ES2460868T3

ES2460868T3 - Metaarsenito sódico para usar en el tratamiento del dolor y la inflamación

Info

Publication number: ES2460868T3
Application number: ES08714162.8T
Authority: ES
Inventors: Michael Hwang; Yong-Jin Yang
Original assignee: PANAPHIX Inc
Current assignee: PANAPHIX Inc
Priority date: 2007-02-02
Filing date: 2008-02-01
Publication date: 2014-05-14
Anticipated expiration: 2028-02-01
Also published as: CA2845292C; RU2009132951A; IL217891A0; TW200843734A; RU2630574C2; EP2114419B1; NZ578621A; AU2008214084C9; BRPI0807154B8; AU2008214084C1; IL217891A; CA2845299A1; AU2008214084A1; IL200173A0; PL2114419T3; AU2008214084B2; IL229255A; RU2013151904A; US20130309319A1; EP2114419B8

Abstract

Metaarsenito sódico formulado para la administración oral para la utilización en el tratamiento del dolor en un mamífero, en donde dicho dolor es dolor provocado por apoplejía, dolor posquirúrgico, osteoartritis, dolor vertebral, lesión muscular, dolor perioperatorio, dismenorrea, dolor asociado con angina, dolor provocado por una enfermedad infecciosa o enfermedades autoinmunitarias

Description

Metaarsenito sodico para usar en el tratamiento del dolor y la inflamacion

Descripcion de la invencion

Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional n° de serie 60/899,007, presentada el 2 de febrero de 2007.

Campo de la invencion

Esta invencion se refiere a composiciones para la utilizacion en el tratamiento del dolor y la inflamacion, asi como el tratamiento de trastornos autoinmunitarios e inmunologicos utilizando compuestos de arsenico. Mas particularmente, la presente invencion se refiere a metaarsenito sodico (NaAs02) para la utilizacion en el tratamiento del dolor, la inflamacion y trastornos autoinmunitarios e inmunologicos.

Antecedentes de la invencion

La percepcion del dolor, o nocicepcion, esta mediada por las terminaciones perifericas de un grupo de neuronas sensitivas especializadas, denominadas nociceptores. Una amplia variedad de estimulos fisicos y quimicos induce la activacion de tales neuronas en mamiferos, conduciendo al reconocimiento de un estimulo potencialmente danino. Sin embargo, la activacion inapropiada o excesiva de nociceptores puede dar como resultado un dolor agudo o cronico debilitante.

Generalmente, se experimenta dolor cuando las terminaciones nerviosas libres que constituyen los receptores del dolor de la piel asi como de ciertos tejidos internos se someten a estimulos mecanicos, termicos u otros estimulos nocivos. Los receptores del dolor pueden transmitir senales a lo largo de neuronas aferentes hasta el sistema nervioso central y de alli al cerebro.

Las causas del dolor pueden incluir inflamacion, una lesion fisica, una enfermedad infecciosa, una lesion quimica o anoxica, un espasmo muscular y el comienzo de un episodio o sindrome neuropatico. El dolor tratado ineficazmente puede ser insoportable para la persona que lo experimenta limitando la funcion, reduciendo la movilidad. complicando el sueno e interfiriendo drasticamente con la calidad de vida.

La inflamacion es una afeccion fisiologica caracterizada en la forma aguda por los signos clasicos de dolor, calor, enrojecimiento, hinchazon y perdida de funcion. El dolor inflamatorio se puede producir cuando el tejido se dana. Por ejemplo, los episodios fisicos, quimicos y termicos, la cirugia, una infeccion y las enfermedades autoinmunitarias pueden provocar dano e inflamacion tisulares. Cuando un tejido se dana, una multitud de sustancias endogenas inductoras de dolor, por ejemplo bradicinina e histamina, se puede liberar desde el tejido lesionado. Las sustancias inductoras de dolor se pueden unir a receptores sobre las terminaciones nerviosas sensitivas y de ese modo iniciar senales de dolor aferentes.

Adicionalmente, se pueden liberar sustancias inductoras de dolor desde terminaciones aferentes nociceptivas, y los neuropeptidos liberados de terminaciones sensitivas pueden acentuar una respuesta inflamatoria. Asi, durante la inflamacion puede haber un brote de fibras perifericas peptidergicas y un contenido de peptido incrementado, con muchas fibras que muestran una coexistencia de sustancia P (SP, por sus siglas en ingles) y peptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP, por sus siglas en ingles). La sustancia P puede inducir la contraccion de celulas endoteliales, que a su vez provoca extravasacion plasmatica para permitir que otras sustancias (bradicinina, AlP, histamina) tengan acceso a la zona de la lesion y las terminaciones nerviosas aferentes. La liberacion de sustancia P por la terminacion nerviosa sensitiva tambien puede desgranular los mastocitos. Se cree que este proceso es un factor importante en la inflamacion neurogenica debido a la liberacion de mediadores inflamatorios tales como histamina y serotonina y la liberacion de enzimas proteoliticas que catalizan la produccion de bradicinina. El CGRP aparentemente no produce extravasacion plasmatica, pero es un potente vasodilatador y tambien actua sinergicamente con la SP y otros mediadores inflamatorios para potenciar la extravasacion plasmatica. Todos los mediadores inflamatorios listados anteriormente pueden bien sensibilizar nociceptores o bien producir dolor. De ahi que la inhibicion de la liberacion y/o la actividad de mediadores inflamatorios pueda ser util en el tratamiento de enfermedades inflamatorias comunes tales como, por ejemplo, asma, artritis, dermatitis, rinitis, cistitis, gingivitis, tromboflebitis, glaucoma, enfermedades gastrointestinales o migrana.

Aunque el dolor inflamatorio generalmente es reversible y remite cuando el tejido lesionado se ha reparado o el estimulo inductor del dolor se ha retirado, los presentes metodos para tratar el dolor inflamatorio cronico han tenido muchas desventajas y deficiencias. Asi, la tipica administracion oral, parenteral o topica de un farmaco analgesico para tratar los sintomas del dolor, por ejemplo, un antibiotico para tratar factores que provocan dolor inflamatorio, puede dar como resultado una distribucion sistemica amplia del farmaco y efectos secundarios no deseables. Adicionalmente, la terapia actual para el dolor inflamatorio padece de una corta duracion de eficacia del farmaco, lo que hace necesario una frecuente readministracion de farmaco con posibles tolerancia y resistencia al farmaco, desarrollo de anticuerpos y/o dependencia y adicion al farmaco crecientes resultantes, todos los cuales son insatisfactorios. Por otra parte, la administracion de farmaco frecuente incrementa el gasto del regimen para el

paciente y puede requerir que el paciente recuerde atenerse a un esquema de dosificacion.

Ejemplos de tratamientos para la inflamacion y el dolor muscular incluyen farmacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID, por sus siglas en ingles), incluyendo aspirina e ibuprofeno; y opioides, tales como morfina.

Los NSAID alivian el dolor inhibiendo la produccion de prostaglandinas liberadas por tejidos danados. Se ha observado que las prostaglandinas son mediadores perifericos del dolor y la inflamacion, como en las enfermedades artriticas, y una reduccion en su concentracion proporciona alivio a los pacientes. Se ha sugerido que las prostaglandinas estan implicadas en la mediacion del dolor en la medula espinal y el cerebro, lo que puede explicar los efectos analgesicos de los NSAID en algunos estados de dolor que no implican inflamacion o dano en los tejidos perifericos. Sin embargo, las prostaglandinas solo son uno de varios mediadores del dolor. Como tales, los NSAID tienen un techo de actividad por encima del cual las dosis crecientes no proporcionan mas alivio del dolor.

Por otra parte, los NSAID tienen efectos secundarios que limitan su utilidad. Por ejemplo, pueden provocar irritacion del tracto gastrointestinal y la utilizacion prolongada puede conducir al desarrollo de una ulceracion extendida del intestino. Esto es particularmente cierto en pacientes ancianos que utilizan frecuentemente NSAID para sus afecciones artriticas.

Las acciones terapeuticas de los opioides se producen sobre el sistema nervioso central incluyendo el cerebro y la medula espinal. Los opioides inhiben la eficacia de la neurotransmision entre los aferentes sensitivos primarios (principalmente fibras C) y las neuronas de proyeccion. Consiguen esto provocando una hiperpolarizacion prolongada de ambos elementos de estas sinapsis. La utilizacion de opioides es eficaz para aliviar la mayoria de los tipos de dolor agudo y dolor cronico provocado por los tumores malignos. Sin embargo, hay un numero de afecciones dolorosas malignas cronicas que son parcialmente o completamente refractarias a la analgesia con opiodes, particularmente las que implican compresion de nervios, p. ej. por formacion y crecimiento de tumores. Desgraciadamente, los opioides tambien tienen efectos secundarios no deseados, incluyendo depresion del sistema respiratorio, estrenimiento y efectos psicoactivos incluyendo sedacion, euforia y dependencia del farmaco. Estos efectos secundarios se producen a dosis similares a las que producen analgesia y, por lo tanto, limitan las dosis que se pueden suministrar a los pacientes. Adicionalmente, opioides tales como la morfina y la heroina son drogas muy conocidas que a menudo conducen a un incremento rapido en la tolerancia a y la dependencia fisica del farmaco. Con el desarrollo de la tolerancia, la dosis y la frecuencia del farmaco requeridas para producir el mismo efecto analgesico se incrementan con el tiempo. Esto puede conducir a una afeccion en la que la dosis requerida para aliviar el dolor persistente cronico es potencialmente mortal debido a los efectos secundarios mencionados previamente. Segun se utiliza en la presente memoria, el termino quot;cronicoquot; significa un dolor que dura un mes o mas. quot;Dolor agudoquot; se define como un dolor de una duracion mas breve que el dolor cronico y de alta intensidad.

Aunque el dolor que resulta de la inflamacion y el espasmo muscular puede estar iniciado por estimulacion mecanica

o quimica de la terminacion libre de neuronas sensitivas primarias, el dolor neuropatico no requiere un estimulo inicial para la terminacion de nervios libre perifericos. El dolor neuropatico es un sindrome doloroso persistente o cronico que puede resultar del dano al sistema nervioso, los nervios perifericos, el ganglio de la raiz dorsal, la raiz dorsal o al sistema nervioso central.

El dolor neuropatico implica la transmision de una senal de dolor en ausencia de estimulo, y tipicamente resulta de un dano al sistema nervioso. En la mayoria de los casos, se cree que este dolor se produce debido a la sensibilizacion de los sistemas nerviosos periferico y central despues de un dano inicial al sistema periferico (p. ej., a traves de una lesion directa o una enfermedad sistemica). Tipicamente, el dolor neuropatico es urente, fulgurante e implacable en su intensidad y a veces puede ser mas debilitante que la lesion o el proceso patologico inicial que lo indujo.

Los tratamientos existentes para el dolor neuropatico son en gran parte ineficaces. Los opiaceos, tales como morfina, son analgesicos potentes, pero su utilidad es limitada debido a los efectos secundarios adversos mencionados anteriormente, tales como un rapido desarrollo de tolerancia al farmaco, propiedades de capacidad de adiccion fisica y abstinencia, asi como depresion respiratoria, cambios del estado mental, y movilidad intestinal reducida con estrenimiento, nauseas, vomitos concomitantes, y alteraciones en los sistemas endocrino y nervioso. Ademas, frecuentemente, el dolor neuropatico es insensible o solo parcialmente sensible a regimenes analgesicos con opiodes convencionales. Los tratamientos que emplean el antagonista de N-metil-D-aspartato ketamina o el agonista a(2)-adrenergico clonidina pueden reducir el dolor agudo o cronico y permiten una reduccion en el consumo de opioides, pero estos agentes a menudo son poco tolerados debido a los efectos secundarios significativos.

Sindromes de dolor neuropatico incluyen alodinia, diversa neuralgias tales como neuralgia posherpetica y neuralgia del trigemino, dolor por miembro fantasma y sindromes de dolor regional complejo, tales como distrofia simpatica refleja y causalgia. La causalgia se caracteriza a menudo por dolor urente espontaneo combinado con hiperalgesia y alodinia.

Desgraciadamente, no hay un metodo existente para tratar adecuadamente, predeciblemente y especificamente el dolor neuropatico establecido (Woolf C, et al. Neuropathic Pain: A etiology, Symptoms, Mechanisms, and Management, Lancet 1999; 353: 1959-64) ya que los metodos de tratamiento actuales para el dolor neuropatico consisten meramente en tratar de ayudar al paciente a aguantar a traves de terapia psicologica u ocupacional, en lugar de reducir o eliminar el dolor experimentado.

Ishii Y. et al. (Shikwa Gakuho (1986), 86(5), 713 -731) e Ishii Y. et al. (Jap. J. of Pharm. (1984), 36 (Supl.), 216P) ilustran acerca del efecto analgesico del trioxido de arsenico.

Garcia-Chavez et al. (Neurotoxicology (2006), 27(6), 1024) mencionan que la exposicion a arsenito sodico provoca dano en el cerebro, la medula espinal y los nervios perifericos.

Vahidnia A. et al. (Human & Experimental Toxicology (2006), 25(11), 667 - 674) presentan que la exposicion a compuestos de arsenico puede conducir a cancer de piel y pulmon, enfermedad vascular y neuropatia periferica.

Mavromatis Blanche H. et al. (Blood (2006), 108(11), 299B) muestran la utilidad del trioxido de arsenico para el tratamiento del sindrome mielodisplastico.

Kim K. B. et al. (Cancer (2005), 104(8), 1687-1692) presentan la utilizacion de trioxido de arsenico para el tratamiento del melanoma metastatico.

Au Wing Y. et al. (Proceedings of the American Association for Cancer Research (2006), 47) muestran la utilizacion de trioxido de arsenico para el tratamiento de un linfoma no hodgkiniano.

El documento EP1736161 se refiere a la utilizacion de compuestos de arsenico para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias.

Yin K. et al. (Jiangsu Yiyao (2002). 28(9), 662 -665) ilustran acerca de la utilizacion de trioxido de arsenico para tratar la inflamacion de las vias respiratorias en cerdos asmaticos.

Yao X. et al. (Zhongguo Linchuang Kangfu (2004), 8(30),6652 -6653) yZhou Lin-Fuet al. (Jiangsu Med. J. (2002), 28(9), 662 - 665) ilustran acerca de la utilizacion de trioxido de arsenico para el tratamiento del asma.

Tamura A. (Shika Gakuho 1981), 81(3), 511 -531) muestra la utilizacion de trioxido de arsenico para el tratamiento de la inflamacion.

Li L. et al. (Zhongguo Bingli Shengli Zazhi (2007), 23(2), 348 -351) mencionan que el arsenito sodico puede tener efectos terapeuticos en la artritis reumatoide.

El documento W003/090766 se refiere a la utilizacion de compuestos de arsenico tales como hexoxido y trioxido de arsenico para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias.

Por lo tanto, sigue habiendo una necesidad de un metodo o un compuesto mejorados para el tratamiento de dolor cronico y agudo incesante, incluyendo dolor inflamatorio. Tambien hay una necesidad de metodos y agentes mejorados para el tratamiento de enfermedades y afecciones inmunologicas y autoinmunitarias. Esto se consigue mediante la administracion de compuestos de arsenico, segun esta divulgacion.

Compendio de la invencion

La presente invencion trata de las limitaciones apuntadas para la tecnica precedente y proporciona nuevos metodos para reducir la inflamacion y/o el dolor cronico y/o agudo. La presente invencion se basa, en parte, en el descubrimiento y la demostracion de que el metaarsenito sodico (NaAs02) se puede utilizar para reducir la inflamacion y el dolor.

Esta divulgacion, segun un aspecto de la invencion, proporciona metodos para tratar a un mamifero (p. ej., un ser humano) que sufre dolor cronico y/o agudo. Segun ciertas realizaciones de este aspecto de la invencion, la divulgacion proporciona metodos para la utilizacion de metaarsenito sodico (NaAs02) o sus sales, para tratar o prevenir el dolor, incluyendo, por ejemplo, dolor visceral (tal como pancreatitis), dolor relacionado con el cancer (tal como cancer metastatico), sindromes dolorosos centrales (tales como el dolor provocado por una apoplejia), sindromes dolorosos posquirurgicos (p. ej., sindrome posmastectomico), dolor oseo y articular (osteoartritis), dolor vertebral (p. ej., lumbalgia aguda y cronica), dolor miofascial (lesion muscular), dolor posoperatorio, perioperatorio y analgesia preventiva, dolor cronico, dismenorrea, asi como dolor asociado con angina, y dolor inflamatorio de origen diverso (p. ej., asma, osteoartritis, artritis reumatoide).

En una realizacion ejemplar, la invencion proporciona la utilizacion de metaarsenito sodico (NaAs02) en la preparacion de una composicion oral para tratar la hiperalgesia aguda y cronica.

Dentro de un aspecto de la invencion se proporciona un metodo para tratar la inflamacion, que comprende administrar una cantidad terapeuticamente suficiente de metaarsenito sodico (NaAs02) a un mamifero, en donde la administracion del compuesto da como resultado una mejora clinicamente significativa en la afeccion inflamatoria del mamifero. Dentro de una realizacion de la invencion, la mejora clinicamente significativa en la afeccion inflamatoria incluye una o mas de las siguientes: a) una disminucion o inhibicion en el dolor; b) una disminucion o inhibicion en la hinchazon; c) una disminucion o inhibicion en el enrojecimiento; d) una disminucion o inhibicion en la temperatura de un tejido afectado; y e) una disminucion o inhibicion en la perdida de funcion.

Se especula, pero no se asegura con el proposito de esta invencion, que es probable que se produzca la liberacion de histamina, citocininas y otros peptidos en las afecciones inflamatorias, tal como en los pulmones de pacientes asmaticos. Segun esto, en una realizacion, los metodos de la invencion implican la administracion local o sistemica de metaarsenito sodico para tratar la inflamacion y/o el dano tisular presentados, por ejemplo, en vias respiratorias de asmaticos y necrosis relacionada con cancer.

En otra realizacion, los metodos de la invencion proporcionan la administracion oral de metaarsenito sodico para tratar la inflamacion en una zona de tejido danado en un individuo.

En otras realizaciones, la invencion proporciona metodos para tratar el dolor y/o el dano tisular asociados con la inflamacion, p. ej., fibrosis tisular en una enfermedad relacionada con el cancer o inducida de forma autoinmunitaria. Ejemplos de enfermedades inmunitarias y autoinmunitarias que se pueden tratar mediante los presentes metodos incluyen una enfermedad inmunitaria y autoinmunitaria de los sistemas endocrino, neuromuscular, de tejido conectivo, cardiopulmonar, esqueletico y gastrointestinal. En particular, el compuesto de arsenico de la invencion se puede utilizar para tratar trastornos autoinmunitarios y trastornos mediados inmunologicamente tales como esclerosis multiple y otras afecciones relacionadas con el sistema inmunitario.

En otra realizacion, la inflamacion y el dolor provocados por una enfermedad infecciosa, incluyendo infecciones bacterianas, virales, parasitarias, se tratan mediante los metodos de la invencion.

Los metodos de la invencion comprenden administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de metaarsenito sodico. En realizaciones preferidas, la cantidad terapeutica esta en el intervalo de aproximadamente 10 Ig a aproximadamente 200 mg, preferiblemente en dosis divididas que se administran parenteralmente, intratecalmente, oralmente, a traves de inhalacion o topicamente. Una dosis diaria total preferida es de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 70 mg; lo mas preferiblemente aproximadamente 10 mg/kg.

Se especula ademas, pero no se asegura con el proposito de esta invencion, que el metaarsenito sodico inhibe y/o agota leucocitos y linfocitos que estan implicados en la produccion de anticuerpos autoinmunitarios y el dano a tejidos. Segun esto, en una realizacion ejemplar, los metodos de la invencion proporciona la administracion oral de metaarsenito sodico para tratar inflamaciones y/o dano tisular inducidos de forma autoinmunitaria.

El termino quot;hiperalgesiaquot; o quot;sensacion hiperalgesicaquot;, segun se utiliza en la presente memoria, se refiere a una sensibilidad extrema al dolor, que en una forma esta provocada por el dano a nociceptores en los tejidos blandos del cuerpo. La hiperalgesia se puede experimentar en zonas discretas focales o como una forma mas difusa extendida por el cuerpo. Estudios de acondicionamiento han establecido que es posible experimentar una hiperalgesia aprendida de la ultima forma difusa. Tipicamente, la forma focal esta asociada con una lesion, y se divide en dos subtipos: La hiperalgesia primaria describe sensibilidad al dolor que se produce directamente en los tejidos danados. La hiperalgesia secundaria describe sensibilidad al dolor que se produce en tejidos no danados circundantes.

Se ha de entender que tanto la descripcion general precedente como la descripcion detallada siguiente son solamente ejemplares y explicativas y no son restrictivas de la invencion, segun se reivindica.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura 1 es un grafico de barras de datos obtenidos a traves de la determinacion histopatologica de necrosis e inflamacion provocadas por una masa tumoral en ratas tratadas con metaarsenito sodico.

Descripcion detallada de la invencion

Esta invencion proporciona metaarsenito sodico para la utilizacion en metodos de tratamiento de un mamifero (p. ej., un ser humano) que sufre dolor y/o enfermedades o afecciones inflamatorias. En realizaciones particulares, tales metodos incluyen la administracion oral de metaarsenito sodico (NaAs02) para tratar la inflamacion y el dolor agudo y/o cronico.

En ciertas realizaciones, se utiliza metaarsenito sodico (NaAs02) para tratar o prevenir el dolor, incluyendo, por ejemplo, dolor visceral (tal como pancreatitis, cistitis intersticial, colico renal, prostatitis, dolor pelvico cronico), dolor relacionado con cancer, las quot;diniasquot;, p. ej., vulvodinia, dolor de miembros fantasma, avulsiones radiculares, radiculopatia, mononeuropatia traumatica dolorosa, neuropatia compresiva dolorosa, sindrome del tunel carpiano, neuropatia cubital, sindrome del tunel tarsiano, neuropatia diabetica dolorosa, polineuropatia dolorosa, neuralgia del trigemino), sindromes dolorosos centrales (potencialmente provocados virtualmente por cualquier lesion a cualquier nivel del sistema nervioso incluyendo, pero no limitada a, apoplejia, esclerosis multiple, lesion de la medula espinal) y sindromes dolorosos posquirurgicos (p. ej. sindrome posmastectomico, sindrome postoracotomico, dolor de munones), dolor oseo y articular (osteoartritis), dolor vertebral (p. ej., lumbalgia aguda y cronica, dolor de cuello, estenosis vertebral), dolor de hombro, dolor por movimientos repetitivos, dolor agudo tal como dolor dental, faringitis, dolor por cancer, dolor miofascial (lesion muscular, fibromialgia), dolor posoperatorio, perioperatorio y analgesia preventiva (incluyendo, pero no limitado a cirugia general, ortopedica y ginecologica), dolor cronico, dismenorrea (primaria y secundaria), asi como dolor asociado con angina, y dolor inflamatorio de origenes diversos incluyendo reacciones inmunologicas y enfermedades autoinmunitarias (p. ej., osteoartritis, artritis reumatoide, enfermedad reumatica, tenosinovitis y gota, espondilitis anquilosante, bursitis, lupus).

El compuesto reivindicado por la presente invencion tambien se puede utilizar para el tratamiento de cefalea incluyendo cefalea en brotes, migrana, incluyendo la utilizacion profilactica y aguda.

El tecnico experto apreciara que el dolor es un trastorno heterogeneo. En los metodos y las composiciones segun la invencion, el termino quot;dolorquot; se referira a todos los tipos de dolor, incluyendo dolor agudo y persistente. Preferiblemente, el termino se referira a dolores persistentes, tales como, pero no limitados a, neuropatia diabetica, fibromialgia, dolor asociado con trastornos somatoformos, dolor artritico, dolor por cancer, dolor de cuello, dolor de hombro, dolor de espalda, cefaleas en brotes, cefalea por tension, migrana, neuralgia herpetica, dolor de miembros fantasma, dolor central, dolor dental, dolor resistente a NSAID, dolor visceral, dolor quirurgico, dolor posoperatorio, dolor por lesiones oseas, dolor durante las contracciones y el parto, dolor resultante de quemaduras, incluyendo quemaduras solares, dolor posparto, dolor por angina, y dolor relacionado con el tracto genitourinario incluyendo cistitis. El termino dolor persistente tambien se referira preferiblemente a dolor nociceptivo o nocicepcion.

Dentro de otro aspecto de la invencion se proporciona un metodo para tratar la inflamacion, que comprende administrar una cantidad terapeuticamente suficiente de metaarsenito sodico (NaAs02) a un mamifero, en donde la administracion del compuesto da como resultado una mejora clinicamente significativa en la afeccion inflamatoria del mamifero. Dentro de una realizacion de la invencion, la mejora clinicamente significativa en la afeccion inflamatoria incluye una o mas de las siguientes: a) una disminucion o inhibicion en el dolor; b) una disminucion o inhibicion en la hinchazon; c) una disminucion o inhibicion en el enrojecimiento; d) una disminucion o inhibicion en el calor; y e) una disminucion o inhibicion en la perdida de funcion.

El asma es una enfermedad de las vias respiratorias que contiene elementos tanto de inflamacion como de broncoconstriccion. Los regimenes de tratamiento para el asma se basan en la gravedad de la afeccion. Los casos leves bien se dejan sin tratar o bien solo se tratan con agonistas � inhalados que afectan al elemento broncoconstrictivo, mientras que los pacientes con asma mas grave tipicamente son tratados regularmente con corticosteroides inhalados que en un alto grado son de naturaleza antiinflamatoria.

En ciertas otras realizaciones de la invencion, se utiliza metaarsenito sodico para tratar o prevenir las vias respiratorias hiperreactivas y para tratar o prevenir episodios inflamatorios asociados con una enfermedad de las vias respiratorias, p. ej., asma incluyendo asma alergica (atopica o no atopica), asi como broncoconstriccion inducida por ejercicio, asma laboral, exacerbacion viral o bacteriana del asma, otras asmas no alergicas y quot;sindrome del nino sibilantequot;.

La enfermedad pulmonar obstructiva cronica (C0PD, por sus siglas en ingles) es otra enfermedad comun con componentes inflamatorios y broncoconstrictivos. La enfermedad es potencialmente letal, y la morbidez y la mortalidad de la afeccion son considerables. En la actualidad, no hay un tratamiento farmacologico conocido capaz de cambiar el curso de la enfermedad.

El compuesto de arsenico de la invencion, es decir metaarsenito sodico segun una realizacion ejemplar de la presente invencion, tambien se puede utilizar para tratar la enfermedad pulmonar obstructiva cronica incluyendo enfisema, sindrome de fatiga respiratoria del adulto, bronquitis, neumonia, rinitis alergica (estacional y perenne) y rinitis vasomotriz. Tambien puede ser eficaz contra neumoconiosis, incluyendo aluminosis, antracosis, asbestosis, calicosis, ptilosis, siderosis, silicosis, tabacosis y bisinosis.

Por otra parte, el metaarsenito sodico, segun otras realizaciones de la presente invencion, se puede utilizar para el tratamiento de una enfermedad intestinal inflamatoria incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, sindrome del intestino irritable, pancreatitis, nefritis, cistitis (cistitis intersticial), uveitis, trastornos inflamatorios de la piel tales como psoriasis y eccema o artritis reumatoide. Se puede utilizar para tratar la vasculopatia diabetica, la neuropatia diabetica, la retinopatia diabetica o sintomas diabeticos asociados con insulitis (p. ej. hiperglucemia, diuresis, proteinuria y excrecion urinaria incrementada de nitrito y calicreina). Adicionalmente, puede ser eficaz contra la esclerosis multiple.

En otra realizacion, el compuesto de arsenico de la invencion se utiliza para prevenir y/o tratar una enfermedad hepatica inflamatoria o esclerosis multiple.

En una realizacion, se administra metaarsenito sodico a un mamifero para reducir o prevenir la liberacion de histamina.

En otras realizaciones, segun la presente invencion, se administra metaarsenito sodico a un mamifero (p. ej., un ser humano) para tratar o reducir sintomas de inflamacion asociados con enfermedades mediadas inmunitariamente y/o autoinmunitarias, tales como, por ejemplo, lupus eritematoso sistemico (SLE, por sus siglas en ingles), artritis reumatoide (RA, por sus siglas en ingles) autoinmunitaria, vasculitis sistemica; diabetes mellitus insulinodependiente (IDDM [por sus siglas en ingles]; diabetes tipo I), enfermedad intestinal inflamatoria (IBD, por sus siglas en ingles), enfermedad del injerto contra el hospedador (GVH0, por sus siglas en ingles), enfermedad celiaca, enfermedad tiroidea autoinmunitaria, sindrome de Sjogren, gastritis autoinmunitaria, colitis ulcerativa; enfermedad de Crohn; hepatitis autoinmunitaria, cirrosis biliar primaria; colangitis esclerosante primaria; enfermedades autoinmunitarias cutaneas, cardiomiopatia dilatada autoinmunitaria, esclerosis multiple (MS, por sus siglas en ingles), miastenia grave (MG), vasculitis (p. ej., arteritis de Takayasu y granulomatosis de Wegener), enfermedades autoinmunitarias del musculo, trastornos neuromusculares autoinmunitarios, tales como espondilitis anquilosante, esclerosis multiple y encefalitis diseminada aguda; neuropatias mediadas inmunitariamente; enfermedades autoinmunitarias de los testiculos, una enfermedad ovarica autoinmunitaria, uveitis autoinmunitaria, enfermedad de Graves, psoriasis, espondilitis anquilosante, enfermedad de Addison, tiroiditis de Hashimoto, purpura trombocitopenica idiopatica, una enfermedad pulmonar autoinmunitaria tal como enfermedad de Wegener y sindrome de Churg-Strauss; enfermedades pulmonares inmunologicas tales como asma, enfermedad pulmonar infiltrante, enfermedad pulmonar por hipersensibilidad y sarcoidosis; dermatomiosis incluyendo escleroderma y polimiosis; y vitiligo.

Se espera que los metodos de la invencion frenen o detengan el avance de la inflamacion, mejoren al menos algunos sintomas, el funcionamiento y/o incrementen la supervivencia y la recuperacion.

Segun otro cierto aspecto de la presente invencion, se puede utilizar metaarsenito sodico (NaAs02) para inhibir y/o agotar leucocitos o linfocitos y sus secreciones, que estan asociados con el comienzo de trastornos autoinmunitarios en un ser humano. Segun una realizacion de este aspecto de la invencion, la administracion de metaarsenito sodico puede dar como resultado una reduccion en los niveles de autoanticuerpos, celulas B que producen autoanticuerpos y/o celulas T autorreactivas. La reduccion en cualquiera de estos tipos de celulas o sus secreciones puede ser, por ejemplo, al menos 10%, 20%, 30%, 50%, 70% o mas en comparacion con los niveles anteriores al tratamiento.

Segun la presente invencion el metaarsenito sodico se puede utilizar solo o en combinacion con otras medicaciones para el dolor y/o antiinflamatorias tales como, por ejemplo, NSAID.

Modelos en animales de las susodichas enfermedades y afecciones se conocen generalmente en la tecnica, y pueden ser adecuados para evaluar el compuesto de la presente invencion con respecto a sus utilidades potenciales. Finalmente, el compuesto de la presente invencion tambien es util como una herramienta de investigacion (in vivo e in vitro).

El compuesto de la invencion se puede utilizar para tratar a un mamifero que tiene dolor y/o inflamacion, p. ej., dolor asociado a artritis reumatoide o inflamacion asociada a asma. Ejemplos de mamiferos incluyen seres humanos u otros primates (p. ej., chimpances), roedores (p. ej., ratones, ratas o cobayas), conejos, gatos, perros, caballos, vacas y cerdos. En algunos de los sujetos afectados, se espera que el tratamiento de como resultado la inhibicion del avance de y la mejora en los sintomas de dolor y/o inflamacion.

Metodo de administracion

Se puede utilizar cualquier modo de administracion segun la presente invencion, incluyendo administracion parenteral tal como administracion intravenosa, subcutanea, intramuscular e intratecal; tambien se puede utilizar la administracion oral, intranasal, rectal o vaginal; directamente al tumor; parches transdermicos; dispositivos de implante (particularmente para una liberacion lenta); inhaladores, administracion con depositos de accion prolongada y, finalmente, se puede utilizar la administracion topica. El modo de administracion variara segun el tipo de compuesto de arsenico que se utilice y la enfermedad a tratar.

Las composiciones farmaceuticas que se van a utilizar pueden estar en la forma de soluciones esteriles fisiologicamente aceptables (acuosas u organicas), suspensiones coloidales, cremas, pomadas, pastas, capsulas, comprimidos oblongos, comprimidos y obleas. Las composiciones farmaceuticas que comprenden compuestos de arsenico de la invencion pueden estar contenidas en recipientes y/o ampollas de vidrio esteriles sellados. Ademas, el ingrediente activo puede estar microencapsulado, encapsulado en un liposoma, noisoma o lipoespuma solo o junto con anticuerpos de orientacion. Se debe entender que tambien se incluyen formas de administracion de liberacion lenta retardada o sostenida.

Formulacion

El compuesto de arsenico de la invencion se puede formular como preparaciones farmaceuticas para la administracion a mamiferos para el tratamiento del dolor y la inflamacion.

Para la administracion oral, la preparacion farmaceutica puede estar en forma liquida, por ejemplo, soluciones, jarabes o suspensiones, o se puede presentar como un producto farmacologico para la reconstitucion con agua u otro vehiculo adecuado antes de la utilizacion. Tales preparaciones liquidas se pueden preparar mediante medios convencionales con aditivos farmaceuticamente aceptables tales como agentes de suspension (p. ej., jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (p. ej., lecitina o goma arabiga); vehiculos no acuosos (p. ej., aceite de almendra, esteres oleosos o aceites vegetales fraccionados); y conservantes (p. ej., p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo o acido sorbico). Las composiciones farmaceuticas pueden tomar la forma de, por ejemplo, comprimidos o capsulas preparados por medios convencionales con excipientes farmaceuticamente aceptables tales como agentes aglutinantes (p. ej., almidon de maiz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); cargas (p. ej., lactosa, celulosa microcristalina o hidrogenofosfato calcico); lubricantes (p. ej., estearato magnesico, talco o silice); desintegrantes (p. ej., almidon de patata o almidon glicolato sodico); o agentes humectantes (p. ej., laurilsulfato sodico). Los comprimidos se pueden revestir mediante metodos muy conocidos en la tecnica.

Las preparaciones para administracion oral se pueden formular adecuadamente para dar una liberacion controlada del compuesto activo.

Para la administracion bucal, las composiciones pueden tomar la forma de comprimidos o pastillas para chupar formulados de modo convencional.

Para la administracion mediante inhalacion, los compuestos para la utilizacion segun la presente invencion se suministran convenientemente en la forma de una presentacion para pulverizacion de aerosol desde envases presurizados o un nebulizador, con la utilizacion de un propelente adecuado, p. ej., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dioxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificacion se puede determinar proporcionando una valvula para suministrar una cantidad medida. Se pueden formular capsulas y cartuchos de, p. ej., gelatina para la utilizacion en un inhalador o un insuflador que contienen un polvo mixto del compuesto y una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidon.

Los compuestos se pueden formular para la administracion parenteral mediante inyeccion, p. ej. inyeccion en embolada o infusion continua. Tales formulaciones son esteriles. Las formulaciones para inyeccion se pueden presentar en forma de dosificacion unitaria, p. ej., en ampollas o en recipientes de multiples dosis, con un conservante anadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehiculos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulacion tales como agentes de suspension, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para la constitucion con un vehiculo adecuado, p. ej., agua esteril libre de pirogenos, antes de la utilizacion.

Los compuestos tambien se pueden formular en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retencion, p. ej., que contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros gliceridos.

Ademas de las formulaciones descritas previamente, los compuestos tambien se pueden formular como una preparacion de deposito. Tales formulaciones de accion prolongada se pueden administrar mediante implante (por ejemplo, subcutaneamente o intramuscularmente) o mediante inyeccion intramuscular. Asi, por ejemplo, los compuestos se pueden formular con materiales polimericos o hidrofobos adecuados (por ejemplo, como una emulsion en un aceite aceptable) o resinas de intercambio ionico, o como derivados poco solubles, por ejemplo, como una sal poco soluble. Los liposomas y las emulsiones son ejemplos muy conocidos de vehiculos o portadores de suministro para farmacos hidrofilos.

Si se desea, las composiciones se pueden presentar en un envase o dispositivo dispensador que puede contener una o mas formas de dosificacion unitaria que contienen el ingrediente activo. Por ejemplo, el envase puede comprender una lamina metalizada o plastica, tal como un blister. El envase o dispositivo dispensador puede estar acompanado por instrucciones para la administracion.

La invencion tambien proporciona estuches (quot;kitsquot;) para llevar a cabo los regimenes terapeuticos de la invencion. Tales estuches comprenden en uno o mas recipientes cantidades terapeuticamente eficaces de los compuestos de arsenico en forma farmaceuticamente aceptable. El compuesto de arsenico en un vial de un estuche de la invencion puede estar en la forma de una solucion farmaceuticamente aceptable, p. ej., en combinacion con solucion salina esteril, solucion de dextrosa o solucion tamponada, u otro fluido esteril farmaceuticamente aceptable. Alternativamente, el complejo puede estar liofilizado o desecado; en este caso, el estuche comprende ademas opcionalmente en un recipiente una solucion farmaceuticamente aceptable (p. ej., solucion salina, solucion de dextrosa, etc.), preferiblemente esteril, para reconstituir el complejo para formar una solucion con propositos de inyeccion. El estuche tambien puede incluir otro agente o agentes terapeuticos para el tratamiento del dolor y/o la inflamacion en una cantidad apropiada. Este otro agente terapeutico se puede formular como un farmaco de combinacion con el compuesto de arsenico contenido en el estuche, o se puede formular separadamente.

En otra realizacion, un estuche de la invencion comprende ademas una aguja o jeringa, preferiblemente envasada en forma esteril, para inyectar el complejo, y/o una compresa con alcohol envasada. Se incluyen opcionalmente instrucciones para la administracion de los compuestos de arsenico por un medico o por el paciente.

La magnitud de una dosis terapeutica de un compuesto de arsenico en la atencion aguda o cronica del dolor y/o la inflamacion variara con la gravedad de la afeccion que se vaya a tratar y la via de administracion. La dosis, y quiza la frecuencia de las dosis, tambien variara segun la edad, el peso corporal, la afeccion y la respuesta del paciente individual. En general, los intervalos de dosis diarias totales para las afecciones descritas en la presente memoria son generalmente de aproximadamente 10 Ig a aproximadamente 200 mg administrados en dosis dividas administradas parenteralmente u oralmente o topicamente. Una dosis diaria total preferida es de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 70 mg/kg del ingrediente activo; y lo mas preferiblemente aproximadamente 10 mg/kg.

Una dosificacion eficaz conseguida en un animal se puede convertir para la utilizacion en otro animal, incluyendo seres humanos, utilizando factores de conversion conocidos en la tecnica. Vease, p. ej., Freireich et aI., Cancer Chemother Reports 50(4):219-244 (1966) y la Tabla 1 para factores de dosificacion superficial equivalentes.

Tabla 1

De: A:: Raton (20 g) Rata (150 g) Mono (3,5 kg) Perro (8 kg) Ser humano (60 kg)

Raton (20 g): 1 0,5 0,25 0,17 0,08

Rata (150 g): 2 1 0,5 0,25 0,14

Mono (3,5 kg): 4 2 1 0,6 0,33

Perro (8 kg): 6 4 1,7 1 0,5

Ser humano (60 kg): 12 7 3 2 1

5 Se pueden mantener niveles en sangre deseables mediante una infusion continua de un compuesto de arsenico segun se determina por los niveles plasmaticos. Debe apuntarse que el medico responsable deberia saber como y cuando terminar, interrumpir o ajustar la terapia a una dosificacion inferior debido a toxicidad, o disfunciones de la medula osea, el higado o el rinon. A la inversa, el medico responsable tambien deberia saber como y cuando ajustar el tratamiento hasta niveles superiores si la respuesta clinica no es adecuada (excluyendo efectos secundarios

10 toxicos).

De nuevo, se puede emplear cualquier via de administracion adecuada para proporcionar al paciente una dosificacion eficaz de un compuesto de arsenico. Por ejemplo, se puede emplear administracion oral, rectal, vaginal, transdermica, parenteral (subcutanea, intramuscular, intratecal y similares). Las formas de dosificacion incluyen comprimidos, pastillas para chupar, una oblea, dispersiones, suspensiones, soluciones, capsulas, parches y

15 similares. (Vease Remington's Pharmaceutical Sciences).

Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion comprenden un compuesto de arsenico como el ingrediente activo, o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, y tambien pueden contener un portador farmaceuticamente aceptable, y opcionalmente otros ingredientes terapeuticos, por ejemplo medicaciones convencionales para la terapia del dolor. El termino quot;sales farmaceuticamente aceptablesquot; se refiere a sales

20 preparadas a partir de acidos y bases atoxicos farmaceuticamente aceptables, incluyendo acidos y bases inorganicos y organicos.

Las composiciones farmaceuticas incluyen composiciones adecuadas para las vias oral, rectal, mucosa, transdermica, parenteral (incluyendo subcutanea, intramuscular, intratecal e intravenosa), aunque la via mas adecuada en cualquier caso dado dependera de la naturaleza y la gravedad de la afeccion que se trate.

25 En caso de que se emplee una composicion para inyeccion o infusion intravenosa, un intervalo de dosificacion adecuado para la utilizacion es, p. ej., de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 150 mg de dosis diaria total.

Ademas, el portador de arsenico se podria aportar a traves de matrices cargadas y no cargadas utilizadas como dispositivos de aporte de farmacos tales como membranas de acetato de celulosa, tambien a traves de sistemas de aporte dirigidos tales como liposomas fusogenicos unidos a anticuerpos o antigenos especificos.

30 En la utilizacion practica, un compuesto de arsenico se puede combinar como el ingrediente activo en una mezcla intima con un portador farmaceutico segun las tecnicas de composicion farmaceutica convencionales. El portador puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para la administracion, p. ej. oral o parenteral (incluyendo comprimidos, capsulas, polvos, inyecciones o infusiones intravenosas). Al preparar las composiciones para una forma de dosificacion oral, se puede emplear cualquiera de

35 los medios farmaceuticos habituales, p. ej. agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes, conservantes, agentes colorantes y similares; en el caso de las preparaciones liquidas orales, p. ej. suspensiones, soluciones, elixires, liposomas y aerosoles; almidones, azucares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulacion, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares; en el caso de las preparaciones solidas orales, p. ej. polvos, capsulas y comprimidos. Al preparar las composiciones para una forma de dosificacion parenteral, tal como

40 una inyeccion o infusion intravenosa, se pueden emplear medios farmaceuticos similares, p. ej., agua, glicoles, aceites, tampones, azucar, conservantes y similares conocidos por los expertos en la tecnica. Ejemplos de tales composiciones parenterales incluyen, pero no se limitan a, dextrosa al 5% p/v, solucion salina normal u otras soluciones. La dosis total del compuesto de arsenico se puede administrar en un vial de fluido intravenoso, p. ej., que varia de aproximadamente 2 ml a aproximadamente 2.000 ml. El volumen de fluido de dilucion variara segun la

45 dosis total administrada.

0tras realizaciones de la invencion seran evidentes para los expertos en la tecnica considerando la memoria descriptiva y la practica de la invencion divulgada en la presente memoria.

Ejemplos

Ejemplo 1. Utilizacion de modelos en animales para probar la actividad analgesica

Se utilizaron modelos en animales para el dolor inducido quimicamente para determinar la actividad analgesica de 5 diversas concentraciones de metaarsenito sodico y trioxido de arsenico.

Prueba de formalina en ratones. Se administro metaarsenito sodico o trioxido de arsenico oralmente (V0) o intraperitonealmente (IP), respectivamente, a grupos de diez ratones macho derivados de CD-1 (crl.) que pesaban 24 +/- 2 g. Se administraron cada uno de metaarsenito sodico y vehiculo (agua destilada) o trioxido de arsenico y vehiculo una hora antes de la inyeccion subplantar de formalina (0,02 ml, solucion al 2%). La reduccion del tiempo

10 de lamedura inducida por formalina de la pata trasera registrado a intervalos de cinco minutos durante el siguiente periodo de 0 a 35 minutos despues de la inyeccion de formalina en 50% o mas (�50%) indicaba una actividad analgesica significativa. El analisis estadistico se realizo utilizando AN0VA unidireccional seguido por la prueba de Dunnett para comparar los resultados obtenidos con metaarsenito sodico o trioxido de arsenico con los obtenido con vehiculo (referencia) solo. La significacion se considero en Plt;0,05. Los resultados se resumen posteriormente:

Metaarsenito sodico

Tratamiento Ruta Dosis mg/kg Tiempo de lamedura de la para trasera (Segundos) (Media�EEM)Tiempo (minutos)

0-5 5-10 10-15 15-20 20-25 25-30 30-35

Vehiculo V0--66,7�6,4 0,9�0,9 10,1�4,3 81,7�20,7 72,4�25,4 30,8�10,1 4,8�10,6

SMA V0 10 51,2�5,2 0,1�0,1 4,7�4,6 6,5��4,5 20,5�10,8 29,2�7,6 6,6�4,2

SMA V0 1 54,9�6,3 2,7�1,8 7,6�2,8 44,6�13,5 55,7�13,9 45,0�19,3 21,3�9,7

SMA V0 0,1 76,1�8,6 4,3�4,2 24,0�10,4 69,4�13,0 46,0�11,8 44,6�13,0 4,9�1,8

Morfina V0 30 20,8�3,6 0,1�0,1 2,0�1,8 2,0��2,0 10,4��8,2 16,2�8,4 3,3�1,8

SMA: metaarsenito sodicoPlt;0,05 frente al grupo de referencia con vehiculo

Los resultados indican que la administracion oral de metaarsenito sodico en 10 mg/kg provocaba una actividad analgesica significativa a los 15-20 minutos despues de la estimulacion con formalina. El patron, morfina, provocaba un efecto analgesico significativo durante las fases inicial (0-5 minutos) y final (15-25 minutos) despues de la inyeccion de formalina, como se esperaba.

Trioxido de arsenico

Tratamiento Ruta Dosis mg/kg Tiempo de lamedura de la para trasera (Segundos) (Media�EEM) Tiempo (minutos)

0-5 5-10 10-15 15-20 20-25 25-30 30-35

Vehiculo IP-5 ml/kg X 78,9 8,5 40,5 58,7 78,8 61,3 20,7 SEM 6,8 2,7 10,5 18,8 15,0 20,2 12,4

TA IP 10 mg/kg X 9,0� 0,3� 0,0� 0,0� 0,0� 0,0� 0,0 SEM 6,3 0,3 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

TA IP 1 mg/kg X 74,6 2,6� 15,6� 40,0 57,1 53,5 30,0 SEM 11,3 1,5 5,5 13,3 18,1 15,3 18,8

Morfina IP 10 mg/ml X 29,7� 0,0� 0,7� 3,3� 22,8� 30,1 48,0 SEM 5,2 0,0 0,7 1,7 13,8 6,4 11,5

TA: Trioxido de arsenico �: Plt;0,05 frente al grupo de referencia con vehiculo utilizando AN0VA unidireccional seguido por la prueba de Dunnett

La inyeccion intraperitoneal de trioxido de arsenico en 10 mg/kg provocaba una inhibicion significativa de la respuesta de lamedura a la estimulacion con formalina a los intervalos de 0-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-25 y 25-30 minutos despues de la estimulacion con formalina, mientras que la respuesta a la dosis inferior de trioxido de arsenico (1 mg/kg) estaba limitada a los intervalos de 5-10 y 10-15 minutos despues de la estimulacion. El HCl de morfina administrado al mismo tiempo se asociaba con un efecto analgesico a los 0-25 minutos despues de la estimulacion con formalina.

Ensayo de respuesta dolorosa inducida por acido acetico. El metaarsenito sodico se evaluo con respecto a la actividad analgesica en el ensayo de respuesta dolorosa inducida por acido acetico en ratones. El metaarsenito sodico se administro oralmente en dosis de 10, 1 y 0,1 mg/kg para la posible analgesia en el raton. Se utilizo agua destilada como vehiculo. Una hora antes de la inyeccion de acido acetico (0,5%, 20 ml/kg IP), se administro oralmente metaarsenito sodico a grupos de 10 ratones macho derivados de CD-1, que pesaban 24 � 2 g. Una actividad analgesica significativa se definio como una reduccion en el numero de respuestas de contorsion en 50% o mas (� 50%) con relacion a los grupos de referencia a los 5-10 minutos despues de la administracion de acido acetico.

La administracion de 10 mg/kg de metaarsenito sodico estaba asociada con una actividad analgesica significativa (media 7 episodios de contorsion frente a 16 para la referencia). En dosis inferiores el metaarsenito sodico no tenia efecto analgesico.

Ejemplo 2. Utilizacion de modelos en animales para probar la actividad antiinflamatoria de metaarsenito sodico y trioxido de arsenico

El metaarsenito sodico y el trioxido de arsenico se probaron con respecto a posibles efectos protectores contra el choque septico inducido por lipopolisacarido en ratones.

Produccion de citocinas proinflamatorias inducida por LPS. Se administro metaarsenito sodico oralmente en dosis de 0,1, 1 y 10 mg/kg, una hora antes de la estimulacion con lipopolisacarido (LPS; 30 mg/kg IP; Escherechia coli 055:B5). Dos horas despues de la estimulacion con LPS, se tomaron muestras de sangre de 0,1 ml de los ratones a traves de la ruta retroorbital y se centrifugaron para dar plasma para las medidas de citocinas mediante Luminex. Despues de la extraccion de sangre, la mortalidad se verifico y se registro cada 12 horas a lo largo de un periodo de 3 dias. La reduccion en la mortalidad en 50 por ciento o mas ( 50%) indica una proteccion significativa. Los resultados se muestran en la tabla posterior:

Metaarsenito sodico:

Via Dosis % de Proteccion

V0 10 mg/kg 25 V0 1,0 mg/kg 25 V0 0,1 mg/kg 12

21-Acetato de dexametasona

V0 3 mg/kg (75)

Los resultados muestran que el metaarsenito sodico en dosis de 0,1, 1,0 y 10 mg/kg V0 proporcionaba una proteccion moderada contra el choque septico inducido por LPS en ratones. Tambien se observaba una inhibicion significativa de la secrecion de IL-1� con 1 y 10 mg/kg V0 de metaarsenito sodico y la inhibicion de IL-6 (frente a

5 dexametasona en 3 mg/kg) en 10 mg/kg. El metaarsenito sodico no tenia efecto sobre la secrecion de TNF-a, KC o MCP-1.

Neutrofilia inducida por LPS en tejido pulmonar. El metaarsenito sodico se evaluo con respeto a la posible actividad protectora en un modelo en ratones de neutrofilia inducida por LPS en tejidos pulmonares. El metaarsenito sodico en dosis de 0,1, 1 y 10 mg/kg se administro oralmente (V0) dos horas antes de la estimulacion con LPS. Veinticuatro

10 horas despues de la estimulacion con LPS, se recogio fluido de lavado broncoalveolar de animales individuales para los numeros de celulas total y diferencial.

El metaarsenito sodico en 10 mg/kg V0 no se asociaba con cambios significativos en los numeros de celulas. Sin embargo, con 1 mg/kg se observaba una disminucion significativa en los numeros de globulos blancos (total) y neutrofilos (diferencial) y monocitos frente a la referencia con vehiculo tratada con LPS.

15 La dexametasona en 1 mg/kg V0 proporcionaba una proteccion significativa por lo que se refiere a la supresion del numero de globulos blancos total, asi como el numero de neutrofilos y de monocitos diferencial con relacion a la referencia.

Con 10 mg/kg, pero no 1 o 0,1 mg/kg, la administracion de metaarsenito sodico se correlacionaba con una supresion significativa de TNF-a similar a la dexametasona, el patron. Con 1 mg/kg, pero no 0,1 mg/kg o 10 mg/kg, la

20 administracion de metaarsenito sodico se correlacionaba con una reduccion significativa en KC similar a la dexametasona. El efecto sobre KC no parecia estar relacionado con la dosis. Sin concentracion de metaarsenito sodico se observaba secrecion de IL-1�, Il-6 o MCP-1 en el fluido de lavado broncoalveolar.

Ejemplo 3. Estudios de inmunosupresion

Se ha utilizado la hiperplasia de los ganglios linfaticos popliteos (PLN, por sus siglas en ingles) como un indicador

25 fiable de la reaccion del sistema linfatico en estudios del receptor contra el injerto. El modelo de trasplante cardiaco heterotropico en la rata se ha utilizado satisfactoriamente para evaluar agentes inmunosupresores. Una combinacion de ensayo de hiperplasia de PLN y modelo de trasplante cardiaco se utilizo para obtener informacion relativa a la eficacia de linfocitos del receptor tanto en la proliferacion alorreactiva como en el alorrechazo. Los resultados muestran que el metaarsenito sodico tiene efectos inmunosupresores.

30 Trasplante cardiaco. Corazones de donantes se trasplantaron al raton receptor segun se describe (Chen et aI., Transplantation, 56:661-666, 1993; Chen et al., The Journal of Immunology, 152:3107-3318,1994). Los corazones de donantes trasplantados se verificaron cada dia y se administro metaarsenito sodico durante dos semanas o hasta que el injerto era rechazado, lo que ocurriera en primer lugar.

En el modelo de trasplante de corazon, el metaarsenito sodico a la dosis superior (10 mg/kg) mostraba un ligero

35 efecto inmunosupresor en animales tratados con aloantigeno y un efecto positivo global sobre el trasplante. Parece que el metaarsenito sodico puede comprometer la reaccion de linfocitos del receptor a aloantigeno a la dosis superior. Asi, los compuestos de arsenico de la invencion tambien son agentes inmunosupresores.

Ejemplo 4. Artritis inducida por colageno tipo II.

La artritis por colageno en ratas es un modelo experimental de poliartritis que se ha utilizado ampliamente para la

40 prueba preclinica de numerosos agentes antiartriticos que bien estan bajo investigacion preclinica o clinica o bien se utilizan actualmente como agentes terapeuticos en esta enfermedad. Las caracteristicas distintivas de este modelo son un comienzo fiable y el avance de una inflamacion poliarticular consistente facilmente medible, una marcada destruccion de cartilagos con formacion de pano y reabsorcion osea y proliferacion osea periostica de suaves a moderadas. Los agentes terapeuticos que inhiben la produccion o la actividad de Il-1 son especialmente activos en

45 este sistema de prueba, pero otros tipos de agentes antiinflamatorios tienen una actividad de buena a excelente.

Este estudio se acometio para determinar la eficacia oral (V0) sensible a los dosis de metaarsenito sodico y la eficacia intraperitoneal (IP) de trioxido de arsenico, respectivamente, administrados diariamente para la inhibicion de la inflamacion (hinchazon de la pata), la destruccion de cartilagos y la reabsorcion osea que se produce en el desarrollo de la artritis por colageno tipo II en ratas.

5 Los animales (8 por grupo, 4 por grupo para los normales) fueron anestesiados con isoflurano y fueron inyectados con 300 Il de adyuvante incompleto de Freund (Difco, Detroit, MI) que contenia 2 mg/ml de colageno tipo II bovino (Elastin products, 0wensville, Missouri) en la base de la cola y dos zonas en el lomo los dias 0 y 6. La dosificacion por via IP u oral (cada dia a intervalos de 24 horas) se inicio el dia 0 del estudio y continuo hasta el dia 16. Los grupos experimentales eran como sigue:

10 Metaarsenito sodico:

Grupo N Tratamiento: 0ral, cada dia los dias 0-16, 5 ml/kg

1 4 Referencias normales mas agua

2 10 Artritis mas agua

3 10 Artritis mas metaarsenito sodico 10 mg/kg

4 10 Artritis mas metaarsenito sodico 5 mg/kg

Trioxido de arsenico:

Grupo N Tratamiento cada dia los dias 0-16, 10 ml/kg IP grupos 1-4

1 4 Referencias normales mas vehiculo IP

2 8 Artritis mas vehiculo

3 8 Artritis mas trioxido de arsenico 10 mg/kg IP

4 8 Artritis mas trioxido de arsenico 1 mg/kg IP

5 8 Artritis mas trioxido de arsenico 10 mg/kg V0 (5 ml/kg)

Las ratas fueron pesadas los dias 0, 3, 6, 9-17 del estudio y se tomaron medidas con calibre de los tobillos todos los dias empezando el dia 9 (o dia 0 de la artritis). Despues de la medida del peso final el dia 17, los animales fueron anestesiados para la toma de suero y a continuacion se sometieron a eutanasia para la toma de tejidos. Las patas

15 traseras se cortaron transversalmente al nivel del maleolo medial y lateral, se pesaron y se pusieron en formalina, con las rodillas, para la microscopia. El higado, el bazo y el timo se extirparon de cada animal, se pesaron y se descartaron.

Se realizo un muestreo FC los dias 16 utilizando 6 animales por grupo (artriticos) como sigue: los animales 1, 2, 3 se sangraron para las muestras de predosificacion, de 2 y 8 horas; los animales 6, 7 y 8 se sangraron para las

20 muestras de posdosificacion de 1, 4 y 12 horas.

Se determino la patologia morfologica de las ratas tratadas con metaarsenito sodico, pero no se realizo nada para los animales tratados con trioxido de arsenico. Para estas pruebas, las articulaciones del tobillo y la rodilla conservadas y descalcificadas se cortaron por la mitad longitudinalmente (tobillos) o por el plano frontal (rodillas), se procesaron a traves de alcoholes graduados y un agente de aclaramiento, se infiltraron y se embebieron en parafina,

25 se seccionaron y se tineron con azul de toluidina. Todos los tejidos fueron examinados microscopicamente por un patologo veterinario certificado.

A los tobillos y las rodillas artriticos por colageno se les dieron puntuaciones de 0-5 (0 � normal; 5 � grave) con respecto a la inflamacion, la formacion de pano y la reabsorcion osea. El analisis estadistico de los parametros de los pesos de los cuerpos/las patas, el ABC (area bajo la curva) de las patas y los parametros histopatologicos se

30 evaluaron utilizando una prueba de la t de Student con una significacion fijada al nivel de significacion de 5%.

El porcentaje de inhibicion del peso de la pata y el ABC se calcularon utilizando la siguiente formula:

% de inhibicion � A - B/A x 100

A � Media de referencia para la enfermedad - Media normales

B � Media tratados - Media normales

35 Resultados: Metaarsenito sodico: La perdida de peso corporal (debido a la artritis) se inhibia significativamente mediante el tratamiento con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (100% de inhibicion) o MTX (96%), en comparacion con las ratas de referencia para la enfermedad tratadas con vehiculo.

Valor de ED50 calculado � 1,929 mg/kg.

Se observo una inhibicion significativa del diametro del tobillo en ratas tratadas con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (dias 9, 11-17) o MTX (dias 10-17).

La inhibicion del diametro del tobillo (ABC) era significativa para ratas tratadas con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (73% de inhibicion) o MTX (97%), en comparacion con las referencias para la enfermedad. Valor de ED50 calculado

� 8,499 mg/kg.

La inhibicion del peso final de la pata era significativa para ratas tratadas con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (83%) o MTX (95%), en comparacion con las referencias para la enfermedad.

Valor de ED50 calculado � 7,116 mg/kg,

Los pesos relativos del higado se incrementaban, por encima de las referencias normales y artriticas para ratas tratadas con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (17% de incremento sobre las referencias para la enfermedad).

Los pesos relativos de los bazos se reducian mediante el tratamiento con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (10%) o MTX (10%), en comparacion con las ratas de referencia para la enfermedad.

Los pesos relativos de los timos se reducian significativamente en ratas tratadas con 1 mg/kg de metaarsenito sodico (20%), en comparacion con las referencias para la enfermedad.

Todas las ratas de referencia para la enfermedad tratadas con vehiculo tenian sinivitis e inflamacion periarticular de notables a graves en al menos una, y habitualmente ambas, articulaciones del tobillo, con pano y reabsorcion osea moderados, y dano en los cartilagos de minimo a notable. En contraste, todos los parametros histopatologicos del tobillo eran inhibidos significativamente hasta lo normal en ratas tratadas con inhibicion con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (85%) o MTX (97%). Valor calculado de ED50 � 7,080 mg/kg,

Las diez ratas de referencia para la enfermedad tratadas con vehiculo tenian sinovitis e inflamacion periarticular de moderadas a graves en al menos una articulacion de la rodilla, con pano y reabsorcion osea de minimos a moderados, y dano a los cartilagos. En contraste, los parametros histopatologicos de la rodilla eran inhibidos significativamente hacia los normales en ratas tratadas con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (87% de inhibicion) o MTX (100%). Valor calculado de ED50 � 7,924 mg/kg.

Los resultados obtenidos a partir de este estudio indican que el tratamiento oral diario de ratas con 10 mg/kg de metaarsenito sodico inhibe eficazmente los cambios clinicos e histopatologicos asociados con el desarrollo de artritis por colageno tipo II.

Resultados: Trioxido de arsenico y metaarsenito sodico: La perdida de peso corporal era inhibida significativamente mediante el tratamiento IP cada dia con 10 mg/kg de trioxido de arsenico (55% de inhibicion), o el tratamiento V0 cada dia con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (85%), en comparacion con las ratas de referencia para la enfermedad tratadas con vehiculo.

Se observaba una reduccion significativa en el diametro del tobillo en ratas tratadas con 10 mg/kg de trioxido de arsenico (dias 10-17) o 10 mg/kg de metaarsenito sodico (dias 11-17). La inhibicion del ABC del diametro del tobillo era significativa para ratas tratadas IP cada dia con 10 mg/kg de trioxido de arsenico (80% de inhibicion); y V0 cada dia con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (66%), en comparacion con las referencias para la enfermedad.

La inhibicion para el peso final de la pata era significativa para ratas tratadas IP cada dia con 10 mg/kg de trioxido de arsenico (71% de inhibicion) o V0 cada dia con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (69%), en comparacion con las referencias para la enfermedad.

Los pesos relativos del higado se incrementaban por encima de las referencias artriticas para ratas tratadas con 1 o 10 mg/kg de trioxido de arsenico (6% y 10%, respectivamente) o 10 mg/kg de metaarsenito sodico (14%).

Los pesos relativos de los bazos se reducian, por debajo de las referencias normales y artriticas, mediante el tratamiento con 10 mg/kg de trioxido de arsenico (21%) o 10 mg/kg de metaarsenito sodico (10%), en comparacion con las ratas de referencia para la enfermedad. Los pesos relativos del timo se reducian por debajo de las referencias artriticas en ratas tratadas con 10 mg/kg de trioxido de arsenico.

Los resultados de este estudio indican que el tratamiento diario intraperitoneal de ratas con 10 mg/kg de trioxido de arsenico o el tratamiento diario oral con 10 mg/kg de metaarsenito sodico inhibe eficazmente los cambios clinicos asociados con el desarrollo de artritis por colageno tipo II.

Ejemplo 5. Artritis inducida por adyuvante

Este estudio se acometio para evaluar el efecto del metaarsenito sodico (V0, cada dia los dias 0-13) en la inhibicion de la inflamacion periarticular y la reabsorcion osea de artritis por adyuvante establecida. La artritis por adyuvante en ratas es un modelo experimental de poliartritis que se ha utilizado ampliamente para la prueba preclinica de numerosos agentes antiartriticos. Las caracteristicas distintivas de este modelo son un comienzo fiable y el avance de una inflamacion poliarticular potente facilmente medible, reabsorcion osea y proliferacion osea periostica notables. Se produce destruccion de cartilagos, pero es desproporcionadamente leve en comparacion con la

5 inflamacion y la destruccion osea que se produce. La utilizacion del modelo del adyuvante proporciona una oportunidad para estudiar cambios patologicos en una variedad de tejidos distintos a las articulaciones.

Los animales fueron asignados aleatoriamente a los grupos (8 por grupo para el adyuvante, 4 por grupo para las referencias normales y fueron anestesiados con isoflurano y se les inyectaron 100 II de adyuvante completo de Freund (Sigma, St. Louis, M0) que contenia amina lipoide (60 mg/ml) en la base de la cola el dia 0. La dosificacion

10 mediante la via V0 se inicio el dia 0 (tratamiento profilactico) con vehiculo (agua), metaarsenito sodico (3, 10 o 30 mg/kg) o metotrexato (MTX) (0,1 mg/kg). El tratamiento continuaba hasta el dia 13.

Los grupos experimentales eran como sigue:

Grupo N Tratamiento: V0, cada dia los dias 0-13

1 4 Referencias normales mas agua

2 8 Adyuvante mas agua

3 8 Adyuvante mas metaarsenito sodico 30 mg/kg

4 8 Adyuvante mas metaarsenito sodico 10 mg/kg

5 8 Adyuvante mas metaarsenito sodico 3 mg/kg

6 8 Adyuvante mas MTX 0,1 mg/kg

Las ratas se pesaron los dias 0, 4 y 8-13, momentos en los que se ajustaron los volumenes de la dosis. El dia 7 (antes del comienzo de la hinchazon, pero despues del establecimiento de la enfermedad sistemica), se realizaron

15 medidas con calibre de las articulaciones de los tobillos. Los tobillos se midieron de nuevo los dias 8-14. Los pesos corporales finales se tomaron el dia 14. El dia 14, los animales fueron sometidos a eutanasia y las patas traseras, el higado y el bazo se extirparon y se pesaron. Las patas y el bazo se pusieron en formalina y se procesaron para H&E y microscopio.

A los tobillos artriticos por adyuvante (solos los derechos) se les dieron puntuaciones de 0-5 (0 � normal; 5 � grave)

20 con respecto a la inflamacion y la reabsorcion osea. El analisis estadistico del diametro de la articulacion del tobillo se analizo determinando el area bajo la curva de dosificacion (ABC). Para el calculo del ABC, la medida diaria de las articulaciones de los tobillos (utilizando un calibre) para cada rata se introdujo en Microsoft Excel donde se computo el area entre los dias de tratamiento despues del comienzo de la enfermedad hasta el dia de la terminacion. Se determinaron las medias para cada grupo y el % de inhibicion para las referencias de artritis se calculo comparando

25 los valores para animales tratados y normales. Los pesos de las patas, los pesos del bazo y el higado y los parametros histologicos (media � EE) para cada grupo se analizaron con respecto a las diferencias utilizando la prueba de la t de Student u otros analisis apropiados segun se determinaba despues de observar los datos. En ambos casos, la significacion se fijaba en p � 0,05.

El porcentaje de inhibicion del peso de la pata y el ABC se calculo utilizando la siguiente formula:

30 % de inhibicion � A - B/A x 100

A � Media referencia para la enfermedad - media normales

B � Media tratados - media normales

Los calculos de ED50 se realizaron representado el % de inhibicion frente al logaritmo natural de la concentracion de dosis y generando una curva sigmoidea de respuesta a la dosis (pendiente variable). La dosis de concentracion cero

35 (grupo del vehiculo) se incorporo a la grafica asignandola un valor de dosis de 2 unidades logaritmicas inferior que la dosis mas baja dada. Las restricciones de la curva se fijaron en 0 y 100%. Se utilizo un programa informatico para generar una ecuacion para la curva y se calculo la concentracion a la que los animales mostrarian 50% de inhibicion del parametro (ED50).

Resultados. La disminucion media del peso corporal a lo largo del tiempo (debida a la artritis) se inhibia en ratas

40 tratadas V0 con 0,1 mg/kg de MTX (dias significativos 10-14), en comparacion con ratas de referencia tratadas con vehiculo. La perdida media de peso corporal a lo largo del tiempo se incrementaba significativamente en ratas tratadas con 30 mg/kg de metaarsenito sodico (dias 4, 8, 9), en comparacion con las referencias con vehiculo.

La inhibicion de la perdida de peso corporal desde el dia cero era significativa para ratas tratadas con 0,1 mg/kg de MTX (91% de inhibicion). La perdida de peso corporal desde el dia 0 no se inhibia significativamente (2-14%)

45 mediante tratamiento con metaarsenito sodico (3, 10 y 30 mg/kg), en comparacion con las referencias con vehiculo.

Se observaba una inhibicion significativa del incremento del diametro del tobillo en ratas tratadas V0 con 3 mg/kg de metaarsenito sodico (dia significativo 9), 10 mg/kg de metaarsenito sodico (dias significativos 8-14), 30 mg/kg de metaarsenito sodico (dias significativos 8-14) y 0,1 mg/kg de MTX (dias significativos 8-14), en comparacion con las referencias con vehiculo.

Se observaba una inhibicion significativa y sensible a la dosis del incremento de la ABC del diametro del tobillo en ratas tratadas V0 con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (46% de inhibicion), 30 mg/kg de metaarsenito sodico (83% de inhibicion) y 0,1 mg/kg de MTX (96% de inhibicion), en comparacion con las referencias con vehiculo. ED50 calculada para metaarsenito sodico � 10,62 mg/kg,

El incremento del peso final de la pata debido a la artritis se inhibia significativamente y con sensibilidad a la dosis en animales tratados V0 con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (28% de inhibicion), 30 mg/kg de metaarsenito sodico (83% de inhibicion) y 0,1 mg/kg de MTX (99% de inhibicion), en comparacion con las referencias con vehiculo. ED50 calculada para metaarsenito sodico � 14,21 mg/kg.

Los pesos relativos del bazo (incrementados debido a inflamacion y hematopoyesis extramedular potenciada) se reducian significativamente y de forma sensible a la dosis hacia los normales en ratas tratadas V0 con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (50% de reduccion), 30 mg/kg de metaarsenito sodico (91% de reduccion) y 0,01 mg/kg de MTX (77% de reduccion), en comparacion con las referencias con vehiculo.

Los pesos relativos del higado se reducian significativamente hacia los normales en ratas tratadas con MTX (100% de reduccion). Los pesos relativos del higado no se reducian significativamente (7-29%) mediante el tratamiento con metaarsenito sodico (3, 10 y 30 mg/kg).

La reabsorcion osea histopatologica era inhibida significativamente y de forma sensible a la dosis en ratas tratadas V0 con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (59% de inhibicion), 30 mg/kg de metaarsenito sodico (81% de inhibicion) y 0,1 mg/kg de MTX (100% de inhibicion), en comparacion con las referencias con vehiculo. ED50 calculada para metaarsenito sodico � 9,243 mg/kg,

Se observo una inhibicion significativa y sensible a la dosis de la inflamacion histopatologica en comparacion con las referencias con vehiculo en ratas tratadas V0 con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (24% de inhibicion), 30 mg/kg de metaarsenito sodico (76% de inhibicion) y 0,1 mg/kg de MTX (99% de inhibicion). ED50 calculada para metaarsenito sodico � 17,25 mg/kg.

Las medidas de los tobillos (dorsal a ventral) eran inhibidas significativamente y de forma sensible a la dosis mediante tratamiento con 10 mg/kg de metaarsenito sodico (36% de inhibicion), 30 mg/kg de metaarsenito sodico (81% de inhibicion) y 0,1 mg/kg de MTX (97% de inhibicion), en comparacion con las referencias con vehiculo. ED50 calculada para metaarsenito sodico � 13,65 mg/kg,

La inflamacion esplenica y la atrofia linfoide eran inhibidas significativamente y de forma sensible a la dosis en ratas que recibian 10 mg/kg de metaarsenito sodico (32% y 29% de inhibicion, respectivamente), 30 mg/kg de metaarsenito sodico (89% y 39% de inhibicion, respectivamente) y 0,1 mg/kg de MTX (100% y 50% de inhibicion, respectivamente), en comparacion con las referencias con vehiculo.

Los resultados de este estudio indican que el tratamiento oral (V0) con 10 mg/kg (cada dia) o 30 mg/kg (cada 2 dias) de metaarsenito sodico inhibe eficazmente y de forma sensible a la dosis los cambios clinicos e histopatologicos asociados con el desarrollo de artritis por adyuvante. Una dosis diaria de 30 mg/kg de metaarsenito sodico era toxica (basado en cambios en el peso corporal), pero la dosificacion un dia si y uno no durante la fase activa de la enfermedad era bien tolerada y los pesos corporales se siguieron a continuacion con las referencias para la enfermedad desde el dia 10 hasta la terminacion del estudio.

Ejemplo 6. Tratamiento de osteolisis inducida por tumores con metaarsenito sodico

En este estudio, se evaluo una posible terapia para el tratamiento de la osteolisis osea inducida por tumores, metaarsenito sodico, utilizando un modelo singeneico de cancer de huesos en ratas. En resumen, la linea celular de carcinoma de glandula mamaria de rata, MRMT-1, se inyecto en el espacio medular de la tibia proximal el Dia 1 y los animales fueron dosificados mediante una sonda oral con metaarsenito sodico como vehiculo una vez al dia desde los Dias 1-14. Se utilizo morfina como un articulo de referencia y se dosifico justo antes de la prueba conductual. A la conclusion del periodo experimental, las tibias izquierdas se extirparon para la confirmacion radiografica de la osteolisis tumoral. Las radiografias se utilizaron para seleccionar dos huesos representativos de cada grupo para la exploracion micro-CT. Todas las muestras oseas se descalcificaron para el tenido con TRAP y la evaluacion de la actividad osteoclastica (superficies de reabsorcion) y para la determinacion histopatologica de la estructura osea y la carga tumoral. La eficacia del metaarsenito sodico se basaba en una comparacion con el grupo inoculado con tumor tratado con vehiculo.

Los resultados histopatologicos mostraban que a un nivel de dosis de 10 mg/kg el metaarsenito sodico demostraba una tendencia positiva a la mejora de diversos aspectos de dano oseo inducido por cancer. Los datos muestran que en 10 mg/kg, el metaarsenito sodico tenia una fuerte tendencia positiva hacia la mejora de los osteoclastos y la osteolisis inducidos por tumores. Los datos se muestran en la Figura 1.

Ejemplo 7. Perfil farmacocinetico del metaarsenito sodico, despues de la administracion oral e I.V.

Se determinaron los perfiles farmacocineticos plasmaticos y cerebrales despues de la administracion oral (V0) e intravenosa (IV) de metaarsenito sodico en ratones CD-1 macho. Setenta ratones albinos CD-1 (ICR) macho 5 (aproximadamente cuatro semanas de edad, 18-27 g al empezar la prueba) fueron asignados aleatoriamente a los grupos de tratamiento. Los animales se mantuvieron en ayunas durante dos horas antes de la administracion del farmaco de prueba. Los animales se trataron con 10 mg/kg (V0) o 5 mg/kg (IV), con un volumen de dosis elegido de 10 ml/kg. Despues de la administracion, se obtuvieron muestras de sangre (de 0,2 a 0,3 ml) a traves de la vena cava bajo anestesia con isoflurano a los 5, 15, 30, 60, 120, 240, 480, 1.440, 1.920, 2.880, 3.360 y 4.320 minutos despues

10 de la dosis. Inmediatamente despues de cada extraccion de sangre, los animales fueron sacrificados y el cerebro se extirpo a los 5, 30, 60, 120, 240, 480, 1440, 2880 y 4320 minutos despues de la dosis.

Las muestras de plasma y cerebro entero se digirieron con acido nitrico concentrado en una bomba de Teflon a 105�C. El digerido se diluyo hasta 40 ml para el analisis mediante ICP-MS. El digerido se aspiro en el plasma acoplado inductivamente y los iones resultantes se extrajeron mediante una interfaz de vacio a un analizador de

15 masas cuadripolar. La cantidad de arsenico en las muestras se midio mediante comparacion de la respuesta a una solucion estandar de masa 75. Se analizaron NRCC-D0LT-3 y D0RM-2 como materiales de referencia estandar.

Se analizaron los datos frente a la concentracion de la muestra de estudio para generar los siguientes parametros FC mediante analisis no compartimental (WinNonlin, version 2.1):

Parametro: Unidades Notas

Tmax: Hora Tiempo para alcanzar la concentracion maxima

Cmax: ng/ml Concentracion superior dentro del espacio de tiempo

ABCtotal: ng.h/ml �rea bajo la curva, generada por el metodo trapezoidal de logaritmico lineal para la interpolacion

F%: % Biodisponibilidad de animales dosificados oralmente

Los resultados se indican en las tablas siguientes: Resultados FC en plasma: Metaarsenito sodico (V0, 10 mg/kg)

Parametro Farmacocinetico (FC): Unidades Resultados FC (N�3)

ABCtotal: mg�h/kg 6,85

Cmax: mg/kg 0,52

Tmax: h 4

F%: % 101%

El analisis farmacocinetico se completaba utilizando el valor medio (N�3) de la concentracion en cada momento de la extraccion.

Resultados FC en Plasma: Metaarsenito Sodico (IV, 5 mg/kg) Resultados FC en el Cerebro: Metaarsenito sodico (V0, 10 mg/kg)

Parametro Farmacocinetico (FC): Unidades Resultados FC (N�3)

ABCtotal: mg�h/kg 3,38

Cmax: mg/kg 0,41

Tmax: h 0,25

F%: % N/A

El analisis farmacocinetico se completaba utilizando el valor medio (N�3) de la concentracion en cada momento de la extraccion. N/A: No aplicable

Parametro Farmacocinetico (FC): Unidades Resultados FC �N�3)

ABCtotal: mg�h/kg 6,73

Cmax: mg/kg 0,33

Tmax: h 8

F%: % 87%

Resultados FC en el Cerebro: Metaarsenito sodico (IV, 5 mg/kg)

Parametro Farmacocinetico (FC): Unidades Resultados FC (N�3)

ABCtotal: mg�h/kg 3,86

Cmax: mg/kg 0,32

Tmax: h 4

F%: % N/A

Claims

REIVINDICACIONES

1.

Metaarsenito sodico formulado para la administracion oral para la utilizacion en el tratamiento del dolor en un mamifero, en donde dicho dolor es dolor provocado por apoplejia, dolor posquirurgico, osteoartritis, dolor vertebral, lesion muscular, dolor perioperatorio, dismenorrea, dolor asociado con angina, dolor provocado por una enfermedad infecciosa o enfermedades autoinmunitarias.
2.

Metaarsenito sodico para la utilizacion segun la reivindicacion 1, en donde el dolor es dolor visceral, dolor agudo, dolor cronico o dolor central.
3.

Metaarsenito sodico para la utilizacion segun la reivindicacion 1, en donde el dolor esta provocado por neuralgia herpetica.
4.

Metaarsenito sodico para la utilizacion segun la reivindicacion 1, en donde la cantidad de dosificacion de metaarsenito sodico es de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 70 mg/kg.
5.

Metaarsenito sodico para la utilizacion segun la reivindicacion 1, en donde la cantidad de dosificacion de metaarsenito sodico es de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg.
6.

Metaarsenito sodico formulado para la administracion oral para la utilizacion en el tratamiento de la inflamacion en un mamifero, en donde la inflamacion esta asociada con un trastorno autoinmunitario o un trastorno mediado inmunologicamente, asma, enfermedad pulmonar o enfermedad pulmonar obstructiva cronica.
7.

Metaarsenito sodico para la utilizacion segun la reivindicacion 6, en donde la inflamacion esta asociada con artritis, esclerosis multiple, enfermedad de Crohn o colitis ulcerativa.
8.

Metaarsenito sodico para la utilizacion segun la reivindicacion 7, en donde la enfermedad autoinmunitaria es lupus

o artritis reumatoide.
9.

Metaarsenito sodico para la utilizacion segun la reivindicacion 6, en donde el trastorno autoinmunitario o el trastorno mediado inmunologicamente es diabetes tipo I, vasculopatia diabetica, neuropatia diabetica, retinopatia diabetica o sintomas diabeticos asociados con insulitis.
10.

Metaarsenito sodico para la utilizacion en el tratamiento del rechazo de tejidos u organos en un mamifero.
11.

Un estuche que comprende al menos una cantidad de dosificacion terapeuticamente eficaz de metaarsenito sodico formulado para la administracion oral y al menos una cantidad de dosificacion terapeuticamente eficaz de un agente para el tratamiento del dolor, en donde dicho agente para el tratamiento del dolor no es un compuesto de arsenico.
12.

Un estuche que comprende al menos una cantidad de dosificacion terapeuticamente eficaz de metaarsenito sodico formulado para la administracion oral y al menos una cantidad de dosificacion terapeuticamente eficaz de un agente antiinflamatorio, en donde dicho agente antiinflamatorio no es un compuesto de arsenico.