es su forma ΔG-287 con deleciones de poliglicina (ΔG).
La proteína híbrida de la invención es ΔG287-961.
287 se usa en el extremo N-terminal como una forma ΔG de 287, como el extremo N-terminal de un híbrido con 961.
287 es preferentemente de la cepa 1996 o de la cepa 394/98. Pueden usarse las formas de dominios de 961.
Las alineaciones de formas polimórficas de ORF46, 287, 919 y 953 se divulgan en el documento WO00/66741.
Cualquiera de estos polimorfos puede usarse de acuerdo con la presente invención.
Preferentemente, las proteínas constituyentes (A y B) e una proteína híbrida de acuerdo con la invención vendrán de
la misma cepa.
Las proteínas fusionadas en el híbrido están unidas directamente.
Las proteínas fusionadas pueden carecer de los péptidos conductores nativos, o pueden incluir la secuencia
peptídica conductora del compañero de fusión N-terminal
Huésped
Se prefiere utilizar un huésped heterólogo. El huésped heterólogo puede ser procariota o eucariota. Preferiblemente es E. coli, pero otros huéspedes adecuados incluyen Bacillus subtilis, Vibrio cholerae, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria lactamica, Neisseria cinerea, Mycobacteria
5 (por ejemplo, M. tuberculosis), levaduras, etc.
Secuencias
La invención también proporciona una proteína que comprende las secuencias de la secuencia SEQ ID NO 8.
El grado de "identidad de secuencia" es preferiblemente mayor que 70%. Esto incluye mutantes y variantes alélicas [por ejemplo, véase el documento WO00/66741]. La identidad se determina preferiblemente mediante el algoritmo de
10 búsqueda de homología de Smith-Waterman, ejecutado en el programa MPSRCH (Oxford Molecular), empleando una búsquedad de huecos afines con los parámetros penalización de hueco abierto = 12 y penalización de extensión de hueco = 1.
Las proteínas de la invención preferidas se encuentran en el serogrupo B de N. meningitidis.
Las proteínas de la invención preferidas son las del serogrupo B de la cepa 2996 o de la cepa 394/98 (una cepa de
15 Nueva Zelanda) . A menos que se indique lo contrario, las proteínas mencionadas en la presente proceden de la cepa 2996 de N. meningitidis. Sin embargo, se apreciará que la invención no está limitada, en general, por la cepa. Puede considerarse que las referencias a una proteína concreta (por ejemplo, “287”, “919”, etc.) incluyen esa proteína de cualquier cepa.
Breve descripción de los dibujos
20 Las figuras 1 y 2 muestran las proteínas híbridas de acuerdo con la invención.
Modos de realizar la invención
Se descubrió que la deleción de la secuencia (Gly)6 en 287 tiene un profundo efecto sobre la expresión proteica. La proteína que carece de los aminoácidos N-terminales hasta GGGGGG se denomina "G287". En la cepa MC58, su
25 secuencia básica (el péptido conductor está subrayado) es:
La G287, con o sin un marcador de His ("G287-His" y "G287K", respectivamente) se expresa a niveles muy buenos, comparada con "287-His" o "287sin marcar".
Basándose en los datos de variabilidad genética, se expresaron variantes de -G287-His en E. coli de una serie de
30 cepas MenB, en particular de las cepas 2996, MC58, 1000 y BZ232. Los resultados también fueron buenos; cada uno de ellos produjo altas valoraciones con ELISA y también unas valoraciones bactericidas séricas >8192. La G287K, expresada a partir de pET-24b, produjo excelentes valoraciones en el ensayo ELISA y bactericida sérico.
La G287 se fusionó directamente dentro de marco cadena arriba de 919 (las secuencias que aparecen a continuación):
- ELISA
- Bactericida
- G287-961-His
- 108627 65536
Se prepararon las mismas proteínas híbridas utilizando la cepa 394/98 de Nueva Zelanda en lugar de 2996:
La expresión de 287, de longitud completa con un marcador de His C-terminal, o sin su péptido conductor pero con
5 un marcador de His C-terminal, produce unos niveles de expresión bastante bajos. Se logró una mejor expresión empleando una fusión con GST N-terminal. Cuando se fusiona con la proteína 961 (la secuencia NH2-G287-961COOH mostrada anteriormente), la proteína resultante es insoluble y debe desnaturalizarse y renaturalizarse para la purificación. Después de la renaturalización, se descubrió que aproximadamente 50% de la proteína permanecía insoluble. Las proteínas soluble e insoluble se compararon, y se obtuvieron unas valoraciones bactericidas mucho
10 mejores con la proteína soluble (FCA como adyuvante):
- 2996
- BZ232 MC58 NGH38 F6124 BZ133
- Soluble
- 65536 128 4096 >2048 >2048 4096
- Insoluble
- 8192 <4 <4 16 n.d. n.d.
Sin embargo, las valoraciones con la forma insoluble mejoraron utilizando un adyuvante de alumbre:
- Insoluble
- 32768 128 4096 >2048 >2048 2048
También se usó 961c en las proteínas híbridas (véase anteriormente). Puesto que 961 y sus variantes de dominio 5 dirigen una expresión eficaz, son idealmente adecuados como porción N-terminal de una proteína híbrida.
Detalles experimentales
Estrategia de clonación y diseño de oligonucleótidos
Los genes que codifican los antígenos de interés se amplificaron mediante PCR, utilizando oligonucleótidos diseñados basándose en la secuencia genómica de N. meningitidis B MC58. Siempre se utiliza ADN genómico de la
10 cepa 2996 como molde en las reacciones de PCR, a menos que se indique lo contrario, y los fragmentos amplificados se clonaron en el vector de expresión pET21b+ (Novagen) para expresar la proteína como producto marcado con His C-terminal, o en pET-24b+ (Novagen) para expresar la proteína en forma "no marcada" (por ejemplo, G287K).
Cuando una proteína se expresa sin un compañero de fusión y con su propio péptido conductor (si está presente), se 15 realiza una amplificación del marco de lectura abierto (codones desde ATG hasta FIN).
Cuando una proteína se expresa en forma "no marcada", el péptido conductor se omite diseñando el cebador de amplificación del 5'-terminal cadena abajo de la secuencia conductora predicha.
La temperatura de fusión de los cebadores utilizados en la PCR depende del número y tipo de nucleótidos hibridantes en el cebador completo, y se determinó empleando las fórmulas:
20 Tm1 = 4(G+C) + 2(A+T) (sin la cola)
Tm2 = 64,9 + 0,41 (GC%) - 600/N (cebador completo)
Las temperaturas de fusión de los oligonucleótidos seleccionados eran normalmente de 65-70ºC para el oligonucleótido completo, y de 50-60ºC para la región de hibridación sola.
Se sintetizaron oligonucleótidos utilizando un sintetizador de ADN/ARN Perkin Elmer 394, se eluyeron de las
25 columnas en 2,0 ml de NH4OH, y se desprotegieron mediante 5 horas de incubación a 56ºC. Los oligonucleótidos se precipitaron mediante la adición de acetato de Na 0,3 M y 2 volúmenes de etanol. Las muestras se centrifugaron y los sedimentos se resuspendieron en agua.
En todos los constructos que comienzan con un ATG no seguido por un sitio NheI exclusivo, el codón ATG es parte del sitio NheI utilizado para la clonación. Los constructos fabricados utilizando NheI como sitio de clonación en el extremo 5' (por ejemplo, los que contienen 287 en el N-terminal) tienen dos codones más (GCT AGC) fusionados a la secuencia codificadora del antígeno.
Preparación de moldes de ADN cromosómico
Las cepas 2996, MC58, 394.98, 1000 y BZ232 (y otras) de N. meningitidis se cultivaron hasta la fase exponencial en 100 ml de medio GC, se recogieron mediante centrifugación, y se resuspendieron en 5 ml de tampón (sacarosa al 20% p/v, Tris-HCl 50 mM, EDTA 50 mM, pH 8). Después de 10 min de incubación en hielo, las bacterias se lisaron añadiendo 10 ml de disolución de lisis (NaCl 50 mM, Na-Sarkosyl al 1%, proteinasa K 50 g/ml), y la suspensión se incubó a 37ºC durante 2 horas. Se realizaron dos extracciones con fenol (equilibrado a pH 8) y una extracción con CHCl3/alcohol isoamílico (24:1). El ADN se precipitó mediante la adición de acetato de sodio 0,3 M y 2 volúmenes de etanol, y se recogió mediante centrifugación. El sedimento se lavó una vez con etanol al 70% (v/v) y se redisolvió en 4,0 ml de tampón TE (Tris-HCl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 8,0). Se midió la concentración de ADN mediante una lectura de DO260.
Amplificación mediante PCR
El protocolo de PCR convencional fue el siguiente: se utilizó como molde 200 ng de ADN genómico procedente de las cepas 2996, MC581000 o BZ232, o 10 ng de preparación de ADN de plásmido de clones recombinantes, en presencia de 40 M de cada uno de los cebadores oligonucleotídicos, disolución de dNTP 400-800 M, 1x tampón de PCR (que incluye MgCl2 1,5 mM), 2,5 unidades de TaqI ADN polimerasa (utilizando Perkin-Elmer AmpliTaQ, molde largo Boehringer Mannheim Expand).
Después de una incubación preliminar de 3 minutos de la mezcla completa a 95ºC, cada muestra se sometió a una amplificación en dos etapas: los primeros 5 ciclos se realizaron utilizando la temperatura de hibridación que excluye la cola de enzimas de restricción del cebador (Tm1). Después siguieron 30 ciclos según la temperatura de hibridación calculada para los oligonucleótidos de longitud completa (Tm2). Los tiempos de alargamiento, realizado a 68ºC o 72ºC, varían según la longitud del Orf (marco de lectura abierto) que se va a amplificar. En el caso de Orf1, el tiempo de alargamiento, comenzando a partir de 3 minutos, aumentó en 15 segundos cada ciclo. Los ciclos se completaron con una etapa de extensión de 10 minutos a 72ºC.
El ADN amplificado se cargó directamente sobre un gel de agarosa al 1%. El fragmento de ADN que corresponde a la banda del tamaño correcto se purificó del gel utilizando el kit de extracción de gel de Qiagen, siguiendo el protocolo del fabricante.
Digestión de los fragmentos de PCR y de los vectores de clonación
El ADN purificado que corresponde al fragmento amplificado se digirió con las enzimas de restricción apropiadas para clonarlo en pET-21b+, pET22b+ o pET-24b+. Los fragmentos digeridos se purificaron utilizando el kit de purificación de PCR QIAquick (siguiendo las instrucciones del fabricante) y se eluyeron con H2O, o con Tris 10 mM, pH 8,5. Los vectores plásmidos se digirieron con las enzimas de restricción apropiadas, se cargaron sobre un gel de agarosa al 1,0%, y la banda correspondiente al vector digerido se purificó utilizando el kit de extracción de gel QIAquick de Qiagen.
Los fragmentos que correspondían a cada gen, previamente digeridos y purificados, se acoplaron a pET-21b+, pET22b+ o pET-24b+. Se empleó una proporción molar de fragmento/vector 3:1 con ADN ligasa de T4 en el tampón de acoplamiento suministrado por el fabricante.
El plásmido recombinante se transformó en E. coli DH5 o HB101 competente mediante la incubación de la disolución de reacción de ligasa y bacterias durante 40 minutos en hielo, y después a 37ºC durante 3 minutos. A esto le siguió la adición de 800 l de caldo de cultivo LB y una incubación a 37ºC durante 20 minutos. Las células se centrifugaron a velocidad máxima en una microcentífuga Eppendorf, se resuspendieron en aproximadamente 200 l del sobrenadante, y se colocaron en placas con agar con ampicilina y LB (100 mg/ml).
La selección de los clones recombinantes se realizó cultivando colonias, seleccionadas aleatoriamente, durante la noche a 37ºC en 4,0 ml de caldo de cultivo LB + ampicilina 100 g/ml. Las células se sedimentaron y el ADN del plásmido se extrajo utilizando el kit de minipreparaciones de centrifugación QIAprep de Qiagen, siguiendo las instrucciones del fabricante. Se digirió aproximadamente 1 g de cada minipreparación individual con las enzimas de restricción apropiadas, y el digerido se cargó sobre un gel de agarosa al 1-1,5% (dependiendo del tamaño esperado del inserto), en paralelo con el marcador de peso molecular (1 kb de DNA Ladder, GIBCO). Los clones positivos se seleccionaron basándose en el tamaño del inserto.
Después de clonar cada gen en el vector de expresión, los plásmidos recombinantes se transformaron en cepas de
E. coli adecuadas para la expresión de la proteína recombinante. Se empleó 1 l de cada constructo para transformar E. coli BL21-DE3 como se describió anteriormente. Se inocularon colonias recombinantes individuales en 2 ml de LB + ampicilina (100 g/ml), se incubaron a 37ºC durante la noche, después se diluyeron 1:30 en 20 ml de LB + ampicilina (100 g/ml) en matraces de 100 ml, para producir una DO600 entre 0,1 y 0,2. Los matraces se incubaron a 30ºC o a 37ºC en un agitador de baño de agua giratorio hasta que la DO600 indicó un crecimiento exponencial adecuado para la inducción de la expresión (0,4-0,8 DO). La expresión de las proteínas se indujo mediante la adición de IPTG 1,0 mM. Después de 3 horas de incubación a 30ºC o a 37ºC, se midió la DO600 y se estudió la expresión. Se centrifugaron 1,0 ml de cada muestra en una microcentrífuga, el sedimento se resuspendió en PBS y se analizó mediante SDS-PAGE y tinción con azul de Coomassie.
Purificación de proteínas marcadas con His
Se clonaron diversas formas de 287 a partir de las cepas 2996 y MC58. Se construyeron con una fusión de un marcador de His C-terminal e incluían una forma madura (aa 18-427), constructos con deleciones (1, 2, 3 y 4), y clones compuestos de dominios B o C. Para cada clon purificado como una fusión con His, se realizó una siembra en estría de una única colonia y se cultivó durante la noche a 37ºC sobre una placa de agar con LB/ampicilina (100 g/ml). Una colonia aislada de esta placa se inoculó en 20 ml de medio líquido de LB/ampicilina (100 g/ml) y se cultivó durante la noche a 37ºC con agitación. El cultivo de la noche se diluyó 1:30 en 1,0 l de medio líquido de LB/ampicilina (100 g/ml) y se dejó que creciese a la temperatura óptima (30ºC o 37ºC) hata que la DO550 alcanzó un valor de 0,6-0,8. La expresión de la proteína recombinante se indujo mediante la adición de IPTG (concentración final 1,0 mM) y el cultivo se incubó durante 3 horas más. Las bacterias se recolectaron mediante centrifugación a 8000 g durante 15 min a 4ºC. El sedimento bacteriano se resuspendió en 7,5 ml de (i) tampón A frío (NaCl 300 mM, tampón fosfato 50 mM, imidazol 10 mM, pH 8,0) para proteínas solubles, o (ii) tampón B (Tris-HCl 10 mM, tampón fosfato 100 mM, pH 8,8 y, opcionalmente, urea 8 M) para proteínas insolubles. Las proteínas purificadas en forma soluble incluían 287-His, 1, 2, 3 y 4287-His, 4287MC58-His, 287c-His y 287c-MC58-His. La proteína 287bMC58-His era insoluble y se purificó en consecuencia. Las células se rompieron mediante sonicación sobre hielo cuatro veces durante 30 seg a 40 W utilizando un sonicador 450 Branson, y se centrifugaron a 13000 x g durante 30 min a 4ºC. Para las proteínas insolubles, los sedimentos se resuspendieron en 2,0 ml de tampón C (clorhidrato de guanidina 6 M, tampón fosfato 100 mM, Tris-HCl 10 mM, pH 7,5), y se trataron con 10 pases con un homogeneizador Dounce. El homogeneizado se centrífugo a 13000 g durante 30 min y se guardó el sobrenadante. Los sobrenadantes de las preparaciones soluble e insoluble se mezclaron con 150 l de resina Ni2+ (previamente equilibrada con tampón A o tampón B, según sea apropiado) y se incubaron a temperatura ambiente con una agitación suave durante 30 min. La resina era Chelating Sepharose Fast Flow (Pharmacia), preparada según las instrucciones del fabricante. La preparación discontinua se centrífugo a 700 g durante 5 min a 4ºC y se rechazó el sobrenadante. La resina se lavó dos veces (de forma discontinua) con 10 ml de tampón A o B durante 10 min, se resuspendió en 1,0 ml de tampón A
o B, y se cargó en una columna desechable. La resina continuó lavándose con (i) tampón A a 4ºC, o (ii) tampón B a temperatura ambiente, hasta que la DO280 de la corriente alcanzó un valor de 0,02-0,01. La resina se volvió a lavar con (i) tampón C frío (NaCl 300 mM, tampón fosfato 50 mM, imidazol 20 mM, pH 8,0), o (ii) tampón D (Tris-HCl 10 mM, tampón fosfato 100 mM, pH 6,3 y, opcionalmente, urea 8 M) hasta que la DO280 de la corriente alcanzó un valor de 0,02-0,01. La proteína de fusión-His se eluyó mediante la adición de 700 l de (i) tampón de elución A frío (NaCl 300 mM, tampón fosfato 50 mM, imidazol 250 mM, pH 8,0), o (ii) tampón de elución B (Tris-HCl 10 mM, tampón fosfato 100 mM, pH 4,5 y, opcionalmente, urea 8 M), y las fracciones se recogieron hasta que la DO280 indicó que se había obtenido toda la proteína recombinante. Se analizaron partes alícuotas de 20 l de cada fracción de elución mediante SDS-PAGE. Se estimaron las concentraciones de proteínas utilizando el ensayo de Bradford.
Renaturalización de las proteínas de fusión-His desnaturalizadas
Se requiere una desnaturalización para solubilizar 287bMC8, por tanto se empleó una etapa de renaturalización antes de la inmunización. Se añadió glicerol a las fracciones desnaturalizadas obtenidas anteriormente para producir una concentración final de 10% v/v. Las proteínas se diluyeron hasta 200 g/ml utilizando tampón de diálisis I (glicerol al 10% v/v, arginina 0,5 M, tampón fosfato 50 mM, glutatión reducido 5,0 mM, glutatión oxidado 0,5 mM, urea 2,0 M, pH 8,8), y se dializaron contra el mismo tampón durante 12-14 horas a 4ºC. Se realizó otra diálisis con tampón II (glicerol al 10% v/v, arginina 0,5 M, tampón fosfato 50 mM, glutatión reducido 5,0 mM, glutatión oxidado 0,5 mM, pH 8,8) durante 12-14 horas a 4ºC. Se estimó la concentración de proteína utilizando la fórmula:
Proteína (mg/ml) = (1,55 x DO280) - (0,76 x DO260)
Se inmunizaron ratontes Balb/C con antígenos en los días 0, 21 y 35, y se analizaron los sueros el día 49.
Las cepas MenB M7 acapsuladas y las capsuladas se cultivaron en placas de agar de chocolate y se incubaron durante la noche a 37ºC con CO2 al 5%. Las colonias bacterianas se recogieron de las placas de agar utilizando un hisopo Dracon estéril y se inocularon en caldo de cultivo Mueller-Hinton (Difco) que contenía glucosa al 0,25%. El crecimiento bacteriano se controló cada 30 minutos siguiendo la DO620. Se dejaron crecer las bacterias hasta que la DO alcanzó un valor de 0,4-0,5. El cultivo se centrífugo durante 10 minutos a 4000 rpm. El sobrenadante se eliminó y las bacterias se lavaron dos veces con PBS, se resuspendieron en PBS que contenía formaldehído al 0,025%, y se incubaron durante 1 hora a 37ºC, y después durante la noche a 4ºC con agitación. Se añadieron 100 l de células bacterianas a cada pocillo de una placa Greiner de 96 pocillos y se incubaron durante la noche a 4ºC. Los pocillos entonces se lavaron tres veces con tampón de lavado PBT (Tween-20 al 0,1% en PBS). Se añadieron 200 l de tampón de saturación (polivinilpirrolidona 10 al 2,7% en agua) a cada pocillo y las placas se incubaron durante 2 horas a 37ºC. Los pocillos se lavaron tres veces con PBT. Se añadieron 200 l de los sueros diluidos (tampón de dilución: BSA al 1%, Tween-20 al 0,1%, NaN3 al 0,1% en PBS) a cada pocillo, y las placas se incubaron durante 2 horas a 37ºC. Los pocillos se lavaron tres veces con PBT. Se añadieron 100 l a cada pocillo de suero antirratón de conejo conjugado con HRP (Dako) diluido 1:2000 en tampón de dilución, y las placas se incubaron durante 90 minutos a 37ºC. Los pocillos se lavaron tres veces con tampón PBT. Se añadieron 100 l de tampón sustrato para HRP (25 ml de tampón citrato, pH 5, 10 mg de O-fenildiamina, y 10 l de H2O2) a cada pocillo, y las placas se dejaron a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se añadieron 100 l de H2SO4 al 12,5% a cada pocillo y se siguió la DO490. Las valoraciones de ELISA se calcularon de manera arbitraria como la dilución de los sueros que produce un valor de DO490 de 0,4 por encima del nivel de los sueros preinmunológicos. El ELISA se consideró positivo cuando la dilución de los sueros con una DO490 de 0,4 era mayor que 1:400.
Análisis de los sueros - Ensayo de unión de bacterias con barrido FACS
La cepa MenB M7 acapsulada se cultivó en placas de agar de chocolate y se incubó durante la noche a 37ºC con CO2 al 5%. Las colonias bacterianas se recogieron de las placas de agar utilizando un hisopo Dracon estéril y se inocularon en 4 tubos que contenían cada uno 8 ml de caldo de cultivo Mueller-Hinton (Difco) que contenía glucosa al 0,25%. El crecimiento bacteriano se controló cada 30 minutos siguiendo la DO620. Se dejaron crecer las bacterias hasta que la DO alcanzó un valor de 0,35-0,5. El cultivo se centrífugo durante 10 minutos a 4000 rpm. El sobrenadante se eliminó y el sedimento se resuspendió en tampón de bloqueo (BSA al 1% en PBS, NaN3 al 0,1% en PBS) y se centrífugo durante 5 minutos a 4000 rpm. Las células se resuspendieron en tampón de bloqueo para alcanzar una DO620 de 0,05. Se añadieron 100 l de células bacterianas a cada pocillo de una placa Costar de 96 pocillos. Se añadieron 100 l de los sueros diluidos (1:100, 1:200, 1:400) (en tampón de bloqueo) a cada pocillo, y las placas se incubaron durante 2 horas a 4ºC. Las células se centrifugaron durante 5 minutos a 4000 rpm, el sobrenadante se aspiró y las células se lavaron mediante la adición de 200 l/pocillo de tampón de bloqueo en cada pocillo. Se añadieron 100 l de F(ab)2 de cabra antirratón conjugado con R-ficoeritrina, diluido 1:100, a cada pocillo, y las placas se incubaron durante 1 hora a 4ºC. Las células se sedimentaron mediante centrifugación a 4000 rpm durante 5 minutos, y se lavaron mediante la adición de 200 l/pocillo de tampón de bloqueo. El sobrenadante se aspiró y las células se resuspendieron en 200 l/pocillo de PBS, formaldehído al 0,25%. Las muestras se trasladaron a tubos FACScan y se leyeron. Los ajustes del FACScan (potencia del láser 15 mW) fueron: FL2 activo; umbral de FSC-H: 92; voltaje de FSC PMT: E 01; SSC PMT: 474; ganancias de amp. 61; FL-2 PMT: 586; valores de compensación: 0.
Análisis de los sueros - Ensayo bactericida
Se cultivó la cepa 2996 de N. meningitidis durante la noche a 37ºC sobre placas de agar de chocolate (a partir de una cepa congelada) con CO2 al 5%. Las colonias se recogieron y se utilizaron para inocular 7 ml de caldo de cultivo Mueller-Hinton que contenía glucosa al 0,25% hasta alcanzar una DO620 de 0,05-0,08. El cultivo se incubó durante aproximadamente 1,5 horas a 37ºC con agitación hasta que la DO620 alcanzó un valor de 0,23-0,24. Las bacterias se diluyeron en tampón fosfato 50 mM, pH 7,2, que contenía MgCl2 10 mM, CaCl2 10 mM, y BSA al 0,5% (p/v) (tampón de ensayo) con una dilución de trabajo de 105 CFU/ml. El volumen total de la mezcla de reacción final era de 50 l, con 25 l de dilución en dos veces en serie del suero de ensayo, 12,5 l de bacterias en la dilución de trabajo, y 12,5 l de complemento de cría de conejo (concentración final 25%).
Los controles incluían bacterias incubadas con suero de complemento, sueros inmunológicos incubados con bacterias y con complemento inactivado mediante calentamiento a 56ºC durante 30 minutos. Inmediatamente después de la adición del complemento de cría de conejo, 10 l de los controles se cultivaron en placas de agar Mueller-Hinton utilizando el procedimiento de plano inclinado (tiempo 0). La placa de 96 pocillos se incubó durante 1 hora a 37ºC con rotación. Se colocaron 7 l de cada muestra sobre placas de agar Mueller-Hinton como gotas, mientras que 10 l de los controles se cultivaron en placas de agar Mueller-Hinton utilizando el procedimiento de plano inclinado (tiempo 1). Las placas de agar se incubaron durante 18 horas a 37ºC y se contaron las colonias correspondientes al tiempo 0 y tiempo 1.
Proteínas purificadas (500 ng/carril), vesículas de membrana externa (5 g) y extractos de células totales (25 g) procedentes de la cepa 2996 MenB se cargaron sobre un gel de SDS al 12%-poliacrilamida y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa. La transferencia se realizó durante 2 horas a 150 mA a 4ºC, utilizando tampón de transferencia (base Tris al 0,3%, glicina al 1,44%, etanol al 20% (v/v)). La membrana se saturó mediante una incubación durante la noche a 4ºC en tampón de saturación (leche desnatada al 10%, Triton X100 al 0,1% en PBS). La membrana se lavó dos veces con tampón de lavado (leche desnatada al 3%, Triton X100 al 0,1% en PBS) y se incubó durante 2 horas a 37ºC con sueros de ratón diluidos 1:200 en tampón de lavado. La membrana se lavó dos veces y se incubó durante 90 minutos con una dilución 1:2000 de anti-Ig de ratón marcada con peroxidasa de rábano. La membrana se lavó dos veces con Triton X100 al 0,1% en PBS y se reveló con el kit de sustrato Opti-4CN (Bio-Rad). La reacción se detuvo añadiendo agua.
Las VME (vesículas de membrana externa) se prepararon como sigue: la cepa 2996 de N. meningitidis se cultivó durante la noche a 37ºC con CO2 al 5% en 5 placas GC, se recolectó con un asa de siembra y se resuspendió en 10 ml de Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, EDTA 2 mM. La inactivación con calor se realizó a 56ºC durante 45 minutos y las bacterias se rompieron mediante sonicación durante 5 min en hielo (50% del ciclo de servicio, 50% de salida, micropunta de 3 mm de sonicador Branson). Las células sin romper se retiraron mediante centrifugaciópn a 5000 g durante 10 minutos, el sobrenadante que contenía la fracción de la envuelta celular total se recuperó y se volvió a centrifugar durante la noche a 50000 g a una temperatura de 4ºC. El sedimento que contenía las membranas se resuspendió en Sarkosyl al 2%, Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, EDTA 2 mM, y se incubó a temperatura ambiente durante 20 minutos para solubilizar las membranas internas. La suspensión se centrífugo a 1000 g durante 10 minutos para retirar los agregados, y el sobrenadante se volvió a centrifugar a 50000 g durante 3 horas. El sedimento, que contenía las membranas externas, se lavó en PBS y se resuspendió en el mismo tampón. La concentración de proteínas se midió mediante el ensayo de proteínas D.C. Bio-Rad (procedimiento de Lowry modificado), utilizando BSA como patrón.
Los extractos de células totales se prepararon como sigue: la cepa 2996 de N. meningitidis se cultivó durante la noche en una placa GC, se recolectó con un asa de siembra y se resuspendió en 1 ml de Tris-HCl 20 mM. La inactivación con calor se realizó a 56ºC durante 30 minutos.
<110> Novartis Vaccines and Diagnostics SRL
<120> Expresión híbrida de proteínas e Neisseriales
<130> P048826EP
5 <150> EP-01914098.7
<151> 28 de febrero de 2001
<150> PCT/IB01/00420
<151> 28 de febrero 2001
<150> GB 0004695.3 10 <151> 28 de febrero 200
<150> GB0027875.8
<151> 13 de noviembre 2000
<160> 121
<170> SeqWin99, versión 1.02 15 <210> 1
<211> 608
<212> PRT
<213> Neisseria meningitidis
<400> 1
<210> 2
<211> 464
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287
<400> 2
<210> 3
<211> 2505
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-919
<400> 3
<210> 4 10 <211> 832
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-919
<400> 4
<210> 5
<211> 1746
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-953
<400> 5
<211> 579
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 15 <223> deltaG287-953
<400> 6
<210> 7
<211> 2388
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-961
<400> 7
<210> 8
<211> 793
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-961
<400> 8
<210> 9
<211> 2700
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-919
<400> 9
<210> 10
<211> 897
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-919
<400> 10
<210> 11
<211> 1941
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-953
<400> 11
<210> 12
<211> 644
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-953
<400> 12
<210> 13
<211> 2583
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-961
<400> 13
<210> 14
<211> 858
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-961
<400> 14
<210> 15
<211> 1082
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 983
<400> 15
<210> 16
<211> 1047
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983
<400> 16
<210> 17
<211> 4425
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-ORF46.1
<400> 17
<210> 18
<211> 1474
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-ORF46.1
<400> 18
<210> 19
<211> 3939
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-741
<400> 19
<210> 20
<211> 1312
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-741
<400> 20
<210> 21
<211> 4344
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-961
<400> 21
<210> 22
<211> 1447
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-961
<400> 22
<210> 23
<211> 4179
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-961c
<400> 23
<210> 24
<211> 1392
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-961c
<400> 24
<210> 25
<211> 274
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 741
<400> 25
<210> 26
<211> 248
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741
<400> 26
<210> 27
<211> 1947
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-961
<400> 27
<211> 648
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG791-961
<400> 28
<210> 29
<211> 1782
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-961c
<400> 29
<210> 30 10 <211> 593
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-961c 15 <400> 30
<210> 31
<211> 3939
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-983
<400> 31
<210> 32
<211> 1312
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-983
<400> 32
<210> 33
<211> 2028
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-ORF46.1
<400> 33
<211> 675
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-ORF46.1
<400> 34
<210> 35
<211> 2019
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-741
<400> 35
<211> 672
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-741
<400> 36
<210> 37
<211> 2421
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-961
<400> 37
<211> 806
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-961
<400> 38
<210> 39
<211> 2256
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-961c
<400> 39
<210> 40
<211> 751
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-961c
<400> 40
<210> 41
<211> 2421
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-ORF46.1
<400> 41
<210> 42
<211> 806
<212> PRT 10 <213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-ORF46.1
<400> 42
<210> 43
<211> 1938
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-741
<400> 43
<210> 44
<211> 645
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-741
<400> 44
<210> 45
<211> 4335
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-983
<400> 45
<210> 46
<211> 1444
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-983
<400> 46
<210> 47
<211> 2256
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-ORF46.1
<400> 47
<210> 48
<211> 751
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-ORF46.1
<400> 48
<210> 49
<211> 1773
<212> AND
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-741
<400> 49
<210> 50
<211> 590
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-741
<400> 50
<210> 51
<211> 4170
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-983
<400> 51
<210> 52
<211> 1389
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-983
<400> 52
<210> 53
<211> 2304
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-ORF46.1
<400> 53
<210> 54
5 <211> 765
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-ORF46.1 10 <400> 54
<210> 55
<211> 1839
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-741
<400> 55
<211> 612
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 15 <223> 961cL-741
<400> 56
<210> 57
<211> 4218
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-983
<400> 57
<210> 58
<211> 1403
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-983
<400> 58
<210> 59
<211> 25
<212> ADN
5 <213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 59
cgcggatccg gagggggtgg tgtcg 25 10 <210> 60
<211> 27
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 60 cccgctcgag ttgcttggcg gcaaggc 27
<210> 61
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 61 cgcggatccg gcggaggcgg cactt 25
<210> 62
<211> 26
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 62 cccgctcgag gaaccggtag cctacg 26
<210> 63
<211> 41
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 63 cgcggatccg gtggtggtgg ttcagatttg gcaaacgatt c 41
<210> 64
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 64
cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
<210> 65
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 65 cgcggatccg gagggggtgg tgtcg 25
<210> 66
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 66 cccgctcgag ttattgcttg gcggcaag 28
<210> 67
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 67 cgcggatccg gcggaggcgg cactt 25
<210> 68
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 68 cccgctcgag tcagaaccgg tagcctac 28
<210> 69
<211> 41
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 69 cgcggatccg gtggtggtgg ttcagatttg gcaaacgatt c 41
<210> 70
<211> 32
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 70 cccgctcgag ttacgtatca tatttcacgt gc 32
<210> 71
<211> 42
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 71 cgcggatccg gtggtggtgg tcaaagcaag agcatccaaa cc 42
<210> 72
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 72 cccaagcttt tcgggcggta ttcgggcttc 30
<210> 73
<211> 39
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 73 cgcggatccg gtggtggtgg tgccacctac aaagtggac 39
<210> 74
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 74 gcccaagctt ttgtttggct gcctcgat 28
<210> 75
<211> 34
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 75 cgcggatccg gtggtggtgg tacaagcgac gacg 34
<210> 76
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 76 gcccaagctt ccactcgtaa ttgacgcc 28
<210> 77
<211> 41
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 77 cgcggatccg gtggtggtgg ttcagatttg gcaaacgatt c 41
<210> 78
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 78 cccaagcttc gtatcatatt tcacgtgc 28
<210> 79
<211> 44
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 79 cccaagcttg gtggtggtgg tggttcagat ttggcaaacg attc 44
<210> 80
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 80 cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
<210> 81
<211> 45
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 81 cccaagcttg gtggtggtgg tggtcaaagc aagagcatcc aaacc 45
<210> 82
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 82 cccgctcgag cgggcggtat tcgggctt 28
<210> 83
<211> 32
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 83 cgcggatccg ctagccccga tgttaaatcg gc 32
<210> 84
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 84 cggggatcca tcctgctctt ttttgccgg 29
<210> 85
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 85 cgcggatccg ctagcggaca cacttatttc ggcatc 36
<210> 86
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220> <223> Oligonucleótido
<400> 86 cgcggatccc cagcggtagc ctaatttgat 30
<210> 87
<211> 41
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 87 cgcggatccg gtggtggtgg ttcagatttg gcaaacgatt c 41
<210> 88
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 88 cccaagcttc gtatcatatt tcacgtgc 28
<210> 89
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 89 gcggcgtcga cggtggcgga ggcactggat cctcag 36
<210> 90
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 90 ggaggcactg gatcctcaga tttggcaaac gattc 35
<210> 91
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 91 cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
<210> 92
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 92 cggggatccg ggggcggcgg tggcg 25
<210> 93
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 93 cccaagctta tcctgctctt ttttgccggc 30
<210> 94
<211> 42
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 94 cgcggatccg gtggtggtgg tcaaagcaag agcatccaaa cc 42
<210> 95
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 95 cccaagcttc gggcggtatt cgggcttc 28
<210> 96
<211> 26
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 96 ccccaagctt gggggcggcg gtggcg 26
<210> 97
<211> 31
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 97 cccgctcgag atcctgctct tttttgccgg c 31
<210> 98
<211> 45
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 98 cccaagcttg gtggtggtgg tggtcaaagc aagagcatcc aaacc 45
<210> 99
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 99
cccgctcgag cgggcggtat tcgggctt 28
<210> 100
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 100 ggaggcactg gatccgcagc cacaaacgac gacga 35
<210> 101
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 101 gcggcctcga gggtggcgga ggcactggat ccgcag 36
<210> 102
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 102 cccgctcgag acccaqcttg taaggttg 28
<210> 103
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 103 ggaggcactg gatccgcagc cacaaacgac gacga 35
<210> 104
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 104 gcggcctcga gggtggcgga ggcactggat ccgcag 36
<210> 105
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 105 cccgctcgag ccactcgtaa ttgacgcc 28
<210> 106
<211> 38
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 106 gcggcctcga gggatccggc ggaggcggca cttctgcg 38
<210> 107
<211> 26
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 107 cccgctcgag gaaccggtag cctacg 26
<210> 108
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 108 ggaggcactg gatcctcaga tttggcaaac gattc 35
<210> 109
<211> 37
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 109 gcggcgtcga cggtggcgga ggcactggat cctcaga 37
<210> 110
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 110 cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
<210> 111
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 111 gcggcctcga gggatccgga gggggtggtg tcgcc 35
<210> 112
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 112 cccgctcgag ttgcttggcg gcaag 25
<210> 113
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 113 ggaggcactg gatccgcagc cacaaacgac gacga 35
<210> 114
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 114 gcggcctcga gggtggcgga ggcactggat ccgcag 36
<210> 115
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 115 cccgctcgag acccagcttg taaggttg 28
<210> 116
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 116 ggaggcactg gatccgcagc cacaaacgac gacga 35
<210> 117
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 117 gcggcctcga gggtggcgga ggcactggat ccgcag 36
<210> 118
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 118 cccgctcgag ccactcgtaa ttgacgcc 28
<210> 119
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 119 ggaggcactg gatcctcaga tttggcaaac gattc 35
<210> 120
<211> 37
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 120 gcggcgtcga cggtggcgga ggcactggat cctcaga 37
<210> 121
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220> <223> Oligonucleótido
<400> 121
cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
Listado de secuencias
5 <110> Novartis Vaccines and Diagnostics SRL
<120> Expresión híbrida de proteínas de Neisseria
<130> P048826EP
<150> EP-01914098.7
<151> 28 de febrero de 2001 10 <150> PCT/IB01/00420
<151> 28 de febrero 2001
<150> GB 0004695.3
<151> 28 de febrero 200
<150> GB0027875.8 15 <151> 13 de noviembre 2000
<160> 121
<170> SeqWin99, versión 1.02
<210> 1
<211> 608 20 <212> PRT
<213> Neisseria meningitidis
<400> 1
<210> 2
<211> 464
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287
<400> 2
<210> 3
<211> 2505
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-919
<400> 3
<210> 4 10 <211> 832
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-919
<400> 4
<210> 5
<211> 1746
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-953
<400> 5
<211> 579
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 15 <223> deltaG287-953
<400> 6
<210> 7
<211> 2388
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-961
<400> 7
<210> 8
<211> 793
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287-961
<400> 8
<210> 9
<211> 2700
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-919
<400> 9
<210> 10
<211> 897
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-919
<400> 10
<210> 11
<211> 1941
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-953
<400> 11
<210> 12
<211> 644
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-953
<400> 12
<210> 13
<211> 2583
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-961
<400> 13
<210> 14
<211> 858
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG287NZ-961
<400> 14
<210> 15
<211> 1082
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 983
<400> 15
<210> 16
<211> 1047
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983
<400> 16
<210> 17
<211> 4425
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-ORF46.1
<400> 17
<210> 18
<211> 1474
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-ORF46.1
<400> 18
<210> 19
<211> 3939
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-741
<400> 19
<210> 20
<211> 1312
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-741
<400> 20
<210> 21
<211> 4344
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-961
<400> 21
<210> 22
<211> 1447
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-961
<400> 22
<210> 23
<211> 4179
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-961c
<400> 23
<210> 24
<211> 1392
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG983-961c
<400> 24
<210> 25
<211> 274
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 741
<400> 25
<210> 26
<211> 248
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741
<400> 26
<210> 27
<211> 1947
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-961
<400> 27
<211> 648
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG791-961
<400> 28
<210> 29
<211> 1782
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-961c
<400> 29
<210> 30 10 <211> 593
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-961c 15 <400> 30
<210> 31
<211> 3939
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-983
<400> 31
<210> 32
<211> 1312
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-983
<400> 32
<210> 33
<211> 2028
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-ORF46.1
<400> 33
<211> 675
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> deltaG741-ORF46.1
<400> 34
<210> 35
<211> 2019
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-741
<400> 35
<211> 672
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-741
<400> 36
<210> 37
<211> 2421
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-961
<400> 37
<211> 806
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-961
<400> 38
<210> 39
<211> 2256
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-961c
<400> 39
<210> 40
<211> 751
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> ORF46.1-961c
<400> 40
<210> 41
<211> 2421
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-ORF46.1
<400> 41
<210> 42
<211> 806
<212> PRT 10 <213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-ORF46.1
<400> 42
<210> 43
<211> 1938
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-741
<400> 43
<210> 44
<211> 645
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-741
<400> 44
<210> 45
<211> 4335
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-983
<400> 45
<210> 46
<211> 1444
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961-983
<400> 46
<210> 47
<211> 2256
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-ORF46.1
<400> 47
<210> 48
<211> 751
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-ORF46.1
<400> 48
<210> 49
<211> 1773
<212> AND
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-741
<400> 49
<210> 50
<211> 590
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-741
<400> 50
<210> 51
<211> 4170
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-983
<400> 51
<210> 52
<211> 1389
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961c-983
<400> 52
<210> 53
<211> 2304
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-ORF46.1
<400> 53
<210> 54
5 <211> 765
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-ORF46.1 10 <400> 54
<210> 55
<211> 1839
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-741
<400> 55
<211> 612
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220> 15 <223> 961cL-741
<400> 56
<210> 57
<211> 4218
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-983
<400> 57
<210> 58
<211> 1403
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> 961cL-983
<400> 58
<210> 59
<211> 25
<212> ADN
5 <213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 59
cgcggatccg gagggggtgg tgtcg 25 10 <210> 60
<211> 27
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 60 cccgctcgag ttgcttggcg gcaaggc 27
<210> 61
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 61 cgcggatccg gcggaggcgg cactt 25
<210> 62
<211> 26
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 62 cccgctcgag gaaccggtag cctacg 26
<210> 63
<211> 41
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 63 cgcggatccg gtggtggtgg ttcagatttg gcaaacgatt c 41
<210> 64
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 64
cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
<210> 65
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 65 cgcggatccg gagggggtgg tgtcg 25
<210> 66
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 66 cccgctcgag ttattgcttg gcggcaag 28
<210> 67
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 67 cgcggatccg gcggaggcgg cactt 25
<210> 68
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 68 cccgctcgag tcagaaccgg tagcctac 28
<210> 69
<211> 41
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 69 cgcggatccg gtggtggtgg ttcagatttg gcaaacgatt c 41
<210> 70
<211> 32
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 70 cccgctcgag ttacgtatca tatttcacgt gc 32
<210> 71
<211> 42
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 71 cgcggatccg gtggtggtgg tcaaagcaag agcatccaaa cc 42
<210> 72
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 72 cccaagcttt tcgggcggta ttcgggcttc 30
<210> 73
<211> 39
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 73 cgcggatccg gtggtggtgg tgccacctac aaagtggac 39
<210> 74
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 74 gcccaagctt ttgtttggct gcctcgat 28
<210> 75
<211> 34
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 75 cgcggatccg gtggtggtgg tacaagcgac gacg 34
<210> 76
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 76 gcccaagctt ccactcgtaa ttgacgcc 28
<210> 77
<211> 41
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 77 cgcggatccg gtggtggtgg ttcagatttg gcaaacgatt c 41
<210> 78
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 78 cccaagcttc gtatcatatt tcacgtgc 28
<210> 79
<211> 44
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 79 cccaagcttg gtggtggtgg tggttcagat ttggcaaacg attc 44
<210> 80
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 80 cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
<210> 81
<211> 45
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 81 cccaagcttg gtggtggtgg tggtcaaagc aagagcatcc aaacc 45
<210> 82
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 82 cccgctcgag cgggcggtat tcgggctt 28
<210> 83
<211> 32
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 83 cgcggatccg ctagccccga tgttaaatcg gc 32
<210> 84
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 84 cggggatcca tcctgctctt ttttgccgg 29
<210> 85
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 85 cgcggatccg ctagcggaca cacttatttc ggcatc 36
<210> 86
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 86 cgcggatccc cagcggtagc ctaatttgat 30
<210> 87
<211> 41
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 87 cgcggatccg gtggtggtgg ttcagatttg gcaaacgatt c 41
<210> 88
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 88 cccaagcttc gtatcatatt tcacgtgc 28
<210> 89
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 89 gcggcgtcga cggtggcgga ggcactggat cctcag 36
<210> 90
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 90 ggaggcactg gatcctcaga tttggcaaac gattc 35
<210> 91
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 91 cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
<210> 92
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 92 cggggatccg ggggcggcgg tggcg 25
<210> 93
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 93 cccaagctta tcctgctctt ttttgccggc 30
<210> 94
<211> 42
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 94 cgcggatccg gtggtggtgg tcaaagcaag agcatccaaa cc 42
<210> 95
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 95 cccaagcttc gggcggtatt cgggcttc 28
<210> 96
<211> 26
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 96 ccccaagctt gggggcggcg gtggcg 26
<210> 97
<211> 31
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 97 cccgctcgag atcctgctct tttttgccgg c 31
<210> 98
<211> 45
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 98 cccaagcttg gtggtggtgg tggtcaaagc aagagcatcc aaacc 45
<210> 99
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 99
cccgctcgag cgggcggtat tcgggctt 28
<210> 100
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 100 ggaggcactg gatccgcagc cacaaacgac gacga 35
<210> 101
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 101 gcggcctcga gggtggcgga ggcactggat ccgcag 36
<210> 102
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 102 cccgctcgag acccaqcttg taaggttg 28
<210> 103
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 103 ggaggcactg gatccgcagc cacaaacgac gacga 35
<210> 104
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 104 gcggcctcga gggtggcgga ggcactggat ccgcag 36
<210> 105
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 105 cccgctcgag ccactcgtaa ttgacgcc 28
<210> 106
<211> 38
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 106 gcggcctcga gggatccggc ggaggcggca cttctgcg 38
<210> 107
<211> 26
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 107 cccgctcgag gaaccggtag cctacg 26
<210> 108
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 108 ggaggcactg gatcctcaga tttggcaaac gattc 35
<210> 109
<211> 37
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 109 gcggcgtcga cggtggcgga ggcactggat cctcaga 37
<210> 110
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 110 cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
<210> 111
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 111 gcggcctcga gggatccgga gggggtggtg tcgcc 35
<210> 112
<211> 25
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 112 cccgctcgag ttgcttggcg gcaag 25
<210> 113
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 113 ggaggcactg gatccgcagc cacaaacgac gacga 35
<210> 114
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 114 gcggcctcga gggtggcgga ggcactggat ccgcag 36
<210> 115
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 115 cccgctcgag acccagcttg taaggttg 28
<210> 116
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 116 ggaggcactg gatccgcagc cacaaacgac gacga 35
<210> 117
<211> 36
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 117 gcggcctcga gggtggcgga ggcactggat ccgcag 36
<210> 118
<211> 28
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 118 cccgctcgag ccactcgtaa ttgacgcc 28
<210> 119
<211> 35
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 119 ggaggcactg gatcctcaga tttggcaaac gattc 35
<210> 120
<211> 37
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> Oligonucleótido
<400> 120 gcggcgtcga cggtggcgga ggcactggat cctcaga 37
<210> 121
<211> 29
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220> <223> Oligonucleótido
<400> 121 cccgctcgag cgtatcatat ttcacgtgc 29
Claims (2)
- REIVINDICACIONES1.- Una proteína híbrida de fórmula NH2-A-B-COOH, en la que A comprende la proteína G287 de Neisseria, y B comprende la proteína 961 de Neisseria, y en la que la secuencia de aminoácidos de la proteína híbrida es la descrita en SEQ ID NO:8, o es una secuencia que tiene más de 70% de identidad de secuencia con ésta.
- 2.- La proteína de la reivindicación 1, en la que G287 es de la cepa 2996 o 394/98 3.- La proteína de la reivindicación 1, en la que 961 es de la cepa 2996 o 394/98. 4.- La proteína de la reivindicación 1, en la que A y B son de la misma cepa. 5.- La proteína de la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos definida en SEQ ID NO:8.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0004695 | 2000-02-28 | ||
| GB0004695A GB0004695D0 (en) | 2000-02-28 | 2000-02-28 | Protein expression |
| GB0027675A GB0027675D0 (en) | 2000-11-13 | 2000-11-13 | Protein Expression |
| GB0027675 | 2000-11-13 | ||
| EP01914098A EP1261723B1 (en) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Hybrid expression of neisserial proteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2360746T3 true ES2360746T3 (es) | 2011-06-08 |
| ES2360746T9 ES2360746T9 (es) | 2012-02-13 |
Family
ID=26243750
Family Applications (5)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES01914109T Expired - Lifetime ES2281409T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresion heterologa de proteinas de neisseria. |
| ES01914098T Expired - Lifetime ES2299476T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresion hibrida de proteinas de neisseria. |
| ES10178586T Expired - Lifetime ES2386534T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresión heteróloga de proteínas de Neisseria |
| ES08075111T Expired - Lifetime ES2360746T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresión híbrida de proteínas e neisseriales. |
| ES06076718T Expired - Lifetime ES2391153T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresión heteróloga de proteínas de Neisseria |
Family Applications Before (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES01914109T Expired - Lifetime ES2281409T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresion heterologa de proteinas de neisseria. |
| ES01914098T Expired - Lifetime ES2299476T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresion hibrida de proteinas de neisseria. |
| ES10178586T Expired - Lifetime ES2386534T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresión heteróloga de proteínas de Neisseria |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06076718T Expired - Lifetime ES2391153T3 (es) | 2000-02-28 | 2001-02-28 | Expresión heteróloga de proteínas de Neisseria |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (9) | US7803387B2 (es) |
| EP (6) | EP1259627B1 (es) |
| JP (8) | JP4763210B2 (es) |
| CN (7) | CN1201011C (es) |
| AT (3) | ATE352631T1 (es) |
| AU (4) | AU3947801A (es) |
| BR (2) | BR0108711A (es) |
| CA (5) | CA2875231A1 (es) |
| CY (6) | CY1106532T1 (es) |
| DE (3) | DE60144353D1 (es) |
| DK (4) | DK2270030T3 (es) |
| ES (5) | ES2281409T3 (es) |
| LU (1) | LU92240I2 (es) |
| MX (2) | MXPA02008313A (es) |
| NL (1) | NL300605I2 (es) |
| NZ (2) | NZ521396A (es) |
| PT (4) | PT2270030E (es) |
| RU (2) | RU2299906C2 (es) |
| WO (2) | WO2001064920A2 (es) |
Families Citing this family (92)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2298900A1 (en) | 1996-09-17 | 2011-03-23 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Compositions and methods for treating intracellular diseases |
| ATE446368T1 (de) * | 1998-01-14 | 2009-11-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Antigene aus neisseria meningitidis |
| MX343752B (es) | 1998-05-01 | 2016-11-22 | Novartis Vaccines & Diagnostics Inc | Antigenos de neisseria meningitidis y composiciones que los contienen. |
| US20070026021A1 (en) * | 1998-05-01 | 2007-02-01 | Chiron S.R.I. | Neisseria meningitidis antigens and compositions |
| AU2457100A (en) * | 1999-02-26 | 2000-09-14 | Chiron S.P.A. | Enhancement of bactericidal activity of neisseria antigens with oligonucleotidescontaining cg motifs |
| NZ571167A (en) | 1999-04-30 | 2010-05-28 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Fragments from Neisseria protein ORF 953 and their use in medicaments and diagnostic reagents |
| GB9911683D0 (en) * | 1999-05-19 | 1999-07-21 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
| EP1179072A2 (en) | 1999-05-19 | 2002-02-13 | Chiron S.P.A. | Combination neisserial compositions |
| PT2275551E (pt) | 1999-10-29 | 2015-06-29 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Péptidos antigénicos de neisseria |
| GB9928196D0 (en) | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
| ES2588917T3 (es) | 2000-01-17 | 2016-11-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vacuna de VME suplementada contra meningococo |
| PT2270030E (pt) | 2000-02-28 | 2012-07-24 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Expressão heteróloga de proteínas de neisseria |
| JP2004529643A (ja) * | 2001-04-17 | 2004-09-30 | カイロン コーポレイション | 機能活性抗体を誘発する髄膜炎菌性ｂエピトープの分子模倣物 |
| GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| US6928463B1 (en) * | 2001-07-06 | 2005-08-09 | Nortel Networks Limited | Broadband content delivery via personal content tunnel |
| GB0118249D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
| GB0121591D0 (en) * | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| ES2615362T3 (es) * | 2001-07-27 | 2017-06-06 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Adhesinas de meningococos |
| AU2014201962B2 (en) * | 2001-09-06 | 2016-06-09 | Glaxosmithkline Vaccines S.R.L. | Hybrid and tandem expression of Neisserial proteins |
| AR045702A1 (es) | 2001-10-03 | 2005-11-09 | Chiron Corp | Composiciones de adyuvantes. |
| US7838015B2 (en) | 2001-10-03 | 2010-11-23 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Adjuvanted meningococcus compositions |
| NZ532274A (en) * | 2001-10-03 | 2006-02-24 | Chiron Corp | Adjuvanted meningococcus compositions |
| MX339524B (es) * | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| CN1674933B (zh) * | 2002-08-02 | 2012-09-26 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 疫苗组合物 |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| EP2351579B1 (en) * | 2002-10-11 | 2016-09-21 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Polypeptide vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages |
| CA2503871C (en) | 2002-11-01 | 2012-12-11 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | An immunogenic composition for generating an immune response against polio virus |
| CA2506318C (en) | 2002-11-15 | 2011-07-12 | Chiron Srl | Unexpected surface proteins in neisseria meningitidis |
| GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
| DK1587537T3 (da) | 2003-01-30 | 2012-07-16 | Novartis Ag | Injicerbare vacciner mod multiple meningococ-serogrupper |
| WO2005019265A1 (en) | 2003-08-13 | 2005-03-03 | Chiron Corporation | Improved method of purifying tfpi and tfpi analogs |
| ES2397923T3 (es) | 2003-10-02 | 2013-03-12 | Novartis Ag | Vacunas líquidas para múltiples serogrupos meningocócicos |
| GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
| GB0408977D0 (en) | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Chiron Srl | Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins |
| GB0409748D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Lactoferrin cleavage |
| GB0419408D0 (en) * | 2004-09-01 | 2004-10-06 | Chiron Srl | 741 chimeric polypeptides |
| GB0424092D0 (en) | 2004-10-29 | 2004-12-01 | Chiron Srl | Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins |
| JP2008530245A (ja) | 2005-02-18 | 2008-08-07 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド | 尿路病原性菌株由来の抗原 |
| AU2006214064B2 (en) | 2005-02-18 | 2012-04-26 | J. Craig Venter Institute, Inc. | Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli |
| CN100475965C (zh) * | 2005-07-22 | 2009-04-08 | 上海高科联合生物技术研发有限公司 | 一种大肠杆菌高效外分泌表达溶葡萄球菌酶的方法 |
| GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| CA2632434A1 (en) * | 2005-12-06 | 2007-06-14 | Universita Degli Studi Di Padova | Methods and compositions relating to adhesins as adjuvants |
| EP2586790A3 (en) | 2006-08-16 | 2013-08-14 | Novartis AG | Immunogens from uropathogenic Escherichia coli |
| AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| GB0700562D0 (en) | 2007-01-11 | 2007-02-21 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modified Saccharides |
| GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
| HRP20120433T1 (en) | 2007-10-19 | 2012-07-31 | Novartis@Ag | Meningococcal vaccine formulations |
| AU2009215364B2 (en) | 2008-02-21 | 2014-09-18 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Meningococcal fHBP polypeptides |
| SI2268618T1 (sl) | 2008-03-03 | 2015-09-30 | Novartis Ag | Spojine in sestavki kot modulatorji aktivnosti TLR |
| RU2360926C9 (ru) * | 2008-03-17 | 2009-09-10 | Всеволод Иванович Киселев | ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК CFP10-ESAT6, ИНДУЦИРУЮЩИЙ РЕАКЦИЮ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЗАМЕДЛЕННОГО ТИПА В ОТНОШЕНИИ M.Tuberculosis, КОДИРУЮЩАЯ ЕГО ХИМЕРНАЯ НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ПЛАЗМИДНЫЙ ЭКСПРЕССИРУЮЩИЙ ВЕКТОР, ЕЕ СОДЕРЖАЩИЙ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИБРИДНОГО БЕЛКА И ДОЗИРОВАННАЯ ЛЕКАРСТВЕННАЯ ФОРМА ДЛЯ ВНУТРИКОЖНОЙ ИНЪЕКЦИИ НА ЕГО ОСНОВЕ |
| EP2294085A1 (en) * | 2008-06-09 | 2011-03-16 | Novartis AG | Antibodies against neisserial factor h binding protein |
| JP5487463B2 (ja) * | 2008-08-08 | 2014-05-07 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 非拡散植物ウイルスベクター |
| CN104548082A (zh) | 2009-03-24 | 2015-04-29 | 诺华股份有限公司 | 为脑膜炎球菌因子h结合蛋白添加佐剂 |
| CA2765112A1 (en) | 2009-06-10 | 2010-12-16 | Novartis Ag | Benzonaphthyridine-containing vaccines |
| EP2443250B8 (en) | 2009-06-16 | 2016-09-21 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | High-throughput complement-mediated antibody-dependent and opsonic bactericidal assays |
| WO2011024072A2 (en) | 2009-08-27 | 2011-03-03 | Novartis Ag | Hybrid polypeptides including meningococcal fhbp sequences |
| US9950062B2 (en) | 2009-09-02 | 2018-04-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compounds and compositions as TLR activity modulators |
| JO3257B1 (ar) | 2009-09-02 | 2018-09-16 | Novartis Ag | مركبات وتركيبات كمعدلات لفاعلية tlr |
| CN102724988B (zh) | 2009-09-30 | 2014-09-10 | 诺华股份有限公司 | 脑膜炎球菌fHBP多肽的表达 |
| CA2779816A1 (en) | 2009-10-27 | 2011-05-05 | Novartis Ag | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| WO2011057148A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-12 | Irm Llc | Compounds and compositions as tlr-7 activity modulators |
| JP5814933B2 (ja) | 2009-12-15 | 2015-11-17 | ノバルティス アーゲー | 免疫増強化合物の均質な懸濁物およびその使用 |
| EA031379B1 (ru) | 2010-03-23 | 2018-12-28 | Новартис Аг | Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний |
| WO2011161653A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Novartis Ag | Combinations of meningococcal factor h binding proteins |
| CA2808975C (en) | 2010-08-23 | 2018-10-30 | Wyeth Llc | Stable formulations of neisseria meningitidis rlp2086 antigens |
| KR101584871B1 (ko) | 2010-09-10 | 2016-01-22 | 와이어쓰 엘엘씨 | 네이세리아 메닝기티디스 orf2086 항원의 비-지질화된 변이체 |
| CA2810971C (en) | 2010-09-10 | 2020-11-03 | Novartis Ag | Developments in meningococcal outer membrane vesicles |
| GB201102090D0 (en) * | 2011-02-08 | 2011-03-23 | Univ Sheffield | Antigenic polypeptide |
| CA2846290A1 (en) | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Children's Hospital & Research Center Oakland | Engineered sequences to facilitate expression of antigens in neisseria and methods of use |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| CA2865745C (en) | 2012-03-09 | 2018-01-09 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| ES2847923T3 (es) | 2012-06-14 | 2021-08-04 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vacunas contra el meningococo del serogrupo X |
| CN104736563A (zh) | 2012-07-27 | 2015-06-24 | 国家健康与医学研究院 | Cd147作为受体用于脑膜炎球菌至血管内皮的菌毛介导的粘附 |
| WO2014084432A1 (ko) * | 2012-11-30 | 2014-06-05 | 경상대학교 산학협력단 | 헬리코박터 파일로리 발현 벡터 |
| CA2903716C (en) | 2013-03-08 | 2019-04-09 | Pfizer Inc. | Immunogenic fusion polypeptides |
| RU2662968C2 (ru) | 2013-09-08 | 2018-07-31 | Пфайзер Инк. | Иммуногенная композиция против neisseria meningitidis (варианты) |
| CN106661092B (zh) | 2014-02-28 | 2021-07-06 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 修饰的脑膜炎球菌fHbp多肽 |
| BR112017001417B1 (pt) | 2014-07-23 | 2023-11-07 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Variantes da proteína de ligação ao fator h (fhbp), composição imunogênica e uso de uma fhbp variante referência cruzada |
| KR20190049940A (ko) | 2015-02-19 | 2019-05-09 | 화이자 인코포레이티드 | 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법 |
| GB201522153D0 (en) | 2015-12-15 | 2016-01-27 | Univ Southampton | Meningococcal infection and modified neisseria lactamica |
| JP7104027B2 (ja) | 2016-09-02 | 2022-07-20 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 淋菌に対するワクチン |
| EP3312192B1 (en) * | 2016-10-24 | 2023-02-22 | BiOMVis Srl | Immunogenic compositions containing bacterial outer membrane vesicles |
| SG11201906519RA (en) | 2017-01-31 | 2019-08-27 | Pfizer | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| CN110516550B (zh) * | 2019-07-26 | 2022-07-05 | 电子科技大学 | 一种基于fpga的车道线实时检测方法 |
| CA3155669A1 (en) | 2019-09-27 | 2021-04-01 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| MX2022006299A (es) * | 2019-11-25 | 2023-01-19 | Univ Griffith | Proteína inmunogénica contra una infección gonocócica. |
| CN116670157A (zh) * | 2020-10-23 | 2023-08-29 | Omvax公司 | 用于抗淋病奈瑟球菌的疫苗接种的组合物和方法 |
| TW202245836A (zh) | 2021-02-19 | 2022-12-01 | 美商賽諾菲巴斯德公司 | 重組ｂ型腦膜炎球菌疫苗 |
| GB202208089D0 (en) | 2022-06-01 | 2022-07-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic composition |
| GB202208093D0 (en) | 2022-06-01 | 2022-07-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic composition |
| TW202423477A (zh) | 2022-08-03 | 2024-06-16 | 美商賽諾菲巴斯德公司 | 針對腦膜炎奈瑟氏菌b的含佐劑免疫原性組成物 |
| WO2026072910A1 (en) | 2024-09-27 | 2026-04-02 | Sanofi Pasteur Inc. | Anti-meningococcal antibodies for in vitro immunoassay |
Family Cites Families (131)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4239749A (en) | 1979-09-27 | 1980-12-16 | United States Of America | Neisseria gonorrhoeae vaccine |
| US5288641A (en) | 1984-06-04 | 1994-02-22 | Arch Development Corporation | Herpes Simplex virus as a vector |
| CA1282721C (en) | 1984-06-04 | 1991-04-09 | Bernard Roizman | Herpes simplex virus as a vector |
| EP0273116A3 (en) | 1986-10-09 | 1990-05-02 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Gonococcal and meningococcal polypeptides, vaccines and diagnostics |
| GB8702816D0 (en) | 1987-02-07 | 1987-03-11 | Al Sumidaie A M K | Obtaining retrovirus-containing fraction |
| US5270176A (en) * | 1987-11-20 | 1993-12-14 | Hoechst Aktiengesellschaft | Method for the selective cleavage of fusion proteins with lysostaphin |
| CA1340506C (en) * | 1987-11-24 | 1999-04-20 | Nicholas H. Carbonetti | Production of gonorrheal pi proteins and vaccines |
| CN1038306A (zh) | 1988-03-21 | 1989-12-27 | 维吉恩公司 | 重组反转录病毒 |
| US5591624A (en) | 1988-03-21 | 1997-01-07 | Chiron Viagene, Inc. | Retroviral packaging cell lines |
| US5422120A (en) | 1988-05-30 | 1995-06-06 | Depotech Corporation | Heterovesicular liposomes |
| AP129A (en) | 1988-06-03 | 1991-04-17 | Smithkline Biologicals S A | Expression of retrovirus gag protein eukaryotic cells |
| AU640118B2 (en) | 1988-12-19 | 1993-08-19 | De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezonheid En Cultuur | Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine |
| NL8803111A (nl) | 1988-12-19 | 1990-07-16 | Nederlanden Staat | Multivalent meningococcen klasse i buitenmembraaneiwit vaccin. |
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| DK0737750T3 (da) | 1989-03-21 | 2003-09-01 | Vical Inc | Ekspression af exogene polynucleotidsekvenser i vertebrater |
| GB8919607D0 (en) | 1989-08-30 | 1989-10-11 | Wellcome Found | Novel entities for cancer therapy |
| CU22302A1 (es) * | 1990-09-07 | 1995-01-31 | Cigb | Secuencia nucleotidica codificante para una proteina de la membrana externa de neisseria meningitidis y uso de dicha proteina en preparados vacunales |
| EP0467714A1 (en) | 1990-07-19 | 1992-01-22 | Merck & Co. Inc. | The class II protein of the outer membrane of neisseria meningitidis |
| EP0549723A1 (en) | 1990-09-21 | 1993-07-07 | Chiron Corporation | Packaging cells |
| US5965424A (en) * | 1991-01-11 | 1999-10-12 | Boehringer Mannheim Gmbh | Methods for making neisseria or hemophilus IgA protease and DNA encoding the proteases |
| ES2127217T3 (es) * | 1991-03-14 | 1999-04-16 | Imclone Systems Inc | Epitopos de porina hibridos de recombinacion. |
| FR2681786A1 (fr) | 1991-09-27 | 1993-04-02 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs recombinants d'origine virale, leur procede d'obtention et leur utilisation pour l'expression de polypeptides dans des cellules musculaires. |
| IL103059A0 (en) | 1991-09-30 | 1993-02-21 | Boehringer Ingelheim Int | Conjugates for introducing nucleic acid into higher eucaryotic cells |
| NZ244306A (en) | 1991-09-30 | 1995-07-26 | Boehringer Ingelheim Int | Composition for introducing nucleic acid complexes into eucaryotic cells, complex containing nucleic acid and endosomolytic agent, peptide with endosomolytic domain and nucleic acid binding domain and preparation |
| US6100380A (en) | 1991-10-28 | 2000-08-08 | Cytran, Inc. | Immunomodulating peptides and methods of use |
| JPH07503372A (ja) | 1992-01-23 | 1995-04-13 | バイカル・インコーポレイテッド | 生体外遺伝子導入 |
| FR2692592B1 (fr) * | 1992-06-19 | 1995-03-31 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Fragments d'ADN codant pour les sous-unités du récepteur de la transferrine de Neisseria meningitidis et procédés les exprimant. |
| EP1167543B1 (en) | 1992-07-07 | 2005-10-19 | Fuso Pharmaceutical Industries Ltd. | Probe for diagnosing infectious disease arising from Staphylococcus epidermidis |
| US6592873B1 (en) | 1992-10-30 | 2003-07-15 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids |
| CA2132742C (en) | 1993-01-23 | 2000-04-18 | Carmen Vela Olmo | Synthetic peptides and vaccines against parvovirus |
| US5439808A (en) * | 1993-07-23 | 1995-08-08 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| WO1995004133A1 (en) * | 1993-07-30 | 1995-02-09 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Production of gonorrheal pi proteins and vaccines in e. coli and salmonella |
| US5914254A (en) * | 1993-08-02 | 1999-06-22 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Expression of fusion polypeptides transported out of the cytoplasm without leader sequences |
| US5510264A (en) | 1993-09-28 | 1996-04-23 | Insight Biotech Inc. | Antibodies which bind meningitis related homologous antigenic sequences |
| HUT75162A (en) | 1993-11-16 | 1997-04-28 | Depotech Corp | Vesicles with controlled release of actives |
| DE69535669T2 (de) | 1994-05-09 | 2008-12-04 | Oxford Biomedica (Uk) Ltd. | Retrovirale vektoren mit verminderter rekombinationsrate |
| FR2720408B1 (fr) | 1994-05-31 | 1996-08-14 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Fragments Tbp2 de Neisseria meningitidis. |
| US6245337B1 (en) | 1994-08-25 | 2001-06-12 | Washington University | Haemophilus adherence and penetration proteins |
| IL117483A (en) | 1995-03-17 | 2008-03-20 | Bernard Brodeur | MENINGITIDIS NEISSERIA shell protein is resistant to proteinase K. |
| US5646259A (en) | 1995-03-24 | 1997-07-08 | St. Louis University | DNA encoding haemophilus adhesion proteins |
| US6265567B1 (en) | 1995-04-07 | 2001-07-24 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Isolated FrpB nucleic acid molecule |
| JP4091112B2 (ja) * | 1995-06-07 | 2008-05-28 | コノート ラボラトリーズ インコーポレーテッド | リポタンパク質の発現 |
| DE19534579C2 (de) | 1995-09-18 | 2000-06-08 | Max Planck Gesellschaft | Nucleinsäure-Moleküle codierend Proteine, die die Adhäsion von Neisseria-Zellen an humane Zellen vermitteln |
| PT854729E (pt) | 1995-09-18 | 2004-08-31 | Us Army Med Res Mat Com Usamrm | Metodos melhorados para a producao de vacinas de subunidade multivalentes de proteossomas complexados nao covalentemente |
| FR2739624B1 (fr) * | 1995-10-10 | 1997-12-05 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Nouvelle sous-unite tbp2 de neisseria meningitidis |
| ZA9610456B (en) * | 1995-12-20 | 1997-06-20 | Novo Nordisk As | N-terminally extended proteins expressed in yeast |
| EP0877816A1 (en) | 1996-02-01 | 1998-11-18 | North American Vaccine, Inc. | Expression of group b neisseria meningitidis outer membrane (mb3) protein from yeast and vaccines |
| US6083499A (en) | 1996-04-19 | 2000-07-04 | Mycogen Corporation | Pesticidal toxins |
| WO1998017805A2 (en) | 1996-10-24 | 1998-04-30 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES, c/o Centers for Disease Control and Prevention, Technology Transfer Office | Invasion associated genes from neisseria meningitidis serogroup b |
| US5980898A (en) | 1996-11-14 | 1999-11-09 | The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command | Adjuvant for transcutaneous immunization |
| DE69740108D1 (de) | 1996-12-20 | 2011-03-10 | Univ Texas | Moraxella catarrhalis antigene uspa1 und uspa2 |
| US6017531A (en) | 1997-06-02 | 2000-01-25 | W. R. Grace & Co. | Hydrophilic composition containing protease produced by Vibrio |
| US6583275B1 (en) | 1997-07-02 | 2003-06-24 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid sequences and expression system relating to Enterococcus faecium for diagnostics and therapeutics |
| BR9813930A (pt) * | 1997-11-06 | 2006-12-19 | Chiron Spa | antìgeno neisserial |
| US6914131B1 (en) * | 1998-10-09 | 2005-07-05 | Chiron S.R.L. | Neisserial antigens |
| GB9726398D0 (en) | 1997-12-12 | 1998-02-11 | Isis Innovation | Polypeptide and coding sequences |
| ATE446368T1 (de) * | 1998-01-14 | 2009-11-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Antigene aus neisseria meningitidis |
| NZ525674A (en) * | 1998-02-03 | 2005-01-28 | Ct Disease Contr & Prevention | Recombinant lipidated PsaA protein, methods of preparation and use |
| US6426417B1 (en) * | 1998-02-11 | 2002-07-30 | Eli Lilly And Company | Processes and intermediates useful to make antifolates |
| GB9808734D0 (en) | 1998-04-23 | 1998-06-24 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| GB9808866D0 (en) | 1998-04-24 | 1998-06-24 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| US6150502A (en) | 1998-04-29 | 2000-11-21 | Genesis Research & Development Corporation Limited | Polypeptides expressed in skin cells |
| US20070026021A1 (en) | 1998-05-01 | 2007-02-01 | Chiron S.R.I. | Neisseria meningitidis antigens and compositions |
| MX343752B (es) * | 1998-05-01 | 2016-11-22 | Novartis Vaccines & Diagnostics Inc | Antigenos de neisseria meningitidis y composiciones que los contienen. |
| US6615024B1 (en) * | 1998-05-01 | 2003-09-02 | Arraycomm, Inc. | Method and apparatus for determining signatures for calibrating a communication station having an antenna array |
| US5990085A (en) * | 1998-05-04 | 1999-11-23 | Michigan State University | Inhibin-HBc fusion protein |
| GB9810276D0 (en) | 1998-05-13 | 1998-07-15 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| US6248329B1 (en) * | 1998-06-01 | 2001-06-19 | Ramaswamy Chandrashekar | Parasitic helminth cuticlin nucleic acid molecules and uses thereof |
| BR9914374A (pt) * | 1998-10-09 | 2002-09-17 | Chiron Corp | Sequências genÈmicas de neisseria e métodos para seu uso |
| JP2004537954A (ja) | 1999-01-15 | 2004-12-24 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ナイセリア・メニンギティディス・ポリペプチドｂａｓｂ０５２ |
| WO2000043518A1 (en) | 1999-01-22 | 2000-07-27 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Neisseria meningitidis antigenic polypeptides, corresponding polynucleotides and protective antibodies |
| GB9902084D0 (en) | 1999-01-29 | 1999-03-24 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| AU2457100A (en) * | 1999-02-26 | 2000-09-14 | Chiron S.P.A. | Enhancement of bactericidal activity of neisseria antigens with oligonucleotidescontaining cg motifs |
| ES2323845T3 (es) | 1999-04-30 | 2009-07-27 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Secuencias genomicas de neisseria y procedimientos de uso. |
| NZ571167A (en) * | 1999-04-30 | 2010-05-28 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Fragments from Neisseria protein ORF 953 and their use in medicaments and diagnostic reagents |
| GB9911683D0 (en) | 1999-05-19 | 1999-07-21 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
| EP1179072A2 (en) * | 1999-05-19 | 2002-02-13 | Chiron S.P.A. | Combination neisserial compositions |
| GB9916529D0 (en) | 1999-07-14 | 1999-09-15 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
| PT2275551E (pt) * | 1999-10-29 | 2015-06-29 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Péptidos antigénicos de neisseria |
| ATE460484T1 (de) * | 1999-11-29 | 2010-03-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | 85 kda antigen von neisseria |
| GB9928676D0 (en) | 1999-12-03 | 2000-02-02 | Provalis Uk Ltd | Pseudomonas aeruginosa antigens |
| US20010031268A1 (en) * | 1999-12-17 | 2001-10-18 | Baldwin Thomas John | Antigen preparations |
| ES2588917T3 (es) * | 2000-01-17 | 2016-11-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vacuna de VME suplementada contra meningococo |
| AU2818101A (en) | 2000-01-25 | 2001-08-07 | University Of Queensland, The | proteins comprising conserved regions of neisseria meningitidis surface antigen NhhA |
| PT2270030E (pt) | 2000-02-28 | 2012-07-24 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Expressão heteróloga de proteínas de neisseria |
| JP2004520803A (ja) | 2000-04-21 | 2004-07-15 | コリクサ コーポレイション | 尋常性挫瘡の治療および診断のための組成物および方法 |
| ATE440861T1 (de) | 2000-07-03 | 2009-09-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Immunisierung gegen chlamydia pneumoniae |
| GB0017149D0 (en) | 2000-07-12 | 2000-08-30 | Chiron Spa | Helicobacter pylori mutants |
| GB0103170D0 (en) | 2001-02-08 | 2001-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
| US20040073294A1 (en) * | 2002-09-20 | 2004-04-15 | Conor Medsystems, Inc. | Method and apparatus for loading a beneficial agent into an expandable medical device |
| GB0103424D0 (en) * | 2001-02-12 | 2001-03-28 | Chiron Spa | Gonococcus proteins |
| CN100350972C (zh) | 2001-07-26 | 2007-11-28 | 启龙股份公司 | 含有铝佐剂和组氨酸的疫苗 |
| GB0118249D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
| ES2615362T3 (es) | 2001-07-27 | 2017-06-06 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Adhesinas de meningococos |
| GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| GB0129007D0 (en) * | 2001-12-04 | 2002-01-23 | Chiron Spa | Adjuvanted antigenic meningococcal compositions |
| CN1674933B (zh) | 2002-08-02 | 2012-09-26 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 疫苗组合物 |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| EP2351579B1 (en) * | 2002-10-11 | 2016-09-21 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Polypeptide vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages |
| GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
| EP1590459A2 (en) | 2003-01-15 | 2005-11-02 | Wyeth Holdings Corporation | Methods for increasing neisseria protein expression and compositions thereof |
| DK1587537T3 (da) * | 2003-01-30 | 2012-07-16 | Novartis Ag | Injicerbare vacciner mod multiple meningococ-serogrupper |
| BRPI0409459A (pt) | 2003-04-16 | 2006-05-02 | Wyeth Corp | novas composições imunogênicas para a prevenção e tratamento de doença meningocócica |
| GB0315021D0 (en) * | 2003-06-26 | 2003-07-30 | Chiron Srl | Immunogenic gonococcal compositions |
| ES2397923T3 (es) * | 2003-10-02 | 2013-03-12 | Novartis Ag | Vacunas líquidas para múltiples serogrupos meningocócicos |
| GB0323103D0 (en) * | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
| GB0408977D0 (en) * | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Chiron Srl | Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins |
| GB0409748D0 (en) * | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Lactoferrin cleavage |
| GB0410866D0 (en) * | 2004-05-14 | 2004-06-16 | Chiron Srl | Haemophilius influenzae |
| GB0419408D0 (en) | 2004-09-01 | 2004-10-06 | Chiron Srl | 741 chimeric polypeptides |
| CN101107007B (zh) | 2005-01-27 | 2011-08-17 | 奥克兰儿童医院及研究中心 | 对脑膜炎奈瑟球菌所致疾病具有广谱保护作用的gna1870囊泡疫苗 |
| GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| NZ572054A (en) | 2006-03-22 | 2011-12-22 | Novartis Ag | Regimens for immunisation with meningococcal conjugates |
| TW200806315A (en) | 2006-04-26 | 2008-02-01 | Wyeth Corp | Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions |
| AU2007263531B2 (en) * | 2006-06-29 | 2012-03-15 | J. Craig Venter Institute, Inc. | Polypeptides from neisseria meningitidis |
| AR064642A1 (es) * | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| WO2008125985A2 (en) | 2007-04-11 | 2008-10-23 | Novartis Ag | Blocking interaction between pathogen factors and factor h to inhibit hemorrhagic syndromes |
| IN2009KN04098A (es) | 2007-06-04 | 2015-08-28 | Novartis Ag | |
| AU2009215364B2 (en) | 2008-02-21 | 2014-09-18 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Meningococcal fHBP polypeptides |
| SI2268618T1 (sl) * | 2008-03-03 | 2015-09-30 | Novartis Ag | Spojine in sestavki kot modulatorji aktivnosti TLR |
| AU2009223613B2 (en) | 2008-03-10 | 2014-09-25 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Chimeric factor H binding proteins (fHBP) containing a heterologous B domain and methods of use |
| WO2010028096A2 (en) | 2008-09-03 | 2010-03-11 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Peptides presenting an epitope of an a domain of factor h binding protein and methods of use |
| IT1394288B1 (it) | 2008-09-12 | 2012-06-06 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Immunogeni di proteine che legano il fattore h. |
| GB0819633D0 (en) | 2008-10-25 | 2008-12-03 | Isis Innovation | Composition |
| CN104548082A (zh) | 2009-03-24 | 2015-04-29 | 诺华股份有限公司 | 为脑膜炎球菌因子h结合蛋白添加佐剂 |
| JP2013538217A (ja) * | 2010-09-01 | 2013-10-10 | ノバルティス アーゲー | 不溶性金属塩への免疫増強物質の吸着 |
| EP2612148B1 (en) * | 2010-09-04 | 2019-06-12 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Bactericidal antibody assays to assess immunogenicity and potency of meningococcal capsular saccharide vaccines |
| CA2810971C (en) * | 2010-09-10 | 2020-11-03 | Novartis Ag | Developments in meningococcal outer membrane vesicles |
| RU2632651C2 (ru) * | 2011-05-11 | 2017-10-06 | Чилдрен'С Медикал Сентер Корпорейшн | Модифицированный биотин-связывающий белок, слитые белки на его основе и их применение |
| US9184727B2 (en) * | 2012-06-11 | 2015-11-10 | Phonon Corporation | SAW device and method for post-seal frequency trimming |
-
2001
- 2001-02-28 PT PT10178586T patent/PT2270030E/pt unknown
- 2001-02-28 RU RU2002125882/13A patent/RU2299906C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-02-28 MX MXPA02008313A patent/MXPA02008313A/es active IP Right Grant
- 2001-02-28 CN CNB018087507A patent/CN1201011C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 PT PT01914098T patent/PT1261723E/pt unknown
- 2001-02-28 EP EP01914109A patent/EP1259627B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 CA CA2875231A patent/CA2875231A1/en not_active Abandoned
- 2001-02-28 AU AU3947801A patent/AU3947801A/xx active Pending
- 2001-02-28 EP EP10178655A patent/EP2270031A3/en not_active Ceased
- 2001-02-28 EP EP01914098A patent/EP1261723B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 DE DE60144353T patent/DE60144353D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 CN CNB018087388A patent/CN100339482C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 EP EP08075111A patent/EP1947187B9/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 EP EP06076718A patent/EP1790660B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 MX MXPA02008314A patent/MXPA02008314A/es active IP Right Grant
- 2001-02-28 US US10/220,481 patent/US7803387B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 CN CN2007101391568A patent/CN101139590B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 CN CNB2003101028453A patent/CN100473663C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 DK DK10178586.3T patent/DK2270030T3/da active
- 2001-02-28 JP JP2001563611A patent/JP4763210B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 DE DE60126249T patent/DE60126249T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 DK DK01914098T patent/DK1261723T3/da active
- 2001-02-28 PT PT06076718T patent/PT1790660E/pt unknown
- 2001-02-28 CN CN2010101656630A patent/CN101906413A/zh active Pending
- 2001-02-28 AT AT01914109T patent/ATE352631T1/de active
- 2001-02-28 DK DK08075111.8T patent/DK1947187T5/da active
- 2001-02-28 ES ES01914109T patent/ES2281409T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 CA CA2689666A patent/CA2689666C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 EP EP10178586A patent/EP2270030B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 ES ES01914098T patent/ES2299476T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 US US10/220,480 patent/US20040092711A1/en not_active Abandoned
- 2001-02-28 AU AU2001239488A patent/AU2001239488B2/en not_active Ceased
- 2001-02-28 AT AT01914098T patent/ATE387502T1/de active
- 2001-02-28 BR BR0108711-8A patent/BR0108711A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-02-28 CA CA2400570A patent/CA2400570C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 CN CN200510116305XA patent/CN1800385B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 AU AU2001239478A patent/AU2001239478B2/en not_active Ceased
- 2001-02-28 WO PCT/IB2001/000420 patent/WO2001064920A2/en not_active Ceased
- 2001-02-28 NZ NZ521396A patent/NZ521396A/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-02-28 PT PT08075111T patent/PT1947187E/pt unknown
- 2001-02-28 ES ES10178586T patent/ES2386534T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 ES ES08075111T patent/ES2360746T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 DK DK06076718.3T patent/DK1790660T3/da active
- 2001-02-28 AU AU3948801A patent/AU3948801A/xx active Pending
- 2001-02-28 CA CA2744921A patent/CA2744921C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 NZ NZ521531A patent/NZ521531A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-02-28 JP JP2001563609A patent/JP4846160B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 WO PCT/IB2001/000452 patent/WO2001064922A2/en not_active Ceased
- 2001-02-28 CA CA2400562A patent/CA2400562C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 DE DE60132978T patent/DE60132978T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 RU RU2002125880/13A patent/RU2304617C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-02-28 CN CNB2003101036036A patent/CN100334214C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-28 AT AT08075111T patent/ATE503837T1/de active
- 2001-02-28 ES ES06076718T patent/ES2391153T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-28 BR BR0108713-4A patent/BR0108713A/pt not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-02-25 US US11/067,260 patent/US9267163B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-04-19 CY CY20071100540T patent/CY1106532T1/el unknown
-
2008
- 2008-04-30 CY CY20081100464T patent/CY1107447T1/el unknown
-
2010
- 2010-06-28 US US12/825,210 patent/US8114960B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-12-24 JP JP2010288968A patent/JP5346004B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-01-12 JP JP2011004414A patent/JP2011101657A/ja active Pending
- 2011-06-27 CY CY20111100604T patent/CY1111591T1/el unknown
- 2011-12-29 US US13/340,549 patent/US8703914B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-08-13 CY CY20121100728T patent/CY1113032T1/el unknown
- 2012-09-19 CY CY20121100861T patent/CY1113477T1/el unknown
- 2012-09-27 JP JP2012214120A patent/JP2013005816A/ja not_active Withdrawn
-
2013
- 2013-07-03 CY CY2013025C patent/CY2013025I1/el unknown
- 2013-07-04 LU LU92240C patent/LU92240I2/fr unknown
- 2013-07-15 NL NL300605C patent/NL300605I2/nl unknown
- 2013-09-18 JP JP2013192617A patent/JP5941027B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-03-18 JP JP2014054817A patent/JP2014121333A/ja active Pending
- 2014-04-03 US US14/244,806 patent/US20140294885A1/en not_active Abandoned
- 2014-07-31 US US14/448,792 patent/US9150898B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2016
- 2016-04-11 JP JP2016078708A patent/JP2016128520A/ja active Pending
- 2016-12-02 US US15/368,429 patent/US20170080076A1/en not_active Abandoned
- 2016-12-02 US US15/368,435 patent/US20170080077A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2299476T3 (es) | Expresion hibrida de proteinas de neisseria. | |
| AU2001239478A1 (en) | Hybrid expression of neisserial proteins | |
| ES2278436T3 (es) | Antigenos de estreptococos del grupo b. | |
| ES2342416T3 (es) | Procedimiento de purificacion o produccion de una proteina mage. | |
| JP5209163B2 (ja) | Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗原組成物 | |
| ES2609039T3 (es) | Nuevas composiciones inmunogénicas para la prevención y tratamiento de enfermedad meningocócica | |
| US6197929B1 (en) | Carrier protein having an adjuvant effect, immunogenic complex containing it, process for their preparation, nucleotide sequence and vaccine | |
| CN107510841A (zh) | 源头阻断包虫病病原细粒棘球绦虫传播的疫苗 | |
| Canales et al. | Anaplasma marginale major surface protein 1a directs cell surface display of tick BM95 immunogenic peptides on Escherichia coli | |
| WO2007112703A2 (es) | Composición farmacéutica que comprende la proteína nmb0606 | |
| HK1064120B (en) | Hybrid expression of neisserial proteins | |
| ES2367998T3 (es) | Derivados antígenos asociados a tumores de la familia mage, y secuencias de ácidos nucleicos que los codifican, usados para la preparación de proteínas de fusión y de composiciones para vacunación. | |
| AU2004201216A1 (en) | Hybrid expression of Neisserial proteins |