ES2389383T3 - Procedimiento para la preparación de derivados de esteroides mediante la reducción de compuestos oxoesteroides o mediante la oxidación de compuestos hidroxiesteroides usando una hidroxiesteroide deshidrogenasa - Google Patents
Procedimiento para la preparación de derivados de esteroides mediante la reducción de compuestos oxoesteroides o mediante la oxidación de compuestos hidroxiesteroides usando una hidroxiesteroide deshidrogenasa Download PDFInfo
- Publication number
- ES2389383T3 ES2389383T3 ES07724138T ES07724138T ES2389383T3 ES 2389383 T3 ES2389383 T3 ES 2389383T3 ES 07724138 T ES07724138 T ES 07724138T ES 07724138 T ES07724138 T ES 07724138T ES 2389383 T3 ES2389383 T3 ES 2389383T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- group
- represents hydrogen
- compound
- hydroxysteroid
- methyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 44
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 35
- 108010062875 Hydroxysteroid Dehydrogenases Proteins 0.000 title claims description 22
- 102000011145 Hydroxysteroid Dehydrogenases Human genes 0.000 title claims description 22
- KVUXYQHEESDGIJ-UHFFFAOYSA-N 10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-3,16-diol Chemical class C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CC(O)CC1(C)CC2 KVUXYQHEESDGIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 9
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 title description 25
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 title 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 56
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 54
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 54
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 54
- 125000004043 oxo group Chemical group O=* 0.000 claims abstract description 46
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 43
- -1 steroid compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 38
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims abstract description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 22
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 53
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 31
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 26
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 25
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 claims description 22
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 19
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 18
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 14
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 claims description 14
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 claims description 14
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 claims description 14
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 claims description 12
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 claims description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 claims description 11
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 10
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 10
- 150000003333 secondary alcohols Chemical class 0.000 claims description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 9
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N n-butyl methyl ketone Natural products CCCCC(C)=O QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CETWDUZRCINIHU-UHFFFAOYSA-N 2-heptanol Chemical compound CCCCCC(C)O CETWDUZRCINIHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZPVFWPFBNIEHGJ-UHFFFAOYSA-N 2-octanone Chemical compound CCCCCCC(C)=O ZPVFWPFBNIEHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WVYWICLMDOOCFB-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2-pentanol Chemical compound CC(C)CC(C)O WVYWICLMDOOCFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FFWSICBKRCICMR-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-hexanone Chemical compound CC(C)CCC(C)=O FFWSICBKRCICMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 claims description 6
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LUJVUUWNAPIQQI-QAGGRKNESA-N androsta-1,4-diene-3,17-dione Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 LUJVUUWNAPIQQI-QAGGRKNESA-N 0.000 claims description 6
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 claims description 6
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CATSNJVOTSVZJV-UHFFFAOYSA-N heptan-2-one Chemical compound CCCCCC(C)=O CATSNJVOTSVZJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- QNVRIHYSUZMSGM-UHFFFAOYSA-N hexan-2-ol Chemical compound CCCCC(C)O QNVRIHYSUZMSGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 6
- SJWFXCIHNDVPSH-UHFFFAOYSA-N octan-2-ol Chemical compound CCCCCCC(C)O SJWFXCIHNDVPSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- JYVLIDXNZAXMDK-UHFFFAOYSA-N pentan-2-ol Chemical compound CCCC(C)O JYVLIDXNZAXMDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XNLICIUVMPYHGG-UHFFFAOYSA-N pentan-2-one Chemical compound CCCC(C)=O XNLICIUVMPYHGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 5
- 125000004209 (C1-C8) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 claims description 4
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QNVRIHYSUZMSGM-LURJTMIESA-N 2-Hexanol Natural products CCCC[C@H](C)O QNVRIHYSUZMSGM-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 3
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 claims description 3
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 claims description 3
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical class C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 claims description 2
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 21
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 21
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 21
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 20
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 20
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 14
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 13
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 102100039358 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2 Human genes 0.000 description 8
- 108010014831 7-alpha-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 8
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 8
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 6
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 6
- 238000002670 nicotine replacement therapy Methods 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MUMGGOZAMZWBJJ-UHFFFAOYSA-N 4-Androsten-17alpha-ol-3-on Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)O)C4C3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 5
- 241000589518 Comamonas testosteroni Species 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 4
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 4
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001298 alcohols Chemical group 0.000 description 4
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 4
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 108010082514 17-Hydroxysteroid Dehydrogenases Proteins 0.000 description 3
- 102000004026 17-Hydroxysteroid Dehydrogenases Human genes 0.000 description 3
- 108010070743 3(or 17)-beta-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 102100024089 Aldo-keto reductase family 1 member C2 Human genes 0.000 description 3
- 102100034067 Dehydrogenase/reductase SDR family member 11 Human genes 0.000 description 3
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001924 cycloalkanes Chemical class 0.000 description 3
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 3
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 3
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 3
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010060191 3(17)-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102000009878 3-Hydroxysteroid Dehydrogenases Human genes 0.000 description 2
- ZDVJGWXFXGJSIU-UHFFFAOYSA-N 5-methylhexan-2-ol Chemical compound CC(C)CCC(C)O ZDVJGWXFXGJSIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010031132 Alcohol Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000606124 Bacteroides fragilis Species 0.000 description 2
- 102100021973 Carbonyl reductase [NADPH] 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002154 Cortisone Reductase Proteins 0.000 description 2
- 241001267419 Eubacterium sp. Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001304302 Kuraishia capsulata Species 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 101000744001 Ruminococcus gnavus (strain ATCC 29149 / VPI C7-9) 3beta-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 241000193462 [Clostridium] innocuum Species 0.000 description 2
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 2
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 2
- BGTOWKSIORTVQH-UHFFFAOYSA-N cyclopentanone Chemical compound O=C1CCCC1 BGTOWKSIORTVQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 2
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 2
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- INLFWQCRAJUDCR-IQVMEADQSA-N (1R,2S,4S,5'S,6R,7S,8R,9S,12S,13S)-5',7,9,13-tetramethylspiro[5-oxapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosane-6,2'-oxane] Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCCCC4CC[C@H]3[C@@H]2C1)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@H](C)CO1 INLFWQCRAJUDCR-IQVMEADQSA-N 0.000 description 1
- RWBRUCCWZPSBFC-SJOKZOANSA-N (20R)-20-hydroxypregn-4-en-3-one Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](O)C)[C@@]1(C)CC2 RWBRUCCWZPSBFC-SJOKZOANSA-N 0.000 description 1
- MSEZLHAVPJYYIQ-VMXHOPILSA-N (8s,9s,10r,13s,14s)-10,13-dimethyl-1,2,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CCC[C@@]1(C)CC2 MSEZLHAVPJYYIQ-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 108090000874 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 102000004277 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenases Human genes 0.000 description 1
- WHBHBVVOGNECLV-OBQKJFGGSA-N 11-deoxycortisol Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 WHBHBVVOGNECLV-OBQKJFGGSA-N 0.000 description 1
- 108010073927 12-alpha-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101710172561 3alpha-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- QGXBDMJGAMFCBF-HLUDHZFRSA-N 5α-Androsterone Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 QGXBDMJGAMFCBF-HLUDHZFRSA-N 0.000 description 1
- 108010032887 7 beta-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241001156739 Actinobacteria <phylum> Species 0.000 description 1
- 102000005751 Alcohol Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 102100024090 Aldo-keto reductase family 1 member C3 Human genes 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 description 1
- DBPRUZCKPFOVDV-UHFFFAOYSA-N Clorprenaline hydrochloride Chemical compound O.Cl.CC(C)NCC(O)C1=CC=CC=C1Cl DBPRUZCKPFOVDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241001147791 Clostridium paraputrificum Species 0.000 description 1
- 241001147706 Clostridium sardiniense Species 0.000 description 1
- 241001140928 Clostridium sordelli Species 0.000 description 1
- 241001262170 Collinsella aerofaciens Species 0.000 description 1
- 241000223211 Curvularia lunata Species 0.000 description 1
- 241000723247 Cylindrocarpon Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- QGXBDMJGAMFCBF-UHFFFAOYSA-N Etiocholanolone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC21 QGXBDMJGAMFCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186394 Eubacterium Species 0.000 description 1
- 108090000698 Formate Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 108010050375 Glucose 1-Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000690306 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C3 Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 description 1
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 description 1
- 241001468191 Lactobacillus kefiri Species 0.000 description 1
- 241000192003 Leuconostoc carnosum Species 0.000 description 1
- 241001508814 Lodderomyces elongisporus Species 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001467578 Microbacterium Species 0.000 description 1
- 241000235042 Millerozyma farinosa Species 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-L NADH(2-) Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-L 0.000 description 1
- 241000489470 Ogataea trehalophila Species 0.000 description 1
- 241000826199 Ogataea wickerhamii Species 0.000 description 1
- 241000193465 Paeniclostridium sordellii Species 0.000 description 1
- ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N Pregnenolone Natural products O=C(C)[C@@H]1[C@@]2(C)[C@H]([C@H]3[C@@H]([C@]4(C)C(=CC3)C[C@@H](O)CC4)CC2)CC1 ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000316848 Rhodococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 241000187563 Rhodococcus ruber Species 0.000 description 1
- 241000223254 Rhodotorula mucilaginosa Species 0.000 description 1
- 241000192031 Ruminococcus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000223892 Tetrahymena Species 0.000 description 1
- 241001147775 Thermoanaerobacter brockii Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000186864 Weissella minor Species 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000512910 [Candida] nemodendra Species 0.000 description 1
- 241001147801 [Clostridium] scindens Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940124325 anabolic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 1
- 229940061641 androsterone Drugs 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000001741 anti-phlogistic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 description 1
- 229940030495 antiandrogen sex hormone and modulator of the genital system Drugs 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229940055022 candida parapsilosis Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical group C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- 229940124558 contraceptive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- 150000001887 cortisones Chemical class 0.000 description 1
- 150000003997 cyclic ketones Chemical class 0.000 description 1
- XCIXKGXIYUWCLL-UHFFFAOYSA-N cyclopentanol Chemical compound OC1CCCC1 XCIXKGXIYUWCLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 108010084715 isopropanol dehydrogenase (NADP) Proteins 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- QXLPXWSKPNOQLE-UHFFFAOYSA-N methylpentynol Chemical compound CCC(C)(O)C#C QXLPXWSKPNOQLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N pregnenolone Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N 0.000 description 1
- 229960000249 pregnenolone Drugs 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000011916 stereoselective reduction Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 1
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/02—Dehydrogenating; Dehydroxylating
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/12—Acting on D ring
- C12P33/16—Acting at 17 position
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/002—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by oxidation/reduction reactions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Procedimiento para la reducción enzimática enantioselectiva de compuestos oxoesteroides de la fórmula general Ien la que **Fórmula**R1 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,R2 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,R3 representa hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un grupo metilo,R4 representa hidrógeno o un grupo hidroxilo,R5 representa hidrógeno, un resto -COR10, en el que R10 es un grupo alquilo C1-C4 sustituido con un grupo hidroxiloo no sustitudio, o un grupo carboxialquilo C1-C4 sustituido o no sustituido,o R4 y R5 representan conjuntamente un grupo oxo,R6 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,R7 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,R8 representa hidrógeno, un grupo metilo o un haluro, yR9 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un haluro,siendo al menos uno de R1, R2, R4 + R5, R6, R8 o R9 un grupo oxo o R5 es un resto -COR10 y el elemento estructural
Description
Procedimiento para la preparación de derivados de esteroides mediante la reducción de compuestos oxoesteroides
o mediante la oxidación de compuestos hidroxiesteroides usando una hidroxiesteroide deshidrogenasa
La presente invención se refiere a un procedimiento para la reducción enzimática enantioselectiva de compuestos 5 oxoesteroides, reduciéndose el compuesto oxoesteroide con una hidroxiesteroide deshidrogenasa en presencia de un cofactor NADH o NADPH.
La presente invención se refiere también a un procedimiento para la oxidación enzimática de compuestos hidroxiesteroides, oxidándose el compuesto hidroxiesteroide con una hidroxiesteroide deshidrogenasa en presencia de un cofactor NAD o NADP.
10 Los esteroides son compuestos que poseen el sistema anular de la colesterina y que se diferencian en el número de enlaces dobles, el tipo, número y posición de grupos funcionales, número de grupos metilo, las cadenas de alquilo laterales y la configuración de los enlaces.
Los compuestos esteroides están presentes tanto en organismos animales como también en hongos y en plantas y presentan una variada actividad biológica, por ejemplo como hormonas sexuales masculinas y femeninas, como
15 hormonas de las glándulas suprarrenales, como vitaminas, como ácidos biliares, como esteroide sapogeninas, como sustancias cardioactivas y como venenos de sapos.
Por compuestos oxoesteroides se entiende en adelante esteroides del tipo definido al principio, es decir, los que presentan al menos una función cetona, pudiendo ésta estar presente en el sistema anular o también en una cadena lateral situada en el esqueleto del esteroide.
20 Por compuestos hidroxiesteroides se entiende en adelante esteroides del tipo definido al principio, es decir, los que presentan al menos una función hidroxilo, pudiendo ésta estar presente en el sistema anular o también en una cadena lateral situada en el esqueleto del esteroide.
La presente invención se refiere a un procedimiento para la reducción enzimática enantioselectiva de compuestos oxoesteroides de la fórmula general I
en la que
R1 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,
R2 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,
R3 representa hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un grupo metilo,
30 R4 representa hidrógeno o un grupo hidroxilo, R5 representa hidrógeno, un resto -COR10, en el que R10 es un grupo alquilo C1-C4 no sustituido o sustituido con un grupo hidroxilo, o un grupo carboxialquilo C1-C4 sustituido o no sustituido,
o R4 y R5 representan conjuntamente un grupo oxo,
R6 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,
35 R7 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo, R8 representa hidrógeno, un grupo metilo o un haluro, y R9 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un haluro,
siendo al menos uno de R1, R2, R4 + R5, R6, R8 o R9 un grupo oxo o R5 un resto -COR10 y el elemento estructural
representa un anillo de benceno o un anillo C6 con 0, 1 o 2 enlaces dobles C-C,
o la fórmula II (ácido cetolitocólico)
La presente invención se refiere también a un procedimiento para la oxidación enzimática de compuestos hidroxiesteroides de la fórmula general I o de los que son derivados de los ácidos biliares tales como ácido cólico, ácido quenodeoxicólico, ácido 12-oxocólico, ácido 3-hidroxi-12-oxocólico, ácido cetolitocólico o ácido litocólico, oxidándose el compuesto hidroxiesteroide con una hidroxiesteroide deshidrogenasa en presencia de un cofactor
10 NAD o NADP.
Debido a las variadas actividades fisiológicas de los esteroides es evidente que los compuestos y derivados esteroides se usan también en medicina en un gran número como sustancias terapéuticamente activas y medicamentos.
De este modo, por ejemplo, se usan ampliamente a escala mundial derivados de gestágeno y de estrógeno como
15 anticonceptivos; los andrógenos (testosterona) se usan como anabólicos y antiandrógenos, por ejemplo en la terapia de carcinoma de próstata. Los glucocorticoides (cortisona, cortisol, prednisolona y prednisona) y sus derivados, debido a su actividad antiflogística, antialérgica e inmunosupresora, se usan ampliamente en el tratamiento terapéutico de enfermedades de la piel, enfermedades reumáticas, reacciones alérgicas, enfermedades renales, enfermedades gastrointestinales y muchos otros trastornos.
20 El mercado mundial de compuestos esteroides biológicamente activos es inmenso. En la producción de distintos derivados esteroides con diferentes actividades, las biotransformaciones tienen un papel grande. A este respecto son de importancia las reacciones particulares que están catalizadas por hidroxilasas y por deshidrogenasas. Tienen un papel particular, a este respecto, la deshidrogenación 1-delta, la reducción 11-beta, la reducción 20-beta, la reducción 17-beta, las reducciones estereoselectivas en la posición 3 y 7, pero también las oxidaciones de grupos
25 hidroxilo, en particular en las posiciones 3, 7, 12 y 17.
Industrialmente se han realizado hasta la fecha biorreducciones de esteroides exclusivamente con células completas intactas y en concentraciones de sustrato muy inferiores a 10 g/l. Esto es debido, por una parte, a que las enzimas responsables de las biotransformaciones, hasta la fecha, ni se han caracterizado ni son expresables y, por otra parte, también a que no se ha propuesto ninguna solución tecnológica satisfactoria que solucione, por una parte, el
30 problema de la reducida solubilidad de los esteroides en medio acuoso y, por otra parte, el problema de la regeneración de los cofactores NADH y NADPH en una medida suficiente.
Hasta la fecha se han realizado oxidaciones de esteroides a escala industrial químicamente.
De 1975 a 1988 se han descrito enayos de reducción enantioselectiva de esteroides con enzimas aisladas, esencialmente por G. Carrea (Eur. J. Biochemistry 44, 1974 p. 401-405; Biotechnology and Bioengineering, Vol 17,
35 1975, p. 1101-1108; Enzyme Microb. Technol. Vol 6, julio, 1984, p. 307-311; Biotechnology and Bioengineering, Vol 26, 1984, p. 560-563; J. Org. Chem. 51, 1986, p. 2902-2906; J. Org. Chem. 58, 1993, p. 499-501; J. Org. Chem., 53, 1988, p. 88-92; Enzyme Microb. Technol., Vol 10, junio, p. 333-339; Archives of Biochemistry and Biophysics, 159, 1973, p. 7-10).
A este respecto se usaron distintas hidroxiesteroide deshidrogenasas (HSHD), lográndose la regeneración del
40 cofactor NADH esencialmente mediante el acoplamiento con las enzimas lactato deshidrogenasa, formiato deshidrogenasa o también alcohol deshidrogenasa de levadura. La regeneración de NADP se realizó usando
glucosa deshidrogenasa. Para superar los problemas de solubilidad se llevaron a cabo ensayos en un sistema bifásico con acetato de etilo y acetato de butilo como fase orgánica. También con enzimas aisladas en el sistema bifásico se trabajó, a este respecto, en intervalos de concentraciones que eran muy inferiores a 10 g/l, siendo los "números de recambio totales" (NRT = moles de compuesto oxoesteroide reducido / moles de cofactor usado)
5 también muy inferiores a 1000, por lo que estos procesos no representan ninguna ventaja económica en comparación con procedimientos de célula completa.
Además existen trabajos en los que se lleva a cabo la conversión de grupos hidroxilo de 7 alfa a 7 beta mediante acoplamiento de oxidación y reducción. Esto se logró mediante acoplamiento de 7α HSDH y 7β HSDH (Pedrini y col., Steroids 71 (2006) p 189-198). También en estos procedimientos se trabajó en intervalos de concentraciones
10 muy inferiores a 10 g/l y los "números de recambio totales" (NRT = moles de compuesto oxoesteroide reducido / moles de cofactor usado) logrados fueron inferiores a 100, por lo que estos procesos tampoco son ecónomicamente relevantes.
La invención tiene por objeto evitar estas desventajas y dificultades y tiene el objetivo de proporcionar un procedimiento que posibilite la reducción enantioselectiva o la oxidación de compuestos oxoesteroides o
15 compuestos hidroxiesteroides con conversiones más elevadas, en intervalos de concentraciones más altos y con NRT de cofactores más altos y, con ello, de modo más económico.
Este objetivo se logra mediante un procedimiento del tipo mencionado al principio en el que
a) el compuesto oxoesteroide está presente en la preparación de reacción en una concentración ≥ 50 g/l,
b) el cofactor NAD o NADP oxidado formado mediante la hidroxiesteroide deshidrogenasa se regenera
20 continuamente mediante la oxidación de un alcohol secundario de la fórmula general RXRYCHOH, en la que RX, RY independientemente uno de otro representan alquilo C1-C8 ramificado o no ramificado y Ctotal ≥ 3, o mediante la oxidación de un cicloalcanol C4-C6, y
c) para la oxidación del alcohol secundario de la fórmula general RXRYCHOH o del cicloalcanol se usa una oxidorreductasa/alcohol deshidrogenasa adicional,
25 usándose como compuesto oxoesteroide un compuesto de la fórmula general I
en la que
R1 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,
R2 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo, 30 R3 representa hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un grupo metilo,
R4 representa hidrógeno o un grupo hidroxilo,
R5 representa hidrógeno, un resto -COR10, en el que R10 es un grupo alquilo C1-C4 sustituido con un grupo hidroxilo
o no sustituido, o un grupo carboxialquilo C1-C4 sustituido o no sustituido,
o R4 y R5 representan conjuntamente un grupo oxo, 35 R6 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,
R7 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,
R8 representa hidrógeno, un grupo metilo o un haluro, y
R9 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un haluro,
siendo al menos uno de R1, R2, R4+R5, R6, R8 o R9 un grupo oxo o R5 es –COR10 y el elemento estructural
representa un anillo de benceno o un anillo C6 con 0, 1 o 2 enlaces dobles C-C,
o de la fórmula II (ácido cetolitocólico)
5 El objetivo mencionado anteriormente se logra también mediante un procedimiento del tipo mencionado al principio, en el que
a) el compuesto hidroxiesteroide está presente en la preparación de reacción en una concentración ≥ 50 g/l,
b) el cofactor NADH o NADPH reducido formado usando la hidroxiesteroide deshidrogenasa se regenera continuamente mediante la reducción de un compuesto cetona de la fórmula general RXRYCO, en la que RX, RY 10 independientemente uno de otro representan alquilo C1-C8 ramificado o no ramificado y Ctotal ≥ 3, o mediante la reducción de una cicloalcanona C4-C6, y
c) para la oxidación del compuesto cetona de la fórmula general RXRYCO o de la cicloalcanona se usa una oxidorreductasa/alcohol deshidrogenasa adicional, usándose como compuesto hidroxiesteroide los derivados de ácido biliar ácido cólico, ácido quenodeoxicólico, ácido 12-oxocólico, ácido 3-hidroxi-12-oxocólico, ácido
15 cetolitocólico o ácido litocólico o un compuesto de la fórmula general I en la que
R1 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,
R2 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo oxo o un grupo hidroxilo,
R3 representa hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un grupo metilo,
R4 representa hidrógeno o un grupo hidroxilo, 20 R5 representa hidrógeno, un resto -COR10, en el que R10 es un grupo alquilo C1-C4 sustituido con un grupo hidroxilo
- o no sustituido, o un grupo carboxialquilo C1-C4 sustituido o no sustituido,
- o R4 y R5 representan conjuntamente un grupo oxo, R6 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo oxo o un grupo hidroxilo, R7 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo oxo o un grupo hidroxilo,
25 R8 representa hidrógeno, un grupo metilo o un haluro, y R9 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un haluro,
siendo al menos uno de R1, R2, R4, R6, R7, R8 o R9 un grupo hidroxilo y el elemento estructural
representa un anillo de benceno o un anillo C6 con 0, 1 o 2 enlaces dobles C-C.
30 La presente invención representa una mejora esencial de la reacción de reducción y oxidación enzimática enantioselectiva en el esqueleto esteroide frente al estado de la técnica. La presente invención posibilita la reducción u oxidación de compuestos oxoesteroides para dar los hidroxi-u oxoesteroides correspondientes con enzimas libres en intervalos de concentraciones que exceden ampliamente los descritos en el estado de la técnica.
En el procedimiento según la invención se usa como cofactor NADH o NADPH. Por la abreviatura “NADP” se entiende nicotinamida adenina dinucleótido fosfato, por “NADPH” se entiende nicotinamida adenina dinucleótido fosfato reducida. La abreviatura “NAD” significa nicotinamida adenina dinucleótido, la abreviatura "NADH" significa nicotinamida adenina dinucleótido reducida.
5 Preferentemente, como alcohol secundario de la fórmula general RXRYCHOH se usa 2-propanol, 2-butanol, 2pentanol, 4-metil-2-pentanol, 2-hexanol, 2-heptanol, 5-metil-2-hexanol o 2-octanol y como cicloalcohol se usa ciclohexanol.
Preferentemente, como cetona de la fórmula general RXRYCO se usa acetona, 2-butanona, 2-pentanona, 4-metil-2pentanona, 2-hexanona, 2-heptanona, 5-metil-2-hexanona o 2-octanona y como cicloalcanona se usa
10 ciclohexanona.
La cetona de la fórmula general RXRYCO o la cicloalcanona C4-C6 y el alcohol secundario de la fórmula general RXRYCHOH o el cicloalcanol C4-C6 se indican en delante de forma resumida con el término general cosustrato.
Preferentemente, el procedimiento según la invención se lleva a cabo en un sistema bifásico orgánico acuoso. A este respecto, el cosustrato usado para la regeneración de coenzimas no se puede mezclar con agua
15 adecuadamente y forma por lo tanto la fase orgánica del sistema bifásico orgánico acuoso.
Según otra forma de realización, en el procedimiento se usa adicionalmente un disolvente orgánico que no participa en la regeneración del cofactor, tal como, por ejemplo, dietiléter, terc-butilmetiléter, diisopropiléter, dibutiléter, acetato de etilo, acetato de butilo, heptano, hexano o ciclohexano.
Preferentemente, el NRT del procedimiento según la invención es ≥ 103.
20 Además, se reduce o se oxida respectivamente preferentemente al menos el 50 % de los compuestos oxoesteroides
o hidroxiesteroides respectivamente dentro de un periodo de 2 a 96 h dando los compuestos hidroxiesteroides o los compuestos oxoesteroides respectivamente.
Se caracterizan formas de realización preferentes del procedimiento según la invención porque como compuesto oxoesteroide se usan, por ejemplo, ácido cetolitocólico (fórmula II), dexametasona (fórmula III), 4-androsten-3,17
25 diona (fórmula IV), 1,4-androstadien-3,17-diona (fórmula V), estrona (fórmula VI), pregnenolona (fórmula VII) y cortisona (fórmula VIII).
Además, se caracterizan formas de realización preferentes del procedimiento según la invención porque como compuestos hidroxiesteroides se usan por ejemplo distintos derivados de ácidos biliares tales como ácido cólico, ácido quenodeoxicólico, ácido 12-oxocólico, ácido 3-hidroxi-12-oxocólico, ácido cetolitocólico, ácido litocólico o
30 también hidrocortisona.
Por hidroxiesteroide deshidrogenasas se entiende en general las enzimas que son capaces de catalizar la reducción de grupos cetona dando grupos hidroxilo o la oxidación de grupos hidroxilo dando los grupos cetona correspondientes en el esqueleto del esteroide. La oxidación o la reducción puede realizarse a este respecto en el sistema anular del esteroide mismo (por ejemplo 7-α hidroxiesteroide deshidrogenasas) o también en restos
35 carbohidrato del esqueleto principal del esteroide (por ejemplo 20-β hidroxiesteroide deshidrogenasas).
Hidroxiesteroide deshidrogenasas adecuadas para la reducción de compuestos oxoesteroides son, por ejemplo, 3-α hidroxiesteroide deshidrogenada (HSDH), 3β HSDH, 12α HSDH, 20β HSDH, 7α HSDH, 7β HSDH, 17β HSDH y 11β HSDH.
Una 3-α hidroxiesteroide deshidrogenasa adecuada se puede obtener, por ejemplo, de Pseudomonas testosteroni
40 (J. Biol. Chem. 276 (13), 9961-9970 (2001)) y puede usarse para la oxidación de 3-α-hidroxiesteroides o para la reducción de 3-cetoesteroides, tales como, por ejemplo, ácido 3-cetobiliar, progesterona, 4-androsten-3-17-diona, 5α-androstan-3,17-diona, etc.
Se pueden obtener enzimas adecuadas con actividad de 3-β hidroxiesteroide deshidrogenasa, por ejemplo, de Clostridium innocuum (Applied and Environmental Microbiology, June 1989, p. 1656-1659) o de Pseudomonas
45 testosteroni y pueden usarse para la oxidación de 3-β-hidroxiesteroides o para la reducción de 3-cetoesteroides, tales como, por ejemplo, ácido 3-cetobiliar, progesterona, 4-androsten-3-17-diona, 5-α-androstan-3,17-diona, etc.
Se puede obtener una 12α HSDH, por ejemplo, de clostridios (Eur. J. Biochem. 196 (1991) 439-450) y puede usarse para la oxidación de 12α-hidroxiesteroides (por ejemplo, ácido cólico) o para la reducción de 12-cetoesteroides, como por ejemplo de ácido 12-ceto-biliar (ácido 12-cetoquenodeoxicólico, ácido dehidrocólico). También se
50 describen enzimas con actividad de 12-β hidroxiesteroide deshidrogenasa de clostridios (Biochim. Biophys. Acta 1988 Oct. 14; 962(3): 362-370).
Se pueden obtener enzimas con actividad de 20-β hidroxiesteroide deshidrogenasa, por ejemplo, de organismos del grupo de los estreptomices (The Journal of Biological Chemistry, 1977, Vol 252 Nº 1, enero 10, 205-211) y pueden usarse para la reducción de cortisona y derivados de cortisona (cortisona, cortisol, cortexolona, progesterona) para
55 dar los 20-β hidroxiesteroides correspondientes (por ejemplo, 20-β hidroxiprogesterona).
Se pueden obtener enzimas correspondientes con actividad de 20-α hidroxiesteroide deshidrogenasa, por ejemplo, de clostridios, en particular de Clostridium scindens (Journal of Bacteriology, junio 1989, p. 2925-2932) y de Tetrahymena pyrformis (Biochem.J. (1994) 297, 195-200).
Se pueden obtener 7-α hidroxiesteroide deshidrogenasas, entre otros, de organismos de la flora intestinal, como por
5 ejemplo de clostridios (Clostridium absonum, Clostridium sordellii)(Journal of Bacteriology, agosto 1994, p. 48654874), de Escherichia coli (Journal of Bacteriology, abril, 1991, p. 2173-2179), de Bacteroides fragilis (Current Microbiology, Vol 47 (2003) 475-484), Brucella, Eubacterium y pueden usarse para la oxidación de 7-α hidroxiesteroides (ácido quenolitocólico) o para la reducción de 7-cetoesteroides, tales como, por ejemplo, ácidos 7cetobiliares (ácido cetolitocólico).
10 También se han descrito enzimas correspondientes con actividad de 7-β hidroxiesteroide deshidrogenasa de clostridios, de microorganismos de la familia de los ruminococos (J. Biochemistry 102, 1987, p. 613-619) o de los peptoestreptococos (Biochimica and Biophysica Acta 1004, 1989, p. 230-238), de Eubacterium aerofaciens (Applied and Environmental Microbiology, mayo 1982, p. 1057-1063) y de Xanthomonas maltophila (Pedrini y col, Steroids 71(2006) p 189-198). Por medio de una 7-β HSDH puede prepararse, por ejemplo, ácido ursodesoxicólico a partir de
15 ácido cetolitocólico.
Las 17-β hidroxiesteroide deshidrogenasas son conocidas de hongos tales como Cylindrocarpon radicola (J. Biochemistry 103, 1988, 1039-1044) y Cochliobolus lunatus (J. Steroid Biochem. Molec. Biol. Vol 59, 1996, Nº 2, p. 205-214), de bacterias de la familia de los estreptomices (Hoppe-Seyler’s Z. Physiol. Chem, vol. 356, 1975, 18431852), pseudomonas (The Journal of Biological Chemistry, Vol. 252 Nº 11, junio 10, 1977, p. 3775-3783) y
20 alcaligenes (The Journal of Biological Chemistry, Vol. 260, Nº. 25, noviembre 5, 1985, p. 13648-13655).
Las 17-β hidroxiesteroide deshidrogenasas pueden usarse, por ejemplo, para la oxidación de 17-β-hidroxiesteroides
o para la reducción de 17-cetosteroides, como por ejemplo de 4-androsten-3,17-diona, androsterona, estrona.
Se ha descrito una enzima correspondiente con actividad de 17-α hidroxiesteroide deshidrogenasa de Eubacterium sp. (Journal of Lipid Research, Vol. 35, 1994, p. 922-929).
25 Se conocen 11-β hidroxiesteroide deshidrogenasas de mamíferos superiores y pueden usarse, por ejemplo, para oxidar cortisol dando cortisona.
No obstante, también puede usarse otra oxidorreductasa como hidroxiesteroide deshidrogenasa que catalice oxidaciones o reducciones en el esqueleto del esteroide.
Alcohol deshidrogenasas secundarias adecuadas para la regeneración del NADH o NAD, por ejemplo usando las
30 17-β hidroxiesteroide deshidrogenasas de Pseudomonas testosteroni, las 3-β hidroxiesteroide deshidrogenasas de Clostridium innocuum o las 7-α hidroxiesteroide deshidrogenasas de Bacteroides fragilis, son las que se han descrito anteriormente y se aislan de levaduras de los géneros Candida y Pichia, tales como, por ejemplo: carbonil reductasa de Candida parapsilosis (CPCR) (documentos US 5.523.223 y US 5.763.236; Enzyme Microb. Technol. 1993 noviembre; 15(11):950-8), Pichia capsulata (documento DE 10327454.4), Pichia farinosa (documento A 1261/2005,
35 K!. C12N), Pichia finlandica (documento EP 1179595 A1), Candida nemodendra (documento A 1261/2005, KI; C12N), Pichia trehalophila (documento A 1261/2005, KI. C12N), Rhodotorula mucilaginosa (documento A 1261/2005, KI. CI2N), Lodderomyces elongisporus (documento A 1261/2005, KI. C12N) y Pichia stipidis (documento A 261/2005, KI. C12N)
Además, también puede realizarse la regeneración del NADH con alcohol deshidrogenasas / oxidorreductasas
40 secundarias, tal como se ha descrito, y se aislan de bacterias de la clase de las actinobacterias, por ejemplo de Rhodococcus eiythropolis (documento US 5.523.223), Norcardia fusca (Biosci. Biotechnol. Biochem., 63 (10) (1999), páginas 1721-1729; AppI. Microbiol. Biotechnol. 2003 septiembre; 62(4):380-6, Epub 2003 abril 26), Rhodococcus ruber (J. Org. Chem. 2003 enero 24; 8(2):402-6. ) o Microbacterium spec. (documento A 1261/2005, KI. C12N).
Alcohol deshidrogenasas / oxidorreductasas secundarias adecuadas para la regeneración del NADPH o del NADP,
45 por ejemplo en el uso de 12-α hidroxiesteroide deshidrogenasas de Clostridium paraputrificum, de 17-α hidroxiesteroide deshidrogenasas de Eubacterium sp. o de 7-α hidroxiesteroide deshidrogenasas de Clostridium sordelli, son tan como se ha descrito, y se aislan de organismos del orden de los lactobacilares (Lactobacillus kefir (documento US 5.200.335), Lactobacillus brevis (documento DE 19610984 A1; Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 2000 diciembre; 56 Pt 12:1696-8), Lactobacillus minor (documento DE 10119274), Leuconostoc carnosum
50 (documento A 1261/2005, K1. C12N) o los de, tal como se describe, Thermoanerobium brockii, Thermoanerobium ethanolicus o Clostridium bejerinckii.
Tanto las enzimas, hidroxiesteroide deshidrogenasas como las oxidorreductasa / alcohol deshidrogenasas usadas se sobreexpresan de forma recombinante preferentemente en Escherichia coli. En el procedimiento según la invención pueden usarse tanto las enzimas, hidroxiesteroide deshidrogenasas como las oxidorreductasa / alcohol
55 deshidrogenasas bien totalmente purificadas, bien parcialmente purificadas o bien contenidas en células. A este respecto, las células usadas pueden estar presentes en forma nativa, permeabilizadas o lisadas.
Por cada kg de compuesto oxoesteroide o compuesto hidroxiesteroide que se desea transformar se usan de 50.000 a 10 millones de unidades de hidroxiesteroide deshidrogenasas y de 50.000 a 10 millones de unidades de alcohol deshidrogenasas (abierto por arriba).
La unidad de enzima 1 U corresponde, a este respecto, a la cantidad de enzima de hidroxiesteroide deshidrogenada necesaria para transformar 1 µmol de compuesto oxoesteroide por minuto (min) o a la cantidad de enzima de alcohol deshidrogenasa necesaria para oxidar 1 µmol de 2-alcohol por minuto (min).
De forma análoga, por cada kg de compuesto oxoesteroide o de compuesto hidroxiesteroide se usan
5 aproximadamente de 10 g a 500 g de biomasa húmeda de E. coli que contienen la hidroxiesteroide deshidrogenada y de 10 g a 500 g de biomasa húmeda de E. coli que contienen la alcohol deshidrogenasa / oxidorreductasa (abierto por arriba).
La regeneración de NAD(P)H se realiza en los ejemplos descritos de forma acoplada a enzima.
La reacción del compuesto oxoesteroide o del compuesto hidroxiesteroide se realiza en el procedimiento según la
10 invención preferentemente en el sistema bifásico que contiene un compuesto 2-alcohol o un compuesto cetona para la regeneración del cofactor, una hidroxiesteroide deshidrogenasa, una alcohol deshidrogenasa, agua, cofactor y el compuesto oxoesteroide o compuesto hidroxiesteroide. Además, pueden estar presentes también disolventes orgánicos adicionales que no participan en la regeneración del cofactor, es decir, que no contienen ningún grupo hidroxilo oxidable o ningún grupo cetona reducible por la alcohol deshidrogenasa usada.
15 La proporción de componentes orgánicos no miscibles con agua del sistema bifásico puede ser a este respecto de entre el 10 % y el 90 %, preferentemente del 20 % al 80 %, con relación al volumen total de la preparación de reacción. La proporción acuosa puede ser del 90 % al 10 %, preferentemente del 80 % al 20 %, con relación al volumen total de la preparación de reacción.
Se puede añadir un tampón al agua, por ejemplo, un tampón de fosfato de potasio, de Tris/HCl, de glicina o de
20 trietanolamina con un valor del pH de 5 a 10, preferentemente de 6 a 9. El tampón puede contener adicionalmente además iones para estabilizar o activar las enzimas, por ejemplo iones de magnesio o iones de cinc.
Además, el el procedimiento según la invención pueden usarse también otros aditivos para estabilizar la enzima hidroxiesteroide deshidrogenasa y alcohol deshidrogenasa, tales como, por ejemplo, glicerina, sorbitol, 1-4-DLditiotreitol (DTT) o dimetilsulfóxido (DMSO).
25 La concentración del cofactor NAD(P)H, con respecto a la fase acuosa, es de 0,001 mM a 10 mM, en particular de 0,01 mM a 1,0 mM. La temperatura puede ser, en función de las propiedades especiales de la enzima usada, de 10 °C a 70 °C, preferentemente de 20 °C a 35 °C.
El NRT (número de recambio total = moles de compuesto oxoesteroide reducidos / moles de cofactor usados) logrado en el procedimiento según la invención puede encontrarse, a este respecto, en el intervalo de 102 a 105,
30 generalmente es preferente un NRT ≥ 103.
Los compuestos oxoesteroides que se desean reducir o compuestos hidroxiesteroides son generalmente poco solubles en agua. El sustrato puede estar presente durante la reacción totalmente o también no totalmente disuelto. Si el sustrato no está totalmente disuelto en la mezcla de reacción, una parte del sustrato está presente en forma sólida y puede formar una tercera fase sólida. La mezcla de reacción puede formar durante la reacción también
35 termporalmente una emulsión.
El compuesto oxoesteroide que se desea reducir o el compuesto hidroxiesteroide que se desea oxidar se usa en el procedimiento según la invención en cantidades ≥ 50 g/l, con respecto al volumen total de la preparación de reacción. Preferentemente se usan entre 50 g/l y 400g/l de compuesto oxoesteroide / compuesto de hidroxiesteroide, de modo particularmente preferente de entre 50 g/l y 200 g/l.
40 Los disolventes orgánicos adicionales preferentes que no participan en la regeneración del cofactor son, por ejemplo, acetato de etilo, acetato de butilo, terc-butilmetiléter, diisopropiléter, heptano, hexano, tolueno, diclorometano o ciclohexano o sus mezclas de distintas composiciones.
La regeneración del NAD(P)H se logra mediante la oxidación de alcoholes secundarios de la fórmula general RXRYCHOH o cicloalcanoles C4-C6. A este respecto, como productos de reacción se producen cetonas de la
45 fórmula general RXRYC=O o cicloalcanonas C4-C6. Alcoholes secundarios preferentes son, a este respecto, 2alcoholes alifáticos tales como, por ejemplo, isopropanol, 2-butanol, 2-pentanol, 2-hexanol, 2-heptanol, 2-octanol, 4metil-2-pentanol, 5-metil-2-hexanol y alcoholes secundarios cíclicos tales como ciclohexanol, ciclopentanol.
La regeneración del NAD(P) se logra mediante la reducción de compuestos cetona de la fórmula general RXRYCO o de cicloalcanonas C4-C6. A este respecto, como productos de reacción se producen alcoholes secundarios de la
50 fórmula general RXRYCHOH o cicloalcanoles C4-C6. A este respecto, compuestos cetona preferentes son cetonas tales como, por ejemplo, acetona, 2-butanona, 2-pentanona, 2-hexanona, 2-heptanona, 2-octanona, 4-metil-2pentanona, 5-metil-2-hexanona y cetonas cíclicas tales como ciclohexanona, ciclopentanona.
El procedimiento según la invención se lleva a cabo, por ejemplo, en un recipiente de reacción de vidrio o metal. Para ello se transfieren los componentes individualmente al recipiente de reacción y se agita en una atmósfera de,
55 por ejemplo, nitrógeno o aire. Según el compuesto oxoesteroide usado el tiempo de reacción es de 1 hora a 96 horas, en particular de 2 horas a 48 horas. En este tiempo, el compuestos oxoesteroide se reduce al menos en un 50 % dando el hidroxiesteroide correspondiente o el hidroxiesteroide se oxida dando el compuesto oxoesteroide.
A continuación se explicará la invención con más detalle por medio de los ejemplos.
Ejemplos:
A) Sistema bifásico con 4-metil-2-pentanol para la regeneración de coenzima
5 Para la síntesis de 17 β-hidroxi-4-androsten-3-ona (testosterona) se añaden a 0,5 ml de tampón (trietanolamina 100 mM, pH = 7, MgCI2 1 mM, glicerina al 10 %) que contienen 0,1 mg de NAD, 30 unidades de 17-β-hidroxiesteroide deshidrogenasa recombinante de Pseudomonas testosteroni (J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 44 (2), 133-139 (1993), Pubmed P19871) y 50 unidades de alcohol deshidrogenada recombinante de Pichia capsulata (documento DE-A 103 27 454), 100 mg de androsten-3,17-diona disueltos en 0,4 ml de 4-metil-2-pentanol. La mezcla se incuba
10 durante 24 h a temperatura ambiente y con mezclado continuo. La concentración de androsten-3,17-diona en el volumen total de reacción es de aproximadamente 100 g/l.
Al finalizar la reacción la mezcla de reacción se puede procesar, por ejemplo, extrayendo la mezcla de reacción con un disolvente orgánico y eliminando a continuación el disolvente mediante destilación.
Después de 24 h ha reaccionado aproximadamente el 94 % de la androsten-3,17-diona dando 17-β-hidroxi-415 androsten-3-ona (testosterona).
El seguimiento de la reacción de androsten-3,17-diona para dar 17-β-hidroxi-4-androsten-3-ona (testosterona) se realiza mediante cromatografía de gases. Para ello se usó un cromatógrafo de gases GC-17A de Shimadzu con una columna de separación quiral de Lipodex E, 12m (Machery-Nagel, Düren, Alemania), detector de ionización de llama y helio como gas portador.
20 B) Sistema bifásico con acetato de butilo y 2-propanol para la regeneración de coenzimas
Para la síntesis de 17-β-hidroxi-4-androsten-3-ona (testosterona) se añaden a 0,5 ml de tampón (trietanolamina 100 mM, pH = 7, MgCI2 1 mM, glicerina al 10 %) que contienen 0,1 mg de NAD, 30 unidades de 17-β-hidroxiesteroide deshidrogenasa recombinante de Pseudomonas testosteroni (J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 44 (2), 133-139 (1993), Pubmed P19871) y 50 unidades de alcohol deshidrogenada recombinante de Pichia cupsulata (documento DE-A
25 103 27 454), 100 mg de androsten-3,17-diona disueltos en 0,3 ml de acetato de butilo y 0,1 ml de 2-propanol. La mezcla se incuba durante 24 h a temperatura ambiente y con mezclado continuo. La concentración de androsten3,17-diona en el volumen total de reacción es de aproximadamente 100 g/l.
Al finalizar la reacción la mezcla de reacción se puede procesar, por ejemplo, extrayendo la mezcla de reacción con un disolvente orgánico y eliminando a continuación el disolvente mediante destilación.
30 Después de 24 h ha reaccionado aproximadamente el 90-95 % de la androsten-3,17-diona usada dando 17-βhidroxi-4-androsten-3-ona (testosterona).
A) Regeneración de coenzima con ADH de Thermoanerobium brockii / sistema bifásico
Para la síntesis de ácido 3α-7α-dihidroxi-5-β-cólico (ácido quenodeoxicólico) se añaden a 0,2 ml de tampón (tampón
35 de fosfato de potasio 100 mM, pH = 8,5, MgCl2 1 mM, glicerina al 10 %) que contiene 0,1 mg de NADP, 10 unidades de 7-α-hidroxiesteroide deshidrogenasa recombinante de Clostridiem scindens (Pubmed AAB61151) y 10 unidades de alcohol deshidrogenada recombinanate de Thermoanerobium brockii, 100 mg de ácido 3α-hidroxi-7-oxo-5-βcólico (ácido cetolitocólico) en 0,5 ml de metilpentanol. La mezcla se incuba durante 24 h a temperatura ambiente y con mezclado continuo. La concentración de ácido cetolitocólico en el volumen total de reacción es de
40 aproximadamente 100 g/I.
Después de 24 h ha reaccionado el 90-98 % del ácido cetolitocólico dando ácido quenodeoxicólico.
El seguimiento de la reacción de ácido cetolitocólico para dar ácido quenodeoxicólico se realizó mediante HPLC. Para ello se usó una columna de separación EC125/4 Nucleodur 100-5 C18ec (Machery-Nagel, Düren, Alemania) de forma isocrática con una mezcla de MeOH/agua (80:20).
45 B) Regeneración de coenzima con ADH de Lactobacillus (documento DE 10119274) / sistema bifásico
Para la síntesis de ácido 3α-7α-dihidroxi-5-β-cólico (ácido quenodeoxicólico) se añaden, por ejemplo, a 0,3 ml de tampón (tampón de fosfato de potasio 100 mM, pH = 7, MgCl2 1 mM, glicerina al 10 %) que contiene 0,1 mg de NADP, 10 unidades de 7-α-hidroxiesteroide deshidrogenasa recombinante de Clostridiem scindens (Pubmed AAB61151) y 10 unidades de alcohol deshidrogenada recombinanate de Lactobacillus, 100 mg de ácido 3α-hidroxi
50 7-oxo-5-β-cólico (ácido cetolitocólico) en 0,5 ml de octanol. La mezcla se incuba durante 24 h a temperatura ambiente y con mezclado continuo. La concentración de ácido cetolitocólico en el volumen total de reacción es de aproximadamente 100 g/I.
Después de 24 h ha reaccionado el 70-80 % del ácido cetolitocólico dando ácido quenodeoxicólico.
Para la síntesis de 17-β-hidroxi-1,4-androstadien-3-ona se añaden a 0,5 ml de tampón (trietanolamina 100 mM, pH = 7, MgCI2 1 mM, glicerina al 10 %) que contienen 0,1 mg de NAD, 30 unidades de 17-β-hidroxiesteroide deshidrogenasa recombinante de Pseudomonas testosteroni (J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 44 (2), 133-139 (1993), Pubmed P19871) y 5 unidades de alcohol deshidrogenada recombinante de Pichia cupsulata (documento DE-A 103
5 27454), 100 mg de 1,4-androstadien-3,17-diona disueltos en 0,4 ml de 4-metil-2-pentanol. La mezcla se incuba durante 24 h a temperatura ambiente y con mezclado continuo. La concentración de 1,4-androstadien-3,17-diona fue en el volumen total de reacción de aproximadamente 100 g/I.
Después de finalizar la reacción la mezcla de reaccion puede procesarse, por ejemplo, separando la fase orgánica y eliminando la fase orgánica a continuación por medio de destilación.
10 Después de 24 h ha reaccionado aproximadamente el 90-98 % de la androsten-3,17-diona usada dando 17-βhidroxi-1,4-androstadien-3-ona.
El seguimiento de la reacción de 1,4-androstadien-3,17-diona para dar 17-β-hidroxi-1,4-androstadien-3-ona se realizó mediante cromatografía de gases. Para ello se usó un cromatógrafo de gases Autosystem XL de Perkin Elmer equipado con espectrómetro de masas con una columna capilar FS Optima-5-MS (Machery-Nagel, Düren,
15 Alemania) y helio como gas portador.
A) Regeneración de coenzima con ADH de Thermoanerobium brockii / sistema bifásico
Para la síntesis de ácido 3α-hidroxi-7-oxo-5-β-cólico (ácido cetolitocólico) se añaden a 0,4 ml de tampón (tampón de fosfato de potasio 100 mM, pH = 8,5, MgCI2 1 mM, glicerina al 10 %) que contiene 0,1 mg de NADP, 10 mg de
20 biomasa húmeda de E. coli que contienen la 7-α-hidroxiesteroide deshidrogenasa sobreexpresada de Clostridiem scindens (Pubmed AVAB61151), y 5 mg de biomasa húmeda de E. coli que contienen la alcohol deshidrogenasa sobreexpresada de Thermoanaerobium brockii, 100 mg de ácido 3α-7α-dihidroxi-5-β-cólico (ácido quenodeoxicólico) en 0,5 ml de metilisobutilcetona. La mezcla se incuba durante 24 h a temperatura ambiente y con mezclado continuo. La concentración de ácido cetolitocólico en el volumen total de reacción es de aproximadamente 100 g/I.
25 Después de 24 h ha reaccionado más del 80 % del ácido quenodeoxicólico dando ácido cetolitocólico.
El seguimiento de la reacción de ácido cetolitocólico para dar ácido quenodeoxicólico se realizó mediante cromatografía de capa fina.
B) Regeneración de coenzima con ADH de Lactobacillus (documento DE 10119274) / sistema bifásico
Para la síntesis de ácido 3α-hidroxi-7-oxo-5-β-cólico (ácido cetolitocólico) se añaden a 0,15 ml de tampón (tampón
30 de fosfato de potasio 100 mM, pH = 7,5, MgCI2 1 mM, glicerina al 10 %) que contiene 0,1 mg de NADP, 10 mg de biomasa húmeda de E. coli que contienen la 7-α-hidroxiesteroide deshidrogenasa sobreexpresada de Clostridiem scindens (Pubmed AAB61151) y 5 mg de biomasa húmedad de E. coli que contienen la alcohol deshidrogenasa sobreexpresada de Lactobacillus (documento DE 10119274), 100 mg de ácido 3α-7α-dihidroxi-5-β-cólico (ácido quenodeoxicólico) en 0,7 ml de metilisobutilcetona. La mezcla se incuba durante 24 h a temperatura ambiente y con
35 mezclado continuo. La concentración de ácido cetolitocólico en el volumen total de reacción es de aproximadamente 100 g/I.
Después de 24 h ha reaccionado más del 90 % del ácido quenodeoxicólico dando ácido cetolitocólico.
Claims (13)
- REIVINDICACIONES1. Procedimiento para la reducción enzimática enantioselectiva de compuestos oxoesteroides de la fórmula general Ien la que5 R1 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,R2 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo,R3 representa hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un grupo metilo,R4 representa hidrógeno o un grupo hidroxilo,R5 representa hidrógeno, un resto -COR10, en el que R10 es un grupo alquilo C1-C4 sustituido con un grupo hidroxilo10 o no sustitudio, o un grupo carboxialquilo C1-C4 sustituido o no sustituido,o R4 y R5 representan conjuntamente un grupo oxo, R6 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo, R7 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo, R8 representa hidrógeno, un grupo metilo o un haluro, y15 R9 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un haluro,siendo al menos uno de R1, R2, R4 + R5, R6, R8 o R9 un grupo oxo o R5 es un resto -COR10 y el elemento estructuralrepresenta un anillo de benceno o un anillo C6 con 0, 1 o 2 enlaces dobles C-C,o la fórmula II (ácido cetolitocólico)en el que el compuesto oxoesteroide se reduce con una hidroxiesteroide deshidrogenasa en presencia de un cofactor NADH o NADPH, caracterizado porquea) el compuesto oxoesteroide está presente en la preparación de reacción en una concentración ≥ 50 g/l,b) el cofactor NAD o NADP oxidado formado mediante la hidroxiesteroide deshidrogenasa se regenera 25 continuamente mediante la oxidación de un alcohol secundario de la fórmula general RXRYCHOH, en la que RX, RYindependientemente uno de otro representan alquilo C1-C8 ramificado o no ramificado y Ctotal ≥ 3, o mediante la oxidación de un cicloalcanol C4-C6, yc) para la oxidación del alcohol secundario de la fórmula general RXRYCHOH o del cicloalcanol se usa una oxidorreductasa / alcohol deshidrogenasa adicional.
- 5 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque como alcohol secundario de la fórmula general RXRYCHOH se usa 2-propanol, 2-butanol, 2-pentanol, 4-metil-2-pentanol, 2-hexanol, 2-heptanol, 5-metil-2-hexanol o 2-octanol y como cicloalcohol se usa ciclohexanol.
- 3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque se lleva a cabo en un sistema bifásico orgánico acuoso.
- 10 4. Procedimiento según la reivindicación 3, caracterizado porque se usa adicionalmente un disolvente orgánico tal como, por ejemplo, dietiléter, terc-butilmetiléter, diisopropiléter, dibutiléter, acetato de etilo, acetato de butilo, heptano, hexano o ciclohexano.
- 5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el NRT, es decir número de recambio total = moles de compuesto oxoesteroide reducidos / moles de cofactor usados es ≥ 103.
- 15 6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque se reduce al menos el 50 % del compuesto oxoesteroide usado dentro de un periodo de 2 a 96 h dando el compuesto hidroxiesteroide.
- 7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque como compuesto oxoesteroide se usa dexametasona (fórmula Ill).
- 20 8. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque como compuesto oxoesteroide se usa 4-androsten-3,17-diona (fórmula IV).
- 9. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque como compuesto oxoesteroide se usa 1,4-androstadien-3,17-diona (fórmula V).
-
- 10.
- Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque como compuesto oxoesteroide se usa estrona (fórmula VI).
-
- 11.
- Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque como compuesto oxoesteroide se usa pregnenolona (fórmula VII).
-
- 12.
- Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque como compuesto oxoesteroide se usa cortisona (fórmula VIII).
10 13. Procedimiento para la oxidación enzimática de compuestos hidroxiesteroides de la fórmula general Ien la que R1 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo o un grupo oxo, R2 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo oxo o un grupo hidroxilo,R3 representa hidrógeno, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un grupo metilo, R4 representa hidrógeno o un grupo hidroxilo, R5 representa hidrógeno, un resto -COR10, en el que R10 es un grupo alquilo C1-C4 sustituido con un grupo hidroxiloo no sustituido, o un grupo carboxialquilo C1-C4 sustituido o no sustituido,5 o R4 y R5 representan conjuntamente un grupo oxo, R6 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo oxo o un grupo hidroxilo, R7 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo oxo o un grupo hidroxilo, R8 representa hidrógeno, un grupo metilo o un haluro, yR9 representa hidrógeno, un grupo metilo, un grupo hidroxilo, un grupo oxo o un haluro, 10 siendo al menos uno de R1, R2, R4, R6, R7, R8 o R9 un grupo hidroxilo y el elemento estructuralrepresenta un anillo de benceno o un anillo C6 con 0, 1 o 2 enlaces dobles C-C,o de los derivados de ácido biliar ácido cólico, ácido quenodeoxicólico, ácido 12-oxocólico, ácido 3-hidroxi-12oxocólico, ácido cetolitocólico o ácido litocólico,15 oxidándose el compuesto hidroxiesteroide con una hidroxiesteroide deshidrogenasa en presencia de un cofactor NAD o NADP, caracterizado porquea) el compuesto hidroxiesteroide está presente en la preparación de reacción en una concentración ≥ 50 g/l,b) el cofactor NADH o NADPH reducido formado mediante la hidroxiesteroide deshidrogenasa se regenera continuamente mediante la reducción de un compuesto cetona de la fórmula general RXRYCO, en la que RX, RY 20 independientemente uno de otro representan alquilo C1-C8 ramificado o no ramificado y Ctotal ≥ 3, o mediante la reducción de una cicloalcanona C4-C6, yc) para la reducción del compuesto cetona de la fórmula general RXRYCO o de la cicloalcanona se usa una oxidorreductasa / alcohol deshidrogenasa adicional. - 14. Procedimiento según la reivindicación 13, caracterizado porque como cetona de la fórmula general RXRYCO se25 usa acetona, 2-butanona, 2-pentanona, 4-metil-2-pentanona, 2-hexanona, 2-heptanona, 5-metil-2-hexanona o 2octanona y como cicloalcanona se usa ciclohexanona.
-
- 15.
- Procedimiento según la reivindicación 13 ó 14, caracterizado porque se lleva a cabo en un sistema bifásico orgánico acuoso.
-
- 16.
- Procedimiento según la reivindicación 15, caracterizado porque se usa adicionalmente un disolvente orgánico tal
30 como, por ejemplo, dietiléter, terc-butilmetiléter, diisopropiléter, dibutiléter, acetato de etilo, acetato de butilo, heptano, hexano o ciclohexano. - 17. Procedimiento según una de las reivindicaciones 13 a 16, caracterizado porque el NRT, es decir número de recambio total = moles de compuesto hidroxiesteroide oxidados / moles de cofactor usados es ≥ 103.
- 18. Procedimiento según una de las reivindicaciones 13 a 17, caracterizado porque se oxida al menos el 50 % del 35 compuesto hidroxiesteroide usado, dentro de un periodo de 2 a 96 h, dando el compuesto oxoesteroide.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0062706A AT503486B1 (de) | 2006-04-11 | 2006-04-11 | Verfahren zur enantioselektiven reduktion von steroiden |
| AT6272006 | 2006-04-11 | ||
| PCT/EP2007/003197 WO2007118644A1 (de) | 2006-04-11 | 2007-04-11 | Verfahren zur herstellung von steroidderivaten durch reduktion von oxosteroidverbindungen oder durch oxidation von hydroxysteroidverbindungen unter verwendung einer hydroxysteroiddehydrogenase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2389383T3 true ES2389383T3 (es) | 2012-10-25 |
Family
ID=38234310
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES07724138T Active ES2389383T3 (es) | 2006-04-11 | 2007-04-11 | Procedimiento para la preparación de derivados de esteroides mediante la reducción de compuestos oxoesteroides o mediante la oxidación de compuestos hidroxiesteroides usando una hidroxiesteroide deshidrogenasa |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8227208B2 (es) |
| EP (1) | EP2004838B1 (es) |
| JP (1) | JP5113832B2 (es) |
| KR (1) | KR101344581B1 (es) |
| CN (1) | CN101421413A (es) |
| AT (1) | AT503486B1 (es) |
| AU (1) | AU2007237475B2 (es) |
| CA (1) | CA2633736C (es) |
| ES (1) | ES2389383T3 (es) |
| PL (1) | PL2004838T3 (es) |
| PT (1) | PT2004838E (es) |
| RU (1) | RU2426791C2 (es) |
| TW (1) | TWI374936B (es) |
| WO (1) | WO2007118644A1 (es) |
| ZA (1) | ZA200806774B (es) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT502395B1 (de) * | 2005-07-27 | 2007-03-15 | Iep Gmbh | Oxidoreduktasen zur stereoselektiven reduktion von ketoverbindungen |
| AT503486B1 (de) | 2006-04-11 | 2008-05-15 | Iep Gmbh | Verfahren zur enantioselektiven reduktion von steroiden |
| IT1398729B1 (it) | 2009-07-01 | 2013-03-18 | F S I Fabbrica Italiana Sint | Processo per la preparazione di testosterone |
| WO2013117251A1 (de) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | Annikki Gmbh | Verfahren zur enzymatischen regenerierung von redoxkofaktoren |
| US9902981B2 (en) | 2012-02-07 | 2018-02-27 | Annikki Gmbh | Process for the production of furan derivatives from glucose |
| AT513721B1 (de) * | 2012-12-10 | 2014-09-15 | Annikki Gmbh | Verfahren zur enzymatischen Regenerierung von Redoxkofaktoren |
| TW201343623A (zh) * | 2012-02-07 | 2013-11-01 | Annikki Gmbh | 使氧化還原輔因子經酶催化再生之方法 |
| CN103030677A (zh) * | 2012-09-26 | 2013-04-10 | 宜城市共同药业有限公司 | 一种高收率的宝丹酮的合成方法 |
| JP2016521544A (ja) * | 2013-05-21 | 2016-07-25 | ドクター レディズ ラボラトリーズ リミテッド | デヒドロエピアンドロステロンおよびその中間体の調製法。 |
| CN106714770B (zh) * | 2014-07-23 | 2024-04-19 | 斯法尔制药私人有限公司 | 羟基类固醇化合物、其中间体、制备方法、组合物及其用途 |
| CN105483198A (zh) * | 2014-09-16 | 2016-04-13 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 雄烯二酮（4-ad）制备脱氢表雄酮（dhea）的新方法 |
| WO2017093980A1 (en) | 2015-12-05 | 2017-06-08 | Lupin Limited | Process for preparation of testosterone |
| IL268118B2 (en) * | 2017-01-19 | 2024-12-01 | Novartis Ag | Enzymatic reaction medium containing surfactant |
| CN109706108B (zh) * | 2019-01-29 | 2021-04-09 | 天津科技大学 | 一种通过强化nadh脱氢增强甾药前体生产的方法 |
| CN110387360B (zh) * | 2019-06-18 | 2021-12-28 | 华东理工大学 | 羟基类固醇脱氢酶及其在合成熊去氧胆酸前体中的应用 |
| WO2021145458A1 (ja) * | 2020-01-16 | 2021-07-22 | 学校法人慶應義塾 | 胆汁酸を生成するための組成物 |
| CN117778342B (zh) * | 2024-02-27 | 2024-05-28 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 羰基还原酶突变体及其在合成11β-羟基甾体化合物中的应用 |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0118928B1 (en) * | 1983-02-03 | 1986-10-29 | Duphar International Research B.V | Method for the enzymatic conversion of a water-insoluble or substantially water-insoluble organic substrate |
| US5869283A (en) * | 1988-05-06 | 1999-02-09 | Roussel Uclaf | Expression cassette operable in a recombinant host |
| JPH03127998A (ja) * | 1989-10-13 | 1991-05-31 | Taunzu:Kk | 尿素の定量法 |
| DE4014573C1 (es) * | 1990-05-07 | 1991-10-10 | Forschungszentrum Juelich Gmbh, 5170 Juelich, De | |
| US5385833A (en) * | 1992-02-26 | 1995-01-31 | The Scripps Research Institute | Pseudomonas sp. ATCC No. 49794 alcohol dehydrogenase |
| CA2117482C (en) * | 1992-03-13 | 2005-02-15 | Maria-Regina Kula | New ketonic ester reductases, its preparation and use for enzymatic redox reactions |
| JP3574682B2 (ja) * | 1993-09-24 | 2004-10-06 | ダイセル化学工業株式会社 | 新規な酵素、該酵素を製造する方法、該酵素をコードするｄｎａ、該ｄｎａを含む形質転換体、該酵素による光学活性アルコール等の製造方法 |
| US5523233A (en) * | 1995-05-03 | 1996-06-04 | Merck & Co., Inc. | Enzymatic hydrolysis of 3,3-diethyl-4-[(4-carboxy)phenoxy]-2-azetidinone esters |
| DE19610984A1 (de) * | 1996-03-21 | 1997-09-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Alkohol-Dehydrogenase und deren Verwendung zur enzymatischen Herstellung chiraler Hydroxyverbindungen |
| CZ20021784A3 (cs) * | 1999-10-22 | 2002-08-14 | Akzo Nobel N. V. | Mikrobiální 9alfa-hydroxylace steroidů |
| TWI275645B (en) | 2000-02-16 | 2007-03-11 | Daicel Chemical Industries Ltd. | (R)-2-octanol dehydrogenases, methods for producing the enzymes, DNA encoding the enzymes, and methods for producing alcohols using the enzymes |
| DE10119274A1 (de) * | 2001-04-20 | 2002-10-31 | Juelich Enzyme Products Gmbh | Enzymatisches Verfahren zur enantioselektiven Reduktion von Ketoverbindungen |
| DE10218689A1 (de) | 2002-04-26 | 2003-11-20 | Degussa | ADH aus Rhodococcus erythropolis |
| DE10300335B4 (de) | 2003-01-09 | 2008-06-26 | Iep Gmbh | Oxidoreduktase |
| US20050037946A1 (en) * | 2003-01-13 | 2005-02-17 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating cardiovascular disease using 1722, 10280, 59917, 85553, 10653, 9235, 21668, 17794, 2210, 6169, 10102, 21061, 17662, 1468, 12282, 6350, 9035, 1820, 23652, 7301, 8925, 8701, 3533, 9462, 9123, 12788, 17729, 65552, 1261, 21476, 33770, 9380, 2569654, 33556, 53656, 44143, 32612, 10671, 261, 44570, 41922, 2552, 2417, 19319, 43969, 8921, 8993, 955, 32345, 966, 1920, 17318, 1510, 14180, 26005, 554, 16408, 42028, 112091, 13886, 13942, 1673, 54946 or 2419 |
| DE10327454A1 (de) | 2003-06-18 | 2005-01-20 | Juelich Enzyme Products Gmbh | Oxidoreduktase aus Pichia capsulata |
| JP2007502111A (ja) * | 2003-08-11 | 2007-02-08 | コデクシス， インコーポレイテッド | ４−置換３−ヒドロキシ酪酸誘導体およびビシナルなシアノ，ヒドロキシ置換カルボン酸エステルの生成のための酵素的プロセス |
| EP1654354A1 (en) * | 2003-08-11 | 2006-05-10 | Codexis, Inc. | Improved ketoreductase polypeptides and related polynucleotides |
| DE10354779A1 (de) * | 2003-11-21 | 2005-06-23 | Juelich Enzyme Products Gmbh | Oxidoreduktase aus Metschnikowia zobellii |
| US7253293B2 (en) * | 2004-01-06 | 2007-08-07 | Andrzej Slominski | Enzymatic method to produce 7-dehydropregnenolone, vitamin D3-like compounds and derivatives thereof |
| EP1731618A1 (en) * | 2005-06-07 | 2006-12-13 | Prodotti Chimici E Alimentari Spa | Process for the selective oxydation of colic acid |
| AT503486B1 (de) | 2006-04-11 | 2008-05-15 | Iep Gmbh | Verfahren zur enantioselektiven reduktion von steroiden |
-
2006
- 2006-04-11 AT AT0062706A patent/AT503486B1/de not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-04-11 CN CNA2007800128747A patent/CN101421413A/zh active Pending
- 2007-04-11 PL PL07724138T patent/PL2004838T3/pl unknown
- 2007-04-11 US US11/910,886 patent/US8227208B2/en active Active
- 2007-04-11 ZA ZA200806774A patent/ZA200806774B/xx unknown
- 2007-04-11 AU AU2007237475A patent/AU2007237475B2/en not_active Ceased
- 2007-04-11 CA CA2633736A patent/CA2633736C/en active Active
- 2007-04-11 JP JP2009504633A patent/JP5113832B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-04-11 WO PCT/EP2007/003197 patent/WO2007118644A1/de not_active Ceased
- 2007-04-11 TW TW096112717A patent/TWI374936B/zh not_active IP Right Cessation
- 2007-04-11 RU RU2008144419/10A patent/RU2426791C2/ru active
- 2007-04-11 EP EP07724138A patent/EP2004838B1/de active Active
- 2007-04-11 ES ES07724138T patent/ES2389383T3/es active Active
- 2007-04-11 PT PT07724138T patent/PT2004838E/pt unknown
-
2008
- 2008-08-21 KR KR1020087020425A patent/KR101344581B1/ko not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2008144419A (ru) | 2010-05-20 |
| KR101344581B1 (ko) | 2013-12-26 |
| ZA200806774B (en) | 2009-11-25 |
| CN101421413A (zh) | 2009-04-29 |
| TW200806798A (en) | 2008-02-01 |
| CA2633736A1 (en) | 2007-10-25 |
| AT503486A1 (de) | 2007-10-15 |
| KR20090004862A (ko) | 2009-01-12 |
| PT2004838E (pt) | 2012-08-21 |
| EP2004838B1 (de) | 2012-06-13 |
| AT503486B1 (de) | 2008-05-15 |
| US20090280525A1 (en) | 2009-11-12 |
| WO2007118644A1 (de) | 2007-10-25 |
| JP2009535017A (ja) | 2009-10-01 |
| RU2426791C2 (ru) | 2011-08-20 |
| TWI374936B (en) | 2012-10-21 |
| EP2004838A1 (de) | 2008-12-24 |
| JP5113832B2 (ja) | 2013-01-09 |
| US8227208B2 (en) | 2012-07-24 |
| AU2007237475A1 (en) | 2007-10-25 |
| PL2004838T3 (pl) | 2012-11-30 |
| AU2007237475B2 (en) | 2012-04-05 |
| CA2633736C (en) | 2015-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2389383T3 (es) | Procedimiento para la preparación de derivados de esteroides mediante la reducción de compuestos oxoesteroides o mediante la oxidación de compuestos hidroxiesteroides usando una hidroxiesteroide deshidrogenasa | |
| Donova et al. | Steroid 17β-reduction by microorganisms—a review | |
| Eggert et al. | Enzymatic routes for the synthesis of ursodeoxycholic acid | |
| Mahato et al. | Steroid transformations by microorganisms—II | |
| Riva | Enzymatic modification of steroids | |
| JPH0614874B2 (ja) | ステロイド転化プロセス | |
| JPH06104072B2 (ja) | 毒性酸素スカベンジャーを使用する微生物による△▲１▼―脱水素化方法 | |
| Luthra et al. | Biotransformation of 4-androstene-3, 17-dione to androst-1, 4-diene-3, 17-dione by Nocardioides Simplex | |
| Donova | Current Trends and Perspectives in Microbial | |
| US4684610A (en) | Process for converting 1,2-saturated steroids to 1,2-dehydro steroids | |
| US6762302B2 (en) | Process for dehydrogenation of azaandrostane compounds | |
| Andryushina et al. | Optimization of the 9α-hydroxylation of steroid substrates using an original culture of Rhodococcus erythropolis | |
| Carrea et al. | Synthetic applications of NAD (P)(H)-dependent enzymes | |
| DE102015120587A1 (de) | Verfahren zur selektiven Oxygenierung von Testosteron und Testosteron-ähnlichen Steroiden | |
| JP2001136996A (ja) | ウルソデオキシコール酸エステルの製造方法（炭素・プロトン源二段階消費システム） | |
| HU196464B (en) | New process for producing 1,2-dehydrosteroids |