ES2545964T3 - Utilización de un extracto de pétalos de amapola para la nutrición de la epidermis - Google Patents
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Abstract
Composición dermatológica para aplicación tópica, que comprende una cantidad eficaz de un extracto de pétalos de amapola (Papaver rhoeas) para una utilización a título de medicamento dermatológico para favorecer la nutrición, la estimulación del crecimiento y la regeneración celular dérmica y epidérmica.
Description
5
15
25
35
45
55
E08872355
25-08-2015
Transporte de los lípidos
El ensayo se lleva a cabo en triplicado después de un tratamiento directo de los microsomas sobre 8 lotes constituidos de la siguiente manera:
- *
- lote 1: control negativo que no recibe ningún producto.
- *
- lote 2: control positivo (inhibición por la difenhidramina)
- *
- lotes 3-5: tratados mediante el extracto de pétalos de amapola de la invención (3 concentraciones: 0,1%, 0,2% y 0,5%)
- *
- lotes 6-8: tratados por la floretina y el extracto de la invención (3 concentraciones).
La difenhidramina se utiliza a la concentración de 1 mM.
La velocidad de transporte de los lípidos se evaluó mediante la misma técnica que anteriormente para los glúcidos, sustituyendo el tampón PBS sin glucosa por un tampón Tris 25 mM y el 3-O-MG por la [3H]-colina, siendo la captura de la colina detenida por adición de un tampón de lisis (50 mM de Tris, 140 mM de NaCl, 1,5 mM de MgSO4, 0,5% de Igepal-Ca-630, 0,2% de SDS).
Como anteriormente, el tratamiento de los microsomas por los lotes definidos anteriormente se efectúa al mismo tiempo que la introducción de [3H]-colina en el medio de incubación.
Transporte de las proteínas (albúmina)
El ensayo se lleva a cabo en triplicado después del tratamiento directo de los microsomas sobre 8 lotes constituidos de la siguiente manera:
- *
- lote 1: control negativo que no recibe ningún producto.
- *
- lote 2: control positivo (inhibición por el nocodazol)
- *
- lotes 3-5: tratados mediante el extracto de pétalos de amapola de la invención (3 concentraciones: 0,1%, 0,2% y 0,5%)
- *
- lotes 6-8: tratados por la floretina y el extracto de la invención (3 concentraciones). El nocodazol se utiliza a la concentración de 6 mg/ml La velocidad de transporte de las proteínas se evalúa mediante la misma técnica que anteriormente para los
glúcidos, sustituyendo el tampón PBS sin glucosa por un tampón HBSS y el 3-O-MG por la albúmina FITC, siendo la captura de la albúmina detenida por adición de una solución de Ringer (125 mM de NaCl, 5,4 mM de KCl, 1,2 mM de CaCl2, 0,8 mM de MgCl2, 0,8 mM de Na2PO4, 0,2 mM de NaHPO4, 5,5 mM de glucosa,10 mM HEPES, pH 7,4).
Los microsomas se tratan después mediante Triton X-100 (0,1% v/v en el ácido 3-N-morfolinopropanosulfónico, 20
mM, pH 7,4. La fluorescencia se mide por un espectrofluorómetro (excitación a 430 nm; emisión a 520 nm). Como anteriormente, el tratamiento de los microsomas por los lotes definidos anteriormente se efectúa al mismo tiempo que la introducción de la albúmina FITC en el medio de incubación.
Resultados Transporte de los glúcidos Los resultados se reúnen en la tabla 1 siguiente:
Tabla 1
- captura du [3H]-3-O-MG (nmol/mg de proteína)
- 30s
- 60s 90s 120s
- Control negativo
- 13 19 23 27
- Extracto de la Inv. (0,1%)
- 14 18 23 28
E08872355
25-08-2015
Tabla 4
- captura de la [3H]-colina (pmol/mg de proteína)
- 30s
- 60s 90s 120s
- Control negativo
- 165 210 272 312
- Difenhidramina DPA (0,25 mM)
- 83 115 141 153
- Extracto de la inv. (0,1%) + DPA
- 112 132 163 195
- Extracto de la inv. (0,2%) + DPA
- 124 142 179 208
- Extracto de la inv. (0,5%) + DPA
- 132 152 198 210
Los resultados de la tabla 4 muestran que el tratamiento directo de los microsomas por la difenhidramina inhibe
5 fuertemente la velocidad de transporte de los lípidos. Por el contrario, el tratamiento por el extracto de pétalos de amapola de la invención, a las tres concentraciones ensayadas, en presencia de difenhidramina, restablece la velocidad de transporte de los lípidos. Así, la velocidad de transporte de los lípidos está perfectamente restablecida por el extracto de la invención a pesar de la presencia del inhibidor difenhidramina.
10 Transporte de las proteínas
Los resultados se reúnen en la tabla 5 siguiente:
Tabla 5 15
- captura de la albúmina FITC (µg/mg de proteína)
- 30s
- 60s 90s 120s
- Control negativo
- 0,51 0,64 0,76 0,96
- Extracto de la inv. (0,1%)
- 0,52 0,66 0,78 0,95
- Extracto de la inv. (0,2%)
- 0,56 0,71 0,83 0,96
- Extracto de la inv. (0,5%)
- 0,62 0,74 0,86 0,97
El extracto de la invención es el extracto de pétalos de amapola utilizado en la composición del Ejemplo 1.
Los resultados reunidos en la tabla anterior, obtenidos después del tratamiento directo de los microsomas de 20 queratinocitos por el extracto acuoso de la invención a las concentraciones del 0,1%, 0,2% y 0,5%, muestran que el extracto no conlleva ninguna inhibición de la velocidad de transporte de las proteínas.
La cinética de la captura de la albúmina, en las condiciones fisiológicas, es, en efecto, prácticamente idéntica entre los microsomas control y los microsomas tratados por el extracto de la invención a las tres concentraciones 25 estudiadas.
Los resultados reunidos en la tabla 6 siguiente muestran los efectos inhibidores conocidos del nocodazol (ND) y el efecto del extracto de la invención.
30 Tabla 6
- captura de la albúmina FITC (µg/mg de proteína)
- 30s
- 60s 90s 120s
- Control negativo
- 0,51 0,64 0,76 0,96
- Nocodazol ND (0,25 mM)
- 0,31 0,49 0,54 0,63
- Extracto de la inv. (0,1%) + ND
- 0,22 0,50 0,53 0,61
- Extracto de la inv. (0,2%) + ND
- 0,39 0,53 0,58 0,72
- Extracto de la inv. (0,5%) + ND
- 0,43 0,58 0,64 0,77
Los resultados de la tabla 6 muestran que el tratamiento directo de los microsomas por el nocodazol inhibe fuertemente la velocidad de transporte de los lípidos. Por el contrario, el tratamiento por el extracto de pétalos de 35 amapola de la invención, a las tres concentraciones ensayadas, en presencia de nocodazol, restablece la velocidad de transporte de los lípidos. Sin embargo, no se observa ningún efecto a la concentración del 0,1%. Así, la velocidad de transporte de los lípidos está restablecida por el extracto de la invención a las concentraciones del 0,2% y 0,5%,
E08872355
25-08-2015
Tabla 7
- captura de [3H]-3-O-MG (nmol/mg de proteína)
- 30s
- 60s 90s 120s
- Control negativo
- 10 16 19 33
- Extracto de la inv. (0,1%)
- 11 14 20 21
- Extracto de la inv. (0,2%)
- 12 17 21 22
- Extracto de la inv. (0,5%)
- 14 18 22 21
5 El extracto de la invención es el extracto de pétalos de amapola utilizado en la composición del Ejemplo 1.
Los resultados reunidos en la tabla anterior, obtenidos después del tratamiento de los queratinocitos normales por el extracto acuoso de la invención a las concentraciones del 0,1%, 0,2% y 0,5%, confirman que el extracto no conlleva ninguna inhibición de la velocidad de transporte de la glucosa.
10 La cinética de la captura de la glucosa, en las condiciones fisiológicas, es en efecto prácticamente idéntica entre los microsomas de los queratinocitos control y los microsomas de los queratinocitos tratados por el extracto de la invención a las tres concentraciones estudiadas.
15 Los resultados reunidos en la Tabla 8 siguiente muestran los efectos inhibidores conocidos de la floretina y el efecto del extracto de la invención.
Tabla 8
- captura de [3H]-3-O-MG (nmol/mg de proteína)
- 30s
- 60s 90s 120s
- Control negativo
- 10 16 19 23
- Floretina (0,25 mM)
- 9 12 13 14
- Extracto de la inv. (0,1%)+floretina
- 10 14 19 22
- Extracto de la inv. (0,2%)+floretina
- 11 17 20 23
- Extracto de la inv. (0,5%)+floretina
- 12 18 21 22
20 Como lo muestran los resultados de la tabla 8, el tratamiento directo de los queratinocitos normales por la floretina previamente a la separación de los microsomas inhibe fuertemente la velocidad de transporte de la glucosa. Por el contrario, el tratamiento por el extracto de pétalos de amapola de la invención, a las tres concentraciones ensayadas, en presencia de floretina, restablece la velocidad de transporte de la glucosa de manera significativa.
25 Así, la velocidad de transporte de la glucosa está perfectamente restablecida por el extracto de la invención a pesar de la presencia del inhibidor floretina.
Transporte de los lípidos
30 Los resultados se reúnen en la tabla 9 siguiente:
Tabla 9
- captura de la [3H]-colina (pmol/mg de proteína)
- 30s
- 60s 90s 120s
- Control negativo
- 161 195 221 237
- Extracto de la inv. (0,1%)
- 173 189 219 240
- Extracto de la inv. (0,2%)
- 181 190 223 237
- Extracto de la inv. (0,5%)
- 191 205 228 241
35 El extracto de la invención es el extracto de pétalos de amapola utilizado en la composición del Ejemplo 1.
E08872355
25-08-2015
- Control negativo
- 0,44 0,58 0,64 0,82
- Nocodazol ND (0,25 mM)
- 0,19 0,42 0,46 0,57
- Extracto de la inv. (0,1%) + ND
- 0,31 0,45 0,47 0,58
- Extracto de la inv. (0,2%) + ND
- 0,32 0,49 0,58 0,71
- Extracto de la inv. (0,5%) + ND
- 0,38 0,51 0,59 0,73
Los resultados de la tabla 12 muestran que el tratamiento de los queratinocitos normales por el nocodazol, previamente a la separación de los microsomas, inhibe la velocidad de transporte de las proteínas.
5 Por el contrario, el tratamiento por el extracto de pétalos de amapola de la invención, a las tres concentraciones ensayadas, en presencia de nocodazol, restablece la velocidad de transporte de los lípidos a las concentraciones del 0,2% y 0,5%, a pesar de la presencia del inhibidor nocodazol. Sin embargo, no se observa ningún efecto a la concentración del 0,1%.
10 Se constata por lo tanto que el tratamiento directo de los microsomas, al igual que el tratamiento de queratinocitos normales previamente a la especiación de los microsomas, no induce ninguna modificación de la velocidad de transporte de las macromoléculas en unas condiciones fisiológicas. Además, induce un aumento claro de la velocidad de transporte en condiciones de inhibición provocadas por unos inhibidores tales como la floretina, la difenhidramina y el nocodazol. Este efecto es particularmente importante en lo que se refiere al transporte de los
15 glúcidos.
Estos resultados ponen en evidencia el efecto nutritivo ejercido por el extracto de pétalos de amapola de la invención.
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