ES2601461T3 - Derivados de quinazolinona como inhibidores de VHC - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula I**Fórmula** o un estereoisómero del mismo, en el que: al menos uno de al menos uno de **Fórmula**se selecciona independientemente de un grupo que comprende**Fórmula** y y el otro**Fórmula** se selecciona del grupo que comprende adicionalmente**Fórmula** R y R' se seleccionan independientemente de -CR1R2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde R1 se selecciona de alquilo C1-4; alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y metilo; R2 es hidroxilo, amino, mono- o di-alquil C1-4-amino, alquilC1-4-carbonilamino, alquilC1-4-oxicarbonilamino; R3 es hidrógeno o alquilo C1-4; o una sal farmacéuticamente aceptable o un solvato del mismo.

Description

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DESCRIPCION

Derivados de quinazolinona como inhibidores de VHC Campo tecnico

Esta invencion se refiere a derivados heterobidclicos, en particular derivados de quinazolinona, que son inhibidores del virus de la hepatitis C (VHC), a su smtesis y su uso, solo o en combinacion con otros inhibidores de VHC, en el tratamiento o la profilaxis del VHC.

Tecnica anterior

El VHC es un virus de ARN de sentido positivo de una sola hebra perteneciente a la familia de virus Flaviviridae dentro del genero hepacivirus. El genoma viral se traduce en un solo marco de lectura abierto que codifica multiples protemas estructurales y no estructurales.

Despues de una infeccion aguda inicial, una mayona de los individuos infectados desarrolla hepatitis cronica debido a que el VHC se replica preferentemente en hepatocitos pero no es directamente citopatico. En particular, la falta de una respuesta vigorosa de linfocitos T y la gran propension del virus a mutar parecen promover un alto grado de infeccion cronica. La hepatitis cronica puede avanzar a fibrosis hepatica, que conduce a cirrosis, enfermedad hepatica terminal y CHC (carcinoma hepatocelular), convirtiendola en la causa principal de trasplantes de hugado.

Hay seis genotipos principales y mas de 50 subtipos de VHC, que estan distribuidos geograficamente de forma diversa. El genotipo 1 del VHC es el genotipo predominante en Europa y los EE. UU. La amplia heterogeneidad genetica del VHC tiene importantes implicaciones diagnosticas y clmicas, que quiza explican las dificultades en el desarrollo de vacunas y la falta de respuesta de la terapia actual.

La trasmision del VHC se puede producir a traves de contacto con sangre o productos sangumeos contaminados, por ejemplo despues de una transfusion de sangre o del uso de drogas intravenosas. La introduccion de pruebas diagnosticas usadas para cribar sangre ha conducido a una tendencia descendente en la incidencia de VHC despues de una transfusion. Sin embargo, dado el lento avance hasta la enfermedad hepatica terminal, las infecciones existentes continuaran presentando una carga medica y economica grave durante decadas.

Las terapias actuales del VHC se basan en interferon a (IFN-a) (pegilado) en combinacion con ribavirina. Esta terapia combinada da una respuesta virologica sostenida en mas de 40% de pacientes infectados por VHC de genotipo 1 y aproximadamente 80% de los infectados por los genotipos 2 y 3. Ademas de la eficacia limitada contra el genotipo 1 de VHC, esta terapia de combinacion tiene efectos secundarios significativos incluyendo smtomas pseudogripales, anormalidades hematologicas y smtomas neuropsiquiatricos. De aim que exista una necesidad de tratamientos mas eficaces, comodos y mejor tolerados.

La experiencia con farmacos para VIH, en particular con inhibidores de proteasa de VIH, ha mostrado que la farmacocinetica insuficiente y los regfmenes de dosificacion complejos dan como resultado rapidamente fallos de aceptacion terapeutica accidentales. Esto a su vez significa que la concentracion valle (concentracion plasmatica minima) a las 24 horas para los farmacos respectivos en un regimen para VIH cae frecuentemente por debajo del umbral de IC90 o ED90 durante muchas partes del dfa. Se considera que un nivel valle a las 24 horas de al menos la IC50, y de modo mas realista, la IC90 o ED90, es esencial para frenar el desarrollo de mutantes que eluden el farmaco. Alcanzar la farmacocinetica y la velocidad de metabolismo farmacologico necesarios para permitir tales niveles valle proporciona un reto riguroso al diseno de farmacos.

La protema NS5B de VHC esta situada aguas abajo de la protema NS4B y aguas arriba de la protema NS5B. Al escindirse postraduccionalmente mediante la serina proteasa viral NS3/4A, la NS5A madura en una fosfoprotema de tres dominios que contiene cinc que existe bien como una especie hipofosforilada (56-kDa, p56) o bien una hiperfosforilada (58-kDa, p58). NS5A de VHC esta implicada en multiples aspectos del ciclo vital viral incluyendo la replicacion viral y el ensamblaje de partmulas infecciosas asf como la modulacion del ambiente de su celula hospedadora. Aunque no se ha adscrito una funcion enzimatica a la protema, se presenta que interactua con numerosos factores virales y celulares.

Un numero de patentes y solicitudes de patente divulgan compuestos con actividad inhibidora de VHC, en particular que se dirigen a NS5A. El documento WO2006/133326 divulga derivados de estilbeno mientras que los documentos Wo 2008/021927 y WO 2008/021928 divulgan derivados bifemlicos que tienen actividad inhibidora de NS5A VHC. El documento WO 2008/048589 divulga derivados de 4-(feniletinil)-1H-pirazol y su uso antiviral. El documento WO 2008/070447 divulga una amplia gama de compuestos inhibidores de VHC que incluyen un resto bencimidazol. Los documentos WO-2010/017401 y WO-2010/065681 divulgan ambos inhibidores de bisimidazol de NS5A de VHC. El documento WO 2012/013643 divulga un grupo de derivados de quinolinona que inhiben VHC.

Existe una necesidad de inhibidores de VHC que puedan vencer las desventajas de la terapia actual para VHC tales como efectos secundarios, eficacia limitada, la aparicion de resistencia y fallos de cumplimiento terapeutico, asi como mejorar la respuesta sostenida de la carga viral.

5 La presente invention trata de un grupo de derivados de quinazolinona inhibidores de VHC, con propiedades utiles relativas a uno o mas de los siguientes parametros: eficacia antiviral, un perfil favorable de desarrollo de resistencia, reduction o falta de toxicidad y genotoxicidad, farmacocinetica y farmacodinamica favorables, facilidad de formulation y administration y limitation o falta de interaction farmaco-farmaco con otras sustancias farmacologicas, en particular otros agentes anti-VHC.

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Los compuestos de la invencion tambien pueden ser atractivos debido al hecho de que carecen de actividad contra otros virus, en particular contra VIH. Los pacientes infectados con VIH a menudo sufren coinfecciones tales como VHC. El tratamiento de tales pacientes con un inhibidor de VHC que tambien inhiba VIH puede conducir a la aparicion de cepas de HIV resistentes.

15 Description de la invencion

En una primera realization, la presente invencion proporciona un subgrupo de compuestos de formula I, que se pueden representar mediante la formula (I);

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o un estereoisomero de los mismos, en donde:

20 al menos uno de se selecciona independientemente de un grupo que comprende

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O D

y el otro se selecciona del grupo que comprende adicionalmente »

R y R' se seleccionan independientemente de -CRiR2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes 25 seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde

Ri se selecciona de alquilo C1-4; alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y metilo;

R2 es hidroxilo, amino, mono- o di-alquil(C1-4)-amino, alquil(C1-4)-carbonilamino, alquil(C1-4)-oxicarbonilamino;

R3 es hidrogeno o alquilo C1-4;

30 o una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato de los mismos.

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o

En una realization preferida, se selecciona independientemente de un grupo que comprende

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o

Se prefiere aun mas un compuesto de formula I en el que al menos un sea independientemente

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Mas preferiblemente, la invention proporciona compuestos que se pueden representar mediante la formula la

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En una realization adicional de la invention, R2 se selecciona del grupo que comprende alquil(Ci-4)-carbonilamino o alquil(Ci-4)-oxicarbonilamino.

En otra realization mas de la invention, R1 se selecciona de alquilo C3-4 ramificado; alquilo C2-3 sustituido con metoxi; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente seleccionado de halo y metilo.

En otra realization mas de la invention, R3 es hidrogeno.

En una realization adicional, R y R' son identicos.

En una realization adicional mas, R2 es alquil(C1-4)-carbonilamino o alquil(C1-4)-oxicarbonilamino, y R3 es hidrogeno.

Preferiblemente, un metodo para el tratamiento o la profilaxis de una infection por VHC, en particular del genotipo 1a o 1b, comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto como el definido anteriormente en la presente memoria.

Las formas estereoisomeras puras de los compuestos y productos intermedios que se mencionan en la presente memoria se definen como isomeros sustancialmente libres de otras formas enantiomeras o diastereoisomeras de la misma estructura molecular basica de dichos compuestos o productos intermedios. En particular, el termino "estereoisomeramente puro" trata de compuestos o productos intermedios que tienen un exceso estereoisomero de al menos 80% (es decir mmimo 90% de un isomero y maximo 10% de los otros posibles isomeros) hasta un exceso estereoisomero de 100% (es decir 100% de un isomero y nada de los otros), mas en particular, compuestos o productos intermedios que tienen un exceso estereoisomero de 90% hasta 100%, aun mas en particular que tienen un exceso estereoisomero de 94% hasta 100% y lo mas en particular que tienen un exceso estereoisomero de 97%

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hasta 100%. Los terminos "enantiomeramente puro" y "diastereoisomeramente puro" se deben entender de un modo similar, pero teniendo en cuenta entonces el exceso enantiomero, y el exceso diastereoisomero, respectivamente, de la mezcla en cuestion.

Formas estereoisomeras o estereoisomeras puros de los compuestos y productos intermedios de esta invencion se pueden obtener mediante la aplicacion de procedimientos conocidos en la tecnica. Pongamos por caso, los enantiomeros se pueden separar entre si mediante la cristalizacion selectiva de sus sales diastereoisomeras con acidos o bases opticamente activos. Ejemplos de los mismos son acido tartarico, acido dibenzoiltartarico, acido ditoluoiltartarico y acido canforsulfonico. Alternativamente, los enantiomeros se pueden separar mediante tecnicas cromatograficas usando capas estacionarias quirales. Dichas formas estereoqmmicamente isomeras puras tambien se pueden derivar de las correspondientes formas estereoisomeras puras de las materias primas apropiadas, con tal de que la reaccion se produzca estereoespedficamente. Preferiblemente, si se desea un estereoisomero espedfico, dicho compuesto se sintetiza mediante metodos de preparacion estereoespedficos. Estos metodos emplearan ventajosamente materias primas enantiomeramente puras.

Los racematos diastereisomeros de los compuestos de formula I se pueden obtener separadamente mediante metodos convencionales. Metodos de separacion fisica apropiados que se pueden emplear ventajosamente son, por ejemplo, cristalizacion selectiva y cromatografia, p. ej. cromatografia en columna o cromatografia de fluidos supercriticos.

Los compuestos de formula I y subgrupos de compuestos de formula I segun se definen anteriormente en la presente memoria tienen varios centros de quiralidad. Son de interes los centros estereogenicos del anillo de pirrolidina en el atomo de carbono 2. La configuracion en esta posicion puede ser la correspondiente a L-prolina, es decir

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y

o la correspondiente a D-prolina, es decir

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Son de particular interes compuestos de formula I o subgrupos de los mismos segun se definen en la presente memoria, que son segun la formula Ia.

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Tambien es de interes la configuracion del grupo -CR1R2R3 en la que R3 es H: cuando Ri se selecciona de alquilo C3-4 ramificado; alquilo C2-3 sustituido con metoxi, entonces se prefiere la configuracion S; cuando R1 se selecciona de fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y metilo; entonces se prefiere la configuracion R.

Las sales farmaceuticamente aceptables comprenden las formas salinas por adicion de acido y base atoxicas terapeuticamente activas de los compuestos de formula (I) o subgrupos de los mismos. Son de interes las formas libres, es decir no salinas, de los compuestos de formula I, o de cualquier subgrupo de compuestos de formula I especificado en la presente memoria.

Las sales por adicion de acido farmaceuticamente aceptables se pueden obtener convenientemente al tratar la forma de base con tal acido apropiado. Acidos apropiados comprenden, por ejemplo, acidos inorganicos tales como acidos halohidricos, p. ej. acidos clorhidrico o bromhidrico, acidos sulfurico, mtrico, fosforico y similares; o acidos organicos tales como, por ejemplo, acidos acetico, propionico, hidroxiacetico, lactico, piruvico, oxalico (es decir, etanodioico), malonico, sucdnico (es decir acido butanodioico), maleico, fumarico, malico (es decir hidroxilbutanodioico), tartarico, dtrico, metanosulfonico, etanosulfonico, bencenosulfonico, p-toluenosulfonico, ciclamico, salicflico, p-aminosalidlico, pamoico y similares. A la inversa, dichas formas salinas se pueden convertir mediante el tratamiento con una base apropiada en la forma de base libre.

Los compuestos de formula I que contienen un proton acido tambien se pueden convertir en sus sales por adicion de base, en particular formas salinas por adicion de metal o amina, mediante el tratamiento con bases organicas e inorganicas apropiadas. Formas salinas basicas apropiadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalinoterreos, p. ej. las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, sales con bases organicas, p. ej. las sales de benzatina, N-metil-D-glucamina, hidrabamina, y sales con aminoacidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares.

El termino "solvatos" cubre cualesquiera solvatos farmaceuticamente aceptables que sean capaces de formar los compuestos de formula I asi como las sales de los mismos. Tales solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos, p. ej. etanolatos, propanolatos y similares.

Algunos de los compuestos de formula I tambien pueden existir en sus formas tautomeras. Por ejemplo, formas tautomeras de grupos amida (-C(=O)-NH-) son iminoalcoholes (-C(OH)=N-). Las formas tautomeras, aunque no se indican explicitamente en las formulas estructurales representadas en la presente memoria, estan destinadas a estar incluidas dentro del alcance de la presente invencion.

Segun se usa en la presente memoria, "alquilo C1-4" como un grupo o parte de un grupo define grupos hidrocarbonados de cadena lineal o ramificada saturados que tienen de 1 a 4 atomos de carbono tales como, por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo. Para el proposito de la presente invencion, es de interes entre el alquilo C1-4 un alquilo C3-4, es decir un grupo hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene 3 o 4 atomos de carbono tal como 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-1- propilo, 2-metil-2-propilo. Puede ser de particular interes un alquilo C3-4 ramificado, tal como 2-propilo, 2-butilo, 2- metil-1-propilo, 2-metil-2-propilo.

El termino "cicloalquilo C3-6" como un grupo o parte del mismo define grupos hidrocarbonados dclicos saturados que tienen de 3 a 6 atomos de carbono que forman juntos una estructura dclica. Ejemplos de cicloalquilo C3-6 incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

"Alcoxi C1-4" como un grupo o parte de un grupo significa un grupo de formula -O-alquilo(C1-4) en donde el alquilo C1-4 es como se define anteriormente. Ejemplos de alcoxi C1-4 son metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi.

El termino "halo" es generico para fluoro, cloro, bromo y yodo.

Segun se usa en la presente memoria, el termino "(=O)" u "oxo" forma un resto carbonilo cuando se une a un atomo de carbono. Se debe de apuntar que un atomo solo se puede sustituir con un grupo oxo cuando la valencia de ese atomo asi lo permita.

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Segun se usa en la presente memoria, "arilo" como un grupo o parte del mismo significa una estructura anular aromatica que comprende opcionalmente uno o dos heteroatomos seleccionados de N, O y S, en particular de N y O. Dicha estructura anular aromatica puede tener 5 o 6 atomos de anillo.

Segun se usa en la presente memoria, el prefijo "hetero-" en la definition de un grupo significa que el grupo comprende al menos 1 heteroatomo seleccionado de N, O y S, en particular N y O. Por ejemplo, el termino "heteroarilo" significa una estructura anular aromatica segun se define para el termino "arilo" que comprende al menos 1 heteroatomo seleccionado de N, O y S, en particular de N y O, por ejemplo furanilo, oxazolilo, piridinilo. Alternativamente, el termino "hetero-cicloalquilo(C3-6)" significa un grupo hidrocarbonado ticlico saturado segun se define para "cicloalquilo C3-6" que comprende ademas al menos 1 heteroatomo seleccionado de N, O y S, en particular de N y O, por ejemplo tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo.

Cuando la position de un grupo en un resto molecular no se especifica (por ejemplo, un sustituyente sobre fenilo) o se representa mediante un enlace flotante, tal grupo puede estar situado sobre cualquier atomo de tal resto, con la condition de que la estructura resultante sea qmmicamente estable. Cuando cualquier variable esta presente mas de una vez en la molecula, cada definicion es independiente.

Siempre que se use en la presente memoria, se entiende que el termino "compuestos de formula I" o "los presentes compuestos" o terminos similares incluye los compuestos de formula I, incluyendo las posibles formas estereoisomeras, y las sales y solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos.

Metodos sinteticos generales

Esquema 1

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Las unidades estructurales usadas en la smtesis de compuestos de formula I se describen en el esquema 1. La a- aminocetona IIa (Esquema 1, A= NH2), con X un halogeno, en particular bromo o yodo, se acopla con un derivado adecuadamente protegido III, en el que PG' es un grupo protector en el nitrogeno, preferiblemente terc- butoxicarbonilo, en presencia de un reactivo de acoplamiento para la acilacion del grupo amino, preferiblemente HATU, en presencia de una base tal como DIPEA. El producto intermedio asi formado se cicla hasta un compuesto de imidazol de formula general IV mediante tratamiento con acetato amonico, preferiblemente a una temperatura que varia entre 0°C y 150°C.

Alternativamente, el imidazol intermedio IV se puede obtener al acoplar una a-halocetona IIb en la que X y A representan cada uno independientemente un atomo de halo, X se selecciona preferiblemente de yodo o bromo y A se selecciona preferiblemente de cloro, bromo o yodo, con un compuesto adecuadamente protegido III en el que PG' es un grupo protector en el nitrogeno, preferiblemente terc-butoxicarbonilo, en presencia de una base adecuada, por ejemplo DipEa, seguido por ciclacion hasta el producto intermedio de imidazol IV segun se describe anteriormente. Este producto intermedio IV se puede transformar en un ester boronico de formula V bajo condiciones catalizadas por Pd, por ejemplo en presencia de Pd(dppf)Cl2, £>/s(pinacolato)-diboro y una base, por ejemplo acetato potasico.

Otras unidades estructurales se describen en el esquema 2 (a, b). Esquema 2a

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La smtesis de compuestos de la formula IX y IXa es describe en el Esquema 2a. La formacion de enlaces amida 5 partiendo de VI (X' es un halogeno seleccionado de yodo o bromo, preferiblemente bromo) y VII da como resultado la formacion del compuesto VIII. Esta reaccion se puede efectuar al convertir el compuesto VII en un halogenuro de acido, por ejemplo un fluoruro de acido o cloruro de acido, seguido por reaccion con VI en presencia de una base. Otro ejemplo es la formacion de VIII a partir de VI y VII mediante el uso del reactivo de acoplamiento cloruro de 4- (4,6-dimetoxi[1.3.5]triacin-2-il)-4-metilmorfolinio o BF4(DMTMM). Los compuestos VIII se convierten a continuacion 10 en compuestos de la formula general IX bajo condiciones basicas, por ejemplo KOH o Na2CO3, en etanol. En caso de que los compuestos de formula IX se puedan desproteger (p. ej. HCl en dioxano en caso de que PG sea igual a ferc-butiloxicarbonilo), la amina formada se puede acoplar con un acido de formula R(CO)OH bajo condiciones de formacion de enlaces amida tfpicas (p. ej. mediante tratamiento con HATU y una base como DIPEA o EDCI/HOBt/DIPEA).

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De forma similar, los compuestos de formula IV se pueden transformar en compuestos de formula IVa y Va segun se representa en el esquema 2b.

Esquema 2b

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Esquema 3

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5 La unidad estructural IX, obtenida mediante metodos como los descritos en el esquema 2a y V (Esquema 1, 2b), se puede convertir en la estructura X, usando condiciones de Suzuki-Miyaura (esquema 3).

Esquema 4

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Cuando PG' y PG en los esquemas 1 a 4 representan R'(C=O)- y R(C=O)-, respectivamente, los compuestos de estructura general X caen bajo la definition de compuestos de formula I. En ese caso, el esquema 3 describe la 5 smtesis de compuestos de formula I, por ejemplo al usar Va y IXa en un acoplamiento de Suzuki. Alternativamente, X se puede desproteger segun se describe en el esquema 4. Por ejemplo, mediante tratamiento con acido (por ejemplo HCl en iPrOH) cuando PG o PG' representan terc-butiloxicarbonilo (Boc). El compuesto XIII se puede transformar en un compuesto de formula Ib en el que R y R' son identicos, mediante formation de amida clasica entre un acido R-(C=O)OH y la bisamina XIII segun se describe en el esquema 5. Metodos preferidos son el uso de 10 HATU en presencia de una base como DIPEA o HOBt/EDCI/DIPEA.

Esquema 5

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Cuando PG' difiere de PG, es posible la desproteccion selectiva, segun se describe en el esquema 4, dando como

15 resultado los compuestos XII o XI partiendo de X. Por ejemplo, en el caso de que PG' sea igual a terc- butiloxicarbonilo (Boc) y PG sea igual a benciloxicarbonilo (Cbz), la desproteccion selectiva se puede efectuar al retirar el grupo protector Boc bajo condiciones acidas como HCl en iPrOH a temperatura ambiente, o al retirar el grupo protector CBz bajo condiciones reductoras como hidrogeno en presencia de un catalizador, p. ej. Pd(OH)2.

20 Cuando PG' representa R'(C=O)- o PG representa R(C=O)-, la smtesis de compuestos X segun se describe en el esquema 1 a 3 da como resultado compuestos de formula XIV (Esquema 6) o XVI (Esquema 7), respectivamente. Los compuestos XIV y XVI se pueden obtener a partir del compuesto XII y R'(C=O)OH o XI y R(C=O)OH, respectivamente, bajo condiciones de formacion de amida tipicas. Estos compuestos se pueden transformar a continuation en compuestos de formula I. La desproteccion selectiva de XIV en XV seguida por formacion de enlace

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amida entre XV y R(C=O)-OH da como resultado compuestos de la formula I. A continuation, se puede aplicar una reaction analoga para transformar XVI en XVII y avanzar hasta compuestos de formula I.

Esquema 6

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Esquema 7

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En un aspecto adicional, la presente invention trata de una composition farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula I segun se especifica en la presente memoria y un vehiculo farmaceuticamente aceptable. Una cantidad terapeuticamente eficaz en este contexto es una cantidad suficiente para estabilizar o para reducir una infection por VHC en sujetos infectados, o una cantidad suficiente para prevenir la infeccion por vHc en sujetos con riesgo de ser infectados. En un aspecto adicional mas, esta invencion se refiere a un procedimiento para preparar una composicion farmaceutica segun se especifica en la presente memoria, que comprende mezclar mtimamente un vehiculo farmaceuticamente aceptable con una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula I, segun se especifica en la presente memoria.

Por lo tanto, los compuestos de la presente invencion o cualquier subgrupo de los mismos se pueden formular en diversas formas farmaceuticas con propositos de administration. Como composiciones apropiadas se pueden citar todas las composiciones empleadas habitualmente para administrar farmacos sistemicamente. Para preparar las composiciones farmaceuticas de esta invencion, una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma por adicion de sal o de complejo metalico, como el ingrediente activo se combina en mezcla mtima con un vehicuio farmaceuticamente aceptable, vehiculo que puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparation deseada para la administracion. Estas composiciones farmaceuticas son deseables en forma de dosificacion unitaria adecuada, particularmente, para administrar oralmente, rectalmente, percutaneamente o mediante inyeccion parenteral. Por ejemplo, al preparar las composiciones en forma de dosificacion oral, se puede emplear cualquier medio farmaceutico habitual tal como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones liquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones; o vehiculos solidos tales como almidones, azucares, caolm, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, pfldoras, capsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y las capsulas representan las formas unitarias de dosificacion oral mas ventajosas, en cuyo caso obviamente se emplean vehiculos farmaceuticos solidos. Para composiciones parenterales, el vehiculo comprendera

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habitualmente agua esteril, al menos en gran parte, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar en la solubilidad. Por ejemplo, se pueden preparar soluciones inyectables en las que el vetuculo comprende solucion salina, solucion de glucosa o una mezcla de solucion salina y solucion de glucosa. Tambien se pueden preparar soluciones inyectables en las que se pueden emplear vetuculos lfquidos, agentes de suspension y similares apropiados. Tambien se incluyen preparaciones en forma solida destinadas a convertirse, poco antes de usar, en preparaciones en forma lfquida. En las composiciones adecuadas para la administracion percutanea, el vehfculo comprende opcionalmente un agente mejorador de la penetracion y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinados con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, aditivos que no introducen un efecto perjudicial significativo sobre la piel. Los compuestos de la presente invencion tambien se pueden administrar a traves de inhalacion oral o insuflacion en la forma de una solucion, una suspension o un polvo seco usando cualquier sistema de aporte conocido en la especialidad.

Es especialmente ventajoso formular las susodichas composiciones farmaceuticas en forma de dosificacion unitaria para la facilidad de administracion y la uniformidad de dosificacion. Forma de dosificacion unitaria segun se usa en la presente memoria se refiere a unidades ffsicamente discretas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado en asociacion con el vetuculo farmaceutico requerido. Ejemplos de tales formas de dosificacion unitarias son comprimidos (incluyendo comprimidos ranurados y revestidos), capsulas, pfldoras, supositorios, paquetes de polvos, obleas, soluciones o suspensiones inyectables y similares, y los multiplos segregados de los mismos.

Los compuestos de formula I muestran actividad contra VHC y se pueden usar en el tratamiento y la profilaxis de infeccion por VHC o enfermedades asociadas con VHC. Las ultimas incluyen fibrosis hepatica progresiva, inflamacion y necrosis que conducen a cirrosis, enfermedad hepatica terminal y carcinoma hepatocelular. Por otra parte, se sabe que un numero de los compuestos de esta invencion son activos contra cepas mutadas de VHC. Adicionalmente, los compuestos de esta invencion pueden tener propiedades atractivas en cuanto a la biodisponibilidad, muestran un perfil farmacocinetico favorable, incluyendo una semivida, ABC (area bajo la curva), valores maximos y valle aceptables y carecen de fenomenos desfavorables tales como comienzo insuficientemente rapido y retencion tisular.

La actividad antiviral in vitro contra VHC de los compuestos de formula I se puede probar en un sistema celular de replicon de VHC basado en Lohmann y cols. (1999) Science 285:110-113, con las modificaciones adicionales descritas por Krieger y cols. (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 y Lohmann y cols. (2003) Journal of Virology 77: 3007-3019 para el genotipo 1b y por Yi y cols. (2004) Journal of Virology 78: 7904-7915 para el genotipo 1a (incorporados en la presente memoria mediante referencia), que se ejemplifica adicionalmente en la seccion de ejemplos. Este modelo, aunque no es un modelo de infeccion completo para VHC, es ampliamente aceptado como el modelo mas robusto y eficaz de replicacion autonoma de ARN de VHC disponible actualmente. Se apreciara que es importante distinguir entre compuestos que interfieren espedficamente con las funciones de VHC y los que ejercen efectos citotoxicos o citostaticos en el modelo de replicon de VHC, y como consecuencia provocan una disminucion en la concentracion de ARN de VHC o enzima informadora conectada. Se muestran ensayos en este campo para la evaluacion de citotoxicidad celular basados, por ejemplo, en la actividad de enzimas mitocondriales, que usan colorantes fluorogenicos redox tales como resazurina. Por otra parte, existen cribados contadores celulares para la evaluacion de la inhibicion no selectiva de la actividad del gen informador conectado, tales como luciferasa de luciernaga. Tipos de celulas apropiados se pueden equipar mediante transfeccion estable con un gen informador de luciferasa cuya expresion depende de un promotor genico constitutivamente activo, y tales celulas se pueden usar como un cribado contador para eliminar inhibidores no selectivos.

Debido a sus propiedades anti-VHC, los compuestos de formula I o subgrupos de los mismos, segun se especifica en la presente memoria, son utiles en la inhibicion de la replicacion de VHC, en particular en el tratamiento de animales de sangre caliente, en particular seres humanos, infectados con VHC, y para la profilaxis de infecciones por VHC en animales de sangre caliente, en particular seres humanos. Por otra parte, la presente invencion se refiere a un metodo para tratar a un animal de sangre caliente, en particular un ser humano, infectado por VHC, o que tiene riesgo de infeccion por VHC, comprendiendo dicho metodo la administracion de una cantidad terapeuticamente o profilacticamente eficaz de un compuesto de formula I, segun se define anteriormente en la presente memoria.

Por lo tanto, los compuestos de formula I segun se describe en la presente memoria se pueden usar como un medicamento, en particular como un medicamente anti-VHC. Dicho uso como un medicamento o metodo de tratamiento comprende la administracion sistemica a sujetos infectados con VHC o a sujetos sensibles a una infeccion por VHC de una cantidad eficaz para aliviar o prevenir los smtomas y las afecciones asociados con infeccion por VHC.

La presente invencion tambien se refiere al uso de los presentes compuestos en la fabricacion de un medicamente para el tratamiento o la prevencion de infeccion por VHC.

En general, se contempla que una cantidad diaria antiviral eficaz sena de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg, o de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. Puede ser

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apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o mas subdosis a intervalos apropiados a lo largo del dfa. Dichas subdosis se pueden formular como formas de dosificacion unitaria, por ejemplo, que contienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg, o de aproximadamente 1 a aproximadamente 300 mg, o de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg, o de aproximadamente 2 a aproximadamente 50 mg de ingrediente activo por forma de dosificacion unitaria.

Terapia de combinacion

La invencion tambien se refiere a una combinacion de un compuesto de formula I, una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo y otro compuesto antiviral, en particular otro compuesto anti-VHC. El termino "combinacion" se refiere a un producto que contiene (a) un compuesto de formula I, segun se define anteriormente en la presente memoria, y (b) otro inhibidor anti-VHC, como una preparacion combinada para uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por VHC.

Las combinaciones de la presente invencion se pueden usar como medicamentos. Segun esto, la presente invencion se refiere al uso de un compuesto de formula (I) o cualquier subgrupo del mismo segun se define anteriormente para la fabricacion de un medicamento util para inhibir la actividad de VHC en un mairnfero infectado con virus VHC, en donde dicho medicamento se usa en una terapia de combinacion, comprendiendo en particular dicha terapia de combinacion un compuesto de formula (I) y al menos otro agente anti-VHC, p. ej. IFN-a, IFN-a pegilado, ribavirina, albuferona, taribavirina, nitazoxanida Debio025 o una combinacion de los mismos.

Otros agentes que se pueden combinar con los compuestos de la presente invencion incluyen, por ejemplo, inhibidores nucleosfdicos y no nucleosfdicos de la polimerasa de VHC, inhibidores de proteasa, inhibidores de helicasa, inhibidores de NS4B y agentes que inhiben funcionalmente el sitio interno de entrada del ribosoma (IRES) y otros agentes que inhiben la union celular o la entrada del virus de VHC, la traduccion de ARN de VHC, la transcripcion de ARN de VHC, la replicacion o la maduracion de VHC, el ensamblaje o la liberacion de virus. Compuestos espedficos en estas clases incluyen inhibidores de proteasa de VHC tales como telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), ITMN-191 (R-7227), TMC-435350 (TMC-435), MK- 7009, BI- 201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH-1095, GS 9256, VX-985, IDX-375, VX-500, VX-813, PHX-1766, PHX2054, IDX-136, IDX-316, ABT-450, EP-013420 (y congeneres) y VBY-376; los inhibidores de polimerasa de VHC nucleosfdicos incluyen TMC649128, R7128, PSI-7851, PSI 7977, INX-189, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938 y PSI-879 y otros diversos analogos nucleosfdicos y nucleotfdicos e inhibidores de VHC incluyendo los derivados como nucleosidos modificados con metilo en 2'-C, nucleosidos modificados con 4'-aza y nucleosidos modificados con 7'-desaza. Inhibidores de polimerasa de VHC no nucleosfdicos utiles en la invencion incluyen VHC-796, VHC-371, VCH-759, VCH-916, VCH- 222, ANA-598, MK- 3281, ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A- 837093, JKT-109, GL-59728, GL-60667, ABT-072, AZD-2795 y TMC647055.

Los siguientes ejemplos estan destinados a ilustrar la invencion y no se deben considerar como una limitacion de su alcance.

Parte experimental

Metodos de LCMS

Metodo A: General: fase movil A : H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 2 min.; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0,01 [90/10] a 0,9 [20/80] a 1,5[20/80] a 1,51 [90/10]; flujo: 1,2 ml/min.; temp. columna: 50°C

Metodo A1: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS, 3*30mm Metodo A2: Xtimate C18 2,1*30mm, 3um Metodo A3: SHIMADZU Shim pack 2*30

Metodo B: Agilent 1100, YMC-PACK ODS-AQ, 50*2,0 mm 5 pm fase movil A : H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05% Tiempo de parada: 10 min.; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0 [100/0] a 1 [100/0] a 5[40/60] a 7,5 [40/60] a 8 [100/0]; flujo: 0,8 ml/min; temp. columna: 50°C

Metodo C: Agilent 1100, YMC-PACK ODS-AQ, 50*2,0mm 5pm fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B:CH3CN (TFA al 0,05%); Tiempo de parada: 10 min.; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0 [90/10] a 0,8 [90/10] a 4,5 [20/80] a 7,5 [20/80] a 8 [90/10]; flujo: 0,8 ml/min.; temp. columna: 50°C

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Metodo D: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS,3*30 mm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 2 min.; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0,01 [100/0] a 0,9 [70/30] a 1,5 [70/30] a 1,51 [100/0]; flujo: 1,2 ml/min; temp. columna: 50°C

Metodo E: Cromatograffa de l^quidos: Waters Alliance 2695, detector UV: Waters 996 PDA, intervalo: 210-400 nm; Detector de masas: Waters ZQ, fuente ionica: ES+, ES- Columna usada: SunFire C18 3,5|j 4,6x100 mm fase movil A: NH4OOCH 10 mM + HCOOH al 0,1% en H2O; fase movil B: CH3OH; temp. columna: 50°C; flujo: 1,5 ml/min. tiempo de gradiente (min) [%A/%B] 0 [65/35] a 7 [5/95] a 9,6 [5/95] a 9,8 [65/35] a 12 [65/35].

Metodo F: Xtimate C18 2,1*30mm, 3um, fase movil A: H2O (1,5 ml TFA /4 l); B: CH3CN (0,75 ml TFA/4 l) Tiempo de parada : 3 min.; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0,0 [90/10] a 1,35 [20/80] a 2,25 [20/80] a 2,26 [90/10]; 3,0 [90/10] flujo: 0,8 ml/min; temp. columna: 50°C

Metodo G: Condiciones generales: fase movil A: H2O (1,5 ml TFA /4 l); B: CH3CN (0,75 ml TFA/4 l) Tiempo de parada: 2 min.; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0,0 [100/0] a 0,9 [40/60] a 1,5 [40/60] a 1,51 [100/0]; 2,0 [100/0] flujo: 1,2 ml/min; temp. columna: 50°C

Metodo G1: Xtimate C18,2,1*30mm,3um

Metodo H: Condiciones generales: fase movil A: H2O (TFA al 0,1%); B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada: 10 min; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0,0 [90/10] a 0,8 [90/10] a 4,5 [20/80] a 7,5 [20/80]; 9,5 [90/10] flujo: 0,8 ml/min; temp. columna: 50°C

Metodo H1: Agilent TC-C18,2,1*50 mm, 5um

Metodo I: Shimadzu LCMS 2010, Shim-pack XR-ODS,3*30mm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada : 7 min.; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0,01 [90/10] a 6,0 [20/80] a 6,5 [20/80] a 6,51 [90/10]; flujo: 0,8 ml/min; temp. columna: 50°C

Metodo J: Agilent TC-C18, 50*2,1mm, 5jm, fase movil A: H2O (TFA al 0,1%; B: CH3CN (TFA al 0,05%) Tiempo de parada : 10 min; Tiempo posterior: 0,5 min; tiempo de gradiente (min.) [%A/%B] 0 [100/0] a 1 [100/0] a 5 [40/60] a 7,5 [15/85] a 9,5 [100/0]; flujo: 0,8 ml/min; temp. columna: 50°C

Smtesis de productos intermedios:

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Se disolvio 2-bromo-1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona (526,5 g, 1204 mmol) en CH3CN (6.000 ml). Se anadio Boc-L- prolina (284 g, 1325 mmol) a la solucion y la mezcla de reaccion se agito durante 20 minutos a temperatura ambiente. Se anadio Et3N (480 ml, 3612 mmol) gota a gota a la solucion. La mezcla de reaccion se agito durante 15 horas a temperatura ambiente. El disolvente se retiro a vado y se uso SC-1 en bruto (794 g) en la siguiente etapa sin purificacion adicional. Metodo A1; Rt: 1,68 min. m/z : 484,1 (M+Na)+ Masa exacta: 461,1

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Se disolvio SC-1 (794 g, 1204 mmol) en tolueno (6.000 ml) y se anadio acetato amonico (1.855 g, 24.096 mmol) a la solucion. La mezcla se agito durante 12 horas a 100°C. La solucion se diluyo con acetato de etilo (1.000 ml) y se lavo con agua (2 x 500 ml). La capa inorganica se extrajo con acetato de etilo (2 x 500 ml). Las capas organicas combinadas se concentraron a vado. El residuo se trituro en CH3CN (300 ml) durante 0,5 horas a 0°C, dando como 5 resultado el compuesto SC-2 (140 g, 26% de rendimiento basado en 1-(6-bromonaftalen-2-il)etanona). Metodo A; Rt: 1,28 min. m/z: 442,1 (M+H)+ Masa exacta: 441,1

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Se anadio dioxano/HCl (750 ml) a temperatura ambiente a la solucion de compuesto SC-2 (75 g, 170 mmol) y la mezcla se agito durante 1 hora. La mezcla se filtro para obtener el compuesto SC-3 (73 g).

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Se anadieron HOBt (36,4 g, 270 mmol) y EDCI (51,6 g, 270 mmol) a temperatura ambiente a una solucion de acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (47,2 g, 270 mmol) en CH3Cn (1.200 ml). La mezcla se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente y se anadio SC-3 (73 g). A continuacion, la solucion se enfrio hasta 0°C, se anadio diisopropiletilamina (75 g, 578 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche. La 15 mezcla se diluyo con CH2Cl2 (1500 ml) y se lavo con NaOH acuoso (0,5 N, 1.000 ml). La capa organica se lavo con salmuera. La capa organica combinada se seco y se concentro. El producto en bruto obtenido se lavo con CH3CN, dando como resultado el compuesto SC-4 (80 g).

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Se anadio Pd(PPh3)4 (11,6 g, 15,8 mmol) a una mezcla de compuesto SC-2 (140 g, 316,5 mmol), 20 bis(pinacolato)diboro (160,7 g, 633 mmol), KOAc (62 g, 633 mmol) y tolueno (4.000 ml) bajo nitrogeno. La mezcla de reaccion se agito durante 15 h a 85°C. Despues de enfriar, se anadio CH2Cl2 y la mezcla se lavo con Na2CO3, seguido por salmuera. El agua se extrajo con CH2Cl2 (3 x 900 ml). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a vado. El residuo se recristalizo en un disolvente mixto de hexano/ i- Pr2O (3/2, 2 x 150 ml) dando como resultado el compuesto SC-5 (105 g, 63% de rendimiento). Metodo A3; Rt: 1,35 25 min. m/z : 490,1 (M+H)+ Masa exacta: 489,3

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Se anadieron a tolueno (1.500 ml) SC-4 (69 g, 138,2 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (70,2 g, 276,4 mmol) y CH3C0OK (27,1 g, 276,4 mmol), seguido por Pd(dppf)Cl2 (5 g, 6,9 mmol) bajo N2 a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito a 80°C durante la noche. Despues de enfriar, se anadio 5 acetato de etilo (1.000 ml) y la mezcla se lavo con NaHCO3 saturado (1.500 ml) y salmuera. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre Na2SO4 y, despues de la filtracion, se concentro a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatografia en columna dando como resultado el compuesto SC- 6 (52 g, 68% de rendimiento). Metodo C; Rt: 4,01 min. m/z : 547,3 (M+H)+ Masa exacta: 546,3

SFC: Columna: (AS)-H 150 mm x 4,6 mm; 5um. Flujo: 3 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 10 de 5 a 40% de B en A: Rt: 3,11 min.

SFC: Columna: OD-H 50 mm x 4,6 mm; 3um. Flujo: 4 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); de 5 a 40% de B en A: Rt: 1,34 min.

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Se disolvio 1-(6-bromonaftalen-2-il)-2-cloroetanona (5,53 g, 18,79 mmol) en acetonitrilo (15 ml). Se anadieron PR-1 15 (4,27 g, 18,79 mmol) y NEt3 (6,65 g, 65,76 mmol) 25°C y la mezcla se agito durante 5 horas. Las materias volatiles

se retiraron a vado, dando como resultado un residuo que se uso como tal. Una solucion del residuo obtenido (10 g, 18,79 mmol) se disolvio en tolueno seco (50 ml) y se agito a 20°C. Se anadio NH4OAc (29 g, 375,8 mmol) y la mezcla se agito durante 2 horas a 100°C. La solucion se diluyo con acetato de etilo (50 ml) y se lavo con H2O (40 ml). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y, despues de la filtracion, las materias volatiles se retiraron a vado. El 20 residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (Eluyente en gradiente: eter de petroleo / acetato de etilo de 100/1 a 1/100). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se retiro a vado, dando como resultado el compuesto SC-7 (6,5 g) Metodo A2; Rt: 0,94 min. m/z : 456,0 (M+H)+ Masa exacta: 455,1

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El compuesto SC-7 (6,5 g, 14,3 mmol) se disolvio en CH2Cl2 (30 ml) y se agito a 20°C. Se anadio gota a gota a 0°C HCl 4 N/dioxano (30 ml). A continuacion, la mezcla se agito a 25°C durante 1 hora despues de lo cual las materias volatiles se retiraron a vado, dando como resultado un residuo (8 g). Metodo A2; Rt: 0,84 min. m/z : 353,9 (M+H)+ Masa exacta: 353,1. Este residuo se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. Una mezcla del residuo obtenido (8 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (5,5 g, 31,5 mmol), EDCI (6,0 g, 31,5 mmol) y HOBt (4 ml, 31,5 mmol) en CH2Cl2 (80 ml) se agito a 0°C y se anadio DIPeA (18,48 g, 143 mmol). La mezcla se agito a 20°C durante 12 horas. La mezcla se diluyo con CH2Cl2 (20 ml) y H2O (50 ml). La capa organica se separo y se lavo con NaHCO3 acuoso saturado (50 ml), salmuera y se seco sobre Na2SO4. Las materias volatiles se retiraron a vado y el residuo resultante se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (eluyente: eter de petroleo / acetato de etilo de 100/1 a 1/100). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se retiro a vado, dando como resultado el compuesto SC-8 (4,6 g). Metodo A2; Rt: 1,00 min. m/z : 512,9 (M+H)+ Masa exacta: 512,1

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Una mezcla de compuesto SC-8 (4,6 g, 8,99 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (4,57 g, 17,99 mmol), Pd(dppf)Cl2 (0,66 g, 0,9 mmol) y KOAc (1,76 g, 17,99 mmol) en dioxano (50 ml) se agito durante 2 horas a 100°C bajo una atmosfera de N2. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro a vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (eluyente en gradiente: eter de petroleo / acetato de etilo de 100/1 a 1/100). La fraccion que contema producto se recogio y el disolvente se retiro a vado, dando como resultado el compuesto SC-9 (4,8 g). Metodo a2; Rt: 0,98 min. m/z : 559,3 (M+H)+ Masa exacta: 558,3

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al compuesto PR-2 (30 g, 123 mmol) en THF (120 ml). La mezcla se agito a reflujo durante 5 horas. La mezcla se vertio en NH4Cl acuoso (400 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La fase organica se concentro a vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (hexano:acetato de eter=10:1) dando como resultado el compuesto PR-3 (8,4 g).

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Se anadio NaOH (5,85 g, 146 mmol) a una solucion agitada de compuesto PR-3 (8,4 g, 29,3 mmol) en THF/H2O (100 ml, 1:1). La mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 1 hora y se trato con acetato de etilo (20 ml). La capa inorganica combinada se separo, se ajusto hasta pH=4 con HCl 2 N y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado dando como resultado el compuesto PR-4 (5,9 g).

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Se anadio Cs2CO3 (10,6 g, 32,4 mmol) a una solucion agitada de compuesto PR-4 (5,9 g, 21,6 mmol) en DMF (100 ml) y la mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 0,5 horas. A continuacion, se anadieron a la mezcla 1-(6- bromonaftalen-2-il)-2-cloroetanona (9,2 g, 32,4 mmol) y Nal (4,86 g, 32,4 mmol) y la agitacion se continuo a 20°C durante 2 horas. La mezcla se lavo con agua (90 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml), las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna (hexano:acetato de eter=5:1) dando como resultado un residuo (5,9 g).

Se anadio NH4OAc (26,2 g, 32,3 mmol) a una solucion agitada del residuo obtenido, obtenido como se describe anteriormente, (8,4 g, 16,2 mmol) en xileno (80 ml) en un autoclave y la mezcla de reaccion se agito a 160°C durante 1 hora. La mezcla se enfrio, se lavo con agua (90 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml); la capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2So4 y se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna (hexano:acetato de eter=2:1) dando como resultado el compuesto SC-10 (5,2 g). Metodo A2; Rt: 1,07 min. m/z : 500,0 (M+H)+ Masa exacta: 499,1

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Se anadio gota a gota TMSOTf (9,2 g, 40,6 mmol) a una solucion agitada de compuesto SC-10 (5,2 g, 10,4 mmol) y lutidina (2,2 g, 20,8 mmol) en CH2Cl2seco (100 ml) a 0°C. La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 30 minutos, se desactivo con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml); las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vado dando como resultado el compuesto SC-11 (3,0 g) como un solido blancuzco. Metodo a2; Rt: 0,98 min. m/z : 401,9 (M+H)+ Masa exacta: 401,1.

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Se anadio NEt3 (15,2 g, 15 mmol) a una solution agitada de compuesto SC-11 (3,0 g), acido (S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (1,57 g, 9 mmol), EDCI (1,73 g, 9 mmol) y HOBt (0,12 g, 0,9 mmol) en CH2CI2 seco (50 ml). La mezcla de reaction se agito a 20°C durante 2 horas, se desactivo con Na2CO3 acuoso 5 saturado y se extrajo con CH2Q2 (3 x 10 ml); la capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vacfo. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (hexano:acetato de eter=1:1) dando como resultado un residuo solido blanco (2,2 g). Se anadieron 4,4,4',4',5,5,5',5'- octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,5 g, 5,93 mmol) y KOAc (0,77 g, 7,9 mmol) a una solucion agitada de este residuo (2,2 g) y Pd(dppf)Cl2 (0,2 g, 0,395 mmol) en dioxano seco (25 ml). La mezcla de reaccion se agito a reflujo 10 durante 20 minutos, se desactivo con agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2sO4 y se concentro a vacfo. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (hexano: acetato de eter=1:1) dando como resultado el compuesto SC-12 (1,9 g) como un solido. Metodo A2; Rt: 0,97 min. m/z : 605,1 (M+H)+ Masa exacta: 604,3

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15 El compuesto PR-5 (15,7 g, 63,1 mmol) se disolvio en CH2Cl2 seco (250 ml) y se anadio a la solucion DMF (1,5 ml). Se anadio gota a gota a temperatura ambiente cloruro de oxalilo (13,5 ml, 157,5 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 0,5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro a vacfo y el residuo (PR-6, 22 g) se uso directamente sin purification adicional.

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20 Se anadieron 2-amino-4-bromobenzamida (7,6 g, 35,3 mmol) y NaOH 1 N (ac. 85 ml, 85 mmol) a la solucion de compuesto PR-6 (bruto 22 g) en THF seco (250 ml). La mezcla se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Las capas organicas combinadas se lavaron con NaOH 1 N en agua (15 ml), salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vacio dando como resultado un residuo en bruto (17 g). El residuo en bruto, obtenido de un modo similar al descrito anteriormente (25 g), y Na2CO3

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(17,8 g, 168 mmol) en etanol (250 ml) y H2O (250 ml) se sometieron a reflujo 2 horas. El disolvente organico se retiro a vado. La mezcla se extrajo con diclorometano (2 x 200 ml). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se purificaron mediante cromatografia en columna de gel de sflice (eluyente: acetato de etilo). Las fracciones deseadas se evaporaron hasta sequedad. El residuo obtenido se agito en acetato de etilo (50 ml), el precipitado se separo por filtracion y se lavo con acetato de etilo dando como resultado el compuesto QA-1 (17 g).

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El compuesto QA-1 (8 g, 18,6 mmol) se disolvio en HOAc (80 ml) y se anadio HBr al 40% (40 ml). La mezcla se agito a 80°C durante la noche. La mayoria del disolvente se retiro a vado. El precipitado se separo por filtracion y se lavo con metil-t-butil-eter. El solido se coevaporo con tolueno (2 x 20 ml) dando como resultado un residuo en bruto (6,5 g). A continuation, parte de este residuo (6,4 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metil-butanoico (4,5 g, 25,6 mmol), EDCI (4,9 g, 25,6 mmol) y HOBt (1,15 g, 8,5 mmol) en CH2Cl2 (120 ml) se enfriaron hasta 0°C. Se anadio DIPEA (14,8 ml, 85,0 mmol). La mezcla se agito durante 1,5 horas a 20°C. La capa organica se lavo con NaHCO3 acuoso saturado (100 ml) y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (eluyente en gradiente: eter de petroleo:acetato de etilo: de 100:0 a 0:100) dando como resultado el compuesto QA-2 (3,3 g).

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El compuesto PR-7 (7,0 g, 23,21 mmol) en THF (70 ml) se agito a 0°C. Se anadieron gota a gota dicloruro de oxalilo (7 ml, 46,2 mmol) y DMF (2 gotas) y la mezcla se agito durante 10 min. a 0°C. La mezcla se agito y se sometio a reflujo durante 1 hora. La mezcla se enfrio y se evaporo a vado, dando como resultado el compuesto PR-8 (7 g)

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Se anadieron 2-amino-4-bromobenzamida (4,5 g, 21 mmol) y NaOH 1 N (42 ml, 42 mmol) a la solution de compuesto PR-8 (7 g, 21 mmol) en THF (70 ml). La mezcla se agito durante 1 hora a 25°C. La mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las capas organicas se recogieron, se lavaron con NaOH 0,5 N, salmuera, se secaron y se concentraron a vado, dando como resultado un residuo en bruto (9 g). Este residuo (9 g) y Na2CO3 (5,7 g, 54 mmol) en H2O (200 ml) y THF (200 ml) se agitaron y se sometieron a reflujo durante 2 horas. La mezcla se concentro a vado y se extrajo con CH2Cl2 (2x), se lavo con salmuera, se seco y se evaporo a vado. El residuo se disolvio en CH2Cl2 y se lavo con HCl 1 N (3 x), salmuera, se seco y se evaporo a vado, dando como resultado QA-3 (4,4 g). Metodo A2; Rt: 1,27 min. m/z=: 484,0 (M+H)+ Masa exacta: 483,1

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Se anadieron a 25°C 1,3-propanodiol (22 g, 288-mmol), ortoformiato de trietilo (18,3 g, 123,6 mmol) y acido tolueno- 4-sulfonico (1 g, 0,2 mmol) al compuesto PR-2 (10 g, 41,2 mmol) en THF (100 ml). La mezcla se agito a reflujo durante 2 horas. La mezcla se vertio en NH4G acuoso (400 ml), se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml) y se separo. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. La fase organica se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (hexano:acetato de eter=5:1) y el compuesto obtenido (3,8 g,) se disolvio en THF/H2O (40 ml, 1:1). Se anadio NaOH (2,52 g, 63 mmol), la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 hora y se trato con acetato de etilo (20 ml). La capa inorganica combinada se separo, el pH se ajusto hasta 4 con HCl 2 N y se extrajo con CH2O2 (3 x 20 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado dando como resultado el compuesto PR-9 (5,9 g).

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Se anadio gota a gota dicloruro de oxalilo (2,5 ml, 13,11 mmol) a una mezcla del compuesto PR-9 (2,5 g, 8,74 mmol), 2-amino-4-bromobenzamida (2,5 g, 10,49 mmol) en diclorometano (20 ml) y piridina (20 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se retiro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna (eter de petroleo:eter de acetato=1:1). El compuesto de amida intermedio obtenido (0,98 g), Na2CO3 (1,08 g, 10,15 mmol), H2O (5 ml) y CH3CH2OH (5 ml) se agitaron durante 2 horas bajo reflujo. La mayoria del CH3CH2OH se retiro a vado y el residuo obtenido se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se lavo con t-butil-metil-eter dando como resultado el compuesto QA-4 (0,89 g).

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Se anadio gota a gota TMSOTf (1,7 g, 7,68 mmol) a una solucion agitada de compuesto QA-4 (0,89 g, 1,92 mmol) y lutidina (0,41 g, 3,84 mmol) en CH2Chseco (10 ml) a 0°C. La mezcla de reaccion se agito a 0 °C durante 30 minutos, se desactivo con NH4O acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo; las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vado. El residuo obtenido se uso como tal en la siguiente reaccion (0,3 g). Metodo A2; Rt: 0,68 min. m/z=368,0 (M+H)+ Masa exacta: 367,0. Se anadio NEt3 (0,5 ml, 2,46 mmol) a la solucion del residuo obtenido anteriormente (0,3 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- metilbutanoico (0,22 g, 1,23 mmol), HOBt (0,17 g, 1,23 mmol) y EDCI (0,24 g, 1,23 mmol) en diclorometano (15 ml) en un bano de agua de hielo. La mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. A

continuation, la mezcla se diluyo con diclorometano (20 ml) y se lavo con NaHCO3 saturado, salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna (hexano:acetato de eter=1:1), dando como resultado el compuesto QA-5 (0,2 g). Metodo A2; Rt: 1,14 min. m/z=547,1 (M+Na)+ Masa exacta: 524,1

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Se anadio gota a gota cloruro de oxalilo (2,9 ml, 33 mmol) a la mezcla de compuesto PR-1 (5 g, 22 mmol), 2-amino- 4-bromobenzamida (4,7 g, 22 mmol) y piridina (50 ml). La mezcla se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se retiro a vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografia (eter de petroleo:eter de acetato=5:1) dando como resultado un producto intermedio (3,6 g). Metodo A2; Rt: 1,15 min. m/z=:447,7 (M+Na)+ 10 Masa exacta: 425,1. El producto intermedio obtenido anteriormente (3,6 g), Na2CO3 (2,7 g. 25,4 mmol), H2O (20 ml) y CH3CH2OH (20 ml) se agitaron durante 2 horas bajo reflujo. La mayoria del CH3CH2OH se retiro a vado. El residuo se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se lavo con t-butil-metil-eter dando como resultado el compuesto QA-6 (3,4 g)

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15 El compuesto QA-6 (3,4 g, 8,4 mmol) se disolvio en diclorometano (30 ml) y se anadio gota a gota HCl/dioxano (3 ml) a la mezcla a 0°C. La mezcla de reaccion se agito durante 5 horas a temperatura ambiente. El disolvente se retiro a vado. El residuo se lavo con t-butil-metil-eter y el residuo en bruto obtenido se uso como tal (2,7 g). Se anadio DIPEA (14 ml, 78,8 mmol) a una solution de este material en bruto (2,7 g), acido (S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (2,75 g, 15,76 mmol), HOBt (2,42 g, 17,33 mmol) y EDCI (3,32 g, 17,33 20 mmol) en diclorometano (20 ml) enfriada en un bano de agua de hielo. La mezcla de reaccion se agito durante 12 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluyo con diclorometano (20 ml), se lavo con NaHCO3 saturado, salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (hexano:acetato de eter=1:1), dando como resultado el compuesto QA-7 (2,5 g). SFC: Columna: AD-H 250 mm x 4,6 mm; 5um. Flujo: 2,35 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); de 5 25 a 40% de B en A: Rt: 9,99 min.

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El compuesto PR-10 (2,0 g, 7,3 mmol) en CH2CI2 (20 ml) se agito a 0°C. Se anadieron gota a gota dicloruro de oxalilo (2,3 g, 18,2 mmol) y DMF (2 gotas) y la mezcla se agito durante 10 minutos a 0°C. La mezcla se agito durante 1 hora a 20°C. La mezcla se enfrio y se evaporo a vado. El residuo se diluyo dos veces con tolueno (2 x 10 ml) y se evaporo, dando como resultado un residuo (PR-11, 2,5 g).

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Se anadieron 2-amino-4-bromobenzamida (1,57 g, 7,3 mmol) y NaOH 1 N (14,6 ml, 14,6 mmol) a la solucion de compuesto PR-11 (2,5 g) en THF (30 ml). La mezcla se agito durante 1 hora a 25°C. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2x). Las capas organicas se combinaron, se lavaron con NaOH 0,5 N, salmuera, se secaron y se concentraron a vado, dando como resultado un residuo ( 3,5 g) que se agito con Na2CO3 (2,32 g, 21,9 mmol) en H2O (50 ml) y THF (50 ml) y se sometio a reflujo durante 2 horas. Las materias volatiles se retiraron a vado. La mezcla se extrajo con CH2G2 (2x), se lavo con salmuera, se seco y las materias volatiles se retiraron a vado. El residuo se disolvio en CH2Cl2 y se lavo con HCl 1 N (3x), salmuera, se seco y las materias volatiles se retiraron a vado, dando como resultado el compuesto QA-8 (1,5 g). Metodo A2; Rt: 1,15 min. m/z=:453,9 (M+H)+ Masa exacta: 453,1.

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Se anadio gota a gota ClCOCOCl (44,4 ml, 510,2 mmol) a la mezcla de PR-12 (100,6 g, 374 mmol), 2-amino-4- bromobenzamida (73,2 g, 340 mmol) y piridina (760 ml) bajo nitrogeno a 0°C. La mezcla se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. El disolvente se retiro a vado. Se anadio NaHCO3 saturado al residuo y la mezcla resultante se extrajo mediante acetato de etilo tres veces. Las capas organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, salmuera y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa (CH2Ch:MeOH=50:1) dando como resultado un compuesto de amida intermedio (50,6 g). Metodo A2; Rt: 1,15 min. m/z=:490,1 (M+Na)+ Masa exacta: 467,1. Una solucion del producto intermedio obtenido anteriormente (50,61 g), Na2CO3 (34,51 g, 325,6 mmol), H2O (300 ml) y CH3CH2OH (300 ml) se agito durante 3 horas a reflujo. Se retiro a vado EtOH y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 300 ml). Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vado. El residuo obtenido se lavo con t-butil-metil-eter dando como resultado el compuesto Qa-9 (39,2 g).

Metodo A2; Rt: 1,37 min. m/z= 448,1 (M+H)+ Masa exacta: 447,1.

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Sr disolvio QA-9 (39,2 g, 87,5 mmol) en diclorometano (400 ml). Se anadio gota a gota HCl/dioxano (470 ml) a la mezcla a 0°C. La mezcla de reaction se agito durante 3,5 horas a temperatura ambiente. El disolvente se retiro cuidadosamente a vatio. El residuo obtenido se lavo con t-butil-metil-eter, dando como resultado un residuo (30,8 g) Metodo A2; Rt: 0,92 min. m/z=:348,1 (M+H)+ Masa exacta: 347,1. Se anadio DIPEA (54,2 ml, 308 mmol), a 0°C, a una solution del residuo anterior (30,84 g, 61,6 mmol), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (11,9 g, 67,8 mmol) y HBTU (35,0 g, 92,4 mmol) en diclorometano (265 ml) bajo atmosfera de nitrogeno. A continuation, la mezcla de reaccion se agito durante 3 horas bajo nitrogeno a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se diluyo con diclorometano y se lavo con NaHCO3 saturado, salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vatio. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna (eter de petroleo:acetato de etilo=1:1), dando como resultado el compuesto QA-10 (31,1 g). Metodo A2; Rt: 1,28 min. m/z=507,2 (M+H)+ Masa exacta: 506,1

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mezcla de 1-(6-bromonaftalen-2-il)-2-cloroetanona (15 g, 55,3 mmol) en DMF (100 ml). Posteriormente, la mezcla de reaccion se calento hasta 40-45°C y se agito durante 1-2 horas a esta temperatura. Se anadio acetato de etilo (100 ml) y la mezcla se lavo con NaHCO3 saturado y salmuera. La capa organica se separo, se seco y a continuacion se concentro a vatio, dando como resultado un residuo. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna dando como resultado (2S,3aS,7aS)-2-(2-(6-bromonaftalen-2-il)-2-oxoetil)-hexahidro-1H-indol-1,2(2H,3H)- dicarboxilato de 1-terc-butilo (28 g) como un aceite. Se anadio CH3COONH4 (45,9 g, 596,2 mmol) a este producto intermedio (28 g, 54,2 mmol) en tolueno (300 ml). La mezcla se calento hasta 75-85°C. La mezcla de reaccion se agito durante 12 horas a 75-85°C. La solucion se diluyo con acetato de etilo y se lavo con NaHCO3 saturado y salmuera. La capa organica se concentro a vatio dando como resultado el compuesto SC-13 (16 g). Metodo A2; Rt: 1,14 min. m/z=: 496,2 (M+H)+ Masa exacta: 495,2

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Se anadio dioxano/HCl a temperatura ambiente a la solucion del compuesto SC-13 (16 g, 32,3 mmol). La mezcla se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se concentro a vatio. Se anadio CH2Ch (100 ml) al residuo

obtenido y la mezcla se lavo con Na2CO3 saturado. La capa organica se separo y se concentro a vado, dando como resultado un producto intermedio desprotegido (14 g). Se anadieron a temperatura ambiente HOBt (6,1 g, 45,3 mmol) y EDCI (8,6 g, 45,3 mmol) a una solucion de acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (7,9 g, 45,3 mmol) en CH3CN (100 ml). La mezcla se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente y a continuacion se 5 anadio el producto intermedio desprotegido obtenido anteriormente (14 g). Posteriormente, la solucion se enfrio hasta 0°C y se anadio DIPEA (12,5 g, 97,2 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyo con CH2G2 (200 ml) y se lavo con Na2CO3 acuoso (0,5 N, 100 ml) y salmuera. La capa organica se seco y se concentro, dando como resultado SC-14 (14 g)

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10 El compuesto SC-14 (14 g, 25,3 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (12,9 g, 276 mmol) y CH3COOK (4,96 g, 50,6 mmol) se agitaron en tolueno (100 ml). Se anadio Pd(dppf)Cl2 bajo atmosfera de N2 a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito a 80°C durante la noche. Despues de enfriar, se anadio acetato de etilo (200 ml) y la mezcla se lavo con NaHCO3 saturado (200 ml) y salmuera. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vado. El 15 residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna, dando como resultado el compuesto SC-15 (15 g). Metodo A2; Rt: 1,17 min. m/z= 601,4 (M+H)+ Masa exacta: 600,4

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Se anadio gota a gota dicloruro de oxalilo (2,5 ml, 13,11 mmol) a la mezcla de compuesto PR-4 (3,3 g, 12 mmol), 2- amino-4-bromobenzamida (3,1 g, 14,5 mmol) en diclorometano (30 ml) y piridina (30 ml). La mezcla se agito durante 20 1 hora a temperatura ambiente. El disolvente se retiro a vado y el residuo obtenido se purifico mediante

cromatografia (eter de petroleo:eter de acetato=1:1) dando como resultado una amida intermedia (0,7 g). Esta amida intermedia (0,7 g), Na2CO3 (0,82 g, 7,5 mmol), H2O (10 ml) y CH3CH2OH (10 ml) se agitaron durante 2 horas a reflujo. Despues de enfriar, la mayona del CH3CH2OH se retiro a vado. El residuo se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se lavo con t-butil-metil-eter dando como 25 resultado el compuesto QA-11 (0,55 g). Metodo A2; Rt: 1,04 min. m/z=: 454,0 (M+H)+ Masa exacta: 453,1

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Se anadio gota a gota TMSOTf (1,1 g, 4,8 mmol) a una solucion agitada de compuesto QA-11 (0,55 g, 1,2 mmol) y 2,6-lutidina (0,25 g, 2,4 mmol) en CH2Cl2 seco (5 ml) a 0°C. La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 30 minutos, se desactivo con NH4Cl acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vado dando como resultado un residuo 5 (0,56 g). Se anadio NEt3 (0,24 g, 2,4 mmol) a la solucion del residuo obtenido anteriormente (0,56 g), acido (S)-2-

(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,29 g, 1,4 mmol), HOBt (0,1 g) y EDCI (0,27 g, 1,4 mmol) en CH2Cl2 (10 ml) en un bano de agua de hielo. La mezcla de reaccion se agito durante 2 horas a temperatura ambiente. A continuacion, la mezcla se diluyo con diclorometano (20 ml) y se lavo con NaHCO3 saturado y salmuera y finalmente se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de 10 gel de sflice (hexano:acetato de eter=1:1), dando como resultado el compuesto QA-12 (0,3 g). Metodo A2; Rt: 1,11 min. m/z=: 511,1 (M+H)+ Masa exacta: 510,1.

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Se anadio Cs2CO3 (8,12 g, 26,9 mmol) a una solucion agitada de PR-13 (4,32 g, 17,9 mmol) en DMF (60 ml). La mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 0,5 horas. A continuacion, se anadieron 1-(6-bromonaftalen-2-il)-2- 15 cloroetanona (7,2 g, 26,85 mmol) y Nal (3,75 g, 26,85 mmol) y la mezcla se agito adicionalmente a 20°C durante 2 horas. La mezcla se lavo con agua (90 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml), las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna (hexano:acetato de eter=5:1) para proporcionar (S)-6-(2-(6-bromonaftalen-2-il)- 2-oxoetil)-5-azaespiro[2,4]heptano-5,6-dicarboxilato de 5-terc-butilo (6,5 g). Se anadio NH4OAc (21,6 g, 267 mmol) a 20 una solucion agitada de este compuesto (6,5 g) en tolueno (60 ml) y a continuacion la mezcla de reaccion se agito a 80°C durante 12 horas. La mezcla se lavo con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml); la capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna (hexano:acetato de etilo=2:1) dando como resultado el compuesto SC-16 (3,2 g). Metodo A2; Rt: 1,08 min. m/z=: 470,2 (M+H)+ Masa exacta: 469,1.

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El compuesto SC-16 (3,2 g, 6,85 mmol) en HCl/dioxano se agito durante 1 hora. La mezcla se concentro hasta sequedad a vado y se extrajo con CH2Cl2. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a vado dando como resultado un residuo (2,8 g). Se anadio NEt3 (1,54 g, 15,26 mmol) a este residuo (2,8 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (1,63 g, 9,16 mmol), EDCI (1,75 g, 30 9,16 mmol) y HOBt (1,24 g, 9,16 mmol) en CH2Cl2 seco (30 ml). La mezcla de reaccion se agito a 20°C durante 2

horas, se desactivo con Na2CO3 acuoso saturado y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 20 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna (hexano:acetato de eter=1:1) para proporcionar el compuesto SC-17 (3,2 g). Metodo A2; Rt: 1,03 min. m/z=: 527,2 (M+H)+ Masa exacta: 526,1

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Se anadieron 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,92 g, 7,32 mmol) y KOAc (1,2 g, 12,2 mmol) a una solucion agitada de SC-17 (3,2 g, 6,1 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (0,4 g, 0,61 mmol) en dioxano seco (30 ml). La mezcla de reaccion se agito a reflujo durante 20 minutos, se desactivo con agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 30 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo

se purifico mediante cromatografia en columna (hexano:acetato de etilo=1:1) dando como resultado el compuesto SC-18 (2,7 g).

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Una mezcla de compuesto QA-5 (0,2 g, 0,38 mmol), compuesto SC-9 (0,19 g, 0,32 mmol), Pd(dppf)Cl2 (0,15 g, 10 0,032 mmol), Na2CO3 (5 ml, 2 N) y THF (10 ml) se agito durante 0,5 horas a 80°C bajo N2. Las materias volatiles se

retiraron a vado. Se anadieron diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). La capa organica se separo y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado y el producto en bruto obtenido se purifico mediante cromatografia de fiquidos de alto rendimiento (Columna: Diamonsil C18 150*20mm*5 um. Metodo: de 20 a 40% de B en A en 14 minutos. A: H2O+TFA al 0,1% B: MeCN. Caudal (ml/min) :40). Las fracciones puras se recogieron y se neutralizaron mediante 15 NaHCO3 saturado. El disolvente organico se retiro a vado. La capa inorganica se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Las capas organicas combinadas se concentraron a vado dando como resultado el compuesto 1 (60 mg) como un polvo blancuzco. Metodo J; Rt: 4,66 min. m/z :875,5 (M+H)+ Masa exacta: 874,4 ; SFC: Columna: aS-H 250 mm x

4,6 mm; 5um. Flujo: 2,5 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 4,32 min.

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Pd(dppf)Cl2,2N Na2C03,THF reflu jo

Se anadio Na2CO3 (0,5 ml, 2N) a una solucion agitada de compuesto SC-12 (30 mg, 0,05 mmol), compuesto QA-12 (30 mg, 0,06 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (4 mg, 0,006 mmol) en THF seco (1 ml). La mezcla de reaccion se agito a reflujo durante 20 min., se desactivo con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 ml), la capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia de liquidos de alto rendimiento (Columna: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um. Metodo: de 30 a 50% de B en A en 12 minutos. A: H2O+TFA al 0,1% B: MeCN. Caudal (ml/min): 25). Las fracciones puras se recogieron y se neutralizaron con NaHCO3 saturado. El disolvente organico se concentro a vado. El precipitado se filtro, se lavo con H2O (10 ml) y se seco bajo alto vado, dando como resultado el compuesto 2 (20 mg). Metodo J; Rt: 4,62 min. m/z: 907,7 (M+H)+ Masa exacta: 906,4; SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5um. Flujo: 2,35 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); de 5% a 40% de B en A,: Rt: 9,88 min; SFC: Columna: OD-H 150 mm x 4,6 mm; 5um. Flujo: 2,35 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 8,34 min

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Se anadio Na2CO3 (2 ml, 2 N) a una solucion agitada de compuesto QA-7 (160 mg, 0,34 mmol), SC-9 (223 mg, 0,4 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (4 mg, 0,006 mmol) en THF seco (4 ml). La mezcla de reaccion se agito a reflujo durante 20 minutos, se desactivo con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 ml), la capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia de liquidos de alto rendimiento (Columna: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um, Caudal (ml/min): 40 Fase movil: A: H2O +TFA al 0,1% B: MeCN, Gradiente: 25-55%). Las fracciones puras se recogieron y se neutralizaron mediante NaHCO3 saturado. El disolvente organico se concentro a vado. El precipitado se filtro, se lavo con H2O (10 ml) y se seco bajo alto vado dando como resultado el producto compuesto 3 (72 mg) como un solido amarillo. Metodo H; Rt: 3,39 min. m/z: 815,6 (M+H)+ Masa exacta: 814,4; SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5um. Flujo: 2,35 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 3,40 min.; SfC: Columna: Od-H 250 mm x

4,6 mm; 5um. Flujo: 2,35 ml/min., Fase movil: A: cO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A: Rt: 8,16 min.

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Una mezcla de compuesto QA-7 (0,184 g, 0,4 mmol), compuesto SC-12 (0,2 g, 0,33 mmol), Pd(dppf)Cl2 (0,01 g, 0,014 mmol), Na2CO3 (5 ml, 2N) y THF (10 ml) se agito durante 0,5 horas a 80°C bajo N2. Las materias volatiles se retiraron a vado. Se anadieron diclorometano (20 ml) y agua (10 ml). La capa organica se separo y se seco sobre 5 Na2SO4. El disolvente se retiro a vado y el residuo obtenido se purifico mediante cromatografia de Kquidos de alto

rendimiento (Columna: Diamonsil C18 150*20mm*5 um. Metodo: de 20 a 40% de B en A en 14 minutos. A: H2O+TFA al 0,1% B: MeCN. Caudal (ml/min): 40). Las fracciones puras se recogieron y se neutralizaron mediante NaHCO3 saturado. El disolvente organico se retiro a vado. La capa inorganica se extrajo con acetato de eter (3 x 10 ml). Las capas organicas combinadas se concentraron a vado dando como resultado el compuesto 4 (72 mg) como 10 un polvo blancuzco. Metodo J; Rt: 4,66 min. m/z :861,7 (M+H)+ Masa exacta: 860,4; SFC: Columna: oJ-H 250 mm x

4,6 mm; 5um. Flujo: 2,35 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: iProH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 3,68 min.

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Se anadio Na2CO3 (10 ml, 2N) a una solucion agitada de compuesto SC-12 (250 mg, 0,41 mmol), compuesto QA-2 (223 mg, 0,496 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (20 mg, 0,395 mmol) en THF seco (20 ml). La mezcla de reaccion se agito a 15 reflujo durante 20 minutos, se desactivo con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml), la capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia de fiquidos de alto rendimiento (Columna: Phenomenex Synergi C18 200*30mm*4um. Metodo: de 31 a 51% de B en A en 12 minutos. A: H2O+TFA al 0,1% B: MeCN. Caudal (ml/min): 40). Las fracciones puras se recogieron y se neutralizaron con NaHCO3 saturado. El disolvente organico se concentro a vado. El 20 precipitado se filtro, se lavo con H2O (10 ml) y se seco bajo alto vado dando como resultado el compuesto 5 (115 mg) como un solido. Metodo J; Rt: 4,65 min. m/z :849,5 (M+H)+ Masa exacta: 848,4; SFC: Columna: OJ-H 250 mm x

4,6 mm; 5um. Flujo: 2,5 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 10,1 min

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Una mezcla de compuesto SC-9 (1,0 g, 1,79 mmol), compuesto QA-3 (0,87 g, 1,79 mmol), Pd(PPh3)4 (0,21 g, 0,18 mmol) y Na2CO3 (1,52 g, 14,32 mmol) en tolueno/etanol/H2O=1:1:1 (30 ml) se agito durante 2 horas a 100°C bajo N2. Las materias volatiles se retiraron a vado. Se anadieron diclorometano (15 ml) y agua (10 ml). La capa organica se separo y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado. El residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna sobre gel de sflice (Eluyente: eter de petroleo / acetato de etilo de 100/1 a 1/100). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se concentro a vado dando como resultado el compuesto 6 (1,0 g). Metodo A; Rt: 1,02 min. m/z :834,5 (M+H)+ Masa exacta: 833,4;

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agitaron con Pd al 10%/C (humedo) (0,1 g) a 20°C; bajo atmosfera de hidrogeno [0,21 MPa (30 Psi)] durante 24 horas. El catalizador se separo por filtracion y el filtrado se concentro a vado. El residuo obtenido (1,0 g) se disolvio en CH2Cl2 (10 ml) y se agito a 20°C. Se anadio gota a gota a 0°C HCl 4 N/dioxano (10 ml) y la mezcla se agito a 25°C durante 1 hora. El disolvente se retiro a vado y el residuo obtenido, acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- metilbutanoico (0,46 g, 2,64 mmol), EDCI (0,51 g, 2,64 mmol) y HOBt (0,356 g, 2,64 mmol) en CH2Ch (10 ml) se agitaron a 0°C y se anadio DIPEA (1,55 g, 12 mmol). La mezcla se agito a 20°C durante 12 horas. La mezcla se diluyo con CH2Q2 (20 ml) y H2O (50 ml). La capa organica se separo y se lavo con NaHCO3 acuoso saturado (50 ml), salmuera y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (eluyente: eter de petroleo / acetato de etilo de 100/1 a 1/100). Las fracciones puras se

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recogieron y el disolvente se concentro a vado dando como resultado el compuesto 7 (0,15 g). Metodo I; Rt: 3,83 min. m/z :857,6 (M+H)+ Masa exacta: 856,4; SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5um. Flujo: 2,5 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 4,1 min.

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El compuesto QA-3 (0,5 g, 1 mmol), el compuesto SC-12 (0,63 g, 1 mmol), Pd(PPh3)4 (0,35 g, 0,3 mmol) y Na2CO3 (0,42 g, 4 mmol) en tolueno (5 ml), etanol (5 ml) y H2O (5 ml) se sometieron a reflujo bajo N2 durante 12 horas. El disolvente se retiro a vado. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (2x) y las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SO4. Despues de la retirada del disolvente a vado, el residuo obtenido se purifico mediante cromatografia en columna de gel de sflice (eluyente: eter de petroleo / EtOAc = 10/1 y a continuacion 1/100 v/v). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se concentro a vado, dando como resultado el compuesto 8 (0,55 g).

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El compuesto 8 (0,55 g, 0,63 mmol), Boc2O (0,27 g, 1,24 mmol) y trietilamina (0,19 g, 1,88 mmol) en CH3OH (10 ml) se agitaron con Pd al 10%/C (0,15 g) como un catalizador a 20°C bajo una atmosfera de hidrogeno [0,21 MPa (30 Psi)] durante 14 horas. El catalizador se separo por filtracion y el filtrado se concentro. El producto en bruto obtenido se disolvio en CH2Cl2 (5 ml). Se anadio a 0°C HCl 4 N/dioxano (5 ml). La mezcla se agito a 25°C durante 2 horas. El disolvente se retiro a vado. El residuo se coevaporo con tolueno (2 x 5 ml) dando como resultado 0,5 g de producto intermedio desprotegido. Este producto (0,5 g), acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,13 g, 0,74 mmol), EDCI (0,18 g, 0,94 mmol) y HOBt (0,042 g, 0,31 mmol) en CH2Cl2 (5 ml) se agitaron a 0°C. Se anadio DlPEA (0,4 g, 3,1 mmol). La mezcla se agito durante 2 horas a 20°C. La mezcla se lavo con H2O (2 x 5 ml) y salmuera (5 ml), se seco sobre Na2SO4 y la solucion obtenida se concentro hasta sequedad a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia de fiquidos de alto rendimiento (C18, eluyente: CH3CN/H2O de 15/85 a 35/65 con CF3COOH al 0,1% como tampon). Las fracciones puras se recogieron y la mezcla se basifico con NaHCO3 hasta pH=9. El disolvente organico se evaporo, el precipitado se separo por filtracion y se seco a vado, dando como resultado el compuesto 9 como un solido (0,12 g). Metodo H; Rt: 3,80 min. m/z : 903,6 (M+H)+ Masa exacta: 902,4 SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5um. Flujo: 2,35 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 3,68 min; 1H NMR (600 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 0,81 (d, J=6,6 Hz, 3 H), 0,86 (d, J=6,7 Hz, 3 H), 0,88 (d, J=6,5 Hz, 3 H), 0,94 (d, J=6,7 Hz, 3 H), 1,18 - 1,36 (m, 2 H), 1,46 (d, J=10,3 Hz, 1 H), 1,60 - 1,71 (m, 1 H), 1,72 - 1,80 (m, 2 H), 1,82 - 1,90 (m, 1 H), 1,92 - 1,98 (m, 1 H), 1,98 -2,06 (m, 2 H), 2,06 -2,16 (m, 1 H), 2,19 -2,28 (m, 1 H), 2,34 - 2,42 (m, 1 H), 2,46 (d, J=8,2 Hz, 2 H), 3,54 (s, 3 H), 3,55 (s, 3 H), 3,80 (d, J=11,2 Hz, 1 H), 3,88 (dd, J=9,4, 8,8 Hz, 1 H), 3,90 - 4,05 (m, 5 H), 4,07 (d, J=10,9 Hz, 1 H), 4,37 - 4,55 (m, 1 H), 4,75 (t, J=8,9 Hz, 1 H), 5,11 (t, J=8,4 Hz, 1 H), 7,35 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 7,55 (d, J=8,2 Hz, 1 H), 7,71 (s. an., 1 H), 7,75 (s, 1 H), 7,87 (s. an., 1 H), 7,92 (dd, J=8,3, 1,5 Hz, 1 H), 7,95 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 8,03 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 8,04 -8,10 (m, 1 H), 8,20 (d, J=8,2 Hz, 1 H), 8,24 - 8,34 (m, 2 H), 11,99 (s. an., 1 H), 12,40 (s, 1 H).

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Una mezcla de compuesto SC-9 (1,0 g, 1,79 mmol), compuesto QA-2 (0,8 g, 1,79 mmol), Pd(PPh3)4 (0,21 g, 0,18 mmol) y Na2CO3 (1,52 g, 14,32 mmol) en tolueno/etanol/H2O=1:1:1 (30 ml) se agito durante 2 horas a 100°C bajo N2. Las materias volatiles se retiraron a vado. Se anadieron diclorometano (100 ml) y agua (40 ml). La capa organica se 5 separo y se seco sobre Na2SO4. El disolvente se retiro a vado. Del polvo amarillo obtenido (1,0 g), parte (600 mg) se purifico mediante cromatograffa de ffquidos de alto rendimiento (Columna: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um. Metodo: De 20 a 50% de B en A en 11 minutos. A: H2O+TFA al 0,1% B: MeCN. Caudal (ml/min): 40). Las fracciones puras se recogieron y se neutralizaron mediante NaHCO3 saturado. El disolvente organico se retiro a vado. El precipitado se filtro, se lavo con H2O (10 ml) y se seco bajo alto vado, dando como resultado el 10 compuesto 10 como un polvo blancuzco (360 mg). Metodo H; Rt: 3,39 min. m/z : 803,4 (M+H)+ Masa exacta: 802,4; SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5um. Flujo: 2,35 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); de 5 a 40% de B en A,: Rt: 9,48 min

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El compuesto QA-8 (0,5 g, 1,1 mmol), el compuesto SC-12 (0,62 g, 1,1 mmol), Pd(PPh3)4 (0,38 g, 0,33 mmol) y 15 Na2CO3 (0,47 g, 4,4 mmol) en tolueno (5 ml), CH3CH2OH (5 ml) y H2O (5 ml) se sometieron a reflujo bajo N2 durante

12 horas. El disolvente se retiro a vado. La mezcla se extrajo con CH2Ch (2 x 20 ml) y las capas organicas se lavaron con salmuera y se secaron. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de gel de silice (eluyente: eter de petroleo / acetato de etilo = 10/1 y a continuacion 1/100 v/v). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se retiro a vado, dando como resultado el compuesto 11 (0,35 g).

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El compuesto 11 (0,35 g, 0,44 mmol), Boc2O (0,19 g, 0,88 mmol) y NEt3 (0,13 g, 1,32 mmol) en CH3OH (10 ml) se hidrogenaron con Pd al 10%/C (0,1 g) como un catalizador a 20°C [0,21 MPa (30 Psi)] durante 14 horas. Despues de terminar, el catalizador se separo por filtration y las materias volatiles se retiraron a vado, dando como resultado un residuo (0,3 g). Este residuo (0,3 g) se disolvio en CH2Cl2 (5 ml) y se anadio a 0°C HCl 4 M/dioxano (3 ml). La 25 mezcla se agito a 25°C durante 2 horas. El disolvente se retiro a vado y el residuo obtenido se diluyo dos veces con tolueno (2 x 5 ml) seguido por la retirada de tolueno, dando como resultado un residuo (0,3 g). Este residuo (0,3 g), acido (s)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (0,093 g, 0,53 mmol), EDCI (0,13 g, 0,66 mmol) y HOBt (0,030 g, 022 mmol) en CH2Ch (5 ml) se agitaron a 0°C. Se anadio DlPEA (0,28 g, 2,2 mmol) y la mezcla se agito durante 2 horas a 20°C. La mezcla se lavo con H2O (2 x 5 ml) y salmuera, se seco sobre Na2SO4 y las materias volatiles se 30 retiraron a vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa de ffquidos de alto rendimiento (C18, eluyente:

CH3CN / H2O de 15 / 85 a 35 / 65 con CF3COOH al 0,1% como tampon). Las fracciones puras se recogieron y la mezcla se basifico con NaHCO3 hasta pH=9. El disolvente organico se evaporo y el precipitado se filtro. El solido se seco a vado y a continuacion se purifico mediante cromatografia SFC (Chiralcel AD-H, 20 ^m; CO2 supercritico:MeOH, v/v, 200 ml/min). Las fracciones puras se recogieron y el disolvente se retiro a vado, dando 5 como resultado el compuesto 12 (0,06 g). Metodo H; Rt: 3,5 min. m/z :829,5 (M+H)+ Masa exacta: 828,4;

SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Flujo: 2,5 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: EtOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 3,67 min.

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Se anadio NaHCO3 (15 ml, 2N) a una solucion agitada de SC-18 (1,4 g, 2,45 mmol), QA-10 (1,49 g, 2,94 mmol) y 10 Pd(dppf)Cl2 (0,2 g, 0,245 mmol) en THF seco (30 ml). La mezcla de reaccion se agito a reflujo durante 20 minutos,

se desactivo con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia de fiquidos de alto rendimiento. (Columna: Diamonsil C18 250*50mm*10um. Metodo:. A: H2O+TFA al 0,1% B: CH3CN, De 25 a 40% de B en A en 17 minutos. Caudal (ml/min): 90). La fraccion pura se recogio y se neutralizo mediante NaHCO3 15 saturado. La mezcla se extrajo con CH2Cl2 (3 x 20 ml). Las capas organicas combinadas se concentraron a vado dando como resultado el compuesto 13 (600 mg). Metodo H; Rt: 3,92 min. m/z :871,6 (M+H)+ Masa exacta: 870,4;

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Se anadio NaHCO3 (15 ml, 2 N) a una solucion agitada de compuesto QA-10 (2,5 g, 4,96 mmol), compuesto SC-15 (2,5 g, 4,13 mmol) y Pd(dppf)Cl2 (0,2 g, 0,496 mmol) en THF seco (30 ml). La mezcla de reaccion se agito a reflujo 20 durante 20 minutos, se desactivo con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica

combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo se purifico mediante cromatografia de fiquidos de alto rendimiento. (Columna: Diamonsil C18 250*50mm*10um. Metodo: A: H2O+TFA al 0,1% B: CH3CN. De 25 a 40% de B en A en 17 minutos. Caudal (ml/min): 90). La fraccion pura se recogio y se neutralizo mediante NaHCO3 saturado. El disolvente organico se concentro a vado. El precipitado se filtro, se lavo 25 con H2O (10 ml) y se seco bajo alto vado para proporcionar el compuesto 14 (1.000 mg). Metodo H; Rt: 4,11 min.

m/z :899,5 (M+H)+ Masa exacta: 898,5; sFc: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Flujo: 2,5 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 5,1 min.; SFC: Columna: OJ-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Flujo: 2,5 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 3,14 min.

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30 Se anadio NaHCO3 (10 ml, 2 N) a una solucion agitada de QA-10 (2,0 g, 3,97 mmol), compuesto SC-6 (1,8 g, 3,31 mmol) y Pd (dppf)Cl2 (0,2 g, 0,397 mmol) en THF seco (20 ml). La mezcla de reaccion se agito a reflujo durante 20 minutos, se desactivo con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4 y se concentro a vado. El residuo resultante se purifico mediante

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40

cromatograffa de Ifquidos de alto rendimiento. (Columna: Diamonsil C18 250*50mm*10um. Metodo: A: H2O+TFA al 0,1% B: CH3CN. De 25 a 40% de B en A en 17 minutos. Caudal (ml/min): 90). La fraccion pura se recogio y se neutralizo mediante NaHCO3 saturado. El disolvente organico se concentro a vado. El precipitado se filtro, se lavo con H2O (10 ml) y se seco bajo alto vado dando como resultado el compuesto 15 (700 mg). Metodo H; Rt: 3,81 min. m/z: 845,5 (M+H)+ Masa exacta: 844,4; SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Flujo: 2,5 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: MeOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 3,84 min; SFC: Columna: AS-H 250 mm x 4,6 mm; 5 um. Flujo: 2,5 ml/min., Fase movil: A: CO2 B: iPrOH (dietilamina al 0,05%); 40% de B en A,: Rt: 5,15 min.

Ejemplos biologicos - actividad anti-VHC de los compuestos de formula I

Ensayos de replicon

Los compuestos de formula (I) se examinaron con respecto a la actividad inhibidora en el replicon de VHC. Este ensayo celular se basa en una construccion de expresion bicistronica, segun se describe por Lohmann y cols. (Science (1999) 285: 110-113; Journal of Virology (2003) 77: 3007-3019) con las modificaciones descritas por Krieger y cols. (Journal of Virology (2001) 75: 4614-4624) y Lohmann y cols. (Journal of Virology (2003) 77: 30073019) para el genotipo 1b y por Yi y cols. (Journal of Virology (2004) 78: 7904-7915) para el genotipo 1a, en una estrategia de cribado de multiples objetivos.

Transfeccion estable

El metodo era como sigue. El ensayo utilizaba la lmea celular Huh-7 luc/neo (posteriormente en la presente memoria denominada Huh-Luc) establemente transfectada. Esta lmea celular aloja un ARN que codifica una construccion de expresion bicistronica que comprende las regiones NS3-NS5B silvestres de VHC tipo 1b traducidas de un sitio interno de entrada del ribosoma (IRES) del virus de la encefalomiocarditis (VEMC), precedidas por una porcion informadora (FfL-luciferasa) y una porcion de marcador seleccionable (neoR, neomicina fosfotransferasa). La construccion esta flanqueada por NTR (regiones no traducidas) 5' y 3' procedentes del tipo 1b de VHC. El cultivo continuado de las celulas con replicon en presencia de G418 (neoR) depende de la replicacion del ARN de VHC. Las celulas con replicon establemente transfectadas que replican ARN de VHC autonomamente y hasta altos niveles, que codifica entre otra cosas luciferasa, se usaron para cribar los compuestos antivirales.

Las celulas con replicon se sembraron en placas de 384 pocillos en presencia de los compuestos de prueba y control que se anadieron en diversas concentraciones. Despues de una incubacion de tres dfas, la replicacion de VHC se midio ensayando la actividad de luciferasa (usando sustratos y reactivos de ensayo de luciferasa estandar y un aparato de obtencion de imagenes de microplacas Perkin Elmer ViewLux™ ultraHTS). Las celulas con replicon en los cultivos de control tienen una elevada expresion de luciferasa en ausencia de inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto se verifico en las celulas Huh-Luc, permitiendo una curva de respuesta a la dosis para cada compuesto de prueba. A continuacion, se calcularon los valores de EC50, que representan la cantidad de compuesto requerida para disminuir el nivel de actividad de luciferasa detectada en 50%, o, mas espedficamente, para reducir la capacidad para replicarse del ARN del replicon de VHC conectado geneticamente.

Resultados

Cuando un compuesto de formula (I) se probaba mas de una vez en el ensayo de replicon, el promedio de todos los resultados de prueba se da en esta Tabla 1.

ESTRUCTURA

Compuesto n° VHC-REP-HUH7LUC_EC50 (nM)

o nVs q/ ~( >=o ^A-A* Vs °»anh HN-V. /

1 0,026

o HN^W\ 9\ / CVrCCU »f“ y° Ljl j ho=Xr\ vC V ' r> X >®Cu °A oJ /

2 0,018

o hn'^V5^ q/ X %0 ,i;-Xii . LjL o^H (R) y^o H \ H h'5 kJ\^Nv . xr i

3 0,017

/ °« ^ J v° HlXX)v^\ XxH r^\ ft H N—V <R)( J, „ \ \\ N / V°v yW n

4 0,008

o HN^y^ji Q/ r^NjvVi ^ °^° ^Ns^O WX O^H j r /)xCVo> o^o 1 i_y /

5 0,025

o 7 ll / q/ ra^V^N^V^ll X >=° ru XX x^Vo XXXn n~p HN^ -w/ 1 '<• °=< X 0 x /

7 0,008

ESTRUCTURA

Compuesto n° VHC-REP-HUH7LUC_EC50 (nM)

o O o yv ho^b H *S N-. HN v^- T V-/ Lo 0^0 1 U 1

9 0,008

o HN-^S^yj q/ ~V V° Nwnwo oy^H (3 L JL m n—(r) Xr O^q 1 (R> 1

10 0,006

O H HN'^ykj D/ ~{ >=o "fN ,.0 ‘YS 0 /S'h H rg/ L JL !1 n-/«; hut ____- \_/ ]:< o^0 / iN^M» /

12 0,27

o \__/=\_/=\^ O HN^ HN^y^v^vki VV0^ jg^N \=/ N^Wn / ^Cn-^° k? p I® Vg/ ^ HN° \ o^° \

13 0,006

o HN ikk A^Y^n ~< Vo ir kLH n^, ?\r Ti^VP

14 0,022

o HN ikk \/s)NV;0 VrN \ s\y r j) u H fy UyK ° x> '

15 0,006

Transfeccion transitoria

En una disposicion transitoria, una lmea celular de hepatoma Huh-7 lunet se transfecto transitoriamente con un ARN que se replica autonomamente que codifica una construccion de expresion bicistronica. Esta construccion comprende un gen informador de luciferasa de luciernaga que precede a la region subgenomica NS3-NS5B de VHC 5 (genotipo 1a H77 o 1b Coni). La traduccion de la region subgenomica de VHC esta mediada por un sitio interno de entrada del ribosoma del virus de la encefalomiocarditis. Por otra parte, la construccion esta flanqueada por regiones no traducidas 5' y 3' de VHC (genotipo 1a H77 o 1b Con 1, respectivamente), que permiten la replicacion del ARN.

Las celulas se sembraron en placas de 384 pocillos en presencia de compuestos de prueba y control, que se 10 anadieron en diversas concentraciones. Despues de una incubacion de dos dfas, se midio la replicacion del aRn del replicon subgenomico de VHC al ensayar la actividad de luciferasa (usando sustratos y reactivos de ensayo de luciferasa estandar y un aparato de obtencion de imagenes de microplacas Perkin Elmer ViewLuxTM ultraHTS). Las celulas que contienen replicon subgenomico de VHC en los cultivos de control tienen una elevada expresion de luciferasa en ausencia de inhibidor. La actividad inhibidora del compuesto se verifico, permitiendo una curva de 15 respuesta a la dosis para cada compuesto de prueba. A continuacion, se calcularon los valores de EC50, que representan la cantidad de compuesto requerida para disminuir el nivel de actividad de luciferasa detectada en 50%, o, mas espedficamente, para reducir la capacidad para replicarse del ARN subgenomico de VHC conectado geneticamente.

Contracribados

20 Las lmeas celulares de contracribado inclrnan una lmea celular de hepatoma Huh-7 que contiene una construccion de promotor inmediato principal de citomegalovirus humano-Luc (Huh7-CMV-Luc) y una lmea de celulas T MT4 que contiene un informador de repeticion terminal larga-Luc (MT4-LTR-Luc).

Compuesto numero

EC50 de 1b (Transitorio) nM EC50 de 1a (Transitorio) nM CC50 MT4-LTR-luc (PM) CC50 Huh7-CMV-luc (PM)

1

0,029 0,79 > 0,98 > 0,98

2

0,033 1,4 > 0,98 > 0,98

3

0,012 0,16 > 0,98 > 0,98

4

0,013 0,103 > 0,98 > 0,98

5

0,025 0,677 > 0,98 > 0,98

7

0,006 0,546 > 0,98 > 0,98

9

0,006 0,216 > 0,98 > 0,98

10

0,005 0,341 > 0,98 > 0,98

12

0,109 12,5 > 0,98 > 0,98

13

0,009 0,360 > 0,98 > 0,98

14

0,021 0,136 > 0,98 > 0,98

15

0,007 0,496 > 0,98 > 0,98

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES

   5

   1. Un compuesto de formula I

   imagen1

   o

   al menos uno de al menos uno de se selecciona independientemente de un grupo que comprende

   imagen2

   imagen3

   y

   O D

   10 y el otro se selecciona del grupo que comprende adicionalmente >

   R y R' se seleccionan independientemente de -CRiR2R3, arilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados de halo y metilo, o heterocicloalquilo, en donde

   Ri se selecciona de alquilo C1-4; alquilo C2-4 sustituido con metoxi o hidroxilo; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y metilo;

   15 R2 es hidroxilo, amino, mono- o di-alquil Ci-4-amino, alquilCi-4-carbonilamino, alquilCi-4-oxicarbonilamino;

   R3 es hidrogeno o alquilo C1-4;

   o una sal farmaceuticamente aceptable o un solvato del mismo.
2. 2. El compuesto de formula I segun la revindication 1, en el que al menos un independientemente del grupo que comprende

   o

   se

   selecciona

   imagen4

   5

   10

   15

   20

   25

   o
3. 3. El compuesto de formula I segun la reivindicacion 1 o 2, en el que al menos un es independientemente

   imagen5
4. 4. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que es de formula la

   imagen6
5. 5. El compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que R2 es alquil(Ci-4)- carbonilamino o alquil(C1-4)-oxicarbonilamino y R3 es hidrogeno.
6. 6. El compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que R1 se selecciona de alquilo C3- 4 ramificado; alquilo C2-3 sustituido con metoxi; y fenilo opcionalmente sustituido con 1 sustituyente seleccionado de halo y metilo.
7. 7. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y un vehiculo farmaceuticamente aceptable.
8. 8. Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una composicion farmaceutica segun la reivindicacion 7, para el uso como un medicamento.
9. 9. Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 o una composicion farmaceutica segun la reivindicacion 7, para el uso en la prevention o el tratamiento de una infection por VHC en un mamifero.
10. 10. Un producto que contiene (a) un compuesto de formula I segun se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, y (b) otro inhibidor de VHC, como una preparation combinada para el uso simultaneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones por VHC.