ES2382070T3 - Métodos y composiciones inmunoterapéuticos - Google Patents
Métodos y composiciones inmunoterapéuticos Download PDFInfo
- Publication number
- ES2382070T3 ES2382070T3 ES01929778T ES01929778T ES2382070T3 ES 2382070 T3 ES2382070 T3 ES 2382070T3 ES 01929778 T ES01929778 T ES 01929778T ES 01929778 T ES01929778 T ES 01929778T ES 2382070 T3 ES2382070 T3 ES 2382070T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- phospholipid
- vesicle
- cells
- antigen
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 title claims description 5
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 115
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 69
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 68
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 68
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims abstract description 36
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 56
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 53
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 27
- 108010007100 Pulmonary Surfactant-Associated Protein A Proteins 0.000 claims description 26
- 102100027773 Pulmonary surfactant-associated protein A2 Human genes 0.000 claims description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 26
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 15
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 10
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 9
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 claims description 9
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 8
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 28
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 23
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 15
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 15
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 14
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 8
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 7
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 5
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 5
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 5
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 4
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 4
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 4
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 4
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 4
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 3
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 3
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 206010062207 Mycobacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 210000002588 alveolar type II cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000001342 constant potential amperometry Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 2
- 208000008384 ileus Diseases 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 238000005461 lubrication Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000006410 Apoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083590 Apoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000251729 Elasmobranchii Species 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- 208000005422 Foreign-Body reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000190070 Sarracenia purpurea Species 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 229940126587 biotherapeutics Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005465 channeling Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 210000000497 foam cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005213 imbibition Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003580 lung surfactant Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N meglumine amidotrizoate Chemical compound C[NH2+]C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229940042880 natural phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003956 transport vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000005135 veiled cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Una vesícula de fosfolípidos para producir una respuesta inmunitaria, teniendo la vesícula de fosfolípidos una estructura de tipo cuerpo lamelar, multilamelar, y comprendiendo la composición de fosfolípidos de la vesícula de fosfolípidos: fosfatidilcolina 44% a 60%, esfingomielina 15% a 25%, fosfatidiletanolamina 6% a 10%, fosfatidilserina 2% a 6%, fosfatidilinositol 2% a 4% y colesterol 4% a 12% donde las cifras representan el porcentaje en peso, teniendo la vesícula de fosfolípidos un antígeno exógeno o un poliácido nucleico que codifica un antígeno, estando adaptada la vesícula de fosfolípidos para ser fagocitada por las células presentadoras de antígenos.
Description
Métodos y composiciones inmunoterapéuticos
La presente invención se refiere en general al campo de la inmunoterapia, que son las terapias que actúan sobre o a través del sistema inmunitario. En particular, la invención se refiere a métodos y composiciones para introducir entidades químicas en células presentadoras de antígenos, concretamente células dendríticas, dando como resultado la presentación de dichos antígenos sobre la superficie de las células presentadoras de antígenos y produciendo un efecto sobre el sistema inmunitario. La invención se refiere también a las células presentadoras de antígenos modificadas resultantes y a las composiciones farmacéuticas que contienen estas células. Además, la invención describe nuevos conocimientos sobre coadyuvancia y preparaciones coadyuvantes incluyendo una serie de péptidos relacionados y vesículas de fosfolípidos que incorporan dichos péptidos.
En la actualidad existe un considerable interés en la manipulación del sistema inmunitario de los mamíferos incorporando antígenos en la superficie de las células presentadoras de antígenos en general y de las células dendríticas en particular. Al incorporar antígenos en la superficie de las células presentadoras de antígenos, se puede hacer que el sistema inmunitario se dirija a antígenos seleccionados. Esto ha sido aplicado a muchos campos terapéuticos incluyendo la terapia contra el cáncer. Muchos antígenos cancerosos han sido publicados y están siendo utilizados en pruebas en la actualidad para la inmunoterapia basada en células dendríticas humanas para el cáncer como se describe p. ej. en los documentos US 5.990.294 y 5.874.290 de Northwest Biotherapeutics, LLC.
No obstante, resulta difícil preparar células dendríticas con antígenos modificados sobre su superficie. En la técnica anterior se han considerado numerosos mecanismos. Los métodos conocidos actualmente incluyen el "pulsado" del péptido antigénico directamente sobre la superficie de la célula presentadora de antígenos o la incubación de las células presentadoras de antígenos con proteínas completas o fragmentos de proteínas que después son ingeridos por las células presentadoras de antígenos. Estos péptidos son digeridos en pequeños fragmentos por las células presentadoras de antígenos y presentados sobre sus superficies celulares. Todas estas técnicas tienen una eficacia y una reproducibilidad limitadas y hacen referencia solamente a antígenos peptídicos.
Se han publicado otros métodos. Por ejemplo, en los documentos WO96/30030 de Baxter International Inc y WO98/46785 de Dana-Farber Cancer Institute se describen métodos de fusión de las propias células dendríticas del paciente con células no dendríticas, p. ej. células cancerosas que expresan un antígeno en la superficie celular para el cual se desea obtener una respuesta inmunitaria. Dichas células se pueden hacer crecer después e inyectar en un anfitrión, cerca de su sistema linfoide, conduciendo a una respuesta inmunitaria frente al antígeno deseado. Sin embargo, este procedimiento es complejo y lento, requiriendo ingeniería genética de las líneas celulares de un paciente con el fin de incluir un gen que codifique el antígeno de interés. Además, no proporcionan un método de presentación de antígenos que no sean proteínas procesadas por la maquinaria de procesamiento de proteínas de los híbridos de células dendríticas/no dendríticas resultantes. Aún más, estas tecnologías utilizan líneas celulares cancerosas de un paciente y se requeriría un gran cuidado en la manipulación y el procesamiento de estas líneas celulares para evitar una tumorigénesis adicional. Las líneas de células cancerosas están disponibles, por supuesto, solamente en pacientes con cáncer y no está claro que estas terapias puedan ser aplicadas a pacientes para los cuales no se encuentra disponible una línea celular inmortal.
En la Patente de los Estados Unidos 5.976.546 de la Universidad Rockefeller se describe un método de presentación de antígenos sobre la superficie de células dendríticas combinando células dendríticas con un complejo de (a) una proteína de unión a una célula dendrítica, (b) un antígeno polipeptídico y (c) un conector. No está claro hasta qué punto afectará la presencia de una proteína de unión a una célula dendrítica y un conector a la capacidad del antígeno para generar una respuesta inmunitaria dependiente de T. Esta descripción también hace referencia a antígenos polipeptídicos solamente.
El documento WO 92/21981 describe la diagnosis y el tratamiento de enfermedades inflamatorias y degenerativas de tejidos serosos y relacionados. Este documento describe un método de tratamiento de enfermedades inflamatorias y degenerativas de tejidos serosos y relacionados que comprende la etapa de administrar un complejo inmunitario que consiste en cuerpos lamelares o sus constituyentes y anticuerpos específicos para estos.
El primer propósito de la presente invención se proporcionar un método rápido y eficaz para la incorporación de moléculas a células dendríticas y con el fin de hacer que las células dendríticas y las células presentadoras de antígenos presenten las moléculas deseadas sobre su superficie. La invención hace referencia en particular a células dendríticas y células presentadoras de antígenos modificadas por medio de esta técnica. Por ejemplo, la invención pretende proporcionar un método de incorporación de antígenos a las membranas superficiales de las células dendríticas de manera que los antígenos sean presentados a las células T. Como alternativa, se pueden liberar poliácidos nucleicos que codifican antígenos en células dendríticas para su uso en técnicas de terapia génica conocidas. La adyuvancia es un fenómeno en el que un agente o combinación de agentes, utilizados junto con un antígeno, provoca en el anfitrión un incremento de la respuesta inmunológica. El Coadyuvante Completo de Freund consiste básicamente en un antígeno emulsionado en aceite con paredes de células micobacterianas. Generalmente se acepta que el coadyuvante de Freund es el inmunoestimulante más potente descubierto hasta ahora. No obstante, la producción de granulomas de tejido por el mismo en la vacunación ha dado como resultado la suspensión de su uso, no solamente en seres humanos sino también en animales experimentales. Esta resolución ignora totalmente el conocimiento patológico obvio y establecido de que la mayor parte de las respuestas inmunitarias potentes y de larga duración en los vertebrados derivan de organismos o agentes que producen un granuloma.
Un propósito adicional de la invención descrito en la presente memoria es proporcionar un coadyuvante mejorado, que tenga una eficacia que se aproxime a la del Coadyuvante de Freund pero que carezca de los efectos secundarios desagradables asociados.
En esta memoria el término "células presentadoras de antígenos" hace referencia a cualquier célula del sistema inmunitario que presente antígenos a los componentes del sistema inmunitario. Este término incluye por lo tanto las células dendríticas.
La invención se define en las reivindicaciones. De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención se proporciona una vesícula de fosfolípidos para producir una respuesta inmunitaria, teniendo la vesícula de fosfolípidos un antígeno o un poliácido nucleico que codifica un antígeno en ella, estando adaptada la vesícula de fosfolípidos para ser fagocitada por las células productoras de antígenos.
La vesícula de fosfolípidos es multilamelar.
La composición de fosfolípidos de la vesícula de fosfolípidos comprende: fosfatidilcolina 44-60%, esfingomielina 1525%, fosfatidiletanolamina 6-10%, fosfatidilserina 2-6%, fosfatidilinositol 2-4%, colesterol 4-12%.
Preferiblemente, la composición de fosfolípidos de la vesícula de fosfolípidos es: fosfatidilcolina 54%, esfingomielina 19%, fosfatidiletanolamina 8%, fosfatidilserina 4%, fosfatidilinositol 3%, colesterol 10%.
Opcionalmente, la composición de fosfolípidos de de la vesícula de fosfolípidos incluye lisolecitina.
Preferiblemente, la composición de fosfolípidos de la vesícula de fosfolípidos tiene 0-3% de lisolecitina.
Muy preferiblemente, la composición de fosfolípidos de la vesícula de fosfolípidos tiene 2% de lisolecitina.
La vesícula de fosfolípidos puede ser un cuerpo lamelar aislado del organismo de un mamífero.
De acuerdo con un segundo aspecto de la presente invención se proporcionan vesículas de fosfolípidos de acuerdo con el primer aspecto para su uso como agente de vacunación.
De acuerdo con un tercer aspecto de la presente invención se proporcionan células presentadoras de antígenos modificadas para inducir una respuesta inmunitaria celular que comprende células presentadoras de antígenos aisladas de un organismo de un mamífero modificado por medio de la absorción de vesículas de fosfolípidos de acuerdo con el primer aspecto.
Preferiblemente, las células presentadoras de antígenos son células dendríticas.
De acuerdo con un cuarto aspecto de la presente invención se proporciona un método para la incorporación de antígenos en células dendríticas que comprende la etapa de mezclar vesículas de fosfolípidos de acuerdo con el primer aspecto de la presente invención con células dendríticas.
De acuerdo con un quinto aspecto de la presente invención se proporciona una composición farmacéutica para la inducción de una respuesta inmunitaria, comprendiendo la composición vesículas de fosfolípidos de acuerdo con el primer aspecto de la presente invención o células dendríticas modificadas de acuerdo con el segundo o tercer aspectos de la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable.
De acuerdo con un sexto aspecto de la presente invención se proporciona una proteína que tiene una secuencia peptídica como se expone en el ID de secuencia No. 1 o el ID de secuencia No. 2 y que tiene adicionalmente una secuencia peptídica como se expone en el ID de secuencia No. 3 o el ID de secuencia No. 4.
Preferiblemente, la proteína actúa como un coadyuvante cuando induce una respuesta inmunitaria.
Preferiblemente, la proteína puede tener una secuencia peptídica que es idéntica u homóloga a la mostrada en el ID de secuencia No. 1 o el ID de secuencia No. 2 y tiene una secuencia peptídica adicional que es idéntica u homóloga a las mostradas en el ID de secuencia No. 3 o el ID de secuencia No. 4 donde la proteína resultante de nuevo es capaz de actuar como un coadyuvante para producir una respuesta inmunitaria. Preferiblemente los péptidos de sustitución son homólogos en un 99%.
Opcionalmente las sustituciones pueden mostrar una homología entre 99% y 75%.
Preferiblemente la proteína resultante de los péptidos homólogos tiene la misma actividad o una actividad similar a la del original.
De acuerdo con un séptimo aspecto de la presente invención se proporciona una vesícula de fosfolípidos de acuerdo con el primer aspecto de la presente invención que tiene en ella una proteína seleccionada del grupo que comprende:
- (a)
- una proteína de acuerdo con el sexto aspecto.
- (b)
- dimicolato de trehalosa
De acuerdo con un octavo aspecto de la presente invención se proporciona una composición farmacéutica para inducir una respuesta inmunitaria que comprende vesículas de fosfolípidos de acuerdo con el séptimo aspecto, un antígeno y un portador farmacológicamente aceptable.
La presente invención también proporciona vesículas de fosfolípidos inmunoestimulantes que incorporan dimicolato de trehalosa para una vacunación de micro-granuloma controlado; incorporando las vesículas de fosfolípidos la Secuencia 77-110 del Péptido SP-A para Presentar Antígenos a CPA Profesionales y No Profesionales Autólogas in vitro para efectuar una respuesta inmunoterapéutica en un anfitrión; y vesículas de fosfolípidos que incorporan Dimicolato de Trehalosa y la Secuencia 77-110 del Péptido SP-A.
A continuación se ilustrará un ejemplo de la presente invención con referencia a las siguientes Figuras en las que:
La Figura 1 es un diagrama esquemático de un proceso para incorporar material a células dendríticas; y
La Figura 2 es un diagrama esquemático de células dendríticas para su uso en una preparación farmacéutica.
Las células dendríticas son células derivadas de médula ósea pertenecientes a un linaje diferente de macrófagos. Se caracterizan por su forma irregular, su expresión constitutiva a niveles elevados de moléculas del MHC de clase I y II y una escasez de lisosomas y vesículas endocíticas. Se encuentran en forma de células veladas en los aferentes linfáticos, en forma de células interdigitadas en zonas de células T de tejidos linfoides secundarios, y en la médula tímica (Male et al 1991). Se ha establecido ahora que las células dendríticas son las principales células presentadoras de antígenos al desencadenar, con una eficacia elevada, respuestas inmunitarias mediadas por células T primarias (Banchereau J, Steinman R. M. 1998). Adicionalmente la capacidad para estimular las respuestas primarias reside en su expresión constitutiva de una actividad co-estimuladora, a diferencia de otras células presentadoras de antígenos, lo que es necesario además del MHC/péptido para la activación de las células T en reposo pero sensibilizadas previamente. Las células dendríticas son ampliamente reconocidas por ser escasamente endocíticas y quedan dudas en cuanto a la manera en la cual el antígeno es absorbido por la célula aunque algunos creen que los gránulos en forma de raqueta, gránulos de Birbeck, absorben mediante endocitosis el material antigénico y lo procesan para su presentación a las células T. Las células dendríticas están presentes como un pequeño porcentaje de las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) donde circulan hacia los tejidos, migrando desde los tejidos por medio de la linfa aferente para drenar los ganglios linfáticos donde forman las células dendríticas interdigitadas en el paracórtex y allí presentan el antígeno a las células T en tráfico a través del ganglio. Las células dendríticas que pasan a través de la epidermis son conocidas como células de Langerhans (CL).
El avance más reciente en la inmunoterapia contra el cáncer implica el uso de antígenos tumorales y células presentadoras de antígenos autólogas como vacunas contra el cáncer (Melman et al. 1998). En las pruebas clínicas, el pulsado in vitro de células dendríticas autólogas con antígenos expresados por las células tumorales ha logrado una respuestas parcial de hasta 30% y una respuesta completa de 8% en pacientes con ciertos tumores (Tjoa B. et al 1998). El desarrollo adicional de estrategias para intensificar estas pruebas prometedoras se ha frustrado por un déficit del conocimiento actual sobre los métodos eficaces o los agentes que pueden inducir in vitro que las células dendríticas ingieran el antígeno y procesen el determinante antigénico para la presentación sobre su superficie celular, como ocurre in vivo.
Los autores de la presente invención, sin embargo, han descubierto que los cuerpos lamelares son fagocitados por las células dendríticas in vivo. Los cuerpos lamelares, son producidos por la mayor parte, sino por todas, las células de mamífero y son liberados principalmente sobre la superficie celular por medio de secreción exocitótica (3). Sirven como lubricantes, tensioactivos y repelentes de agua intra-matriciales, intercelulares y de la superficie celular. Un nivel superior de producción es carácterístico de ciertos tejidos especializados implicados en la provisión de superficies no pegajosas (peritoneo, pericardio, pleura) (Dobbie et al. (1988); Dobbie y Lloyd (1989); Dobbie et al. (1994); Dobbie et al. (1995)), en la lubricación en la locomoción (membrana sinovial) (Dobbie et al. (1994); Dobbie et al. (1995)), como tensioactivo (pulmón) o como repelente de agua (piel). Los cuerpos lamelares no solamente pasan desde las diferentes cavidades corporales directamente al sistema linfático, sino que en tejidos de elevada secreción también pasan de forma retrógrada a través de la sustancia básica de la matriz y entre las células a los vasos linfáticos de drenaje (6).
Los cuerpos lamelares se asemejan a liposomas. No obstante, existen diferencias clave. Los cuerpos lamelares son cristales líquidos de fosfolípidos y, en contraste directo con los liposomas, son altamente flexibles puesto que no contienen o contienen poco colesterol. De este modo se forman y re-forman constantemente en los tejidos y, al hacerlo, incorporan proteínas y péptidos planctónicos, libres a partir de los desechos proteinaceos fragmentarios del fluido extracelular presente en el tejido normal o patológico del anfitrión como en la respuesta inflamatoria a los organismos invasores. De este modo los cuerpos lamelares, que incorporan material tanto endógeno (propio) como exógeno (no propio), ya sea expuesto sobre la superficie o contenido dentro o entre las bicapas de fosfolípidos, pasan al drenaje linfático y son conducidos automáticamente al tejido linfo-reticular loco-regional. Allí, al filtrarse a través de los senos linfáticos, los cuerpos lamelares, que poseen una composición en bicapa más típica de la membrana celular procariótica (esto es: bacterias o virus) son automáticamente inspeccionados por el tejido linfoide ya que tienen el tamaño, la forma y la composición de la membrana de una bacteria desnuda. Con respecto a esto, la analogía más próxima en la explicación de la función primordial de los cuerpos lamelares es la de una tira atrapamoscas universal, donde las proteínas y péptidos propios y no propios intratisulares son automáticamenteabsorbidos y conducidos al tejido linfoide. Éste es el nivel basal del sistema inmunitario innato, acelular que depende de la interacción fisicoquímica entre las esferas multilamelares que se forman y reciclan naturalmente y las moléculas planctónicas del fluido extracelular. De este modo, los cuerpos lamelares son transportadores centrípetos automáticos en el sistema linfo-reticular. La trascendencia de este sistema biológico básico ha permanecido sin identificar hasta ahora, ya que la ubicuidad de los cuerpos lamelares en los tejidos normales, y su distribución, densidad y contenidos en los procesos patológicos no ha sido observado nunca para nuestro conocimiento. Su presencia en los tejidos no pulmonares no es visualizada con el microscopio electrónico a menos que los tejidos se fijen y se traten deliberadamente de una manera que conserve específicamente su delicada ultraestructura lo que condujo a su descubrimiento en el pulmón (Refs).
La presente invención hace referencia a constructos de tipo cuerpo lamelar fabricados por el ser humano, que son vesículas de fosfolípidos diseñadas para imitar los cuerpos lamelares naturales y en los que se pueden insertar antígenos seleccionados. La invención también se refiere al método por medio del cual pueden ser incorporados a las células dendríticas y a las células dendríticas que se forman de ese modo. Estas células dendríticas que contienen los antígenos seleccionados pueden ser utilizadas después, en un método conocido por otra parte, en preparaciones farmacéuticas para el tratamiento de una amplia gama de afecciones.
Las vesículas de fosfolípidos de la presente invención son constructos que consisten en fosfolípidos naturales para los vertebrados, formados como un liposoma multilamelar que refleja fielmente la composición química y la disposición ultrastructural de los cuerpos lamelares. Estos se encuentran en una densidad variable en la mayor parte de los tejidos en todo el organismo de los mamíferos p. ej.: pulmón, membrana sinovial, peritoneo, pleura y pericardio (Dobbie (1988); Dobbie et al. (1988); Dobbie y Lloyd (1989); Dobbie et al. (1994); Dobbie et al. (1995)). También se han encontrado en anfibios, teleósteos y elasmobranquios (Dobbie y Lewis, 1999, datos no publicados). Los cuerpos lamelares se caracterizan por bicapas de fosfolípidos, normalmente de periodicidad regular (Dobbie (1989); Dobbie et al. (1994)). En contraste con la composición de las bicapas de fosfolípidos de las membranas celulares de mamíferos normales que contienen cantidades significativas de colesterol, los cuerpos lamelares tienen bajas concentraciones de colesterol o no tienen colesterol en sus lamelas. Con respecto a esto, sus cuerpos lamelares están más próximos a las características composicionales y a la disposición ultraestructural de la membrana celular de microorganismos desnudos, bacterias y virus.
La invención implica la construcción de liposomas multi-lamelares con una composición química similar o próxima a la de los cuerpos lamelares que incorpora material antigénico, proteínas, péptidos u otras moléculas que se extruden de la superficie o están presentes dentro o entre las bicapas de fosfolípidos.
La Figura 1 muestra un diagrama esquemático de cómo se lleva a cabo este procedimiento. Los antígenos 1 se incorporan primero a una vesícula de fosfolípido de tipo cuerpo lamelar 2, formando una vesícula de fosfolípido cargada de antígeno 3.
La vesícula de fosfolípidos construida de este modo se utiliza como portador de un antígeno seleccionado para la presentación a una célula presentadora de antígenos profesional (célula dendrítica o macrófago), o no profesional (célula presentadora de antígenos). Estas células internalizan la vesícula de fosfolípido junto con el material antigénico distribuido en sus diferentes compartimentos. Después el material antigénico es procesado intracelularmente por la célula presentadora de antígenos y el determinante antigénico es presentado con posterioridad sobre la superficie celular con las proteínas de superficie apropiadas, adjuntas y estimuladoras p. ej.: moléculas del MHC 1 y 2.
En este ejemplo, las propias células dendríticas de un paciente 4 son cultivadas in vitro y combinadas con vesículas de fosfolípido para proporcionar células dendríticas modificadas 5. Aunque esta descripción hace referencia a células dendríticas en particular, será evidente para un experto en la técnica que se puede aplicar el mismo principio para modificar otras células presentadoras de antígenos.
La Figura 2 muestra de manera figurativa una pluralidad de células dendríticas modificadas 5. En la terapia, las células dendríticas autólogas, aisladas de sangre periférica, cultivadas in vitro y cebadas con el antígeno liberado por la vesícula de fosfolípido, cuando retornan al paciente por medio de cualquier ruta (por ejemplo, inyección en el sistema linfático), avanzan hasta el sistema linforeticular donde estimulan la producción de linfocitos T específicos del antígeno 6 que constituyen la célula efectora completando la respuesta inmunitaria celular a las células del organismo que portan el antígeno seleccionado.
Cuerpos lamelares
Los liposomas naturales, cuerpos lamelares, son producidos por la mayor parte, sino por todas, las células de mamífero y son liberadas principalmente sobre la superficie celular por medio de secreción exocitótica (Dobbie (1989)). Sirven como lubricantes, tensioactivos y repelentes del agua en la superficie celular, intercelular e intramatriz. Un nivel superior de producción es característico de ciertos tejidos especializados implicados en proporcionar superficies no pegajosas (peritoneo, pericardio, pleura) (Dobbie et al. (1988); Dobbie y Lloyd (1989); Dobbie et al. (1994); Dobbie et al. (1995)), la lubricación en la locomoción (membrana sinovial) (Dobbie et al. (1994); Dobbie et al. (1995)), como tensioactivo (pulmón) o como repelente de agua (piel). Los cuerpos lamelares no solamente pasan desde las diferentes cavidades corporales directamente al sistema linfático, sino que en tejidos de secreción elevada también pasan de manera retrógrada a través de la sustancia básica de la matriz y entre las células a los vasos linfáticos de drenaje (Dobbie y Anderson (1996)).
Estructura de las Vesículas de fosfolípidos
En esta invención se construyen vesículas de fosfolípido utilizando fosfolípidos específicos en proporciones similares a las encontradas en los cuerpos lamelares en los tejidos normales. El rasgo clave que distingue las vesículas de fosfolípido descritas en la presente aplicación de liposomas es su bajo contenido de colesterol o la ausencia del mismo. En las aplicaciones biomédicas los liposomas, como constructos sintéticos, son diseñados principalmente para la contención compartimental y la conservación de fármacos y diversos agentes. De este modo se construyen con elevados niveles de colesterol que confieren estabilidad de membrana y baja porosidad, imitando las membranas celulares de mamíferos. Por lo tanto se deduce que la concentración de colesterol de la bicapa es el determinante clave de la vida media circulatoria para los liposomas diseñados como portadores de fármacos. El efecto inhibidor del colesterol sobre la absorción de los liposomas por el sistema linforeticular, medida en hígado y bazo, está bien establecida (Patell H. M. et al. 1983). En contraste directo, las vesículas de fosfolípidos, modeladas sobre las propiedades de los cuerpos lamelares, son fácilmente absorbidas por las células fagocíticas y como en el caso de los liposomas con un bajo contenido de colesterol, son rápidamente eliminadas de la circulación por el tejido linfo-reticular.
Los constituyentes fosfolipídicos principales de los cuerpos lamelares son fosfatidilcolina (PC), esfingomielina (SPH), fosfatidiletanolamina (PE), fosfatidilserina (PS), fosfatidilinositol (PI) y lisolecitina (LPC). La composición de fosfolípidos de los cuerpos lamelares muestra una ligera variación de acuerdo con la célula de origen.
La PC es el fosfolípido principal en los cuerpos lamelares, con independencia del sitio de origen. El porcentaje de concentración de PC varía de alrededor de 70% en el lavado pulmonar a 45% en el fluido sinovial (Refs). El siguiente fosfolípido en la clasificación de concentración es la SPH (5-15%). Después, PE, PS, PI, PG y LPC están presentes a concentraciones de porcentaje variables de un único dígito en los cuerpos lamelares de acuerdo con el sitio de origen.
La composición preferida de fosfolípidos y colesterol para las vesículas de fosfolípidos comprende: PC 54%: SPH 19%: PE 8%: PS 4%: PI 3%: colesterol 10%. Estos valores son medios y se ha encontrado el siguiente intervalo de concentraciones en los cuerpos lamelares naturales (investigación privada): PC 44-60%, SPH 15-23%, PE 6-10%, PS 2-6%, PI 2-4%, Colesterol 4-12%. Estas cifras son porcentajes en peso.
La LPC también puede ser incorporada a las vesículas a 2% en peso que sigue el intervalo encontrado en los cuerpos lamelares naturales de 0-3%.
Las vesículas de fosfolípidos en forma de liposomas son, desde luego, bien conocidas. Sin embargo, los liposomas son elaborados por aquellos expertos en la técnica con elevadas concentraciones de colesterol para mejorar su rigidez. Los liposomas que contienen colesterol a un 20% o menos serían considerados con un bajo contenido de colesterol (Love WG et al, 1990). Los liposomas que incorporan una elevada proporción de colesterol (50%), cuando ésta es equimolar con los fosfolípidos, tienen una estructura muy estable (Kirby et al, 1980, Senior et al, 1982) y en consecuencia, hasta esta invención, no habría sido obvio para nuestro conocimiento intentar utilizar vesículas con un bajo contenido de colesterol. Se ha encontrado que el contenido de colesterol de los cuerpos lamelares derivados de los alvéolos pulmonares contienen alrededor de 10% de colesterol (Schmitz G, Muller J 1991) (J Lipid Research. 32:1539).
La presencia de esfingomielina en los cuerpos lamelares naturales y en las vesículas de fosfolípidos reivindicados en la presente invención es importante. La esfingomielina no se utiliza generalmente, que sepan los autores de la presente invención, en los liposomas y sirve para conferir flexibilidad y suavidad a los cuerpos lamelares. La tecnología de liposomas convencional ilustra que la rigidez es mejor para la liberación de agentes químicos; sin embargo, los autores de la presente invención han encontrado que las vesículas de fosfolípidos que contienen esfingomielina, con bajo contenido de colesterol, flexibles son ideales para la liberación de antígenos en las células presentadoras de antígenos.
Preparación de vesículas de Fosfolípidos
Las vesículas de fosfolípidos se preparan por medio de una técnica similar a la utilizada para producir vesículas multi-lamelares sacudidas a mano (New RRC, 1990). La mezcla de fosfolípidos, junto con el colesterol en los porcentajes dados en peso se disuelven en una mezcla disolvente de cloroformo/metanol (2:1 vol/vol). La solución de lípido se introduce en un matraz de fondo redondo y se fija a un evaporador rotatorio. El matraz se evacúa y se hace girar a 60 r.p.m. en un baño de agua controlado termostáticamente a una temperatura de 30°C hasta que se deposita una película seca de lípidos. Se introduce nitrógeno en el matraz y se elimina el disolvente residual antes de su conexión a un liofilizador donde se somete a alto vacío a la temperatura ambiente durante una hora. Después de la liberación del vacío y tras enjuagar con nitrógeno, se añade solución salina que contiene los solutos (antígeno seleccionado) para el atrapamiento. El lípido se hidrata en el interior del matraz, se enjuaga con nitrógeno, se fija al evaporador, y se hace girar a 60 r.p.m. a la temperatura ambiente durante treinta minutos. La suspensión se deja reposar durante dos horas a la temperatura ambiente para completar el procedimiento de imbibición.
Vesículas de Fosfolípidos cargadas con Antígeno
El antígeno que se va a presentar (proteína, péptido u otro agente antigénico) a la célula presentadora de antígenos profesional, p. ej. una célula dendrítica, se prepara en forma de soluto en la solución salina normal (0,9%) utilizada en la hidratación y producción de las vesículas de fosfolípidos. Como los liposomas, las vesículas de fosfolípidos de la presente invención no pueden ser esterilizadas mediante su exposición a temperaturas elevadas y también son sensibles a diferentes tipos de radiación y agentes de esterilización química. Para su uso en seres humanos cada fase de su producción se debe llevar a cabo en condiciones asépticas pasando la solución orgánica inicial de lípidos a través de filtros de membrana de celulosa regenerada (tamaño de poro 0,45 Pm) y fibra de vidrio, antes de secar, para separar microorganismos, esporas y material pirogénico (Ref. RRC New, pág. 103). Puesto que las vesículas de fosfolípidos descritas en la presente memoria son similares al tipo de vesícula multilamelar del liposoma, estas son mecánicamente estables tras el almacenamiento durante largos períodos de tiempo. Su tamaño se puede regular por medio de extrusión.
Las vesículas de fosfolípido de la presente invención tienen una construcción similar a los liposomas de tipo vesícula multilamelar que, en contraste con otros tipos de liposomas, proporcionan una liberación mucho más gradual y sostenida del material (RRC New, pág. 28). Esta propiedad es importante en la liberación de antígeno, tanto extracomo intra-celularmente.
Las vesículas de fosfolípidos preparadas de este modo se pueden utilizar para presentar antígenos a células presentadoras de antígenos profesionales y no profesionales.
Se conoce en la actualidad la liberación de ácidos nucleicos en células presentadoras de antígenos, incorporándose después tales ácidos nucleicos a las células y expresando allí las proteínas que son presentadas sobre la superficie de las células. En una realización alternativa, las vesículas de fosfolípidos se elaboran con ARN o ADN en ellas y, después de la absorción de la vesícula de fosfolípidos, liberan los ácidos nucleicos en las células presentadoras de antígenos, actuando como un agente de terapia génica conveniente.
Separación, Aislamiento y Cultivo de Células Dendríticas Humanas
Las CMSP derivadas o bien de 50 ml de sangre venosa recién recogida o bien por medio de leucaféresis se aíslan utilizando centrifugación en gradiente de densidad Hypaque en condiciones estériles. Las CMSP se vuelven a suspender en medio completo (medio OPTIMEM) en plasma autólogo inactivado con calor al 5% y se cultivan en placa en un matraz para el cultivo de tejidos de 75 cm2 con 2 - 3 x 10’ células por matraz. Las suspensiones celulares se incuban en una incubadora humidificada (37°C, 5% de CO2) durante 60 min. Las células no adherentes se eliminan y las células adherentes se lavan suavemente con medio completo caliente (37°C). Se añaden medio de propagación de células dendríticas (MP de células dendríticas: medio completo, 500 unidades/ml de factor estimulador de colonias de granulocitos macrófagos (GM-CSF) y 500 unidades/ml de Interleuquina 4 (IL-4) a las células adherentes (matraces de 10 ml) y se cultivan durante 4-6 días.
Modificación de células dendríticas Autólogas Cultivadas con Vesículas de Fosfolípidos Cargadas con Antígeno
Las vesículas de fosfolípidos cargadas con antígeno, suspendidas en un volumen mínimo de solución salina normal (0,9%), se añaden a los matraces de cultivo, exponiéndolas a las células dendríticas cultivadas durante 1 hora a 37°C. Después de eso las células se lavan suavemente en PBS y se vuelven a suspender en solución salina normal para su administración intravenosa o intradérmica intra-linfática al paciente.
Los autores de la presente invención han encontrado que los desechos "espumosos" y los contenidos de las células espumosas, tanto mononucleares como multinucleares, un rasgo característico de todos los granulomas, se revelan como cuerpos lamelares cuando los tejidos se fijan en fijador con ácido tánnico-glutaraldehído y pueden proporcionar ahora una explicación satisfactoria de la naturaleza de la vacunación por medio de Coadyuvante Completo de Freund.
La inyección de Coadyuvante Completo de Freund con antígeno crea un depósito artificial de antígeno por medio de la inducción de un depósito natural de auto-generación y auto-mantenimiento a través de la formación de un granuloma que contiene cuerpos lamelares. Éste resulta de la inhibición de la fusión del fagosoma/lisosoma mediante dimicolato de trehalosa (derivado de paredes celulares micobacterianas) lo que ocasiona la acumulación intracelular de cuerpos lamelares. La capacidad de los macrófagos para degradar los cuerpos lamelares se reduce adicionalmente por las gotitas de aceite mineral fagocitadas y se induce una reacción de cuerpos extraños. Las células repletas de cuerpos lamelares que ellas son incapaces de digerir por el bloqueo de la fusión del fagosoma/lisosoma, experimentan necrosis, liberando en el granuloma en desarrollo una cantidad creciente de cuerpos lamelares que, al ser re-fagocitados por las células viables restantes, son bloqueados a su vez por el efecto local del coadyuvante de Freund.
Por lo tanto el Coadyuvante Completo de Freund crea un granuloma que imita el efecto de un granuloma micobacteriano natural, donde los bacilos intracelulares vivos liberan dimicolato de trehalosa, bloqueando todas las fusiones de fagosoma/lisosoma.
En una vacuna que contiene Coadyuvante Completo de Freund, el antígeno seleccionado es absorbido automáticamente en los cuerpos lamelares desde el fluido extracelular en el sitio de la inyección. De este modo el antígeno se concentra localmente como depósito de auto-generación y auto-mantenimiento en el que las moléculas de antígeno se dispersan sucesivamente en un número creciente de cuerpos lamelares que se forman y se vuelven a formar. Los cuerpos lamelares, a la dimensión del organismo y con una composición de fosfolípidos (bajo contenido de colesterol) que se asemeja a una membrana celular bacteriana, son ávidamente fagocitados por anillos concéntricos de leucocitos que envuelven el granuloma.
Este es un mecanismo de defensa innato en mamíferos, no reconocido hasta el momento, donde los organismos fagocitados, en su propia defensa, por medio del bloqueo de la fusión fagosoma/lisosoma intracelular, inevitablemente conducen a la acumulación local de gran número de cuerpos lamelares que portan una selección de porciones antigénicas de los invasores muertos. Esto crea automáticamente una amplificación creciente de la exposición local, luego distante, a moléculas antigénicas portadas por cuerpos lamelares, y por último da como resultado una potente respuesta terapéutica incluso a los más virulentos de los organismos.
Interacción Mesosoma-Cuerpo Lamelar en la Presentación de Antígenos Bacterianos en Granulomas.
Puestos de manifiesto mediante técnicas de microscopía electrónica similares a las que han descrito los cuerpos lamelares en tejidos animales, los mesosomas son pequeñas esferas (0,05 !m), compuestas por bicapas de fosfolípidos oligo-lamelares que están presentes en la mayor parte de las bacterias. En las bacterias vivas se pueden encontrar en una variedad de localizaciones para-membrana celular y paraseptales. Aunque se les han atribuido diferentes funciones, tales como la transferencia intercelular de ADN, su naturaleza y función han suscitado poca curiosidad. Sin embargo se reconoce, que los organismos dañados, moribundos y muertos liberan numerosos mesosomas que se dispersan en los desechos celulares de un evento inflamatorio local.
Los mesosomas tienen por lo tanto una estructura idéntica a los liposomas y los cuerpos lamelares, que tienen un radio de curvatura muy pequeño y están compuestos por fosfolípidos (sin colesterol). Se ha establecido que tales liposomas, debido a la alta tensión intra-membrana, se fusionan rápidamente con liposomas más grandes en cualquier mezcla de liposomas de tamaño variable (RRC New 1991. P28). De este modo se deduce que los mesosomas liberados de bacterias moribundas serán incorporados rápidamente, por medio de su química física, a cuerpos lamelares congregados en la localización del evento inflamatorio agudo. Las bicapas de fosfolípidos de origen bacteriano, ya sea derivadas de mesosomas o de membranas celulares de bacterias en desintegración, y que portan material proteico o peptídico potencialmente antigénico, serán automáticamente incorporadas en aquél sitio de las bicapas de fosfolípidos de los "liposomas" más grandes, esto es, cuerpos lamelares, presentes en la mezcla.
El ingrediente principal del Coadyuvante Completo de Freund, la pared celular micobacteriana emulsionada, utiliza sin darse cuenta este fenómeno no reconocido hasta ahora que se produce en el sitio de la respuesta inflamatoria a organismos invasores.
Las vesículas de fosfolípidos de la presente invención, por medio de su tamaño, su composición (bajo contenido de colesterol) y carga de antígeno, imitan de este modo este fenómeno.
La producción de proteínas de choque térmico (HSP) es la respuesta universal de las células procarióticas y eucarióticas al efecto lesivo del calor (Ritossa F 1962. Kaufmann SHE 1990). Al principio se creía que las HSP habían evolucionado para la prevención del desplegamiento de las proteínas a temperatura elevada, con posterioridad se demostró que muchos insultos distintos del calor inducían la síntesis de HSP, de manera que se introdujo el término "proteínas de estrés". Actualmente está claro que las HSP también cumplen importantes funciones fisiológicas, y que muchas están presentes y son activas en células normales (Ellis J. 1987. Pelham H 1988). De este modo se acuñó la denominación "chaperona molecular" para representar su papel más general como proteínas constitutivas de la célula (Ellis 1987, Pelham 1988). Entre las proteínas más conservadas conocidas en la filogenia, no es sorprendente por lo tanto que las HSP también estén profundamente implicadas en la inmunidad (Kaufman 1990).
El hecho de que el patógeno y el anfitrión utilicen mecanismos similares para protegerse entre sí, y de que esto se logre por medio de moléculas similares, cuadra bien en el amplio ámbito de las funciones de las HSP. Se cree que el que una única molécula comprenda epítopos con relevancia potencial para la protección adyacente de los epítopos con relevancia potencial en la patogénesis es un factor significativo en la inmunogenicidad de estas proteínas (Kaufman 1990).
Conexión de la Proteína Tensioactiva A (SP-A) y la HSP Micobacteriana de 65 kDa
Existen diversas evidencias de que las HSP micobacterianas de seres humanos son especies moleculares altamente inmunogénicas en la defensa contra las infecciones micobacterianas (tuberculosis, lepra), y una evidencia circunstancial considerable de que en individuos susceptibles genéticamente juegan un papel fundamental en la autoinmunidad (enfermedad inflamatoria de las articulaciones) (Dobbie et al 1994).
Hasta hace poco se creía que estaba asociada exclusivamente con la producción, dispersión y metabolismo del tensioactivo pulmonar, SP-A, una proteína secretora constitutiva de los pneumocitos de Tipo II, se ha demostrado sorprendentemente que está presente en abundancia en muchos tejidos corporales. Inicialmente descrita como una apoproteína íntimamente unida a los cuerpos lamelares alveolares, se reconoce actualmente que se encuentra invariablemente a elevadas concentraciones en tejidos extra-pulmonares que se especializan en la secreción de cuerpos lamelares (Dobbie et al). De este modo, se ha mostrado SP-A en la membrana sinovial, peritoneo, pericardio, pleura, piel, íleo terminal, conductos glandulares (biliar, lacrimal, salivar), vesícula biliar y próstata (Dobbie 1994). Resulta significativo que la SP-A muestre una homología considerable con el componente Clq de la Cascada del Complemento.
Las micobacterias son microorganismos obligados por nutrientes fosfolípidos. Por lo tanto no es una coincidencia que los tejidos que secretan, como los cuerpos lamelares, la cantidad más elevada de fosfolípido (Dobbie & Pavlina), sean aquellos tejidos (pulmón, articulaciones, cavidades serosas, íleo terminal, etc.) sometidos a infección primaria por las micobacterias patogénicas. Las infecciones micobacterianas en el ser humano se producen por consiguiente en los sitios de elevada producción de SP-A.
Recientemente se ha demostrado una sorprendente conexión entre la SP-A y las HSP micobacterianas por medio de la co-localización de anticuerpos para SP-A (PE 10, 5B8, 8H10) y de las HSP micobacterianas (ML30) en las células que secretan cuerpos lamelares a través de inmunotinción (Dobbie et al. 1994). Esta conexión se demuestra adicionalmente en una prueba de Transferencia Puntual en la que ML30 reacciona con SP-A, una preparación pura aislada sobre una columna de inmunoafinidad de Sefarosa, acoplada a los anticuerpos monoclonales 5B8 y 8H10. Esto indica epítopos compartidos, esto es, secuencias de aminoácidos homólogas, entre SP-A y las HSP micobacterianas. Esta sería una estrategia razonable por parte de los patógenos micobacterianos, ya que sus HSP lograban un camuflaje relativo con secuencias comunes con SP-A, puesto que estaban obligados a vivir en zonas ricas en fosfolípidos del anfitrión.
Está establecido que los macrófagos alveolares son las células principales implicadas en la fagocitosis y el reciclado del fosfolípido alveolar. Además, está establecido que la SP-A es crucial para este procedimiento mientras la selección de los liposomas con SP-A incremente la tasa de absorción de los liposomas en cultivos celulares de pneumocitos de Tipo II. Los autores de la presente invención han demostrado que los macrófagos en otros sitios extrapulmonares de elevado nivel de producción de cuerpos lamelares (articulaciones y cavidades corporales) son también las principales células implicadas en la absorción de cuerpos lamelares y el reciclado de los fosfolípidos. Por lo tanto se ha demostrado la SP-A mediante inmunotinción a concentraciones significativas en macrófagos en esas localizaciones extra-pulmonares. Por consiguiente se ha demostrado que la SP-A facilita la absorción de cuerpos lamelares por al menos una de las CPA profesionales.
Los autores de la presente invención concluyen por lo tanto que esta conexión entre la SP-A y las HSP micobacterianas representa un potente inmunoestimulante que involucra proteínas eucarióticas y procarióticas altamente conservadas en íntima relación recíproca entre fosfolípidos simples, que forman y reforman automáticamente cuerpos lamelares y mesosomas bacterianos. Se sugiere adicionalmente que este mecanismo en
individuos inmunológicamente disfuncionales, susceptibles genéticamente, es responsable del desencadenamiento de ciertas formas de auto-inmunidad, asociadas con la formación de granulomas en los que las HSP han sido presentadas recientemente como auto-antígenos candidato diana en enfermedades inflamatorias de las articulaciones.
Se realizaron comparaciones de las secuencias de la SPA de cuerpo lamelar de pulmón humano con la HSP de 65 kDa de M. leprae utilizando comparaciones de extensión múltiple y puntuaciones de Dayhoff para sopesar el emparejamiento de Aa. La longitud mínima para seleccionar péptidos autólogos fue de 10 Aa, con dos posibilidades
– sin deleción o deleción de 3 o menos de 3 Aa con péptidos homólogos alineados. La SP-A tiene 150 Aa, la HSP de 65 kDa tiene 540 Aa. Como segunda etapa, se seleccionaron los alineamientos que mostraban sub-secuencias potencialmente antigénicas. Se utilizaron dos criterios para realizar la selección: la presencia dentro del péptido de un carácter anfipático compatible con una hélice alfa y la presencia de uno de los dos patrones observados en péptidos antigénicos bien determinados. Estos dos patrones corresponden a secuencias de Aa preferidas basadas en su carácter hidrófilo, hidrófobo o neutro.
Más abajo se proporcionan las secuencias del antígeno de 65 kDa y de la SP-A, sin deleción, que muestran homología:
Esta secuencia del antígeno de 65 kDa ha sido reconocida como un epítopo por los anticuerpos monoclonales anti-
M. leprae (H 9) (Shinnick et al 1987). Los péptidos sintéticos de esta secuencia han sido identificados como un epítopo implicado en el reconocimiento por las células T humanas de M. tuberculosis (Lamb et al 1989).
Más abajo se muestra una segunda secuencia que presenta homología:
Los pacientes con artritis reumatoide demuestran una reactividad de los linfocitos T específica para este epítopo micobacteriano (van Eden 1988).
Papel de las HSP en la Captura de Antígenos y como Chaperonas en Células Dendríticas
Se están acumulando evidencias de que las HSP del anfitrión tienen un importante papel en el inicio y la amplificación de la respuesta inmunitaria a través de su efecto sobre las CPA profesionales, especialmente sobre las CD (Colaco, 1998). Existe un interés creciente en el efecto inmunoestimulante de las HSP endógenas, provocado por la liberación temprana de citoquinas, al facilitar la captura del antígeno por las CD. Además, se reconoce cada vez más que las HSP endógenas actúan como chaperonas, canalizando los antígenos en cisternas y orgánulos intracelulares apropiados para un procesamiento eficaz del determinante antigénico.
El análisis de los autores de la presente invención de los datos publicados sobre el funcionamiento del Coadyuvante Completo de Freund indica que las HSP micobacterianas provocan en el ser humano estímulos inmunitarios rápidos y potentes, innatos por medio de los mecanismos detallados previamente. De este modo las HSP micobacterianas o los péptidos derivados, adherentes o incorporados a los cuerpos lamelares, actúan facilitando tanto su anclaje como su fagocitosis.
Adicionalmente se mantiene que los motivos peptídicos, incluyendo aquellas secuencias de Aa compartidas por las HSP micobacterianas de 65kDa, y la SP-A humana proporcionan los péptidos fundamentales que conducen esta captura eficaz del antígeno y su procesamiento por las CD. Por lo tanto se propone que las vesículas de fosfolípidos de tipo cuerpo lamelar, cargadas con dichos motivos y un antígeno seleccionado, utilizarán esta propiedad inmunoestimulante o coadyuvante de las HSP micobacterianas en el pulsado de CD autólogas en la vacunación o en la inmunoterapia.
De este modo el rasgo clave de esta invención es la adición de péptidos que explotan una respuesta temprana y potente, innata por las CPA, donde uno o varios motivos de un patógeno peligroso de especie reconocida, esto es, péptidos HSP micobacterianos, garantizan la atención y la captura inmediatas del antígeno cuando se presenta asociado con estos motivos. El análisis implica que la elevada eficacia del Coadyuvante Completo de Freund, sin todos los desechos micobacterianos y las gotitas de aceite acompañantes, se obtendrá a través de la incorporación de estos motivos a vesículas de fosfolípidos junto con el antígeno cargado.
Composición de las vesículas de Fosfolípidos cebadas con Motivos HSP / SP-A Micobacterianos
Las vesículas de fosfolípidos se componen de fosfolípidos y colesterol en las proporciones especificadas más arriba. Los motivos de Aa se presentan en forma de soluto (concentraciones enumeradas) en la solución salina normal (0,9%) utilizada en el procedimiento de hidratación en la formación de la vesícula de fosfolípidos.
La presente invención también proporciona vesículas de fosfolípidos inmunoestimulantes que incorporan dimicolato para una vacunación de micro-granuloma controlado; vesículas de fosfolípidos que incorporan la Secuencia 77-110 del Péptido SP-A para Presentar el Antígeno a CPA Profesionales y No Profesionales Autólogas in vitro para Llevar a cabo una Respuesta Inmunoterapéutica en un Anfitrión; y vesículas de fosfolípidos que Incorporan Dimicolato de Trehalosa y la Secuencia 77-110 del Péptido SP-A.
Documentos referenciados en la presente memoria
Dobbie JW (1988) Ultrastructural similarities between mesothelium and Type II pneumocytes and their relevance to fosfolipid surfactant production by the peritoneum. En: Advances in Continuous Ambulatory Peritoneal Dialysis, (Eds: Khanna R, Nolph KD, Prowant B), University of Toronto Press, Toronto, págs. 47-53.
Dobbie JW, Pavlina T, Lloyd J, Johnson RC (1988) Phosphatidylcoline synthesis by peritoneal mesothelium: Its implications for peritoneal dialysis, Am.J. Kid. Dis. 12, 31-36.
Dobbie JW, Lloyd JK (1989) Mesothelium secretes lamellar bodies in a similar manner to Type II pneumocyte secretion of surfactant. Perit. Dial. Int. 9: 215-219.
Dobbie JW, Tasiaux N, Meijers P et al. (1994) Lamellar bodies in synoviocytes, mesothelium and specific epithelia as possible site of auto-antigen in rheumatoid disease. B J Rheum 33:508-519.
Dobbie JW, Hind C, Meijers P, Bodart C, Tasiaux N, Perret J, Anderson JD. (1995) Lamellar body secretion: Ultrastructural analysis of an unexplored function of synoviocytes. Br J Rheum. 34:13-23.
Dobbie JW, Anderson JD (1996) Infrastructure, distribution and density of lamellar bodies in human peritoneum. Perit Dial Int. 16:482-487.
New RRC ed. (1990) Liposomes: A Practical Approach. Oxford University Press, Nueva York. págs. 36-39.
Male D, Champion B, Cooke A, Owen M. (1991) E: Advanced Immunology. Segunda Edición. Gower Medical Publishing, Londres, Nueva York. págs. 8.13-8.14.
Melman I, Turley SJ, Steinman RM. (1998) Antigen processing for amateurs and professionals. Trends Cell Biol. 8:231-35.
Tjoa B Simmons S. Bowes V. et al. (1998) Evaluation of Phase I/II clinical trials in prostate cancer with dendritic cells and PSMA peptides. Prostate 36:39-44.
Banchereau J, Steinman RM 1998 Dendritic cells and the control of immunity. Nature 392:245.
Colaco CALS (1998) Towards a unified theory of immunity: Dendritic cells, stress proteins and antigen capture. Cell Mol Biol. 44:883-90.
Markowicz S, Engelman EG (1990) Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor promotes differentiation and survival of human peripheral blood dendritic cells in vitro. J Clin Invest. 85:955-61.
RitossaF (1962) Experientia 18:571-73.
Kaufmann SHE (1990) Heat shock proteins and the immune response. Immunology Today, 1 1:129-36).
Ellis J. (1987) Nature 328:378-79. Pelham H (1988) Nature 332:776-77.
LISTA DE SECUENCIAS
<110> Lamellar Therapeutics Ltd
<120> Métodos y composiciones inmunoterapéuticos
<130> Péptidos adyuvantes
<140>
<141>
<160> 4
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> SEC ID NO: 1
<211> 12
<212> PRT
<213> Mycobacterium leprae
<400> 1
<210> SEC ID NO: 2
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
<210> SEC ID NO: 3
<211> 16
<212> PRT
<213> Mycobacterium leprae
<400> 3
<210> SEC ID NO: 4
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Claims (16)
- REIVINDICACIONES1. Una vesícula de fosfolípidos para producir una respuesta inmunitaria, teniendo la vesícula de fosfolípidos una estructura de tipo cuerpo lamelar, multilamelar, y comprendiendo la composición de fosfolípidos de la vesícula de fosfolípidos:fosfatidilcolina 44% a 60%, esfingomielina 15% a 25%, fosfatidiletanolamina 6% a 10%, fosfatidilserina 2% a 6%, fosfatidilinositol 2% a 4% y colesterol 4% a 12%donde las cifras representan el porcentaje en peso, teniendo la vesícula de fosfolípidos un antígeno exógeno o un poliácido nucleico que codifica un antígeno, estando adaptada la vesícula de fosfolípidos para ser fagocitada por las células presentadoras de antígenos.
-
- 2.
- Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en la Reivindicación 1, donde la composición de fosfolípidos comprende fosfatidilcolina 54%, esfingomielina 19%, fosfatidiletanolamina 8%, fosfatidilserina 4%, fosfatidilinositol 3%
y colesterol 10% donde las cifras representan el porcentaje en peso. -
- 3.
- Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, donde la composición de fosfolípido incluye lisolecitina.
-
- 4.
- Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en la Reivindicación 3, donde la composición de fosfolípidos incluye de 0% a 3% en peso de lisolecitina.
-
- 5.
- Una vesícula de fosfolípido según se reivindica en la Reivindicación 3 o la Reivindicación 4, donde la composición de fosfolípidos de la vesícula incluye 2% de lisolecitina.
-
- 6.
- Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en la Reivindicación 3 o la Reivindicación 4, donde la vesícula es un cuerpo lamelar aislado del organismo de un mamífero.
-
- 7.
- Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en una cualquiera de las Reivindicaciones anteriores, para su uso como un agente de vacunación.
-
- 8.
- Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en la Reivindicaciones 1 a 7, que tiene una proteína que tiene una secuencia peptídica que es homóloga o idéntica a la mostrada en el ID de secuencia No 1 o No 2, y que tiene una secuencia peptídica adicional que es homóloga o idéntica a las mostradas en el ID de secuencia No 3 o No 4, donde la proteína resultante es capaz de actuar como un coadyuvante para producir una respuesta inmunitaria.
-
- 9.
- Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en la Reivindicación 8, donde la secuencia peptídica que es homóloga muestra una homología entre 99% y 75% con el SEQ ID No 1, el SEQ ID No 2, el SEQ ID No 3 o el SEQ ID No 4, respectivamente.
-
- 10.
- Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en la Reivindicación 8, donde la secuencia peptídica que es homóloga muestra una homología de 99% con el SEQ ID No 1, el SEQ ID No 2, el SEQ ID No 3 o el SEQ ID No 4, respectivamente.
-
- 11.
- Una vesícula de fosfolípidos de acuerdo con la Reivindicación 8 que tiene una proteína que tiene una secuencia peptídica como se muestra en el ID de secuencia No 1 o el ID No 2, y que tiene adicionalmente una secuencia peptídica como se muestra en el ID de secuencia No 3 o el ID No 4.
- 12. Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7, que tiene 5 dimicolato de trehalosa.
- 13. Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7 que incorpora la secuencia 77 a 110 del péptido SP-A para presentar un antígeno a células presentadoras de antígenos profesionales y no profesionales autólogas in vitro para llevar a cabo una respuesta inmunoterapéutica en un anfitrión.10 14. Una vesícula de fosfolípidos según se reivindica en una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7 que incorpora dimicolato de trehalosa y la secuencia 77 a 110 del péptido SP-A.
- 15. Células presentadoras de antígenos modificadas para inducir una respuesta inmunitaria celular que comprenden células presentadoras de antígenos aisladas de un organismo de un mamífero, modificadas por medio de la absorción de vesículas de fosfolípidos de acuerdo con una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12.15 16. Células presentadoras de antígenos modificadas según se reivindica en la Reivindicación 15, donde las células presentadoras de antígenos son células dendríticas.
-
- 17.
- Un método de incorporación de antígenos a células dendríticas, que comprende la etapa de mezclar vesículas de fosfolípidos de acuerdo con las Reivindicaciones 1 a 7 con células dendríticas.
-
- 18.
- Una composición farmacéutica para inducir una respuesta inmunitaria que comprende una vesícula de
20 fosfolípidos de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 7, o células presentadoras de antígenos modificadas de acuerdo con las Reivindicaciones 15 y 16, y un portador farmacológicamente aceptable.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0007150 | 2000-03-24 | ||
| GBGB0007150.6A GB0007150D0 (en) | 2000-03-24 | 2000-03-24 | Immunotherapeutic methods and compositions |
| PCT/GB2001/001936 WO2001072277A2 (en) | 2000-03-24 | 2001-03-26 | Immunotherapeutic methods and compositions |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2382070T3 true ES2382070T3 (es) | 2012-06-05 |
Family
ID=9888324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES01929778T Expired - Lifetime ES2382070T3 (es) | 2000-03-24 | 2001-03-26 | Métodos y composiciones inmunoterapéuticos |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20040110695A1 (es) |
| EP (1) | EP1267924B1 (es) |
| JP (1) | JP2004517031A (es) |
| AT (1) | ATE544470T1 (es) |
| AU (2) | AU5646101A (es) |
| CA (1) | CA2404325C (es) |
| DK (1) | DK1267924T3 (es) |
| ES (1) | ES2382070T3 (es) |
| GB (1) | GB0007150D0 (es) |
| NO (1) | NO333157B1 (es) |
| NZ (1) | NZ522058A (es) |
| PT (1) | PT1267924E (es) |
| WO (1) | WO2001072277A2 (es) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0007150D0 (en) * | 2000-03-24 | 2000-05-17 | Lamellar Therapeutics Limited | Immunotherapeutic methods and compositions |
| GB0207653D0 (en) * | 2002-04-03 | 2002-05-15 | Lamellar Therapeutics Ltd | Methods of using lamellar bodies for therapeutic purposes |
| DK1592441T3 (da) * | 2003-02-06 | 2012-05-14 | Aduro Biotech | Listeria, hvis indtrængen i ikke-phagocytiske celler er svækket, vacciner omfattende listeria og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
| US11324698B2 (en) * | 2003-08-28 | 2022-05-10 | Vgsk Technologies, Inc. | Sterically stabilized carrier for aerosol therapeutics, compositions and methods for treating the respiratory tract of a mammal |
| GB0322448D0 (en) * | 2003-09-25 | 2003-10-29 | Lamellar Therapeutics Ltd | Using lamellar bodies to modify linear biological macro molecules |
| AU2004275550B2 (en) * | 2003-09-25 | 2011-08-18 | Lamellar Biomedical Limited | Compositions and methods of using lamellar bodies for therapeutic purposes |
| ATE406874T1 (de) * | 2004-07-07 | 2008-09-15 | Statens Seruminstitut | Zusammensetzungen und verfahren zur stabilisierung von adjuvans-formulierungen auf lipid-basis unter verwendung von glykolipiden |
| WO2007130465A2 (en) | 2006-05-02 | 2007-11-15 | Green Medical, Inc. | Systems and methods for treating superficial venous malformations like spider veins |
| US7465312B2 (en) | 2006-05-02 | 2008-12-16 | Green Medical, Inc. | Systems and methods for treating superficial venous malformations like spider veins |
| JP5667180B2 (ja) * | 2009-07-01 | 2015-02-12 | イオン メディックス インコーポレイテッド | 哺乳類の有核細胞に由来するマイクロベシクル及びその用途 |
| RU2570636C2 (ru) | 2010-07-01 | 2015-12-10 | Аэон Медикс Инк | Микровезикулы, происходящие из протопластов клеток, и их применение |
| CN107115314B (zh) * | 2011-06-02 | 2022-04-29 | 加利福尼亚大学董事会 | 膜包封的纳米颗粒及使用方法 |
| WO2015021390A2 (en) | 2013-08-08 | 2015-02-12 | The Regents Of The University Of California | Nanoparticles leverage biological membranes to target pathogens for disease treatment and diagnosis |
| US20170000875A1 (en) | 2013-12-02 | 2017-01-05 | Arytha Biosciences, Llc | Toxoid preparation and uses thereof |
| WO2015143295A2 (en) | 2014-03-20 | 2015-09-24 | The Regents Of The University Of California | Hydrogel compositions containing toxin-absorbing or binding nanoparticles and uses thereof |
| WO2015187502A1 (en) | 2014-06-02 | 2015-12-10 | Cellics Therapeutics, Inc. | Use of nanoparticles coated with red blood cell membranes to treat hemolytic diseases and disorders |
| WO2016109306A1 (en) | 2015-01-02 | 2016-07-07 | Cellics Therapeutics, Inc. | Use of nanoparticles coated with red blood cell membranes to enable blood transfusion |
| WO2016176041A1 (en) | 2015-04-29 | 2016-11-03 | The Regents Of The University Of California | Detoxification using nanoparticles |
| US20190046444A1 (en) | 2015-09-14 | 2019-02-14 | Vgsk Techologies, Inc. | A sterically stabilized carrier for subcutaneous, sublingual, and oral therapeutics, compositions and methods for treating a mammal |
| EP3632410A1 (en) | 2018-10-05 | 2020-04-08 | Lamellar Biomedical Limited | Lipidic polynucleotide carriers for cellular delivery |
| EP3692984A1 (en) | 2019-02-08 | 2020-08-12 | Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts | Annexin-coated particles |
| AU2022270670A1 (en) | 2021-05-05 | 2023-11-30 | Nejat Duzgunes | Liposome-encapsulated corticosteriods inhibit sars-cov-2 replication and reduces lung inflammation |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5925375A (en) * | 1987-05-22 | 1999-07-20 | The Liposome Company, Inc. | Therapeutic use of multilamellar liposomal prostaglandin formulations |
| US5403592A (en) * | 1987-08-25 | 1995-04-04 | Macnaught Pty Limited | Lubricant composition for rheumatism |
| US5006343A (en) * | 1988-12-29 | 1991-04-09 | Benson Bradley J | Pulmonary administration of pharmaceutically active substances |
| FR2645878B1 (fr) * | 1989-04-17 | 1994-02-25 | Institut Nal Sante Recherc Medic | Sequences nucleotidiques d'actinomycetales, applications a la synthese ou a la detection d'acides nucleiques, produits d'expression de ces sequences et application en tant que compositions immunogenes |
| US5088499A (en) * | 1989-12-22 | 1992-02-18 | Unger Evan C | Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same |
| ATE164230T1 (de) * | 1991-05-29 | 1998-04-15 | Baxter Int | 4verfahren und zusammensetzungen zur vorbeugung, diagnose und behandlung seröser entzündungen und damit verbundener störungen |
| JPH05339169A (ja) * | 1992-03-03 | 1993-12-21 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | 経口ワクチン |
| US5543152A (en) * | 1994-06-20 | 1996-08-06 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Sphingosomes for enhanced drug delivery |
| US5462752A (en) * | 1994-07-28 | 1995-10-31 | Prp, Inc. | Inhibition of platelet binding |
| US5643599A (en) * | 1995-06-07 | 1997-07-01 | President And Fellows Of Harvard College | Intracellular delivery of macromolecules |
| JPH11510046A (ja) * | 1995-07-21 | 1999-09-07 | ローヌ−プーラン ローラー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | アデノ関連ウイルスリポソーム及び樹状細胞をトランスフェクトして特異性免疫を刺激することにおけるそれらの使用 |
| JP4480800B2 (ja) * | 1997-05-08 | 2010-06-16 | オンコシリオン・インコーポレイテッド | 活性化ｔ細胞および抗原パルス標識した抗原提示細胞を生成する方法 |
| GB9807298D0 (en) * | 1998-04-03 | 1998-06-03 | Britannia Pharmaceuticals Ltd | Medicament |
| EP0976403A1 (en) * | 1998-07-30 | 2000-02-02 | Stichting Instituut voor Dierhouderij en Diergezondheid (ID-DLO) | Adjuvant comprising pulmonary surfactant |
| US6290987B1 (en) * | 1998-09-27 | 2001-09-18 | Generex Pharmaceuticals, Inc. | Mixed liposome pharmaceutical formulation with amphiphiles and phospholipids |
| US6193997B1 (en) * | 1998-09-27 | 2001-02-27 | Generex Pharmaceuticals Inc. | Proteinic drug delivery system using membrane mimetics |
| GB0007150D0 (en) * | 2000-03-24 | 2000-05-17 | Lamellar Therapeutics Limited | Immunotherapeutic methods and compositions |
| GB0207653D0 (en) * | 2002-04-03 | 2002-05-15 | Lamellar Therapeutics Ltd | Methods of using lamellar bodies for therapeutic purposes |
| GB0322448D0 (en) * | 2003-09-25 | 2003-10-29 | Lamellar Therapeutics Ltd | Using lamellar bodies to modify linear biological macro molecules |
-
2000
- 2000-03-24 GB GBGB0007150.6A patent/GB0007150D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-03-26 DK DK01929778.7T patent/DK1267924T3/da active
- 2001-03-26 CA CA2404325A patent/CA2404325C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-26 AU AU5646101A patent/AU5646101A/xx active Pending
- 2001-03-26 AU AU2001256461A patent/AU2001256461B2/en not_active Ceased
- 2001-03-26 EP EP01929778A patent/EP1267924B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-26 ES ES01929778T patent/ES2382070T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-26 AT AT01929778T patent/ATE544470T1/de active
- 2001-03-26 NZ NZ522058A patent/NZ522058A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-03-26 PT PT01929778T patent/PT1267924E/pt unknown
- 2001-03-26 US US10/239,576 patent/US20040110695A1/en not_active Abandoned
- 2001-03-26 JP JP2001570238A patent/JP2004517031A/ja active Pending
- 2001-03-26 WO PCT/GB2001/001936 patent/WO2001072277A2/en not_active Ceased
-
2002
- 2002-09-24 NO NO20024571A patent/NO333157B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-07-24 US US11/491,177 patent/US20080069866A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK1267924T3 (da) | 2012-05-29 |
| US20080069866A1 (en) | 2008-03-20 |
| CA2404325C (en) | 2012-06-12 |
| NZ522058A (en) | 2005-05-27 |
| EP1267924B1 (en) | 2012-02-08 |
| GB0007150D0 (en) | 2000-05-17 |
| CA2404325A1 (en) | 2001-10-04 |
| AU2001256461B2 (en) | 2005-06-30 |
| NO333157B1 (no) | 2013-03-18 |
| WO2001072277A2 (en) | 2001-10-04 |
| AU5646101A (en) | 2001-10-08 |
| US20040110695A1 (en) | 2004-06-10 |
| NO20024571L (no) | 2002-10-14 |
| NO20024571D0 (no) | 2002-09-24 |
| PT1267924E (pt) | 2012-05-24 |
| JP2004517031A (ja) | 2004-06-10 |
| ATE544470T1 (de) | 2012-02-15 |
| EP1267924A2 (en) | 2003-01-02 |
| WO2001072277A3 (en) | 2002-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1267924B1 (en) | Immunotherapeutic methods and compositions | |
| Meng et al. | Biosynthetic neoantigen displayed on bacteria derived vesicles elicit systemic antitumour immunity | |
| AU2001256461A1 (en) | Immunotherapeutic methods and compositions | |
| Stephens | Immune responses of some insects to some bacterial antigens | |
| ES2869155T3 (es) | Péptidos inmunogénicos para su uso en la prevención y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, enfermedades autoinmunitarias, respuestas inmunitarias a alofactores, enfermedades alérgicas, tumores, rechazo de injerto y respuestas inmunitarias contra vectores virales usados para terapia génica o vacunación génica | |
| ES2709176T3 (es) | Péptidos inmunogénicos y su uso en trastornos inmunitarios | |
| Chaput et al. | The potential of exosomes in immunotherapy | |
| KR20080082893A (ko) | 면역 질환의 예방 또는 치료제 및 방법 | |
| ES2290390T3 (es) | Medio acondicionado y producto biologico difundible producido incubando celulas atrapadas. | |
| ES2689141T3 (es) | Modulación de inmunogenicidad antigénica mediante la adición de epítopos reconocidos por linfocitos T citolíticos naturales | |
| BRPI0707556A2 (pt) | veÍculo para vacina | |
| EP1427394B1 (en) | Process for accelerating recovery from trauma by using apoptosis-mimicking synthetic or natural entities | |
| US6749831B1 (en) | Vaccine against lipopolysaccharide core | |
| TWI457145B (zh) | 以被包封於微脂粒內之蒂卡琳素（ｓｔｉｃｈｏｌｙｓｉｎ）為基礎的疫苗組成物 | |
| Sinha et al. | A Text book of Immunology | |
| NO335784B1 (no) | Liposomvaksine omfattende antigenisk materiale fra finne-fisk patogener. | |
| CN101405025B (zh) | 含有同种异体或异种肿瘤细胞的肿瘤疫苗 | |
| BR112020024211A2 (pt) | compostos de peptídeo multiepitópico e vacinas contra leishmaniose | |
| JP2013166699A (ja) | 不活化したウイルス粒子を含む複合体及びその用途 | |
| ES2509351T3 (es) | Procedimiento para la purificación de DNAK | |
| CN1887296B (zh) | 一种诱导抗肿瘤免疫的方法及其在制药中的应用 | |
| JP2001527562A (ja) | リポ多糖コアに対するワクチン | |
| Craig et al. | Immunization against experimental rabbit cysticercosis using liposome-associated antigen preparations | |
| Nain et al. | Elicitation of protective immunity to Entamoeba histolytica—an experimental study | |
| Janatpour et al. | A brief history of blood transfusion |