ES2423029T3

ES2423029T3 - Compuestos de arilsulfonamida

Info

Publication number: ES2423029T3
Application number: ES07864478T
Authority: ES
Inventors: Jonathan Bayldon Baell; Guillaume Laurent Lessene; Brad Edmund Sleebs; Wayne J. Fairbrother; John A. Flygare; Michael F.T. Koehler
Original assignee: Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research; Genentech Inc
Current assignee: Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research; Genentech Inc
Priority date: 2006-11-15
Filing date: 2007-11-15
Publication date: 2013-09-17
Anticipated expiration: 2027-11-15
Also published as: AU2007319209A1; WO2008061208A3; NZ577442A; CN101535280B; CN101535280A; CA2666837C; JP5366817B2; HK1134283A1; CA2666837A1; WO2008061208A2; JP2010510237A; EP2094672B1; US8168645B2; AU2007319209B2; EP2094672A2; US20100056517A1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I):**Fórmula** en el que X es NO2 o -SO2-C(X')3, en la que X' es H o halógeno; Z es un grupo cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocíclico o heteroarilo; R1 y R2 son independientemente arilo, heteroarilo, -NR5R6, -CONR5R6, -O(CH2)rarilo, -O(CH2)rheteroarilo, -CO(CH2)rarilo, -CO(CH2)rheteroarilo, -CO2(CH2)rarilo, -CO2(CH2)rheteroarilo, -OCO(CH2)rarilo, -OCO(CH2)rheteroarilo, -S(CH2)rarilo, -S(CH2)rheteroarilo, -SO(CH2)rarilo, -SO(CH2)rheteroarilo, -SO2(CH2)rarilo o -SO2(CH2)rheteroarilo; R3 es alquilo, alquenilo, -(CH2)tcicloalquilo, -(CH2)tcicloalquenilo, -(CH2)tarilo, -(CH2)theterociclilo o -(CH2)theteroarilo,en los que cada cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido conalquilo, alquenilo, halógeno, nitro, halogenoalquilo o fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 grupos alquilo,alquenilo, alcoxilo, halógeno o nitro; R5 y R6 son independientemente hidrógeno, alquilo o alquenilo o R5 y R6, tomados conjuntamente con el nitrógeno alque están unidos, forman un anillo heterocíclico o heteroarilo; cada R7 es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, -alquenilo C2-6, -alquinilo C2-6 o acilo;cada R8 es independientemente hidrógeno o halógeno; cada R9 es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, -alquenilo C2-6 o -alquinilo C2-6,t es 0 o un entero de 1 a 6; y r es 0 o un entero de 1 a 6; en los que cada grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo puedeestar opcionalmente sustituido; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Compuestos de arilsulfonamida

5 CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] La invención se refiere en general a inhibidores novedosos de proteínas de la familia Bcl-2 que son útiles como agentes terapéuticos para tratar malignidades. La invención se refiere también a procesos de preparación de los compuestos y composiciones útiles en la regulación de la muerte celular y al tratamiento y/o la

10 profilaxis de enfermedades o afecciones asociadas a la desregulación de la muerte celular.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0002] La apoptosis es ahora reconocida como un proceso biológico esencial en la homeostasis de tejido de

15 todas las especies de seres vivos. En mamíferos en particular, se ha mostrado que regula el desarrollo embrionario. Más tardíamente, la muerte celular es un mecanismo por defecto que elimina células potencialmente peligrosas (por ejemplo, células portadoras de defectos cancerosos). Se han descubiertos varias rutas apoptóticas y una de las más importantes implica la familia de proteínas Bcl-2. Los dominios de homología estructural BH1 a BH4 son característicos de esta familia. La clasificación adicional en tres subfamilias depende de cuántos de estos dominios

20 de homología contenga una proteína y de su actividad biológica (proapoptótica o antiapoptótica).

[0003] El primer subgrupo contiene proteínas que tienen los 4 dominios de homología BH1 a BH4. Su efecto genérico es antiapoptótico, evitando por tanto que la célula inicie un proceso de muerte celular. Las proteínas tales como Bcl-2, Bcl-w Bcl-xL son miembros de este primer subgrupo. Las proteínas pertenecientes al segundo subgrupo

25 tienen un efecto proapoptótico y contienen tres dominios de homología BH1 a BH3. Las dos principales proteínas representativas de este segundo subgrupo son Bax y Bak. Finalmente, el tercer subgrupo está compuesto por proteínas que contienen solo el dominio BH3 y se hace referencia habitualmente a los miembros de este subgrupo como “proteínas solo BH3”. Su efecto biológico sobre la célula es proapoptótico. Bim, Bad, Bmf y Bid son ejemplos de esta tercera subfamilia de proteínas.

30 [0004] El delicado equilibrio entre los tres subgrupos es la clave de la homeostasis de las células. Estudios recientes han intentado dilucidar los mecanismos que implican la familia de proteínas Bcl-2 que permiten que una célula experimente muerte celular programada tras recibir una señal intracelular o extracelular. Dicha señal induce la activación (postraduccional o transcripcional) de proteínas solo BH3. Estas proteínas son los inductores primarios de

35 la cascada que conduce a la muerte celular. Las proteínas solo BH3 interaccionan principalmente con el subgrupo Bcl-2 y evitan que proteínas tales como Bcl-2, Bcl-xL o Bcl-w inhiban el subgrupo Bax/Bak. Estas últimas proteínas están ya ancladas a la membrana mitocondrial o bien migran a esta membrana. Su activación conduce al hinchamiento de membrana, liberación de citocromo C y activación posterior de caspasas efectoras que dan como resultado la apoptosis.

40 [0005] Como ya se ha mencionado, el equilibrio entre estas proteínas es esencial para la correcta respuesta celular ante diversos estímulos. Cualquier perturbación de este equilibrio provocará o empeorará enfermedades graves. Por tanto, se ha mostrado que las perturbaciones de la apoptosis son el origen de enfermedades importantes tales como afecciones neurodegenerativas (apoptosis regulada positivamente), por ejemplo enfermedad

45 de Alzheimer, o enfermedades proliferativas (apoptosis regulada negativamente), por ejemplo cáncer y enfermedades autoinmunitarias.

[0006] El descubrimiento de que varias proteínas de la familia Bcl-2 están implicadas en el inicio de la malignidad cancerosa ha revelado una vía novedosa de enfrentarse a esta enfermedad aún elusiva. Se ha mostrado

50 en particular que las proteínas prosupervivencia tales como Bcl-2 se sobreexpresan en muchos tipos de cáncer (véase la Tabla 1) [Zhang, 2002]. El efecto de esta desregulación es la supervivencia de células alteradas que habrían experimentado apoptosis en condiciones normales. La repetición de estos defectos asociados a la proliferación no regulada se cree que es el punto de partida de la evolución cancerosa. Se ha mostrado también que las proteínas solo BH3 actúan como supresores tumorales cuando se expresan en animales enfermos.

TABLA 1: Sobreexpresión de Bcl-2 en cáncer Tipo de cáncer Sobreexpresión de Bcl-2 Cáncer de próstata resistente a hormonas 90-100% Melanoma maligno 90% Cáncer de mama positivo de receptor de estrógenos 80-90% Linfoma no de Hodgkin 50% Cáncer de colon 30-50% Leucemia linfocítica crónica 25-50%

[0007] Estos hallazgos, así como numerosos otros, han posibilitado la emergencia de un nuevo concepto en estrategias anticancerosas y descubrimiento de fármacos. Si una entidad que imita el efecto de proteínas solo BH3

fuera capaz de entrar en la célula y anular la sobreexpresión de proteína prosupervivencia, podría ser posible reajustar el proceso apoptótico. Esta estrategia puede tener la ventaja de que puede aliviar el problema de la resistencia a fármacos que es habitualmente la consecuencia de la desregulación apoptótica (supervivencia anormal).

5 [0008] Se ha realizado un considerable esfuerzo por comprender los detalles estructurales de las interacciones clave entre proteínas solo BH3 y el subgrupo prosupervivencia. Fesik y colaboradores han demostrado en el caso del dímero Bad/Bcl-xL la importancia de algunos elementos estructurales [Muchmore y col., 1996; Sattler y col., 1997 y Petros y col., 2000]:

10 aparece unión entre un surco hidrófobo localizado en Bcl-xL y el dominio BH3 de Bad; la proteína solo BH3 Bad adopta una estructura helicoidal tras la unión al surco hidrófobo de BclxL; y

cuatro aminoácidos hidrófobos del dominio BH3 localizados a intervalos de i, i+3, i+7 e i+11 son esenciales para la unión de Bad a Bcl-xL e interaccionan con cuatro bolsillos hidrófobos situados 15 en el surco de unión de Bcl-xL. Además, los estudios de los miembros de los subgrupos de solo

BH3 han mostrado que estos cuatro aminoácidos hidrófobos se conservan por todo el subgrupo.

[0009] Recientemente, se han publicado la estructura de la proteína prosupervivencia Bcl-w [Hinds y col., 2003] y la estructura de la proteína solo BH3 Bim en interacción con Bcl-xL [Liu y col., 2003]. Esta última estructura 20 confirma los hallazgos de la interacción Bad/Bd-xL.

[0010] Es una diana potencial para una nueva terapia farmacológica las moléculas pequeñas que imitan la interacción entre una proteína solo BH3 y la familia de proteínas Bcl-2. Recientemente, se ha mostrado que una molécula pequeña mimética de proteína solo BH3 tiene actividad citotóxica en algunas líneas celulares cancerosas y

25 que potencia los efectos de la radioterapia y de una serie de agentes quimioterapéuticos [Oltersdorf y col., 2005; documentos US 2002/0086887; WO 03/080586; US 6.720.338; WO 05/049597; Petros, y col., 2006; Cory y Adams, 2005].

[0011] La hélice a es un motivo de reconocimiento común exhibido en péptidos y proteínas. Las secuencias

30 de a-hélice están a menudo implicadas en interacciones proteína-proteína, tales como interacciones enzima-receptor y anticuerpo-receptor. La orientación a estas interacciones proteína-proteína es ahora reconocida como uno de los mayores retos del descubrimiento de fármacos.

[0012] Existe la necesidad de moléculas pequeñas que puedan sintetizarse fácilmente y que imiten la 35 actividad de proteínas solo BH3.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

[0013] En un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I): 40

en la que

X es NO2 o -SO2-C(X’)3, en la que X’ es H o halógeno;

45 Z es un grupo cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocíclico o heteroarilo; R1 y R2 son independientemente arilo, heteroarilo, -NR5R6, -CONR5R6, -O(CH2)rarilo, -O(CH2)rheteroarilo, CO(CH2)rarilo, -CO(CH2)rheteroarilo, -CO2(CH2)rarilo, -CO2(CH2)rheteroarilo, -OCO(CH2)rarilo, OCO(CH2)rheteroarilo, -S(CH2)rarilo, -S(CH2)rheteroarilo, -SO(CH2)rarilo, -SO(CH2)rheteroarilo, -SO2(CH2)rarilo o SO2(CH2)rheteroarilo;

50 R3 es alquilo, alquenilo, -(CH2)tcicloalquilo, -(CH2)tcicloalquenilo, -(CH2)tarilo, -(CH2)theterociclilo o -(CH2)theteroarilo, en los que cada cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido con alquilo, alquenilo, halógeno, nitro, halogenoalquilo o fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 grupos alquilo, alquenilo, alcoxilo, halógeno o nitro; R5 y R6 son independientemente hidrógeno, alquilo o alquenilo o R5 y R6, tomados conjuntamente con el nitrógeno al

55 que están unidos, forman un anillo heterocíclico o heteroarilo; cada R7 es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, -alquenilo C2-6, -alquinilo C2-6 o acilo;

cada R8 es independientemente hidrógeno o halógeno; cada R9 es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, -alquenilo C2-6 o -alquinilo C2-6, t es 0 o un entero de 1 a 6; y r es 0 o un entero de 1 a 6; en los que cada grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0014] En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un procedimiento in vitro de regulación de la muerte de una célula que comprende poner en contacto dicha célula con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I.

[0015] En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un procedimiento in vitro de inducción de la apoptosis en células indeseadas o dañadas que comprende poner en contacto dichas células indeseadas o dañadas con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I.

[0016] En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I para uso en terapia.

[0017] En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I para uso en un procedimiento de tratamiento y/o profilaxis de una enfermedad o afección mediada por un miembro de Bcl2 prosupervivencia en un mamífero, en el que el procedimiento comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz del compuesto.

[0018] En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I para uso en un procedimiento de tratamiento y/o profilaxis de una enfermedad o afección caracterizada por la persistencia o proliferación inapropiada de células indeseadas o dañadas en un mamífero, en el que el procedimiento comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz del compuesto.

[0019] En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.

[0020] En un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad o afección mediada por un miembro de Bcl-2 prosupervivencia en un mamífero.

[0021] En un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad o afección caracterizada por una persistencia o proliferación inapropiada de células indeseadas o dañadas en un mamífero.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

[0022] La Figura 1 representa gráficamente el efecto del compuesto 1 (Figura 1A) y etopósido (Figura 1B), a concentraciones crecientes, sobre el % de viabilidad de ciertas células de fibroblasto embrionario de ratón (MEF) valorado mediante la captación de yoduro de propidio después de 24 horas. Se introdujeron Noxa y Bad por infección retrovírica de las células como retrovirus pMIG como se describe por Chen y col., 2005.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

[0023] A lo largo de esta memoria descriptiva y las reivindicaciones siguientes, a menos que el contexto requiera otra cosa, la palabra “comprender”, y variaciones tales como “comprende” y “comprendiendo”, se entenderá que significa la inclusión de un entero o etapa o grupo de enteros o etapas señalados, pero no la exclusión de ningún otro entero o etapa o grupo de enteros o etapas. Como se usa en la presente memoria, el término “alquilo” hace referencia a un grupo hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 10 átomos de carbono. Cuando sea apropiado, el grupo alquilo puede tener un número especificado de átomos de carbono, por ejemplo, alquilo C1-6 que incluye grupos alquilo que tienen 1, 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono en disposición lineal o ramificada. Los ejemplos de grupos alquilo adecuados incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, 4-metilbutilo, n-hexilo, 2-metilpentilo, 3metilpentilo, 4-metilpentilo, 5-metilpentilo, 2-etilbutilo, 3-etilbutilo, heptilo, octilo, nonilo y decilo.

[0024] Como se usa en la presente memoria, el término “alquenilo” hace referencia a un grupo hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más doble enlaces entre los átomos de carbono y que tiene de 2 a 10 átomos de carbono. Cuando sea apropiado, el grupo alquenilo puede tener un número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, C2-C6 como en “alquenilo C2-C6” incluye grupos que tienen 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono en disposición lineal o ramificada. Los ejemplos de grupos alquenilo adecuados incluyen, pero sin limitación, etenilo, propenilo, isopropenilo, butenilo, butadienilo, pentenilo, pentadienilo, hexenilo, hexadienilo, heptenilo, octenilo, nonenilo y decenilo.

[0025] Como se usa en la presente memoria, el término “alquinilo” hace referencia a un grupo hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más triples enlaces entre los átomos de carbono y que tiene de 2 a 10 átomos de carbono. Cuando sea apropiado, el grupo alquinilo puede tener un número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, C2-C6 como en “alquinilo C2-C6” incluye grupos que tienen 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono en disposición lineal o ramificada. Los ejemplos de grupos alquinilo adecuados incluyen, pero sin limitación, etinilo, propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, octinilo, noninilo y decinilo.

[0026] Como se usa en la presente memoria, el término “cicloalquilo” hace referencia a un hidrocarburo cíclico saturado. El anillo cicloalquilo puede incluir un número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo cicloalquilo de 3 a 8 miembros incluye 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo adecuados incluyen, pero sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentanilo, ciclohexanilo, cicloheptanilo y ciclooctanilo.

[0027] Como se usa en la presente memoria, el término “cicloalquenilo” hace referencia a un hidrocarburo cíclico que tiene al menos un doble enlace. El anillo cicloalquenilo puede incluir un número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo cicloalquenilo de 4 a 8 miembros contiene al menos un doble enlace y 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquenilo adecuados incluyen, pero sin limitación, ciclopentenilo, ciclopenta-1,3-dienilo, ciclohexenilo, ciclohexen-1,3-dienilo o ciclohexen-1,4-dienilo.

[0028] El término “acilo” usado en la presente memoria hace referencia a un grupo alcanoílo o aroílo como se define por (C=O)R en el que los grupos R adecuados incluyen, pero sin limitación, -alquilo C1-7, -alquenilo C1-7, alquinilo C1-7, -cicloalquilo C3-8, -cicloalquenilo C3-8, arilo, heterociclilo, heteroarilo, -alquil C1-7-arilo, -alquil C1-7cicloalquilo, -alquil C1-7-cicloalquenilo, -alquil C1-7-heterociclilo, -alquil C1-7-heteroarilo, -alcoxi C1-7-alquilo, -alquil C1-7tioalquilo, -alquil C1-7-tioarilo, -alcoxi C1-7-arilo y similares.

[0029] Los términos “alquiloxilo” o “alcoxilo”, “alqueniloxilo”, “alquiniloxilo”, “cicloalquiloxilo”, “cicloalqueniloxilo”, “ariloxilo”, “heterocicliloxilo”, “heteroariloxilo”, “O-alquilo”, “O-alquenilo”, “O-alquinilo”, “O-cicloalquilo”, “Ocicloalquenilo”, “O-arilo”, “O-heterociclilo” y “O-heteroarilo” como se usan en la presente memoria representan un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo o heteroarilo como se define unido mediante un puente de oxígeno. Los ejemplos de grupos alquiloxilo, alqueniloxilo, alquiniloxilo, cicloalquiloxilo, cicloalqueniloxilo, ariloxilo, heterocicliloxilo y heteroariloxilo adecuados incluyen, pero sin limitación, metoxilo, etoxilo, n-propiloxilo, n-butiloxilo, n-pentiloxilo, n-hexiloxilo, eteniloxilo, propeniloxilo, buteniloxilo, penteniloxilo, hexeniloxilo, etiniloxilo, propiniloxilo, butiniloxilo, pentiniloxilo, hexiniloxilo, ciclopentiloxilo, ciclohexiloxilo, ciclopenteniloxilo, ciclohexeniloxilo, fenoxilo, naftoxilo, pirrolidiniloxilo, tetrahidrofuraniloxilo, furaniloxilo y piridiniloxilo.

[0030] Los términos “alquiltio”, “alqueniltio”, “alquiniltio”, “S-alquilo” y “S-alquenilo” como se usan en la presente memoria representan un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo como se define anteriormente unido mediante un puente de azufre. Los ejemplos de alquiltio, alqueniltio y alquiniltio adecuados incluyen, pero sin limitación, metiltio, etiltio, propiltio, butiltio, pentiltio, hexiltio, eteniltio, propeniltio, buteniltio, penteniltio, hexeniltio, etiniltio, propiniltio, butiniltio, pentiniltio y hexiniltio.

[0031] Como se usa en la presente memoria, el término “arilo” se pretende que signifique cualquier anillo de carbonos monocíclico o bicíclico estable de hasta 7 átomos en cada anillo, en el que al menos un anillo es aromático. Los ejemplos de dichos grupos arilo incluyen, pero sin limitación, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo, bifenilo y binaftilo.

[0032] Como se usa en la presente memoria, el término “halógeno” o “halo” hace referencia a flúor (fluoro), cloro (cloro), bromo (bromo) y yodo (yodo).

[0033] El término “heterocíclico” o “heterociclilo” como se usa en la presente memoria hace referencia a un hidrocarburo cíclico en el que se han reemplazado de 1 a 4 átomos de carbono por heteroátomos, independientemente N, S u O. Un anillo heterocíclico puede ser saturado o insaturado. Los ejemplos de grupos heterociclilo adecuados incluyen tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, piranilo, piperidinilo, piperazinilo, pirazolinilo, ditiolilo, oxatiolilo, dioxanilo, dioxinilo, morfolino, tiomorfolino y oxazinilo.

[0034] El término “heteroarilo” como se usa en la presente memoria representa un anillo monocíclico o bicíclico estable de hasta 7 átomos en cada anillo, en el que al menos un anillo es aromático y al menos un anillo contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo consistente en O, N y S. Los grupos heteroarilo dentro del alcance de esta definición incluyen, pero sin limitación, acridinilo, carbazolilo, cinolinilo, quinoxalinilo, pirazolilo, indolilo, benzotriazolilo, furanilo, tienilo, tiofenilo, benzotienilo, benzofuranilo, quinolinilo, isoquinolinilo, oxazolilo, isoxazolilo, imidazolilo, pirazinilo, piridazinilo, piridinilo, pirimidinilo, pirrolilo, tetrahidroquinolina, tiazolilo, isotiazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo y 1,2,4-tiadiazolilo. Los grupos heteroarilo particulares tienen anillos de 5 o 6 miembros, tales como pirazolilo, furanilo, tienilo, oxazolilo, isoxazolilo, imidazolilo, pirazinilo, piridazinilo, piridinilo, pirimidinilo, pirrolilo, tiazolilo, isotiazolilo, 1,2,4-triazolilo y 1,2,4-oxadiazolilo y 1,2,4-tiadiazolilo.

[0035] Cada alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo, tanto como entidad individual como parte de una entidad mayor, puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes opcionales seleccionados del grupo consistente en alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cicloalquilo C3-6, alquil C1-6-oxi(CH2)p-, alquenil C2-6-oxi(CH2)p-, alquinil C2-6-oxi(CH2)p-, cicloalcoxi C3-6(CH2)p-, alquil C1-6-tio(CH2)p-, alquenil C2-6-tio(CH2)p-, alquinil C2-6-tio(CH2)p-, cicloalquil C3-6-tio(CH2)p-, hidroxi(CH2)p-, -(CH2)pSH, (CH2)pCO2H, -(CH2)pCO2-alquilo C1-6, (CH2)pCON(R10)2, acil C2-6(CH2)p-, acil C2-6-oxi(CH2)p-, alquil C2-6-SO2(CH2)p-, alquenil C2-6-SO2(CH2)p-, alquinil C2-6-SO2(CH2)p-, arilSO2(CH2)p-, heteroaril-SO2(CH2)p-, heterociclil-SO2(CH2)p, (CH2)pNH2, -(CH2)pNH-alquilo C1-6, -(CH2)pN(alquilo C1-6)2, -(CH2)pNH(fenilo), -(CH2)pN(fenilo)2, -(CH2)pNH(acilo), (CH2)pN(acil)(fenilo), -(CH2)pNH-(CH2)p-S-arilo, -(CH2)pN=NHC(O)NH2, -(CH2)pC(R11)3, -(CH2)pOC(R11)3, (CH2)pSC(R11)3, -(CH2)pCN, -(CH2)pNO2, -(CH2)phalógeno, -(CH2)pheterociclilo, heterocicliloxi(CH2)p-, (CH2)pheteroarilo, heteroariloxi(CH2)p-, -(CH2)parilo, -(CH2)pC(O)arilo y ariloxi(CH2)p-en los que cada R11 es independientemente hidrógeno o halógeno; cada R10 es independientemente H, alquilo C1-6, fenilo o cicloalquilo o los dos R10, tomados junto con el nitrógeno al que están unidos, pueden formar un anillo heterociclilo o heteroarilo; y p es 0 o un entero de 1 a 6. Los ejemplos de sustituyentes adecuados incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, vinilo, metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, butoxilo, metiltio, etiltiio, propiltio, isopropiltio, butiltio, hidroxilo, hidroximetilo, hidroxietilo, hidroxipropilo, hidroxibutilo, fluoro, cloro, bromo, yodo, ciano, nitro, CO2H, CO2CH3, CH2CO2CH3, trifluorometilo, trifluorometoxilo, trifluorometiltio, acetilo, morfolino, amino, metilamino, dimetilamino, fenilo, fenilcarbonilo, NHCOfenilo, NHCObencilo, en que el anillo fenilo está opcionalmente sustituido con metilo o metoxilo, NHCOetilfenilo, NHCOCH2S-fenilo -N=NHC(O)NH2, -CH=C(CN)2 y fenoxilo. Los sustituyentes particulares incluyen fluoro, cloro, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, terc-butilo, metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, trifluorometilo, trifluorometoxilo, ciano, nitro, acetilo, amino, metilamino, dimetilamino, fenilo y bencilo en que el anillo fenilo o bencilo está opcionalmente sustituido con halógeno, metilo o metoxilo.

[0036] Los compuestos de la invención pueden estar en forma de sales farmacéuticamente aceptables. Se apreciará, sin embargo, que las sales no farmacéuticamente aceptables entran también dentro del alcance de la invención, puesto que estas pueden ser útiles como intermedios en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables o pueden ser útiles durante el almacenamiento o transporte. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen, pero sin limitación, sales de ácidos inorgánicos farmacéuticamente aceptables tales como ácido clorhídrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, carbónico, bórico, sulfámico y bromhídrico, o sales de ácidos orgánicos farmacéuticamente aceptables tales como ácido acético, propiónico, butírico, tartárico, maleico, hidroximaleico, fumárico, maleico, cítrico, láctico, múcico, glucónico, benzoico, succínico, oxálico, fenilacético, metanosulfónico, toluenosulfónico, bencenosulfónico, salicílico, sulfanílico, aspártico, glutámico, edético, esteárico, palmítico, oleico, láurico, pantoténico, tánico, ascórbico y valérico.

[0037] Las sales de bases incluyen, pero sin limitación, aquellas formadas con cationes farmacéuticamente aceptables tales como sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, amonio y alquilamonio.

[0038] Los grupos que contienen nitrógeno básicos pueden cuaternizarse con agentes tales como haluros de alquilo inferiores, tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo como sulfato de dimetilo y dietilo y otros.

[0039] Los compuestos y sales de la invención pueden presentarse en forma de un profármaco. El término “profármaco” se usa en su sentido más amplio y abarca aquellos derivados que se convierten in vivo en los compuestos de la invención. Dichos derivados aparecerán fácilmente para los expertos en la materia, e incluyen Na-aciloxiamidas, derivados de N-(aciloxialcoxicarbonil)amina, ésteres y ésteres de a-aciloxialquilo de fenoles y alcoholes. Un profármaco puede incluir modificaciones en uno o más de los grupos funcionales de un compuesto de la invención.

[0040] El término “profármaco” abarca también la combinación de lípidos con los compuestos de la invención. La presencia de lípidos puede ayudar a la translocación de los compuestos a través de una membrana celular y hasta el citoplasma o núcleo celular. Los lípidos adecuados incluyen ácidos grasos que pueden estar ligados al compuesto mediante la formación de un éster de ácido graso. Los ácidos grasos particulares incluyen, pero sin limitación, ácido laúrico, ácido caproico, ácido palmítico y ácido mirístico.

[0041] La frase “un derivado que puede convertirse in vivo", como se usa con relación a otro grupo funcional, incluye todos aquellos grupos funcionales o derivados que, tras administración a un mamífero, pueden convertirse en el grupo funcional señalado. Los expertos en la materia pueden determinar fácilmente si un grupo puede poder convertirse in vivo en otro grupo funcional usando estudios enzimáticos o animales rutinarios.

[0042] Se reconocerá también que los compuestos de la invención pueden poseer centros asimétricos y, por lo tanto, pueden existir en más de una forma estereoisomérica. La invención se refiere por tanto también a compuestos en forma isomérica sustancialmente pura en uno o más centros asimétricos, por ejemplo, más de aproximadamente un 90% de ee, tal como aproximadamente un 95% o un 97% de ee, o más de un 99% de ee, así como mezclas, incluyendo mezclas racémicas, de las mismas. Dichos isómeros pueden prepararse mediante síntesis asimétrica, por ejemplo usando intermedios quirales, o mediante resolución quiral.

[0043] En realizaciones particulares, se aplica al menos uno de los siguientes con respecto al resto:

5 X es NO2 o -SO2-C(X’)3 en el que X’ es H o halógeno. En una realización particular, X es NO2 o -SO2-CF2X’ en la que X’ es F o Cl. En una realización particular, X es NO2. En una realización particular, X es -SO2-CF3. En una realización particular, X es -SO2-CF2Cl. Z es un grupo cicloalquilo o heterociclilo. En una realización particular, Z es un grupo heterociclilo. En una realización particular, Z es un grupo piperazina, por ejemplo piperazin-1-ilo.

10 R1 y R2 son independientemente arilo, heteroarilo, -NR5R6, -CONR5R6, -O(CH2)rarilo, -O(CH2)rheteroarilo, CO(CH2)rarilo, -CO(CH2)rheteroarilo, -CO2(CH2)rarilo, -CO2(CH2)rheteroarilo, -OCO(CH2)rarilo, OCO(CH2)rheteroarilo, -S(CH2)rarilo, -S(CH2)rheteroarilo, -SO(CH2)rarilo, -SO(CH2)rheteroarilo, -SO2(CH2)rarilo o SO2(CH2)rheteroarilo.

15 [0044] En una realización particular, R1 es arilo, heteroarilo, -S(CH2)rarilo o -S(CH2)rheteroarilo. En una realización particular, R1 es -S(CH2)rarilo o -S(CH2)rheteroarilo. En una realización particular, R’ es –S-arilo o –Sheteroarilo. En una realización particular, R1 es –S-fenilo. En una realización particular, el resto -(CH2)tR1 es -CH2-Sfenilo.

20 [0045] En una realización particular, R2 es -NR5R6 o -CONR5R6. En una realización particular, R2 es N(alquil)(alquilo), -CON(alquil)(alquilo). En una realización particular, el grupo -(CH2)tR2 es -CH2CH2N(CH3)2, CH2CON(CH3)2.

[0046] En una realización particular, R2 es -NR5R6 o -CONR5R6 en que R5 y R6, junto con el átomo de

25 nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico o heteroaromático. En una realización particular, R5 y R6 forman juntos una morfolina, piperidina, piperazina o tiomorfolina. En una realización particular, el grupo -(CH2)tR2 es -CH2CH2(N-morfolina), -CH2CH2(N-piperidina), -CH2CH2(N-piperazina) y -CH2CH2(N-tiomorfolina). En una realización particular, el grupo -(CH2)tR2 es -CH2CH2(N-azepanilo), -CH2CH2(N-oxazapanilo), -CH2CH2(Npirrolidinilo), -CH2CH2(N-7-azabiciclo[2.2.1]heptanilo), -CH2CH2(N-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo). En una

30 realización particular, el grupo -(CH2)tR2 es -CH2CH2N(CH3)2. En una realización particular, el grupo -(CH2)tR2 es CH2CH2(N-morfolina).

[0047] R3 es halógeno, -(CH2)tcicloalquilo, -(CH2)tcicloalquenilo, -(CH2)tarilo, -(CH2)theterociclilo, (CH2)theteroarilo, en los que cada cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo puede estar 35 opcionalmente sustituido con alquilo, alquenilo, halógeno, nitro, haloalquilo o fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2, o 3 grupos alquilo, alquenilo, alcoxilo, halógeno o nitro. En una realización particular, R3 es -(CH2)tarilo opcionalmente sustituido con un grupo fenilo que está opcionalmente sustituido en la posición 4 con un grupo halógeno. En una realización particular, R3 es -(CH2)tarilo sustituido con un grupo fenilo que está sustituido en la posición 4 con un grupo cloro. En una realización particular, R3 es 2-(4-halogenofenil)fenilmetilo. En una realización

40 particular, R3 es 2-(4-clorofenil)fenilmetilo.

[0048] En una realización particular, R3 es:

45 en la que Q es O, CH2, C(alquilo)2 o CH2CH2; R12 es halógeno y R13 y R14 son ambos H o son ambos alquilo. En una realización particular, Q es C(CH3)2. En una realización particular, R12 es Cl. En una realización particular, Q es C(CH3)2 y R13 y R14 son ambos H. En una realización particular, Q es O. En una realización particular, Q es O y R13 y R14 son ambos H. En una realización particular, R3 es:

50 [0049] En una realización particular, R3 es:

R5 y R6 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-6. En una realización particular, R5 y R6 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-3. En una realización particular, R5 y R6, tomados junto con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico o heteroarilo. En una realización particular, R5 y R6 forman un

10 anillo heterocíclico. En una realización particular, R5 y R6 son ambos metilo. En una realización particular, R5 y R6 juntos forman un anillo de morfolina, tiomorfolina, piperidina o piperazina. En una realización particular, R5 y R6 forman juntos un anillo de morfolina.

[0050] t es 0 o un entero de 1 a 5. En una realización particular, t es 0 o un entero de 1 a 3. 15 [0051] r es 0 o un entero de 1 a 5. En una realización particular, r es 0 o un entero de 1 a 3.

[0052] Los compuestos particulares de la invención incluyen:

[0053] Los compuestos de la invención pueden prepararse mediante procedimientos sintéticos conocidos en la materia. Un medio de preparar los compuestos es usar una síntesis convergente, en que se prepara una 5 arilsulfonamida y se prepara un compuesto heterocíclico sustituido y se hacen reaccionar entonces las dos moléculas entre sí formando el compuesto de la invención.

[0054] La porción de arilsulfonamida de la molécula puede prepararse como se muestra en el esquema 1:

10 Esquema 1

[0055] La porción heterocíclica de la molécula puede prepararse como se muestra en el Esquema 2: Esquema 2

[0056] Las dos partes pueden ligarse entre sí como se muestra en el Esquema 3:

[0057] Algunos compuestos de fórmulas:

están comercialmente disponibles, otros pueden prepararse mediante procedimientos conocidos en la materia. Por ejemplo, un compuesto en que el resto heterocíclico incluye un grupo quinazolina puede prepararse como se muestra en el Esquema 4:

Un experto en la materia será consciente de que, durante la síntesis de los compuestos de la invención, algunos

20 sustituyentes pueden ser reactivos en las condiciones usadas y deben enmascararse o protegerse para evitar reacciones secundarias indeseadas. Se proporcionan grupos protectores adecuados para proteger grupos reactivos de reacciones indeseadas en Green y Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”.

[0058] En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento de regulación de la muerte 25 de una célula que comprende poner en contacto dicha célula con una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula

(I) como se define en la presente memoria.

[0059] En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento de inducción de la apoptosis en células indeseadas o dañadas que comprende poner en contacto dichas células indeseadas o dañadas 30 con una cantidad eficaz de compuesto de fórmula (I) como se define en la presente memoria.

[0060] La célula que se trata según un procedimiento de la presente invención puede estar localizada ex vivo

o in vivo. Se entiende por "ex vivo" que la célula se ha retirado del cuerpo de un sujeto, en la que la modulación de

su actividad se iniciará in vitro. Por ejemplo, la célula puede ser una célula que se va a usar como modelo para 35 estudiar uno cualquiera o más de los aspectos de la patogénesis de afecciones que se caracterizan por una señalización aberrante de la muerte celular. En una realización particular, la célula objeto se localiza in vivo.

[0061] En aún otro aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento de tratamiento y/o profilaxis de una enfermedad o afección mediada por un miembro de Bcl-2 prosupervivencia en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se define en la presente memoria.

[0062] En aún otro aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento de tratamiento y/o profilaxis de una enfermedad o afección caracterizada por una persistencia o proliferación inapropiada de células indeseadas o dañadas en un mamífero, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) como se define en la presente memoria.

[0063] En aún otro aspecto de la invención, se proporciona un uso de un compuesto de fórmula (I) como se describe en la presente memoria en la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad o afección mediada por un miembro de Bcl-2 prosupervivencia, o para el tratamiento y/o profilaxis de una enfermedad o afección caracterizada por una persistencia o proliferación indeseada de células indeseadas o dañadas.

[0064] El término “mamífero” como se usa en la presente memoria incluye seres humanos, primates, animales de granja (por ejemplo, ovejas, cerdos, vacas, caballos, burros), animales de ensayo de laboratorio (por ejemplo, ratones, conejos, ratas, conejillos de Indias), animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos) y animales salvajes cautivos (por ejemplo, zorros, canguros, venados). En una realización particular, el mamífero es un ser humano o un animal de ensayo de laboratorio. En una realización particular, el mamífero es un ser humano.

[0065] Como se usa en la presente memoria, el término “enfermedad o afección mediada por un miembro de la familia Bcl-2 prosupervivencia” hace referencia a enfermedades o afecciones en que las células indeseadas o dañadas no se eliminan mediante procesos celulares normales, o a enfermedades o afecciones en que las células experimentan una proliferación aberrante, indeseada o inapropiada. Dichas enfermedades incluyen aquellas relacionadas con la inactivación de la apoptosis (muerte celular), incluyendo trastornos caracterizados por una proliferación celular inapropiada. Los trastornos caracterizados por una proliferación celular inapropiada incluyen, por ejemplo, afecciones inflamatorias tales como inflamación que surge por lesión aguda de tejido incluyendo, por ejemplo, lesión pulmonar aguda, cáncer incluyendo linfomas, tal como hiperplasia prostática, tumores genotípicos, trastornos autoinmunitarios, hipertrofia de tejido, etc. Por ejemplo, las enfermedades o afecciones asociadas a o caracterizadas por una persistencia o proliferación inapropiada de células indeseadas o dañadas incluyen aquellas relacionadas con linfocitos B indeseados o dañados, por ejemplo, linfoma no de Hodgkin de linfocitos B, leucemia linfoblástica aguda de linfocitos B, artritis reumatoide, lupus sistémico eritematoso y artropatías relacionadas. Las enfermedades y afecciones asociadas a o caracterizadas por una persistencia inapropiada de linfocitos T indeseados o dañados incluyen leucemia linfoblástica aguda de linfocitos T, linfoma no de Hodgkin de linfocitos T y enfermedad del injerto contra el hospedador. Las enfermedades y afecciones asociadas a o caracterizadas por una persistencia inapropiada de células mieloides indeseadas o dañadas incluyen leucemia mielogenosa aguda, leucemia mielogenosa crónica y leucemia mielomonocítica crónica. Las enfermedades y afecciones asociadas o caracterizadas por una persistencia inapropiada de células plasmáticas indeseadas o dañadas incluyen mieloma múltiple. Las enfermedades y afecciones asociadas a o caracterizadas por la persistencia inapropiada de células cancerosas indeseadas o dañadas incluyen células de cánceres, especialmente cáncer de ovario, cáncer de mama y cáncer de próstata.

[0066] Una “cantidad eficaz” significa la cantidad necesaria al menos en parte para alcanzar una respuesta deseada, o para retardar el inicio o inhibir la progresión o detener en conjunto el inicio o la progresión de una afección particular que se esté tratando. La cantidad varía dependiendo de la salud y estado físico del individuo para tratar, del grupo taxonómico del individuo para tratar, del grado de protección deseado, de la formulación de la composición, de la valoración de la situación médica y de otros factores relevantes. Se espera que la cantidad entre dentro de en un intervalo relativamente amplio que puede determinarse mediante ensayos rutinarios. Una cantidad eficaz con relación a un paciente humano, por ejemplo, puede encontrarse en el intervalo de aproximadamente 0,1 ng por kg de peso corporal a 1 g por kg de peso corporal por dosificación. En una realización particular, la dosificación está en el intervalo de 1 μg a 1 g por kg de peso corporal por dosificación, tal como en el intervalo de 1 mg a 1 g por kg de peso corporal por dosificación. En una realización, la dosificación está en el intervalo de 1 mg a 500 mg por kg de peso corporal por dosificación. En otra realización, la dosificación está en el intervalo de 1 mg a 250 mg por kg de peso corporal por dosificación. En aún otra realización, la dosificación está en el intervalo de 1 mg a 100 mg por kg de peso corporal por dosificación, tal como hasta 50 mg por kg de peso corporal por dosificación. En aún otra realización, la dosificación está en el intervalo de 1 μg a 1 mg por kg de peso corporal por dosificación. Los regímenes de dosificación pueden ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, pueden administrarse varias dosis divididas al día, a la semana, al mes o en otros intervalos temporales adecuados,

o puede reducirse proporcionalmente la dosis según indiquen las exigencias de la situación.

[0067] La referencia en la presente memoria a “tratamiento” y “profilaxis” ha de considerarse en su contexto más amplio. El término “tratamiento” no implica necesariamente que el sujeto se trate hasta su recuperación completa. De forma similar, “profilaxis” no significa necesariamente que el sujeto no contraiga dado el caso una afección patológica. Por consiguiente, tratamiento y profilaxis incluyen la mejora de los síntomas de una afección particular o la prevención o reducción de otro modo del riesgo de desarrollar una afección particular. El término “profilaxis” puede considerarse que reduce la gravedad o el inicio de una afección particular. El “tratamiento” puede reducir también la gravedad de una afección existente.

[0068] La presente invención contempla además una combinación de terapias, tal como la administración de los compuestos de la invención o sales o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos junto con la sujeción del mamífero a otros agentes o procedimientos que sean útiles en el tratamiento de enfermedades y afecciones caracterizadas por la persistencia o proliferación inapropiada de células indeseadas o dañadas. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden administrarse en combinación con otros fármacos quimioterapéuticos, o con otros tratamientos tales como radioterapia. Los fármacos quimioterapéuticos adecuados incluyen, pero sin limitación, ciclofosfamida, doxorubicina, fosfato de etopósido, paclitaxel, topotecán, camptotecinas, 5-fluorouracilo, tamoxifeno, estaurosporina, avastina, erbitux, imatinib y vincristina.

[0069] Para uso en terapia, un compuesto de la invención puede administrarse como producto químico puro. En una realización particular, el compuesto de la invención se administra en una composición farmacéutica.

[0070] Por tanto, en un aspecto adicional de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) como se define en la presente memoria y al menos un portador farmacéuticamente aceptable. El portador o portadores deben ser “aceptables” en el sentido de ser compatibles con los demás ingredientes de la composición y no perjudiciales para el receptor de la misma.

[0071] Las formulaciones farmacéuticas incluyen aquellas adecuadas para administración oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal o parenteral (incluyendo intramuscular, subcutánea e intravenosa) o en una forma adecuada para administración por inhalación o insuflación. Los compuestos de la invención, junto con un coadyuvante, portador, excipiente o diluyente convencional, pueden disponerse entonces en forma de composiciones farmacéuticas y dosificación unitarias de las mismas, y en dicha forma pueden emplearse como sólidos tales como comprimidos o cápsulas rellenas, o líquidos tales como disoluciones, suspensiones, emulsiones, elixires o cápsulas rellenas con las mismas, todas para uso oral, en forma de supositorios para administración rectal;

o en forma de disoluciones inyectables estériles para uso parenteral (incluyendo subcutáneo). Dichas composiciones farmacéuticas y formas de dosificación unitaria de las mismas pueden comprender ingredientes convencionales en proporciones convencionales, con o sin compuestos o principios activos adicionales, y dichas formas de dosificación unitarias pueden contener cualquier cantidad eficaz adecuada del ingrediente activo proporcional al intervalo de dosificación diaria que se pretenda emplear. Las formulaciones que contienen diez (10) miligramos de ingrediente activo o, más ampliamente, de 0,1 a doscientos (200) miligramos, por comprimidos, son por consiguiente formas de dosificación unitaria representativas adecuadas. Los compuestos de la presente invención pueden administrarse en una amplia variedad de formas de dosificación orales y parenterales. Será obvio para los expertos en la materia que las siguientes formas de dosificación pueden comprender como componente activo cualquiera de un compuesto de la invención o una sal o derivado farmacéuticamente aceptable del compuesto de la invención.

[0072] Para preparar composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos de la presente invención, los portadores farmacéuticamente aceptables pueden ser sólidos o bien líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos, píldoras, cápsulas, sellos, supositorios y gránulos dispersables. Un portador sólido puede ser una o más sustancias que pueden actuar también como diluyentes, agentes aromatizantes, solubilizantes, lubricantes, agentes de suspensión, aglutinantes, conservantes, agentes disgregantes de comprimidos o material encapsulante.

[0073] En polvos, el portador es un sólido finamente dividido que es una mezcla con el componente activo finamente dividido.

[0074] En comprimidos, el componente activo se mezcla con un portador que tenga la capacidad de unión necesaria en proporciones adecuadas y se compacta a la forma y tamaños deseados.

[0075] En una realización particular, los polvos y comprimidos contienen de 5 o 10 a aproximadamente 70% de compuesto activo. Son portadores adecuados carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao y similares. El término “preparación” se pretende que incluya la formulación del compuesto activo con material encapsulante como portador, que proporciona una cápsula en la que el componente activo, con o sin portadores, está rodeado por un portador que por tanto está en asociación con el mismo. Se incluyen de forma similar sellos y trociscos. Pueden usarse comprimidos, polvos, cápsulas, píldoras, sellos y trociscos como formas sólidas adecuadas para administración oral.

[0076] Para preparar supositorios, se funde en primer lugar una cera de bajo punto de fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácido graso o manteca de cacao, y se dispersa el componente activo homogéneamente en la misma, como por agitación. Se vierte entonces la mezcla homogénea fundida en moldes de tamaño conveniente, se dejan enfriar y así solidificar.

[0077] Las formulaciones adecuadas para administración vaginal pueden presentarse como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o pulverizadores que contienen, además del ingrediente activo, portadores tales como son conocidos en la materia por ser apropiados.

[0078] Las preparaciones en forma líquida incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones, por ejemplo, agua o disoluciones de agua y propilenglicol. Por ejemplo, las preparaciones líquidas de inyección parenteral pueden formularse como disoluciones en disolución acuosa de polietilenglicol.

[0079] Los compuestos según la presente invención pueden formularse por tanto para administración parenteral (por ejemplo, mediante inyección, por ejemplo inyección embolada o infusión continua) y pueden presentarse en forma de dosificación unitaria en ampollas, jeringuillas prellenadas, infusión de pequeño volumen o envases multidosis con un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, disoluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Como alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo, obtenido mediante aislamiento aséptico de un sólido estéril o mediante liofilización a partir de una disolución, para constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril exenta de pirógeno, antes del uso.

[0080] Las disoluciones acuosas adecuadas para uso oral pueden prepararse disolviendo el componente activo en agua y añadiendo agentes colorantes, aromatizantes, estabilizantes y espesantes adecuados, según se desee.

[0081] Pueden hacerse suspensiones acuosas adecuadas para uso oral dispersando el componente activo finamente dividido en agua con material viscoso tal como gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio u otros agentes de suspensión bien conocidos.

[0082] Se incluyen también preparaciones en forma sólida que se pretende convertir, justo antes del uso, en preparaciones de forma líquida para administración oral. Dichas formas líquidas incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones. Estas preparaciones pueden contener, además del componente activo, colorantes, aromas, estabilizantes, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes y similares.

[0083] Para administración tópica a la epidermis, los compuestos según la invención pueden formularse como pomadas, cremas o lociones, o como parche transdérmico. Las pomadas y cremas pueden formularse, por ejemplo, con una base acuosa u oleosa con la adición de agentes espesantes y/o gelificantes adecuados. Las lociones pueden formularse con una base acuosa u oleosa y contendrán en general también uno o más agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes o agentes colorantes.

[0084] Las formulaciones adecuadas para administración tópica a la boca incluyen trociscos que comprenden agente activo en una base aromatizada, habitualmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa y goma arábiga; y colutorios que comprenden el ingrediente activo en un portador líquido adecuado.

[0085] Las disoluciones o suspensiones se aplican directamente a la cavidad nasal por medios convencionales, por ejemplo, con un gotero, pipeta o pulverizador. Las formulaciones pueden proporcionarse en forma monodosis o multidosis. En el último caso de un gotero o pipeta, esto puede conseguirse por el paciente administrando un volumen predeterminado adecuado de la disolución o suspensión. En el caso de un pulverizador, esto puede conseguirse, por ejemplo, mediante una bomba pulverizadora de atomización medida. Para mejorar el suministro y retención nasales, los compuestos según la invención pueden encapsularse con ciclodextrinas, o formularse con agentes que se espera que potencien el suministro y la retención en la mucosa nasal.

[0086] La administración al tracto respiratorio puede conseguirse también mediante una formulación de aerosol en que el ingrediente activo se proporciona en un envase a presión con un propelente adecuado tal como un clorofluorocarburo (CFC), por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano o diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. El aerosol puede contener convenientemente también un tensioactivo tal como lecitina. La dosis de fármaco puede controlarse mediante la provisión de una válvula de medida.

[0087] Como alternativa, los ingredientes activos pueden proporcionarse en forma de un polvo seco, por ejemplo una mezcla en polvo del compuesto en una base de polvo adecuada tal como lactosa, almidón, derivados de almidón tales como hidroxipropilmetilcelulosa y polivinilpirrolidona (PVP).

[0088] Convenientemente, el portador en polvo formará un gel en la cavidad nasal. La composición en polvo puede presentarse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo en cápsulas o cartuchos de, por ejemplo, gelatina o envases de tipo blíster desde los que puede administrarse el polvo mediante un inhalador.

[0089] En formulaciones pretendidas para administración al tracto respiratorio, incluyendo formulaciones intranasales, el compuesto tendrá generalmente un tamaño de partícula pequeño, por ejemplo del orden de 1 a 10 μm o menos. Dicho tamaño de partícula puede obtenerse por medios conocidos en la materia, por ejemplo mediante

5 micronización.

[0090] Cuando se desee, pueden emplearse formulaciones adaptadas para dar una liberación mantenida del ingrediente activo.

10 [0091] En una realización particular, las preparaciones farmacéuticas están en formas de dosificación unitaria. En dicha forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de preparación, tal como comprimidos envasados, cápsulas y polvos en viales o ampollas. La forma de dosificación unitaria puede ser también una cápsula, comprimido, sello o trocisco mismo, o puede ser el número

15 apropiado de cualquiera de estos en forma envasada.

[0092] Son composiciones farmacéuticas particulares líquidos o polvos para administración nasal, comprimidos o cápsulas para administración oral y líquidos para administración intravenosa.

20 [0093] La invención se describirá ahora con referencia a los siguientes ejemplos, que ilustran algunos aspectos y realizaciones particulares de la presente invención. Sin embargo, ha de entenderse que la particularidad de la siguiente descripción de la invención es no reemplazar la generalidad de la descripción precedente de la invención.

25 EJEMPLOS

Ejemplo 1. 4-Fluoro-3-(trifluorometilsulfonil)bencenosulfonamida

[0094]

[0095] Se preparó el intermedio 4-fluoro-3-(trifluorometilsulfonil)bencenosulfonamida según los procedimientos descritos en la publicación de patente de Estados Unidos número US2007/0027135. Se saturó con

35 yoduro de trifluorometilo clorhidrato de metilviológeno (0,51 g) en DMF (35 ml) a 25ºC, se trató con 2fluorobencenotiol a (5,1 g, 4,24 ml) y TEA (8,8 ml), se agitó durante 22 horas, se diluyó con agua (240 ml) y se extrajo con dietiléter. Se lavó el extracto con NaOH 1 M, cloruro de amonio saturado y salmuera y se concentró, dando 5,33 g del intermedio b (68% de rendimiento).

40 [0096] Se trató el intermedio b (5,33 g) en tetracloruro de carbono/acetonitrilo/agua 1:1:2 (336 ml) a 35ºC con peryodato de sodio (23,86 g) y cloruro de rutenio (III) hidratado (77 mg), se agitó durante 18 horas, se diluyó con diclorometano (50 ml) y se filtró a través de tierra de diatomeas (Celite®). Se lavó el filtrado y con bicarbonato de sodio saturado y se extrajo con diclorometano. Se lavó el extracto con salmuera y se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. Se filtró el concentrado a través de gel de sílice, dando 6,52 g de intermedio c (77% de rendimiento).

45 [0097] Se agitó el intermedio c (6,42 g) en ácido clorosulfónico (5,6 ml) a 120ºC durante 18 horas, se enfrió a 25ºC y se pipeteó sobre hielo triturado. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo, se lavó el extracto con agua y salmuera y se secó (MgSO4), se filtró y se concentró, dando 5,71 g de intermedio d (62% de rendimiento).

[0098] Se trató el intermedio d (5,71 g) en isopropanol (175 ml) a -78ºC con hidróxido de amonio (24 ml) durante 1 hora, se agitó durante 1 hora, se inactivó con HCl 6 M (88 ml), se calentó a 25ºC y se concentró. Se

5 mezcló el concentrado con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se secó el extracto (MgSO4), se filtró y se concentró. Se recristalizó el concentrado con acetato de etilo/hexano, dando 4,33 g de intermedio 4-fluoro-3(trifluorometilsulfonil)bencenosulfonamida (80% de rendimiento).

Ejemplo 2. (R)-4-(4-Morfolino-1-(feniltio)butan-2-ilamino)-3-nitrobencenosulfonamida

[0099]

15 [0100] Se añadió ácido (R)-aspártico a (65 g, 489 mmol) a una disolución de NaOH (6 M, 500 ml) en H2O destilada para ajustar a pH= 13 la disolución a 0ºC, se añadieron entonces 1,7 eq. de cloroformiato de bencilo (141 g, 831 mmol) con agitación magnética. Se calentó la mezcla a temperatura ambiente y se dejó reaccionar durante 2 días. Posteriormente, se lavó la mezcla con éter, se acidificó la fase acuosa con HCl 6 N y se extrajo entonces con

20 AcOEt. Finalmente, se secó la fase orgánica sobre Na2SO4 seco, se filtró a través de papel de filtro y se concentró en rotavapor. Se obtuvieron 80 g de producto b en forma de un residuo transparente incoloro y pegajoso (rendimiento: 59%). EM (IEP) m/e (M-H-): 266; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,27-7,21 (m, 5H), 6,14 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,05 (s, 2H), 4,60 (m, 1H), 2,99 (m, 1H), 2,75 (m, 1H).

25 [0101] Se trató una suspensión agitada del intermedio b (80 g, 300 mmol) en AcOEt (500 ml) gota a gota con cloruro de tionilo (71 g, 600 mmol), se agitó la mezcla homogénea resultante a temperatura ambiente durante 16 horas y se concentró. Se trituró el sólido resultante en dietiléter/hexanos 1:1 durante 2 horas y se filtró. Se secó el sólido, proporcionando el producto c deseado (60 g, rendimiento: 80%). EM (IEP) m/e (M+H+): 250.

30 [0102] Se enfrió a 0ºC una suspensión agitada de NaBH4 (5,8 g, 154 mmol) en THF (100 ml), se trató gota a gota con una disolución de compuesto c (32 g, 128 mmol) en 50 ml de THF, se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Se trató la mezcla resultante con HCl concentrado (26,2 ml) y etanol (26,2 ml), se calentó a reflujo durante 12 horas, se dejó enfriar a temperatura ambiente, se vertió en salmuera y se separaron las fases. Se extrajo la fase acuosa con AE y se secaron los extractos combinados, se filtraron, se concentraron y se purificaron mediante sílice, proporcionando el producto d deseado (17 g, rendimiento: 57%) EM (IEP) m/e (M+H+): 236; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,33-7,28 (m, 5H), 5,32 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,49 (s a, 2H), 4,22 (m, 1H), 2,84 (dd, J = 7,6 18Hz, 1H), 2,45 (dd, J = 2,8 17,6Hz, 1H).

[0103] Se agitó a 70ºC durante 18 horas una disolución del intermedio d (27 g, 115 mmol) y morfolina (20 g, 230 mmol) en 200 ml de dioxano y se concentró, se añadió AcOEt (500 ml) y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró, proporcionando el producto e en forma de un aceite, que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional (31 g, 84%). EM (IEP) m/e (M+H+): 323; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,38-7,31 (m, 5H), 5,85 (m, 1H), 5,12 (s a, 2H), 3,92 (m, 1H), 3,71-3,49 (m, 10H), 2,91 (m, 1H), 2,50 (m, 1H). Se añadió cloruro de metanosulfonilo (7,9 g, 68 mmol) (diluido 1:1 en DCM) a una disolución del intermedio e (20 g, 62 mmol) y trietilamina (6,9 g, 68 mmol) en DCM seco (300 ml) manteniendo la temperatura <10ºC. Después de la adición, se agitó la reacción durante 1 hora a 0ºC. Tras la terminación, se inactivó la reacción con agua (50 ml). Se desechó la fase acuosa y se secó la fase orgánica sobre Na2SO4. Se retiró el disolvente a vacío, dando el producto f en forma de un aceite amarillo, que se usó para la siguiente etapa sin purificación. EM (IEP) m/e (M+H+): 401.

[0104] Se añadió NaH (2,7 g, 68 mmol) en porciones a una disolución de PhSH (7,5 g, 68 mmol) en THF seco (300 ml) en baño de hielo y agua manteniendo la temperatura <10ºC durante 1 hora, se añadió entonces gota a gota la disolución de intermedio f y se agitó la reacción durante otras 1,5 horas a ta. Tras la terminación, se inactivó la reacción con agua (100 ml) y AcOEt (200 ml). Se desechó la fase acuosa, se lavó la fase orgánica con salmuera y se secó sobre Na2SO4. Se retiró el disolvente a vacío, dando el producto bruto que se purificó por columna, proporcionando 12 g del intermedio g deseado (rendimiento: 47%). EM (IEP) m/e (M+H+): 415.

[0105] Se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente una disolución de intermedio g (4 g, 9,7 mmol) en 30% de HBr en ácido acético (40 ml), se concentró a la mitad de su volumen y se vertió en HCl 1 M (40 ml). Se lavaron las fases acuosas combinadas con éter (3X50 ml), se enfriaron a 0ºC, se ajustaron a pH 12 con KOH sólido y se extrajeron con CH2Cl2. Se lavaron los extractos combinados con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron, proporcionando el producto h deseado (2,5 g, rendimiento: 93%). EM (IEP) m/e (M+H+): 281; RMN1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,31 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,21 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,12 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,58-3,50 (m, 6H), 3,38-3,30 (m, 3H), 3,05 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,28 (m, 1H).

[0106] Se trató una disolución de intermedio h (2,5 g, 8,9 mmol) e intermedio i (1,96 g, 8,9 mmol) en 100 ml de dioxano con Et3N (1,8 g, 17,8 mmol), se calentó a reflujo durante una noche, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con PE:AE= (1:1), proporcionando el producto i deseado (3,6 g, rendimiento: 84%). EM (IEP) m/e (M+H+): 481; RMN-1H (DMSO, 400 MHz): 5 8,66 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,69 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,41-7,21 (m, 5H), 7,15 (m, 1H), 7,05 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,39 (m, 1H), 3,52-3,36 (m, 10H), 2,96 (m, 1H), 2,76 (m, 1H).

[0107] Se calentó a 55ºC una disolución del intermedio i (2,0 g, 4,2 mmol) en 100 ml de THF seco y se trató gota a gota con una disolución de borano 1 M (19 ml) en THF durante un periodo de 1 hora. Se agitó la mezcla de reacción resultante a 55ºC durante 18 horas, se enfrió a 0ºC, se trató gota a gota con metanol y se concentró. Se disolvió el residuo bruto en metanol, se trató con HCl metabólico y se calentó a reflujo durante 24 horas. Se dejó enfriar la mezcla a temperatura ambiente, se concentró, se diluyó con NaOH 2 M y se extrajo con AcOEt. Se lavaron los extractos combinados con NaOH 1 M y salmuera, se secaron, se filtraron, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía en sílice eluyendo con CH2Cl2: MeOH= (10:1), proporcionando el intermedio (R)-4-(4morfolino-1-(feniltio)butan-2-ilamino)-3-nitrobencenosulfonamida deseado (1,3 g, rendimiento: 66%). EM (IEP) m/e (M+H+): 467; RMN-1H (DMSO, 400 MHz): 5 8,38 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,68 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,29-7,26 (m, 3H), 7,23 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,13 (m, 1H), 3,48 (s a, 4H), 3,36 (m, 2H), 2,43 (s a, 4H), 2,18 (s a, 2H), 2,49 (m, 2H), 1,93 (m, 1H), 1,82 (m, 1H).

Ejemplo 3. (R)-4-(4-(Dimetilamino)-1-(feniltio)butan-2-ilamino)-3-nitrobencenosulfonamida [0108]

[0109] Se añadió ácido (R)-aspártico a (65 g, 489 mmol) a una disolución de NaOH (6 M, 500 ml) en H2O destilada para ajustar la disolución a pH= 13 a 0ºC, se añadieron entonces 1,7 eq. de cloroformiato de bencilo (141 g, 831 mmol) con agitación magnética. Se calentó la mezcla a temperatura ambiente y se dejó reaccionar durante 2

10 días. Posteriormente, se lavó la mezcla con éter, se acidificó la fase acuosa con HCl 6 N y se extrajo entonces con AcOEt. Finalmente, se secó la fase orgánica sobre Na2SO4 seco, se filtró a través de papel de filtro y se concentró en rotavapor. Se obtuvieron 80 g de producto b en forma de un residuo transparente incoloro y pegajoso (rendimiento 59%). EM (IEP) m/e (M-H-): 266; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,27-7,21 (m, 5H), 6,14 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,05 (s, 2H), 4,60 (m, 1H), 2,99 (m, 1H), 2,75 (m, 1H).

15 [0110] Se trató una suspensión agitada de compuesto b (80 g, 300 mmol) en AcOEt (500 ml) gota a gota con cloruro de tionilo (71 g, 600 mmol), se agitó la mezcla homogénea resultante a temperatura ambiente durante 16 horas y se concentró. Se trituró el sólido resultante con dietiléter/hexanos 1:1 durante 2 horas y se filtró. Se secó el sólido, proporcionando el producto c deseado (60 g, rendimiento: 80 %). EM (IEP) m/e (M+H+): 250.

20 [0111] Se enfrió a 0ºC una suspensión agitada de NaBH4 (5,8 g, 154 mmol) en THF (100 ml), se trató gota a gota con una disolución de compuesto c (32 g, 128 mmol) en 50 ml de THF, se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Se trató la mezcla resultante con HCl concentrado (26,2 ml) y etanol (26,2 ml), se calentó a reflujo durante 12 horas, se dejó enfriar a temperatura ambiente, se vertió en salmuera y se separaron las fases.

25 Se extrajo la fase acuosa con AE y se secaron los extractos combinados, se filtraron, se concentraron y se purificaron por sílice, proporcionando el producto d deseado (17 g, rendimiento: 57%) EM (IEP) m/e (M-H-): 236; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,33-7,28 (m, 5H), 5,32 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,49 (s a, 2H), 4,22 (m, 1H), 2,84 (dd, J = 7,6 18Hz, 1H), 2,45 (dd, J = 2,8 17,6Hz, 1H).

30 [0112] Se agitó una disolución del compuesto e (30 g, 127 mmol) y Me2NH (en exceso) en 200 ml de dioxano a 0ºC durante 24 horas y se concentró, se añadió AcOEt (500 ml) y se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. Se preparó el aceite resultante e para la siguiente etapa sin purificación adicional (32 g, 90%). EM (IEP) m/e (M+H+): 281; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,35-7,27 (m, 5H), 5,89 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 3,97 (m, 1H), 3,78-3,67 (m, 2H), 2,77-2,62 (m, 2H).

[0113] Se añadió cloruro de metanosulfonilo (8,9 g, 78 mmol) (diluido 1:1 en DCM) a una disolución del compuesto e (20 g, 71 mmol) y trietilamina (7,9 g, 78 mmol) en DCM seco (300 ml), manteniendo la temperatura

5 <10ºC. Después de la adición, se agitó la reacción durante 1 hora a 0ºC. Tras la terminación, se inactivó la reacción con agua (50 ml). Se desechó la fase acuosa y se secó la fase orgánica sobre Na2SO4. Se retiró el disolvente a vacío, proporcionando f en forma de un aceite amarillo que se usó para la siguiente etapa sin purificación. EM (IEP) m/e (M+H+): 359.

10 [0114] Se añadió NaH (3,1 g, 78 mmol) a una disolución de PhSH (8,6 g, 78 mmol) en THF seco (300 ml) en baño de hielo y agua, manteniendo la temperatura < 10ºC durante 1 hora, se añadió entonces gota a gota la disolución del compuesto f y se agitó la reacción durante otras 1,5 horas a ta. Tras la terminación, se inactivó la reacción con agua (100 ml) y AcOEt (200 ml). Se desechó la fase acuosa, se lavó la fase orgánica con salmuera y se secó sobre Na2SO4. Se retiró el disolvente a vacío y se purificó el producto g por columna (14 g, rendimiento:

15 48%). EM (IEP) m/e (M+H+): 373; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,33-7,10 (m, 10H), 6,19 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,01 (s, 2H), 3,97 (m, 1H), 3,70 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 3,56 (d, J = 4,4 Hz, 3H), 3,28 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 2,81 (m, 1H), 2,45 (m, 1H).

[0115] Se agitó una disolución del compuesto g (4 g, 11 mmol) en 30% de HBr en ácido acético (40 ml) a

20 temperatura ambiente, se concentró a la mitad de su volumen y se vertió en HCl 1 M (40 ml). Se lavaron las fases acuosas combinadas con éter (3X50 ml) y se enfriaron a 0ºC, se ajustaron a pH 12 con KOH sólido y se extrajeron con CH2Cl2. Se lavaron los extractos combinados con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron, proporcionando el producto h deseado (1,8 g, rendimiento: 72%). EM (IEP) m/e (M+H+): 239; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 7,30 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,21 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,30 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,36 (m, 1H), 3,04 (m, 1H), 2,85 (m,

25 1H), 2,88 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,51 (m, 1H), 2,30(m, 1H).

[0116] Se trató una disolución de compuesto h (1,8 g, 7,6 mmol) y de compuesto i (1,7 g, 7,6 mmol) en dioxano con Et3N (1,5 g, 15,2 mmol), se calentó a reflujo durante una noche, se concentró y se purificó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con PE:AE= (1:1), proporcionando el producto j deseado (2,3 g, rendimiento:

30 76%). EM (IEP) m/e (M+H+): 439; RMN-1H (DMSO, 400 MHz): 5 8,74 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,67 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,41-7,04 (m, 7H), 4,36 (m, 1H), 3,36 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 3,15 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,86 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 2,73 (m, 1H).

[0117] Se calentó a 55ºC una disolución del compuesto j (2,5 g, 5,7 mmol) en 100 ml de THF seco y se trató

35 gota a gota con una disolución de borano 1 M (25 ml) en THF durante un periodo de 1 hora. Se agitó la mezcla de reacción resultante a 55ºC durante 18 horas, se enfrió a 0ºC, se trató gota a gota con metanol y se concentró. Se disolvió el residuo bruto en metanol, se trató con HCl metanólico y se calentó a reflujo durante 24 horas. Se dejó enfriar la mezcla a temperatura ambiente, se concentró, se diluyó con NaOH 2 M y se extrajo con AcOEt. Se lavaron los extractos combinados con NaOH 1 M y salmuera, se secaron, se filtraron, se concentraron y se purificaron por

40 cromatografía en sílice eluyendo con CH2Cl2:MeOH= (10:1), proporcionando el producto deseado, (R)-4-(4(dimetilamino)-1-(feniltio)butan-2-ilamino)-3-nitrobencenosulfonamida (1,2 g, rendimiento: 46%). EM (IEP) m/e (M+H+): 425; RMN-1H (CDCl3, 400 MHz): 5 9,05 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,72 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 7,30-7,2 (m, 3H), 6,72 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 4,00 (m, 1H), 3,14 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 2,49 (m, 1H), 2,32 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,84 (m, 1H).

45 Ejemplo 4. 4-((R)-3-Morfolin-4-il-1-fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida

[0118]

[0119] Se agitaron a 50ºC durante 4 h la sulfonamida a (1,63 mmol), amina b (1,63 mmol) y diisopropiletilamina (3,26 mmol) en dioxano. Se trató la mezcla con una disolución de hidrogenocarbonato de sodio 55 al 10% (30 ml) y se extrajo entonces la disolución acuosa con acetato de etilo (2 x 20 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío. Se aplicó el residuo resultante a cromatografía de sílice en gradiente eluyendo con 100% de diclorometano a 5% de metanol/diclorometano, proporcionando 4-((R)-3-morfolin-4-il-3-oxo-1

fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida c en forma de un sólido blanco (77%). RMN-1H (300 MHz, DMSO): 5 7,97 (1H, d, J 2,2 Hz), 7,83 (1H, dd, J 9,2 y 2,2 Hz), 7,39-7,27 (7H, m, ArH), 7,21 (1H, tt, J 6,8 y 1,65 Hz), 7,00 (1H, d a, J 9,5 Hz), 4,38-4,25 (1H, m), 3,40-3,27 (2H, m), 3,50-3,37 (10H, m), 2,94 (1H, dd, J 16,8 y 5,8 Hz), 2,71 (1H, dd, J 16,8 y 5,1 Hz). CLEM- tr 7,17, M+H 568.

5 [0120] Se añadió gota a gota complejo de borano-tetrahidrofurano (4,21 mmol) durante 2 h al intermedio amida c (1,24 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. Se agitó entonces la disolución a 55ºC durante 24 h. Se enfrió la disolución a 0ºC y se trató con metanol (2 ml). Se añadió a esta mezcla ácido clorhídrico concentrado (0,5 ml) y se calentó la disolución a 65ºC durante 10 h. Se concentró

10 entonces la disolución a vacío y se vertió en una disolución de hidróxido de sodio 2 N (10 ml). Se extrajo entonces la fase acuosa con acetato de etilo (2 x 10 ml), se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío. Se aplicó el residuo resultante a cromatografía de gel en gradiente eluyendo con 100% de diclorometano a 10% de metanol/diclorometano, proporcionando el intermedio 4-((R)-3-morfolin-4-il-1-fenilsulfanilmetilpropilamino)-3trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida en forma de un sólido blanco (76%). RMN-1H (300 MHz, DMSO): 5 7,97

15 (1H, d, J 2,2 Hz), 7,83 (1H, dd, J 9,2 y 2,3 Hz), 7,35-7,26 (6H, m, ArH), 7,20 (1H, tt, J 7,0 y 1,8 Hz), 7,04 (1H, d, J 9,6 Hz), 6,89 (1H, d a, J 9,1 Hz), 4,12-4,02 (1H, m), 3,49 (4H, s a), 3,37-3,22 (2H, m), 2,33-2,14 (6H, m), 1,94-1,88 (1H, m), 1,76-1,70 (1H, m). CLEM- tr-5,69, M+H 554. Ejemplo 5. 4-((R)-3-Dimetilamino-1-fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida

20 [0121]

[0122] Se agitaron a 50ºC durante 4 h la sulfonamida a (1,63 mmol), amina b (1,63 mmol) y

25 diisopropiletilamina (3,26 mmol) en dioxano. Se trató la mezcla con una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10% (30 ml) y se extrajo entonces la disolución acuosa con acetato de etilo (2 x 20 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío. Se aplicó el residuo resultante a cromatografía de sílice en gradiente eluyendo con 100% de diclorometano a 5% de metanol/diclorometano, proporcionando el intermedio c (R)-N,N-dimetil-4fenilsulfanil-3-(4-sulfamoil-2-trifluorometanosulfonil-1-fenilamino)butiramida en forma de una espuma blanca (84%).

30 RMN-1H (300 MHz, DMSO): 5 7,97 (1H, d, J 2,2 Hz), 7,83 (1H, dd, J 9,2 y 2,2 Hz), 7,47 (1H, d a, J 8,7 Hz), 7,37-7,30 (6H, m, ArH), 7,21 (1H, tt, J 6,8 y 1,65 Hz), 6, 99 (1H, d a, J 9,5 Hz), 4,38-4,25 (1H, m), 3,40-3,27 (2H, m), 2,91 (1H, dd, J 17,2 y 5,6 Hz), 2,86 (3H, s), 2,76 (3H, s), 2,68 (1H, dd, J 16,7 y 5,0 Hz). CLEM- tr-7,24, M+H 526.

[0123] Se añadió gota a gota complejo de borano-tetrahidrofurano (4,21 mmol) durante 2 h al intermedio c

35 (1,24 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. Se agitó entonces la disolución a 55ºC durante 24 h. Se enfrió la disolución a 0ºC y se trató con metanol (2 ml). Se añadió a esta mezcla ácido clorhídrico concentrado (0,5 ml) y se calentó la disolución a 65ºC durante 10 h. Se concentró entonces la disolución a vacío y se vertió en una disolución de hidróxido de sodio 2 N (10 ml). Se extrajo entonces la fase acuosa con acetato de etilo (2 x 10 ml), se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío. Se aplicó el

40 residuo resultante a cromatografía de sílice en gradiente eluyendo con 100% de diclorometano a 10% de metanol/diclorometano, proporcionando 4-((R)-3-dimetilamino-1-fenilsulfanilmetilpropilamino)-3trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida en forma de un aceite incoloro (67%). RMN-1H (300 MHz, DMSO): 5 7,97 (1H, d, J 2,2 Hz), 7,81 (1H, dd, J 9,3 y 2,2 Hz), 7,40-7,26 (7H, m, ArH), 7,21 (1H, tt, J 6,8 y 1,65 Hz), 6,97 (1H, d a, J 9,5 Hz), 4,07-4,00 (1H, m), 3,32 (1H, dd, J 13,8 y 6,1 Hz), 3,22 (1H, dd, J 13,8 y 6,4 Hz), 2,42-2,33 (1H, m), 2,19

45 2,07 (1H, m), 1,92-1,85 (1H, m), 1,77-1,70 (1H, m). CLEM- tr-5,68, M+H 512.

Ejemplo 6. 7-(Piperazin-1-il)quinazolin-4-ol [0124]

[0125] Se agitaron 2,4-dinitrobenzonitrilo (10 g) y Boc-piperazina (20 g, aprox. 2 eq) en DMSO (60 ml) durante 3 días a temperatura ambiente. Se repartió entonces la mezcla de reacción marrón oscura entre acetato de etilo (aprox. 400 ml) y agua (aprox. 2 x 100 ml) [nota: a veces se requirió calentamiento para evitar que el producto

10 cristalizara de la fase orgánica]. Se concentró la fase orgánica separada y secada, se trituró el residuo con éter y se filtró, dando el intermedio b (1ª recogida 8 g, 47% de rendimiento), en forma de un polvo amarillo oscuro. Se obtuvo una 2ª recogida del sobrenadante de acetato de etilo-éter por reposo después de tener lugar cierta evaporación (2ª recogida, 1,7 g, 10%).

15 [0126] Se redujo el intermedio b (3 g) a la anilina c usando hierro en polvo (2 g) en ácido acético (20 ml) a 60ºC con agitación rápida. Se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo (aprox. 60 ml), se filtró dos veces a través de Celite y se retiró el ácido acético con un lavado básico usando NaOH ac. aprox. 6 M. Se separó la fase orgánica lavada, se secó y se concentró, dando el intermedio c (52-72% de rendimiento) en forma de un polvo amarillo pálido.

20 [0127] Se trató el intermedio c (1,5 g) en MeOCH2CH2OH (10 ml) a 120ºC en porciones (4 x 2,5 eq. durante un periodo de 1 hora) con acetato de formamidina y se calentó el conjunto durante 6 horas adicionales, volviéndose durante dicho tiempo la mezcla de reacción heterogénea debido a la formación de producto. Después de reposar durante una noche a temperatura ambiente, se agitó la mezcla de reacción con éter (aprox. 40 ml), se filtró y se lavó

25 la torta de filtrado adicionalmente con éter, se suspendió entonces en agua (aprox. 40 ml) y se volvió a filtrar, dando el intermedio d en forma de un polvo incoloro (aprox. 1,1 g, 69%). Tras el reposo, el filtrado después de la evaporación de la fase orgánica, dio una recogida adicional de producto bruto (aprox. 22%).

[0128] Se añadió cuidadosamente el intermedio d (4 mmol) con agitación rápida [nota: apareció una fuerte

30 efervescencia] a HBr ac. aprox. 6 M (aprox. 5-6 ml) para retirar inicialmente el grupo Boc, dando el intermedio V. La agitación y calentamiento adicionales a 130ºC en un recipiente tapado durante 3 h dieron el producto hidrolizado dibromhidrato de 7-(piperazin-1-il)quinazolin-4-ol en forma de agujas incoloras (97%) después de añadir la mezcla de reacción en caliente a metanol caliente (aprox. 50 ml), dejar enfriar el conjunto durante una noche y filtrar [nota: un enfriamiento demasiado rápido conducía a un gel intratable]. M+ 231.

Ejemplo 7. 2-Bromometil-4’-clorobifenilo [0129]

[0130] Se agitaron a 40ºC durante 30 min 2-bromobenzaldehído a (19 mmol), ácido 4-clorofenilborónico b (19 mmol), yoduro de tetrabutilamonio (0,19 mmol), carbonato de potasio (57 mmol) y acetato de paladio (0,12 mmol) en mezcla de acetona/agua (25 ml/25 ml). Se repartió la mezcla entre acetato de etilo y agua y se separaron las fases.

10 Se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío. Se aplicó el residuo resultante a cromatografía de sílice en gradiente eluyendo con 100% de éter de petróleo a 5% de acetato de etilo/éter de petróleo, proporcionando el intermedio c 4’-clorobifenil-2-carbaldehído en forma de un aceite incoloro (76%). RMN-1H (300 MHz, CDCl3) 5 9,96 (1H, s), 8,02 (1H, dd, J 7,8 y 1,0 Hz), 7,64-7,30 (7H, m, ArH).

15 [0131] Se añadió borohidruro de sodio (11,5 mmol) a una mezcla del aldehído (2,3 mmol) en una mezcla de tetrahidrofurano y etanol (7,5 ml/7,5 ml) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla durante 30 min y se inactivó entonces mediante la adición de agua fría. Se ajustó el pH a pH 5-6 y se agitó la disolución durante 15 min. Se añadió dietiléter (20 ml) a la disolución y se separaron las fases. Se extrajo la disolución acuosa una vez más con dietiléter (20 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas (MgSO4) y se concentraron a vacío, proporcionando el

20 intermedio d 4’-clorobifenil-2-ilmetanol en forma de un aceite incoloro (al 95%). El compuesto era de suficiente pureza para usarse en la siguiente etapa sin purificación adicional. RMN-1H (300 MHz, DMSO): 5 7,56-7,18 (8H, m, ArH), 5,1 (1H, s a, OH) y 4,36 (2H, s, ArCH2).

[0132] Se añadió lentamente tribromuro de fósforo (4,6 mmol) en diclorometano (10 ml) a una disolución del

25 alcohol d (4,6 mmol) en diclorometano seco (40 ml) a 0ºC. Se dejó agitar la disolución durante 1 h a 0ºC y se inactivó entonces mediante la adición de agua fría. Se separaron las fases y se extrajo entonces la acuosa con diclorometano (20 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas (MgSO4) y se concentraron a vacío. El secado adicional proporcionó el intermedio 2-bromometil-4’-clorobifenilo en forma de un sólido blanco (80%). El compuesto era de suficiente pureza para usarse en la siguiente etapa sin purificación adicional. RMN-1H (300 MHz, CDCl3):

30 5 7,56-7,23 (8H, m, ArH) y 4,44 (2H, s, ArCH2).

(Sigue en página siguiente)

Ejemplo 8. 1-(2-(Bromometil)-4,4-dimetilciclohex-1-enil)-4-clorobenceno [0133]

[0134] Se añadió hidruro de sodio (9,6 g, 0,24 mol) en porciones a 0ºC a una disolución de 21 g de carbonato de dimetilo (0,23 mol) en THF seco (400 ml). Se agitó la mezcla resultante a 0ºC durante 30 min y se añadió entonces una disolución de 10 g de compuesto a (79 mmol) en THF (100 ml) gota a gota durante 30 min. Se calentó

10 la mezcla resultante a 60-80ºC durante 3 h antes de enfriar a temperatura ambiente. Se vertió la mezcla de reacción en una disolución saturada de NaHCO3 y se extrajo con éter. Se lavó la fase orgánica con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró, dando 25 g del intermedio b 5,5-dimetil-2-oxociclohexanocarboxilato de metilo (rendimiento: 84%). EM (IEP) m/e (M+H+): 185.

15 [0135] Se añadió hidruro de sodio (6,6 g, 0,16 mol) en porciones a 0ºC a una disolución de b (10 g, 54 mmol) en DCM seco (100 ml). Se agitó la mezcla resultante a 0ºC durante 30 min y se enfrió entonces a -78ºC. Se añadieron 46,6 g de anhídrido trifluorometanosulfónico a la suspensión densa gota a gota durante 1 h. Se calentó la mezcla resultante a ta y se agitó durante una noche. Se vertió la mezcla de reacción en una disolución saturada de Na2SO4 y se concentró, dando el producto bruto que se purificó por columna, proporcionando 9,5 g del intermedio c

20 5,5-dimetil-2-(trifluorometilsulfoniloxi)ciclohex-1-enocarboxilato de metilo (rendimiento: 55%). EM (IEP) m/e (M+H+):

317.

[0136] Se calentó a 70ºC en atmósfera de N2 durante una noche una mezcla de compuesto c (5,1 g, 16 mmol), compuesto d (3,0 g, 19 mmol), fluoruro de cesio (6,1 g, 40 mmol) y tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0) (0,8

25 mmol) en DME/metanol 2:1 (100 ml). Se filtró la mezcla a través de Celite y se concentró, dando el producto bruto que se purificó por columna, proporcionando 4 g del intermedio e 2-(4-clorofenil)-5,5-dimetilciclohex-1-enocarboxilato de metilo (rendimiento: 89%). EM (IEP) m/e (M+H+): 279.

[0137] Se añadió intermedio e (2,79 g, 10 mmol) a -10ºC durante 30 min a una suspensión de LiAlH4 (0,95 g,

30 25 mmol) en éter (100 ml). Se agitó la mezcla resultante durante 1 h y 30 min a -10-0ºC. Se inactivó entonces la mezcla de reacción con 1 ml de agua y 1 ml de disolución acuosa de NaOH al 10% a 0ºC. Se filtró la mezcla resultante y se diluyó el filtrado con éter, se lavó entonces el lavado de fase de éter con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró, proporcionando 2,3 g del intermedio f (2-(4-clorofenil)-5,5-dimetilciclohex-1enil)metanol (rendimiento: 95%). EM (IEP) m/e (M+H+): 251 / 233. RMN-1H (DMSO, 400 MHz): 5 7,35 (d, J = 8,4 Hz,

35 2H), 7,20 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,52 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,67 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 2,21 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 1,92 (s, 2H), 1,40 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 0,94 (s, 6H).

[0138] Se añadió lentamente tribromuro de fósforo (4,6 mmol) en diclorometano (10 ml) a una disolución del intermedio f (4,6 mmol) en diclorometano (40 ml) a 0ºC. Se dejó agitar la disolución durante 1 h a 0ºC y se inactivó 40 entonces mediante la adición de agua fría. Se separaron las fases y se extrajo entonces la acuosa con diclorometano (20 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas (MgSO4) y se concentraron a vacío,

proporcionando 1-(2-bromometil-4,4-dimetilciclohex-1-enil)-4-clorobenceno en forma de un aceite incoloro (95%). El compuesto era de suficiente pureza para usarse en la siguiente etapa sin purificación adicional. RMN-1H (300 MHz, CDCl3): 5 7,26 (4H, c, J 17,2 Hz), 3,83 (2H, s), 2,31-2,27 (2H, m), 2,09 (3H, t, J 2,1 Hz), 1,49 (2H, t, J 6,5 Hz) y 1,01 (6H, s).

Ejemplo 9. 4-Cloro-7-[4-(4’-clorobifenil-2-ilmetil)piperazin-1-il]quinazolina [0139]

[0140] Se añadió diisopropiletilamina (2,55 mmol) a una disolución agitada de la quinazolinona b (1,28 mmol)

en N,N-dimetilformamida (10 ml). Se añadió a esta disolución gota a gota el intermedio bromuro a (1,28 mmol) en

N,N-dimetilformamida (4 ml) durante 30 min. Se dejó agitar la disolución a temperatura ambiente durante 20 h. Se 15 añadió una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10% (50 ml) a la disolución agitada. Se filtró el precipitado

resultante y se secó en una estufa a vacío, proporcionando el intermedio c 7-[4-(4’-clorobifenil-2-ilmetil)piperazin-1

il]quinazolin-4-ol en forma de un sólido blanco (al 80%). El compuesto era de suficiente pureza para usarse en la

siguiente etapa sin purificación adicional. RMN-1H (300 MHz, DMSO): 5 7,92 (1H, s), 7,86 (1H, d, J 9,0 Hz), 7,52

7,34 (7H, m), 7,23 (1H, dd, J 6,9 y 1,9 Hz), 7,11 (1H, dd, J 9,0 y 2,2 Hz), 6,88 (1H, d, J 2,3 Hz), 3,38 (2H, s), 3,25 20 (4H, s a) y 2,41 (4H, s a). CLEM -r.t. 5,77, M+H 431.

[0141] Se añadió una disolución de cloruro de fósforo (0,5 ml) y N,N-dimetilformamida (0,058 mmol) en 1,2

dicloroetano (2 ml) gota a gota durante 15 min a una disolución agitada de la quinazolinona c (1,16 mmol) en 1,2

dicloroetano (30 ml) a 70ºC en atmósfera de nitrógeno. Se añadió cloruro de fósforo adicional por incrementos (1 ml) 25 de 15 min durante la siguiente hora. Se dejó agitar la disolución a 70ºC durante 20 h. Se concentró entonces la

disolución a vacío hasta sequedad y se diluyó entonces con una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10%

(40 ml) y diclorometano (40 ml). Se separaron las fases, se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío.

Se aplicó entonces el residuo resultante a cromatografía en columna de alúmina en gradiente eluyendo con 100% de

diclorometano a 0,5% de metanol/diclorometano, proporcionando 4-cloro-7-[4-(4’-clorobifenil-2-ilmetil)piperazin-130 l]quinazolina en forma de una espuma amarilla (55%). RMN-1H (300 MHz, CDCl3): 5 8,80 (1H, s), 8,02 (1H, d, J 9,4

Hz), 7,37-7,24 (7H, m), 7,12 (1H, d, J 2,5 Hz), 3,45 (6H, s a), 2,55 (4H, s).CLEM- r.t. 3.67, M+H 449.

35 [0142]

[0143] Se añadió diisopropiletilamina (2,55 mmol) a una disolución agitada de la quinazolinona b (1,28 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 ml). Se añadió a esta disolución el bromuro a (1,28 mmol) en N,N-dimetilformamida (4 ml) gota a gota durante 30 min. Se dejó agitar la disolución a temperatura ambiente durante 20 h. Se añadió una 5 disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10% (50 ml) a la disolución agitada. Se filtró el precipitado resultante y se secó en una estufa a vacío, proporcionando el intermedio c en forma de un sólido blanco (84%). El compuesto era de suficiente pureza para usarse en la siguiente etapa sin purificación adicional. RMN-1H (300 MHz, DMSO): 5 7,92 (1H, s), 7,83 (1H, d, J 9,0 Hz) 7,36 (2H, d, J 6,5 Hz), 7,15 (2H, d, J 6,5 Hz), 7,06 (1H, dd, J 90 y 2,4 Hz), 6,82 (1H, d, J 2,3 Hz), 3,25 (4H, s a), 2,74 (2H, s a), 2,27-2,21 (6H, m), 1,98 (2H, s), 1,42 (2H, t, J 6,4 Hz) y 0,96 (6H, s).

10 CLEM- tr 5,95, M+H 463.

[0144] Se añadió gota a gota durante 15 min una disolución de cloruro de fósforo (0,5 ml) y N,Ndimetilformamida (0,058 mmol) en 1,2-dicloroetano (2 ml) a una disolución agitada de la quinazolinona c (1,16 mmol) en 1,2-dicloroetano (30 ml) a 70ºC en atmósfera de nitrógeno. Se añadió cloruro de fósforo adicional en incrementos 15 (1 ml) de 15 min durante la siguiente hora. Se dejó agitar la disolución a 70ºC durante 20 h. Se concentró entonces la disolución a vacío hasta sequedad, y se diluyó entonces con una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10% (40 ml) y diclorometano (40 ml). Se separaron las fases, se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío. Se aplicó entonces el residuo resultante a cromatografía en columna de alúmina en gradiente eluyendo con 100% de diclorometano a 0,5% de metanol/diclorometano, proporcionando 4-cloro-7-(4-((2-(4-clorofenil)-5,520 dimetilciclohex-1-enil)metil)piperazin-1-il)quinazolina en forma de una espuma amarilla (58%). CLEM- tr 6,41, M+H

463.

[0145]

30 [0146] Se desgasificó durante 5 min una disolución de la cloroquinazolina a (0,22 mmol), sulfonamida b (0,22 mmol), carbonato de cesio (0,31 mmol), tetraquis(trifenilfosfino)paladio (0,015 mmol) y yoduro de cobre (0,03 mmol) en dioxano (4 ml) antes de someter a irradiación por microondas (300 W, 150-180ºC, CEM Discover Labmate) durante 45 min. Se filtró la mezcla, se lavó con acetato de etilo y se lavó entonces con una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10% (10 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO4) y se concentró a vacío, dando un

35 residuo bruto (al 90%). Se sometió entonces este residuo a HPLC en fase inversa preparativa para purificación del compuesto final 2. RMN-1H (300 MHz, CDCl3): 5 CLEM- tr. 5,77, M+H 837.

[0147] Los compuestos 2-8 se prepararon según procedimientos análogos:

40 Compuesto 2: N-{7-[4-(4’-Clorobifenil-2-ilmetil)piperazin-1-il]quinazolin-4-il}-4-((R)-3-dimetilamino-1fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida RMN-1H (300 MHz, CDCl3) 5 CLEM- tr 5,98, M+H 924.

45 Compuesto 3: N-{7-[4-(4’-Clorobifenil-2-ilmetil)piperazin-1-il]quinazolin-4-il}-4-((R)-3-morfolin-4-il-1fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-nitrobencenosulfonamida RMN-1H (300 MHz, CDCl3) 5 CLEM- tr. 5,78, M+H 879.

50 Compuesto 4: N-{7-[4-(4’-Clorobifenil-2-ilmetil)piperazin-1-il]quinazolin-4-il}-4-((R)-3-morfolin-4-il-1

fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida RMN-1H (300 MHz, CDCl3) 5 CLEM- tr. 6,00, M+H 966.

5 Compuesto 5: N-(7-{4-[2-(4-Clorofenil)-5,5-dimetilciclohex-1-enilmetil]piperazin-1-il}-quinazolin-4-il)-4-((R)-3dimetilamino-1-fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-nitrobencenosulfonamida RMN-1H (300 MHz, CDCl3) 5 CLEM- tr. 5,97, M+H 869.

10 Compuesto 6: N-(7-{4-[2-(4-Clorofenil)-5,5-dimetilciclohex-1-enilmetil]piperazin-1-il}-quinazolin-4-il)-4-((R)-3dimetilamino-1-fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida RMN-1H (300 MHz, CDCl3) 5 CLEM- tr. 6,11, M+H 956.

15 Compuesto 7: N-(7-{4-[2-(4-Clorofenil)-5,5-dimetilciclohex-1-enilmetil]piperazin-1-il}quinazolin-4-il)-4-((R)-3-morfolin4-il-1-fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-nitrobencenosulfonamida RMN-1H (300 MHz, CDCl3) 5 CLEM- tr. 5,99, M+H 911.

20 Compuesto 8: N-(7-{4-[2-(4-Clorofenil)-5,5-dimetilciclohex-1-enilmetil]piperazin-1-il}quinazolin-4-il)-4-((R)-3-morfolin4-il-1-fenilsulfanilmetilpropilamino)-3-trifluorometanosulfonilbencenosulfonamida RMN-1H (300 MHz, CDCl3) 5 CLEM- tr. 6,16, M+H 998.

25 Ejemplo 12. Compuesto 1. (R)-N-(7-(4-((4’-Clorobifenil-2-il)metil)piperazin-1-il)quinazolin-4-il)-4-(4(dimetilamino)-1-(feniltio)butan-2-ilamino)-3-nitrobencenosulfonamida [0148]

30 a)

Se trató Boc-piperazina (20 mmol) en DMSO (20 ml) con 2,4-dinitrobenzonitrilo (10 mmol) y se agitó la mezcla de

35 reacción, que se volvió inmediatamente naranja oscura/roja, durante una noche a temperatura ambiente. Se repartió la mezcla de reacción entre acetato de etilo y ácido cítrico al 10%, se lavó adicionalmente la fase de acetato de etilo, se evaporó y se trituró el residuo con éter, dando un producto de piperizinilo (rendimiento de 33%) en forma de un polvo amarillo. Si se contaminaba con el nitrilo de partida, la cristalización con acetato de etilo/éter era eficaz (M+ [ES+] 333, 1H 5: (ppm, DMSO-d6) 7,82, d (J1 8,86 Hz), 1H, ArH; 7,66, d (J2, 2,52 Hz), 1H, ArH; 7,28, dd (J1 8,86 Hz,

40 J2 2,52 Hz), 1H, ArH; 3,4-3,5, m, 8H, 4xCH2; 1,39, m, 9H, CMe3.

b)

5 Se desprotegió el compuesto de piperazinilo (15 mmol) disolviendo en acetonitrilo (40 ml) y tratando con 5 equivalentes de ácido p-toluenosulfónico en acetonitrilo (20 ml) y reposando durante 2 horas. Se filtró entonces el producto en forma de un bistosilato en forma de prismas brutos (rendimiento de 83%). (M+ [ES+] 233; 1H 5: (ppm, DMSO-d6) 8,80, s a, 1H, N+H; 7,88, d (J1 8,82 Hz), 1H, ArH; 7,76, d (J2 2,58 Hz), 1H, ArH; 7,46, d (J1 8,07 Hz), 4H, 4xArH; 7,37, dd (J1 8,82 Hz, J2 2,58 Hz), 1H, ArH; 7,09, d (J1 8,07 Hz), 4H, 4xArH; 3,6-3,7, m, 4H, 2xCH2; 3,1-3,3, m,

10 4H, 2xCH2; 2,25, s, 6H, 2xMe.

c)

15 Se añadió trietilamina (14 mmol) a 4 mmol de este bistosilato y 6 mmol de bromuro de 2-bromobencilo en isopropanol (15 ml) y se agitó el conjunto durante 3 horas. Se añadió entonces metanol (20 ml), se dejó reposar la mezcla durante unos pocos minutos y se filtró el producto de bromuro de arilo puro en forma de un polvo naranja (al 93%). (M+ [ES+] 401, 403; 1H 5: (ppm, DMSO-d6) 7,80, d (J1 8,9 Hz), 1H, ArH; 7,67, d (J2 2,47 Hz), 1H, ArH; 7,58, d

20 (J1 7,6 Hz), 1H, ArH; 7,49, d (J1 7,6 Hz), 1H, ArH; 7.36, dd (J1 7,6 Hz, J1 7,6 Hz), 1H, ArH; 7,30, dd (J1 8,9 Hz, J2 2,47 Hz); 7,19, dd (J1 7,6 Hz, J1 7,6 Hz); 3,58, s, 2H, CH2; 3,4-3,5, m 4H, 2xCH2; 2,5-2,6, m 4H, 2xCH2.

d)

Se añadió una disolución de carbonato de sodio acuoso 2 M (2,25 ml) a una mezcla de 3,43 mmol de bromuro de arilo, 703 mg de ácido p-clorofenilborónico y 50 mg de PdCl2(PPh3)2 agitando en dimetoxietano:etanol:agua 1:1:1 (20 ml) en atmósfera de nitrógeno y se calentó la disolución a 90ºC durante 4 horas. Se repartió la mezcla de reacción 30 entre acetato de etilo y agua, se filtró a través de Celite, se secó la fase orgánica, se evaporó, se trató el residuo con 10 mmol de ácido p-toluenosulfónico en acetonitrilo (20 ml) y se añadió entonces éter (40 ml). En reposo en congelador, precipitó el producto de nitroareno en forma de un polvo amarillo: rendimiento 1,68 g (al 81%). (M+ [ES+] 433, 435; 1H 5: (ppm, DMSO-d6) 9,57, s a, 1H, N+H; 7,85, d (J1 8,8 Hz), 1H, ArH; 7,7-7,8, m, 1H, ArH; 7,69, d (J2 2,52 Hz), 1H, ArH; 7,4-7,6, m, 6H, 6xArH; 7,2-7,4, m, 4H, 4xArH; 7,08, d (J1 7,9 Hz), 2H, 2xArH; 4,36, m, 2H, CH2;

35 4,07, m, 2H, CH2; 3,22, m, 4H, 2xCH2; 2,88, m, 2H, CH2; 2,25, 2, 3H, Me.

e) Se calentaron el compuesto de nitroareno (62 mg) y hierro en polvo (50 mg) en ácido acético glacial (0,2 ml) a 90ºC con agitación durante 10 minutos, se repartió entre acetato de etilo y disolución acuosa saturada de bicarbonato de

5 sodio, se separó la fase orgánica, se secó y se evaporó hasta sequedad, dando la anilina bruta en forma de un residuo amarronado. Se repitió esto a escala de 1,3 g. Se purificó el residuo bruto triturando con éter. Esto dio un producto de anilina con aprox. 60% de rendimiento y pudo recuperarse un 25% adicional del sobrenadante de éter si se deseaba. (M+ [ES+] 403, 405; 1H 5: (ppm, DMSO-d6) 7,1-7,6, m, 9H, 9xArH; 6,23, d (J1 9,2 Hz), 1H, ArH; 6,04, s, 1H, ArH; 4,23, s a, 2H, CH2; 3,40, s a, 2H, NH2; 3,19, s a, 4H, 2xCH2; 2,34, s a, 4H, 2xCH2.

10 f)

15 Se hizo reaccionar el compuesto de anilina (216 mg) con acetato de formamidina (10 eq) en MeOCH2CH2OH (5 ml) a reflujo durante 3 horas en atmósfera de nitrógeno, el producto precipitó en la oscuridad y se enfrió la mezcla de reacción mediante la adición de un poco de agua. Se filtró estw y se secó, dando el compuesto de 4aminoquinazolina en forma de un sólido beis que pudo recristalizarse con DMSO acuoso después de neutralización con amoniaco acuoso (198 mg, rendimiento de 81%). M+ [ES+] 430, 432, 1H 5: (ppm, DMSO-d6) 8,18, s, 1H, ArH

20 (H2); 7,95, d, (J 9,2 Hz), 1H, ArH (H5); 7,47-7,50, m, 1H, ArH; 7,45, s a, 4H, 4 x ArH; 7,29-7,36, m, 4H, 2 x ArH + NH2; 7,20-7,23, m, 1H, ArH; 7,16, dd (J, 9,2 Hz, J2 2,4 Hz) 1H, ArH; 6,80, d, (J 2,3 Hz), 1H, ArH; 3,37, s, 2H, CH2; 3,23, m, 4H, 2 x CH2 (piperazina); 2,40, m, 4H, 2 x CH2 (piperazina).

g) 25

Se calentó el compuesto de 4-aminoquinazolina (176 mg) aprox. a 130ºC durante 9 horas en ácido acético glacial (2 ml) y una disolución de ácido clorhídrico acuoso concentrado (al 25%) (2 ml) en un matraz pequeño equipado con un 30 condensador de aire. Se retiró el disolvente y se recristalizó el residuo con DMSO acuoso después de neutralización con el mínimo de amoniaco acuoso. Esto dio el producto hidrolizado en forma de un polvo beis (87% de rendimiento). M+ [ES+] 431, 433. 1H 5: (ppm, DMSO-d6) 11,8, s a, 1H, OH; 7,90, s, 1H, ArH (H2); 7,84, d (J 9,0 Hz), 1H, ArH (H5); 7,46-7,51, m, 1H, ArH; 7,44, s a, 4H, 4 x ArH; 7,30-7,38, m, 2H, 2 x ArH; 7,20-7,23, m, 1H, ArH, 7,09, dd, (J, 9,0 Hz, J2 2,0 Hz) 1H, ArH; 6,86, d, (J 20 Hz) 1H, ArH; 4,44-3,37, s a, 2H, NCH2Ph; 3,27, m, 4H, 2 x CH2

(piperazina) 2,38, m b, 4H, 2 x CH2, (piperazina). h)

Se cloró el producto hidrolizado tratando 30 mg con 1 ml de cloroformo seco y 1 ml de cloruro de tionilo con una cantidad catalítica de DMF (10 μl), calentando a reflujo durante 1 hora, vertiendo sobre hielo y extrayendo el producto con acetato de etilo, dando el producto clorado que se hizo reaccionar sin caracterización.

10 i) Se acopló una porción del producto clorado de h) (aprox. 8 mg) con la sulfonamida (8 mg) preparada en el siguiente ejemplo calentando a 85ºC en DMF (0,2 ml) con carbonato de potasio (40 mg) durante una noche. Se repartió la mezcla de reacción entre acetato de etilo (2 ml) y agua (2 ml) y se separó la fase orgánica, se secó y se evaporó, dando un residuo amarillo. Se purifico éste por HPLC, dando 2 mg del compuesto 2 en forma de un vidrio

15 amarillo aproximadamente un 80% puro con un tiempo de retención máximo de 3,52 min y un pico iónico molecular en ES+ de 837 (mayor) y 839 (menor).

Condiciones de HPLC

20 [0149]

Disolventes:

A: H2O + 0,1% de ácido fórmico

B: MeCN + 0,1% de ácido fórmico

25 C: H2O D MeCN Presión: Mínima (MPa) 0,00 Máxima (MPa) 43,15

30 [0150] Columna: Phenomenex Gemini 5u C18 110A; 50 x 2,00 mm.

Programa:

35 [0151] Tiempo (min) Flujo (ml/min) A (%) B (%) C (%) D (%) 0,00 1,000 90 10 0 0 8,00 1,000 0 100 0 0 10,00 1,000 0 100 0 0 10,10 1,000 90 10 0 0 12,00 1,000 90 10 0 0 12,10 0,000 90 10 0 0

Ejemplo 13. (R)-4-(4-(Dimetilamino)-1-(feniltio)butan-2-ilamino)-3-nitrobencenosulfonamida para uso en el ejemplo 12

[0152] El procedimiento seguido para la preparación de este compuesto era generalmente el de Wendt y col., 5 con las siguientes adaptaciones:

[0153] Se siguió el procedimiento de Wendt para la preparación de los compuestos B y E a H. Sin embargo, 10 los compuestos C y D se prepararon como sigue:

i)

15 Se añadió gota a gota cloruro de mesilo (16 μl, 1,2 eq.) a una disolución del Fmoc-aminoalcohol B purificado (68 mg, 0,17 mmol) (purificación en gel de sílice usando éter de petróleo/acetato de etilo 95:5 a 60:40) en disolución con trietilamina (29 μl, 1,2 eq.) en 1 ml de diclorometano a 0ºC. Se dejó la reacción a 0ºC durante 1 h y se calentó a temperatura ambiente. Después de ese tiempo, la TLC (Pet.Et./AcOEt 50:50) indicó que no permanecía material de partida. Se diluyó entonces la reacción con diclorometano y se lavó con NaHSO4 1 M, agua y salmuera. Se secó

20 entonces la fase orgánica sobre Na2SO4 y se concentró, proporcionando un aceite incoloro. Se disolvió este aceite en una pequeña cantidad de diclorometano y se añadió éter de petróleo hasta que empezó a precipitar un sólido. Se dejó esta mezcla en el congelador durante una noche. Se recogió el sólido mediante filtración y se aclaró con éter de petróleo (rendimiento de 83% de C). RMN (CDCl3, ppm): 7,78 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,42 (t, 2H), 7,33 (t, 2H), 5,46 (d

a, 1H), 4,43 (t a, 2H), 4,34 (s a, 2H), 4,24 (t a, 1H), 3,03 (s, 3H), 2,61 (d a, 2H), 1,48 (s, 9H). ii)

Se calentaron a 30ºC en tolueno el mesilato C (100 mg, 0,21 mmol), tiofenol (43 μl, 2 eq.), carbonato de potasio (58 mg, 2 eq.) y bromuro de tetrabutilamonio (3 mg) durante un total de 87 horas. Se vertió directamente la reacción bruta en la parte superior de una columna y se purificó por cromatografía ultrarrápida en gel de sílice: 100% de

10 tolueno y entonces 100% de diclorometano, entonces acetato de etilo/Pet. Et. 60:40 a 70:30 (m= 43 mg, 77%) de D). EM: 269 (M+H). RMN (CDCl3, ppm): 7,41-7,38 (m, 2H), 7,32-7,27 (m, 2H), 7,21 (tt, 1H), 3,38-3,30 (m, A1B1A2B2X, 1H), 3,12 (dd, A1B1X, 1H), 2,90 (dd, A1B1X, 1H), 2,67 (s a, 2H), 2,54 (dd, A2B2X, 1H), 2,38 (dd, A2B2X, 1H), 1,45 (s, 9H).

15 Ejemplo 14. Ensayo de unión de Bcl-2

[0154] Medida de la competencia de compuestos de la invención con Bim26-mer por un sitio de unión homólogo de Bcl-2.

20 [0155] Alphascreen (ensayo homogéneo de proximidad luminiscente amplificada) es una tecnología basada en perlas que mide la interacción entre moléculas. El ensayo consiste en dos perlas recubiertas con hidrogel que, cuando se ponen en estrecha proximidad por una interacción de unión, permiten la transferencia de un oxígeno de singlete desde una perla donante a una perla aceptora.

25 [0156] Tras la unión y excitación con luz láser a 680 nm, un fotosensibilizador en la perla donante convierte el oxígeno ambiental en un estado de singlete más excitado. Este oxígeno de singlete se difunde entonces para reaccionar con un producto quimioluminiscente en la perla aceptora. Los fluoróforos en la misma perla se activan, dando como resultado la emisión de luz a 580-620 nm.

30 [0157] Se efectuó el cribado de los compuestos de la invención usando el sistema de detección en kit Alphascreen GST (glutation-S-transferasa). Se titularon los compuestos de ensayo en el ensayo, que consistían en proteína Bclw LC29 marcada con GST (concentración final 0,05 nM) y péptido Bim BH3-26 biotinilado, biotina-DLRPEIRIAQELRRIGDEFNETYTRR (concentración final 3,0 nM). Para el ensayo de Bcl-xL marcada con GST, se usaron proteína Bcl-xL LC25 marcada con GST (concentración final 0,6 nM) y péptido Bim BH3-26 biotinilado,

35 biotina-DLRPEIRIAQELRRIGDEFNETYTRR (concentración final 5,0 nM). Se añadieron a esta mezcla de reacción perlas aceptoras recubiertas con anti-GST y perlas donantes recubiertas con estreptavidina ambas a 15 μg/ml de concentración final, y se incubó la mezcla de ensayo durante 4 horas a temperatura ambiente antes de leer. De forma similar, cuando la proteína Bcl-2 era Mcl-1, se usaron proteína Mcl-1 marcada con GST (concentración final 0,4 nM) y péptido Bak BH3 biotinilado, biotina-PSSTMGQVGRQLAIIGDDINRRYDSE-OH (concentración final 4,0

40 nM).

[0158] Protocolo detallado:

1) Se preparan 384 pocillos con 4,75 μl de tampón y 0,25 μl de los compuestos (20 mM en DMSO) por pocillo.

45 2) Se mezclan los copartícipes de unión, en un tubo se añaden Bcl-w, Bcl-xL o Mcl-1 y las perlas aceptoras, en el segundo tubo se añaden péptido BH3 biotinilado y las perlas donantes. 3) Se preincuban los dos pares de copartícipes de unión durante 30 minutos. 4) Se añade 1 μl de perlas aceptoras: mezcla de proteína Bcl-w, Bcl-xL o Mcl-1 a cada pocillo. 5) Se sella la placa y se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos.

50 6) Se añaden 10 μl de mezcla de perlas donantes:péptido BH3 a cada pocillo. 7) Se sella la placa, se cubre con papel de aluminio y se incuba durante 4 horas.

[0159] El tampón de ensayo contenía Hepes 50 mM, pH 7,4, DTT 10 mM, NaCl 100 mM, 0,05% de Tween y caseína 0,1 mg/ml. El tampón de dilución de perlas contenía Tris 50 mM, pH 7,5, 0,01% de Tween y caseína 0,1

55 mg/ml. La concentración final de DMSO en el ensayo era de 0,5%. Se efectuaron los ensayos en Optiplates de 384 pocillos y se analizaron en el lector de placas PerkinElmer Fusion alpha (Ex680, Em520-620 nm).

[0160] Se adquirieron el kit de detección GST Alphascreen y las Optiplates en PerkinElmer.

[0161] Los resultados de Alphascreen para el compuesto de la invención son como siguen: del ejemplo 1 se indicó una CI50 de aproximadamente 3 nM para Bcl-xL.

Compuesto: Bcl-xL Mcl-1 Bcl-w

1: 0,007 9 nt

2: 0,006 50 nt

3: 0,034 6
3

4: 0,016 nt 0,8

5: 0,003 7 nt

6: 0,003 20 0,8

7: 0,020 10 3

8: 0,029 10 3

nt: no ensayado

Ejemplo 15. Ensayo de viabilidad celular

[0162] La eficacia de los compuestos de la presente invención puede determinarse también en ensayos de

10 destrucción basados en células usando una variedad de líneas celulares y modelos de tumor de ratón. Por ejemplo, puede valorarse su actividad sobre la viabilidad celular en un panel de líneas celulares tumorigénicas y no tumorigénicas cultivadas, así como poblaciones de células de ratón o humanas primarias, por ejemplo, linfocitos. Para estos ensayos, se cultivan 5.000-20.000 células a 37ºC y 10% de CO2 en medios de crecimiento apropiados, por ejemplo, 100 μl de medio de Eagle modificado por Dulbecco suplementado con 10% de suero fetal bovino,

15 asparaginasa y 2-mercaptoetanol en el caso de tumores de ratón pre-B Eµ-Myc en placas de 96 pocillos. La viabilidad celular y los números de células totales pueden controlarse durante 1-7 días de incubación con 1 nM-100 μM de los compuestos para identificar aquellos que destruyen a CI50<10 μM. La viabilidad celular se determina por la capacidad de las células de expulsar yoduro de propidio (10 μg/ml) mediante análisis de inmunofluorescencia de longitudes de onda de emisión de 660-675 nm en un citómetro de flujo (BD FACScan). Como alternativa, podría

20 usarse un ensayo colorimétrico de alto rendimiento tal como Cell Titre 96. Puede usarse el ensayo de proliferación celular no radiactivo acuoso (Promega). La muerte celular por apoptosis se confirma mediante la preincubación de las células con un inhibidor de caspasa 50 μM tal como zVAD-fmk.

[0163] La neutralización de ambas proteínas antiapoptóticas Bcl-xL y Mcl-1 en células normales es necesaria

25 antes de que una célula experimente apoptosis por la ruta posterior Bax/Bak [Chen y col., 2005; Willis y col., 2005]. Un compuesto que se oriente solo a Bcl-xL no debería afectar a células normales, pero podría destruir ciertas células cancerosas si se basan más en Bcl-xL y menos en Mcl-1 para la supervivencia. Para reflejar esto, se ensayó el efecto del compuesto 1 sobre la supervivencia de fibroblastos embrionarios de ratón (MEF) de tipo silvestre (wt), MEF con doble desactivación Bax/Bak (BB DKO), MEF que expresaban Noxa y MEF que expresaban Bad. Noxa

30 neutraliza específicamente Mcl-1. Por tanto, los MEF que expresan Noxa reflejan los tipos de célula cancerosa que se basan en Bcl-xL para la supervivencia y deberían ser mucho más sensibles a la inactivación por un compuesto orientado a Bcl-xL que los MEF en que tanto Bcl-xL como Mcl-1 son protectoras. Es más, como se muestra en la Figura 1A, este resultó ser el caso para el compuesto 1.

35 [0164] El fármaco anticanceroso etopósido induce también la muerte celular por la ruta Bax/Bak, como se muestra por la resistencia de MEF BB DKO. Sin embargo, como se muestra en la Figura 1B, lo hace menos selectivamente que el compuesto 1.

Ejemplo 16. Ensayo de citotoxicidad luminiscente CellTitre-Glow

40 [0165] Se evaluó la citotoxicidad de los compuestos 1-8 en las líneas celulares de SCLC NCI-H889, NCI-H1963 y NCI-H146 usando el kit de ensayo luminiscente Promega CellTitre-Glow G7571 según los siguientes procedimientos: Medio de cultivo y líneas celulares:

1. Se adquirieron las líneas celulares de SCLC NCI-H889, NCI-H1963 y NCI-H146 en la American Type Culture Collection. Se mantuvieron las células en RPMI 1640 (Invitrogen Corp., Grand Island, NY) suplementado con 10% de suero fetal bovino (FBS, Invitrogen), 1% de piruvato de sodio, HEPES 25 mM, glucosa 4,5 g/l y 1% de penicilina/estreptomicina (Sigma) en una cámara humidificada a 37ºC que contenía 5% de CO2.

50 2. Se cultivaron las células como agregados en suspensión en un matraz T162 con 25 ml de medio y se mantuvieron a una concentración de 1 millón/ml.

Disoluciones madre de compuesto de ensayo:

1. Se prepararon los compuestos de ensayo en forma de disoluciones madre 10 mM en DMSO y se almacenaron a 20ºC.

5 Diluciones en serie del compuesto de ensayo:

1.: Se precalentó el medio a 37ºC.

2.: Se descongelaron los compuestos a temperatura ambiente.

10 3. Se determinó cuál será la máxima concentración para ensayar (concretamente 10 mM).

4.: Se preparó una disolución madre 2x en medio de cultivo de la primera dosis (concretamente 2 x 10 μM= 20 μM) en un tubo Eppendorf (concretamente, 4 μl de disolución madre 5 mM en 1000 μl= 20 μM).

5.: Se invirtió el tubo varias veces para mezclar.

15 Dilución en serie en placas de 96 pocillos:

Se ensayaron los compuestos por triplicado a concentraciones de 10, 5, 2,5, 1,3, 0,63, 0,32, 0,16, 0,08, 0,04 y 0,02 μM. Las columnas 1-10 comprendían los tratamiento con compuesto de ensayo en serie, la columna 11 era el control no tratado y la columna 12 era el control “sin células” para determinar el fondo.

1.: Se añadieron a una placa de 96 pocillos 50 μl de medio/pocillo a las columnas 2 a 11 y se añadieron 100 μl a la columna 12.

2.: Se añadieron a la columna 1 100 μl de 2x compuesto.

3. Se realizaron diluciones en serie transfiriendo 50 μl a la columna 2 y así hasta la columna 10. Después de añadir 25 50 μl a la columna 10 y mezclar, se desecharon 50 μl.

4. Se almacenaron las placas a 37ºC hasta estar listos para añadir células.

Preparación de células

30 1. Se lavaron las células una vez con medio de cultivo y se prepararon en forma de suspensión.

a.: Se centrifugaron en primer lugar las células para retirar el medio y se añadió entonces ~1 ml de tripsina al 0,25%, se mezcló suavemente y se incubó durante no más de 3 minutos a temperatura ambiente.

b.: Se añadieron ~10 ml del medio y se pipetearon suavemente las células varias veces.

35 c. Se contaron entonces las células y se centrifugaron al volumen necesario para el número de células totales necesario, se resuspendieron entonces en el medio a una concentración de 200 células/μl

(50.000 células/pocillo).

2.: Se añadieron 50 μl de prep. de células a los pocillos apropiados.

3.: Se incubaron las células durante 48 h a 37ºC.

40 Ensayo luminiscente CellTiter-Glow (Promega - kit G7571):

1. Se descongeló el tampón en un baño de agua a 37ºC hasta descongelación completa y se dejó entonces durante al menos 0,5 horas a temperatura ambiente.

: 45 2. Se mezclaron conjuntamente sustrato y tampón y se invirtieron suavemente varias veces para disolver el sustrato.

3.: Se retiraron las placas de cultivo de células del incubador y se dejaron adaptarse a la temperatura ambiente durante al menos 15 min.

4.: Se añadieron 100 μl de reactivo a 100 μl de medio de cultivo y se mezclaron en un agitador de placa durante 2 min a TA.

: 50 5. Se incubaron durante 15 min en banco.

6.: Se leyó la luminiscencia en un lector de placas BioTek (sensibilidad= 95).

7.: Se calculó el valor medio de fondo (columna 12).

8.: Se restaron las cuentas medias de fondo de los demás pocillos (columnas 1-11).

9.: Se calculó el valor medio de control no tratado (columna 11).

55 10. Se dividieron los valores de pocillos tratados con compuesto de ensayo (filas 1-10) entre el valor medio de control y se expresaron como CE50.

Compuesto: H146 (CE50 μM) H889 (CE50 μM) H1963 (CE50 μM)

1: 0,61 0,21 0,17

3: 3,7 1,3 1,4

4: 0,63 0,82 0,40

5: 0,54 0,41 0,17

6: 0,71 0,72 0,30

7: 1,2 0,60 0,46

Referencias

[0166]

L. Chen y col., Mol. Cell, 2005, 17, 393-403.

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S.N.: Willis y col., Genes Dev., 2005, 19, 1294-1305.

J.: Y. Zhang, Nature Reviews/Drug Discovery 2002, 1, 101.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I):

5 en el que X es NO2 o -SO2-C(X’)3, en la que X’ es H o halógeno; Z es un grupo cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocíclico o heteroarilo; R1 y R2 son independientemente arilo, heteroarilo, -NR5R6, -CONR5R6, -O(CH2)rarilo, -O(CH2)rheteroarilo, 10 CO(CH2)rarilo, -CO(CH2)rheteroarilo, -CO2(CH2)rarilo, -CO2(CH2)rheteroarilo, -OCO(CH2)rarilo, OCO(CH2)rheteroarilo, -S(CH2)rarilo, -S(CH2)rheteroarilo, -SO(CH2)rarilo, -SO(CH2)rheteroarilo, -SO2(CH2)rarilo o SO2(CH2)rheteroarilo; R3 es alquilo, alquenilo, -(CH2)tcicloalquilo, -(CH2)tcicloalquenilo, -(CH2)tarilo, -(CH2)theterociclilo o -(CH2)theteroarilo, en los que cada cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo puede estar opcionalmente sustituido con 15 alquilo, alquenilo, halógeno, nitro, halogenoalquilo o fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 o 3 grupos alquilo, alquenilo, alcoxilo, halógeno o nitro; R5 y R6 son independientemente hidrógeno, alquilo o alquenilo o R5 y R6, tomados conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico o heteroarilo; cada R7 es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, -alquenilo C2-6, -alquinilo C2-6 o acilo; 20 cada R8 es independientemente hidrógeno o halógeno; cada R9 es independientemente hidrógeno, -alquilo C1-6, -alquenilo C2-6 o -alquinilo C2-6, t es 0 o un entero de 1 a 6; y r es 0 o un entero de 1 a 6; en los que cada grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterociclilo y heteroarilo puede 25 estar opcionalmente sustituido;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es NO2 o -SO2-CF2X’ en la que X’ es F o Cl.

30 3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es -SO2-CF2Cl.
4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Z es un piperazin-1-ilo.
5.

Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es arilo, heteroarilo, -S(CH2)rarilo o 35 S(CH2)rheteroarilo.
6. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es -S-fenilo.
7.

Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el resto -(CH2)tR1 es -CH2-S-fenilo. 40
8.

Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R2 es -NR5R6 o -CONR5R6.
9.

Un compuesto según la reivindicación 1, en el que -NR5R6 o -CONR5R6 en que R5 y R6, junto con el

átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico o heteroaromático. 45
10. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el grupo -(CH2)tR2 es -CH2CH2(N-azepanilo), CH2CH2(N-oxazapanilo), -CH2CH2(N-pirrolidinilo), -CH2CH2(N-7-azabiciclo[2.2.1]heptanilo), -CH2CH2(N-2-oxa-5azabicyclo[2.2.1]heptanilo).

50 11. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el grupo -(CH2)tR2 es -CH2CH2N(CH3)2.
12. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el grupo -(CH2)tR2 es -CH2CH2(N-morfolina).
13. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R3 es: 55

en la que Q es O, CH2, C(alquilo)2 o CH2CH2; R12 es halógeno y R13 y R14 son ambos H o son ambos alquilo.

5 14. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es uno de
15.

Un procedimiento in vitro de regulación de la muerte de una célula que comprende poner en contacto dicha célula con una cantidad eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14.
16.

Un procedimiento in vitro de inducción de la apoptosis en células indeseadas o dañadas que

10 comprende poner en contacto dichas células indeseadas o dañadas con una cantidad eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14.
17. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para uso en terapia.

15 18. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para uso en un procedimiento de tratamiento y/o profilaxis de una enfermedad o afección mediada por un miembro de Bcl-2 prosupervivencia, en el que el procedimiento comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz del compuesto.
19. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para uso en un procedimiento de tratamiento y/o profilaxis de una enfermedad o afección caracterizada por una persistencia o proliferación

5 inapropiada de células indeseadas o dañadas en un mamífero, en el que el procedimiento comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz del compuesto.
20. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 14 y al menos un portador farmacéuticamente aceptable. 10
21. Uso de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad o afección mediada por un miembro de Bcl-2 prosupervivencia en un mamífero.

15 22. Uso de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad o afección caracterizada por la persistencia o proliferación inapropiada de células indeseadas o dañadas en un mamífero.