ES2504977T3 - Derivados hetero-bicíclicos como inhibidores del VHC - Google Patents

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Wim Gaston Verschueren
Pierre Jean-Marie Bernard Raboisson
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Abstract

Un compuesto de fórmula I: o un estereoisómero del mismo, en donde: cada uno de es, independientemente, pirrolidin-2-ilo, 2-aza-biciclo[3.1.0]hexan-3-ilo, piperidin-2-ilo, 2-azabiciclo[ 2.2.1]heptan-2-ilo u octahidro-1H-indol-2-ilo, en donde cada uno de dichos heterociclos puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno; es CR4>=C-NH, NH-C>=CH o NH-C>=N; X1 es CH y X2 es CH; o X1 es CH y X2 es N; o X1 es N y X2 es CH; W es carbonilo, sulfonilo o CR5R6; R y R' se seleccionan, independientemente, de -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde R1 se selecciona de alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxilo o dimetilamino; cicloalquilo C3-6; tetrahidropiranilo; fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi C1-4, trifluorometoxi, o 2 sustituyentes en átomos adyacentes del anillo forman un grupo 1,3-dioxolano; bencilo opcionalmente sustituido con halo o metoxi; heteroarilo; y heteroarilmetilo; R2 se selecciona de hidrógeno, hidroxilo, amino, mono- o di-alquil C1-4-amino, (cicloalquil C3-6)(alquil C1- 4)amino, alquil C1-4carbonilamino, fenilamino, alquil C1-4oxicarbonilamino, (alquil C1-4oxicarbonil)(alquil C1-4)amino, alquil C1-4aminocarbonilamino, tetrahidro-2-oxo-1(2H)-pirimidinilo, pirrolidin 1-ilo, piperidin- 1-ilo, 3,3-difluoropiperidin-1-ilo, morfolin-1-ilo, 7-azabiciclo[2.2.1]hept-7-ilo e imidazol-1-ilo; y R3 es hidrógeno o alquilo C1-4, o CR2R3 juntos forman carbonilo; o CR1R3 forma un grupo ciclopropilo; R4 es hidrógeno, alquilo C1-4 o ciano ; R5 y R6, cada uno independientemente, son alquilo C1-4; o CR5R6 juntos forman cicloalquilo C3-7, oxetano, tetrahidrofurano; o sales farmacéuticamente aceptables o un solvato del mismo.

Description

imagen1
DESCRIPCIÓN
Derivados hetero-bicíclicos como inhibidores del VHC
5 Campo técnico
Esta invención se refiere a derivados hetero-bicíclicos, en particular derivados de quinolinona, que son inhibidores del virus de la hepatitis C (VHC), a su síntesis y a su uso, solos o en combinación con otros inhibidores del VHC, en el tratamiento o la profilaxis del VHC.
10 Técnica de Antecedentes
El VHC es un virus de ARN de cadena sencilla, de sentido positivo, perteneciente a la familia de virus Flaviviridae en el género hepacivirus. El genoma viral se traduce en un marco de lectura abierto sencillo que codifica múltiples proteínas
15 estructurales y no estructurales.
Después de la infección aguda inicial, una mayoría de individuos infestados desarrollan hepatitis crónica debido a que el VHC se replica preferiblemente en los hepatocitos, pero no es directamente citopático. En particular, la falta de una respuesta de linfocitos T vigorosa y la alta propensión del virus a mutar parecen fomentar una tasa elevada de infección
20 crónica. La hepatitis crónica puede progresar a una fibrosis hepática, que conduce a la cirrosis, la enfermedad hepática en fase terminal y CHC (carcinoma hepatocelular), haciéndola la causa principal de trasplantes de hígado.
Existen seis genotipos del VHC y más de 50 subtipos, que se distribuyen de manera diferente geográficamente. El VHC genotipo 1 es el genotipo predominante en Europa y en los EE.UU. La extensa heterogeneidad genética del VHC tiene
25 importantes implicaciones diagnósticas y clínicas, explicando quizás las dificultades en el desarrollo de vacunas y la falta de respuesta a la terapia actual.
La transmisión del VHC puede producirse a través del contacto con sangre o productos de la sangre contaminados, por ejemplo después de una transfusión de sangre o el uso de fármacos por vía intravenosa. La introducción de ensayos de
30 diagnóstico utilizados en los análisis de sangre ha llevado a una tendencia a la baja en la incidencia del VHC posttransfusión. Sin embargo, dada el lento progreso de la enfermedad hepática en fase terminal, las infecciones existentes continuarán constituyendo una carga médica y económica seria durante décadas.
Terapias para el VHC actuales se basan en interferón-alfa (IFN-α) (pegilado) en combinación con ribavirina. Esta terapia
35 de combinación proporciona una respuesta virológica sostenida en el 40% de los pacientes infestados por el VHC genotipo 1 y aproximadamente el 80% de los infestados por los genotipos 2 y 3. Además de la eficacia limitada en el VHC genotipo 1, esta terapia de combinación tiene efectos secundarios significativos, incluyendo síntomas similares a la gripe, alteraciones hematológicas y síntomas neuropsiquiátricos. Por lo tanto existe una necesidad de tratamientos más eficaces, más convenientes y mejor tolerados.
40 La experiencia con los fármacos contra el VIH, en particular con los inhibidores de la proteasa del VIH, ha enseñado que la farmacocinética sub-óptima y regímenes de dosificación complejos resultan rápidamente en incumplimientos involuntarios. Esto, a su vez, significa que la concentración valle de 24 horas (concentración plasmática mínima) para los respectivos fármacos en un régimen de VIH cae con frecuencia por debajo del umbral de CI90 o DE90 durante largos
45 periodos del día. Se considera que un nivel valle de 24 horas de al menos la CI50, y más realísticamente de la CI90 o DE90, es esencial para ralentizar el desarrollo de mutantes resistentes a fármacos. El logro de la farmacocinética y la tasa de metabolismo de los fármacos, necesarias para permitir niveles valle de este tipo, proporciona un desafío exigente para el diseño de fármacos.
50 La proteína NS5A del VHC está situada aguas abajo de la proteína NS4B y aguas arriba de la proteína NS5B. Tras la escisión post-traducción por parte de la serina proteasa NS3/4A del virus, la NS5A madura en una fosfoproteína de tres dominios, con contenido en zinc, que existe en forma de una especie hipofosforilada (56-kDa, p56) o hiperfosforilada (58-kDa, p58). La NS5A del VHC está implicada en múltiples aspectos del ciclo de vida viral, incluyendo la replicación viral y el ensamblaje de partículas infecciosas, así como la modulación del entorno de su célula huésped. Aunque no se
55 ha atribuido función enzimática alguna a la proteína, se reseña que interactúa con numerosos factores virales y celulares.
Un cierto número de patentes y solicitudes de patente describen compuestos con actividad inhibidora del VHC, en particular la fijación como objetivo de NS5A. El documento WO2006/133326 describe derivados de estilbeno, mientras 60 que los documentos WO 2008/021927 y WO 2008/021928 describen derivados de bifenilo que tienen actividad inhibidora de la NS5A del VHC. El documento WO 2008/048589 describe derivados de 4-(feniletinil)-1H-pirazol y su uso antiviral. El documento WO 2008/070447 describe una amplia gama de compuestos inhibidores del VHC, incluido un resto bencimidazol. Los documentos WO-2010/017401 y WO-2010/065681 describen ambos inhibidores de bis
imagen2
imidazol de NS5A del VHC. Se puede hacer referencia adicional a los documentos WO2008/021936 y WO2004/005264.
Existe una necesidad de inhibidores del VHC que puedan superar las desventajas de la actual terapia del VHC tales 5 como efectos secundarios, eficacia limitada, el surgimiento de la resistencia y fracasos en el cumplimiento, así como mejorar la respuesta de carga viral sostenida.
La presente invención se refiere a un grupo de derivados hetero-bicíclicos inhibidores del VHC, en particular derivados de quinolinona, con propiedades útiles en relación con uno o más de los siguientes parámetros: eficacia antiviral, perfil
10 favorable del desarrollo a la resistencia, toxicidad y genotoxicidad reducida o ausente, farmacocinética y farmacodinámica favorables, facilidad de formulación y administración, e interacciones fármaco-fármaco, limitadas o ausentes, con otras sustancias medicamentosas, en particular otros agentes anti-VHC.
Los compuestos de la invención también pueden ser atractivos, debido al hecho de que carecen de actividad contra
15 otros virus, en particular contra el VIH. Pacientes infestados por el VIH sufren a menudo co-infecciones tales como el VHC. El tratamiento de tales pacientes con un inhibidor del VHC, que también inhibe el VIH, puede conducir a la aparición de cepas resistentes del VIH.
Descripción de la Invención 20
imagen3
incluidos cualesquiera posibles estereoisómeros de los mismos, en donde: imagen4
cada uno de
es, independientemente, pirrolidin-2-ilo, 2-aza-biciclo[3.1.0]hexan-3-ilo, piperidin-2-ilo, 2-aza25 biciclo[2.2.1]heptan-2-ilo u octahidro-1H-indol-2-ilo, en donde imagen5cada uno de dichos heterociclos puede estar
opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
es CR4=C-NH, NH-C=CH o NH-C=N; X1 es CH y X2es CH; o X1 es CH y X2es N; o X1 es N y X2es CH;
30 W es carbonilo, sulfonilo o CR5R6;
R y R' se seleccionan, independientemente, de -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde R1 se selecciona de alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxilo o
dimetilamino; cicloalquilo C3-6; tetrahidropiranilo; fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3
35 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi C1-4, trifluorometoxi, o 2 sustituyentes en átomos adyacentes del anillo forman un grupo 1,3-dioxolano; bencilo opcionalmente sustituido con halo o metoxi; heteroarilo; y heteroarilmetilo;
R2 se selecciona de hidrógeno, hidroxilo, amino, mono-o di-alquil C1-4-amino, (cicloalquil C3-6)(alquil C14)amino, alquil C1-4carbonilamino, fenilamino, alquil C1-4oxicarbonilamino, (alquil C1-4oxicarbonil)(alquil 40 C1-4)amino, alquil C1-4aminocarbonilamino, tetrahidro-2-oxo-1(2H)-pirimidinilo, pirrolidin 1-ilo, piperidin
1-ilo, 3,3-difluoropiperidin-1-ilo, morfolin-1-ilo, 7-azabiciclo[2.2.1]hept-7-ilo e imidazol-1-ilo; y R3 es hidrógeno o alquilo C1-4, o CR2R3 juntos forman carbonilo; o CR1R3 forma un grupo ciclopropilo;
45 R4 es hidrógeno, alquilo C1-4 o ciano; R5 y R6, cada uno independientemente, son alquilo C1-4; o CR5R6 juntos forman cicloalquilo C3-7, oxetano, tetrahidrofurano;
o sales farmacéuticamente aceptables o un solvato de los mismos.
50 En otro aspecto, la presente invención proporciona compuestos que pueden ser representados por la fórmula (I’) incluidos cualesquiera posibles estereoisómeros de los mismos, en donde: imagen6
imagen7
cada uno de
es, independientemente, pirrolidin-2-ilo, 2-aza-biciclo[3.1.0]hexan-3-ilo, piperidin-2-ilo, 2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-ilo u octahidro-1H-indol-2-ilo; imagen8
5 es CH=C-NH, NH-C=CH o NH-C=N;
R y R' se seleccionan, independientemente, de -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde R1 se selecciona de alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxilo o
dimetilamino; cicloalquilo C3-6; tetrahidropiranilo; fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3
10 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi C1-4, trifluorometoxi, o 2 sustituyentes en átomos adyacentes del anillo forman un grupo 1,3-dioxolano; bencilo opcionalmente sustituido con halo o metoxi; heteroarilo; y heteroarilmetilo;
R2 se selecciona de hidrógeno, hidroxilo, amino, mono-o di-alquil C1-4-amino, (cicloalquil C3-6)(alquil C14)amino, alquil C1-4carbonilamino, fenilamino, alquil C1-4oxicarbonilamino, (alquil C1-4oxicarbonil)(alquil 15 C1-4)amino, alquil C1-4aminocarbonilamino, tetrahidro-2-oxo-1(2H)-pirimidinilo, pirrolidin 1-ilo, piperidin
1-ilo, 3,3-difluoropiperidin-1-ilo, morfolin-1-ilo, 7-azabiciclo[2.2.1]hept-7-ilo e imidazol-1-ilo; y
R3 es hidrógeno o alquilo C1-4, o
CR2R3 juntos forman carbonilo; o
CR1R3 forma un grupo ciclopropilo;
20 y las sales farmacéuticamente aceptables o los solvatos de los mismos.
En un aspecto adicional, la invención se refiere al uso de compuestos de fórmula I, o sub-grupos de los mismos, según se especifica en esta memoria, para inhibir el VHC. Alternativamente, se proporciona el uso de dichos compuestos para la fabricación de un medicamento para inhibir el VHC.
25
En una primera realización de la presente invención, cada uno de
imagen9es independientemente pirrolidin-2-ilo, 2-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-ilo o piperidin-2-ilo, en donde cada uno de dichos heterociclos puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
30 En una segunda realización de la presente invención, cada uno de
imagen10es independientemente pirrolidin-2-ilo o 2aza-biciclo [3.1.0]hexano-3-ilo, en donde cada uno de dichos heterociclos puede estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
En una tercera realización de la presente invención
imagen11es CH=C-NH. 35 En una realización adicional R y R' son idénticos.
Todavía en una realización adicional, R2 es hidroxilo, amino, mono-o di-alquil C1-4amino, alquil C1-4carbonilamino, alquil C1-4oxicarbonilamino; en particular, R2 es alquil C1-4carbonilamino o alquil C1-4oxicarbonilamino, y R3 es hidrógeno.
40 En una realización adicional, R1 se selecciona de alquilo C1-4, alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo; y fenilo, opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y metilo. En particular, R1 se selecciona de alquilo C3-4 ramificado; alquilo C2-3 sustituido con metoxi; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente seleccionado de halo y metilo.
45 En un aspecto adicional, la invención proporciona un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato o solvato del mismo, para uso en el tratamiento o la profilaxis (o la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis) de la infección por el VHC. Genotipos del VHC representativos en el contexto del tratamiento
o la profilaxis de acuerdo con la invención incluyen, pero no se limitan a los genotipos 1b (que prevalece en Europa) y 50 1a (que prevalece en América del Norte).
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Las formas estereoisómeras puras de los compuestos y compuestos intermedios tal como se mencionan en esta memoria se definen como isómeros sustancialmente libres de otras formas enantioméricas o diastereoméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o compuestos intermedios. En particular, la expresión "puros 5 en cuanto a los estereoisómeros" se refiere a compuestos o compuestos intermedios que tienen un exceso estereoisomérico de al menos 80% (es decir, mínimo 90% de un isómero y máximo 10% de los otros isómeros posibles) hasta un exceso estereoisomérico de 100% (es decir, 100% de un isómero y nada del otro), más en particular, compuestos o compuestos intermedios que tienen un exceso estereoisomérico de 90% hasta 100%, incluso más en particular que tienen un exceso estereoisomérico de 94% hasta 100%, y más en particular que tienen un exceso
10 estereoisomérico de 97% hasta 100%. Las expresiones "enantioméricamente puros" y "diastereoméricamente puros" deben entenderse de una manera similar, pero entonces teniendo en cuenta el exceso enantiomérico, y el exceso diastereomérico, respectivamente, de la mezcla en cuestión.
Formas puras en cuanto a los estereoisómeros o estereoisómeros de los compuestos y compuestos intermedios de
15 esta invención se pueden obtener mediante la aplicación de procesos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los enantiómeros pueden separarse unos de otros mediante la cristalización selectiva de sus sales diastereoméricas con ácidos o bases ópticamente activos. Ejemplos de los mismos son ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico y ácido canfosulfónico. Alternativamente, los enantiómeros pueden separarse por técnicas cromatográficas utilizando fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoquímicamente isoméricas puras también
20 se pueden derivar de las correspondientes formas estereoisómeras puras de los materiales de partida apropiados, con la condición de que la reacción se produzca de manera estereoespecífica. Preferiblemente, si se desea un estereoisómero específico, dicho compuesto se sintetizará por métodos de preparación estereoespecíficos. Estos métodos emplearán ventajosamente materiales de partida puros en cuanto a los enantiómeros.
25 Los racematos diastereoméricos de los compuestos de fórmula I pueden obtenerse por separado por métodos convencionales. Métodos de separación física apropiados que se pueden emplear ventajosamente son, por ejemplo, cristalización selectiva y cromatografía, p. ej. cromatografía en columna o cromatografía de fluidos supercríticos.
Los compuestos de fórmula I y subgrupos de compuestos de fórmula I según se definen anteriormente en esta
30 memoria tienen varios centros de quiralidad. De interés son los centros estereogénicos del anillo de pirrolidina en el átomo de carbono 2. La configuración en esta posición puede ser la correspondiente a L-prolina, es decir,
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o la correspondiente a D-prolina, es decir,
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De particular interés son compuestos de fórmula I o subgrupos de los mismos según se define en esta memoria, que están de acuerdo con la fórmula Ia.
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También de interés es la configuración del grupo -CR1R2R3: cuando R1 se selecciona de alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxilo o dimetilamino; cicloalquilo C3-6; y tetrahidropiranilo,entonces se prefiere la configuración S; cuando R1 se selecciona de fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados
10 independientemente de halo, alcoxi C1-4, trifluorometoxi o 2 sustituyentes en átomos adyacentes del anillo forman un grupo 1,3-dioxolano; y heteroarilo; entonces se prefiere la configuración R.
Las sales por adición farmacéuticamente aceptables comprenden el ácido no tóxico terapéuticamente activo y las formas de sal por adición de bases de los compuestos de fórmula (I) o sus subgrupos. De interés son las formas libres,
15 es decir, no salinas de los compuestos de fórmula I, o de cualquier subgrupo de compuestos de fórmula I especificados en esta memoria.
Las sales por adición de ácidos farmacéuticamente aceptables pueden obtenerse convenientemente tratando la forma de base con un ácido apropiado. Ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como 20 hidrácidos halogenados, p. ej., ácido clorhídrico o bromhídrico, ácido sulfúrico, nítrico, fosfórico y los ácidos similares; o ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético, propiónico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (es decir, etanodioico), malónico, succínico (es decir, ácido butanodioico), maleico, fumárico, málico (es decir, ácido hidroxilbutanodioico), tartárico, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, p-toluenosulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico y ácidos similares. Inversamente, dichas formas de sal pueden convertirse, por
25 tratamiento con una base apropiada, en la forma de base libre.
Los compuestos de fórmula (I) que contienen un protón de carácter ácido también se pueden convertir en sus sales por adición de bases, en particular formas de sales por adición de metales o aminas, por tratamiento con bases orgánicas e inorgánicas apropiadas. Formas de sales de bases apropiadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales
30 de metales alcalinos y alcalinotérreos, p. ej. las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, sales con bases orgánicas, p. ej. las sales de benzatina, N-metil-D-glucamina, sales de hidrabamina, y sales con aminoácidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares.
El término "solvatos" abarca cualesquiera solvatos farmacéuticamente aceptables que son capaces de formar los
35 compuestos de fórmula I, así como las sales de los mismos. Tales solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos, p. ej., etanolatos, propanolatos, y similares.
Algunos de los compuestos de fórmula I también pueden existir en formas tautómeras. Por ejemplo, las formas tautómeras de grupos amida (-C(=O)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-). Las formas tautoméricas, aunque no se indique explícitamente en las fórmulas estructurales representadas en esta memoria, pretenden estar incluidas dentro del alcance de la presente invención.
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5 Tal como se utiliza en esta memoria, "alquilo C1-4", como un grupo o parte de un grupo, define grupos hidrocarbonados de cadena lineal o ramificada, saturados, que tienen de 1 a 4 átomos de carbono tales como, por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo. Para los fines de la presente invención, de interés entre alquilo C1-4 es alquilo C3-4, es decir, grupos hidrocarbonados de cadena lineal o ramificada que tienen 3 ó 4 átomos de carbono tales como 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo. De particular
10 interés puede ser alquilo C3-4 ramificado tal como 2-propilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo.
El término "cicloalquilo C3-6", como un grupo o parte del mismo, define grupos de hidrocarburos cíclicos saturados que tienen de 3 a 6 átomos de carbono que forman juntos una estructura cíclica. Ejemplos de cicloalquilo C3-6 incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
15 "Alcoxi C1-4", como un grupo o parte de un grupo, significa un grupo de fórmula -O-alquilo C1-4, en donde alquilo C1-4 es como se define anteriormente. Ejemplos de alcoxi C1-4 son metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi.
El término "halo" es genérico para flúor, cloro, bromo y yodo.
20 Tal como se utiliza en esta memoria, el término "(=O)" u "oxo" forma un resto carbonilo cuando está unido a un átomo de carbono. Cabe señalar que un átomo sólo puede estar sustituido con un grupo oxo cuando la valencia de ese átomo así lo permita.
25 Tal como se utiliza en esta memoria, para el propósito de definir "arilo" como un grupo o parte del mismo significa una estructura de anillo aromático que comprende opcionalmente uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S, en particular de N y O. Dicha estructura de anillo aromático puede tener 5 ó 6 átomos en el anillo.
Tal como se utiliza en esta memoria, el prefijo "hetero-" en la definición de un grupo significa que el grupo comprende al
30 menos 1 heteroátomo seleccionado de N, O y S, en particular N y O. Por ejemplo, el término "heteroarilo" significa una estructura de anillo aromático como se define para el término "arilo" que comprende al menos 1 heteroátomo seleccionado de N, O y S, en particular, de N y O, por ejemplo furanilo, oxazolilo, piridinilo. Alternativamente, el término "heterocicloalquilo C3-6" significa un grupo hidrocarbonado cíclico saturado según se define para "cicloalquilo C3-6" que comprende, además, al menos 1 heteroátomo seleccionado de N, O y S, en particular de N y O, por ejemplo
35 tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo.
En los casos en los que no se especifica la posición de un grupo en un resto molecular (por ejemplo, un sustituyente en el fenilo) o está representada por un enlace flotante, tal grupo puede estar situado en cualquier átomo de un resto de este tipo, siempre y cuando la estructura resultante sea químicamente estable. Cuando cualquier variable está presente
40 más de una vez en la molécula, cada una de las definiciones es independiente.
Cada vez que se utilice en esta memoria, la expresión "compuestos de fórmula I", o "los presentes compuestos" o expresiones similares, pretenden incluir los compuestos de fórmula I, incluidas las posibles formas estereoisoméricas y las sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos.
45 Métodos de síntesis generales Esquema 1
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En el esquema 1 se describen bloques de construcción utilizados en la síntesis de compuestos de fórmula I. α-amino
5 cetona Ila (Esquema 1, A = NH2), con X un halógeno, en particular bromo o yodo, se acopla con un derivado adecuadamente protegido III, en donde PG' es un grupo protector en el nitrógeno, preferiblemente terc.-butoxicarbonilo, en presencia de un reactivo de acoplamiento para la acilación del grupo amino, preferiblemente HATU, en presencia de una base tal como DIPEA. El compuesto intermedio, así formado, se cicla para formar un compuesto de imidazol de fórmula general IV mediante tratamiento con acetato de amonio, preferiblemente a una temperatura comprendida entre
10 0ºC y 150ºC.
Alternativamente, el imidazol IV intermedio puede obtenerse mediante el acoplamiento de una α-halocetona IIb, en donde X y A representan, cada uno independientemente, un átomo de halógeno, X se selecciona preferiblemente de yodo o bromo y A se selecciona preferiblemente de cloro, bromo o yodo, con un compuesto III adecuadamente
15 protegido, en donde PG' es un grupo protector en el nitrógeno, preferiblemente terc.-butoxicarbonilo, en presencia de una base adecuada, por ejemplo DIPEA, seguido de ciclación para dar el imidazol IV intermedio según se describe arriba. Este compuesto intermedio IV se puede transformar en un éster borónico de fórmula V bajo condiciones catalizadas por Pd, por ejemplo en presencia de Pd(dppf)Cl2, bis(pinacolato)diboro y una base, por ejemplo acetato de potasio.
20 Otros bloques de construcción se describen en los esquemas 2a, 2b, 2c y 3a, 3b, 3c, 3d.
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Esquema 2a
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En el esquema 2a, el derivado de ácido VI se convierte en un β-cetoéster VII por métodos conocidos en la bibliografía,
5 por ejemplo por activación del ácido carboxílico con DCC o CDI, seguido, por ejemplo, por la reacción con ácido de Meldrum y subsiguiente descarboxilación en presencia de un alcohol, o como una alternativa, según se describe en los ejemplos, por condensación con una sal de magnesio de un malonato de monoalquilo, seguido de descarboxilación. El β-cetoéster VII (refiriéndose Ralk a alquilo C1-4) se condensa luego con VIII o X, seguido de ciclación para dar IXa y IXb, respectivamente (X 'es un halógeno seleccionado de yodo o bromo, preferiblemente bromo). Esta condensación puede
10 llevarse a cabo en tolueno en presencia de ácido acético. La ciclación para dar los compuestos de fórmula IXa y IXb se puede realizar térmicamente por calentamiento a reflujo en Dowtherm™ A (mezcla de óxido de difenilo y bifenilo). Un ejemplo preferido del grupo protector PG es benciloxicarbonilo (CBz).
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Alternativamente, los compuestos de la fórmula general IXc se pueden obtener mediante una secuencia Sonogashira/ciclación carbonilativa, catalizada por Pd, según se describe en el Esquema 2b. Partiendo del compuesto de yodo-anilina A.I., bajo procesos similares a los descritos en Applied Catalysis, A: General, 2009, 369, 1-2, 125-132 y las referencias citadas en la misma.
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Esquema 2c
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5 Compuestos de la fórmula general IXd, en donde R4 es igual a H o alquilo C1-4, se pueden obtener como se muestra en el esquema 2c. El compuesto VIII (X 'es un halógeno seleccionado de yodo o bromo, preferiblemente bromo) se puede convertir en el compuesto A.IV, por ejemplo mediante tratamiento de VIII con BCI3 en un disolvente tal como benceno, a una temperatura más baja que la temperatura ambiente, por ejemplo mediante enfriamiento con hielo, seguido de tratamiento con AlCl3 y nitrilo A.III (R4 es igual a H o alquilo C1-4), por ejemplo a reflujo, en benceno. Después de la
10 hidrólisis, se puede obtener el compuesto A.IV. La formación del enlace amida a partir de A.IV y VI resulta en la formación del compuesto A.V. Esta reacción puede efectuarse por conversión del compuesto VI en un haluro de ácido, por ejemplo un fluoruro de ácido o cloruro de ácido, seguido de reacción con A.IV en presencia de una base. Otro ejemplo es la formación de A.V a partir de VI y A.IV mediante el uso del reactivo de acoplamiento cloruro de 4 (4,6dimetoxi [1.3.5] triazin-2-il)-4-metilmorfolinio hidrato (DMTMM). La ciclación de A.V, en condiciones de carácter básico,
15 por ejemplo KOH en EtOH, o NaOH en dioxano, da como resultado el compuesto IXd.
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La síntesis de compuestos de la fórmula XIII se describe en el Esquema 3a. La formación del enlace amida partiendo de
20 XI (X' es un halógeno seleccionado de yodo o bromo, preferiblemente bromo) y VI resulta en la formación de compuesto XII. Esta reacción puede efectuarse convirtiendo el compuesto VI en un haluro de ácido, por ejemplo un fluoruro de ácido o cloruro de ácido, seguido de reacción con XI en presencia de una base. Otro ejemplo es la formación de XII a partir de VI y XI mediante el uso del reactivo de acoplamiento cloruro de 4 (4,6-dimetoxi [1.3.5] triazin2-il)-4-metilmorfolinio hidrato (DMTMM). Los compuestos XII se convierten luego en compuestos de la fórmula general
25 XIII en condiciones de carácter básico, por ejemplo KOH en etanol.
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Esquema 3b
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El compuesto de fórmula general A.XI (X 'es un halógeno seleccionado de yodo o bromo, preferiblemente bromo) se
5 puede obtener como se muestra en el Esquema 3b. Utilizando métodos descritos en la bibliografía (documento WO2007039578; Tet. Lett. 2001, 42, 33, 5601-5603), el fluoruro A.VI se puede convertir en A.IX. Este último se acopla con un haluro de ácido A.X (en que X” es igual a cloro o flúor) en presencia de una base, por ejemplo trietilamina, seguido de ciclación en el compuesto A.XI en condiciones de carácter básico tal como, por ejemplo, K2CO3 acuoso 2N a reflujo.
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El compuesto de fórmula general A.XVI puede obtenerse como se muestra en el Esquema 3c. La dialquilación de éster
A.XII con el haluro de alquilo apropiado, por ejemplo Mel en el caso R5 = R6 = metilo, en presencia de una base, por
15 ejemplo NaH, resulta en el compuesto A.XIII. Este éster se puede convertir en el compuesto A.XIV mediante subsiguiente hidrólisis, formación de azida de acilo (por ejemplo mediante tratamiento del ácido correspondiente de
A.XIII con difenilfosforil azida) y reacción de Curtius. Después de la reducción del compuesto A.XIV en A.XV, este último compuesto se convierte en el compuesto A.XVI mediante acoplamiento con ácido VI, por ejemplo mediante tratamiento con HATU y una base tal como trietilamina, y la subsiguiente ciclación para dar el compuesto A.XVI bajo
20 condiciones de carácter ácido, por ejemplo en ácido acético a 50ºC.
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Esquema 3d
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Un proceso alternativo para la síntesis de compuesto A.XIV (por ejemplo en caso de que R5 y R6, junto con el carbono
5 que los conecta, formen un oxetano) se representa en el esquema 3d. El anión, generado por la reacción de transmetalación, por ejemplo de butil-litio y compuesto A.XVII a baja temperatura, por ejemplo -78ºC, se puede hacer reaccionar con una sulfinamida A.XVIII. Después de la desprotección de la sulfinamida formada, en condiciones de carácter ácido, se obtiene el compuesto A.XIV, que se puede transformar ulteriormente en A.XVI según se describe en el Esquema 3c.
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Los bloques de construcción A.XIX, obtenidos por métodos similares a los descritos en los Esquemas 2 (a, b, c) y los Esquemas 3 (a, b, c y d) y V (Esquema 1) se pueden convertir en la estructura XIV, utilizando condiciones de Suzuki15 Miyaura (Esquema 4).
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Esquema 5
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La síntesis de compuestos de fórmula general XlVa se describe en el Esquema 5. El acoplamiento de Suzuki-Miyaura entre un haluro XV y éster borónico V resulta en el compuesto intermedio XVI, que se puede convertir en XlVa mediante tratamiento con una base, por ejemplo butil-litio, y reacción con XVII.
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Cuando PG 'y PG en los Esquemas 1 a 6 representan R'(C=O)-y R(C=O)-, respectivamente, los compuestos de estructura general XIV caen bajo la definición de los compuestos de fórmula I. En el caso de que los Esquemas 4 y 5 describen la síntesis de compuestos de fórmula I. Alternativamente, XIV se puede desproteger según se describe en el
15 Esquema 6. Por ejemplo, mediante tratamiento con ácido (por ejemplo HCl en iPrOH) cuando PG o PG' representan terc.-butiloxicarbonilo (Boc). El compuesto XX puede transformarse en un compuesto de fórmula Ib, en donde R y R' son idénticos, mediante formación clásica de amida entre un ácido R-(C=O)OH y bisamina XX según se describe en el Esquema 7. Un método preferido es el uso de HATU en presencia de una base tal como DIPEA.
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Esquema 7
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Cuando PG' difiere de PG, es posible la desprotección selectiva, según se describe en el Esquema 6, resultando en
5 compuestos XVIII o XIX partiendo de XIV. Por ejemplo en el caso de que PG' sea igual a terc.-butiloxicarbonilo (Boc) y PG sea igual a benciloxicarbonilo (Cbz), la desprotección selectiva puede efectuarse separando el grupo protector Boc bajo condiciones de carácter ácido tal como HCl en iPrOH a temperatura ambiente, o separando el grupo protector Cbz bajo condiciones reductoras tal como hidrógeno, en presencia de un catalizador, p. ej., Pd(OH)2.
10 Cuando PG' representa R'(C=O)-o PG representa R(C=O)-, la síntesis de compuestos XIV según se describe en los Esquemas 1 a 5 resulta en compuestos de fórmula XXI (Esquema 8) o XXIII (Esquema 9), respectivamente. Los compuestos XXI y XXIII se pueden obtener a partir del compuesto XIX y R'(C=O)OH o XVIII y R(C=O)OH, respectivamente, bajo condiciones típicas de formación de amida. Estos compuestos se pueden transformar en compuestos de fórmula I. La desprotección selectiva de XXI para dar XXII, seguido de la formación de enlaces amida
15 entre XXII y R(C=O)-OH resulta en los compuestos de la fórmula I. Luego se puede aplicar una secuencia de reacción análoga para transformar XXIII en XXIV y en adelante en los compuestos de fórmula I.
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20 Esquema 9
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En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I según se especifica en esta memoria, y un soporte farmacéuticamente aceptable. Una cantidad terapéuticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para
25 estabilizar o para reducir la infección por el VHC en sujetos infestados, o una cantidad suficiente para prevenir una infección por el VHC en sujetos en riesgo de ser infestados. En aún un aspecto adicional, esta invención se refiere a un procedimiento para preparar una composición farmacéutica según se especifica en esta memoria, que comprende mezclar íntimamente un soporte farmacéuticamente aceptable con una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, según se especifica en esta memoria.
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Por lo tanto, los compuestos de la presente invención o cualquier subgrupo de los mismos pueden formularse en diversas formas farmacéuticas para fines de administración. Como composiciones apropiadas pueden citarse todas las composiciones empleadas habitualmente para administrar fármacos sistémicamente. Para preparar las composiciones 5 farmacéuticas de esta invención, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal por adición o complejo metálico, en calidad del ingrediente activo, se combina en mezcla íntima con un soporte farmacéuticamente aceptable, soporte que puede adoptar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas se encuentran deseablemente en forma de dosificación unitaria adecuada, particularmente, para la administración por vía oral, rectal, percutánea, o por 10 inyección parenteral. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en forma de dosificación oral, se pueden emplear cualquiera de los medios farmacéuticos usuales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y disoluciones; o soportes sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administración, los 15 comprimidos y las cápsulas representan las formas unitarias de dosificación oral más ventajosas, en cuyo caso se emplean obviamente soportes farmacéuticos sólidos. Para composiciones parenterales, el soporte comprenderá habitualmente agua estéril, al menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad. Se pueden preparar, por ejemplo, disoluciones inyectables, en las que el soporte comprende solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y solución de glucosa. También se pueden 20 preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear soportes líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares. También se incluyen preparaciones en forma sólida destinadas a ser convertidas, poco antes del uso, en preparaciones en forma líquida. En las composiciones adecuadas para administración percutánea, el soporte comprende opcionalmente un agente que mejora la penetración y/o un agente humectante adecuado, combinado opcionalmente con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones minoritarias, aditivos que no introducen
25 un efecto deletéreo significativo en la piel. Los compuestos de la presente invención también pueden administrarse mediante inhalación oral o insuflación en la forma de una disolución, una suspensión o un polvo seco utilizando cualquier sistema de administración conocido en la técnica.
Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma de
30 dosificación unitaria para facilitar la administración y uniformidad de dosificación. Forma de dosificación unitaria, tal como se utiliza en esta memoria, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el soporte farmacéutico requerido. Ejemplos de tales formas de dosificación unitaria son comprimidos (incluidos comprimidos con muesca o revestidos), cápsulas, píldoras, supositorios, paquetes
35 de polvos, pastillas, disoluciones o suspensiones inyectables y similares, y múltiplos segregados de las mismas.
Los compuestos de fórmula I muestran actividad contra el VHC y se pueden utilizar en el tratamiento y la profilaxis de una infección por el VHC o enfermedades asociadas con el VHC. Estas últimas incluyen fibrosis progresiva del hígado, inflamación y necrosis que conduce a cirrosis, enfermedad hepática en fase terminal y carcinoma hepatocelular. Se
40 sabe, además, que un cierto número de los compuestos de esta invención son activos contra cepas mutadas del VHC. Adicionalmente, los compuestos de esta invención pueden tener propiedades atractivas en términos de biodisponibilidad, pueden mostrar un perfil farmacocinético favorable, incluida una semivida aceptable, un AUC (área bajo la curva), valores pico y valle, y carecen de fenómenos desfavorables tales como comienzo insuficientemente rápido o la retención de tejido.
45 La actividad antiviral in vitro contra el VHC de los compuestos de fórmula I se puede someter a ensayo en un sistema de replicón del VHC celular basado en Lohmann et al. (1999) Science 285: 110-113, con las nuevas modificaciones descritas por Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 (incorporado aquí como referencia), que se ejemplifica adicionalmente en la sección de ejemplos. Este modelo, aunque no es un modelo de infección completa
50 para el VHC, es ampliamente aceptado como el modelo más robusto y eficiente de la replicación autónoma del ARN del VHC actualmente disponible. Se apreciará que es importante distinguir entre compuestos que interfieren específicamente con las funciones del VHC y los que ejercen efectos citotóxicos o citostáticos en el modelo de replicón del VHC y, como consecuencia, causan una disminución en el ARN del VHC o una concentración de la enzima indicadora ligada. Los ensayos son conocidos en el campo para la evaluación de la citotoxicidad celular basada, por
55 ejemplo, en la actividad de enzimas mitocondriales utilizando colorantes fluorogénicos redox tal como resazurina. Además, existen tamices de recuento celular para la evaluación de la inhibición no selectiva de la actividad del gen informador ligado, tales como la luciferasa de la luciérnaga. Tipos de células apropiados pueden equiparse mediante transfección estable con un gen informador de luciferasa, cuya expresión depende de un promotor del gen constitutivamente activo, y tales células pueden utilizarse como un contador de pantalla para eliminar inhibidores no
60 selectivos.
Debido a sus propiedades anti-HCV, los compuestos de fórmula I o subgrupos de los mismos, según se especifica en esta memoria, son útiles en la inhibición de la replicación del VHC, en particular en el tratamiento de animales homeotermos, en particular seres humanos, infestados con el VHC, y para la profilaxis de infecciones por el VHC en animales homeotermos, en particular seres humanos. La presente invención se refiere, además, a un método de tratamiento de un animal homeotermo, en particular un ser humano, infestado por el VHC, o que está en riesgo de infección por el VHC, comprendiendo dicho método la administración de una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, según se define antes en esta memoria.
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5 Por lo tanto, los compuestos de fórmula I tal como se especifica en esta memoria, pueden ser utilizados como una medicina, en particular como una medicina anti-VHC. Dicho uso como una medicina o método de tratamiento comprende la administración sistémica a sujetos infestados por el VHC o para sujetos susceptibles a la infección por el VHC de una cantidad eficaz para aliviar o prevenir los síntomas y condiciones asociadas con la infección por el VHC.
10 La presente invención también se refiere al uso de los presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una infección por el VHC.
En general, se contempla que una cantidad diaria antiviral eficaz sería de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50
15 mg/kg, o de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida en forma de dos, tres, cuatro o más sub-dosis a intervalos apropiados a lo largo del día. Dichas subdosis se pueden formular como formas de dosificación unitaria, por ejemplo, que contienen aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg, o aproximadamente 1 a aproximadamente 300 mg, o aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg, o aproximadamente 2 a aproximadamente 50 mg de ingrediente activo por forma de
20 dosificación unitaria.
Terapia de combinación
La invención también se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula I, a una sal farmacéuticamente
25 aceptable o solvato del mismo, y a otro compuesto antiviral, en particular, otro compuesto anti-VHC. El término "combinación" se refiere a un producto que contiene (a) un compuesto de fórmula I, según se define antes en esta memoria, y (b) otro inhibidor anti-VHC, en forma de una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHC.
30 Las combinaciones de la presente invención pueden utilizarse como medicamentos. Por consiguiente, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) o cualquier subgrupo del mismo según se define anteriormente para la fabricación de un medicamento útil para inhibir la actividad del VHC en un mamífero infestado con virus VHC, en donde dicho medicamento se utiliza en una terapia de combinación, comprendiendo dicha terapia de combinación, en particular, un compuesto de fórmula (I) y al menos otro agente anti-VHC, p. ej., IFN-α, IFN-α pegilado,
35 ribavirina, albuferón, taribavirina, nitazoxanida Debio025 o una combinación de los mismos.
Otros agentes que se pueden combinar con los compuestos de la presente invención incluyen, por ejemplo, inhibidores nucleósidos y no nucleósidos de la polimerasa del VHC, inhibidores de proteasa, inhibidores de helicasa, inhibidores de NSB4 y agentes que inhiben funcionalmente el sitio interno de entrada en el ribosoma (IRES) y otros agentes que
40 inhiben la unión del VHC celular o la entrada del virus, la traducción del ARN del VHC, la transcripción del ARN del VHC, la replicación o la maduración del VHC, reunión o liberación del virus. Compuestos específicos de estas clases incluyen inhibidores de la proteasa del VHC tales como telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC-435350 (TMC-435), MK-7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS650032, ACH-1625, ACH-1095, GS 9256, VX-985, IDX-375, VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX
45 316, ABT-450, EP-013420 (y congéneres) y VBY-376; los inhibidores de la polimerasa del VHC nucleósidos útiles en la invención incluyen TMC649128, R7128, PSI-7851,PSI 7977, IDX-189, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI6130, PSI-938 y PSI-879 y diversos otros análogos de nucleósidos y nucleótidos, e inhibidores del VHC que incluyen los derivados como nucleósidos modificados 2'-C-metilo, nucleósidos modificados 4 'aza y nucleósidos modificados 7'desaza. Inhibidores de la polimerasa del VHC no nucleósidos útiles en la invención incluyen HCV-796, HCV-371, VCH
50 759, VCH-916, VCH-222, ANA-598, MK-3281, ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A-837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 y TMC647055.
Los siguientes ejemplos están destinados a ilustrar la invención y no deben interpretarse como una limitación de su alcance.
55 Parte experimental: Métodos LCMS
Método A: Información general: fase móvil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 2 min,
60 tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,01 [90/10] a 0,9 [20/80] a 1,5 [20/80] a 1,51 [90/10]; cuadal: 1,2 mL/min; temp. de la columna: 50ºC
Método A1: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS, 3 * 30 mm Método A3: SHFMADZU Shim pack 2 * 30
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5 Método A4: Welch Xtimate C18 2,1 * 30 mm, 3 um
Método B: Agilent 1100, YMC-Pack ODS-AQ, 50x2,0 mm 5 µm fase móvil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05% Tiempo de parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0 [100/0] a 1 [100/0] a 5 [40/60] a 7,5 [40/60] a 8 [100/0]; caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 50ºC
10 Método C: Agilent 1100, YMC-Pack ODS-AQ, 50x2,0 mm 5 µm fase móvil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05% Tiempo de parada: 10 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0 [90/10] a 0,8 [90/10] a 4,5 [20/80] a 7,5 [20/80] a 8 [90/10]; caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna: 50ºC
15 Método D: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS, 3 * 30 mm, fase móvil A: H2O (TFA al 0,1%); B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 2 min; tiempo de gradiente (min) [% A/% B] 0,01 [100/0] a 0,9 [70/30] a 1,5 [70/30] a 1.51 [100/0]; caudal: 1,2 mL/min; temp. de la columna: 50ºC
Método E: Cromatografía líquida: Waters Alliance 2695, detector de UV: Waters 996 PDA, intervalo 210 -400 nm;
20 detector de masas: Waters ZQ, fuente de iones: ES +, ES-Columna utilizada: SunFire C18 3,5 µ 4,6x100 mm fase móvil A: NH4OOCH 10 mM + HCOOH al 0,1% en H2O; fase móvil B: CH3OH; temp. de la columna: 50ºC; caudal:1,5 mL/min. tiempo de gradiente (min) [% A /% B] 0 [65/35] a 7 [5/95] a 9,6 [5/95] a 9,8 [65/35] a 12 [65/35].
Método F: Xtimate C18 2,1 * 30 mm, 3 um, fase móvil A: H2O (1,5 mL de TFA/4 L); B: CH3CN (0,75 ml de TFA/4 L)
25 Tiempo de parada: 3 min; tiempo de gradiente (min) [% A /% B] 0,0 [90/10] a 1,35 [20/80] a 2,25 [20/80] a 2,26 [90/10]; 3,0 [90/10] caudal: 0,8 mL/min; temp. de la columna.: 50ºC
Método G: Condiciones generales: fase móvil A: H2O (1,5 mL de TFA/4 L); B: CH3CN (0,75 mL de TFA/4 L) Tiempo de parada: 2 min; tiempo de gradiente (min) [% A /% B] 0,0 [100/0] a 0,9 [40/60] a 1,5 [40/60] a 1,51 [100/0]; 2.0 [100/0]
30 caudal: 1,2 mL/min; temp. de la columna: 50ºC
Método Gl: Xtimate C18, 2,1 * 30 mm, 3um
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NaOH 1N en agua (1250 mL) se añadió a L-valina (150 g, 1280 mmol) en un matraz de 3 L de fondo redondo, equipado con una varilla agitadora magnética. A esta disolución se añadió Na2CO3 (67,8 g, 640 mmol) y la mezcla de reacción se enfrió a 0ºC en un baño de hielo-agua. Se añadió gota a gota cloroformiato de metilo (107 mL, 1,390 mmol) y la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 15 horas. La 40 mezcla de reacción se lavó con acetato de etilo (3 x 400 mL). La capa acuosa se enfrió en un baño de hielo-agua y se acidificó mediante HCl concentrado (aq.) a pH = 2. La mezcla de reacción se extrajo con CH2Cl2 (3 x 1000 mL). Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre Na2SO4 y el disolvente se concentró para dar el producto bruto. El producto bruto se calentó a reflujo con 150 mL de etanol y 150 mL de agua durante 2 horas. Después, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y los sólidos cristalinos se filtraron para dar ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metil-butanoico
45 (146 g, rendimiento del 65%).
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MgCl2 (153 g, 1640 mmol) se añadió en una porción a una disolución de malonato de etilo y potasio (354,9 g, 2085
mmol) en THF (2500 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 7 h a 65-70ºC y luego a 30ºC durante una noche.
Una disolución de Cbz-L-prolina (400 g) en THF (1000 mL) se añadió lentamente a una mezcla de CDI (312,1 g,
5 1924,8 mmol) en THF (1500 mL) y se agitó a 30ºC durante 2 h. La disolución se añadió a la mezcla de malonato de
etilo durante 20 min a 20-30ºC y se agitó durante una noche a 30ºC. La mezcla se enfrió a 20ºC y se neutralizó con HCl
diluido (4 N, 1800 mL). La disolución se concentró y el producto se disolvió en acetato de etilo y se lavó con bicarbonato
de sodio acuoso al 5%. La capa orgánica se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en columna de
resolución instantánea (eluyente: éter de petróleo: acetato de etilo = 20: 1 a 3: 1) para dar 2-(3-etoxi-310 oxopropanoil)pirrolidina-1-carboxilato de (S)-bencilo puro (460 g, rendimiento del 90%). Método A4 Rt: 1,23 min. m/z:
341,9 (M + Na)+ Masa exacta: 319,1
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4-bromoanilina (40 g, 235 mmol) se añadió a una mezcla de 2-(3-etoxi-3-oxopropanoil)pirrolidina-1-carboxilato de (S)bencilo (100 g, 313 mmol) en tolueno (800 mL) que contenía ácido acético (16,7 mL, 3 13 mmol) y se sometió a reflujo 15 durante 6 horas utilizando un aparato Dean Stark para separar el agua de reacción. El disolvente se separó y el residuo, que contenía el compuesto intermedio de condensación 1, se disolvió en Dowtherm™ A (260 mL). La mezcla se agitó a 235ºC durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, y se añadió éter (800 mL) seguido de heptano (500 mL). Precipitó un residuo oleoso y el disolvente se decantó. El residuo se sometió a cromatografía en columna de resolución instantánea (eluyente: CH2Cl2: acetato de etilo = 1: 1), dando como resultado el compuesto 2
20 (28 g, 11% de rendimiento global). Método A3; Rt: 1,31 min. m/z: 428,9 (M+H)+ Masa exacta: 428,1
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3-bromoanilina (186 g, 1080 mmol) se añadió a una mezcla de 2-(3-etoxi-3-oxopropanoil)pirrolidina-1-carboxilato de (S)bencilo (460 g, 1440 mmol) en tolueno que contenía ácido acético (86,4 g, 1440 mmol) y se sometió a reflujo durante 8 horas utilizando un aparato Dean Stark para separar el agua de reacción. La mezcla se concentró a presión reducida y 25 se secó bajo vacío. El producto bruto se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional (662 g). Un matraz equipado con un agitador, cabeza de destilación y embudo de goteo se purgó con nitrógeno. Se añadió Dowtherm™ A (90 mL) y luego se calentó a 240ºC. Una disolución del compuesto intermedio de condensación 3 (662 g) en Dowtherm™ A (900 mL) se añadió a lo largo de 10 min, al tiempo que la temperatura se mantenía en el intervalo de
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230-245ºC. La mezcla se calentó durante otra 1 h a 240ºC y después se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron éter de petróleo (2000 mL) y heptano (2400 mL). Se formó un residuo oleoso y el disolvente se decantó. El residuo de aceite recogido se purificó por cromatografía en columna de resolución instantánea (eluyente: CH2Cl2: EtOAc = 10: 1 a
1: 3), dando como resultado el compuesto 4 (38 g). Método B; Rt: 5,20 min. m/z: 429,0 (M+H)+ Masa exacta: 428,1 Columnas: AD-H de 50 mm * 4,6 mm, 3 um caudal: 4 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%), 5% a
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Una mezcla de 2-bromonaftaleno (950 g, 4589 mmol), cloruro de acetilo (260 mL, 4589 mmol), nitrobenceno (6000 mL) y cloruro de aluminio (642,2 g, 4818 mmol) se agitó durante 4 horas a 100°C. La mezcla se vertió en hielo-agua, la 10 suspensión resultante se filtró y la fase orgánica se separó del filtrado. La fase orgánica se lavó con agua (2000 mL), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. El disolvente se separó por destilación. El residuo se re-cristalizó en una disolución de
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TMSOTf (13,4 g, 60,2 mmol) se añadió a una disolución agitada de 1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (300 g, 1204
15 mmol) y NBS (235,8 g, 1324 mmol) en CH3CN (6000 mL). La mezcla se agitó durante 24 h a 30ºC. La mezcla de reacción se diluyó con éter, se lavó con H2O, se secó sobre Na2SO4, se filtró, y se concentró bajo presión reducida. El residuo de 2-bromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (526 g) bruto se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
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20 2-bromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (526,5 g, 1204 mmol) se disolvió en CH3CN (6000 mL). Se añadió Boc-Lprolina (284 g, 1325 mmol) a la disolución y la mezcla de reacción se agitó durante 20 min a temperatura ambiente. Se añadió gota a gota Et3N (480 mL, 3612 mmol) a la disolución. La mezcla de reacción se agitó durante 15 h a temperatura ambiente. El disolvente se separó en vacío y 5 bruto (794 g) se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Método A1; Rt: 1,68 min. m/z: 484,1 (M+Na)+ Masa exacta: 461,1
5 (794 g, 1204 mmol) se disolvió en tolueno (6000 mL) y acetato de amonio (1855 g, 24096 mmol) se añadió a la disolución. La mezcla se agitó durante 12 h a 100°C. La disolución se diluyó con acetato de etilo (1000 mL), y se lavó con agua (2 x 500 mL). La capa inorgánica se extrajo con acetato de etilo (2 x 500 mL). Las capas orgánicas reunidas se concentraron en vacío. El residuo se trituró en CH3CN (300 mL) durante 0,5 h a 0ºC, dando como resultado el compuesto 6 (140 g, rendimiento del 26% basado en 1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona). Método A; Rt: 1,28 min. m/z:
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A la disolución de compuesto 6 (75 g, 170 mmol) se añadió dioxano/HCl (750 mL) a temperatura ambiente y la mezcla
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10 A una disolución de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (47,2 g, 270 mmol) en CH3CN (1200 mL) se añadieron HOBt (36,4 g, 270 mmol) y EDC.HCl (51,6 g, 270 mmol) a la temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente y se añadió 6a (73 g). La disolución se enfrió entonces a 0ºC, se añadió diisopropiletilamina (75 g, 578 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche.La mezcla se diluyó con CH2Cl2 (1500 mL) y se lavó con NaOH acuoso (0,5 N, 1000 mL).La capa orgánica se lavó con salmuera.La
15 capa orgánica reunida se secó y se concentró.El producto bruto obtenido se lavó con CH3CN, dando como resultado el compuesto 6b (80 g, de 6: 94%).
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20 Pd (PPh3)4 (11,6 g, 15,8 mmol) se añadió a una mezcla de compuesto 6 (140 g,316,5 mmol), bis(pinacolato)diboro (160,7 g, 633 mmol), KOAc (62 g, 633 mmol) y tolueno (4000 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 15 h a 85ºC. Después de enfriar, se añadió CH2Cl2 y la mezcla se lavó con Na2CO3, seguido de salmuera. El agua se extrajo con CH2Cl2 (3 x 900 mL). Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron en vacío. El residuo se recristalizó en un disolvente mixto de hexano/i-PR2O (3/ 2,2 x 150
25 mL), dando como resultado el compuesto 7 (105 g, rendimiento del 63%). Método A3; Rt: 1,35 min. m/z: 490,1 (M+H)+ Masa exacta: 489,3
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6b (69 g, 138,2 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (70,2 g, 276,4 mmol) y CH3COOK (27,1 g, 276,4 mmol) se añadieron a tolueno (1500 mL), seguido de Pd(dppf)Cl2 (5 g, 6,9 mmol) bajo N2 a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a 80ºC durante una noche. Después de enfriar, se añadió acetato de etilo
5 (1000 mL) y la mezcla se lavó con NaHCO3 saturado (1500 mL) y salmuera. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, y después de la filtración, se concentró en vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna, dando como resultado el compuesto 7a (52 g, rendimiento del 68%). Método C; Rt: 4,01 min. m/z: 547,3 (M+H)+ Masa exacta: 546,3 SFC: Columna: (AS) H 150 mm x 4,6 mm; 5 um. Caudal: 3 mL/min, fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%);
10 5 a 40% de B en A,: Rt: 3,11 min SFC: Columna: OD-H 50 mm x 4,6 mm; 3um. Caudal: 4 mL/min,.Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A,: Rt: 1,34 min
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Pd(PPh3)4 (17,4 g, 15,1 mmol) se añadió en una porción a una mezcla de compuesto 7 (37 g, 75,6 mmol) y 2 (32,3 g,
15 75,6 mmol), Na2CO3/H2O (16 g/300 mL), tolueno (600 mL) y etanol (300 mL) bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante 10 h a 90ºC. La mezcla de reacción se filtró y se lavó con metanol (500 mL). El filtrado se concentró en vacío. El residuo se extrajo con CH2Cl2 (3 x 300 mL). Las capas orgánicas reunidas se concentraron a sequedad en vacío. El residuo se disolvió en CH3CN y se purificó por cromatografía de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 40/60 a 65/35, CF3COOH al 0,1%). Se recogió la fracción deseada y el pH de la disolución se ajustó a 8 a 9 con
20 NaHCO3 (aq.) saturado. CH3CN se separó bajo presión reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 150 mL). Las capas orgánicas se reunieron y se secaron bajo Na2SO4. La disolución se evaporó y el producto puro 8 se secó en vacío (12,7 g, rendimiento del 19%). Método C; Rt: 3,91 min. m/z: 710,5 (M+H)+ Masa exacta: 709,3
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Pd(PPh3)4 (20,5 g, 17,8 mmol) se añadió en una porción a la mezcla de compuesto  (43,5 g, 88,9 mmol) y 4 (38 g, 88,9 mmol), Na2CO3/H2O (18,8 g / 300 mL), tolueno (650 mL) y etanol (350 mL) bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante 10 h a 90ºC. La mezcla de reacción se filtró y se lavó con metanol (500 mL). El filtrado se concentró en vacío. El residuo se extrajo con CH2Cl2 (2 x 500 mL).Las capas orgánicas reunidas se concentraron a sequedad en vacío. El residuo se trituró en CH3CN para proporcionar el producto 9 (25 g, rendimiento del 40%). Método A1; Rt: 1,22 min. m/z: 710,3 (M+H)+ Masa exacta: 709,3
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HCl 4N/dioxano (4,2 mL, 17 mmol) se añadió a una disolución de 9 (6 g, 8,5 mmol) en CH2Cl2 (40 mL) a 0ºC. La
10 mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 10 min. El precipitado se separó por filtración y se lavó con terc-butil-metil-éter para obtener el compuesto 10 (5,2 g, rendimiento del 87%). Método A; Rt: 1,14 min. m/z: 610,4 (M+H)+ Masa exacta: 609,3
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A una disolución del compuesto ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (3,6 g, 20,4 mmol) en CH3CN (100 mL) se añadió EDC.HCl (3,9 g, 20,4 mmol) y HOBT (2,75 g, 20,4 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 h. Luego se añadió  (5,2 g, 7,6 mmol). La suspensión se enfrió a 0ºC y se añadió DIPEA (4,4 g, 30,4 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. La mezcla se concentró y el residuo se diluyó con 150 mL de CH2Cl2 y 75 mL de NaOH 0,5 N (aq.). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (3 x 75 mL), se secó y se concentró para obtener el producto bruto. El producto bruto 11 se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional (4,9 g, rendimiento del 87%). Método A; Rt: 1,19 min. m/z: 767,3 (M+H)+ Masa exacta: 766,4
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10 Pd(OH)2/C (20%, 3 g, seco) se añadió a una disolución de 11 (4,9 g, 6,4 mmol) en metanol (40 ml). La mezcla se hidrogenó bajo H2 (345 kPa) a 40ºC. Después de 18 horas, la mezcla se filtró sobre tierra de diatomeas y se concentró. El producto bruto del compuesto 12 se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional (4,0 g, rendimiento del 75%). Método A; Rt: 1,04 min. m/z: 633,3 (M+H)+ Masa exacta: 632,3
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A una disolución del compuesto ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (2,6 g, 15,1 mmol) en CH3CN (40 mL) se añadió EDC.HCl (2,8 g, 15,1 mmol) y HOBT (2,0 g, 15,1 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 h. Luego se añadió 12 (4,0 g, 6,3 mmol). La suspensión se enfrió a 0ºC y se añadió DIPEA (3,2 g, 25,2 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. La mezcla se concentró y se diluyó con CH2Cl2 (120 mL) y NaOH 0,5 N acuoso (50 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (3 x 50 mL), se secó y se concentró para obtener
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el producto bruto. El producto bruto se purificó por cromatografía de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O
= 30/70 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y el valor del pH de la disolución se ajustó a
aproximadamente 6 con ácido cítrico (aq.) 0,5 N. CH3CN se separó bajo presión reducida. La capa acuosa se extrajo
5 con CH2Cl2 (3 x 150 mL). Las capas orgánicas se reunieron y se secaron bajo Na2SO4. La disolución se evaporó y el
compuesto 13 se secó en vacío (2 g, rendimiento del 40%). 1 g de mezcla diastereomérica 13 se separó por separación
de SFC. Las dos fracciones deseadas se recogieron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El producto puro se
secó en vacío. Se obtuvieron 335 mg de 13a y 310 mg de 13b. SFC: Columna: OD-3 150 mm * 4,6 mm; 3 um; caudal:
2,5 mL/min Fase móvil: EtOH al 40% (dietilamina al 0,05%) en CO2 13a: Rt: 4,9 min; 13b: Rt: 7,8 min; Isómero 13b: 10 Método C; Rt: 3,63 min. m/z: 790,5 (M+H)+ Masa exacta: 789,4; Isómero 13a: Método C; Rt: 3,69 min. m/z: 790,4
(M+H)+ Masa exacta: 789,4
13b: 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6; isómero principal descrito) δ ppm 0,83-0,95 (m, 12 H), 1,87-2,10 (m, 6 H), 2,10
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2,24 (m, 2 H), 2,24-2,38 (m, 2 H), 3,55 (s, 6 H), 3,78-3,93 (m, 4 H), 4,09 (t, J = 8,3 Hz, 1 H), 4,15 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 15 4,94 (dd, J = 8,0, 3,3 Hz, 1 H), 5,06-5.18 (m, 1 H), 5,86 (s, 1 H), 7,29-7,41 (m, 2 H), 7,66 (s, 1 H), 7,75 (d, J = 8,5 Hz, 1
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A ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico (63,5 mg, 0,332 mmol), disuelto en diclorometano (100 mL) en un matraz de fondo redondo de 250 mL se añadió trietilamina (0,13 mL, 0,95 mmol), seguido de COMU (142 20 mg, 0,33 mmol). La mezcla se agitó a la temperatura ambiente. Después de 10 minutos, se añadió el compuesto 12 (200 mg, 0,32 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió HCl 5-6 N en iPrOH (10 mL) a la mezcla de reacción y, posteriormente, la mezcla se lavó con disolución acuosa saturada de Na2CO3 (2 x 200 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y después de la filtración, el filtrado se evaporó hasta sequedad para proporcionar un polvo pardo. El polvo obtenido se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, mediante
25 elución con MeOH al 0 a 8% (NH3 7N) en EtOAc). Después de la recogida de las fracciones relevantes y de la evaporación de los componentes volátiles, se obtuvo el compuesto 13-A1 en forma de un polvo de color amarillo-blanco (105 mg, 0,130 mmol, 41%) Método E; Rt: 5,01 min. m/z: 806,3 (M+H)+ Masa exacta: 805,4;
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El compuesto 13-A2 se sintetizó de manera similar a la descrita para 13-A1, utilizando ácido (S)-2(metoxicarbonilamino)butanoico en lugar de ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico. Método E; Rt:
5.0 (dos picos) min. m/z 776,4 (M+H)+ Masa exacta: 775,4;
El compuesto 13-A3 se sintetizó de manera similar a la descrita para 13-A1, utilizando ácido (2S,3S)-2(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico en lugar de ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico. Método E; Rt: 5,45 y 5,61 min. m/z: 804,4 (M+H)+ Masa exacta: 803,4
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10 El compuesto 13-A4 se sintetizó de manera similar a la descrita para 13-A1, utilizando ácido 2-(metoxicarbonilamino)-2(tetrahidro-2H-piran-4-il)acético en lugar de ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico. Método E; Rt: 4,94 min. m/z: 832,4 (M+H)+ Masa exacta: 831,4
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El compuesto 13-A5  13-A1, utilizando ácido (2S,3R)-2(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico en lugar de ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico. Método E; Rt: 5,54 y 5,64 min. m/z: 804,4 (M+H)+ Masa exacta: 803,4
El compuesto 13-A6 se sintetizó de manera similar a la descrita para 13-A1, utilizando ácido (S)-4-metoxi-2(metoxicarbonilamino)butanoico en lugar de ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico. Método E; Rt: 5,03 min. m/z: 806,4 (M+H)+ Masa exacta: 805,4
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10 El compuesto 13-A7 se sintetizó de manera similar a la descrita para 13-A1, utilizando sal de diciclohexilamina del ácido (S)-2-(terc.-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanoico en lugar de ácido (2S,3R)-3-metoxi-2-( metoxicarbonilamino)butanoico. Método E; Rt: 5,70 min. m/z: 834,4 (M+H)+ Masa exacta: 833,4
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El compuesto 13-A8 se sintetizó a partir del compuesto  . 13-A7 (135 mg, 0,162 mmol) se agitó en MeOH (9 mL) y se añadió HCl 6 M en iPrOH (2,9 mL), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y se separaron los componentes volátiles. El polvo obtenido (130 mg) se agitó en
5 acetonitrilo (10 mL) y se trató con cloroformiato de metilo y N-metilimidazol, hasta que se consumió el producto de partida. Se separaron los componentes volátiles, se disolvieron en MeOH (5 mL), se trataron con HCl 6 M en iPrOH (5 mL) y la mezcla se sometió a reflujo durante 2 horas, se separaron los componentes volátiles y el compuesto se purificó mediante HPLC preparativa (RP Vydac Denali C18 -10 µm, 250 g, 5 cm) Fase móvil (disolución de NH4HCO3 al 0,25% en agua, CH3CN)), se recogieron las fracciones deseadas, se evaporaron, se disolvieron en MeOH y se evaporaron de
10 nuevo. Después de secar en vacío, se obtuvo el compuesto 13-A8 (32 mg). Método E; Rt: 4,88 min. m/z: 792,4 (M+H)imagen72+ Masa exacta: 791,4
Se añadió gota a gota, a temperatura ambiente, cloruro de oxalilo (50 mL, 581,5 mmol) a una disolución de 14 (50 g, 232,5 mmol) en CH2Cl2 (750 mL) y DMF (1 mL, 11,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 0,5 h a 15 temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró en vacío y el residuo se utilizó sin purificación adicional. Se
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A una disolución de 15 (65 g, 232,5 mmol) en THF (750 mL) se añadió dietilamina (18,7 g, 255,7 mmol) y NaOH 1 N en agua (465 mL, 465 mmol). La mezcla se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se extrajo
20 con acetato de etilo (3 x 10 mL). Las capas orgánicas se reunieron, se secaron y se concentraron en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo = 10: 1) para dar el producto 16 (36 g, rendimiento del 57%, 2 etapas). Método A3; Rt: 1,39 min. m/z: 269,9 (M+H)+ Masa exacta: 269,0
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Pd(PPh3) (4,3 g, 3,7 mmol) se añadió en una porción a una mezcla de 7 (18,1 g, 37 mmol) y 16 (10 g, 37 mmol), Na2CO3 (8 g, 74 mmol), agua (160 mL), tolueno (320 mL) y etanol (160 mL) bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante 10 h a 90ºC. La mezcla de reacción se extrajo mediante CH2Cl2 (dos veces 300 mL). Las capas orgánicas reunidas se
5 concentraron en vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 mL) y después se añadió a la mezcla éter de petróleo (200 mL). La disolución transparente de la capa superior se decantó y el residuo de aceite negro se separó. Éter de petróleo adicional (800 mL) se añadió a la disolución resultante. El sólido resultante se recogió mediante filtración y después se secó para proporcionar el producto 17 (14,7 g, rendimiento del 72%). Método A3; Rt: 1,28 min. m/z: 553,2 (M+H)+ Masa exacta: 552,3
n-BuLi (26,7 ml, 71,6 mmol) se añadió lentamente a una disolución del Compuesto 17 (9 g, 16,3 mmol) en THF seco (300 mL) bajo nitrógeno a -20ºC, al tiempo que la temperatura de reacción se mantuvo por debajo de 0ºC. Después de la adición, la mezcla de reacción se agitó durante otra 1 h a la misma temperatura. 1-N-Boc-2-ciano-pirrolidina (obtenida de acuerdo con los procesos descritos en J. Med. Chem., 2002, 45, 4581-4584 (3,5 g, 17,9 mmol) en THF (10 mL) se
15 añadió a la disolución resultante a -50ºC, y la mezcla se agitó durante 20 min adicionales a la misma temperatura. La mezcla de reacción se inactivó mediante la adición lenta de agua (15 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 150 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron en vacío para dar el producto bruto 18.
20 El producto bruto se purificó por cromatografía de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 45/55 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 8 con NaHCO3 (aq.) saturado. CH3CN se separó bajo presión reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 150 mL). Las capas orgánicas se reunieron y se secaron sobre Na2SO4. La disolución se evaporó y el producto puro se secó en vacío (5 g, rendimiento 45%). Método B; Rt: 5,67 min. m/z: 676,3 (M+H)+ Masa exacta: 675,3; SFC: Columnas:
25 ChiralpakOD-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: Metanol (dietilamina al 0,05%; 40% de B en A. Isómero 18a: Rt: 5.51min isómero 18b: Rt: 6,71min
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El compuesto 18 (1,8 g, 2,7 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (10 mL) y se añadió gota a gota HCl 4 N en 1,4-dioxano (2 mL, 8,1 mmol) a 0-5°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se filtró y el sólido se lavó con t-butil-metil-éter (20 mL), dando como resultado el producto 19 (1,4 g). Método D; Rt: 1,52 min. m/z: 476,3
5 (M+H)+ Masa exacta: 475,2
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A una disolución del compuesto ácido (S 3CN (20 mL) se añadieron HOBT (0,8 g, 5,8 mmol) y EDC.HCl (1,08 g, 5,8 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 h. Luego se añadió el compuesto 19 (1,14 g). La suspensión resultante se enfrió a 0º C y se añadió DIPEA (1,3 g, 8,4 10 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 15 h. La mezcla se concentró y se diluyó con 30 mL de CH2Cl2 y 15 mL de NaOH (aq.) 0,5 N. La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (3 x 15 mL). La capa orgánica se secó y se concentró para dar el producto bruto. El producto bruto se purificó por cromatografía de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 35/65 a 70/30, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 8 con NaHCO3 (aq.) saturada. CH3CN se separó bajo presión reducida. La capa acuosa se
15 extrajo con CH2Cl2 (3 x 200 mL). Las capas orgánicas se reunieron y se secaron bajo Na2SO4. La disolución se evaporó, dando como resultado el compuesto 20 (0,893 g). Método B; Rt: 5,14 min. m/z: 790,4 (M+H)+ Masa exacta: 789,4; SFC: Columna: Chiralpak AS-H 250 mm * 4,6mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min Fase móvil: MeOH al 40% (dietilamina al 0,05%) en CO2 20a: Rt: 4,5 min; 20b: Rt: 8,0 min
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El compuesto 8 (1500 mg, 2,11 mmol, 1,00 equiv.) se disolvió en HCl 5-6 N en isopropanol (150 mL, 900 mmol, 426 equiv.) en un matraz de fondo redondo de 250 mL, y la mezcla de reacción se agitó durante 20 horas a 100ºC bajo una atmósfera de nitrógeno y se dejó enfriar a temperatura ambiente. A la suspensión se añadió tBuOMe (100 mL). Los sólidos se filtraron y se lavaron con tBuOMe (2x 50 mL) y se secaron inmediatamente en vacío para proporcionar 1,23 g
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 S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (314 mg, 1.80 mmol) en diclorometano (150 mL) en un matraz de fondo redondo de 500 mL se añadió trietilamina (0,713 mL, 5,13 mmol), seguido de hexafluorofosfato de 2-(3H10 [1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilisouronio (V) (682 mg, 1.80 mmol) La mezcla se trató mediante ultrasonidos durante 10 minutos. Después, se añadió 21 (500 mg, 0,86 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se añadió HCl en iPrOH (5-6 N, 10 mL) y la disolución resultante se lavó sucesivamente con una disolución acuosa saturada de Na2CO3 (2 x 200 mL) y salmuera (100 mL). Después de secar sobre sulfato de magnesio y de filtrar, el filtrado se evaporó hasta sequedad para proporcionar un 15 polvo blanco. El polvo se purificó utilizando cromatografía en columna (NH3 (7N en MeOH) /CH2Cl2 al 0-6,5%) para proporcionar el compuesto 22 en forma de un polvo blanco (mezcla diastereomérica, 636 mg; 93%). Parte de la mezcla diastereomérica (586 mg) se recristalizó en metanol/acetonitrilo/DMSO 5/2/2 (9 mL). Los sólidos se filtraron, se lavaron con metanol (2 x 2 mL) y se secaron en una estufa de vacío a 40ºC durante el fin de semana para proporcionar el isómero 22b (122 mg, 92% de) SFC: Columna: (AS) 500 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: MeOH al 35%
20 (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantener 15 min; Temperatura: 50ºC; Rt (6,38 min) UV: 4,0% de isómero 22a; UV: 96,0% de isómero 22b. LC-MS (22b) Método E; Rt: 4,81 min. m/z: 790,3 (M+H)+ Masa exacta: 789,4.
El filtrado se enfrió a 4ºC durante el fin de semana y el precipitado resultante se separó por filtración, se lavó con metanol y se secó en una estufa de vacío a 40ºC durante una noche para proporcionar el isómero 22a (164 mg, 92%
25 de) en forma de un polvo blanco. SFC: Columna: (OD)-H 500 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: MeOH al 10-40% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) a una tasa de 1,6%/min, MeOH al 40-50% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) a una tasa de 5% y mantener durante 4,00 min; Temperatura: 50º C; Rt (21,74min) UV: 95,9%, 22a; Rt (22,72 min) UV: 4.1%, 22b. LC-MS (22a): Método E; Rt: 5,04 min. m/z: 790,4 (M+H)+ Masa exacta: 789,4.
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A ácido (2S,3 )-3-metoxi-2-(metoxicarbonilamino)butanoico (251 mg, 1,31 mmol) disuelto en diclorometano (150 mL) en un matraz de fondo redondo de 250 mL se añadió trietilamina (0,694 mL , 4,99 mmol) seguido de hexafluorofosfato de 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilisouronio (V) (498 mg, 1,31 mmol). La mezcla se agitó a 5 temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió el compuesto 21 (365 mg, 0,624 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se añadió entonces HCl en iPrOH (5-6 N, 10 mL) y la disolución resultante se lavó sucesivamente con disolución acuosa saturada Na2CO3 (2 x 200 mL) y salmuera (100 mL). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se concentró en vacío para proporcionar un polvo pardo. El polvo se purificó utilizando cromatografía en columna (NH3 (7N en MeOH) /DCM
10 al 0-8%) para proporcionar el compuesto 23 (390 mg; 75%) en forma de un polvo blanco (). Método D; Rt: 4,40 y 4,52 min. m/z: 822,3. (M+H)+ Masa exacta: 821,4;
340 mg de la mezcla diastereomérica se recristalizaron en metanol (8 mL). Los sólidos se filtraron y se lavaron con metanol (2 x 2 mL) y se secaron en una estufa de vacío a 40ºC durante una noche para proporcionar el compuesto 23b
15 (73 mg, 14%, 93% de) en forma de un polvo blanco. SFC: Columna: (OD)-H 250 mm x 4,6 mm; Caudal: 3,5 mL/min; Fase móvil: MeOH al 40% 10,00 min; Temperatura: 30ºC, Rt (3,58 min, 23a) UV: 3,4%; Rt (4,49 min, 23b) UV: 96,6% Método D; Rt: 4,39 min. m/z: 822,3 (M+H)+ Masa exacta: 821,4;
El filtrado se purificó mediante SFC preparativa sobre Chiralpak Diacel OD 20 x 250 mm. Fase móvil (CO2, metanol con
20 iPrNH2 al 0,2%). Las fracciones deseadas se recogieron, se evaporaron, se disolvieron en metanol y se evaporaron de nuevo, proporcionando el compuesto 23a (114 mg) en forma de un polvo blanco (22%, 100% de) SFC: Columna: (OD)-H 500 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: MeOH al 40% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantener 19,50 min, MeOH al 40-50% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantener 4,10 min; Temperatura: 50ºC; Rt (6,5 min, 23a) UV: 100,00%; Rt (7,5 min, 23b) UV: 0,00%. LC-MS: Método E; Rt: 4,44 min. m/z: 822,5 (M+H)+ Masa exacta: 821,4; y
25 compuesto 23b (41 mg) en forma de un polvo blanco (7%, 94% de) SFC: Columna: (OD)-H 500 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: MeOH al 40% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantener 19,50 min, MeOH al 40-50% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantener 4,10 min; Temperatura: 50ºC; Rt (6,5 min, 23a) UV: 2,99%; Rt (7,5 min, 23b) UV: 97,01%
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A ácido (2S,3S) 2 (metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico (248 mg, 1,31 mmol), disuelto en diclorometano (150 mL) en un matraz de fondo redondo de 250 mL se añadió trietilamina (0,694 mL, 4,99 mmol,), seguido de hexafluorofosfato de 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin 3-il)-1,1,3,3-tetrametilisouronio (V) (498 mg, 1,31 mmol). La mezcla se agitó a 5 temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió el compuesto  (365 mg, 0,624 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se añadió HCl en iPrOH (5-6 N, 10 mL) y la disolución resultante se lavó con disolución acuosa saturada de Na2CO3 (2 x 200 mL) y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la filtración, el disolvente se evaporó en vacío para proporcionar un polvo pardo. El polvo se purificó utilizando cromatografía en columna (NH3 (7N en MeOH)/DCM 0 -6,5%) para proporcionar la mezcla de
10 diastereomérica 24 (395 mg) en forma de un polvo blanco. LC-MS: Método E; Rt: 5,5 y 5,7 min. m/z: 818,4 (M+H)+ Masa exacta: 817,4.
345 mg de la mezcla diastereomérica se recristalizaron en metanol (5 mL). Los sólidos se filtraron, se lavaron con metanol (2 x 2 mL) y se secaron en una estufa de vacío a 40ºC durante una noche para proporcionar el compuesto 24a 15 (78 mg, 14%, 93% de) en forma de un polvo blanco. LC-MS: Método E; Rt: 5,7 min m/z: 818,4 (M+H)+ Masa exacta:
817.4.
SFC: Columna: (OD)-H 250 mm x 4,6 mm: caudal 3,5 mL/min: fase móvil: MeOH al 40% 10,00 min Temperatura: 30ºC: Rt (3,29 min, 24a) UV: 97,7%: Rt (4,55 min, 24b) UV: 2,3%.
20 El filtrado se purificó por SFC preparativa (Chiralpak Diacel OD 20 x 250 mm; fase móvil (CO2, metanol con iPrNH2 al 0,2%). Las fracciones deseadas se recogieron y se evaporó, proporcionando el compuesto 24a (54 mg, 10%, 100% de) en forma de un polvo blanco.LC-MS: Método E; Rt: 5,7 min m/z: 818,4 (M+H)+ Masa exacta: 817,4; SFC Columna: (OD)-H 500 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: MeOH al 40% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantener 19.50
25 min, MeOH al 40-50% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantener 4,10 min; Temperatura: 50ºC; Rt (6,8 min, 24a) UV: 100,00; Rt (8,0 min, 24b) UV: 0,00%
y 24b en forma de un polvo blanco (130 mg 25%, 100% de). LC-MS: Método E; Rt: 5,5 min m/z: 818,4 (M+H)+ Masa exacta: 817,4; Columna: (OD)-H 500 mm x 4,6 mm; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: MeOH al 40% (que contiene iPrNH2 30 al 0,2%) mantener 19,50 min, MeOH al 40-50% (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantener 4,10 min; Temperatura: 50ºC;
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El compuesto 25 (10 g, 43,5 mmol) y NaOH (5,2 g, 130,4 mmol) se disolvieron en H2O (60 mL), CH3CH2OH (60 mL) y THF (180 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. El disolvente orgánico se 35 separó en vacío. Después, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mL). La capa de agua se neutralizó con
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HCl 1 N (hasta pH = 4) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las capas orgánicas reunidas se concentraron en
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El compuesto 26 (9,1 g, 42,1 mmol), HOBT (13,6 g, 101,1 mmol) y EDC.HCl (19,4 g, 101,1 mmol) se disolvieron en DMF (60 mL) y NH3. Se añadió lentamente H2O (30 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 15 horas a temperatura ambiente. El disolvente se separó después en vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (100 mL) y se lavó con NaOH 1 N (20 mL), seguido de salmuera, se secó sobre Na2 4 y se concentró en vacío, resultando el
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10 El compuesto 28 (15,7 g, 63,1 mmol) se disolvió en CH2Cl2 seco (250 mL) y se añadió DMF (1,5 mL) a la disolución. Se añadió gota a gota cloruro de oxalilo (13,5 mL, 157,5 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 0,5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró en vacío y el residuo (22 g) se utilizó
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15 A la disolución del compuesto 29 (22 g, mezcla bruta) en THF seco (250 mL), se añadieron el compuesto 27 (7,6 g, 35,3 mmol) y NaOH 1 N (aq. 85 mL, 85 mmol). La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se extrajo después con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con NaOH 1 N en agua (15 mL), salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró en vacío, resultando el compuesto 30. Método A1; Rt: 1,36 min. m/z =: 446,1 (M+H)+ Masa exacta: 445,1
El compuesto 30 (17 g, 38,1 mmol) en CH3CH2OH (200 mL) y KOH al 10% (34 mL) se calentaron a 80ºC durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se neutralizó a pH = 7 mediante la adición cuidadosa de HCl concentrado. El precipitado resultante se recogió mediante filtración y se lavó mediante acetato de etilo/hexano (5/1), dando como resultado el compuesto 31 (12,6 g; 77%). Método C; Rt: 4,27 min. m/z =: 428,0 (M+H)+ Masa exacta: 427,1 [α]58920 = 0,75 (CH2Cl , 9,47 mg/mL) SFC: Columnas: Chiralpak OD-3 50 mm * 4,6 mm; 3 um; Caudal: 4 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%; 5 a 40% de B en A, Temperatura 40ºC; Rt: 1,4 min SFC: Columnas: Chiralpak AS-H 150 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina
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Pd(PPh3)4 (3,0 g, 2,6 mmol) se añadió a la mezcla de compuesto 31 (11 g, 25,7 mmol), compuesto 7 (12,5 g, 25,7
10 mmol), Na2CO3 (5,4 g, 51,4 mmol), agua (110 mL), CH3CH2OH (110 mL) y tolueno (220 mL) en una sola porción bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante 10 horas a 80ºC.El disolvente orgánico se separó en vacío y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 200 mL).Las capas orgánicas reunidas se lavaron con salmuera y después se secó sobre Na2SO4 y se concentró hasta sequedad.El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo = 2/1 a 1/2).El producto obtenido se purificó adicionalmente mediante cromatografía de alto
15 rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 20/80 a 70/30, CF3COOH al 0,1%).La fracción deseada se recogió y el valor de pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 8 mediante la adición de K2CO3.A continuación, el disolvente orgánico se separó a presión reducida.La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 300 mL).Las capas orgánicas se reunieron y se secaron bajo Na2SO4.La disolución se evaporó, resultando el compuesto 32 (rendimiento del 23%).Método C; Rt: 4,21 min. m/z =: 711,3 (M+H)+ Masa exacta: 710,3
20 SFC: Columnas: Chiralpak OJ-H 250 mm x 4,6mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%; 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 5.47 min [α]58920 = -44,54 (CH2Cl2, 5,25 mg/mL) SFC: Columnas: Chiralpak AS-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%; 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 4,25 min
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A la disolución del compuesto 32 (3,2 g, 4,5 mmol) en CH2Cl2 (20 mL) se añadió gota a gota HCl 4 N en dioxano (5,6 mL) a 0ºC. Cuando el material de partida se consumió por completo, el disolvente se separó en vacío.El residuo se lavó
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Pd(OH)2/C (0,3 g, 0,43 mmol) se añadió a la disolución del compuesto 33 (2,47 g, 3,82 mmol) en CH3OH bajo nitrógeno. La mezcla resultante se hidrogenó a 40ºC bajo H2 (3,5 bar) durante 14 horas. La mezcla se filtró sobre celite y se concentró. El residuo (1,2 g, compuesto 34) se utilizó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.
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A una disolución de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (1,05 g, 6 mmol) en CH3CN (20 mL) se añadieron HOBT (0,81 g, 6 mmol) y EDC.HCl (1,14 g, 6 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 hora. A continuación, se añadió el compuesto 34 (1,2 g). La suspensión se enfrió a 0º C y se añadió diisopropiletilamina (1,6 g). 5 La mezcla se agitó a 20ºC durante 15 horas. La mezcla se concentró y se diluyó con CH2Cl2 (30 mL) y NaOH 0,5 N acuoso (15 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (3 x 15 mL). Las capas orgánicas reunidas se secaron sobre Na SO4 y se concentraron para dar el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante cromatografía de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3OH/H2O = 40/60 a 70/30, CF3COOH al 0,1%). Se recogió la fracción deseada y el valor de pH de la solución se ajustó a aproximadamente 8 con K2CO3. Después CH3OH se
10 separó bajo presión reducida y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 300 mL). Las capas orgánicas se reunieron y se secaron sobre Na2SO4. La disolución se evaporó, dando como resultado el compuesto 35 (1,0 g).1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6 isómero principal descrito) δ ppm 11,79-12,44 (m, 2 H, dos singletes principales en 11,84 y 12,34) 7,82-8,49 (m, 8 H) 7,56-7,68 (m, 2 H) 7,23-7,33 (m, 2 H) 5,09 -5,17 (m, 1 H) 4,78-4,87 (m, 1 H) 4,07 -4,17 (m, 2 H) 3,73-3,96 (m, 4 H) 3,55 (2x s, 6 H) 1,89-2,36 (m, 10 H) 0,79-1,07 (m, 12 H)
15 Método C; Rt: 3,97 min. m/z =: 791,5 (M+H)+ Masa exacta: 790,4; SFC: Columnas: Chiralpak OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%; 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 3,05 min [α]58920 = -24,25 (CH2Cl2, 2,55 mg/mL).
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El compuesto 36 (10 g, 43,5 mmol) y NaOH (5,2 g, 130,4 mmol) se disolvieron en H2O (40 mL), CH3CH2OH (40 mL) y
20 THF (120 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a 50ºC. El disolvente orgánico se separó después en vacío. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL). La capa acuosa se acidificó con HCl conc. hasta pH = 2 y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las capas orgánicas reunidas se concentraron en vacío para proporcionar el producto 37 (9,3 g, rendimiento del 98%).
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El compuesto 37 (9,3 g, 43,1 mmol), HOBT (13,4 g, 99 mmol) y EDC.HCl (19 g, 99 mmol) se disolvieron en DMF (40 mL). La disolución se agitó a 20ºC durante 30 minutos. A la disolución se añadió lentamente NH3 2O (20 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 15 horas a temperatura ambiente. El disolvente se separó en vacío. El residuo se 5 disolvió en acetato de etilo (100 mL). La mezcla se lavó con NaHCO3 saturado y disolución acuosa de NH4CI. La capa
A la disolución de compuesto 29 (7,0 g, 26,1 mmol) en THF seco (100 mL) se añadió el compuesto 38 (5,6 g, 26,1 mmol) y NaOH 1 N (aq. 52 mL, 52,2 mmol). La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de
10 reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con NaOH 1 N en agua (50 mL), salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró en vacío, resultando el compuesto 39 (8,3 g, rendimiento del 71%). Método A1; Rt: 1,37 min. m/z =: 468,1 (M+Na)imagen96+ Masa exacta: 445,1
La disolución del compuesto 39 (8,3 g, 18,6 mmol) en CH3CH2OH (100 mL) y KOH al 10% (17 mL) se calentó a 80ºC
15 durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se neutralizó a pH = 7 con disolución acuosa de HCl 10 N. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió en CH2Cl2 (80 mL) y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró en vacío. El residuo se purificó por columna de resolución instantánea (eluyente: éter de petróleo / acetato de etilo = 10/1 a 1/3) resultando el compuesto 40 (1,8 g, rendimiento del 21%). Método A; Rt: 1,42 min. m/z =: 428,1 (M+H)+ Masa exacta: 427,1
20 SFC: Columnas: Chiralpak AD-H 50 mm * 4,6 mm; 3 um; Caudal: 4 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%; 5% a 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 1,98 min SFC: Columnas: Chiralpak OD-H de 50 mm * 4,6 mm; 3 um; Caudal: 4 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%; 5% a 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 1,45 min
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Pd(PPh3)4 (0,27 g, 0,23 mmol) se añadió a la mezcla de compuesto 40 (1 g, 2,33 mmol), compuesto 7 (1,14 g, 2,33 mmol), Na2CO3 (0,5 g, 4,67 mmol), agua (11,3 mL), CH3 2OH (10 mL) y tolueno (20 mL) en una sola porción bajo 5 nitrógeno. La mezcla se agitó durante 10 horas a 90ºC. El disolvente orgánico se separó en vacío. El residuo se purificó mediante columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1 a 1/3). El compuesto 41 obtenido se re-purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 10 con K2CO3. Después se separó CH3CN bajo presión reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 15 mL) y las capas orgánicas se
10 reunieron y se secaron sobre Na2SO4. La disolución se evaporó y el residuo se secó en vacío, resultando el compuesto 41 (0,58 g, rendimiento del 35%). Método C; Rt: 4,11 min. m/z =: 711,3 (M+H)+ Masa exacta: 710,3 SFC: Columnas: Chiralpak OD-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%; 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 8,45 min
15 SFC: Columnas: Chiralpak OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH
A la solución de compuesto 41 (0,58 g, 0,82 mmol) en CH2Cl2 (5 mL) se añadió gota a gota HCl 4 N en dioxano (0,35 mL) a 0ºC. Después de la conversión completa en el compuesto 42, el disolvente se separó en vacío. El residuo se lavó 20 con t-butil-metil-éter (2 x 3 mL) resultando el compuesto 42 (0,5 g). Método A; Rt: 0,98 min. m/z =: 611,5 (M+H)+ Masa exacta: 610,3
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Pd(OH)2/C (0,15 g, 0,22 mmol) se añadió a la disolución de Compuesto 42 (0,5 g) en CH3OH bajo nitrógeno. La mezcla resultante se hidrogenó a 40ºC bajo la presión de 3,5 bar durante 18 horas. La mezcla se filtró sobre celite y se 25 concentró. El residuo se utilizó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional (0,38 g). Método A; Rt: 1,02 min. m/z =: 477,3 (M+H)+ Masa exacta: 476,2
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A una disolución de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,43 g, 2,4 mmol) en CH3CN (10 mL) se añadieron HOBT (0,43 g, 3,2 mmol) y EDC.HCl (0,63 g, 3,2 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 hora. Después se añadió el compuesto 43  2Cl2 (50 mL) y NaOH 0,5 N (20 mL;. aq). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (3 x 10 mL). Después de la evaporación de los componentes volátiles, el producto bruto se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 6 con ácido cítrico 0,5 N. después se separó CH3CN bajo presión reducida. La capa acuosa
10 se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL) y las capas orgánicas se reunieron y se secaron bajo Na2SO4. La disolución se evaporó y el residuo se secó en vacío, resultando el compuesto 44 (181 mg). Método C; Rt: 3,86 min. m/z =: 791,5 (M+H)+ Masa exacta: 790,4; SFC: Columnas: Chiralpak OD-H de 50 mm * 4,6 mm; 3 um; Caudal: 4 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%; 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 1,42 min SFC: Columnas: Chiralpak AS-H 150 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina
15 al 0,05%; 5% a 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 5,26 min [α]58920 = -228,0 (CH2Cl2, 1 mg/mL)1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6, isómero principal descrito) δ ppm 11,67-12,44 (2 H, m, dos singletes principales en 11,82 y 12,26) 7,61-8,36 (10 H, m) 7,23 (2 H, d , J = 8,3 Hz) 5,08 -5.16 (1 H, m) 4,82 (1 H, dd, J = 4,9, 7,7 Hz) 4,06
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Se añadieron EDC.HCl (0,63 g, 3,3 mmol) y HOBt (0,45 g, 3,3 mmol) a una disolución de ácido (S)-2(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0.58 g, 3.3 mmol) en acetonitrilo (45 mL). La mezcla se agitó a 10º C durante 1 hora y después se añadió el compuesto 42 (0,9 g). La mezcla se enfrió a 0ºC y después de la adición de diisopropiletilamina (0,72 g, 5,6 mmol), la mezcla se agitó a 10º C durante 48 horas. Después de la filtración de la
25 mezcla de reacción, el filtrado se concentró en vacío y el residuo resultante se diluyó con CH2Cl2 (20 mL) y HCl 1 N (15 mL). El sólido se filtró, se lavó con t-butil-metil-éter (5 mL) y se secó bajo alto vacío, para proporcionar el compuesto 42a (0,4 g). La capa orgánica se separó y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado (15 mL) y salmuera y se secó sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se separó en vacío. El residuo se lavó con butil-metil-éter (10 mL) y se secó bajo alto vacío, dando como resultado más compuesto 42a (0,3 g).
30 Método A2; Rt: 0,84 min. m/z =: 767,8 (M+H)+ Masa exacta: 767,3
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Una mezcla de compuesto 42a (0,56 g), (Boc)2O (0,34 g, 1,54 mmol, 2 eq), trietilamina (0,33 mL, 2,31 mmol) y Pd(OH)2/C al 20% seco (0,5 g) en metanol (5 mL) se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno a 10ºC durante 3 horas. La mezcla se filtró y el filtrado se evaporó en vacío. El residuo obtenido se disolvió en CH2Cl2 (10 mL) y se lavó con H O 5 (5 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y después de la filtración, el filtrado se concentró en vacío. El residuo obtenido se lavó con terc-butil-metil-éter (3 mL). El sólido (0,47 g) se filtró y se secó bajo alto vacío. Método A2; Rt: 1,00 min. m/z =: 734,4 (M+H)+ Masa exacta: 733,4. El sólido se disolvió en CH2Cl2 (5 mL) y HCl 4 N/dioxano (3 mL, 12 mmol) se añadió gota a gota a 0ºC. La mezcla se agitó a 10ºC durante 1 hora. El disolvente se separó en vacío y el residuo se solidificó con t-butil-metil-éter (2 mL). El sólido se filtró y se secó bajo alto vacío para proporcionar compuesto
10 42b (0,36 g). Método A2; Rt: 0,82 min. m/z =: 634,1 (M+H)imagen103+ Masa exacta: 633,3.
anhídrido cíclíco de ácido propilfosfónico (0,9 mL, 1,69 mmol.), diisopropiletilamina (0,6 mL, 2,7 mmol, 6 eq) y DMF (6
15 mL) se agitó a 10ºC durante 1 hora. Se añadieron CH2Cl2 (5 mL) y disolución saturada de NaHCO3 (3 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (2 x 3 mL) y se secó sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se separó en vacío. El residuo obtenido se lavó con terc-butil-metil-éter (3 mL). El sólido se filtró y se secó bajo alto vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Grace Vydac 250 x 20 mm x 5 um; Fase móvil
A: agua (que contiene TFA al 0,075%, V/V) Fase móvil B: acetonitrilo (que contiene TFA al 0,025%, V/V) Caudal: 30
20 mL/min, Gradiente: 35-50% (v / v) B en A de 0 a 11 min). Las fracciones puras se recogieron y se basificaron con NaHCO3 a pH = 8. Los componentes volátiles se separaron en vacío. El residuo se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (10 mL) y se secó sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se separó en vacío para proporcionar el compuesto 44-1 (0,11 g). Método C; Rt: 4,10 min. m/z =: 867,5 (M+H)+ Masa exacta:
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El compuesto 44-1 (1,8 g, bruto) se disolvió en CH2Cl2 (20 mL) y se añadió gota a gota HCl/dioxano (6 mL, 24 mmol) a
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0ºC. La mezcla se agitó a 0ºC durante 2 horas. El disolvente se separó en vacío. El residuo se lavó con dietiléter (3 mL) y CH2Cl2 (5 mL). El sólido se secó bajo alto vacío para proporcionar el compuesto 44-1a (0,82 g). Método A2; Rt: 0,85 min. m/z =: 767,3 (M+H)+ Masa exacta: 766,4
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5 Cloroformiato de metilo (0,33 g, 3,49 mmol) se añadió a la mezcla del compuesto 44-1a en H2O (10 mL) y se añadió terc-butil-metil-éter (10 mL) a 0ºC. Se añadió NaOH (0,12 g, 3,1 mmol). La mezcla se agitó a 0º C durante 1 hora y luego se añadió CH2Cl (10 mL). La capa orgánica se lavó con H2O (10 mL) y se secó (Na2SO4). Después de la filtración, el disolvente se evaporó en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Grace Vydac 250 x 20 mm x 5 um, Fase móvil A: agua (que contiene TFA al 0,075%, V/V) Fase móvil B:
10 acetonitrilo (que contiene TFA al 0,025%, V/V), caudal: 30 mL/min, Gradiente: 35-50% de B (v/v) en A de 0 a 11 min). Las fracciones puras se recogieron y se basificaron con una disolución saturada de NaHCO3 a pH = 8. Los componentes volátiles se separaron en vacío. El residuo se extrajo con CH2Cl2 (2 x 15 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (10 mL) y se secó sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se separó en vacío. El residuo resultante se secó adicionalmente en vacío para proporcionar el compuesto 44-2 (45 mg) en forma de un polvo blanco.
15 Método B; Rt: 5,05 min. m/z =: 825,5 (M+H)imagen107+ Masa exacta: 824,4
Cloroformiato de ciclopentilo (0,44 g, 3 mmol) se añadió a la mezcla de compuesto 44-1a (0,2 g), y se añadieron H2O (5 mL) y MTBE (5 mL) a 0ºC. Se añadió NaOH (0,1 g, 2,5 mmol) en H2O (0,5 mL). La mezcla se agitó a 0ºC durante 1 hora. Se añadió HCl 1 N hasta pH = 3, seguido de CH2Cl2 (10 mL). La capa orgánica se lavó con H2O (10 mL). El 20 disolvente se separó en vacío y el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Grace Vydac 250 x 20 mm x 5um, Fase móvil A: agua (que contiene TFA al 0,075%, V/V), Fase móvil B: acetonitrilo (que contiene TFA al 0,025% V/V), Caudal 30 mL/min, Gradiente: 35-50% de B (v/v) en A de 0 a 11 min). Las fracciones puras se recogieron y se basificaron con NaHCO3 a pH = 8. Los componentes volátiles se separaron en vacío y el residuo obtenido se extrajo con CH2Cl2 (2 x 15 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (10 mL) y se secó
25 sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se separó en vacío. El residuo resultante se liofilizó, resultando el compuesto 44-3 (34 mg). Método B; Rt: 5,35 min. m/z =: 879,6 (M+H)+ Masa exacta: 878,4
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Ciclobutanol (2 g, 27,7 mmol) y N,N-dimetilanilina (3,69 g, 30,5 mmol) se añadieron lentamente a una mezcla de
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trifosgeno (8,22 g, 27,7 mmol, 1 eq) en THF seco (20 mL) a 0ºC. Después de 10 minutos, la reacción se calentó a 10ºC y se agitó durante 12 horas. Se añadió CH2Cl2 seco (20 mL) y la mezcla se vertió lentamente en una disolución de Nhidroxisuccinimida (4,14 g, 36 mmol) en CH2Cl2 seco (20 mL) a 0ºC. La mezcla se agitó a 10ºC durante 10 horas. Se añadió H2 2SO4. El disolvente se separó en vacío, resultando 2,5
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A 44-1a (0,1 g) en THF (5 mL) se añadió gota a gota una disolución saturada de NaHCO3 (1,25 mL). A continuación, se añadió gota a gota 2,5-dioxopirrolidin-1-il-carbonato de ciclobutilo (0,03 g) en THF (2 mL). La mezcla se agitó a 10º
10 C durante 1 hora y se añadió ácido cítrico acuoso al 10% (3 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 5 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con salmuera (2 mL) y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se separó en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (columna: Grace Vydac 250 * 20 mm * 5um Fase móvil A: agua (que contiene TFA al 0,075%, % en V/V) Fase móvil B: acetonitrilo (que contiene TFA al 0,025%, % en V/V) Caudal: 30 mL/min; Gradiente: 35-50% de B (v/v) en A de 0 a 11 min). Las fracciones puras se
15 combinaron y se basificaron con disolución saturada de NaHCO3 a pH = 8. Los componentes volátiles se separaron en vacío. La mezcla resultante se extrajo con CH2Cl2 (2 x 15 mL). Las capas orgánicas se reunieron, se lavaron con salmuera (10 mL) y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se separó en vacío, dando como resultado el compuesto 44-4 (0,023 g) Método B; Rt: 5,16 min. m/z =: 865,3 (M+H)+ Masa exacta: 864,4
Los compuestos 45 (4 g, 15,9 mmol) y 38 (3,8 g, 17,7 mmol) se disolvieron en THF seco (250 mL). La mezcla se calentó a 80ºC y se agitó durante 1 hora. Después se añadió cloruro de 4-(4,6-dimetoxi[1.3.5]triazin-2-il)-4metilmorfolinio hidrato (DMTMM, 1,2 eq) y la mezcla se agitó a 80ºC durante una noche. La mezcla se concentró, se añadió agua (60 mL) y después se extrajo con CH2Cl2 (3 x 150 mL). La fase orgánica se separó, se secó sobre
25 Na2SO4, se filtró y el disolvente se separó en vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa (columna: C18, eluyente: CH3CN/H2O de 47/53 a 77/23, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y se basificó mediante NaHCO3 saturado (aq.). La mezcla se concentró y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 200 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se evaporó en vacío. El producto puro se secó en vacío (4,2 g, 59%). Método F; Rt: 1,63 min. m/z =: 470,0 (M+Na)+ Masa exacta: 447,1
Una disolución del compuesto 46 (4,2 g, 9,4 mmol) y KOH (al 10% aq., 3 eq) en CH3CH2OH (120 mL) se agitó a 20ºC durante una noche. La mezcla se concentró y se añadió agua (40 mL). La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (3 x 120 mL) y las capas orgánicas reunidas se separaron. Las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4 y el disolvente se separó en vacío. El compuesto 47 se secó en vacío (3,2 g, 79%). Método C; Rt: 4,31 min. m/z =: 430,0 (M+H)+ Masa exacta: 429,1 SFC: Columnas: Chiralpak OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%; 5% a 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 4,27 min SFC: Columnas: Chiralpak AD-3 150 mm * 4,6 mm; 3 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: isopropanol (dietilamina al 0,05%; 5% a 40% de B en A, Temperatura 40ºC: Rt: 5,64 min [α] 20 = -96,8 (CH2OH, 2,5 mg/mL)
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10 Pd(PPh3)4 (0,2 eq) se añadió en una porción a una mezcla del compuesto 47 (2 g, 4,6 mmol), compuesto 7 (2,4 g, 1,1 eq) y Na2CO3 (2,0 eq) en H2O/tolueno/CH3CH2OH (1/2/1) (32 mL, 16 mL/lote) bajo nitrógeno. La mezcla se agitó a 100ºC bajo microondas durante 2 horas. La mezcla se concentró y se añadió agua (30 mL). La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (3 x 80 mL). Las capas orgánicas reunidas se separaron, se secaron sobre Na2SO4 y el disolvente se separó en vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa (columna: C18,
15 eluyente: CH3CN/H2O de 35/65 a 60/40, CF3COOH al 0,1%).
La fracción deseada se recogió y se basificó mediante NaHCO3 saturado (aq.). La mezcla se concentró y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 100 mL). La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se separó en vacío. El compuesto 48 se secó en vacío (1,9 g, 58%). Método F; Rt: 1,55 min. m/z =: 713,5 (M+H)+ Masa exacta: 712,3
El compuesto 48 (1,8 g, 2,5 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (30 mL) y se enfrió a 0ºC. Se añadió gota a gota HCl en dioxano (4 N, 10 mL) a 0-5ºC y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se filtró después y el sólido se lavó con t-butil-metil-éter (20 mL). El residuo (1,8 g) se utilizó directamente en la etapa siguiente. Método F; Rt: 1,14 min. m/z =: 513,1 (M+H)+ Masa exacta: 512,2
A una disolución de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (1,23 g, 7,0 mmol) en CH3CN (50 mL) se añadieron EDC.HCl (7,0 mmol) y HOBt (7,0 mmol.). La mezcla se agitó a 0ºC durante 1 hora y después se añadió el compuesto 49 (1,7 g). La suspensión se enfrió después a 0ºC y se añadió DIPEA (1,5 g). La mezcla se agitó a 20ºC
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durante 15 horas. La mezcla se concentró y se diluyó con CH2Cl2 (30 mL) y NaOH 0,5 N (aq.) (15 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (3 x 15 mL). La capa orgánica reunida se secó sobre Na SO4 y se concentró para dar el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa (columna: C18, eluyente: CH3CN/H2O de 35/65 a 50/50, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y se 5 basificó mediante NaHCO3 saturado (aq.) hasta pH ~ 8. La mezcla se concentró y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se separó en vacío. Después, el producto puro se purificó adicionalmente mediante cromatografía de super-fluido (Columna: Chiralpak AS 250 x 25 mm D.I., 20 µm Fase móvil:
A: CO2, B: metanol (DEA al 0,5%); B en A de 5% a 40%, caudal: 50 mL/min). El disolvente se separó bajo vacío y el compuesto 50 se obtuvo después de la liofilización (640 mg). Método C; Rt: 3,84 min. m/z =: 827,3 (M+H)+ Masa
10 exacta: 826,4 [α]58920 = -232,8 (CH2Cl2, 2,5 mg/mL) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6 isómero principal descrito) δ ppm 11,79-12,44 (m, 2 H dos singletes principales en 11,86 y 12,33) 8,12-8,34 (m, 3 H) 7,83-8,05 (m, 6 H) 7,63-7,69 (m, 1 H) 7,49 (d, 1 H; J = 8,0 Hz) 7,31 (d, 1 H, J = 8,5 Hz) 5,08 -5,16 (m, 1 H) 4,94-5,05 (m, 1 H) 4,50-4,65 (m, 1 H) 4,21-4,39 (m, 1 H) 4,04 – 4,16 (m, 1 H) 3,93-4,04 (m, 1 H)
15 3,75-3,89 (m, 2 H) 3,55 (s, 6 H) 2,88-3,04 (m, 1 H) 2,60-2,77 (m, 1 H) 2,10 – 2,26 (m, 2 H) 1,83-2,10 (m, 4 H) 0,791,07 (m, 12 H)
SFC: Columnas: Chiralpak AS-H 150 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 3 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A ,: Rt: 5,73 min
20 SFC: Columnas: Chiralpak OD-3 150 mm * 4,6 mm; 3 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 5,98 min SFC: Columnas: Chiralpak OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH
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25 NaH (al 60%, 3,13 g, 78mmol, 2 equiv.) se añadió a DMSO (100 mL), seguido de la adición gota a gota de malonato de dietilo (12,54 g, 78 mmol, 2 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 100ºC durante 40 minutos. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se añadió 1,4-dibromo-2-nitrobenceno (10 g, 35,60 mmol), se continuó la agitación durante 30 minutos a temperatura ambiente y después se calentó a 100ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactivó con NH4Cl aq. sat. (50 mL). Después se añadió EtOAc (150 mL), y la capa orgánica se separó y se lavó con agua (50 mL) y
30 salmuera (50 mL). La capa orgánica se secó, se filtró y luego se concentró, resultando el compuesto 51 (15 g), que se
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El compuesto 51 bruto (15 g) se disolvió en DMSO (100 mL). Se añadieron LiCl (3,0 g, 70 mmol) y H2O (0,64 g, 35,6 mmol) y la reacción se calentó a 100ºC durante 3 horas. La reacción se enfrió y se vertió en EtOAc (200 mL) y salmuera
35 (200 mL). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, y el filtrado se concentró. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 50/1) dando como resultado el producto 52 (9,0 g).
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NaH (al 60%, 3,75 g, 93 mmol) se añadió a una suspensión agitada del compuesto 52 (8,0 g, 27,8 mmol) en DMF (90 mL) a temperatura ambiente. Después de 15 minutos, se añadió Mel (22,2 g, 156 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se vertió en hielo-agua (200 mL) y EtOAc (200 mL). La capa orgánica se lavó con agua (3 x 200 mL), salmuera, se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 200:1), resultando el compuesto 53 (7,0 g,
rendimiento del 80%.).
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Al compuesto 53 (7,0 g, 22,1 mmol), disuelto en MeOH (80 mL) y THF (40 mL), se añadió KOH (2 M, 80 mL, 160
10 mmol, 2,7 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante 5 horas y después se concentró en vacío. El residuo se diluyó con agua (50 mL), y se lavó con metil-t-butil-éter (50 ml). La capa acuosa se acidificó a pH 2 por adición de HCl 6 M y después se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó y se
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15 El compuesto 54 (8,8 g, 30,5 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (200 mL) bajo N2. Después de la adición de trietilamina (4,01 g, 39,6 mmol), la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se añadió difenilfosforilazida (DPPA) (11 g, 40,0 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de la separación de los componentes volátiles en vacío, el residuo obtenido se diluyó con tolueno (200 mL) y la mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se añadió HCl (6 M, 100 mL). La disolución
20  2SO4, y después se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía (éter de petróleo: acetato de etilo = 10: 1), dando como resultado el compuesto 55 (7,1 g, 89%).
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añadieron HATU (20,6 g, 54,2 mmol) y trietilamina (8,22 g, 81,4 mmol.). La disolución resultante se agitó a la temperatura ambiente durante 15 minutos, y luego se añadió el compuesto 55 (7,1 g, 27,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se añadió agua (150 mL). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y después de la filtración, se concentró en vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 20: 1), dando como resultado el compuesto 56 (8,9 g, 72%). Método A2; Rt: 1,30 min. m/z =: 477,9 (M+Na)+ Masa exacta: 455,1
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10 El compuesto 56 (8,9 g, 19,5 mmol) se disolvió en MeOH (50 mL), se añadió Pt/C (1,0 g) y la mezcla se agitó bajo H2 (1,4 bar) durante una noche. La filtración y la separación de los componentes volátiles resultaron en el compuesto 57
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El compuesto 57  
15 hora y después se concentró en vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (éter de petróleo: acetato de etilo = 7: 1), resultando en el compuesto 58 (1,5 g). [α]58920 = -93,12 (CH3OH, 2,50 mg/mL) Método G1; Rt: 1,19 min. m/z =: 408,1 (M+H)+ Masa exacta: 407,1
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20 A una mezcla agitada del compuesto 58 (730 mg, 1,79 mmol) en DMSO (10 mL) se añadió el compuesto 7 (1,05 g, 2,15 mmol) y una disolución de Na2CO3 (2 M, 2,68 mL) y después se añadió Pd(dppf)Cl2 (105 mg, 0,143 mmol) bajo N2 a temperatura ambiente. Después de la adición, la mezcla se agitó a 60-70º C durante 1 hora. Después de terminar, se añadió diclorometano (50 mL) y la mezcla se lavó con agua (3 x 100 mL) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró en vacío. El residuo se purificó sobre gel de sílice en cromatografía de capa fina
25 (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/100), resultando en el compuesto 59 (778 mg; 63%). Método A2; Rt: 1,01 min. m/z =: 691,5 (M+H)+ Masa exacta: 690,4
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A la disolución del compuesto 59 (500 mg, 0,72 mmol) se añadió metanol/HCl (10 mL) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se lavó mediante metil-t-butil-éter (20 mL) y se filtró, dando como resultado el compuesto 60 (355 mg, 99%). Método A2; Rt: 0,81 min. m/z =: 491,1 (M+H)+ Masa exacta: 490,3
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A una disolución del compuesto 60 (355 mg, 0,72 mmol) en CH3CN (30 mL), se añadieron HOBt (234 mg, 1,73 mmol), EDC (333 mg, 1,73 mmol), ácido (S 2. Después de la conversión en el compuesto
10 61, la mezcla se diluyó con CH2Cl2 (50 mL) y se lavó con NaOH acuoso (0,5 N, 50 mL) y salmuera. La capa orgánica se secó y después de la filtración, se concentró en vacío. El producto bruto obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (Phenomenex Gemini C18 150 * 30 mm * 5 um (eluyente: (NH3 al 0,05% en H2O)/CH3CN 44/64 v/v)), resultando en el compuesto 61 (231 mg, rendimiento del 40%). Método C; Rt: 3,53 min. m/z =: 805,4 (M+H)+ Masa exacta: 804,4
15 [α]58920 = -146,67 (CH3OH, 1,07 mg/mL) SFC: Columnas: Chiralcel OD-H 150 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A ,: Rt: 9,10 min SFC: Columnas: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A,: Rt: 7,71 min.
20 1H-RMN (600 MHz, DMF + gota de TFA) δ ppm 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1,00 (d, J = 6,9 Hz, 3 H), 1,77 (s, 3H), 1,85 (s, 3 H), 2,05-2,16 (m, 2 H), 2,17-2,38 (m, 6 H), 2,48-2,59 (m, 2 H), 3,62 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,91 (dd, J = 12,8, 8,6 Hz, 1 H), 3,96-4,01 (m, 1 H), 4,01-4,07 (m, 2 H), 4,32 (dd, J = 8,5, 6,7 Hz, 2 H), 4,85 (t, J = 7,8 Hz, 1 H), 5,42 (dd, J = 7,8, 6,5 Hz, 1 H), 7,07 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,17 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,70 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,84 (dd, J = 8,1, 1,8 Hz, 1 H), 7,89 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,96 (dd, J = 8,7, 1,8 Hz, 1 H), 8,08
25 (dd, J = 8,7, 1,8 Hz, 1 H), 8,10 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,13 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 8,34 (s, 1 H), 8,58 (s, 1H), 10,76 (s ancho, 1 H), 12.83 (s ancho, 1 H)
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A oxetan-3-ona (5 g, 69 mmol) en THF (50 mL) se añadieron secuencialmente 2-metilpropano-2-sulfinamida (8,34 g, 69 mmol) y Ti(OEt)4 (20 mL). La reacción se calentó a 50ºC durante 5 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente
30 y se inactivó con agua (200 mL). El precipitado se filtró y el filtrado se extrajo con CH2Cl2 (2 x 50 mL). La capa orgánica reunida se separó y se lavó con agua (50 mL) y salmuera (50 mL). La capa orgánica se secó y se concentró. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (CH2Cl2) para proporcionar el compuesto 62 (5,5 g, rendimiento del 46%).
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4-bromo-1-yodo-2-nitrobenceno (3 g, 9,18 mmol) se disolvió en THF anhidro (20 mL) bajo atmósfera de N2, y el matraz se enfrió a -78°C. La mezcla se agitó durante 5 minutos y se añadió lentamente n-BuLi (4,4 mL, 2.5mol/L). La mezcla de reacción se volvió oscura y se continuó agitando a -78ºC durante 15 minutos. Después, se añadió lentamente a la 5 mezcla el compuesto 62 (1,92 g, 11 mmol). La reacción se agitó durante 30 minutos a -78ºC y después se calentó a temperatura ambiente. La mezcla se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 mL). Las fases orgánicas se separaron y se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1), resultando en el compuesto 63 (1,3 g, rendimiento del 38%). Método A2; Rt: 1,04 min. m/z =: 378,7 (M+H)+ Masa
10 exacta: 378,0
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El compuesto  (1,3 g, 3,45 mmol) se disolvió en MeOH (10 mL) y se añadió lentamente HCl/dioxano (4 N, 10 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y la mezcla se concentró, resultando en el compuesto intermedio 64 (0,89 g).
15 Método A2; Rt: 0,60 min. m/z =: 272,7 (M+H)+. Al compuesto intermedio 64 (0,89 g) en un matraz de 50 mL, se añadieron HATU (1,49 g, 3,94 mmol), trietilamina (0,66 g, 6,56 mmol) y ácido (S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidina-2carboxílico (0,84 g, 3,94 mmol,). El residuo se disolvió en CH2Cl2 (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. La mezcla se inactivó con agua (20 mL) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 10 mL). Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y después se concentró. El residuo
20 obtenido se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente: éter de petróleo / acetato de etilo = 2/1) dando como resultado el compuesto intermedio 65 (1,27 g). El compuesto intermedio 65 (1 g, 2,1 mmol) se disolvió en MeOH/agua (20 mL 1: 1), y se añadieron polvo de Fe (0,35 g, 6,3 mmol) y NH4Cl (0,55 g, 10,5 mmol) y la mezcla se agitó a reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró a sequedad. El residuo obtenido se lavó con agua (10 mL) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 10 mL). La capa orgánica se
25 separó y se concentró en vacío, dando como resultado el compuesto intermedio 66 (0,77 g). Método A2; Rt: 1,07 min. m/z =: 464,0 (M+Na)+ Masa exacta: 441,1. El compuesto intermedio 66 (0,77 g, 1,75 mmol) se disolvió en AcOH (20 mL). La disolución resultante se agitó a 80ºC durante 30 minutos. La mezcla de reacción se concentró en vacío y el residuo resultante se purificó mediante cromatografía en columna (éter de petróleo: acetato de etilo = 1: 1), resultando el compuesto 67 (0,49 g, 66%). Método B; Rt: 4,06 min. m/z =: 422,0 (M+H)+ Masa exacta: 421,1
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A un matraz de 20 mL que contiene compuesto 67 (0,49 g, 1,16 mmol), se añadieron compuesto 7 (0,68 g, 1,4 mmol,) y Pd(dppf)Cl2 (45 mg, 0,058 mmol), THF (10 mL) y Na2CO3 acuoso (2 mL, 2 N). La mezcla se purgó tres veces con nitrógeno gaseoso. La mezcla de reacción se agitó a 80ºC durante 15 minutos. La mezcla se inactivó con agua (10 mL) y se extrajo con CH2Cl2  2SO4 y se concentró. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna sobre sílice (eluyente: CH2Cl2/metanol = 10/1), resultando el compuesto 68 (0,37 g, 45%). Método A2; Rt: 0,92 min. m/z =: 705,4 (M+H)+ Masa exacta: 704,4
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10 El compuesto 68 (0,2 g, 0,28 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (5 mL) y se añadió lentamente TFA (5 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y la mezcla se concentró en vacío, dando como resultado el compuesto 69. Método A2; Rt: 0,77 min. m/z =: 505,1 (M+H)+ Masa exacta: 504,3
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15 A una disolución del compuesto 69 (200 mg) en CH2Cl2 (10 mL), se añadieron ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3metilbutanoico (140 mg, 0,80 mmol), EDC (170 mg, 0,94 mmol), HOBt (10 mg, 0,076 mmol) y trietilamina (154 mg, 1,52 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se lavó con agua (10 mL) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 10 mL). La capa orgánica reunida se secó y se concentró y el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (YMC-pack ODS-AQ 150 x 30 mm x 5 um Fase móvil: A: agua + TFA
20 al 0,1% B: acetonitrilo. Eluyen de 26% de B a 52% de B en A para un total de 15 min. Caudal: 25 mL/min). A las fracciones apropiadas, se añadió Na2CO3 hasta que el valor del pH era de 9. La disolución se concentró para separar el acetonitrilo y la mezcla se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 mL). La capa orgánica se separó y se concentró a sequedad para proporcionar el compuesto 70 (92 mg). Método C; Rt: 3,37 min. m/z =: 819,4 (M+H)+ Masa exacta: 818,4
25 SFC: Columnas: Chiralcel OD-3 150 mm * 4,6 mm; 3 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 5,66 min SFC: Columnas: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 3,44 min.1H-RMN (600 MHz, DMF-d7 + gota de TFA) δ ppm 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,95 (d, J = 6,9
30 Hz, 3 H), 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 2,07-2,16 (m, 2 H), 2,18 – 2,25 (m, 1 H), 2,26-2,37 (m, 4 H), 2,37-2,43 (m, 1 H), 2,49-2,58 (m, 2 H), 3,62 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 3,91 (dd, J = 14,2, 8,0 Hz, 1 H ), 3,96-4,12 (m, 3 H), 4,32 (dd, J = 8,4, 6,9 Hz, 1 H), 4,35 (dd, J = 8,6, 6,7 Hz, 1 H), 4,91 (t, J = 8,1 Hz , 1 H), 4,98 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 5,00 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 5,24 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,42 (dd, J = 7,8, 6,5 Hz, 1 H), 7,08 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,19 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,94 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,99 (dd, J = 8,5, 1,8 Hz, 1 H), 8,00 (dd, J = 8,1, 1,8 Hz, 1 H), 8,09 (dd, J = 8,7, 1,8 Hz, 1 H), 8,10 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 8,12 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,15 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 8,38 (s, 1 H),
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Una mezcla del compuesto 71 (6,5 g, 19,8 mmol) y Fe (4,98 g, 89,2 mmol) en CH3COOH (30 mL) y CH3CH2OH (30 mL) se calentó a reflujo durante 1,5 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y después de la adición de NaHCO3 (aq.) saturado, se extrajo con acetato de etilo (3 x 150 mL). La capa orgánica reunida se separó, se secó
10 sobre Na2SO4 y el disolvente se separó en vacío, dando como resultado el compuesto 72 (5,9 g). Método A2; Rt: 1,17 min. m/z =: 299,6 (M+H)+ Masa exacta: 298,9
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La mezcla del compuesto 72 (2,0 g, 6,7 mmol), éster terc.-butílico del ácido 2-etinil-piperidin-1-carboxílico (2,8 g, 13,4 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (0,245 g, 0,335 mmol) en dietilamina (30 mL) se agitó bajo monóxido de carbono a una presión de 15 2 MPa a 120ºC. Después de 6 horas, la mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en CH2Cl2 (50 mL) y se lavó con salmuera (2 x 20 mL). Después, la capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 30/1 a 1/30). La sección deseada se recogió y se concentró. El residuo se trituró mediante CH3OH y el sólido (impureza) se separó mediante filtración. El filtrado se concentró y el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta
20 resolución (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40, ácido tnfluoroacetic al 0,05%). A continuación, el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 7-8 con NaHCO3 y acetonitrilo se separó a presión reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL) y las capas orgánicas se reunieron y secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el filtrado se evaporó y el residuo obtenido se secó en vacío, resultando el compuesto 73 (0,21 g, rendimiento del 8%). Método A2; Rt: 1,10 min. m/z =: 408,9 (M+H)+ Masa exacta: 408,1
Pd(PPh3)4 (59 mg, 0,051 mmol) se añadió a la mezcla de compuesto 73 (0,21 g, 0,51 mmol), compuesto 7 (0,25 g, 0,51 mmol), Na2CO3/H2O (0,11 g, 1 mL), tolueno (2 mL) y CH3CH2OH (1 mL) en una sola porción bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante 10 horas a 90ºC. Después, la solución se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró en vacío. El residuo obtenido se disolvió en CH2Cl2 (20 mL) y se lavó con agua (3 x 5 mL). Las fracciones 30 orgánicas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 60/40, ácido trifluoroacético al 0,05%). El pH de la disolución obtenida se ajustó a aproximadamente 7-8 con NaHCO3 y acetonitrilo se separó a presión reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL) y las capas orgánicas se reunieron y se secaron con Na2SO4. Después
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de la filtración, el filtrado se concentró en vacío, dando como resultado el compuesto 74 (0,11 g, 31%). Método A2; Rt: 1,02 min. m/z =: 690,4 (M+H)+ Masa exacta: 689,4
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HCl 4N/dioxano (0,16 mL, 0,64 mmol) se añadió a la disolución del compuesto 74 (0,11 g, 0,16 mmol) en CH2Cl2 (2
5 mL) a 0ºC. La mezcla se agitó después a temperatura ambiente durante 1 hora. El precipitado formado se filtró y la torta se lavó con metil-terc-butil-éter (2 x 10 mL) para obtener el compuesto bruto 75 (78 mg). Método A2; Rt: 0,76 min. m/z =: 490,2 (M+H)+ Masa exacta: 489,3
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A una disolución de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (84 mg, 0,48 mmol) en acetonitrilo (3 mL) se
10 añadieron EDC.HCl (122,7 mg, 0,64 mmol) y HOBt (86,5 mg, 0,64 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 hora. Después se añadió el compuesto 75  2Cl2 (20 mL) y NaOH (aq.) 0,5 N (5 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con NaCl acuoso al 13% (3 x 10 mL). El disolvente se separó y el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alto
15 rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 6 con ácido cítrico (0,5 N, aq.). A continuación, el acetonitrilo se separó a presión reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL) y las capas orgánicas se reunieron y secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se separó y el residuo se secó en vacío, dando como resultado el compuesto 76 (33 mg).
20 Método B; Rt: 5,11 min y 5,03 min. m/z =: 804,2 (M+H)+ Masa exacta: 803,4 SFC: Columnas: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina
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El compuesto 77 (50 g, 227 mmol) se disolvió en etanol (600 mL). Subsiguientemente, se añadió una suspensión de
25 Na2SO3 (71,6 g, 568 mmol) en etanol (1000 mL) y agua (1250 mL). La suspensión se agitó a 70ºC durante 15 horas. Luego, a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se acidificó con HCl (2 N) hasta pH = 2 y se concentró en vacío. El residuo restante se disolvió a reflujo en salmuera (1000 mL). Subsiguientemente, se añadió agua (100 mL) y la
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disolución se enfrió en un baño de hielo. El precipitado se recogió mediante filtración, resultando el compuesto 78 (57,3
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A una disolución de cloruro de tionilo (50 mL) se añadió el compuesto 78 (30 g, 106 mmol) y DMF (1 gota) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 4 horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción se sometió a destilación azeotrópica con tolueno tres veces. El residuo se disolvió en una cantidad mínima de tolueno y la mezcla resultante se añadió después a una mezcla de disolución acuosa concentrada de hidróxido de amonio (1 mL) y THF (10 mL) a 10°C. Después de agitar durante 2 horas, la reacción se inactivó mediante la adición de una disolución acuosa de ácido clorhídrico 6 M hasta pH = 4. La capa orgánica se separó y después se secó y se concentró en vacío. Se añadió éter de
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Una suspensión del compuesto 79 (21,2 g, 75 mmol) en HI al 57% (250 mL) se calentó a 90ºC durante 4 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de color púrpura oscuro se diluyó con acetato de etilo (500 mL) y seguidamente se lavó sucesivamente mediante Na2S2O3 aq. saturado, NaHCO3 aq. saturado y salmuera. La capa
15 orgánica incolora se secó sobre MgSO4  3CN/H2O de 22/78 a 52/48 con NH3H2O al 0,01% como tampón). Resulta en el compuesto 80 (18,6 g). Método B; Rt: 3,36 min. m/z =: 250,9 (M+H)imagen146+ Masa exacta: 249,9
20 Trietilamina (40,5 mL, 296 mmol) se añadió a una disolución del compuesto 80 (18,6 g, 74 mmol) en acetona (200 mL). El compuesto 29 (12,8 g, 48 mmol) se añadió a la mezcla de reacción bajo enfriamiento. Después de agitar durante 5 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se acidificó con HCl 2 N a pH 4. El precipitado resultante se recogió por filtración y después se transfirió a otro matraz. Se añadió una disolución de K2CO3 (15 g) en agua (100 mL) y la mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 2 horas hasta que la reacción se volvió homogénea. La mezcla de
25 reacción se acidificó con HCl 2 N hasta pH = 4. El precipitado se separó por filtración y se lavó con agua. El producto bruto se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (eluyente: CH3CN/H2O de 35/65 a 65/35 con CF3COOH al 0,75% como tampón), resultando el compuesto 81 (8,3 g, 45%) Método A2; Rt: 1,05 min. m/z =: 487,8 (M+Na)+ Masa exacta: 465,0 Pd(dppf)2Cl2 (140 mg) se añadió a una mezcla del compuesto 81 (1 g, 2,1 mmol), y compuesto 7a (1,4 g, 2,5 mmol) en una disolución de Na2CO3 aq. (2 M, 4 mL) y DMSO (8 mL) bajo nitrógeno. La mezcla se agitó a 80ºC durante 30 min. La mezcla se concentró y se añadió agua (30 mL). La mezcla resultante se extrajo con CH2Cl2 (3 x 80 mL). Las capas orgánicas reunidas se separaron, se secaron sobre Na2SO4 y después de la filtración, el disolvente se separó en vacío. El sólido (1,75 g) resultante se utilizó directamente en la siguiente etapa. Método A2; Rt: 0,99 min. m/z =: 804,4 (M+H)+ Masa exacta: 803,3
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El compuesto 82 (1,5 g, 1,86 mmol) se disolvió en una mezcla de AcOH (10 mL) y HBr aq. (5 ml). La mezcla se agitó a
10 60ºC durante 4 horas. La mezcla se concentró y el residuo obtenido se lavó mediante acetonitrilo. El sólido resultante se separó mediante filtración para proporcionar el compuesto 83 en forma de una sal de HBr (0,9 g). Método A2; Rt: 0,94 min. m/z =: 670,3 (M+H)+ Masa exacta: 669,3
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A una disolución de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (125 mg, 0,7 mmol) en CH CN (10 mL) se
15 añadieron EDC.HCl (137 mg, 0,7 mmol) y HOBt (97 mg, 0,7 mmol). La mezcla se agitó a 0ºC durante 1 hora y se añadió el compuesto 83 (0,4 g). La suspensión se enfrió a 0ºC, se añadió diisopropiletilamina (0,3 g, 2,3 mmol) y la mezcla se agitó adicionalmente a 20ºC durante 15 horas. Los componentes volátiles se separaron. La mezcla se diluyó con CH2Cl2 (30 mL) y NaOH (aq.) 0,5 N (15 mL), la capa orgánica se separó y después se lavó con salmuera (3 x 15 mL). La capa orgánica reunida se secó sobre Na2SO4 y después de la filtración, se concentró. El producto bruto
20 obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (eluyente: CH3CN/H2O de 35/65 al 65/35 con CF3COOH al 0,75% como tampón). La fracción deseada se recogió y se basificó mediante NaHCO3 saturado (aq.) hasta pH ~ 8. La mezcla se concentró y después se extrajo con CH2Cl2 (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y el disolvente se seoparó en vacío, resultando el compuesto 84 (86 mg).
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Método B; Rt: 4,83 min. m/z =: 827,6 (M+H)+ Masa exacta: 826,4 SFC: Columnas: Chiralcel AS-H 250 mm* 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 2,73 y 3,55 min SFC: Columnas: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A ,: Rt: 2,58 y 3,05 min.
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A una disolución del compuesto 83 (1,2 g, 1,79 mmol) en DMF (15 mL) se añadieron ácido (R)-2-(tercbutoxicarbonilamino)-2-fenilacético (0,54 g, 2,15 mmol), anhídrido cíclico de ácido 1-propano-fosfónico (3,8 mL, 6,62 mmol) y diisopropiletilamina (0,92 g, 7,16 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 15 horas. La mezcla se concentró y 10 se diluyó con CH2Cl2 (50 mL) y NaOH 0,5 N (aq., 15 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera (3 x 20 mL). La capa orgánica reunida se secó sobre Na2SO4 y después de la filtración, se concentró en vacío. El producto bruto obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (eluyente: CH3CN/H2O de 32/68 a 62/38 con CF3COOH al 0,75% como tampón). La fracción deseada se recogió y se basificó mediante NaHCO3 saturado (aq.) hasta pH ~ 8. La mezcla se concentró y la mezcla resultante se extrajo con CH2Cl2 (3 x 100 mL). La capa orgánica se
15 secó sobre Na2SO4 y el disolvente se separó en vacío, resultando el compuesto  (750 mg).
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El compuesto 85 (600 mg, 0,66 mmol) se disolvió en HCl dioxano (10 mL). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1,5 horas y se concentró, resultando el compuesto 86 (625 mg). Método G1; Rt: 0,89 min. m/z = 803,1 (M+H)+ Masa exacta: 802,3
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Se añadió diisopropiletilamina (369,7 mg, 2,87 mmol) gota a gota a la disolución del compuesto 86 (600 mg, 0,72 mmol) en CH2Cl2 (15 mL) a 0ºC. Se añadió cloroformiato de metilo (81,2 mg, 0,86 mmol). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 hora y luego se lavó mediante KOH acuoso (15 mL), NaHCO3 (15 mL) y salmuera (15 mL). La capa orgánica 5 se secó sobre Na2SO4 y después de la filtración, el filtrado se concentró. El producto bruto obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (eluyente: CH3CN/H2O de 31/69 a 61/39 con CF3COOH al 0,75% como tampón). La fracción deseada se recogió y se basificó mediante saturado (3 x 100 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y después de la filtración, el disolvente se separó en vacío. El producto se purificó adicionalmente mediante SFC (eluyente: CO2 supercrítico/CH3CH2OH de 65/35 a 80 mL/min con DEA al 0,05% como tampón, Temp..
10 de la columna: 38ºC, Presión de la Boquilla: 100 bar, Temp.. de la Boquilla: 60ºC, Temp. del evaporador 20ºC, Temp. del cortador: 25ºC, Longitud de onda: 220 nm). La capa orgánica se concentró a sequedad, dando como resultado el compuesto 87 (113 mg) Método B; Rt: 4,91 min. m/z =: 861,3 (M+H)+ Masa exacta: 860,3
 2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 5,39 min
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A la disolución de fluoruro de tetrabutil-amonio (TBAF, 51,2 g, 197,4 mmol, 1,5 eq) en DMF (100 mL), se añadió polvo de tamices moleculares de 4 A (30 g). La mezcla resultante se agitó durante 30 minutos. La mezcla se filtró y el filtrado se transfirió a un matraz de reacción de 1000 mL. Se añadió una disolución del compuesto 88 (30 g, 131,6 mmol, 1,0 eq) en DMF (50 mL) a la disolución anterior a través de un embudo de adición durante 10 minutos, manteniendo la
20 temperatura interna por debajo de –15ºC. Después de agitar durante 20 minutos, se añadió HCl 2 N (60 mL) a lo largo de 5 minutos. Después de envejecer durante 1 hora, la mezcla se enfrió a 2,5ºC y se filtró. La torta de filtración se lavó con DMF/agua (10% (v/v), 2 x 36 mL). El filtrado se reunió y se concentró en vacío. El residuo resultante se recristalizó en 2-propanol (50 mL) para proporcionar el compuesto deseado 89 (13 g).
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25 La disolución del compuesto 89 (7,5 g) en tolueno (100 mL) se enfrió a –10ºC y se añadió MeMgCI (3N en etil-éter, 25 mL, 74,6 mmol) a lo largo de 2 minutos bajo N2, durante lo cual la temperatura se elevó a 0ºC. La mezcla se dejó en agitación a –10ºC durante 1 hora. Después se aádió ácido clorhídrico 3 N (91 mL, 274 mmol) a lo largo de 3 minutos a través de un embudo de adición. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se inactivó con NaHCO3 0,5 M (30 mL) y la mezcla obtenida se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La capa orgánica se lavó con agua, Na2SO4 acuoso al 10% (2 x 5 mL) y agua (2 x 5 mL). La capa reunida se concentró y seguidamente se co-concentró con tolueno (50 mL) y MeOH (50 mL). El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente de eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 20: 1 a 8: 1). Se recogió la sección deseada, se separaron los componentes volátiles en vacío para proporcionar el compuesto 90 (6,4 g). Método A2; Rt: 0,88 min. m/z =: 219,7 (M+H)+ Masa exacta: 219,0
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Se añadió 2, 4-dimetoxi-bencilamina (4,3 g, 25,6 mmol) al compuesto 90 (5,6 g, 25,6 mmol, 1,0 eq) en DMF (12 mL).
10 La mezcla de reacción se agitó bajo irradiación de microondas durante 0,5 horas a 120ºC bajo nitrógeno. El disolvente se separó en vacío. El residuo se solidificó mediante metanol (10 mL), resultando el compuesto 91 (6,8 g, 73%) Método A2; Rt: 1,33 min. m/z =: 366,8 (M+H)+ Masa exacta: 366,0
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Ácido trifluoro-acético (6,4 g, 55,9 mmol) se añadió a una disolución del compuesto 91 (6,8 g, 18,6 mmol) en CH2Cl2
15 (68 mL). La mezcla se agitó durante 0,5 horas después de lo cual se separó el disolvente. Al residuo obtenido, se añadió terc-butil-metil-éter (50 mL) y la mezcla se filtró. El filtrado se recogió y se lavó con disolución acuosa saturada de Na2CO3. La capa orgánica se secó sobre MgSO4  92 (3,6 g) Método A2; Rt: 1,00 min. m/z =: 216,6 (M+H)+ Masa exacta: 216,0
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20 A la disolución del compuesto 92 (5,74 g, 16,7 mmol) y del compuesto 29 (3,6 g, 16,7 mmol) en CH2Cl2 (25 mL) se añadió gota a gota piridina (25 mL). La mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. A continuación, la disolución se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 2,5/1), resultando el compuesto 93 (3,8 g, 51%). Método A2; Rt: 1,22 min. m/z =: 445,8 (M+H)+ Masa exacta: 445,1 Na2CO3 (0,95 g, 9 mmol) en H2O (15 mL) se añadió a una mezcla de compuesto 93 (2,0 g, 4,8 mmol), compuesto 7 (2,2 g, 4,8 mmol), etanol (15 mL) y tolueno (30 mL). Pd(PPh3)4 (0,52 mg, 0,45 mmol) se añadió en una porción bajo nitrógeno. La mezcla se agitó durante 10 horas a 90ºC. Después, la disolución se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró en vacío. El residuo se disolvió en CH2Cl2 (20 mL) y se lavó con agua (3 x 10 mL). La disolución se secó sobre Na2SO4 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente de eluyente: acetato de etilo/diclorometano = 1/5 a 3/1), resultando el compuesto 94 (2,0 g, 61%). Método A2; Rt: 1,08 min. m/z =: 728,3 (M+H)+ Masa exacta: 729,2
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10 Un tubo secado en estufa con una varilla agitadora se cargó con el compuesto 94 (1,44 g, 1,98 mmol, 1,0 eq) y NaOH triturado (0,276 g, 6,9 mmol, co-evaporado con tolueno seco). Se añadió dioxano seco (14 mL) a través de una jeringa. La mezcla se agitó en un baño de aceite precalentado a 110ºC durante 1,5 horas. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente, después de lo cual se añadió etanol. La disolución se concentró en vacío y el residuo obtenido se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40 a
15 CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 8 con NaHCO3  2Cl2 (3 x 50 mL) y las capas orgánicas se reunieron y secaron sobre Na2SO4. La disolución se concentró y el residuo obtenido se secó en vacío, dando como resultado el compuesto 95 (0,22 g, 16%). Método A2; Rt: 0,92 min. m/z =: 711,2 (M+H)+ Masa exacta: 710,3
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El compuesto 95 (0,2 g, 0,28 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (5 mL) y se añadió gota a gota HCl concentrado (5 mL). La
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mezcla se agitó a 60ºC durante 3 horas. El disolvente se evaporó en vacío. El residuo se lavó con una mezcla de tercbutil-metil-éter y metanol (1: 1). El sólido se filtró y se secó en alto vacío. El compuesto 96 bruto (0,138 g) se utilizó en la siguiente etapa como tal.
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5 EDC.HCl (0,116 g, 0,604 mmol) y HOBT (0,081 g, 0,604 mmol) se añadieron a la disolución de ácido (S)-2(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,106 g, 0,604 mmol) en acetonitrilo (5 mL). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 hora. Después se añadió el compuesto 96 (0,138 g). La suspensión se enfrió a 0ºC y se añadió DIEA (0,13 g, 1,0 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. La mezcla se concentró y se diluyó con CH2Cl2 (20 mL) y HCl 1 N (5 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con disolución saturada de NaHCO3 y salmuera. El
10 producto bruto obtenido después de la concentración de la capa orgánica se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). La fracción deseada se recogió y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 8 con NaHCO3. Después se separó acetonitrilo a presión reducida y la capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL). Las capas orgánicas se reunieron y se secaron sobre Na2 4. La disolución obtenida se concentró y el residuo, así obtenido, se secó en vacío, resultando el compuesto 97
15 (3,0 mg). Método B; Rt: 4,38 min. m/z =: 791,1 (M+H)+ Masa exacta: 790,4; HPLC quiral: Columnas: OJ-R 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal 0,5 mL/min; Fase móvil: A: H2O (TFA al 0,069%), B: acetonitrilo A/B = 80/20 Rt: 15,5 min.; HPLC quiral: Columnas: AS-R 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 0,5 mL/min; Fase móvil: A: H2O (TFA 0,069%), B: acetonitrilo A/B = 80/20 Rt: 14,9 min
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20 El compuesto 4 (1 g, 2,3 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (20 mL). Se añadió NIS (0,44 g, 2,6 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se lavó mediante Na2SO3 al 10%y luego mediante salmuera. El disolvente se separó en vacío. El residuo resultante se purificó mediante columna de rsolución instantánea. (Eluyente: acetato de etilo/éter de petróleo, 1: 1). Las fracciones recogidas se reunieron y se concentraron en vacío. El sólido resultante se suspendió mediante acetato de etilo (3 mL) y se agitó durante 30 minutos. El compuesto 98 (polvo
25 de color amarillo, 0,5 g, 39%) se recogió mediante filtración y se secó en una estufa de alto vacío.
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Una mezcla del compuesto 98 (0,28 g, 0,506 mmol), Zn(Me)2 (1M en heptano, 1 mL, 1,012 mmol), Pd2(dba)3 (28 mg, 0,0304 mmol) y BINAP (19 mg, 0,0304 mmol) en THF seco (4,5 mL) se agitó bajo N2 durante una noche a 20ºC. Se añadieron más Zn(Me)2 (1 M en heptano, 1 mL), se añadieron Pd2(dba)3 (28 mg) y BINAP (20 mg). La mezcla se agitó
5 durante otras 3 horas a 20º C, seguido de la adición de más Zn(Me)2 (1 mL), Pd2(dba)3 (28 mg) y BINAP (20 mg). La mezcla se agitó bajo N2 durante una noche a 20ºC. La mezcla se inactivó con NH4Cl acuoso saturado y la mezcla se extrajo con diclorometano (2 x 20 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se separó en vacío. El residuo se purificó mediante columna de resolución instantánea (gradiente de eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo: de 100/0 a 1/3), resultando el compuesto 99 (75 mg, 34%).
10 Método A2; Rt: 1,07 min. m/z =: 441,0 (M+H)+ Masa exacta: 440,1
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El compuesto  (75 mg, 0,170 mmol) y el compuesto 7 (0,1 g, 0,204 mmol) se disolvieron en THF (1,6 mL) y se añadió una disolución de Na2CO3 (72 mg, 0,68 mmol) en H2O (0,4 mL), seguido por Pd(PPh3)4 (40 mg, 0,034 mmol) bajo N2. La mezcla se agitó bajo irradiación de microondas durante 15 min a 70ºC bajo N2. Los componentes volátiles
15 se separaron en vacío y se añadió agua (5 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 10 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se separó en vacío. El residuo obtenido se purificó mediante columna de resolución instantánea (eluyente en gradiente: primero: acetato de etilo/metanol: de 100/0 de 10/1, luego diclorometano/metanol = 12/1), resultando el compuesto 100 (70 mg). Método A2; Rt: 1,03 min. m/z =: 724,2 (M+H)+ Masa exacta: 723,3
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Una mezcla del compuesto 100 (70 mg, 0,097 mmol) en HCl conc. (1 mL) y CHCl3 (1 mL) se agitó durante 1 hora a 60ºC. El disolvente se separó en vacío. El residuo se co-evaporó con tolueno (2 x 10 mL), resultando el compuesto 101 (70 mg). Método A2; Rt: 0,80 min. m/z =: 490,2 (M+H)+ Masa exacta: 489,2
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El compuesto 101 (70 mg), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (41 mg, 0,23 mmol), EDC.HCI (46 mg, 0,24 mmol) y HOBt (7 mg, 0,048 mmol) en CH2Cl2 (2 mL) se enfrió a 0ºC. Se añadió DIEA (0,17 mL, 0,97 mmol). La 5 mezcla se agitó durante una noche a 15ºC. El disolvente se separó en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución (C18, eluyente: CH3OH/H2O de 15/85 a 45/55 con TFA al 0,1% como tampón). Las fracciones puras se recogieron y la mezcla se basificó con NaHCO3 acuoso saturado a pH = 8. Los componentes volátiles se separaron en vacío. El precipitado se separó por filtración y se secó en vacío, dando como resultado el compuesto 102a (14,6 mg) y el compuesto 102b (14,2 mg) por separado. 102a: Método B; Rt: 4,63 min. m/z =: 804,3
10 (M+H)+ Masa exacta: 803,4 SFC: Columnas: Chiralcel AS-H 2,50 mm* 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A ,: Rt: 2,84 min SFC: Columnas: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,5 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A ,: Rt: 2,43 min.102b: Método B; Rt: 4,79 min. m/z =: 804,3 (M+H)+ Masa exacta: 803,4 SFC: Columnas: Chiralcel AS-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase
15 móvil: A: CO2  2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A ,: Rt: 9,63min.
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NCS (0,31 g, 2,34 mmol) se añadió a una disolución del compuesto 4 (0,5 g, 1,17 mmol) en CH2Cl2. La mezcla se
20 sometió a reflujo durante 4 horas y después de enfriar a temperatura ambiente, se lavó con Na2SO3 al 10%, K2CO3 al 10% y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4 y la disolución obtenida se concentró a presión reducida. El residuo obtenido se lavó con CH2Cl2 y se filtró, dando como resultado el compuesto 103 (0,18 g). Método A2; Rt: 1,09 min. m/z =: 462,8 (M+H)+ Masa exacta: 462,0
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25 Pd(PPh3)4 (0,1 g, 0,087 mmol, 0,25 eq) se añadió a la mezcla de compuesto 103 (0,16 g, 0,346 mmol) y compuesto 7
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(0,17 g, 0,346 mmol) en THF (6 mL) y H2O bajo nitrógeno. La mezcla se agitó bajo irradiación de microondas durante 15 minutos a 80ºC. Después, la disolución se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró en vacío. El residuo obtenido se disolvió en CH2Cl2 (20 mL) y se lavó con agua (3 x 10 mL). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice
5 (gradiente de eluyente: acetato de etilo/diclorometano = 1/5 a 3/1). Se recogió la fracción deseada, el disolvente se evaporó y el residuo obtenido se secó en vacío, dando como resultado el compuesto 104 (0,22 g, 50%). Método A2; Rt: 1,02 min. m/z =: 744,2 (M+H)+ Masa exacta: 743,3
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El compuesto 104 (0,2 g, 0,156 mmol), se disolvió en CH2Cl2 (3 mL) y se añadió gota a gota HCl concentrado (3 mL).
10 La mezcla se agitó a 60ºC durante 3 horas. El disolvente se evaporó en vacío y el residuo obtenido se lavó con una mezcla de terc-butil-metil-éter y metanol (1/1). El sólido se filtró y se secó bajo alto vacío, resultando el compuesto 105 (90 mg). El producto bruto se utilizó como tal en la siguiente etapa.
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EDC.HCl (71,7 mg, 0,374 mmol) y HOBT (50,5 mg, 0,374 mmol) se añadieron a una disolución de ácido (S 
15 (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (65,5 mg, 0.374 mmol) en acetonitrilo (5 mL). La mezcla se agitó a 20ºC durante 1 hora. Después se añadió el compuesto 105 (90,8 mg). La suspensión se enfrió a 0ºC y se añadió DIEA (80,6 mg, 0,624 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se concentró y se diluyó con CH2Cl2 (20 mL) y disolución acuosa de HCl 1 N (5 mL). La capa orgánica se separó y se lavó con NaHCO3 acuoso saturado y salmuera. La capa orgánica se concentró y el producto bruto obtenido se purificó mediante cromatografía
20 líquida de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). Las fracciones deseadas se recogieron y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 8 con NaHCO3 saturado. A continuación, el acetonitrilo se separó a presión reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL) y las capas orgánicas se reunieron y secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se evaporó y el residuo obtenido se secó en vacío, dando como resultado los compuestos 106a (13,1 mg) y 106b (6,7 mg)
25 106a: Método C; Rt: 3,58 min. m/z =: 824,4 (M+H)+ Masa exacta: 823,4 SFC: Columnas: Chiralcel OD-H 150 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 5,38 min SFC: Columnas: Chiralcel AS-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A ,: Rt: 9,27 min.
30 106b: Método C; Rt: 3,70 min. m/z =: 824,4 (M+H)+ Masa exacta: 823,4 SFC: Columnas: Chiralcel OD-H 150 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A ,: Rt: 5,38 min SFC: Columnas: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A ,: Rt: 8,66 min.
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El compuesto 4 (1 g, 2,3 mmol) y Selectfluor (0,81 g, 2,3 mmol) en DMA (10 mL) se agitaron a 150ºC durante 15 min. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, y se vertió en NaHCO3 saturado pre-enfriado (100 mL). El precipitado se filtró, se lavó con H2O y se purificó mediante cromatografía en gel de sílice. (Eluyente: CH2Cl2/EtOAc, 1/1). Las fracciones recogidas se reunieron y se concentraron en vacío. El residuo obtenido se solidificó mediante THF (3 mL), resultando el compuesto 107 (0,13 g). Método A2; Rt: 1,55 min. m/z =: 447,0 (M+H)+ Masa exacta: 446,1
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Pd(PPh3)4 (0,098 g, 0,085 mmol) se añadió a una mezcla de compuesto 107 (0,15 g, 0,34 mmol), compuesto 7 (0,16
10 g, 0,34 mmol) y Na2CO3 (0,16 g, 1,53 mmol) en THF (9 mL) y H2O (2,15 mL) en una porción bajo nitrógeno. La mezcla se agitó bajo irradiación de microondas durante 15 minutos a 80ºC. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se separó en vacío. La purificación mediante cromatografía en capa fina preparativa (eluyente: CH2Cl /metanol, 1/10), dio como resultado el compuesto 108 (0,10 g).
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15 El compuesto 108 (0,1 g, 0,12 mmol) se disolvió en CHCl3 (5 mL) y HCl concentrado (2 mL). La mezcla se agitó a 60ºC en un tubo sellado durante 1 hora. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y la capa acuosa se concentró en vacío. El sólido resultante se co-evaporó con tolueno (2 x 10 mL), resultando el compuesto 109 (0,1 g).
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EDC.HCl (70 mg, 0,36 mmol) y HOBt (50 mg, 0,36 mmol) se añadieron a la disolución de ácido (S)-2(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (63 mg, 0.36 mmol) en acetonitrilo (5 mL). La mezcla se agitó a 10ºC durante 1 hora. Después se añadieron el compuesto 109 (100 mg) y DIEA (0,18 g, 1,4 mmol) a 0°C. La mezcla se agitó a 5 temperatura ambiente durante 2 horas y se concentró en vacío. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa (eluyente: CH3CN/H2O = 30/70 a 60/40, CF3COOH al 0,1%). Las fracciones deseadas se recogieron y el pH de la disolución se ajustó a aproximadamente 8 con NaHCO3. El acetonitrilo se separó a presión reducida. La capa acuosa se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL) y las capas orgánicas se reunieron y secaron sobre Na2SO4. Las disoluciones se evaporaron y los residuos se secaron en vacío. Los productos resultantes se
10 solidificaron mediante metil-terc-butil-éter, dando como resultado los compuestos 110a (21 mg) y 110b (17 mg). 110a: Método C; Rt: 3,49 min. m/z =: 808,5 (M+H)+ Masa exacta: 807,4 SFC: Columna: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: iPrOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A ,: Rt: 9,14 min SFC: Columna: Chiralcel OD-H 150 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH
15 (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A ,: Rt: 6,08 min.  : Método C; Rt: 3,60 min. m/z =: 808,4 (M+H)+ Masa exacta: 807,4 SFC: Columna: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: iPrOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A,: Rt: 9,43 min SFC: Columna: Chiralcel OD-H 150 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH
20 (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 4,62 min.
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El compuesto 111 (20 g, 119 mmol) y K2CO3 (23 g, 165 mmol) se disolvieron en THF (60 mL) y H2O (60 mL) a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos, la mezcla se enfrió a 0ºC y se añadió lentamente Cbz-CI (22 g, 131 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se
25 acidificó a pH = 3 y el producto se extrajo con diclorometano (2 x 40 mL). La capa orgánica reunida se concentró, y el residuo obtenido se secó en vacío, dando como resultado el compuesto 112 (34 g, 96%)
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Acetonitrilo (23,7 g, 580 mmol) se añadió a 3-bromoanilina (113) (10 g, 58 mmol) en tolueno (70 mL). La mezcla se
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enfrió a 0ºC y se añadió gota a gota BCl3 (1 M en CH2Cl2, 64 mL, 64 mmol), manteniendo la temperatura por debajo de 10ºC. A continuación, se añadió AlCl3 (11,6 g, 87 mmol) en pequeñas porciones a 0ºC. La mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 5 horas.La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se inactivó con HCl acuoso (2 N, 100 mL). La mezcla se calentó a 50ºC durante 1 hora, se enfrió a temperatura ambiente y se separó. La capa orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se recogió, se secó y se concentró, resultando el compuesto 114 (4 g). Método A2; Rt: 0,98 min. m/z =: 215,7 (M+H)+ Masa exacta: 215,0
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El compuesto 112 (15 g, 49,5 mmol) se disolvió en SOCl2 (30 mL) a la temperatura ambiente. La mezcla se sometió a
10 reflujo durante 50 minutos y después se concentró en vacío. Al residuo obtenido se añadieron secuencialmente a 0ºC compuesto 114 (12,7 g, 59,4 mmol) y piridina (60 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El producto se diluyó con agua y se extrajo con diclorometano (2 x 50 mL). La capa orgánica se separó y se concentró a sequedad. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo; 2/1) resultando el compuesto 115 (14,5 g).
15 Método A2; Rt: 1,36 min. m/z =: 521,0 (M+Na)+ Masa exacta: 498,1
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El compuesto 115 (2,0 g, 4 mmol) y NaOH (0,48 g, 12 mmol) se añadieron a dioxano seco a la temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 100ºC bajo irradiación de microondas durante 20 minutos. (Se realizaron y se elaboraron juntas 8 reacciones paralelas). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró en vacío. El producto bruto se purificó mediante
20 cromatografía en columna. (Eluyente: éter de petróleo y acetato de etilo, 2: 1), dando como resultado el compuesto 116 (1,5 g). Método A2; Rt: 1,21 min. m/z =: 483,1 (M+H)+ Masa exacta: 482,1
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El compuesto 116 (1,5 g, 3,1 mmol) se disolvió en HBr al 40%/ácido acético (15 mL) a temperatura ambiente. La 25 mezcla se calentó a 80ºC durante 40 minutos. La mezcla se concentró en vacío, resultando el compuesto 117 (0,8 g). Método A2; Rt: 0,83 min (isómero menor), 0,89 min (isómero principal). m/z =: 346,9 (M+H)+ Masa exacta: 346,1
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5
10
15
20
25
30
35
El compuesto 117 (0,8 g), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,8 g, 4,6 mmol), EDC.HCl (0,9 g, 4,6 mmol), HOBt (0,06 g, 0,046 mmol) y TEA (0,46 g, 4,6 mmol) se disolvieron en CH2Cl2 (20 mL) a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos. La mezcla se lavó con agua y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 mL). La capa orgánica reunida se secó y se concentró, dando como resultado el producto bruto. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. (Eluyente: acetato de etilo), dando como resultado el compuesto 118 (0,7 g). Método A2; Rt: 1,04 min. m/z =: 503,9 (M+H)+ Masa exacta: 503,1
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El compuesto 118 (pureza 70%, 0,50 g, 1,0 mmol), compuesto 7a (0,55 g, 1,0 mmol), Pd(PPh3)4 (0,35 g, 0,3 mmol) y Na2CO3 (0,52 g, 4,0 mmol) en tolueno (5 mL), etanol (5 mL) y H2O (5 mL) se calentaron a reflujo bajo atmósfera de N2 durante una noche. La mezcla se enfrió a 20ºC y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 mL). La capa orgánica se concentró en vacío. El residuo se lavó con terc.-butil-metil-éter (10 mL) y CH3CN (5 mL). El polvo resultante se purificó mediante HPLC preparativa. (Columna: Grace Vydac C18, 200 * 25 mm * 5 um, Temperatura de la columna: 40ºC, fase móvil A: agua (que contiene TFA al 0,075%, V/V), Fase móvil B: acetonitrilo, Caudal 30 mL/min, Gradiente: 30-45% de B, 0 3. El disolvente orgánico se separó en vacío. El precipitado se filtró, se lavó con H2O y terc-butil-metil-éter y se disolvió en metanol. La disolución se concentró en vacío, dando como resultado el compuesto 119a (77,1 mg). Una fracción de la mezcla se purificó adicionalmente mediante SFC (Instrumento: Berger MultiGramTM SFC, Mettler Toledo Co, Ltd. MG II Columna Quiral Cel OJ, 5 m, Daicel Chemical Industries, Ltd 50x30 mm D.I. Fase móvil: A: CO2 supercrítico, B: MeOH (contenía dietilamina al 0,2%), A: B = 70: 30 a 60 mL/min. Temp.. de la columna: 38ºC Longitud de onda: 220 nm. Presión de la Boquilla: 100 bar, Temp. de la Boquilla: 60ºC, Temp. del evaporador 20ºC, Temp. del cortador: 25ºC, La fracción recogida se concentró en vacío. El residuo obtenido se purificó mediante CCF preparativa. (Eluyente: CH2Cl2/metanol, 10:1) La fracción recogida se concentró en vacío y se suspendió en CH3CN (1 mL) y después MTBE (3 mL). El sólido resultante se disolvió en metanol (2 mL) y se filtró. El filtrado obtenido se concentró en vacío, dando como resultado el compuesto 119b (20 mg). 119a: Método C; Rt: 3,86 min. m/z =: 844,5 (M+H)+ Masa exacta: 843,4 SFC: Columna: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 30% de B en A,: Rt: 4,45 min1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6; isómero principal descrito)  ppm 0,82 -0,99 (m, 12 H), 1,17-2,43 (m, 17 H), 3,54 (s, 3H), 3,55 (s, 3 H) 3,78-3,89 (m, 2 H), 3,95 (t, J = 8,5 Hz, 1 H), 4,09 (t, J = 8,3 Hz, 1 H), 4,41-4,53 (m, 1 H), 4,76 -4,85 (m, 1 H), 5,08 – 5,16 (m, 1 H), 5,88 (s, 1 H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,53 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,63-7,67 (m, 1 H), 7,72-7,80 (m, 1 H), 7,82-8,06 (m, 5 H), 8.11-8.18 (m, 1 H), 8,22-8,33 (m, 2 H), 11,77-11,92 (m, 2 H) 119b: Método B; Rt: 5,20 min. m/z =: 844,3 (M+H)+ Masa exacta: 843,4 SFC: Columna: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 30% de B en A,: Rt: 3,22 min SFC: Columna: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 5% a 40% de B en A ,: Rt: 7,91 min
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10 El compuesto 121 (0,6 g, 1,37 mmol) y NaOH (0,2 g, 5 mmol) en dioxano (10 mL) se agitaron durante 1 hora a 100ºC bajo N2. La mezcla se vertió en NH4Cl al 10% (50 mL) y el disolvente orgánico se separó en vacío. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (2 x 50 mL). Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron en vacío. El residuo obtenido (0,6 g) se agitaron durante 2 horas a 20ºC en HCl/dioxano (10 mL). La mezcla se concentró en vacío. La mezcla obtenida (0,6 g), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,36 g, 2,1 mmol), EDC.HCl (0,4 g, 2,1
15 mmol) y HOBt (0,09 g, 0,69 mmol) en CH2Cl2 (10 mL) se agitó a 0°C. Se añadió DIEA (0,9 g, 6,9 mmol). La mezcla se agitó durante 12 horas a 20ºC. La mezcla se lavó dos veces con H2O, salmuera, se secó y se evaporó en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: acetato de etilo, después CH3OH).
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20 El compuesto 122 (0,3 g, 0,6 mmol), compuesto 7a (0,33 g, 0,6 mmol), Pd(PPh3)4  2CO3 (0,252 g, 0,24 mmol) en tolueno (6 mL), CH3CH2OH (6 mL) y H2O (6 mL) se sometieron a reflujo bajo N2 durante 12 horas. El disolvente se separó en vacío. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (2 x 20 mL). Las capas orgánicas reunidas se lavaron con salmuera, se secaron y se evaporaron en vacío. El residuo se purificó mediante CCF de gel de sílice preparativa (eluyente: CH2Cl2/CH3OH = 10/1). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se concentró en vacío. El residuo se purificó adicionalmente mediante cromatografía líquida de alta resolución (C18, eluyente: CH3CN/H2O de 15/85 to 35/65 con CF3COOH al 0,1% como tampón). Se recogieron las fracciones puras, se neutralizaron mediante NaHCO3 saturado y el disolvente orgánico se evaporó. La mezcla resultante se extrajo con CH2Cl2. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4. La capa orgánica se filtró y se concentró en vacío. El residuo se solidificó mediante terc-butil-metil-éter y después se coevaporó con CH3CN, resultando el compuesto 123 (136,6 mg). Método C; Rt: 3,70 min. m/z =: 816,3 (M+H)+ Masa exacta: 815,4; SFC: Columna: Chiralcel OJ-H 250 mm * 4,6 mm; 5 um; Caudal: 2,35 mL/min; Fase móvil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 5 a 40% de B en A,: isómero secundario (4,6%) Rt: 7.97min; isómero principal (95,4%), Rt: 8,37 min,
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Ejemplos biológicos -actividad anti-VHC de compuestos de fórmula I
Ensayo del Replicón Los compuestos de fórmula (I) se examinaron en cuanto a la actividad inhibidora en el replicón del VHC. Este ensayo celular se basa en una construcción de expresión bicistrónico, según se describe por Lohmann et al. (1999) Science vol. 285 págs. 110-113 con las modificaciones descritas por Krieger et al. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624, en una estrategia de rastreo multi-objetivo.
En esencia, el método era como sigue: El ensayo utilizó la línea celular transfectada establemente Huh-7 luc/neo (a la que se alude de aquí en adelante como Huh-Luc). Esta línea de células alberga un ARN que codifica una construcción de expresión bicistrónica que comprende las regiones NS3-NS5B tipo salvaje del VHC tipo 1b, traducida a partir de un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) del virus de la encefalomiocarditis (VEMC), precedida por una porción de informador (luciferasa de luciérnaga), y una porción de marcador seleccionable (neoR, neomicina fosfotransferasa). La construcción está flanqueada por NTRs (siglas inglesas de regiones no tradsucidas) 5 'y 3'del VHC tipo 1b El cultivo continuado de las células del replicón en presencia de G418 (neoR) depende de la replicación del ARN del VHC. Las células del replicón transfectadas establemente que expresan ARN del VHC, que se replica autónomamente y a niveles altos, codificando, entre otros, luciferasa, se utilizaron para el rastreo de los compuestos antivirales.
Las células de replicón se sembraron en placas de 384 pocillos en presencia de los compuestos de ensayo y control que se añadieron en diversas concentraciones. Después de una incubación durante tres días, la replicación del VHC se midió sometiendo a ensayo la actividad de luciferasa (utilizando sustratos estándar de ensayo de luciferasa y los reactivos y un dispositivo de representación en imágenes de microplacas Perkin Elmer Viewlux™ ultraHTS). Células de replicón en los cultivos control tienen una elevada expresión de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto sobre la actividad de luciferasa se monitorizó en las células Huh-Luc, lo que permite una curva de dosis-respuesta para cada uno de los compuestos de ensayo. Se calcularon después los valores de CE50, que representan la cantidad de compuesto requerida para reducir el nivel de actividad de luciferasa detectado en un 50% o, más específicamente, para reducir la capacidad de replicarse del ARN del replicón del VHC genéticamente ligado.
Resultados En los casos en los que un compuesto de fórmula (I) se sometió a ensayo más de una vez en el ensayo de replicón, el promedio de todos los resultados del ensayo se da en esta Tabla 1.
imagen193
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
13
0,028
13a
0,91
13b
0,022
13-A1
0,1
13-A2
0,079
13-A3
imagen194
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
13-A4
1,2
13-A5
0,062
13-A6
0,5
13-A7
0,053
imagen195
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
13-A8
0,18
20
0,79
20-A
0,2
imagen196
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
22
0,075
22a
3,4
22b
0,052
23
0,47
imagen197
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
23a
23b
0,34
24
0,048
24a
9,6
24b
imagen198
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
35
0,64
44
0,005
44-1
8,1
44-2
0,084
imagen199
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
44-3
1,0
44-4
9,8
50
0,006
61
0,017
imagen200
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
70
0,009
76
0,034
84
0,034
87
0,008
imagen201
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
97
0,24
102
102a
0,069
102b
20,6
106
106a
0,12
imagen202
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
106b
20,6
110
110a
0,048
110b
0,48
119
119a
0,033
119b
imagen203
ESTRUCTURA
Compuesto nº VHC-REP-HUH7LUC_CE50 (nM)
123
5
Descripción del ensayo para la medición del transporte transepitelial de los compuestos de ensayo a través de monocapas de LLC-MDR1
10 La permeabilidad apical a basolateral (AtoB) permeabilidad de los compuestos de ensayo en presencia del inhibidor de la P-gp GF 120918 (Papp x10-6 cm/s) se midió después de un período de incubación de 120 minutos. La integridad de la monocapa celular se evaluó en cada uno de los pocillos de incubación a través de la inclusión del compuesto marcador fluorescente de baja permeabilidad, fluoresceína. En detalle, células LLC-MDR1 (células LLC-PK1 establemente transducidas con MDR1 en un sistema trans-well) fueron
15 sembradas en insertos de cultivo celular de 24 pocillos (Millicell® -PCF, 0,4 µm, 13 mm Ø, 0,7 cm2) a razón de 400 000 células/cm2. El medio de cultivo celular consiste en Medio 199 suplementado con suero dce ternero fetal (FBS) al 10% y 100 U/mL Penicilina/estreptomicina se reemplazó el día después de la siembra y el día antes del experimento. El experimento de transporte se llevó a cabo 5 días después de la siembra. El día del experimento del transporte, las disoluciones de los
20 compuestos de ensayo se aplicaron a la cara apical de las monocapas para evaluar el transporte en la dirección AtoB. El medio utilizado en el ensayo era (OPTI-MEM (1x) (GIBCO) con insertos de albúmina de suero bovino al 1% p/v. Los insertos se incubaron a 37ºC en una incubadora humidificada que contiene 5% de CO2. Muestras de los compartimentos aceptores y donantes se recogieron después de un tiempo de incubación de 120 min, para evaluar la permeabilidad y para permitir la estimación de la recuperación del compuesto de ensayo durante el experimento,
25 respectivamente. Se realizaron experimentos de transporte por triplicado. Las concentraciones de compuesto de ensayo absolutas se midieron utilizando LC-MS/MS y se cuantificaron a través de una curva de calibración.
Número de Compuesto
Permeabilidad A→B (Papp x 10- cm/s) en presencia del inhibidor de la P-gp GF 120918
44
6,9
35
5,0
13b
0,5
13A-3
0,9
44-1
2,7
44-2
5,5
50
5,8
61
4,8
70
7,8
76
3,1
84
0,4
87
1,0
102a
< 0,6
110a
0,4
110b
2,3

Claims (8)

  1. imagen1
    REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de fórmula I:
    imagen2
    o un estereoisómero del mismo, en donde:
    cada uno de
    imagen3es, independientemente, pirrolidin-2-ilo, 2-aza-biciclo[3.1.0]hexan-3-ilo, piperidin-2-ilo, 2-azabiciclo[2.2.1]heptan-2-ilo u octahidro-1H-indol-2-ilo, en donde imagen4cada uno de dichos heterociclos puede estar
    opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno;
    es CR4=C-NH, NH-C=CH o NH-C=N; X1 es CH y X2es CH; o
    10 X1 es CH y X2es N; o X1 es N y X2es CH; W es carbonilo, sulfonilo o CR5R6; R y R' se seleccionan, independientemente, de -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 ó
    2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde
    15 R1 se selecciona de alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con metoxi, hidroxilo o dimetilamino; cicloalquilo C3-6; tetrahidropiranilo; fenilo opcionalmente sustituido con 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi C1-4, trifluorometoxi, o 2 sustituyentes en átomos adyacentes del anillo forman un grupo 1,3-dioxolano; bencilo opcionalmente sustituido con halo o metoxi; heteroarilo; y heteroarilmetilo;
    20 R2 se selecciona de hidrógeno, hidroxilo, amino, mono-o di-alquil C1-4-amino, (cicloalquil C3-6)(alquil C14)amino, alquil C1-4carbonilamino, fenilamino, alquil C1-4oxicarbonilamino, (alquil C1-4oxicarbonil)(alquil C1-4)amino, alquil C1-4aminocarbonilamino, tetrahidro-2-oxo-1(2H)-pirimidinilo, pirrolidin 1-ilo, piperidin1-ilo, 3,3-difluoropiperidin-1-ilo, morfolin-1-ilo, 7-azabiciclo[2.2.1]hept-7-ilo e imidazol-1-ilo; y
    R3 es hidrógeno o alquilo C1-4, o
    25 CR2R3 juntos forman carbonilo; o CR1R3 forma un grupo ciclopropilo; R4 es hidrógeno, alquilo C1-4 o ciano; R5 y R6, cada uno independientemente, son alquilo C1-4; o CR5R6 juntos forman cicloalquilo C3-7, oxetano, tetrahidrofurano;
    30 o sales farmacéuticamente aceptables o un solvato del mismo.
  2. 2.
    El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada uno de
    imagen5es, independientemente, pirrolidin-2-ilo, 2-aza-biciclo[3.1.0]hexan-3-ilo o piperidin-2-ilo.
  3. 3.
    El compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada uno de
    es, independientemente, pirrolidin-2-ilo o 2-aza-biciclo[3.1.0]hexan-3-ilo, en donde cada uno de dichos heterociclos puede 35 estar opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
  4. 4. El compuesto de fórmula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde CH=C-NH.
    40 5. El compuesto de fórmula I de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R y R’ son iguales.
  5. 6. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R2 es hidroxilo, amino, mono-o di-alquil C1-4-amino, alquil C1-4carbonilamino, alquil C1-4oxicarbonilamino, en particular R2 es alquil C1-4carbonilamino o alquil C1-4oxicarbonilamino, y R3 es hidrógeno.
    45
  6. 7. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R1 se selecciona de alquilo C14, alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y metilo, en particular R1 se selecciona de alquilo C3-4 ramificado, alquilo C2-3 sustituido con metoxi; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente seleccionado de halo y metilo.
    79 8. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que es de fórmula Ia
    imagen6
    imagen7
    imagen8
  7. 9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 8 y un soporte farmacéuticamente aceptable.
  8. 10. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, para uso en la prevención o el tratamiento de una infección por VHC en un mamífero.
    10 11. Un producto que contiene (a) un compuesto de fórmula (I) según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, y (b) otro inhibidor del VHC, en forma de una preparación combinada para el uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por el VHC.
    80
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