ES2398268T3

ES2398268T3 - Derivados de fenantrolina triplemente sustituidos para el tratamiento de enfermedades o estados neurodegenerativos o hematológicos, o cáncer

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Publication number: ES2398268T3
Application number: ES09765124T
Authority: ES
Inventors: Miguel Medina Padilla; Ana Castro Morera; Jorge Sánchez-Quesada; Esther GARCÍA PALOMERO; Mercedes Alonso Cascón; Susana Herrero Santos; Marta Vela Ruiz; Paola Usán Egea; Ana Luisa RODRÍGUEZ VILLANUEVA
Original assignee: Noscira SA
Current assignee: Noscira SA
Priority date: 2008-12-10
Filing date: 2009-12-10
Publication date: 2013-03-15
Anticipated expiration: 2029-12-10
Also published as: PT2373650E; WO2010066832A1; EP2373650A1; WO2010066832A8; EP2196466A1; US20110306631A1; EP2373650B1; JP2012511544A

Abstract

Compuesto de fórmula (I): CH>=N-OH en la que R1 se selecciona de -O-R4 y -S-R5, en los que R4 y R5 se seleccionan de H y alquilo C1-C6, R2 se selecciona de hidrógeno, halógeno, alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6 y -O-(CH2)n-O-R6, en el que n seselecciona de 1, 2, 3, 4, 5, 6 y R6 es alquilo C1-C6, R3 se selecciona de hidrógeno y alcoxilo C1-C6, con la condición de que uno de R2 y R3 es H y el otro es diferente de H, o cualquier sal o solvato o estereoisómero o tautómero del mismo.

Description

Derivados de fenantrolina triplemente sustituidos para el tratamiento de enfermedades o estados neurodegenerativos o hematológicos o cáncer.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al uso de algunos derivados de fenantrolina triplemente sustituidos para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad o estado neurodegenerativo o hematológico, particularmente la enfermedad de Alzheimer (EA). Adicionalmente, se proporcionan nuevos derivados de fenantrolina triplemente sustituidos, procedimientos para preparar tales compuestos y composiciones farmacéuticas que los comprenden.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La EA y la enfermedad de Parkinson (EP) son las enfermedades neurodegenerativas progresivas más frecuentes, afectando a millones de personas en todo el mundo. Debido a que un porcentaje significativo de pacientes comparten síntomas clínicos y patológicos comunes para ambas entidades, esto parece indicar la existencia de un mecanismo patológico común.

Se sabe que el estrés oxidativo está implicado en muchas enfermedades, incluyendo aterosclerosis, enfermedad de Parkinson y EA, y también puede ser importante en el envejecimiento.

Las especies reactivas de oxígeno (ERO), tales como el radical de oxígeno superóxido (O2-) o peróxido de hidrógeno (H2O2), se producen durante procesos metabólicos normales y realizan varias funciones útiles (Reactive oxygen species and the central nervous system, Halliwell B., J. Neurochem.; 1992, 59 859: 1609-1623). Las células están dotadas de varios mecanismos para controlar los niveles de estos agentes oxidativos, por ejemplo, la superóxido dismutasa (SOD), el glutatión o la vitamina E. En condiciones fisiológicas normales, existe un equilibrio entre las ERO y estos mecanismos antioxidativos. Una producción excesiva de ERO y una pérdida de la eficacia de las defensas antioxidativas pueden conducir a estrés oxidativo celular y por tanto a estados patológicos en las células y provocar daño tisular. Parece que se produce este acontecimiento más drásticamente en neuronas, debido a su alta tasa de actividad metabólica, y por tanto parece que está relacionado con una serie de procesos, enfermedades y síndromes degenerativos, por ejemplo, EA, EP, esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y esquizofrenia (Glutathione, oxidative stress and neurodegeneration, Schulz et al., Eur. J. Biochem.; 2000, 267, 4904-4911). Se han relacionado también otras enfermedades o estados patológicos con el estrés oxidativo, tales como la enfermedad de Huntington (Oxidative damage in Huntington’s disease, Segovia J. y Pérez-Severiano F, Methods Mol. Biol.; 2004; 207: 321-334), lesiones cerebrales, tales como accidente cerebrovascular e isquemia, (Oxidative Stress in the Context of Acute Cerebrovascular Stroke, El Kossi et al., Stroke; 2000; 31: 1889-1892), diabetes (Oxidative stress as a therapeutic target in diabetes: revisiting the controversy, Wiernsperger NF, Diabetes Metab.; 2003; 29, 579-85), esclerosis múltiple (The role of oxidative stress in the pathogenesis of multiple sclerosis: the need for effective antioxidant therapy, Gilgun-Sherki Y. et al., J. Neurol.; 2004; 251 (3): 261-8), epilepsia (Oxidative injury in epilepsy: potential for antioxidant therapy?, Costello

D.J. y Delanty N., Expert. Rev. Neurother.; 2004; 4(3):541-553), aterosclerosis (The oxidative stress hypothesis of atherogenesis, Iuliano L., Lipids; 2001; 36 supl.: S41-44), ataxia de Friedreich (Oxidative stress mitochondrial dysfuntion and cellular stress response in Friedreich’s ataxia, Calabrese et al., J. Neurol. Sci.; 2005, 233, 145-162), insuficiencia cardiaca (Oxygen, oxidative stress, hypoxia and heart failure, Giordano F.J., J. Clinic. Invest.; 2005; 115 (3): 500-508), cancer(ROS stress in cancer cells and therapeutic implications, Pelicano et al. , Drug Resistance Updates, 2004, 7(2), 97-110)y progression tumoral(The signaling mechanism of ROS in tumor progression, Wu W.S., Cancer and metastasis reviews, 2006, 25(4), 695-705). Los tratamientos que conducen a una potenciación de los mecanismos antioxidativos pueden ralentizar la evolución de algunas de las enfermedades mencionadas.

Otro tipo de estrés celular es el estrés del retículo endoplasmático (RE). El RE es un orgánulo intracelular representado por una extensa red formada por cisternas y microtúbulos y que se extiende desde la envuelta nuclear hasta la superficie celular en todas las células eucariotas. El RE desempeña varias funciones vitales: el RE rugoso es el lugar para la síntesis de proteínas y los cambios postraduccionales para el plegamiento correcto de proteínas, el RE es la ruta de transporte común para enviar proteínas a su destino apropiado dentro de la célula y es también un depósito de Ca2+. Las alteraciones en la función del RE conducen a la acumulación de proteínas no plegadas dentro del RE, induciendo un estado denominado generalmente estrés del RE. Estas alteraciones pueden producirse no sólo por un desequilibrio bioquímico sino también por una alteración en la homeostasis del Ca2+ del RE. Algunos estudios (Glycogen

synthase kinase 3j (GSK3j) mediates 6-hidroxidopamine-induced neuronal death, Chen et al., FASEB J.

2004;18(10):1162-4) demuestran que el estrés del RE activa la enzima glicógeno sintasa cinasa 3j, una enzima implicada en el proceso neurodegenerativo que se produce en pacientes con EA.

La desaparición de las células tumorales es un acontecimiento importante en la eliminación de células malignas anormales y proporciona un importante mecanismo de supresión tumoral natural. Las anormalidades que incapacitan estos procesos finamente ajustados proporcionan una gran ventaja para los clones del cáncer para conseguir evitar a los sistemas de control fisiológico y de intervención terapéutica. Aunque los datos disponibles actualmente indican que la eliminación de células malignas a menudo depende de las clásicas vías apoptóticas (vía mitocondrial y/o receptores de muerte), la evidencia de que las vías alternativas apoptóticas y no apoptóticas pueden efectivamente contribuir a la muerte celular del tumor es cada vez mayor. Entre estos mecanismos, la evidencia experimental indica que RE y el aparato de Golgi pueden activar el mecanismo de pro-supervivencia (recuperación), así como los programas de suicidio celular si el umbral de la señalización de estrés se supera. Es así concebible que el frágil equilibrio de las proteínas que trafican entre varios compartimentos subcelulares proporciona una excepcional oportunidad terapéutica(ER-Golgi network—a future target for anti-cancer therapy, Wlodkowic D. et al. , 2009, Leukemia Research, 33(11), 1440-1447).

La neurotoxina catecolaminérgica 6-hidroxidopamina (6-OHDA) se forma de manera endógena en pacientes que padecen la enfermedad de Parkinson. La 6-OHDA tiene dos modos de acción: forma fácilmente radicales libres y es un potente inhibidor de los complejos I y IV de la cadena respiratoria mitocondrial. Se usan modelos de 6-OHDA para producir un amplio espectro de déficits neuroquímicos y de comportamiento que caracterizan a la degeneración por DA en seres humanos, especialmente para la EP (por ejemplo Glinka Y et al, “Mechanism of 6-hidroxidopamine neurotoxicity”, J Neural Transm Supl. 1997;50:55-66; Willis GL et al, “The implementation of acute versus chronic animal models for treatment discovery in Parkinson’s disease” Rev Neurosci. 2004;15(1):75-87).

Un signo común de las enfermedades neurodegenerativas es la acumulación y los depósitos de proteínas plegadas de manera errónea que afectan a varias rutas de señalización que conducen finalmente a la muerte neuronal. Algunos autores (ER stress and neurodegenerative diseases, Lindholm et al., Cell Death and Differentiation; 2006; 13: 385-392) consideran que el estrés de RE está relacionado con varias enfermedades neurodegenerativas tales como EP, EA, ELA y encefalopatías espongiformes transmisibles (EET).

En vista de lo anterior, un enfoque interesante para desarrollar nuevos compuestos farmacéuticos para tratar enfermedades neurodegenerativas puede ser diseñar compuestos que inhiben el estrés oxidativo celular.

El amiloide beta (Aj) es un péptido que es el constituyente principal de las placas de amiloide en los cerebros

de pacientes con EA. Aparecen placas similares en algunas variantes de la demencia de cuerpos de Lewy y en miositis de cuerpos de inclusión, una enfermedad muscular. El Aj también forma agregados que recubren vasos sanguíneos cerebrales en la angiopatía amiloide cerebral.

El Aj se forma tras la escisión secuencial de la proteína precursora del amiloide (APP) por las j-y y

secretasas. Se producen o bien Aj42 o bien Aj40 dependiendo de dónde se produce la escisión. La APP es una glicoproteína transmembrana. Las mutaciones autosómicas dominantes en la APP producen una EA hereditaria de aparición temprana, probablemente como resultado del procesamiento proteolítico alterado. Se ha implicado a los

aumentos en los niveles de Aj total en la patogenia tanto de EA familiar como esporádica [Soluble Amyloid f Peptide Concentration as a Predictor of Synaptic Change in Alzheimer’s Disease, L.et al., The American Journal of Pathology, Lue, L; 1999, 155(3):853-662].

Según la “hipótesis del amiloide”, aceptada por la mayoría de los investigadores, las placas son responsables de la patología de la EA. También se observan depósitos intracelulares de proteína tau en la enfermedad, y también pueden estar implicados. Los oligómeros que se forman en la ruta del amiloide, en vez de las fibrillas maduras, pueden ser la especie citotóxica.

Por tanto, el desarrollo de inhibidores de la secreción de amiloide beta es una estrategia actual para encontrar tratamientos para enfermedades en las que está implicada la amiloidosis, tales como EA, EP, enfermedad de Huntington, EET, enfermedades priónicas, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob y encefalopatía espongiforme bovina.

Por otra parte, se usan quelantes de hierro para tratar algunas clases de enfermedades hematológicas, tales como talasemia, anemia, anemia aplásica, síndrome mielodisplásico, diabetes, anemia de Diamond-Blackfan, drepanocitosis, trastornos hematológicos que requieren transfusiones regulares de glóbulos rojos, disfunción cardiaca inducida por hierro e insuficiencia cardiaca inducida por hierro.

Metales tales como el hierro pueden realizar un ciclo redox en el que puede aceptarse o donarse por el metal un único electrón. Esta acción cataliza reacciones que producen radicales reactivos y pueden producir especies reactivas de oxígeno. Las reacciones más importantes son probablemente la reacción de Fenton y la reacción de Haber-Weiss, en la que se produce radical hidroxilo a partir de hierro reducido y peróxido de hidrógeno. El radical hidroxilo entonces puede conducir a modificaciones de aminoácidos (por ejemplo, formación de meta-tirosina y orto-tirosina a partir de fenilalanina), hidratos de carbono, iniciar la peroxidación de lípidos y oxidar nucleobases. La mayoría de las enzimas que producen especies reactivas de oxígeno contienen uno de estos metales. La presencia de tales metales en sistemas biológicos en una forma no complejada (no en una proteína u otro complejo de metal protector) puede aumentar significativamente el nivel de estrés oxidativo. Por tanto, es deseable que los ligandos quelantes para el tratamiento de estados según la invención muestren una preferencia hacia Fe(II) en vez de Fe(III).

Se han usado los quelantes de hierro deferoxamina y deferiprona en seres humanos desde los años 70 y los últimos 80, respectivamente, y recientemente se ha usado un nuevo fármaco, deferasirox, en seres humanos. Se ha demostrado que la deferoxamina es eficaz en la talasemia mayor, drepanocitosis y otros trastornos hematológicos para

los que los trastornos hematológicos, pero sólo puede administrarse por vía subcutánea [Oral chelators deferasirox and deferiprone for transfusional iron overload in thalassemia major:new data, new questions, Blood; Neufeld, E.L., 2006, 107(9): 3436-3441]. El deferasirox, aprobado en los EE.UU. para tratar una sobrecarga de hierro crónica debida a transfusiones de sangre, ha mostrado un éxito de moderado a bueno [New advances in Iron Chelation Therapy, Cohen,

A.R. ; Hematology, 2006, 42-47]. También se esta usando terapia de combinación con deferiprona y deferoxamina.Sin embargo, se han asociado efectos secundarios con el uso de estos fármacos; la deferiprona produce a menudo síntomas gastrointestinales, artritis erosiva, neutropenia y en algunos casos agranulocitosis; la deferiprona requiere de ese modo un hemograma completo semanal y suministros auxiliares para infusión, de modo que se requiere una monitorización estrecha; la deferoxamina presenta síntomas gastrointestinales y dolor articular y el deferasirox es costoso. Por tanto, sigue habiendo todavía una necesidad de quelantes de hierro terapéuticos adicionales para su uso en estas enfermedades hematológicas, producidos y usados con bajo coste y efectos secundarios reducidos.

Adicionalmente, se han descrito fármacos quelantes y complejos metálicos quelantes como agentes útiles para la prevención, diagnosis y tratamiento de cáncer. Las células cancerígenas y las células normales requieren iones metálicos esenciales como el hierro, el cobre y el zinc para el crecimiento y proliferación. Los quelantes pueden dirigir las rutas metabólicas de las células cancerígenas a través del control de las proteínas involucradas en la regulación de estos metales y de otras moléculas involucradas en el control del ciclo celular, angiogénesis y supresión metastásica. Otros objetivos incluyen la inhibición de proteínas específicas como la reductasa ribonucleotida involucrada en la síntesis de ADN, la inhibición del daño de los radicales libres sobre el ADN causada por centros catalíticos de hierro y cobre, la inhibición del crecimiento microbiano en pacientes con cáncer inmunocomprometidos y la decorporación de otros metales tóxicos y radioactivos que causan cáncer. Aunque se ha demostrado que muchos quelantes experimentales son efectivos como agentes anti-cancer, sólo unos pocos, como dexrazoxano, deferoxamina(DFO) y triapina, han alcanzado el estadio de testeo clínico o aplicación (Chelators controlling metal metabolism and toxicity pathways: applications in cancer prevention, diagnosis and treatment, Kontoghiorghes G.J. et. al., Hemoglobin, 2008, 32(1-2), 217-27).

Se conoce bien que los derivados de fenantrolina presentan buenas propiedades quelantes de hierro. Se muestran algunos derivados de fenantrolina en la patente PL76345. Sería sumamente recomendable encontrar nuevos derivados de fenantrolina que puedan mostrar propiedades mejoradas en la quelación de metal de hierro con el fin de proporcionar una capacidad potenciada para tratar las enfermedades hematológicas mencionadas y para prevenir, diagnosticar y tratar el cáncer.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Los autores de la presente invención han encontrado una nueva familia de compuestos, concretamente derivados de fenantrolina triplemente sustituidos, definidos por la fórmula (I) tal como se detalla a continuación, que abarcan las propiedades de protección frente al estrés oxidativo, particularmente frente a la muerte celular por peróxido de hidrógeno y muerte celular por 6-hidroxidopamina, que tienen un efecto neuroprotector frente a la toxicidad de Aj e inhiben la secreción de Aj. Por tanto, pueden ser útiles para el tratamiento o la profilaxis de enfermedades o estados neurodegenerativos. Además, estos compuestos se caracterizan por actuar como quelantes de hierro (II) específicos y por tanto también podrían usarse para tratar enfermedades hematológicas y cáncer. Adicionalmente, los compuestos no afectan a la viabilidad de la célula en concentraciones superiores a las de las activas.

Por tanto, según un primer aspecto, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I):

R2 R1

R3

N CH=N-OH N

(I)

en la que R1 se selecciona de –O-R4 y –S-R5, en los que R4 y R5 se seleccionan de H y alquilo C1-C6, R2 se selecciona de hidrógeno, halógeno, alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6 y –O-(CH2)n-O-R6, en el que n se selecciona de

1, 2, 3, 4, 5, 6 y R6 es alquilo C1-C6, R3 se selecciona de hidrógeno y alcoxilo C1-C6, con la condición de que uno de R2 y R3 es H y el otro es diferente de H,

o cualquier sal o solvato o estereoisómero o tautómero del mismo.

Según un aspecto adicional, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I): R2 R1

R3

N

CH=N-OH

N

(I)

en la que

R1 se selecciona de –O-R4 y –S-R5, en los que R4 y R5 se seleccionan de H y alquilo C1-C6,

R2 se selecciona de hidrógeno, halógeno, alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6 y –O-(CH2)n-O-R6, en el que n se selecciona de 1, 2, 3, 4, 5, 6 y R6 es alquilo C1-C6,

R3 se selecciona de hidrógeno y alcoxilo C1-C6,

con la condición de que uno de R2 y R3 es H y el otro es diferente de H,

: o cualquier sal o solvato o estereoisómero o tautómero del mismo,

en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad o estado neurodegenerativo

: o hematológico o cáncer.

Un aspecto adicional de la invención son los compuestos de fórmula (I) tal como se definió anteriormente para su uso en el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad o estado neurodegenerativo o hematológico o cáncer.

Los compuestos de fórmula (I) pueden usarse en ensayos biológicos en los que necesita modularse la secreción de beta-amiloide. Por tanto, en otro aspecto, la invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente, o cualquier sal o solvato del mismo, como reactivo para ensayos biológicos, preferiblemente como reactivo para ensayos farmacocinéticos, ensayos de cruce de la barrera hematoencefálica, ensayos de quelación, para ensayos sobre protección frente a la muerte celular inducida por peróxido de hidrógeno,

protección frente a la muerte celular inducida por 6-OHDA, neuroprotección frente a la toxicidad de Aj e inhibición de la secreción de beta-amiloide.

Un aspecto adicional de la invención se refiere a un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o estado neurodegenerativo o hematológico o cáncer, comprendiendo dicho método administrar a un paciente que necesita un tratamiento de este tipo una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente, sus sales, solvatos, estereoisómeros o tautómeros del mismo, o una composición farmacéutica del mismo.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente, sus sales o solvatos o estereoisómeros o tautómeros del mismo, y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Según un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente, sus sales, solvatos o estereoisómeros o tautómeros del mismo, para su uso como medicamento.

Según un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un procedimiento para la síntesis de los compuestos de fórmula I, sus sales o solvatos o estereoisómeros o tautómeros del mismo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

En la definición anterior de compuestos de fórmula (I), los siguientes términos tienen el significado indicado:

“Alquilo C1-C6” se refiere a un radical de cadena hidrocarbonada lineal o ramificada que consiste en átomos de carbono e hidrógeno, que no contiene ninguna insaturación, que tiene de uno a seis átomos de carbono, preferiblemente de uno a tres, y que está unido al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo, etc.

“Alcoxilo C1-C6” se refiere a un radical de fórmula -ORa en la que Ra es un radical “alquilo C1-C6” tal como se definió anteriormente, por ejemplo, metoxilo, etoxilo, propoxilo, etc.

“Halógeno” se refiere a bromo, cloro, yodo o flúor.

Compuestos de fórmula I

Una realización de la invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) en la que R1 se selecciona de –O-R4 y –S-R5, en los que R4 y R5 se seleccionan de H y alquilo C1-C6, R2 se selecciona de hidrógeno, halógeno, alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6 y –O-(CH2)n-O-R6, en el que n se

selecciona de 1, 2, 3, 4, 5, 6 y R6 es alquilo C1-C6, R3 se selecciona de hidrógeno y alcoxilo C1-C6, con la condición de que uno de R2 y R3 es H y el otro es diferente de H,

o cualquier sal o solvato o estereoisómero o tautómero del mismo. Según una realización preferida, R4 y R5 se seleccionan de H y metilo. Según otra realización preferida, R2 se selecciona de hidrógeno, flúor, metilo, metoxilo y –O-(CH2)2-O-CH3. Según una realización preferida adicional, R3 se selecciona de hidrógeno y metoxilo. Preferiblemente, el doble enlace del grupo oxima –CH=NOH presenta conformación E, según la siguiente

fórmula estructural (Ia):

R2 R1

N

NN

(Ia) OH

Preferiblemente, el compuesto de fórmula (I) se selecciona de los siguientes compuestos:

oxima de 5-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 5-fluoro-4-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 4-metoxi-5-(2-metoxi-etoxi)-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 5-metil-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 6-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 4-hidroxi-6-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído.

Los compuestos de fórmula (I) pueden estar en forma de sales, preferiblemente sales farmacéuticamente aceptables, o en forma de solvatos. La expresión “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a cualquier sal que tras su administración al receptor puede proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto tal como se describe en el presente documento. Sin embargo, se apreciará que las sales no farmacéuticamente aceptables también se encuentran dentro del alcance de la invención dado que éstas pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. Preferiblemente, “farmacéuticamente aceptable” se refiere a composiciones y entidades moleculares que son fisiológicamente tolerables y que no producen normalmente una reacción alérgica o similar adversa, tal como malestar gástrico, mareo y similares, cuando se administra a un ser humano. Preferiblemente, tal como se usa en el presente documento, la expresión “farmacéuticamente aceptable” significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o un gobierno estatal o enumerado en la farmacopea estadounidense u otra farmacopea reconocida generalmente para su uso en animales, y más particularmente en seres humanos.

El término “solvato” según esta invención se entiende que significa cualquier forma del compuesto activo según la invención que tiene otra molécula (lo más probablemente un disolvente polar) unido a él mediante enlaces no covalentes. Los ejemplos de solvatos incluyen hidratos y alcoholatos, por ejemplo metanolato. Preferiblemente, los solvatos son solvatos farmacéuticamente aceptables.

La preparación de sales y solvatos puede llevarse a cabo mediante métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, se sintetizan sales farmacéuticamente aceptables de compuestos proporcionados en el presente documento a partir del compuesto original, que contiene un resto básico, mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales se preparan, por ejemplo, haciendo reaccionar las formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico o en una mezcla de los dos. Generalmente, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Los ejemplos de sales de adición de ácido incluyen sales de adición de ácido mineral tales como, por ejemplo, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, nitrato, fosfato y sales de adición de ácido orgánico, tales como, por ejemplo, acetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartrato, malato, mandelato, metanosulfonato y p-toluenosulfonato.

Una forma farmacéuticamente aceptable preferida es la forma cristalina, incluyéndose tal forma en una composición farmacéutica. En el caso de sales y solvatos, los restos de disolvente e iónicos adicionales también deben ser no tóxicos. Los compuestos de la invención pueden presentar diferentes formas polimórficas, se pretende que la invención abarque todas de tales formas.

Los compuestos de la invención también pretenden incluir compuestos que difieren sólo en la presencia de uno

o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras excepto por la sustitución de un hidrógeno por un deuterio o tritio, o la sustitución de un carbono por un carbono enriquecido en13C o 14C o un nitrógeno por nitrógeno enriquecido en 15N están dentro del alcance de esta invención.

Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (I) descrita anteriormente pueden incluir enantiómeros o diastereómeros dependiendo de la presencia de isómeros o centros quirales que dependen de la presencia de enlaces múltiples (por ejemplo, Z, E). Los diastereómeros, enantiómeros o isómeros individuales y mezclas de los mismos se encuentran dentro del alcance de la presente invención.

Usos de compuestos de fórmula (I)

Dentro del marco de la presente invención, la expresión “enfermedad o estado neurodegenerativo” significa cualquier enfermedad o estado en el que se produce neurodegeneración. Tal enfermedad o estado incluye, pero no se limita a, cualquier enfermedad o estado seleccionado de enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), esquizofrenia, enfermedad de Huntington, lesiones cerebrales, tales como accidente cerebrovascular e isquemia, esclerosis múltiple, epilepsia, ataxia de Friedreich, encefalopatías espongiformes, amiloidosis, demencia vascular, taupatías, parálisis supranuclear progresiva, degeneración lobular frontotemporal, parkinsonismo panencefálico esclerosante subagudo, parkinsonismo postencefálico, encefalitis pugilística, complejo de parkinsonismo-demencia de Guam, enfermedad de Pick, degeneración corticobasal, demencia frontotemporal, demencia asociada al SIDA, esclerosis múltiple, trastornos del estado de ánimo tales como depresión, esquizofrenia y trastornos bipolares, estimulación de la recuperación funcional tras accidente cerebrovascular y lesión cerebral, especialmente lesión cerebral traumática. En un aspecto preferido de la invención, la enfermedad o estado neurodegenerativo es la enfermedad de Alzheimer.

Dentro del marco de la presente invención, la expresión “enfermedad o estado hematológico” significa cualquier enfermedad o estado en el que se producen trastornos de la sangre y de los tejidos que forman la sangre. En una realización preferida, la enfermedad o estado hematológico se selecciona de talasemia, anemia, anemia aplásica, anemia de Diamond-Blackfan, drepanocitosis, trastornos hematológicos que requieren transfusiones regulares de glóbulos rojos, síndrome mielodisplásico, disfunción cardiaca inducida por hierro, insuficiencia cardiaca inducida por hierro y diabetes, más preferiblemente de talasemia, anemia, anemia aplásica, síndrome mielodisplásico y diabetes.

Dentro del marco de la presente invención, la expresión “cáncer” incluye cáncer de intestinos, de hígado, gástrico, de pecho, de pulmón, de ovario, de próstata, glioma cerebral, linfático, de piel, de pigmento, de la glándula tiroidea, leucemia y varios de la médula ósea.

Según una realización preferida, R4 y R5 se seleccionan de H y metilo.

Según otra realización preferida, R2 se selecciona de hidrógeno, flúor, metilo, metoxilo y –O-(CH2)2-O-CH3.

Según una realización preferida adicional, R3 se selecciona de hidrógeno y metoxilo.

Preferiblemente, el doble enlace del grupo oxima –CH=NOH presenta conformación E, según la siguiente formula estructural (Ia):

R2 R1

N

NN

(Ia) OH

En un aspecto particular, el compuesto de fórmula (I) usado en la presente invención se selecciona de los siguientes compuestos:

oxima de 5-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 5-fluoro-4-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 4-metoxi-5-(2-metoxi-etoxi)-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 5-metil-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 6-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 4-hidroxi-6-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

Los compuestos usados en la presente invención pueden usarse con al menos otro fármaco para proporcionar una terapia de combinación. El al menos otro fármaco puede formar parte de la misma composición, o proporcionarse como una composición separada para su administración al mismo tiempo o en un momento diferente.

Según un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o estado neurodegenerativo o hematológico o cáncer, comprendiendo dicho método administrar a un paciente que necesita un tratamiento de este tipo una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto de fórmula (I), sus sales o solvatos, estereoisómeros o tautómeros del mismo, tal como se definió anteriormente o una composición farmacéutica del mismo.

El término “tratamiento” o “tratar” en el contexto de esta memoria descriptiva significa la administración de un compuesto o una formulación según la invención para prevenir, mejorar o eliminar la enfermedad o uno o más síntomas asociados a dicha enfermedad. “Tratamiento” también abarca prevenir, mejorar o eliminar las secuelas fisiológicas de la enfermedad.

El término “mejorar” en el contexto de esta invención se entiende que significa cualquier mejora en la situación del paciente tratado, o bien subjetiva (sensación de o en el paciente) o bien objetivamente (parámetros medidos).

Composiciones farmacéuticas

Según un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula (I) tal como se definió anteriormente, sus sales o solvatos o estereoisómeros o tautómeros del mismo, y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Como se indicó anteriormente, la composición además puede contener al menos otro fármaco, para proporcionar una terapia de combinación. Este otro fármaco puede ser un compuesto biológicamente activo, especialmente cualquier otro fármaco conocido para el tratamiento de enfermedades o estados hematológicos o neurodegenerativos, o cáncer.

El término “vehículo” se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el que se administra el principio activo. Tales vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Se emplean preferiblemente como vehículos agua o disoluciones de solución salina acuosas y disoluciones de dextrosa y glicerol acuosas, particularmente para disoluciones inyectables. Se describen vehículos farmacéuticos adecuados en “Remington’s Pharmaceutical Sciences” por E.W. Martin, 1995.

Preferiblemente, los vehículos de la invención están aprobados por una agencia reguladora del gobierno federal o un gobierno estatal o están enumerados en la farmacopea estadounidense u otra farmacopea reconocida generalmente para su uso en animales, y más particularmente en seres humanos.

Los vehículos y sustancias auxiliares necesarios para fabricar la forma farmacéutica deseada de administración de la composición farmacéutica de la invención dependerán, entre otros factores, de la forma farmacéutica de administración elegida. Dichas formas farmacéuticas de administración de la composición farmacéutica se fabricarán según métodos convencionales conocidos por el experto en la técnica. Puede encontrarse una revisión de diferentes métodos de administración de principios activos, excipientes que van a usarse y procedimientos para producirlos en “Tratado de Farmacia Galénica”, C. Faulí i Trillo, Luzán 5, S.A. de Ediciones, 1993.

Los ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen cualquier composición sólida (comprimidos, píldoras, cápsulas, gránulos, etc.) o líquida (disoluciones, suspensiones o emulsiones) para administración oral, tópica o parenteral.

En una realización preferida, las composiciones farmacéuticas están en forma oral. Las formas de dosificación adecuadas para administración oral pueden ser comprimidos y cápsulas y pueden contener excipientes convencionales conocidos en la técnica tales como agentes aglutinantes, por ejemplo jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplo lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricantes para la preparación de comprimidos, por ejemplo estearato de magnesio; disgregantes, por ejemplo almidón, polivinilpirrolidona, glicolato sódico de almidón o celulosa microcristalina; o agentes humectantes farmacéuticamente aceptables tales como laurilsulfato de sodio.

Las composiciones orales sólidas pueden prepararse mediante métodos convencionales de combinación, rellenado o preparación de comprimidos. Pueden usarse operaciones de combinación repetidas para distribuir el agente activo por todas las composiciones empleando grandes cantidades de cargas. Tales operaciones son convencionales en la técnica. Los comprimidos pueden prepararse por ejemplo mediante granulación en húmedo o en seco y recubrirse opcionalmente según métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal, en particular con un recubrimiento entérico.

Las composiciones farmacéuticas también pueden adaptarse para administración parenteral, tal como disoluciones estériles, suspensiones o productos liofilizados en la forma farmacéutica unitaria apropiada. Pueden usarse excipientes adecuados, tales como agentes de carga, agentes de tamponamiento o tensioactivos.

Las formulaciones mencionadas se prepararán usando métodos convencionales tales como los descritos o a los que se hace referencia en las farmacopeas española y estadounidense y textos de referencia similares.

Los compuestos o composiciones de la presente invención pueden administrarse mediante cualquier método adecuado, tal como infusión intravenosa, preparaciones orales y administración intraperitoneal e intravenosa. Se prefiere la administración oral debido a la comodidad para el paciente y el carácter crónico de muchas de las enfermedades que van a tratarse.

Generalmente, una cantidad administrada eficaz de un compuesto de la invención dependerá de la eficacia relativa del compuesto elegido, la gravedad del trastorno que está tratándose y el peso del paciente. Sin embargo, se administrarán normalmente compuestos activos una o más veces al día, por ejemplo 1, 2, 3 ó 4 veces al día, con dosis diarias totales típicas en el intervalo de desde 0,01 hasta 1000 mg/kg/día.

Según un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), sus sales o solvatos o estereoisómeros o tautómeros del mismo, tal como se definió anteriormente, para su uso como medicamento.

Síntesis de compuestos de fórmula (I)

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse siguiendo el esquema general mostrado a continuación:

R2 R2R2 R2

Reducción R3Glicerol R3

1. MeO2C CO2Me R3R3 CO2Me

MeOH NaI, H2SO4 NNO2 NH2NO2

H NH2 N CO2Me

N

(IX) (VIII) (VII) (VI)

R2O R2R1

R2 R1 R3

Aromatización R3 reducción R3ciclación N CO2Me N CO2Me NHN

N

N OH

(V) (IV) (III)

R2 R1 NOH

(II) (I)

Por tanto, los compuestos de la presente invención pueden prepararse mediante una combinación de reacciones conocidas en la técnica.

En una realización particular, los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse mediante un procedimiento que comprende convertir el grupo aldehído –CHO del compuesto de fórmula (II) en un grupo oxima, en presencia de hidroxilamina. La reacción tiene lugar preferiblemente en un disolvente prótico polar y en presencia de una base. Según otra realización preferida, la reacción se lleva a cabo en una mezcla de un alcohol, tal como etanol y una sal de sodio acuosa, tal como hidróxido de sodio.

En una realización particular, el compuesto de fórmula (II) puede prepararse mediante oxidación del alcohol de fórmula (III). La reacción se lleva a cabo en presencia de agentes oxidantes para oxidar alcoholes para dar aldehídos, bien conocidos por el experto en la técnica. La elección del reactivo más adecuado es una cuestión de experimentación de rutina para el experto. Sin embargo, según una realización preferida, la reacción de oxidación se lleva a cabo en presencia de cloruro de oxalilo y DMSO, seguido por tratamiento con una base, por ejemplo trietilamina.

En una realización particular, el compuesto de fórmula (III) puede prepararse mediante reducción del grupo carboxilato de un compuesto de fórmula (IV). La reacción se lleva a cabo en presencia de agentes reductores para reducir carboxilatos para dar alcoholes, bien conocidos por el experto en la técnica. La elección del reactivo más adecuado es una cuestión de experimentación de rutina para dicho experto. Sin embargo, según una realización preferida, la reducción se lleva a cabo en presencia de NaBH4.

En una realización particular, el compuesto de fórmula (IV) puede prepararse mediante aromatización de un compuesto de fórmula (V). El experto en la técnica conoce bien varios reactivos para llevar a cabo esta reacción. La elección del reactivo más adecuado es una cuestión de experimentación de rutina para el experto. Sin embargo, según una realización preferida, la aromatización se lleva a cabo mediante calentamiento en presencia de POCl3, de modo que se proporciona un compuesto de fórmula (IV) en la que R1 es cloro.

Según una realización preferida, tal compuesto puede trasformarse en un compuesto de fórmula (IV) en la que R1 es –O-R4 o –S-R5, mediante reacción con una sal de sodio del alcóxido o tiolato correspondiente de fórmula –OR4 o –SR5, respectivamente. Como alternativa, dicha transformación puede realizarse a través de un compuesto de fórmula (III), (II) o (I).

Según una realización adicional, la aromatización puede tener lugar en presencia de una base y un haluro de alquilo de fórmula R4X, en la que X es halógeno. La elección de los reactivos más adecuados es una cuestión de experimentación de rutina para el experto. Sin embargo, según una realización preferida, la base es hidruro de sodio y el haluro de alquilo es un yoduro de alquilo.

En una realización particular, el compuesto de fórmula (V) puede prepararse mediante ciclación de un compuesto de fórmula (VI), con calentamiento. En una realización adicional, el compuesto de fórmula (VI) puede prepararse mediante alquilación de una amina de fórmula (VII) en presencia de acetilendicarboxilato de metilo.

En una realización particular, el compuesto de fórmula (VII) puede prepararse mediante reducción del grupo nitro de un compuesto de fórmula (VIII). La reacción se lleva a cabo en presencia de agentes reductores para reducir grupos nitro para dar aminas, bien conocidos por el experto en la técnica. La elección del reactivo más adecuado es una cuestión de experimentación de rutina para dicho experto. Sin embargo, según una realización preferida, la reducción se lleva a cabo en presencia de cloruro de estaño dihidratado.

En una realización particular, el compuesto de fórmula (VIII) puede prepararse mediante condensación de un compuesto de fórmula (IX) con glicerol en medios ácidos.

EJEMPLOS

En los presentes ejemplos, los siguientes compuestos de fórmula (I) se están refiriendo a:

TABLA 1

Compuesto: Estructura

A: N N S O N OH O N

B: N N N OH OF

C: O N N N OH OO

D: N N S N OH

S

O

E

: N

N: N OH

F: MeO N N H O N OH

SÍNTESIS DE LOS COMPUESTOS

Se prepararon los compuestos de fórmula (I) según la presente invención siguiendo la estrategia de preparación general detallada a continuación.

5 En lo siguiente, se describen las síntesis particulares de los compuestos A a F, con estructuras tal como se detalló en la tabla 1. Los compuestos intermedios se nombran en números arábigos.

Todos los reactivos usados están comercialmente disponibles.

Ejemplo 1

Síntesis del derivado B de fenantrolina

10 Esquema de reacción:

F Glicerol

F FF

SnCl2 . 2H2O

1. MeO2C CO2Me

CO2Me NaI, H2SO4

MeOH NNO2 NH2NO2

H NH2

CO2MeN

N

2829 30

FO FOMe FOMe MeI, NaH

NaBH4 DMF

,

MeOH/CH2Cl2Ph2O N CO2Me N CO2Me NHN

N

N OH

31 32 33

F OMeF OMe1. (COCl)2, DMSO

NH2OH . HCl, NaOH ac.

2. Et3N

CH2Cl2 H EtOH, ,

N NO

N NN

OH

34 B

1. Síntesis de 6-fluoro-8-nitro-quinolina (28)

FF Glicerol

NaI, H2SO4

NO2NO2 NNH2

Se calentó glicerol (38,0 ml, 518,5 mmoles) a 140-150ºC durante 1 hora. Se añadieron 4-fluoro-2-nitrofenilamina (30,0 g, 192 mmoles) y NaI (0,9 g, 5,8 mmoles) y se enfrió la mezcla hasta 110ºC mientras que se añadía lentamente H2SO4 (23,5 ml, 441,6 mmoles) desde un embudo de adición. Se elevó la temperatura de nuevo hasta 150ºC y se agitó la reacción durante 3 horas. Se enfrió la reacción hasta temperatura ambiente y se añadieron agua y CH2Cl2. Se secó la fase orgánica (Na2SO4) y se evaporó proporcionando la nitroquinolina 28 (14,9 g, 40%) como un sólido amarillo-marrón, que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,05 (dd, 1H, J= 1,76, 4,24 Hz); 8,23 (dd, 1H, J=1,65, 8,43 Hz); 7,86 (dd, 1H, J=2. 75, 7,95 Hz); 7,70 (dd, 1H, J=2,78, 8,07 Hz); 7,58 (dd, 1H, J=4,35, 8,68 Hz).

2. Síntesis de 6-fluoro-8-amino-quinolina (29)

F F

SnCl2 . 2H2O

NH2NO2

NN

A una disolución de la nitroquinolina 28 (14,9 g, 77,9 mmoles) en etanol (100 ml) se le añadió SnCl2·2H2O (53,0 g, 233,6 mmoles). Se calentó la reacción a reflujo durante 2 horas. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se ajustó la mezcla de reacción a pH 10 mediante la adición de NaOH 1 N. Se filtraron las sales de estaño y se lavaron 4 veces con CH2Cl2. Se lavaron las fases orgánicas combinadas con agua, se secaron (Na2SO4) y se evaporaron proporcionando la aminoquinolina 29 (10,6 g, 84%) como un aceite marrón.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,68 (dd, 1H, J=1,56, 4,16 Hz); 7,99 (dd, 1H, J=1,65, 8,23 Hz); 7,37 (dd, 1H, J= 4,32, 8,23 Hz); 6,73 (dd, 1H, J= 2,6, 9,31 Hz); 6,66 (d, 1H, J= 2,61, 10,55 Hz).

3. Síntesis del éster dimetílico del ácido 2-(6-fluoro-quinolin-8-ilamina)-but-2-enadioico (30)

FF

1. MeO2C CO2Me

CO2Me

MeOH NNH2 H CO2MeN

Se añadió acetilenodicarboxilato de metilo (8,8 ml, 72,0 mmoles) sobre una disolución de la aminoquinolina 29 (10,6 g, 65,4 mmoles) en MeOH (80 ml) a 0ºC. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 18 horas y apareció un precipitado amarillo. Se filtró el sólido y se lavó con MeOH y hexano, proporcionando el producto intermedio 30 (11,3 g, 57%) que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 11,07 (a, 1H); 8,86 (dd, 1H, J= 1,6, 4,23 Hz); 8,07 (dd, 1H, J=1,60, 8,30 Hz); 7,46 (dd, 1H, J=4,23, 8,30 Hz); 7,04 (dd, 1H, J=2,50, 8,81 Hz); 6,65 (dd, 1H, J=2,48, 10,27 Hz); 5,66 (s, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,80 (s, 3H).

4. Síntesis de éster metílico del ácido 5-fluoro-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]-fenantrolina-2-carboxílico (31)

F FO

CO2Me ,

Ph2O

N

N CO2Me

H

CO2Me

N

Se añadió lentamente una disolución del derivado de quinolina 30 (6,7 g, 22,0 mmoles) en difenil éter (20 ml) (12 minutos) a difenil éter en reflujo (100 ml). Se dejó la mezcla a reflujo durante 10 minutos adicionales, y entonces se dejó alcanzar la temperatura ambiente. Se precipitó el producto mediante la adición de hexanos (300 ml). Se filtró el producto bruto y se lavó con hexanos y etil éter. Se trató el sólido obtenido con MeOH caliente hasta que se eluyó totalmente el compuesto 31 a partir de un embudo sinterizado. Tras la evaporación del disolvente, se lavó el sólido marrón obtenido con etil éter proporcionando el producto deseado 31 (2,4 g, 40%) como un sólido marrón.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,89 (dd, 1H, J=1,43, 4,29 Hz); 8,16 (dd, 1H, J= 1,53, 8,28 Hz); 7,65 (dd, 1H, J= 4,31, 8,28 Hz); 7,24 (d, 1H, J=14,97 Hz); 7,16 (s, 1H); 4,99 (s, 3H).

5. Síntesis de éster metílico del ácido 5-fluoro-4-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico (32)

FO FOMe

MeI, NaH

DMF

N CO2Me N CO2Me HN N

A una disolución de la fenantrolona 31 (500 mg, 1,83 mmoles) y NaH (60% en aceite mineral, 5,50 mmoles, 220 mg) en DMF (20 ml), se le añadió yoduro de metilo (0,45 ml, 7,32 mmoles). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 18 horas. Se eliminó el disolvente a presión reducida y se distribuyó el producto bruto en agua y CH2Cl2. Se secó la fase orgánica (Na2SO4) y se evaporó a presión reducida. Se lavó el sólido obtenido con éter para aislar la fenantrolina 32 (286 mg, 54%), que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,23 (dd, 1H, J=1,19, 4,18 Hz); 8,09 (dd, 1H, J= 1,63, 8,11 Hz); 7,94 (s, 1H); 7,67 (dd, 1H, J= 4,37, 8,08 Hz); 7,47 (d, 1H, J=12,23 Hz); 4,17 (s, 3H); 4,10 (s, 3H).

6. Síntesis de 5-fluoro-4-metoxi-[1,10]-fenantrolin-2-il]-metanol (33)

F OMe F OMe NaBH4

MeOH/CH2Cl2

N CO2Me

N N

N OH

A una disolución del éster 32 (445 mg, 1,56 mmoles) en una mezcla de MeOH/CH2Cl2 (1:5, 40 ml) a 0ºC, se le añadió lentamente NaBH4 sólido (72 mg, 1,87 mmoles). Se dejó que la reacción alcanzara la temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Se vertió la mezcla de reacción en agua, y se extrajo 3 veces con CH2Cl2. Se secaron las fases orgánicas combinadas (Na2SO4) y se evaporó proporcionando el alcohol 33 (346 mg, 77%) como un sólido marrón, que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,13 (dd, 1H); 8,23 (dd, 1H, J= 1,58, 8,14 Hz); 7,67 (dd, 1H, J=4,34, 7,73 Hz); 7,38 (d, 1H, J=12,3 Hz); 7,23 (s, 1H); 5,14 (s, 2H); 4,14 (s, 3H).

7. Síntesis de 5-fluoro-4-metoxi-[1,10]-fenantrolin-2-carbaldehído (34)

F OMe F OMe

1. (COCl)2, DMSO 2. Et3N

HCH2Cl2

N N OH

N NO

A una disolución 2,0 M de cloruro de oxalilo en CH2Cl2 seco (1,34 ml, 2,68 mmoles), se le añadió lentamente una disolución de dimetilsulfóxido en CH2Cl2 seco (0,38 ml, 5,36 mmoles) bajo nitrógeno a -78ºC. Se agitó la mezcla durante 35 minutos y se añadió una disolución de 5-fluoro-4-metoxi-[1,10]-fenantrolin-2-il]-metanol 33 (346 mg, 1,34 mmoles) en CH2Cl2 anhidro (10 ml). Tras agitar durante 2 horas a -78ºC, se añadió trietilamina (1,11 ml, 8,04 mmoles) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Se lavó la mezcla de reacción con agua, salmuera, se secó (Na2SO4) y se evaporó obteniendo el aldehído deseado 34 (320 mg, 93%) como un sólido rojo-marrón.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,48 (s, 1H); 9,23 (dd, 1H, J=1,99, 4,73 Hz); 8,23 (dd, 1H, J=1,70, 8,10 Hz); 7,75 (s, 1H); 7,70 (dd, 1H, J= 4,30, 8,15 Hz); 7,52 (d, 1H, J=12,26 Hz); 4,19 (s, 3H).

8. Síntesis de oxima de 5-fluoro-4-metoxi-[1,10]-fenantrolina-2-carbaldehído (B)

F OMe F OMe

NH2OH . HCl, NaOH ac.

H

EtOH, ,

NN NNNO

OH

A una disolución del derivado de aldehído 34 (320 mg, 1,25 mmoles) en etanol (50 ml), se le añadió una disolución de clorhidrato de hidroxilamina (434 mg, 6,25 mmoles) en agua (40 ml) y se calentó la mezcla a 35ºC. Se

5 añadió una disolución de NaOH al 10% hasta pH 6, se agitó a 35ºC durante 1 hora y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió agua y se filtró el precipitado, se lavó con agua y se secó dando la aldoxima B (152 mg, 45%) como un sólido blanco.

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6, ppm): 12,01 (s, 1H); 9,06 (dd, 1H, J=1,72, 4,25 Hz); 8,42 (dd, 1H, J=1,69, 8,14 Hz); 8,33 (s, 1H); 7,78 (dd, 1H, J= 4,27, 8,16 Hz); 7,74 (d, 1H, J=13,09 Hz); 7,66 (s, 1H); 3,32 (s, 3H).

10 Ejemplo 2

Síntesis del derivado de fenantrolina C

OO

O

OH

O

OK2CO3,

Glicerol

Br SnCl2 . 2H2O

MeO2C CO2Me DMF

NaI, H2SO4 EtOH MeOH NO2

NH2 NH2 NH2

NO2 NO2 N

N

35 36

OO

O

O OO

O OMe

NaBH4

MeI, NaH

CO2Me , N CO2Me DMFPh2O N CO2Me MeOH/CH2Cl2N HH NN CO2Me N

3839 40

O

O OMe

1. (COCl)2, DMSO 2. Et3N

NH2OH . HCl, NaOH ac. H

CH2Cl2

N N OH

N N EtOH NNNO

OH

4142 C

1. Síntesis de 4-(2-metoxi-etoxi)-2-nitro-fenilamina (35)

O

OH

O

K2CO3, O

Br

DMF

NO2

NO2 NH2 NH2

15 A una disolución de 4-amina-3-nitrofenol (30,0 g, 195 mmoles) y K2CO3 (53,8 g, 390 mmoles) en DMF, se le añadió 1-bromo-2-metoxi-etano (20,0 ml, 214 mmoles). Se calentó la reacción hasta 50ºC durante 4 horas. Se eliminó el disolvente a presión reducida y se distribuyó el residuo en agua y CH2Cl2. Se secó la fase orgánica (Na2SO4) y se evaporó obteniendo el producto puro deseado 35 (33,8 g, 81%) como un sólido naranja.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 7,99 (s, NH2); 7,52 (d, 1H, J=2,92 Hz); 7,09 (dd, 1H, J= 6,12, 9,08 Hz); 6,76 20 (d, 1H, J= 9,15 Hz); 4,06 (m, 2H); 3,71 (m, 2H); 3,42(s, 3H).

2. Síntesis de 6-(2-metoxi-etoxi)-8-nitro-quinolina (36)

O

O Glicerol

NaI, H2SO4 NO2

NO2 NH2 N

Se calentó glicerol (31,5 ml, 431,0 mmoles) a 140-150ºC durante 1 hora y se añadieron 4-(2-metoxi-etoxi)-2nitro-fenilamina 35 (33,38 g, 159,6 mmoles) y NaI (0,48 g, 3,2 mmoles). Se enfrió la mezcla de reacción hasta 110ºC y se añadió H2SO4 (19,6 ml, 367,0 mmoles) gota a gota desde un embudo de adición. Se calentó la reacción hasta 150ºC durante 3 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se transfirió a un embudo de decantación con agua y CH2Cl2. Se secó la fase orgánica (Na2SO4) y se evaporó. Se purificó el residuo obtenido mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, acetato de etilo/hexano 1:1) proporcionando la quinolina pura 36 (2,21 g. 6%) como un aceite marrón.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,87 (dd, 1H, J= 1,62, 4,26 Hz); 8,10 (dd, 1H, J=1,63, 8,4 Hz); 7,73 (d, 1H, J=2,71 Hz); 7,45 (dd, 1H, J=4,24, 8,4 Hz); 7,29 (d, 1H, J= 2,72 Hz); 4,27 (m, 2H); 3,81 (m, 2H); 3,46 (s, 3H).

3. Síntesis de 6-(2-metoxi-etoxi)-8-amino-quinolina (37)

OO

SnCl2 . 2H2O EtOH

NH2NO2

NN

A una disolución de nitroquinolina 36 (2,21 g, 8,9 mmoles) en etanol (20 ml) se le añadió SnCl2·2H2O (6,00 g, 26,8 mmoles). Se sometió a reflujo la reacción durante 2 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se ajustó hasta pH 10 mediante la adición de NaOH 1 N. Se separaron por filtración las sales de estaño y se aclararon con CH2Cl2. Se lavaron las fases orgánicas combinadas con agua, se secaron (Na2SO4) y se evaporaron proporcionando la aminoquinolina 37 (1,50 g, 78%) como un aceite marrón, que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,58 (dd, 1H, J=2,58, 4,22 Hz); 7,93 (dd, 1H, J=1,6, 8,3 Hz); 7,31(dd, 1H, J= 4,21, 8,28 Hz); 6,63 (d, 1H, J= 2,55 Hz); 6,47 (d, 1H, J= 2,57 Hz); 4,19 (m, 2H); 3,79 (m, 2H); 3,47 (s, 3H).

4. Síntesis de éster dimetílico del ácido 2-[6-(2-metoxi-etoxi)quinolin-8-ilamina)-but-2-enadioico (38)

O

MeO2C CO2Me

CO2Me

MeOH NH2 N

HN CO2Me

Se añadió acetilenodicarboxilato de metilo (0,94 ml, 7,7 mmoles) sobre una disolución de la aminoquinolina 37 (1,52 g, 7,0 mmoles) en MeOH (40 ml) a 0ºC. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 18 horas y apareció un precipitado amarillo. Se filtró el sólido y se lavó con MeOH y hexano, proporcionando el producto intermedio 38 (1,41 g, 51%), que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,91 (a, 1H); 8,75 (dd, 1H, J= 1,60, 4,16 Hz); 7,99 (dd, 1H, J= 1,60, 8,29 Hz); 7,38 (dd, 1H, J= 4,25, 8,27 Hz); 6,74 (d, 1H, J=2,45 Hz); 6,64 (d, 1H, J= 2,47 Hz); 5,58 (s, 1H); 4,20 (m, 2H); 3,79 (m, 8H), 3,46 (s, 3H).

5. Síntesis de éster metílico del ácido 5-(2-metoxi-etoxi)-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]-fenantrolina-2-carboxílico

(39)

O

OO

O

CO2Me ,

N CO2Me H

Ph2O

N HNN CO2Me

Se añadió lentamente (12 minutos) una disolución de derivado de quinolina 38 (1,41 g, 3,6 mmoles) en difenil éter (10 ml) a difenil éter en reflujo (60 ml). Se dejó la mezcla de reacción a reflujo durante 10 minutos adicionales y entonces se dejó alcanzar la temperatura ambiente. Se precipitó el producto mediante la adición de hexano. Se filtró el residuo y se lavó con hexano y etil éter. Se trató el sólido obtenido con MeOH caliente hasta que se eluyó totalmente el compuesto 39 a partir de un embudo sinterizado. Tras la evaporación del disolvente, se lavó el sólido marrón obtenido con etil éter proporcionando el producto deseado 39 (0,70 g, 60%) como un sólido marrón oscuro.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,79 (dd, 1H); 8,06 (dd, 1H, J= 1,54, 8,24 Hz); 7,55 (dd, 1H, J= 4,31, 8,23 Hz); 7,24 (d, 1H, J=14,96 Hz); 6,86 (s, 1H); 4,33 (m, 2H); 4,06 (s, 3H); 3,96 (m, 2H); 3,56 (s, 3H).

6. Síntesis de éster metílico del ácido 4-metoxi-5-(2-metoxi-etoxi)-[1,10]-fenantrolina-2-carboxílico (40)

O

OO

O OMe

MeI, NaH

N CO2Me DMF

CO2MeHN N

A una disolución de la fenantrolona 39 (703 mg, 2,15 mmoles) y NaH (60% en aceite mineral, 258 mg, 6,45 mmoles) en DMF (20 ml), se le añadió yoduro de metilo (0,45 ml, 7,32 mmoles). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 18 horas. Se eliminó el disolvente a presión reducida y se distribuyó el producto bruto en agua y CH2Cl2. Se secó la fase orgánica (Na2SO4) y se evaporó a presión reducida. Se lavó el sólido obtenido con éter para aislar la fenantrolina 40 (272 mg, 37%) como un aceite marrón, que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,07 (dd, 1H); 8,09 (dd, 1H, J= 1,44, 8,08 Hz); 7,87 (s, 1H); 7,57 (dd, 1H, J= 4,37, 8,08 Hz); 7,06 (s, 1H); 4,34 (m, 2H); 4,13 (s, 3H); 4,09 (s, 3H); 3,96 (m, 2H); 3,55 (s, 3H).

7. Síntesis de [4-metoxi-5-(2-metoxi-etoxi)-[1,10]-fenantrolin-2-il]-metanol (41)

OO

O OMe

NaBH4

N CO2Me MeOH/CH2Cl2

N N

N OH

A una disolución del éster 40 (272 mg, 0,79 mmoles) en una mezcla de MeOH/CH2Cl2 (1:5, 40 ml) a 0ºC, se le añadió lentamente NaBH4 sólido (36 mg, 0,95 mmoles). Se dejó que la reacción alcanzara la temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Se vertió la mezcla de reacción en agua y se extrajo 3 veces con CH2Cl2. Se secaron las fases orgánicas combinadas (Na2SO4) y se evaporaron proporcionando el alcohol 41 (210 mg, 84%) como un aceite marrón, que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,97 (dd, 1H); 8,08 (dd, 1H); 7,87 (s, 1H); 7,53 (dd, 1H); 7,16 (s, 1H); 6,96 (s, 1H); 5,10 (s, 2H); 4,34 (m, 2H); 4,06 (s, 3H); 3,96 (m, 2H); 3,56 (s, 3H).

8. Síntesis de 4-metoxi-5-(2-metoxi-etoxi)-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (42)

O

O OMe

1. (COCl)2, DMSO 2. Et3N

H

CH2Cl2

N

N N OH

NO

A una disolución 2,0 M de cloruro de oxalilo en CH2Cl2 seco (0,67 ml, 1,34 mmoles), se le añadió lentamente una disolución de dimetilsulfóxido en CH2Cl2 seco (0,19 ml, 2,68 mmoles) bajo nitrógeno a -78ºC. Se agitó la mezcla

5 durante 35 minutos y se añadió una disolución de [4-metoxi-5-(2-metoxietoxi)[1,10]-fenantrolin-2-il]metanol 41 (210 mg, 0,67 mmoles) en CH2Cl2 anhidro (10 ml). Tras agitar durante 2 horas a -78ºC, se añadió trietilamina (0,56 ml, 4,02 mmoles) y se agitó la mezcla bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. Se lavó la mezcla de reacción con agua, salmuera, se secó (Na2SO4) y se evaporó obteniendo el aldehído deseado 42 (198 mg, 97%) como un sólido marrón, que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

10 1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,45 (s, 1H); 9,08 (dd, 1H, J=1,46, 4,27 Hz); 8,09 (dd, 1H, J=1,34, 8,12 Hz); 7,67 (s, 1H); 7,58 (dd, 1H, J= 4,32, 8,04 Hz); 7,08 (s, 1H); 4,32 (m, 2H); 4,11 (s, 3H); 3,91 (m, 2H); 3,53 (s, 3H).

9. Síntesis de oxima de 4-metoxi-5-(2-metoxi-etoxi)-[1,10]-fenantrolina-2-carbaldehído (C)

OO

O OMe

NH2OH . HCl, NaOH ac. H

NN

EtOH

NNNO

OH

A una disolución del derivado de aldehído 42 (198 mg, 0,65 mmoles) en etanol (40 ml), se le añadió una

15 disolución de clorhidrato de hidroxilamina (225 mg, 3,25 mmoles) en agua (40 ml). Se añadió una disolución de NaOH al 10% hasta pH 6, y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió agua y se extrajo la reacción con CH2Cl2. Se secó la fase orgánica (Na2SO4) y se evaporó a presión reducida proporcionando la aldoxima deseada C (69 mg, 32%) como un sólido blanco.

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6, ppm): 11,95 (s, 1H); 8,90 (dd, 1H, J=1,72, 4,22 Hz); 8,30 (s, 1H); 8,27 (dd, 1H, 20 J=1,72, 8,21 Hz); 7,67 (dd, 1H, J= 4,27, 8,11 Hz); 7,58 (s, 1H); 7,30 (s, 1H); 4,29 (m, 2H); 4,03 (s, 3H); 3,84 (m, 2H); 3,43 (s, 3H).

Ejemplo 3 Síntesis del derivado de fenantrolina E

Cl MeO MeO Cl

SnCl2 · 2H2O NO2 NaI, H2SO4 NaOMe, MeOH Glicerol MW , 100ºC NO2 EtOH NH2

NO2

N NNH2 N

43 44

O

MeO MeO CO2Me

,

MeO2C CO2Me

,

N

N CO2Me POCl3Ph2OMeOH

H

N CO2Me

N

46 47

Cl SMe Cl

MeO

MeO MeO NaSMe NaBH4

N NMeOH N CO2Me MeOH, CH2Cl2 N OH N OHN

48 4950

SMe SMe

MeO

1.: (COCl)2, DMSO MeO

2.: Et3N

NH2OH . HCl, NaOH ac.

H

NNCH2Cl2 EtOH, , NNNO

OH

51 E

1. Síntesis de 5-cloro-8-nitro-quinolina (43)

Cl

Glicerol

NaI, H2SO4

NO2

NO2 NH2

N

A glicerol (11,4 ml, 156,5 mmoles) precalentado hasta 160ºC durante 1 hora y enfriado hasta 110ºC, se le añadieron 5-cloro-2-nitroanilina (10,00 g, 58,0 mmoles) y yoduro de sodio (0,17 g, 1,2 mmoles). Se agitó enérgicamente la mezcla a 110ºC consiguiendo un alquitrán homogéneo. Se calentó la mezcla de reacción de nuevo hasta 150ºC y se

10 añadió gota a gota ácido sulfúrico al 95-98% (7,1 ml, 133,3 mmoles). Tras 45 minutos de agitación a 150ºC, se dejó que la reacción alcanzara la temperatura ambiente y se distribuyó en CH2Cl2 y H2SO4 al 50%. Se secó la fase orgánica (Na2SO4) y se evaporó hasta sequedad. Se lavó el residuo con MeOH/hexano (1:5), proporcionando el producto 43 deseado (7,33 g, 61%) como un sólido naranja.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,12 (H-2, dd, 1H, J=1,6 y 4,2 Hz), 8,67 (H-4, dd, 1H, J=1,6 y 8,6 Hz), 7,99 15 (H-7, d, 1H, J=8,1 Hz), 7,71 (H-6, d, 1H, J=8,1 Hz), 7,68 (H-3, dd, 1H, J=4,2 y 8,6 Hz).

2. Síntesis de 5-metoxi-8-nitro-quinolina (44)

Cl MeO

NaOMe, MeOH

MW , 100ºC

NO2NO2 NN

Se calentó una mezcla de metóxido de sodio (7,3 g, 135,7 mmoles) y 5-cloro-8-nitroquinolina 43 (6,7 g, 32,2 mmoles), en MeOH anhidro (80 ml), en un horno microondas (potencia: 250 W, tiempo de rampa: 5 minutos) a 100ºC durante 10 minutos. Se evaporó parcialmente el disolvente y se añadieron CH2Cl2 y agua. Se recogió la fase orgánica y se lavó con agua y salmuera, se secó (Na2SO4) y se evaporó. Se trató el residuo con MeOH/hexano (3:50) proporcionando 5-metoxi-8-nitroquinolina 44 (5,8 g, 83%) como un sólido marrón.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,08 (H-2, dd, 1H, J=1,8 y 4,2 Hz), 8,63 (H-4, dd, 1H, J=1,8 y 8,6 Hz), 8,19 (H-7, d, 1H, J=8,6 Hz), 7,51 (H-3, dd, 1H, J=4,2 y 8,6 Hz), 6,84 (H-6, d, 1H, J=8,6 Hz), 4,09 (OCH3, s, 3H).

3. Síntesis de 5-metoxi-quinolin-8-ilamina (45)

MeO MeO

SnCl2·2H2O

NO2 EtOH

NH2 N

N

Se calentó a reflujo una suspensión de 5-metoxi-8-nitroquinolina 44 (5,8 g, 28,5 mmoles) y SnCl2.2H2O (19,3 g, 85,6 mmoles) en etanol (120 ml) durante 1 hora. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo y se trató con NaOH al 10% hasta pH 11. Se separó la fase orgánica, se lavó con salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, acetato de etilo/hexano, 0-40%) obteniendo la amina final 45 (2,7 g, 53%) como un sólido marrón.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,79 (H-2, dd, 1H, J=1,7 y 4,2 Hz), 8,51 (H-4, dd, 1H, J=1,7 y 8,5 Hz), 7,38 (H-3, dd, 1H, J=4,2 y 8,5 Hz), 6,89 (H-7, d, 1H, J=8,2 Hz), 6,73 (H-6, d, 1H, J=8,2 Hz), 3,95 (OCH3, s, 3H).

4. Síntesis de éster dimetílico del ácido 2-(5-metoxiquinolin-8-ilamino)-but-2-enodioico (46)

MeO MeO2C CO2Me MeO

CO2Me MeOH NH2

N

HN N CO2Me

A una disolución de 5-metoxiquinolin-8-ilamina 45 (2,7 g, 15,3 mmoles) en metanol (20 ml) a 4ºC, se le añadió acetilenodicarboxilato de dimetilo (2,1 ml, 16,8 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción y se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 3 horas. Se evaporó el disolvente y se lavó el residuo con MeOH y hexano, proporcionando un sólido naranja que se secó a vacío (3,8 g, 79%).

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,63 (NH, s, 1H), 8,90 (H-2, dd, 1H, J=1,7 y 4,2 Hz), 8,53 (H-4, dd, 1H, J=1,7 y 8,4 Hz), 7,41 (H-3, dd, 1H, J=4,2 y 8,4 Hz), 6,95 (H-7, d, 1H, J=8,3 Hz), 6,73 (H-6, d, 1H, J=8,3Hz), 5,44 (s, 1H, CH=), 3,96 (OCH3, s, 3H), 3,77 (CO2CH3, s, 3H), 3,69 (CO2CH3, s, 3H).

5. Síntesis de éster metílico del ácido 6-metoxi-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico (47)

O MeO MeO

CO2Me

,

N N CO2Me

Ph2O

H HN CO2Me N

Se sometió a reflujo una disolución de éster dimetílico del ácido 2-(5-metoxiquinolin-8-ilamino)-but-2-enodioico 46 (3,8 g, 12,1 mmoles) en difenil éter (25 ml) a 250ºC durante 15 minutos. Se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y entonces se añadió hexano proporcionando un sólido marrón (3,0 g, 88%), que se filtró y se secó a vacío.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,92 (NH, s, 1H), 8,97 (H-9, dd, 1H, J=1,6 y 4,3 Hz), 8,66 (H-7, dd, 1H, J=1,6 y 8,5 Hz), 7,66 (H-8, dd, 1H, J=4,3 y 8,5 Hz), 7,59 (H-3, s, 1H), 7,26 (H-5, s, 1H), 4,11 (OCH3, s, 3H), 4,08 (OCH3, s, 3H).

6. Síntesis de éster metílico del ácido 4-cloro-6-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico (48)

O Cl

MeO

, MeO

POCl3

N CO2Me N CO2MeHN N

A éster metílico del ácido 6-metoxi-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico 47 sólido (2,01 g, 7,07 mmoles), se le añadió lentamente POCl3 (18 ml) y se calentó la mezcla a reflujo durante 2 horas. Se enfrió la reacción

5 hasta temperatura ambiente y se evaporó el disolvente. Se trató el sólido obtenido con CH2Cl2 y NaHCO3 saturado y se transfirió a un embudo de decantación. Se extrajo adicionalmente la fase acuosa con CH2Cl2 y se lavaron las fases orgánicas combinadas con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se evaporaron. Se trató el residuo obtenido con etil éter, se filtró y se secó proporcionando el derivado de cloro 48 como un sólido marrón claro (2,02 g, 95%).

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,89 (d, 1H, J=5,0 Hz), 9,19 (d, 1H, J=8,3 Hz), 8,54 (s, 1H), 8,16 (dd, 1H, 10 J=5,0 y 8,3Hz), 7,55 (s, 1H), 4,27 (s, 3H), 4,15 (s, 3H).

7. Síntesis de (4-cloro-6-metoxi-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol (49)

Cl

Cl MeO

MeO NaBH4

N N CO2Me MeOH, CH2Cl2 N OHN

A una disolución de éster metílico del ácido 4-cloro-6-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico 48 (2,02 g, 6,63 mmoles) en una mezcla de MeOH/CH2Cl2 (1:5, 300 ml) enfriada a 0ºC, se le añadió NaBH4 sólido (0,71 g, 19,80

15 mmoles). Se agitó la mezcla a 0ºC durante 3 horas y a temperatura ambiente durante 18 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con agua y se separó la fase orgánica. Se extrajo la fase acuosa dos veces con CH2Cl2, y se secaron las fases orgánicas combinadas (Na2SO4), se evaporaron y se lavó el residuo con etil éter proporcionando el alcohol 49 (1,72 g, 94%) como un sólido marrón claro.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,17 (d, 1H, J=2,6 Hz), 8,70 (dd, 1H, J=1,7Hz y 8,2 Hz), 7,78 (s, 1H), 7,66 20 (dd, 1H, J=4,4 y 8,2 Hz), 7,36 (s, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,16 (s, 3H).

8. Síntesis de (6-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol (50)

Cl SMe MeO

MeO NaSMe

N N

MeOH

N OH N OH

Se añadió tiometilato de sodio sólido (2,18 g, 31,0 mmoles) a una disolución de 4-cloro-6-metoxi[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol 49 (1,72 g, 6,21 mmoles) en MeOH (300 ml) y se calentó la mezcla de reacción a reflujo

25 durante 3 horas. Se eliminó el disolvente en un evaporador rotatorio y se distribuyó el residuo en CH2Cl2 y NaHCO3 saturado. Se lavó la fase orgánica con salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró a vacío. Se trató el residuo sólido con etil éter, se filtró y se secó obteniendo el material deseado 50 (0,74 g, 42%) como un sólido marrón claro.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,04 (s, 1H), 8,62 (d, 1H, J=6,8 Hz), 7,56 (s, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,04 (s, 2H), 4,11 (s, 3H), 2,63 (s, 3H).

30 9. Síntesis de 6-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (51)

SMe SMe

1. (COCl)2, DMSO

MeO MeO

2. Et3N HN

N N OH

CH2Cl2 NO

A una disolución 2,0 M de cloruro de oxalilo en CH2Cl2 seco (2,56 ml, 5,12 mmoles) a -78ºC se le añadió lentamente una disolución de dimetilsulfóxido (0,73 ml, 10,24 mmoles) en CH2Cl2 seco (15 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla durante 30 minutos y se añadió una disolución de (6-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol 50 (738 mg, 2,58 mmoles) en CH2Cl2 seco (20 ml). Tras agitar a -78ºC durante 50 minutos, se añadió trietilamina (2,13 ml, 15,4 mmoles) y se dejó que la mezcla alcanzara la temperatura ambiente y se agitó bajo nitrógeno durante 18 horas. Se lavó la mezcla de reacción con agua, salmuera, se secó (Na2SO4) y se evaporó obteniendo el aldehído 51 (285 mg, 39%) como un sólido marrón.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,46 (s, 1H), 9,31 (dd, 1H, J=1,5 y 4,3 Hz), 8,75 (d, 1H, J=7,4 Hz), 8,01 (s, 1H), 7,74 (dd, 1H, J=4,3 y 8,2 Hz), 7,26 (s, 1H), 4,19 (s, 3H), 2,75 (s, 3H).

10. Síntesis de oxima de 6-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (E)

SMe SMe MeO

MeO NH2OH.HCl, NaOH ac.

HH EtOH, , NNNO OH

A una disolución de 6-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído 51 (285 mg, 1,10 mmoles) en etanol (15 ml), se le añadió una disolución de clorhidrato de hidroxilamina (690 mg, 10,20 mmoles) en agua (20 ml) y se calentó la mezcla a 60ºC. Se añadió NaOH al 10% hasta pH 6 y se agitó la mezcla de reacción a 60ºC durante 30 minutos y se enfrió hasta 0ºC. Se filtró el precipitado resultante y se lavó sucesivamente con agua y etil éter, dando la aldoxima E (120 mg, 40%) como un sólido amarillo claro.

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6, ppm): 11,81 (s, 1H), 9,14 (dd, 1H, J=1,6 y 4,2 Hz), 8,64 (dd, 1H, J=1,7 y 8,3 Hz), 8,30 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,80 (dd, 1H, J=4,3 y 8,3Hz), 7,19 (s, 1H), 4,11 (s, 3H), 2,71 (s, 3H).

13C-RMN (400MHz, DMSO-d6, ppm): 153,59, 151,59, 149,92, 149,91, 149,67, 147,33, 146,41, 141,034, 131,21, 126,73, 124,10, 123,43, 97,42, 56,79, 14,27.

EM (ES+): m/z = 302 (M+H)+

Ejemplo 4

Síntesis del derivado de fenantrolina F

O O O

1. (COCl)2, DMSO MeO

MeO MeO NaBH4 2. Et3N

H

CH2Cl2N CO2Me MeOH, CH2Cl2

N

N H

H

N OH

NON

47 5253

O

MeO

NH2OH.HCl, NaOH ac.

N EtOH, ,

H

NN

OH

F

1. Síntesis de 2-hidroximetil-6-metoxi-1H-[1,10]fenantrolin-4-ona (52)

O

O MeOMeO

NaBH4

N CO2Me MeOH, CH2Cl2 N

HH N OHN

Se añadió NaBH4 sólido (1,20 g, 32,0 mmoles) en porciones en una disolución de éster metílico del ácido 6metoxi-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico 47 (0,40 g, 1,4 mmoles) en una mezcla de MeOH/CH2Cl2 (1:1, 10 ml) enfriada a 0ºC. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 3 horas y entonces se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 24 horas adicionales. Tras la dilución en MeOH/CH2Cl2 (1:3), se lavó la mezcla con agua y se separó la fase orgánica y se evaporó hasta sequedad. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, NH3OH 7 N en MeOH/CH2Cl2, 0-50%), proporcionando el alcohol deseado 52 como un sólido marrón (0,25 g, 68%).

1H-RMN (400 MHz, MeOD/CDCl3, 1/1, ppm): 8,84 (H-9, dd, 1H, J=1,3 y 4,3 Hz), 8,43 (H-7, dd, 1H, J=1,3 y 8,5 Hz), 7,55 (H-8, dd, 1H, J=4,3 y 8,5 Hz), 7,28 (H-3, s, 1H), 6,32 (H-5, s, 1H), 4,77 (OCH2, s, 2H), 3,98 (OCH3, s, 3H).

2. Síntesis de 6-metoxi-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (53)

O O

1. (COCl)2, DMSO

MeO MeO 2. Et3N

H

CH2Cl2

N NH HN OH NO

A una disolución de 2,0 M de cloruro de oxalilo en CH2Cl2 anhidro (270 Il, 0,54 mmoles) a -78ºC, se le

10 añadió una disolución de DMSO anhidro (77 Il, 1,08 mmoles) en CH2Cl2 seco (1 ml) bajo nitrógeno y se agitó durante 20 minutos. Entonces, se añadió una disolución de 2-hidroximetil-6-metoxi-1H-[1,10]fenantrolin-4-ona 52 (68,5 mg, 0,27 mmoles) en una mezcla de DMSO anhidro/CH2Cl2 (1:4, 2,5 ml) a la mezcla de reacción, y se mantuvo la agitación a

78ºC durante 50 minutos adicionales. Finalmente, se añadió trietilamina (225 Il, 1,6 mmoles) a -78ºC, y se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente durante 3 horas. Se diluyó la disolución final con CH2Cl2 y

15 se lavó con agua. Se separó la fase orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, MeOH/CH2Cl2, 0-50%), proporcionando una mezcla que contenía el aldehído 53 que se usó en la próxima etapa sin purificación adicional.

3. Síntesis de oxima de 6-metoxi-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (F)

OO MeO

MeO

NH2OH . HCl, NaOH ac.

H

N H

EtOH, ,

NNNO

OH

20 Se añadió una disolución de clorhidrato de hidroxilamina (230 mg, 3,3 mmoles) en agua (1 ml) a una disolución de 6-metoxi-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (mezcla obtenida en la etapa anterior) disuelta en etanol/CH2Cl2 (3:1, 2 ml), y se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con CH2Cl2 y agua, y se separó la fase orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, NH3OH 7 N en MeOH/CH2Cl2, 0-50%) proporcionando un sólido impuro que se

25 redisolvió en MeOH/CHCl3 y se precipitó con etil éter proporcionando la aldoxima pura F (6,2 mg, 4%).

1H-RMN (400 MHz, MeOD/CDCl3, 1/1, ppm): 9,02 (H-9, d, 1H, J= 4,0 Hz), 8,72 (H-7, d, 1H, J= 8,0 Hz), 8,19 (H5, s, 1H), 7,77 (H-8, m, 1H), 7,52 (H-3, s, 1H), 6,68 (CH=, s, 1H), 4,12 (OCH3, s, 3H).

EM (ES+): m/z = 270.

Ejemplo 5 Síntesis del derivado de fenantrolina D

EtOH

NaI, H2SO4

MeOH

NO2

NH2

NO2

NH2

SnCl2 · 2H2O

MeO2C CO2Me

Glicerol

54 55

O Cl

,

POCl3

CO2Me Ph2O

CH3CNN

N CO2Me

N CO2MeH HCO2Me N N

5657 58

Cl

S

1. (COCl)2, DMSO

2. Et3N

NaSCH3

NaBH4

CH2Cl2

DMF / 70ºC

N

MeOH, CH2Cl2

N OH

59 60

S

NH2OH . HCl, NaOH ac.

H

N

EtOH, ,

NN

NO

OH

61 D

1. Síntesis de 6-metil-8-nitroquinolina (54)

A glicerol (6,5 ml, 89,0 mmoles) precalentado hasta 160ºC durante 1 hora, y enfriado hasta 110ºC, se le añadieron 4-metil-2-nitroanilina (5,00 g, 33,0 mmoles) y yoduro de sodio (0,10 g, 0,7 mmoles). Se agitó enérgicamente la mezcla, se calentó hasta 150ºC y se añadió gota a gota ácido sulfúrico al 95-98% (4,2 ml, 78,0 mmoles). Tras 45

10 minutos a 150ºC, se dejó que la mezcla alcanzara la temperatura ambiente y entonces se distribuyó en CH2Cl2 y agua. Se secó la fase orgánica (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se lavó el residuo con MeOH/hexano (1:10), proporcionando la nitroquinolina 54 (4,07 g, 65%) como un sólido naranja que se secó a vacío.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,00 (H-2, dd, 1H, J=1,3 y 4,2 Hz), 8,16 (H-4, dd, 1H, J=1,3 y 8,3Hz), 7,89 (H7, s, 1H), 7,80 (H-5, s, 1H), 7,50 (H-3, dd, 1H, J=4,2 y 8,3 Hz), 2,61 (CH3, s, 3H).

2. Síntesis de 6-metil-quinolin-8-ilamina (55)

SnCl2·2H2O EtOH

NO2

NH2

N

Se calentó a reflujo una suspensión de 6-metil-8-nitroquinolina (15,0 g, 80,0 mmoles) y SnCl2·2H2O (54,0 g, 240,0 mmoles) en etanol (300 ml) durante 1 hora. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo y se trató con KOH al 10% hasta pH 11. Se separó la fase orgánica, se lavó con salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, acetato de etilo/hexano, 0-30%). Se aisló la amina 55 (9,9 g, 79%) como un sólido amarillo.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,69 (H-2, dd, 1H, J=1,6 y 4,1 Hz), 7,96 (H-4, dd, 1H, J=1,6 y 8,3 Hz), 7,33 (H-3, dd, 1H, J=4,1 y 8,3 Hz), 6,94 (H-5, s, 1H), 6,79 (H-7, s, 1H), 4,91 (NH2, sa, 2H), 2,43 (CH3, s, 3H).

3. Síntesis de éster dimetílico del ácido 2-(6-metil-quinolin-8-ilamino)-but-2-enodioico (56)

MeO2C CO2Me CO2Me MeOH NH2

N

H

N CO2MeN

A una disolución de 6-metil-quinolin-8-ilamina 55 (4,8 g, 30,2 mmoles) en MeOH (15 ml) a 4ºC se le añadió acetilenodicarboxilato de dimetilo (4,5 ml, 36,5 mmoles). Se agitó la mezcla de reacción y se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtró el precipitado y se lavó meticulosamente con MeOH y hexano proporcionando el compuesto deseado 56 como un sólido amarillo (8,6 g, 95%).

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,89 (NH, s, 1H), 8,83 (H-2, dd, 1H, J=1,7 y 4,2 Hz), 8,02 (H-4, dd, 1H, J=1,7 y 8,3 Hz), 7,38 (H-3, dd, 1H, J=4,2 y 8,3 Hz), 7,23 (H-5, s, 1H), 6,79 (H-7, s, 1H), 5,54 (CH=, s, 1H), 3,80 (CO2CH3, s, 3H), 3,74 (CO2CH3, s, 3H), 2,46 (CH3, s, 3H).

4. Síntesis de éster metílico del ácido 5-metil-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico (57)

O

,

CO2Me

Ph2O

N N CO2MeH HN CO2Me N

Se distribuyó una disolución de éster dimetílico del ácido 2-(6-metilquinolin-8-ilamino)-but-2-enodioico (8,6 g, 28,6 mmoles) en difenil éter (50 ml) en diez reactores y se calentó cada uno en un horno microondas (potencia: 250 W, tiempo de rampa: 5 minutos) a 230ºC durante 10 minutos. Se combinaron las mezclas de reacción y se filtraron. Tras lavar con MeOH y CH2Cl2, se evaporó el filtrado y se obtuvo un aceite marrón que precipitó tras la adición de hexano. Se lavó el sólido secuencialmente con hexano, MeOH y etil éter proporcionando el compuesto final 57 (5,7 g, 74%) como un sólido marrón.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 11,07 (NH, s, 1H), 8,87 (H-9, d, 1H, J=4,3 Hz), 8,11(H-7, d, 1H, J=8,1 Hz), 7,59 (H-8, dd, 1H, J=4,3 y 8,1Hz), 7,31 (H-3, s, 1H), 7,10 (H-6, s, 1H), 4,07 (OCH3, s, 3H), 3,01 (CH3, s, 3H).

5. Síntesis de éster metílico del ácido 4-cloro-5-metil-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico (58)

O Cl

POCl3

CH3CN

N CO2Me N CO2Me HN N

Se añadió POCl3 (3,7 ml, 40,4 mmoles) a una disolución de éster metílico del ácido 5-metil-4-oxo-1,4-dihidro[1,10]fenantrolina-2-carboxílico 57 (5,7 g, 21,2 mmoles) en CH3CN (80 ml). Se agitó la mezcla de reacción a

temperatura ambiente durante 5 horas, se diluyó con CH2Cl2 y se añadió K2CO3 sólido hasta pH 10. Se añadieron agua y CH2Cl2 y se transfirió la mezcla a un embudo de decantación. Se lavó la fase orgánica con salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, MeOH/CH2Cl2, 1-20%) proporcionando el derivado de cloro 58 (4,1 g, 68%) como un sólido marrón claro.

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,15 (H-9, dd, 1H, J=1,5 y 4,3 Hz), 8,43 (H-3, s, 1H), 8,10 (H-7, dd, 1H, J=1,5 y 8,1 Hz), 7,66 (H-6, s, 1H), 7,61 (H-8, dd, 1H, J=4,3 y 8,1Hz), 4,07 (OCH3, s, 3H), 3,06 (CH3, s, 3H).

6. Síntesis de (4-cloro-5-metil-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol (59)

ClCl

NaBH4

N N CO2Me MeOH, CH2Cl2 N OHN

Se añadió borohidruro de sodio sólido (0,24 g, 6,3 mmoles) en porciones a una disolución de éster metílico del ácido 4-cloro-5-metil-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico 58 (1,00 g, 3,5 mmoles) en una mezcla de MeOH/CH2Cl2 (1:1, 20 ml) enfriada previamente a 0ºC en un baño de hielo. Se mantuvo la adición con agitación a 0ºC durante 3 horas. Se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se añadió agua. Se extrajo la mezcla con CH2Cl2 y se separó la fase orgánica, se lavó con salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó hasta sequedad. Se trató el residuo con etil éter proporcionando alcohol 59 como un sólido rojo oscuro (0,77 g, 85%).

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,04 (H-9, d, 1H, J= 4,2 Hz), 8,12 (H-7, dd, 1H, J=1,3 y 8,0 Hz), 7,78 (H-3, s, 1H), 7,58 (H-8, dd, 1H, J=4,2 y 8,0 Hz), 7,56 (H-6, s, 1H), 5,13 (OCH2, s, 2H), 3,07 (OCH3, s, 3H).

7. Síntesis de (5-metil-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol (60)

OH

A una disolución de (4-cloro-5-metil-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol 59 (100,0 mg, 0,4 mmoles) en DMF anhidra (2 ml) a 70ºC se le añadió una disolución de tiometóxido de sodio (82,0 mg, 1,2 mmoles) en DMF anhidra (3 ml). Se mantuvo la agitación a 70ºC durante 15 minutos y se añadió agua. Se diluyó la mezcla en MeOH/CH2Cl2 (1:1) y se separó la fase orgánica, se lavó con salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, NH3OH 7 N en MeOH/CH2Cl2, 0-50%) proporcionando el producto deseado 60 como un sólido marrón claro (30,3 mg, 29%).

1H-RMN (400 MHz, MeOD, ppm): 8,97 (H-9, dd, 1H, J= 1,6 y 4,4 Hz), 8,25 (H-7, dd, 1H, J=1,7 y 8,1 Hz), 7,68 (H-8, dd, 1H, J=4,4 y 8,1 Hz), 7,55 (H-3, s, 1H), 7,52 (H-6, s, 1H), 4,95 (OCH2, s, 2H), 3,05 (SCH3, s, 3H), 2,64 (CH3, s, 3H).

8. Síntesis de 5-metil-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (61)

S

1.: (COCl)2, DMSO

2.: Et3N H

CH2Cl2

N

N N OH

NO

A una disolución 2,0 M de cloruro de oxalilo en CH2Cl2 (600 Il, 1,2 mmoles) a -78ºC, se le añadió DMSO

anhidro (170 Il, 2,4 mmoles) y se agitó la mezcla a -78ºC durante 20 minutos. Entonces, se añadió una disolución de (5-metil-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol 60 (161,0 mg, 0,6 mmoles) en CH2Cl2 anhidro (3 ml) y se mantuvo la agitación a -78ºC durante 50 minutos. Finalmente, se añadió trietilamina (0,5 ml, 3,6 mmoles) a -78ºC, y se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla con CH2Cl2 y se lavó con agua. Se separó la fase orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, MeOH/CH2Cl2, 0-50%), proporcionando el aldehído 61 como un sólido marrón claro (51,4 mg, 32%).

1H-RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,48 (CHO, s, 1H), 9,20 (H-9, dd, 1H, J= 1,7 y 4,3 Hz), 8,15 (H-7, dd, 1H,

J=1,7 y 8,1 Hz), 7,98 (H-3, s, 1H), 7,66 (H-6, s, 1H), 7,65 (H-8, dd, 1H, J=4,3 y 8,1 Hz), 3,16 (SCH3, s, 3H), 2,69 (CH3, s,

3H).

9. Síntesis de oxima de 5-metil-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (D)

S

NH2OH . HCl, NaOH ac.

H EtOH, ,

N

NN

NO

OH

Se añadió una disolución de clorhidrato de hidroxilamina (133,0 mg, 1,9 mmoles) en agua (2 ml) a una disolución de 5-metil-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído 61 (51,4 mg, 0,2 mmoles) en una mezcla de etanol/CH2Cl2 (5/1,5, 6,5 ml). Se mantuvo la agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Se diluyó la mezcla de reacción con agua y CH2Cl2, y se separó la fase orgánica, se secó (Na2SO4), se filtró y se evaporó. Se purificó el residuo

10 mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, MeOH/CH2Cl2, 0-50%), proporcionando la aldoxima D como un sólido marrón claro (8,4 mg, 15%).

1H-RMN (400 MHz, CDCl3/MeOD, 3/1, ppm): 9,00 (H-9, dd, 1H, J= 1,5 y 4,0 Hz), 8,50 (H-3, s, 1H), 8,28 (H-7, dd, 1H, J= 1,4 y 8,0 Hz), 7,96 (H-6, s, 1H), 7,70 (H-8, dd, 1H, J= 4,0 y 8,0 Hz), 7,62 (CH=, s, 1H), 3,15 y 3,13 (SCH3, s y s, 3H), 2,72 y 2,66 (CH3, s y s, 3H).

Ejemplo 6 Síntesis del derivado de fenantrolina A

O O O SnCl2 · 2H2O

MeO2C CO2Me CO2Me EtOH

MeOH NO2

NH2

N HN N CO2MeN

OO OCl

,

NaBH4 Ph2O

POCl3

N CO2Me MeOH, CH2Cl2H

N CO2Me NN

64 65

OCl OS OS

1. (COCl)2, DMSO NaSCH3

2. Et3N HMeOH, , CH2Cl2

N

N N OH

N

N OH

NO

6667 68

OS NH2OH . HCl, NaOH ac.

EtOH, , N NN

OH

A

1. Síntesis de 6-metoxi-quinolin-8-ilamina (62)

O SnCl2·2H2O

O

N

EtOH NO2

NH2

Se añadió SnCl2·2H2O (39,78 g, 176,3 mmoles) a una disolución de 6-metoxi-8-nitro-quinolina (18,00 g, 88,1 mmoles) en etanol (200 ml). Se calentó la mezcla a reflujo durante aproximadamente dos horas y se basificó la disolución resultante con NaOH 1 N. Se separaron por filtración las sales de estaño y se extrajeron las aguas madre varias veces con CH2Cl2. Se secaron las fases orgánicas combinadas (Na2SO4) y se evaporó dando 6-metoxi-8-amino

10 quinolina 62 (15,00 g, 98%) como un sólido marrón.

1H RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,59 (dd, J = 4,21, 1,65 Hz, 1H), 7,94 (dd, J = 8,29, 1,64 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 8,28, 4,20 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 2,57 Hz, 1H), 6,47 (d, J = 2,57 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H).

13C RMN (100 MHz, CDCl3, ppm): 158,79, 145,01, 144,97, 135,38, 134,72, 129,83, 121,77, 101,55, 94,53, 55,20.

2. Síntesis de éster dimetílico del ácido 2-(6-metoxi-quinolin-8-ilamino)-but-2-enodioico (63)

O O MeO2C CO2Me CO2Me MeOH NH2

N H

N N CO2Me

Se añadió acetilenodicarboxilato de dimetilo (6,0 ml, 48,9 mmoles) a una disolución de 6-metoxi-quinolin-8ilamina (7,75 g, 44,5 mmoles) en MeOH (40 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Tras la eliminación del disolvente, se purificó el residuo mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, acetato de etilo/hexano, 3:1) obteniendo el compuesto puro 63 (4,20 g, 30%) como un sólido amarillo.

1H RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,95 (s, 1H), 8,73 (dd, J = 4,22, 1,65 Hz, 1H), 7,98 (dd, J = 8,30, 1,63 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 8,28, 4,22 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 2,48 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 2,46 Hz, 1H), 5,55 (s, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,78 (s, 6H).

13C RMN (100 MHz, CDCl3, ppm): 169,07, 165,01, 157,69, 146,42, 145,83, 137,75, 136,34, 134,71, 129,50, 122,08, 106,64, 99,07, 96,36, 55,41, 52,85, 51,36.

3. Síntesis de éster metílico del ácido 5-metoxi-4-oxo-1,4-dihidro-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico (64)

O OO

CO2Me ,

Ph2O

N CO2Me H

N HNN CO2Me

Se calentó el derivado de quinolina 63 (4,20 g, 13,28 mmoles) en difenil éter (40 ml) a 240ºC durante 20 minutos. Se enfrió la disolución a temperatura ambiente, se añadió hexano obteniendo una pasta marrón que se filtró y entonces se eluyó con metanol caliente. Se concentró la disolución metanólica obteniendo un sólido marrón oscuro, que se trituró con etil éter proporcionando el producto deseado 64 (0,75 g, 20%) como un sólido marrón claro

1H RMN (400 MHz, CDCl3, ppm) 8,78 (d, J = 4,13 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 8,23, 1,31 Hz, 1H), 7,57 (dd, J = 8,23, 4,30 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,06 (s, 3H), 2,17 (s, 1H)

13C RMN (100 MHz, CDCl3, ppm) 146,77, 146,69, 141,67, 134,59, 134,53, 130,16, 124,68, 118,86, 117,30, 98,81, 86,29, 53,62.

4. Síntesis de éster metílico del ácido 4-cloro-5-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico (65)

O Cl

OO

POCl3

N CO2Me H

N CO2Me NN

Se añadió POCl3 (15 ml) al derivado de fenantrolina 65 (0,89 g, 3,13 mmoles) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Tras la evaporación a presión reducida, se disolvió el residuo en CH2Cl2 y se lavó secuencialmente con NaHCO3 saturado y salmuera, se secó (Na2SO4) y se evaporó proporcionando el producto intermedio de clorofenantrolina puro 65 (1,00 g 100%) como un sólido marrón.

1H RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 9,28 (d, J = 3,63 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 7,98 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,84 (dd, J = 7,02, 4,58 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 4,13 (s, 3H), 4,12 (s, 3H)

13C RMN (100 MHz, CDCl3, ppm): 164,48, 154,82, 147,69, 143,49, 139,01, 130,02, 129,68, 127,43, 124,88, 123,21, 118,84, 103,96, 56,38, 53,58.

5. Síntesis de (4-cloro-5-metoxi-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol (66)

OCl OCl

NaBH4

N CO2Me MeOH, CH2Cl2

N N

N OH

Se añadió borohidruro de sodio sólido (0,25 g, 6,6 mmoles) en porciones a una disolución de éster metílico del ácido 4-cloro-5-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carboxílico 65 (1,00 g, 3,3 mmoles) en una mezcla de MeOH/CH2Cl2 (1:5, 50 ml) enfriada 0ºC. Se agitó la mezcla a 0ºC durante 1 hora y a temperatura ambiente durante 18 horas. Se eliminó el disolvente y se disolvió el residuo en CH2Cl2 y se lavó secuencialmente con agua y salmuera, se secó (Na2SO4) y se evaporó proporcionando el alcohol puro 66 (710 mg 78%) como un sólido marrón.

1H RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,91 (s, 1H), 8,09 (dd, J = 8,06, 1,19 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,54 (dd, J = 8,03, 4,40 Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,06 (s, 3H).

13C RMN (100 MHz, CDCl3, ppm): 160,86, 153,98, 147,66, 141,89, 134,82, 129,69, 129,29, 123,87, 123,53, 120,14, 118,85, 102,34, 65,05, 55,74.

6. Síntesis de (5-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolin-2-il)-metanol (67)

OCl OS

NaSCH3

MeOH, ,

NN N OHN OH

A una disolución del derivado de cloro 66 (710 mg, 2,6 mmoles) en MeOH anhidro (10 ml), se le añadió tiometóxido de sodio sólido (906 mg, 12,9 mmoles). Se calentó a reflujo la mezcla resultante durante 8 horas. Se eliminó el disolvente a presión reducida, se disolvió el residuo en CH2Cl2 y se lavó con NaHCO3 saturado y salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró obteniendo el compuesto puro 67 (500 mg, 70%) como un sólido marrón.

1H RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,87 (d, J = 2,86 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 1,17 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 7,95, 4,28 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,07 (s, 3H), 2,49 (s, 3H)

13C RMN (100 MHz, CDCl3, ppm): 159,49, 155,12, 150,90, 147,51, 134,36, 129,69, 128,98, 123,35, 123,17, 118,85, 114,45, 100,82, 65,59, 55,37, 16,168.

7. Síntesis de 5-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (68)

OS

1. (COCl)2, DMSO 2. Et3N

H

CH2Cl2

N

N N OH

NO

A una disolución de 2,0 M de cloruro de oxalilo en CH2Cl2 anhidro (1,4 ml, 2,8 mmoles) a -78ºC, se le añadió gota a gota una disolución de DMSO anhidro (0,4 ml, 5,6 mmoles) en CH2Cl2 anhidro (2 ml) bajo nitrógeno. Tras 20 minutos de agitación a -78ºC, se añadió gota a gota una disolución del derivado de alcohol 67 (400 mg, 1,4 mmoles) en CH2Cl2 seco (5 ml). Se agitó la disolución durante 50 minutos a -78ºC y se añadió lentamente trietilamina (1,2 ml, 8,4 mmoles). Tras 5 minutos se dejó calentar la mezcla hasta temperatura ambiente y se agitó durante 5 horas. Se añadió agua y se transfirió la mezcla a un embudo de decantación, entonces se lavó la fase orgánica con agua y salmuera, se secó (Na2SO4) y se concentró proporcionando el aldehído puro 68 (375 mg, 94%) como un sólido marrón.

1H RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 10,49 (s, 1H), 9,11 (dd, J = 4,35, 1,68 Hz, 1H), 8,15 (dd, J = 8,10, 1,67 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,63 (dd, J = 8,09, 4,36 Hz, 1H), 7,09 (s, 1H), 4,12 (s, 3H), 2,61 (s, 3H)

13C RMN (100 MHz, CDCl3, ppm): 194,355, 152,809, 150,630, 148,493, 134,554, 134,510, 129,708, 129,133, 123,955, 123,195, 118,867, 113,629, 103,696, 55,622, 16,366.

8. Síntesis de oxima de 5-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído (A)

OS OS

NH2OH . HCl, NaOH ac. H EtOH, ,

N N

NO NN

OH

A una suspensión de aldehído 68 (330 mg, 1,16 mmoles) en etanol (16 ml), se le añadió una disolución de

5 clorhidrato de hidroxilamina (801 mg, 11,6 mmoles) en agua (8 ml) y se calentó la mezcla a 60ºC. Se añadió una disolución de NaOH al 10% hasta pH 6 y se agitó la reacción a 60ºC durante 1 hora y se enfrió a 0ºC. Se formó un precipitado que se filtró y se lavó con agua obteniendo la aldoxima deseada A (233 mg, 70%) como un sólido marrón claro.

1H RMN (400 MHz, CDCl3, ppm): 11,98 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 8,31 (d, J = 6,68 Hz, 2H), 7,86 (s, 1H), 7,68 (dd, J 10 = 7,53, 3,71 Hz, 1H), 7,35 (s, 1H), 4,05 (s, 3H), 2,54 (s, 3H)

13C RMN (100 MHz, CDCl3, ppm): 154,053, 150,819, 149,909, 148,876, 147,384, 134,456, 129,938, 128,818, 123,710, 120,327, 118,498, 112,746, 102,459, 55,695, 15,324.

EM (ES-): m/z = 298.

EJEMPLOS BIOLÓGICOS

15 Ejemplo 7

Toxicidad

Se sometieron a ensayo los posibles efectos sobre la viabilidad celular de los compuestos sometidos a ensayo en células de neuroblastoma humanas SH-SY5Y, mediante la cuantificación de la liberación de actividad lactato deshidrogenasa (LDH). Se siembran células de neuroblastoma humanas SH-SY5Y en placas de cultivo de 96 pocillos a

20 104 células/pocillo. Entonces se retira el medio y se incuban las células con diferentes concentraciones de los compuestos durante 24 h. Se someten a prueba los compuestos a concentraciones crecientes partiendo de 1 IM, en medio de cultivo nuevo, con el fin de encontrar la concentración mínima a la que los compuestos son tóxicos, hasta un máximo de 1 mM. Tras 24 h, se retira el medio y se lisan las células unidas al fondo del pocillo añadiendo 50 Il de Krebs-Hepes; Triton X-100 al 1% durante 5 minutos a temperatura ambiente. Para la cuantificación de la liberación de

25 LDH, se usa el kit de detección de citotoxicidad de Roche (nº de catálogo 11 644 793 001). Se mide la actividad LDH mediante su absorbancia a 492 nm con 620 nm de longitud de onda de referencia.

En la tabla 2, se indica para cada compuesto en la segunda columna la concentración máxima a la que se sometió a prueba la toxicidad. En la tercera columna, se indica si a esta concentración máxima el compuesto era tóxico

o no. Todos los compuestos resultaron no tóxicos a la concentración para la que se encontró actividad, en la mayoría de 30 los casos incluso a una concentración de 1000 veces. Por tanto, los compuestos pueden considerarse no tóxicos.

Tabla 2

Compuesto: Concentración máxima sometida a prueba para detectar toxicidad Sí/No

A: 100 IM S

B: 1000 IM N

C: 1000 IM N

D: 1000 IM N

E: 100 IM S

F: 1000 IM N

Ejemplo 8

Protección frente a la muerte celular inducida por peróxido de hidrógeno

El objetivo de este ensayo es determinar el efecto neuroprotector de los compuestos de fórmula (I) cuando se

5 exponen células de neuroblastoma humanas a estrés oxidativo inducido por peróxido de hidrógeno, que es sumamente perjudicial para la célula y su acumulación produce oxidación de dianas celulares tales como ADN, proteínas y lípidos conduciendo a mutagénesis y muerte celular.

Se siembran células de neuroblastoma humanas SH-SY5Y en una placa de cultivo de 96 pocillos a una densidad de 104 células/pocillo. Se exponen las células a diferentes concentraciones del compuesto una hora antes del

10 tratamiento con H2O2 100 IM durante 24 h. Se usó como control positivo N-acetilcisteína (NAC) 5 mM, un agente antioxidante conocido, y se preincubó 1 hora antes del tratamiento con H2O2. Tras 24 h, se retira el medio y se lisan las células unidas al fondo del pocillo añadiendo 50 Il de Triton X-100 al 1% en Krebs-Hepes durante 5 minutos a temperatura ambiente. Para la cuantificación de la liberación de LDH, se usó el kit de detección de citotoxicidad de Roche (nº de catálogo 11 644 793 001).

15 La concentración mínima de compuestos A-E para los que se determinó la protección frente a H2O2 se muestra en la Tabla 3.

Tabla 3

Compuesto: Protección frente a H2O2

A: 0,05 IM

B: 0,05 IM

C: 0,005 IM

D: 0,5 IM

E: 0,05 IM

Ejemplo 9

20 Protección frente a la muerte celular inducida por 6-OHDA

El objetivo de este experimento es determinar el efecto protector de los compuestos de fórmula (I) frente a la toxicidad producida por 6-OHDA. Esta toxina induce una muerte celular similar a la que se produce en la enfermedad de Parkinson, destruyendo neuronas dopaminérgicas (“MPTP and 6-hidroxidopamina-induced neurodegeneration as models for Parkinson’s disease: neuroprotective strategies”; Grunblatt E, et al.; J Neurol. Abril de 2000; 247 Supl. 2: II95

25 102).

Dos o tres días antes del experimento, se siembran las células de neuroblastoma humanas SH-SY5Y en una placa de cultivo de 96 pocillos a una densidad de 104 células/pocillo. Se exponen las células al tratamiento con 6-OHDA y, finalmente, se mide la muerte celular mediante cuantificación de LDH. Como control positivo se usó NAC.

Se preincuban NAC y el compuesto de fórmula (I) durante 2 horas antes del tratamiento con 6-OHDA 75 IM 30 durante 16 horas. El ensayo se realiza en medio que contiene suero bovino fetal al 10%.

Los resultados neuroprotectores frente a la muerte celular inducida por 6-OHDA se muestran en la tabla 4. Para cada compuesto, se muestra la concentración mínima de compuesto de fórmula (I) a la que hay un efecto neuroprotector.

Tabla 4

Compuesto: Protección frente a 6-OHDA

A: 0,05 IM

B: 0,05 IM

C: 0,5 IM

D: 0,05 IM

E: 0,5 IM

F: 10 IM

5 Ejemplo 10

Neuroprotección frente a la toxicidad de Aj

Con el fin de evaluar la posible neuroprotección de los compuestos, se trataron previamente células SH-SY5Y,

cultivadas en placas de 96 pocillos, durante 1 hora con el compuesto a diferentes concentraciones y entonces se expusieron durante 24 horas a Aj25-35 200 IM (Neosystem) para inducir estrés oxidativo extenso y muerte celular. 10 Entonces se evalúa la capacidad del compuesto para proteger frente a esta toxicidad midiendo la LDH intracelular,

usando el ensayo de LDH colorimétrico.

Está ampliamente aceptado que la actividad neurotóxica de Aj se encuentra dentro de los aminoácidos 25-35 (véase, por ejemplo Yankner BA et al., (1990) Neurotrophic and neurotoxic effects of amyloid j protein: reversal by tachykinin neuropeptides; Science 250:279-282).

15 En la tabla 5, se muestra la concentración mínima a la que los compuestos sometidos a prueba mostraron neuroprotección frente a la toxicidad de Aj25-35.

Tabla 5

Compuesto: Protección frente a jamiloide

A: 5 IM

B: 5 IM

C: 5 IM

D: 0,5 IM

E: 10 IM

Ejemplo 13

Inhibición de la secreción de Aj(1-40)

Para cuantificar la secreción de Aj, se usó un método basado en ELISA. El ensayo consiste en la detección

de antígeno mediante anticuerpos monoclonales selectivos anti-Aj en dos epítopos diferentes formando un “complejo

5 de tipo sándwich”, que se detecta mediante medición colorimétrica debida a la unión de un anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa que cataliza la conversión de un sustrato o cromógeno, TMB, en un producto coloreado, directamente proporcional a la cantidad de péptido en la muestra. Se ha analizado la producción de Aj mediante ELISA, usando un kit colorimétrico comercial: H-amyloid b-30 ELISA (The Genetics Company).

Se cuantificó Aj (1-40) de sobrenadantes celulares. Se ha empleado una línea celular transfectada con APP

10 para los experimentos: CHO7W (transfectada de manera estable con ADNc de tipo natural de APP751 humana). Se hicieron crecer las células en un medio de cultivo que consistía en DMEM complementado con suero bovino fetal al 2%, penicilina al 1%-estreptomicina, L-glutamina al 1% y G418 200 Ig/ml. Se siembran las células en una microplaca de cultivo de 96 pocillos, a 5000 células/pocillo y se realiza el tratamiento con diferentes compuestos a diferentes concentraciones durante 24 horas tras la siembra.

15 En la tabla 6, se muestra la concentración mínima para cada compuesto sometido a prueba a la que el compuesto inhibe la inhibición por beta-amiloide.

Tabla 6

Compuesto: Inhibición de la secreción de Aj

A: 0,1 IM

B: 1 IM

C: 0,1 IM

D: 1 IM

E: 10 IM

Claims

REIVINDICACIONES

1. Compuesto de fórmula (I):

(I)

en la que 5 R1 se selecciona de –O-R4 y –S-R5, en los que R4 y R5 se seleccionan de H y alquilo C1-C6,

R2 se selecciona de hidrógeno, halógeno, alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6 y –O-(CH2)n-O-R6, en el que n se selecciona de 1, 2, 3, 4, 5, 6 y R6 es alquilo C1-C6, R3 se selecciona de hidrógeno y alcoxilo C1-C6, con la condición de que uno de R2 y R3 es H y el otro es diferente de H,

10 o cualquier sal o solvato o estereoisómero o tautómero del mismo.
2.

Compuesto según la reivindicación 1, en el que R4 y R5 se seleccionan de H y metilo.
3.

Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, en el que R2 se selecciona de hidrógeno, flúor, metilo, metoxilo y –O-(CH2)2-O-CH3.
4.

Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R3 se selecciona de hidrógeno y 15 metoxilo.
5. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el doble enlace del grupo oxima – CH=NOH presenta conformación E.
6.

Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el compuesto de fórmula (I) se selecciona de los siguientes compuestos: 20 oxima de 5-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído oxima de 5-fluoro-4-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído oxima de 4-metoxi-5-(2-metoxi-etoxi)-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído oxima de 5-metil-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído

oxima de 6-metoxi-4-metilsulfanil-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído 25 oxima de 4-hidroxi-6-metoxi-[1,10]fenantrolina-2-carbaldehído.
7.

Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso como medicamento.
8.

Compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso en el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad o estado neurodegenerativo o hematológico.
9. Compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso en el tratamiento o 30 prevención de cáncer
10. Compuesto para su uso en el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad neurodegenerativa según la reivindicación 8, en el que la enfermedad neurodegenerativa se selecciona de enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), esquizofrenia, enfermedad de Huntington, lesiones cerebrales, tales como accidente cerebrovascular e isquemia, esclerosis múltiple, epilepsia, ataxia de

35 Friedreich, encefalopatías espongiformes, amiloidosis, demencia vascular, taupatías, parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal, degeneración lobular frontotemporal, parkinsonismo panencefálico esclerosante subagudo, parkinsonismo postencefálico, encefalitis pugilística, complejo de parkinsonismodemencia de Guam, enfermedad de Pick, demencia frontotemporal, demencia asociada al SIDA, esclerosis múltiple, trastornos del estado de ánimo tales como depresión, esquizofrenia y trastornos bipolares, estimulación de la recuperación funcional tras accidente cerebrovascular y lesión cerebral, especialmente

5 lesión cerebral traumática.
11. Compuesto para su uso en el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad hematológica según la reivindicación 8, en el que la enfermedad hematológica se selecciona de talasemia, anemia, anemia aplásica, anemia de Diamond-Blackfan, drepanocitosis, trastornos hematológicos que requieren transfusiones regulares de glóbulos rojos, síndrome mielodisplásico, disfunción cardiaca inducida por hierro, insuficiencia cardiaca

10 inducida por hierro y diabetes.
12.

Compuesto para su uso en el tratamiento o prevención del cáncer según la reivindicación 9, donde el cáncer se selecciona de cáncer de intestinos, hígado, gástrico, de pecho, de pulmón, de ovarios, de próstata, glioma cerebral, linfático, de piel, de pigmento, de glándula tiroidea, leucemia y varios de médula ósea.
13.

Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las

15 reivindicaciones 1 a 6, sus sales o solvatos o tautómeros del mismo, y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.
14. Uso de un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o cualquier sal o solvato del mismo, como reactivo para ensayos biológicos, preferiblemente como reactivo para ensayos farmacocinéticos, ensayos de cruce de la barrera hematoencefálica, ensayos de quelación, para ensayos sobre

20 protección frente a la muerte celular inducida por peróxido de hidrógeno, protección frente a la muerte celular inducida por 6-OHDA, neuroprotección frente a la toxicidad de Aj e inhibición de la secreción de betaamiloide.