ES2532483T3 - Ensayo de distinción - Google Patents
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Abstract
Un método para la determinación de un anticuerpo contra un anticuerpo de fármaco (anticuerpo anti-fármaco, ADA) en una muestra con un inmunoensayo, en el que dicho método comprende los siguientes pasos: a) proporcionar a-i) un anticuerpo de captura de fármacos, en el que dicho anticuerpo de fármaco está conjugado a una fase sólida, a-ii) un anticuerpo trazador de fármaco, en el que dicho anticuerpo de fármaco está conjugado a un marcador detectable, b) poner en contacto dicho anticuerpo de captura de fármacos por separado con b-i) dicha muestra, b-ii) dicha muestra, a la que se ha añadido dicho anticuerpo de fármaco en forma monomérica, b-iii) dicha muestra, a la que se ha añadido dicho anticuerpo de fármacos en forma oligomérica, c) determinar un anticuerpo contra dicho anticuerpo de fármacos en dicha muestra mediante un inmunoensayo positivo en b-i) y un inmunoensayo negativo en b-ii) y b-iii).
Description
E12196714
09-03-2015
i) muestra no adicionada ii) muestra adicionada con 1 g / ml de anticuerpo de fármacos en forma monomérica iii) muestra adicionada con 1 g / ml de anticuerpo de fármacos en forma oligomérica iv) muestra adicionada con 1 g / ml de anticuerpo de fármacos en forma monomérica
5 v) muestra adicionada con 1 g / ml de anticuerpo de fármacos en forma oligomérica
En los pasos distintivos que el ELISA se realizó de nuevo como se describió anteriormente (ensayo de selección), pero la muestra fue anterior a la aplicación a la placa microtitulada incubada con cada una de las soluciones ii) a v) como se describió anteriormente para los cuatro pasos distintivos. Las sustancias adicionadas compiten con la
10 captura-BI para la unión a sustancias (por ejemplo ADA) de la muestra. La señal de ensayo de la muestra no adicionada tiene que estar dentro del intervalo dinámico del ensayo, de lo contrario la muestra tiene que ser diluida. Esta dilución final de la muestra tiene que utilizarse también en todos los pasos distintivos. Si la disminución en la absorbancia debido a la presencia de reactivos adicionados (ii) - v)) es inferior al 20%, el resultado de la prueba se consideró "positivo" (inmunoensayo positivo). Si la disminución en la absorbancia fue de 20% o más, el resultado de
15 la prueba se consideró "negativo" (inmunoensayo negativo). Con otras palabras, si la recuperación de la señal era más del 80%, el resultado de la prueba se consideró "positivo" (inmunoensayo positivo) y si la recuperación de la señal era menos de 80%, el resultado de la prueba se consideró "negativo" (inmunoensayo negativo).
Ejemplo 9
20
ELISA para la detección de anticuerpos anti-anticuerpo anti-IL-6R
El ensayo se realizó de acuerdo con el Ejemplo 8. Excepción: la muestra (adicionada o no adicionada) se preincubó con el fármaco-DIG durante una hora. Los resultados se muestran en la siguiente Tabla 1.
25
Tabla 1: Resultados de la prueba ELISA para la detección de anticuerpos anti-anticuerpo anti-IL-6R
- anticuerpo
- anticuerpo de anticuerpo de anticuerpo de anticuerpo de anticuerpo de
- de fármaco
- fármaco fármaco fármaco fármaco fármaco
- inespecífico,
- respuesta inespecífico, específico, específico,
- inespecífico,
- oligomérico
- inespecífica oligomérico monomérico monomérico monomérico
- muestra no adicionada
- + + + + + +
- señal recuperada en la adición
- [%] [%] [%] [%] [%] [%]
- ii) anticuerpo anti-IL-6R en monomérico
- 96,5 + 95,1 + 93,2 + 27,9 2,88 63,3
- iii) anticuerpo anti-IL-6R en oligomérico
- 41,1 92,0 + 12,2 15,3 - BLQ - 12,1
- iv) anticuerpos anti-IgG humano
- 91,9 + 103,9 + 88,9 + 90,8 + 107,0 + 73,0
- v) anticuerpos anti-IgG humano oligomérico
- 41,9 98,3 + 14,9 93,7 + 100,0 + 22,5 -
- BLQ = por debajo del límite de cuantificación
Ejemplo 10
30
ELISA para la detección de anticuerpos anti-anticuerpos anti-IGF-1R El ensayo se realizó de acuerdo con el Ejemplo 8. Los resultados se muestran en la siguiente Tabla 2. 35 Tabla 2: Resultados de la prueba ELISA para la detección de anticuerpos anti-anticuerpos anti-IGF-1R
- anticuerpo de fármaco
- anticuerpo de fármaco
- anticuerpo de fármaco
- respuesta inespecífica
- respuesta específica, respuesta específica,
- oligomérico (IgM)
- monomérico (IgG)
- muestra no adicionada
- + + +
- señal recuperada en la
- [%] [%] [%]
16
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