ES2553962T3

ES2553962T3 - Composiciones de oligo-guluronato y galacturonato

Info

Publication number: ES2553962T3
Application number: ES08736951.8T
Authority: ES
Inventors: Catherine TAYLOR NORDGÅRD; Kurt Ingar Draget; Olav Åsmund Smidsrød
Original assignee: Norwegian University of Science and Technology NTNU
Current assignee: Norwegian University of Science and Technology NTNU
Priority date: 2007-04-12
Filing date: 2008-04-11
Publication date: 2015-12-15
Anticipated expiration: 2028-04-11
Also published as: JP2010523636A; EP2155211B1; JP5649443B2; BRPI0810179A2; JP2014129401A; EA200901299A1; GB0707096D0; BRPI0810179B8; WO2008125828A3; DK2500025T3; CN101711159A; KR20130106446A; CA2683914A1; BRPI0810179B1; EP2500025B1; MX352972B; WO2008125828A2; AU2008237710B2; CA2817754A1; KR101472245B1

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende (a) un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiológicamente tolerable que tiene un promedio en número del grado de polimerización en el intervalo de 5 a 18, una fracción de guluronato (o galacturonato) (FG) de al menos 0,80, una fracción de manuronato (FM) de no más de 0,20, y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerización menor de 20 y (b) un fármaco macromolecular que tiene un peso molecular por encima de 2000 Da.

Description

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DESCRIPCION

Composiciones de oligo-guluronato y galacturonato

La presente invencion se define por las reivindicaciones adjuntas. Las materias objeto que no estan englobadas en el ambito de las reivindicaciones no forman parte de la presente invencion.

Esta invencion se refiere a composiciones de oligo-guluronato y galacturonato, y a un metodo para tratar seres humanos o animales no humanos, en particular mairnferos, con oligoguluronatos u oligogalacturonatos, por ejemplo, para combatir la viscosidad elevada del mucus, por ejemplo, para aumentar el aclaramiento del mucus, especialmente del tracto respiratorio, en particular de los senos y pulmones, en particular en el tratamiento de la fibrosis qrnstica (CF) y sinusitis.

La fibrosis qrnstica es la enfermedad genetica letal mas comun en la poblacion europea. La enfermedad se produce por una mutacion en el gen que codifica el regulador transmembrana de la fibrosis qrnstica (CFTR), un canal de cloruro que esta presente en las celulas secretoras y otras celulas del cuerpo. La enfermedad se caracteriza por la presencia de secreciones de mucus densas, intratables, en el cuerpo que pueden dar lugar a una enfermedad pulmonar, problemas digestivos e infertilidad. El patron normal del aclaramiento mucociliar en los pulmones no consigue aclarar el mucus excesivamente viscoso que puede ser colonizado por microorganismos, que a su vez aumentan la viscosidad del mucus y puede dar lugar a inflamacion pulmonar cronica y obstruccion. Por lo tanto la enfermedad pulmonar es el mayor problema sanitario en la mayona de los pacientes con CF y es la principal causa de muerte.

El mucus es una secrecion normal de todo el tracto respiratorio, incluyendo los pulmones. Su funcion primaria es como parte del sistema de aclaramiento mucociliar, que mantiene los pulmones limpios y los protege contra la infeccion. El sistema de aclaramiento mucociliar tiene tres componentes principales: el mucus; los cilios; y el lfquido de superficie de vfas respiratorias. La superficie epitelial comprende por lo tanto las celulas caliciformes que segregan el mucus y las celulas epiteliales ciliadas con una capa encima de lfquido de superficie de vfas respiratorias y por encima de esta una capa de mucus, en el que protruyen las puntas de los cilios. El mucus es un material tipo gel pegajoso compuesto principalmente por agua (aproximadamente el 95 % p.) y mucinas, moleculas que forman el gel que son responsables de las propiedades ffsicas del mucus. Los cilios son pequenas proyecciones pilosas de la superficie de las celulas epiteliales que tienen pulsaciones ntmicas en el lfquido acuoso, no viscoso de superficie de vfas respiratorias con las puntas inmersas en la capa de mucus. La capa de mucus forma una lamina pegajosa en la superficie pulmonar que atrapa bacterias, virus, partfculas inhaladas, polucion ambiental y desechos celulares. La pulsacion de los cilios sirve para propulsar esta lamina de mucus y cualquier cosa que este atrapada en ella hacia la boca y fuera de los pulmones. Bajo condiciones normales, el sistema de aclaramiento mucociliar funciona eficazmente y los pulmones se mantienen limpios y libres de infecciones. Si el sistema se sobrepasa, hay una segunda lmea de defensa - la tos. Por lo tanto, cuando aumenta la secrecion de los niveles de mucus en respuesta a irritacion o inflamacion, por ejemplo, debido a partfculas inhaladas o infeccion, el mucus se proyecta fuera de los pulmones por el reflejo tusfgeno.

En los pacientes con CF el mucus en el pulmon es mas denso y mas viscoso de lo normal, y este mucus mas denso no es facil de transportar por los cilios. Como resultado se compromete el sistema de aclaramiento mucociliar y los pulmones son mas vulnerables a la infeccion. Ademas, parece que los pulmones de los pacientes con CF estan en un estado hiperinflamatorio con un bajo nivel continuo de inflamacion y tienen una respuesta reforzada a los agentes que normalmente producen inflamacion. Esto es problematico porque como parte de la respuesta a la inflamacion la produccion de mucus aumenta. El aumento de mucus se acumula si es demasiado espeso para aclararse por el sistema de aclaramiento mucociliar o la tos, se reduce la capacidad pulmonar y disminuye el intercambio de oxfgeno a traves de la mucosa. Esto proporciona un ambiente ideal para la colonizacion bacteriana, un serio problema para los pacientes con CF ya que esta tambien produce inflamacion y activa la respuesta inmunitaria. Esto da lugar no solo al aumento de la secrecion de mucus sino tambien al aumento de la presencia de celulas de respuesta inmunitaria y agentes tales como los macrofagos y las lisozimas. Segun mueren las bacterias y macrofagos, sus contenidos celulares se liberan en el mucus y estos incluyen moleculas viscosas tales como el ADN. Ademas, algunas bacterias, por ejemplo Burkholdia sp. y Pseudomonas aeruginosa, tambien segregan polisacaridos altamente viscosos, en el ultimo caso alginatos. Estas moleculas aumentan adicionalmente la viscosidad del mucus, en el caso de los alginatos aparentemente por la interaccion con la matriz de la mucina del mucus pero en el caso del ADN aparentemente por aumento de la viscosidad de la fase sol en la matriz de mucina.

El mantenimiento del mucus en una forma capaz de ser transportada por los cilios es por lo tanto un objetivo clave del tratamiento de la CF. Los agentes que simplemente degradan su estructura tipo gel danan como resultado un fluido que es tan no transportable como el mucus hiperviscoso del paciente con CF. Por lo tanto, es importante que cualquier agente de tratamiento no debiera degradar la matriz de gel formada por las mucinas glucoproteicas.

Los inventores han descubierto que esto se puede conseguir utilizando oligoguluronatos u oligogalacturonatos (preferentemente oligoguluronatos) que tienen un promedio en numero del grado de polimerizacion (DPn) en el intervalo de 5 a 30, preferentemente de 5 a 18.

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En cualquier sitio del cuerpo, por ejemplo, los ofdos, el cuello uterino y especialmente en el tracto respiratorio, en particular en los senos, especialmente los senos paranasales, el mucus excesivamente viscoso puede presentar problemas. Los oligoguluronatos y oligogalacturonatos tambien se pueden utilizar para abordar estos problemas.

El mucus del cuello uterino, que se produce por las glandulas del cuello uterino, es una entidad heterogenea que contiene diferentes tipos de secreciones en diferentes proporciones a lo largo del ciclo menstrual. La naturaleza de la secrecion es tal que proporciona una barrera a la migracion del esperma a traves del cuello uterino todas las veces excepto durante la “ventana fertil” cuando se produce la ovulacion y es posible la concepcion. Esto actua para proteger el utero, las trompas de Falopio y los ovarios de la exposicion innecesaria a agentes patogenos.

Con el fin de mantener la migracion del esperma durante la ventana fertil, el mucus del cuello uterino debe tener las caractensticas bioqmmicas y bioffsicas adecuadas. Las propiedades bioqmmicas, tales como el pH y la osmolaridad son importantes para proporcionar las condiciones adecuadas para la supervivencia del esperma (vease Marriott et al., "Mucus physiology and pathology" en Bioadhesive Drug Delivery Systems, CRC Press, 1990), mientras que las propiedades bioffsicas, tales como la reologfa y la morfologfa del entramado macromolecular, afectan a la motilidad del esperma en el mucus (vease Rutllant et al., Reprod. Dom. Anim. 40: 79-86 (2005)).

Cffnicamente, la ventana fertil se puede identificar detectando el aumento de hormona luteinizante antes de la ovulacion y el aumento de temperatura basal corporal tras la ovulacion y examinando las propiedades bioffsicas del mucus del cuello uterino en particular su fibrosidad, que esencialmente es una medida de como de elastico es el mucus y como tal se relaciona con la reologfa del mucus. Tambien se ha demostrado que la cristalizacion en forma de hoja de helecho del mucus cervical, es decir, los patrones de cristalizacion que se forman cuando el mucus del periodo ovulatorio se deja secar al aire, esta relacionada con la morfologfa del entramado macromolecular del mucus (vease, Menarguez et al., Human Reproduction 18: 1782-1789 (2003)).

Se ha demostrado que los patrones de cristalizacion en forma de hoja de helecho (y por lo tanto la morfologfa del entramado macromolecular) son un factor significativo en la probabilidad de conseguir una gestacion con el uso de la inseminacion artificial y para un subgrupo de mujeres, el “mucus problematico” parece ser una de las barreras mas importantes para conseguir una gestacion (vease Boyers et al., Human Reproduction 6: 1108-1114 (1991)).

Por lo tanto existe la necesidad de un metodo para modular las propiedades bioffsicas del mucus cervical para la motilidad optima del esperma, no solo para las mujeres con “mucus problematico” sino para cualquier mujer que desee maximizar su probabilidad de concebir, y tambien para criadores de animales que deseen maximizar la probabilidad de gestacion en sus animales.

Los inventores han descubierto que se puede conseguir utilizando oligoguluronatos u oligogalacturonatos (preferentemente oligoguluronatos) que tienen un promedio en numero del grado de polimerizacion (DPn) en el intervalo de 5 a 30, preferentemente de 5 a 18.

Estos usos de los oligoguluronatos u oligogalacturonatos se describen por ejemplo en los documentos WO2007/039754 y WO2007/039760.

Los oligoguluronatos y oligogalacturonatos (de aqm en adelante “Bloques-G”) se pueden preparar a partir de polisacaridos naturales como se describe posteriormente y comprenden una mezcla de compuestos de grados de polimerizacion (DP) diferentes. Los inventores han descubierto ahora que retirando la “cola” de alto peso molecular de la mezcla bloque-G, se obtiene un material con caractensticas mejoradas en terminos de su capacidad para modificar la estructura del mucus.

Las reivindicaciones al respecto exponen, por lo tanto, valores particularmente preferidos del promedio en numero del grado de polimerizacion (DPn), fraccion guluronato/galacturonato (Fg), fraccion de manuronato (Fm) y distribucion del peso molecular.

Los inventores han descubierto tambien sorprendentemente que los bloques-G (especialmente los oligoguluronatos) se pueden utilizar ventajosamente para facilitar la captacion de farmacos macromoleculares por las superficies mucosas, es decir, farmacos que tienen un peso molecular por encima de 2000 Da (preferentemente por encima de 4000 Da, por ejemplo 5-2000 kDa) cuando se co-administran. Este efecto se ha demostrado claramente utilizando un modelo celular de rinon de perro Madin-Darby (MDCK).

Por lo tanto, vista desde un aspecto, la invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un oligoguluronato u oligogalacturonato y un farmaco macromolecular.

Vista desde un aspecto mas, la invencion proporciona un metodo de tratamiento de un sujeto humano o vertebrado no humano (por ejemplo, un mairfffero, ave o reptil, especialmente un mairfffero) que comprende la administracion a dicho sujeto de una composicion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de un farmaco macromolecular, comprendiendo la mejora la co-administracion de dicho farmaco en una superficie mucosa de dicho sujeto con una cantidad eficaz de un oligoguluronato u oligogalacturonato.

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Vista desde otro aspecto, la invencion proporciona el uso de un oligoguluronato u oligogalacturonato para la fabricacion de un medicamento que comprende adicionalmente un farmaco macromolecular para su uso en un metodo de tratamiento que comprende la administracion de dicho medicamento a una superficie mucosa en un sujeto humano o un vertebrado no humano.

Por superficie mucosa se entiende por ejemplo, el interior de la nariz, la vagina, los pulmones, el revestimiento de la boca (por ejemplo, bajo la lengua) o el ano. La administracion en la boca sera generalmente por inhalacion con un pulverizador o la colocacion sublingual o por retencion en la boca. La administracion por via oral en el tracto gastrointestinal para la captacion del farmaco en el estomago o los intestinos es una opcion mas pero es menos preferida debido a que los farmacos macromoleculares frecuentemente son propensos a la destruccion si se administran de esta manera.

Los ejemplos de farmacos macromoleculares adecuados incluyen los acidos nucleicos (por ejemplo, ADN o ARN), protemas, peptidos, hormonas, anticuerpos, etc., mas particularmente, insulina, anti-TNF (por ejemplo, etenercept, infliximab, adalimumab, etc.), interferon (por ejemplo, interferon alfa o beta), factor VII, factor Vila, factor VIII, factor IX, hormona foliculoestimulante, eritropoyetina, trastuzumab, rituximab, factor estimulante de colonias de granulocitos (y equivalentes PEGilados), hormonas de crecimiento tales como somatotropina, apotransferrina (que se utilizan en el tratamiento de atransferrinemia), y beta-glucocerebrosidasa. La mayona de estos tienen una captacion biologica tan baja de las superficies mucosas que convencionalmente se administran por inyeccion, una via de administracion que es menos admitida por el paciente que la administracion por superficie mucosa. En el metodo de la invencion, tales farmacos puede utilizarse por supuesto para sus indicaciones normales. La dosificacion adecuada se puede determinar facilmente a partir de modelos animales, trabajando basandose en que la cantidad que se capta debena ser comparable a la dosis convencional que se inyecta. Si se desea, las composiciones de la invencion se pueden administrar por via subcutanea o intramuscular; sin embargo, esto se prefiere menos y en general la inyeccion iv no es deseable.

Los ejemplos de farmacos macromoleculares adecuados para su incorporacion en las composiciones de la invencion incluyen los farmacos anti-TNF que se comercializan bajo los nombres comerciales Enbrel y Remicade; los anti-CD20 que se comercializan bajo el nombre comercial Rituxan; las eritropoyetinas que se comercializan bajo los nombres comerciales Procrit, Eprex, Aranesp, Epogen, NeoRecormon, y Epogin; el G-CSF que se comercializa bajo el nombre comercial Neulasta; el anti-EGFR que se comercializa bajo el nombre comercial Herceptin; los interferones que se comercializan bajo los nombres comerciales Avonex, Rebif, Betaseron, Neupogen y Pegasys; el factor VIII que se comercializa bajo el nombre comercial Kogenate; el factor VII que se comercializa bajo el nombre comercial NovoSeven; el factor IX que se comercializa bajo el nombre comercial Benefix; las hormonas de crecimiento que se comercializan bajo los nombres comerciales Genotropin y Nutropin; el tPA que se comercializa bajo el nombre comercial Activase; la FSH que se comercializa bajo el nombre comercial Follistim; y la glucocerebrosidasa que se comercializa bajo el nombre comercial Cerezyme. Las paginas web de los fabricantes dan detalles de las indicaciones y dosificaciones.

El farmaco macromolecular por supuesto puede ser un acido nucleico para su uso en terapia genica.

El farmaco macromolecular es preferentemente uno que tiene un efecto fisiologico deseado mas alla de cualquier efecto simplemente para reducir la infeccion, inflamacion, viscosidad del mucus u otros problemas pulmonares. En particular es preferentemente distinto de una enzima de escision de acidos nucleicos, gelsolina, dextrano, poliASP o poliGLU.

Los farmacos macromoleculares a veces tienen una tendencia para formar agregados en solucion acuosa y, aunque no deseando quedar ligados por teona alguna, se cree que parte de la mejona de la captacion que se consigue por la co-administracion con bloques-G es como resultado del efecto de los bloques-G en la reduccion de la formacion de agregados. La invencion por lo tanto es especialmente adecuada para su uso con macromoleculas, tales como la insulina, que tienen esta tendencia a agregarse. Se cree que una parte adicional de la captacion mejorada que se consigue por la co-administracion de los bloques-G reside en la capacidad de los bloques-G para promover el paso a traves de estructuras de glucocaliz en las superficies celulares, esto puede surgir en virtud de que los bloques G faciliten el acceso del farmaco macromolecular a los receptores de superficie celular adecuados.

El bloque-G que se utiliza preferentemente es un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 5 a 18 (especialmente de 7 a 15), una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,80 (preferentemente al menos 0,85, especialmente al menos 0,92), una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,20 (preferentemente no mas de 0,15, especialmente no mas de 0,08), y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 20 (preferentemente menor de 17). El bloque-G esta presente preferentemente en las composiciones en 0,1-50 mg/ml, especialmente de 0,5-25 mg/ml, particularmente de 1-10 mg/ml en una solucion acuosa cuando esta lista para su uso. Expresado de manera alternativa, el bloque-G y el farmaco macromolecular estan presentes preferentemente en una relacion de peso relativa de aproximadamente 0,5:1 a 10:1, particularmente aproximadamente de 1:1.

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Vista desde otro aspecto, la invencion proporciona un metodo de tratamiento de un sujeto humano o vertebrado no humano (por ejemplo, un mai^ero, ave o reptil, especialmente un mairnfero) para reducir la viscosidad del mucus en una superficie mucosa en dicho sujeto y en particular para combatir la hiperviscosidad mucosa (por ejemplo, para tratar la otitis media adhesiva, sinusitis, o fibrosis qmstica, para aumentar la posibilidad de gestacion despues de la inseminacion o el coito, para aumentar el suministro del farmaco a traves de las superficies mucosas), cuyo metodo comprende la aplicacion a dicha superficie mucosa de una cantidad eficaz de un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 5 a 18, una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,92, una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,08, y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 20.

Cuando el oligoguluronato u oligogalacturonato se aplica a una superficie mucosa en el tracto respiratorio (es decir, la nariz, senos y los pulmones) o en los ofdos, preferentemente se formulara en una solucion acuosa con una concentracion de 40 a 140 mg/ml (calculada basandose en el peso del oligoguluronato u oligogalacturonato en forma de sal sodica, que se denomina en lo sucesivo en el presente documento “basandose en la sal sodica”). Cuando se administra en los pulmones, la dosificacion diaria para un ser humano sera de 100 a 2000 mg/dfa para un adulto (basandose en la sal sodica), preferentemente de 120 a 1000 mg/dfa, especialmente de 150 a 500 mg/dfa. Para un nino la dosificacion puede ser proporcional al peso corporal del nino asumiendo un peso corporal de 70 kg para el adulto en los intervalos de dosis anteriores. Esta dosificacion diaria preferentemente se dara en 2, 3 o 4 aplicaciones separadas en el tiempo.

Cuando el oligoguluronato u oligogalacturonato se aplica a una superficie mucosa en la vagina o se aplica por via rectal, tambien se puede presentar en una forma distinta de una solucion acuosa. Por lo tanto, por ejemplo, puede estar en forma de comprimido, comprimido recubierto (especialmente un comprimido revestido de liberacion retardada o sostenida), capsula, supositorio, supositorio vaginal, gel, emulsion, jarabe, dispersion, suspension, emulsion, polvo, crema, pasta, etc. Para este fin se puede formular con vehfculos y excipientes farmaceuticos convencionales y la forma de dosificacion se puede preparar de una manera convencional.

Para la aplicacion vaginal, el oligouronato (es decir oligoguluronato u oligogalacturonato) se aplica preferentemente en forma de una composicion acuosa esteril, por ejemplo, una solucion, gel, emulsion, crema o pasta, o como un comprimido, capsula o supositorio vaginal. Sin embargo, se prefieren las formas en gel, especialmente los geles acuosos lubricantes. Tales composiciones, que estaran libres de espermicida, pueden contener si se desea, agentes adicionales para aumentar la funcion del esperma, por ejemplo, reguladores del pH y antioxidantes, o para ayudar a la inseminacion, por ejemplo, relajantes musculares, lubricantes, etc. Claramente, las composiciones pueden contener componentes adicionales farmaceuticos o cosmeticos fisiologicamente tolerables tales como los que se encuentran normalmente en las composiciones para la aplicacion vaginal, por ejemplo, aglutinantes, diluyentes, cubiertas de capsulas solubles, aromas, antibioticos, vitaminas, aceites, emulsionantes, bases de supositorio, etc.

El oligouronato estara preferentemente presente como aproximadamente de 0,1 a 2,5 g por unidad de dosificacion, mas preferentemente de 0,5 a 2 g por unidad de dosificacion, mas preferentemente de 0,5 a 2 g/unidad de dosificacion para una mujer adulta humana. Las dosificaciones para otras especies se pueden calcular de manera analoga en referencia al tamano medio corporal, por ejemplo [(0,1 a 2,5)/60] g/unidad de dosificacion/kg de peso corporal, etc.

La composicion se aplica preferentemente antes de la inseminacion, por ejemplo, de 1 a 60 horas antes, preferentemente de 2 a 48 horas antes, especialmente de 4 a 36, por ejemplo, de 20 a 52 horas antes. Esto se puede conseguir por ejemplo por ducha vaginal, por insercion vaginal de un comprimido o capsula degradable en agua, o por inyeccion de un gel o pasta. El momento de la aplicacion se puede seleccionar controlando los parametros indicativos de la ovulacion o proximidad de la ovulacion, por ejemplo, la temperatura.

Si se desea, la composicion se puede aplicar dos o mas veces, por ejemplo, bastante antes de la inseminacion y poco antes (por ejemplo, 1 hora antes) de la inseminacion.

Cuando se incluye un regulador del pH en la composicion, es preferentemente tal que produzca que el pH vaginal se vuelva ligeramente basico, por ejemplo un pH de 7,1 a 7,6, especialmente aproximadamente un pH de 7,4. Se pueden utilizar tampones de rutina fisiologicamente tolerables a este respecto.

La hembra tratada con el metodo de la invencion es preferentemente una mujer humana, en particular una a la que se le han diagnosticado problemas de fertilidad debido a mucus problematico. El metodo, sin embargo, se puede utilizar por otras mujeres humanas con una edad capaz de gestar con el fin de aumentar la probabilidad de gestacion. Tambien se puede utilizar por veterinarios y criadores de animales, por ejemplo, granjeros, para animales tales como vacas, caballos, perros, gatos, ovejas, cabras, cerdos, etc.

Las composiciones de la invencion para aplicacion vaginal se envasan preferentemente junto con instrucciones de uso en el metodo de la invencion, particularmente preferentemente en forma de unidad de dosificacion, y especialmente preferentemente junto con un aplicador, por ejemplo, una jeringa. Se prefiere especialmente el uso de jeringas pre-cargadas. De manera alternativa el aplicador puede tener forma de un diafragma del cuello uterino,

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cargado en el lado concavo con la composicion, que se eliminara antes de la inseminacion a menos que la membrana del diafragma sea permeable al esperma o material hidrosoluble. Tales jeringas y diafragmas forman aspectos adicionales de la presente invencion.

Para la administracion en el tracto gastrointestinal de manera rectal, la dosificacion diaria sera tipicamente de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal, mas preferentemente de 1 a 50 mg/kg, especialmente de 1,5 a 25 mg/kg (basandose en la sal sodica). La administracion es preferentemente de una a cuatro veces al dfa.

Para la administracion en los ofdos, la dosificacion diaria sera tfpicamente de 0,05 a 4 mg/kg de peso corporal (basandose en la sal sodica), mas preferentemente de 0,1 a 2 mg/kg. La administracion se efectua preferentemente una a cuatro veces al dfa.

La dosis optima se puede determinarse facilmente por los experimentos de variacion de dosificacion de rutina, opcionalmente a continuacion de una investigacion inicial de un modelo animal, por ejemplo, un modelo de perro.

Las composiciones de la invencion pueden producirse utilizando vetuculos y excipientes farmaceuticos convencionales, por ejemplo, disolventes esteriles (tales como el agua, especialmente el agua para inyecciones), modificadores de la osmolalidad, saborizantes, reguladores del pH, etc. Pueden contener principios activos adicionales, por ejemplo, agentes que sirvan para degradar biopolfmeros que no esten implicados en la matriz de mucina del mucus (por ejemplo, DNasa, particularmente la rhDNasa), agentes antibacterianos, anestesicos y anti- inflamatorios. La terapia de combinacion utilizando tal agente adicional y el oligoguluronato u oligogalacturonato, que se administran por separado o juntos es una realizacion particularmente preferida del metodo de la invencion. Tales agentes adicionales se pueden utilizar en sus dosis normales o incluso a dosis menores, por ejemplo, al 50 % de la dosis normal.

El oligoguluronato u oligogalacturonato que se utiliza de acuerdo con la invencion tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion (DPn) desde 7 a 15, mas preferentemente de 8 a 12, especialmente aproximadamente 10. La distribucion del peso molecular es preferentemente tal que no mas del 5 % molar tenga un grado de polimerizacion (DP) por encima de 17, mas preferentemente no mas del 5 % molar tiene un DP por encima de 14, aun mas preferentemente no mas del 5 % molar tiene un DP por encima de 12 (por ejemplo, en cada caso anterior un DP dos veces mayor que el lfmite superior relevante para el DPn). Igualmente se prefiere que no mas del 5 % molar tenga un DP por debajo de un numero dos veces menor que el lfmite inferior relevante de DPn).

El contraion del oligoguluronato u oligogalacturonato puede ser cualquier cation fisiologicamente tolerable, por ejemplo, cualquiera de los iones fisiologicamente tolerables que se utilizan comunmente para sustancias farmacologicas con carga, por ejemplo, iones de sodio, potasio, meglumina, etc. que promueven la gelificacion de alginato, por ejemplo, metales grupo 2, sin embargo preferentemente no se utilizaran. Se prefiere en general el sodio.

Por lo tanto, vista desde un aspecto mas, la invencion proporciona una composicion lfquida acuosa pulverizable esteril que comprende una solucion acuosa de un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 5 a 18 (preferentemente de 7 a 15, mas preferentemente de 8 a 12, especialmente aproximadamente 10), una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,80 (preferentemente al menos de 0,85, mas preferentemente al menos de 0,90, especialmente al menos de 0,92, mas especialmente al menos de 0,95), una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,20 (preferentemente no mas de 0,15, mas preferentemente no mas de 0,10, especialmente no mas de 0,08, mas especialmente no mas de 0,05), y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 20 (preferentemente menos de 17, mas preferentemente menos de 14), conteniendo dicha solucion dicho oligoguluronato a una concentracion de 40 a 140 mg/ml, preferentemente de 50 a 100 mg/ml, especialmente de 55 a 75 mg/ml (basandose en la solucion salina).

Vista desde un aspecto mas, la invencion proporciona un aplicador en pulverizador que comprende un deposito y un generador de gotas, conteniendo dicho deposito una solucion o composicion acuosa esteril de acuerdo con la invencion. Tales aplicadores en pulverizador, y tambien los oligoguluronatos u oligogalacturonatos, se pueden utilizar en el tratamiento de fibrosis qrnstica, bloqueo nasal o sinusal, o congestion que resulta del resfriado comun u otras razones.

Las composiciones que se pretenden para inhalacion en los pulmones contienen convenientemente un agente reductor de la viscosidad adicional fisiologicamente tolerable, por ejemplo, una enzima de escision de acido nucleico (por ejemplo una DNasa tal como la DNasa I), gelsolina, un agente reductor de tiol, una acetilcistema, cloruro sodico, un polisacarido sin carga de bajo peso molecular (por ejemplo, dextrano), arginina (u otros precursores o estimulantes de la smtesis de acido mtrico), o un poliaminoacido anionico (por ejemplo, poliASP o poliGLU). Se prefiere especialmente el uso de una DNasa.

Para la administracion en los pulmones, los oligouronatos pueden estar en forma de polvo, por ejemplo, con un tamano de partfcula de aproximadamente modo nanometro a micrometro (por ejemplo, de 10 a 50.000 nm).

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Vista desde un aspecto mas, la invencion proporciona oligoguluronatos u oligogalacturonatos fisiologicamente tolerables que tienen un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 7 a 15 (preferentemente de 8 a 12), una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,92 (preferentemente al menos de 0,95), una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,08 (preferentemente no mas de 0,05), y que tienen al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 17 (preferentemente menor de 14) para su uso en medicina.

Vista desde un aspecto mas, la invencion proporciona el uso de un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 7 a 15 (preferentemente de 8 a 12), una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,92 (preferentemente al menos 0,95), una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,08 (preferentemente no mas de 0,05), y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 17 (preferentemente menor de 14) para la fabricacion de un medicamento para su uso en un metodo de tratamiento medico para reducir la viscosidad del mucus en una superficie mucosa por la aplicacion en dicha superficie, por ejemplo, en el tratamiento de la fibrosis qrnstica, otitis media adhesiva, sinusitis, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC, especialmente sus formas humedas), bronquitis, enfisema, fertilidad alterada, o para aumentar el suministro de un farmaco a traves de una superficie mucosa.

Vista desde un aspecto adicional mas, la invencion proporciona el uso de un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero de polimerizacion en el intervalo de 7 a 15 (preferentemente de 8 a 12), una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,85 (preferentemente al menos 0,92), una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,15 (preferentemente no mas de 0,08), y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 17 (preferentemente menor de 14) para la fabricacion de un medicamento que contiene dicho oligoguluronato u oligogalacturonato en una solucion acuosa esteril con una concentracion de 40 a 140 mg/ml (basandose en la sal sodica) para su uso en un metodo de tratamiento medico para reducir la viscosidad del mucus en una superficie mucosa por la aplicacion en dicha superficie, por ejemplo, en el tratamiento de la fibrosis qrnstica, otitis media adhesiva, sinusitis, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC, especialmente sus formas humedas), bronquitis, enfisema, fertilidad alterada, o para aumentar el suministro de un farmaco a traves de una superficie mucosa.

Vista desde un aspecto adicional mas, la invencion proporciona un metodo de tratamiento de un sujeto humano o animal vertebrado no humano (por ejemplo, un mairnfero, ave o reptil, preferentemente un mairnfero) para reducir la viscosidad del mucus en una superficie mucosa del mismo, cuyo metodo comprende la administracion a dicha superficie de una cantidad eficaz de un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 7 a 15 (preferentemente de 8 a 12), una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,92 (preferentemente al menos 0,95), una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,08 (preferentemente no mas de 0,05), y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion de menos de 17 (preferentemente menor de 14).

Vista desde un aspecto adicional mas, la invencion proporciona un metodo de tratamiento de un sujeto humano o animal vertebrado no humano (por ejemplo, un mairnfero, ave o reptil, preferentemente un mairnfero) para reducir la viscosidad del mucus en una superficie mucosa del mismo, cuyo metodo comprende la administracion a dicha superficie de una cantidad eficaz de una solucion acuosa esteril que contiene, con una concentracion de 40 a 140 mg/ml (basandose en la sal sodica), un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 7 a 15 (preferentemente de 8 a 12), una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,85 (preferentemente al menos 0,92), una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,15 (preferentemente no mas de 0,08), y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 17 (preferentemente menor de 14).

En los metodos de la invencion, la administracion a la superficie mucosa puede ser directa, por ejemplo, por insercion de un supositorio vaginal, por inyeccion de un gel vaginal, por inyeccion o administracion de gotas en el ofdo o la nariz, o por inhalacion de gotas pulverizadas en la nariz o los pulmones, o indirecta, por ejemplo, por la administracion de un supositorio o enema para alcanzar el extremo distal del tracto gastrointestinal.

Vista desde otro aspecto, la invencion proporciona un metodo de tratamiento de un sujeto humano o animal vertebrado no humano (por ejemplo, un mairnfero, ave o reptil, preferentemente un mairnfero) para combatir la hiperviscosidad del mucus en los ofdos, senos o pulmones de dicho sujeto, cuyo metodo comprende la administracion en los ofdos, nariz o pulmones de dicho sujeto de una cantidad eficaz de un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 5 a 18, una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,92, una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,08, y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 20, preferentemente en una solucion acuosa esteril a una concentracion de 40 a 140 mg/ml (basandose en la sal sodica).

La aplicacion del oligouronato en este metodo puede ser por medios que lo suministran en una superficie secretora de mucus, o que porta mucus en los ofdos o tracto respiratorio del paciente, por ejemplo, los senos paranasales o

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mas preferentemente en los pulmones. La introduccion sera tipicamente por inhalacion, por ejemplo de gotas Kquidas (por ejemplo, un aerosol) o un polvo, o por administracion de gotas en la nariz u ofdos.

Los inventores tambien han descubierto que los oligoguluronatos y oligogalacturonatos se pueden utilizar para aumentar la captacion a traves de una superficie mucosa de un agente fisiologicamente activo (en lo sucesivo en el presente documento “una sustancia farmacologica”). Por lo tanto, vista desde un aspecto adicional, la invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende una sustancia farmacologica y un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 5 a 18, una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,80, una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,20, y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 20, preferentemente se prefiere uno de los oligouronatos descritos anteriormente. Tales composiciones pueden tener cualquier forma convencional, por ejemplo polvos, comprimidos, capsulas, soluciones, supositorios, dispersiones, etc., y se pueden producir de una manera convencional utilizando vetuculos y excipientes farmaceuticos convencionales. La sustancia farmacologica preferentemente es una molecula cargada, especialmente una macromolecula (por ejemplo, que tiene un peso molecular por encima de 2 kDa), por ejemplo un poli-electrolito o anfolito, en particular una molecula cargada negativamente. Por lo tanto, por ejemplo, la sustancia farmacologica puede ser una macromolecula compleja tal como una glucoprotema, por ejemplo transferrina. Vista desde un aspecto mas, la invencion proporciona el uso de un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 5 a 18, una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,80, una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,20, y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 20, preferentemente se prefiere uno de los oligouronatos descritos anteriormente, para la fabricacion de un medicamento que contiene ademas una sustancia farmacologica para su administracion a una superficie mucosa para la captacion de dicha sustancia farmacologica a traves de la misma. Vista desde un aspecto adicional mas, la invencion proporciona un metodo de tratamiento de un sujeto humano o animal vertebrado no humano por la administracion a una superficie mucosa de este de una cantidad eficaz de una sustancia farmacologica para combatir una afeccion que responde a dicha sustancia farmacologica, comprendiendo la mejona la administracion de dicha sustancia farmacologica con un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 5 a 18, una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,80, una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,20, y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 20, preferentemente se prefiere uno de los oligouronatos descritos anteriormente. La administracion sera tfpicamente nasal, por inhalacion, rectal o vaginal. La sustancia farmacologica se utilizara tfpicamente de 50 a 110 % de su dosis normal.

Aunque el oligouronato puede ser un material sintetico, es preferentemente un derivado de un polisacarido de origen natural. Puede ser un unico compuesto o puede ser una mezcla de compuestos de oligouronato, por ejemplo, de un intervalo de grados de polimerizacion.

Los oligouronatos son facilmente accesibles a partir de fuentes naturales ya que muchos polisacaridos naturales estan en una forma de bloques de co-polfmeros que contienen bloques de restos de acido guluronico (denominados bloques-G), frecuentemente junto con bloques de restos de acido manuronico (denominados bloques-M). Los bloques-M o bloques-M/G se pueden utilizar en lugar de los bloques-G de acuerdo con la invencion; sin embargo esto no es lo preferido.

La escision del polisacarido a oligosacarido para producir oligouronatos que se puedan utilizar de acuerdo con la presente invencion se puede llevar a cabo utilizando tecnicas de lisis de polisacaridos convencionales tales como digestion enzimatica e hidrolisis acida. Sin embargo se prefiere el uso de hidrolisis acida. Los oligouronatos con la DPn y la distribucion del peso molecular deseadas se pueden separar entonces de los productos de degradacion del polisacarido de manera cromatografica utilizando una resina de intercambio ionico, por precipitacion o solubilizacion fraccionada, o por dialisis.

Los polisacaridos adecuados se tratan por ejemplo en "Handbook of Hydrocolloids", Ed. Phillips and Williams, CRC, Boca Raton, Florida, Estados Unidos, 2000. El uso de alginatos sin embargo se prefiere especialmente ya que estos se encuentran naturalmente como co-polfmeros de bloques de acidos manuronico (M) y guluronico (G) y los oligomeros de bloques-G se pueden producir facilmente a partir de materiales de una fuente de alginato.

Cuando se utilizan los alginatos como material de partida para la preparacion del oligouronato, el contenido de acido guluronico puede aumentarse si se desea por epimerizacion con epimerasas C-5 del manouronano de A. vinelandii.

Los oligoguluronatos adecuados para su uso de acuerdo con la invencion se pueden producir convenientemente por hidrolisis acida del acido algmico de Laminaria hyperborea, disolucion a pH neutro, adicion de acido mineral para reducir el pH a 3,4 para precipitar el oligoguluronato, lavado con un acido debil, resuspension a pH neutro y liofilizacion.

La invencion se describira ahora adicionalmente en referencia a los siguientes Ejemplos y los dibujos adjuntos, en los que:

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Las Figuras 1a y 1b, 2a y 2b, y 3a y 3b muestran los cambios en G* (arriba) y ^* (abajo) en el esputo de un paciente con EPOC con el tiempo y en funcion de oligouronato anadido;

La Figura 4 es un cromatograma Dionex del material del bloque-G con DPn 10 que se utiliza en el Ejemplo 7 y a modo de comparacion el material precursor con DPn 19 del que no se ha retirado la cola de alto peso molecular; y

La Figura 5 muestra el desarrollo con el tiempo de las propiedades mecanicas de un mucus modelo en presencia de los materiales de bloque-G de la Figura 4.

Ejemplo 1

Preparacion de oligoguluronato sodico de DPn 5 a 18

1. Se hidrolizo extensamente un acido algmico rico en guluronato (pH 2-3; 15-40 % de peso seco) del peciolo de Laminaria hyperborea con un acido mineral u organico, preferentemente HCl, a 70-100 °C durante 2-12 h.

2. Tras la hidrolisis, el pH de la mezcla de oligosacaridos se aumenta a 3-4 y se lava con agua de baja fuerza ionica para eliminar los fragmentos ricos en M y componentes de bajo peso molecular.

3. Si fuera necesario, la mezcla de oligosacaridos purificada se hidroliza y se purifica adicionalmente como en las etapas 1 y 2.

4. La mezcla purificada de oligosacaridos se neutraliza entonces con un alcali, preferentemente NaOH o Na2CO3, para dar los bloques-G solubles y se ajusta el contenido en peso seco a 2,5-20 %.

5. Para obtener un producto con un promedio en numero del grado de polimerizacion aceptable asf como una distribucion del peso molecular, la solucion de bloques-G se filtra dos veces. Primero a traves de un filtro con un corte aproximado de 1000 Da para retirar los oligomeros por debajo de DP 5. Lo retenido se filtra entonces a traves de un filtro con un corte aproximado de 4000 Da para retirar los fragmentos de bloque-G por encima de DP 20 aproximadamente.

6. Si fuera necesario, el contenido en sustancia seca del permeado se ajusta y la solucion se seca por pulverizacion. El polvo blanquecino o amarillo claro resultante (producto) tienen un contenido de humedad menor del 15 %.

Ejemplo 2

Preparacion de oligoguluronato sodico de DPn 7 a 15 Las etapas de preparacion son las siguientes:

1. Como en el Ejemplo 1 anterior.

2. Como en el Ejemplo 1 anterior.

3. Como en el Ejemplo 1 anterior.

4. Para optimizar el rendimiento y la pureza, el contenido en sustancia seca de la mezcla de oligosacaridos se ajusta a 5-15 %, la mezcla de oligosacaridos se solubiliza en un tampon de acido acetico (50-250 mM) para conseguir un pH final de la solucion de 3,8 - 5,0.

5. El oligosacarido solubilizado en tampon de acetato se hidroliza adicionalmente homogeneamente a 70-100 °C durante 1-15 horas para disminuir el contenido de fragmentos de alto peso molecular y aumentar los fragmentos de bloques-G fisiologicamente activos.

6. La filtracion (incluyendo tambien la desalacion) y el secado por pulverizacion se efectua como se ha descrito en las etapas 5 y 6 del Ejemplo 1 anterior.

Los oligoguluronatos tambien se pueden preparar como se describe en la Patente de EE. UU. N° 6121441 y en la Patente de EE. UU. N° 6407226. De hecho, los productos de los Ejemplos 1 y 2 del presente documento pueden producirse ventajosamente utilizando un oligoguluronato que se produce de acuerdo con la Patente de EE. UU. N° 6121441 como el material de partida.

Ejemplo 3

Caracterizacion y control de calidad

Para los Ejemplos 1 y 2, incluyendo la comprobacion de los productos intermediarios, se utilizaron las siguientes tecnicas:

Se determino la pureza (contenido de restos de acido guluronico) y promedio en numero del grado de polimerizacion por espectroscopia 1H-NMR como esta descrito por Grasdalen et al en Carbohydr. Res. 68(1):23- 31 (1979).

Tambien se utilizo cromatograffa anionica de alta precision combinada con deteccion amperiometrica de pulso (HPAEC-PAD), comercializada por Dionex, para la caracterizacion del material oligomerico. Se utilizo el siguiente metodo para la caracterizacion de los bloques-G:

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1. Se solubilizan las muestras de bloques-G en agua MQ, 1-2 mg/ml.

2. Se utilizo una solucion de NaOH 0,1 M (sin carbonato) como fase movil, y se utilizo acetato sodico 1,0 M como eluyente. Todas las soluciones se desgasificaron con helio y se filtraron a traves de un filtro de 0,22 micrometros.

3. Se inyectaron muestras de 20 microlitros, y se emplearon una pre-columna AG4A y una columna principal lonPac 4x250 AS4A.

4. Las columnas se eluyeron con un gradiente lineal desde 0 a 87,5 % de acetato de Na en un NaOH 0,1 M durante 90 minutos. La velocidad de elucion es de 1 ml/min con un regimen de presion de 650-750 psi.

5. Tras determinar el factor de respuesta como una funcion de la longitud de cadena, se puede calcular la concentracion de cada oligomero, lo que implica que se puede determinar tanto el numero como el promedio en peso del peso molecular asf como la distribucion de peso molecular.

Posible tratamiento adicional de los oligosacaridos: esta consideracion, es decir, si los parametros relevantes estan fuera de los intervalos deseados, se relaciona con el rendimiento de fabricacion del producto. No es problema tener algo de producto hidrolizado de alginato alto en G para ajustarse dentro de los intervalos de parametros requeridos, pero el rendimiento puede ser menor. Con el fin de optimizar el rendimiento y continuar dentro de los intervalos de parametros requeridos, se pueden sugerir las siguientes advertencias:

a) Fc demasiado bajo: hidrolisis adicional (siendo las uniones GG mas estables frente a la hidrolisis acida) o/y lavado adicional con valores de pH ligeramente mas altos (los fragmentos ricos en M son mas solubles en acido que los fragmentos ricos en G).

b) DPn “erroneo”: si el DPn promedio es demasiado bajo, el rendimiento se reducira debido a un aumento de la perdida cuando se filtra a traves del filtro de 1 kDa. El rendimiento sin embargo se puede aumentar cuando el DPn promedio es demasiado alto; aqrn, un aumento de la hidrolisis acida resultara en mas moleculas que estan en el intervalo de parametros deseados.

Ejemplo 4

Soluciones para la administracion

Las soluciones para inhalacion se preparan disolviendo oligoguluronatos sodicos de un DPn 5 a 18 o 7 a 15 que se preparan segun los Ejemplos 1 y 2 respectivamente en agua esteril para inyeccion a concentraciones de 6, 8 y 10 %

p.

Se cargan entonces alfcuotas de estas en un aplicador pulverizador para la administracion en los pulmones en dosis de 1 a 5 ml, preferentemente 2-3 ml.

Se cargan alfcuotas adicionales en botellas con tapas que tienen cuentagotas. Se pueden administrar las gotas en la nariz u ofdos, por ejemplo, 2-4 gotas por ofdo o narina.

Ejemplo 5

Gel vaginal

Los oligoguluronatos sodicos preparados segun los Ejemplos 1 y 2 se mezclan en un gel lubricante comercial (por ejemplo, K-Y Jelly (de Johnson & Johnson) o Astroglide (de BioFilm Inc)) a concentraciones de 5 y 15 % p. El gel se aplica liberalmente, preferentemente de 2-4 horas antes de la inseminacion o el coito.

Ejemplo 7

Efecto sobre la mucina

Las muestras de esputo se recolectaron de pacientes con enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC). Las muestras se agitaron suavemente, se dividieron en porciones, se congelaron y se almacenaron a -40 °C.

Las muestras de control y las mezcladas (esputo y bloque-G) se agitaron suavemente durante 1 min, se eliminaron los gases a aproximadamente 10 mBar durante 2 x 1 minuto y posteriormente se colocaron en el frigonfico durante 5 min antes de transferirse al reometro para el ensayo.

Las mediciones reologicas del esputo de EPOC puro y mezclado se llevo a cabo en placa/cono (40 mm/1° o 25 mm/1°, dependiendo de la calidad de la muestra) utilizando el reometro de uso general Rheologica Stress-Tech a 10 °C para minimizar el efecto de cualquier enzima proteolftica que estuviera presente.

La caracterizacion reologica del esputo de EPOC puro y el esputo mezclado con bloques-G se llevo a cabo en cuatro etapas diferentes: 1

1. Control del esfuerzo oscilante durante 2 minutos con esfuerzo constante de 0,03 y frecuencia a 1 Hz.

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2. Control del esfuerzo oscilante despues de una pre-cizalladura (tasa de cizalladura de 1 min a 20 s-1) durante 60 min con esfuerzo constante de 0,03 y frecuencia a 1 Hz.

3. Barrido de frecuencia con un intervalo de 0,01 - 5 Hz a un esfuerzo constante de 0,03.

4. Barrido de estres con un intervalo de 0,02 - 20 Pa a 1 Hz.

El tratamiento n° 2 (pre-cizalladura y medicion de 1 hora) representa la base de los resultados experimentales que se presentan. Esta tratamiento se repitio 2-3 veces en 0-24 h.

Se presentan aqu los resultados de tres muestras de esputo de EPOC ex vivo. Se ensayaron reologicamente “como tal” (control) asf como habiendose dosificado con la adicion de bloques-G:

- esputo puro (control)

- esputo + 75 microlitros 150 mg/ml (por cada 0,5 g de muestra de esputo) de oligomeros de guluronato sodico DP 10.

El oligomero de guluronato sodico DP 10 tema las siguientes caractensticas:

Fg 0,79, Fm 0,11, Fgg 0,76, Fgm-Fmc 0,03, Fmm 0,07,

Fmgg-Fggm 0,02, Fmgm 0,01, Fcgg 0,74, FG(rojo) 0,10, FG(tot) 0,89, DPn 10

Las Figuras 1a, 2a y 3a muestran el desarrollo del modulo complejo (G*) para las muestras de esputo de EPOC (con y sin oligoguluronato) despues del final del tratamiento de pre-cizalladura y a determinados espacios de tiempo tras la introduccion del oligouronato. Las Figuras 1b, 2b y 3b muestran el desarrollo de la viscosidad del complejo de la misma muestra de esputo de las Figuras 1a, 2a y 3a.

La adicion de oligouronato reduce obviamente con el tiempo las propiedades mecanicas del esputo de EPOC ex vivo. Tanto el modulo del complejo dinamico asf como la viscosidad del complejo dinamico estan considerablemente reducidos. El cambio en el angulo de fase, sin embargo, no esta afectado en tanta medida como G* y eta* (datos no incluidos). Esto es lo mas importante ya que claramente muestra que las propiedades mecanicas del entramado de mucina estan preservadas.

Ejemplo 8

Cristalizacion en forma de hoja de helecho

Las composiciones de mucina se prepararon de la siguiente manera:

a) 18 mg de mucina por ml de NaCl acuoso 0,05 M;

b) 18 mg de mucina y 1 mg de alginato por ml de NaCl acuoso 0,05 M; y

c) 18 mg de mucina y 0,5 mg de oligomero de guluronato (DPn - 10, como M.

Las composiciones se secaron al aire y se registraron microfotograffas. documento) mostraban claramente que el oligomero de guluronato promovfa helecho.

Ejemplo 9

Propiedades mecanicas del mucus

Se prepararon dos modelos de materiales de mucus, el primero 18 mg/ml de mucina y 0,6 mg/ml de alginato en agua, el segundo solamente 18 mg/ml de mucina. Se anadio bloque-G DPn - 10 a 4 mg/ml (como en el Ejemplo 7) o DPn - 19 a cada uno y se registro el modulo del complejo dinamico G* de cada muestra. El G* es indicativo de las propiedades mecanicas del mucus. Los resultados se exponen en la Figura 5: desde arriba mucina/alginato; mucina; mucina/alginato mas DPn 19; y mucina/alginato mas DPn 10. Como se puede apreciar, el bloque-G DPn10, que carece de la cola de alto peso molecular, reduce el comportamiento tipo solido del mucus mas que el bloque-G DPn 19. La Figura 4 es un cromatograma Dionex para los dos bloques-G que se utilizaron. Como se puede apreciar, la muestra con DPn 19 tiene una protuberancia en el extremo derecho indicando la presencia de la cola de alto peso molecular.

Ejemplo 10

Composicion de Etanercept

Se disolvio el bloque-G DPn - 10 (como en el Ejemplo 7) a 40 mg/ml en una solucion acuosa para inyeccion de Etanercept de 50 mg/ml (disponible bajo la marca registrada Enbrel de Amgen, CA, EE. UU.).

en el Ejemplo 7) por ml de NaCl 0,05

Estas (no incluidas en el presente la cristalizacion en forma de hoja de

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Ejemplo 11

Composicion de Infliximab

Se disolvieron en agua esteril bloque-G DPn = 10 a 8 mg/ml (como en el Ejemplo 7) e infliximab a 10 mg/ml (disponible en Centocor, PA, EE. UU bajo la marca registrada Remicade).

Ejemplo 12

Composicion de Rituximab

Se disolvio el bloque-G DPn = 10 (como en el Ejemplo 7) a 10 mg/ml en una solucion acuosa para inyeccion de rituximab de 10 mg/ml (disponible bajo la marca registrada Rituxan de Genentech, CA, EE. UU.).

Ejemplo 13

Composicion de Eritropoyetina

Se disolvio el bloque-G DPn = 10 (como en el Ejemplo 7) a 8 mg/ml en una solucion acuosa para inyeccion de epoetina alfa de 4000 U/ml (disponible bajo la marca registrada Epogen de Amgen, CA, EE. UU.).

Ejemplo 14

Composicion de G-CSF

Se disolvio el bloque-G DPn = 10 (como en el Ejemplo 7) a 9 mg/ml en una solucion acuosa para inyeccion de pegfilgrastin de 10 mg/ml (disponible bajo la marca registrada Neulasta de Amgen, CA, EE. UU.).

Ejemplo 15

Composicion de Trastuzumab

Se disolvieron en agua bacteriostatica para inyeccion el bloque-G DPn = 10 a 15 mg/ml (como en el Ejemplo 7) y trastuzumab a 22 mg/ml (disponible bajo la marca registrada Herceptin en Genentech, CA, EE. UU).

Ejemplo 16

Composicion de Interferon

Se disolvio el bloque-G DPn = 10 (como en el Ejemplo 7) a 1 mg/ml en una solucion acuosa para inyeccion de interferon beta-1a de 30 microgramos/ml (disponible bajo la marca registrada Avonex de Biogen Idec, Hoofddorp, NL).

Ejemplo 17

Composicion de Insulina

Se disolvio el bloque-G DPn = 10 (como en el Ejemplo 7) a 10 mg/ml en una solucion acuosa para inyeccion de insulina de 100 U/ml (disponible bajo la marca registrada Humulin de Ely Lilly, IN, EE. UU.).

Las composiciones de los Ejemplos 10 a 17 se pueden administrar tfpicamente por via nasal, vaginal o sub-lingual, generalmente a dosificaciones del orden de magnitud recomendado por los proveedores de los compuestos farmacologicos disponibles comercialmente a los que se hace referencia en estos Ejemplos.

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REIVINDICACIONES

1. Una composicion farmaceutica que comprende (a) un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable que tiene un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 5 a 18, una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,80, una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,20, y que tiene al menos un 95 % molar con un grado de polimerizacion menor de 20 y (b) un farmaco macromolecular que tiene un peso molecular por encima de 2000 Da.
2. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, teniendo dicho oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 7 a 15, en el que no mas del 5 % molar tiene un grado de polimerizacion por encima de 17.
3. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 2, teniendo dicho oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable un promedio en numero del grado de polimerizacion en el intervalo de 8 a 12, en el que no mas del 5 % molar tiene un grado de polimerizacion por encima de 14.
4. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 3, teniendo dicho oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable un promedio en numero del grado de polimerizacion de 10.
5. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, teniendo dicho oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,85 y una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,15.
6. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, teniendo dicho oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,92 y una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,08.
7. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 2 o la reivindicacion 3, teniendo dicho oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable una fraccion de guluronato (o galacturonato) (Fg) de al menos 0,95 y una fraccion de manuronato (Fm) de no mas de 0,05.
8. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que el farmaco macromolecular es una glucoprotema.
9. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 8, en la que el farmaco macromolecular es la transferrina.
10. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para su uso como un medicamento.
11. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para su uso como un medicamento, en que dicha composicion es para la administracion en una superficie mucosa de un sujeto humano o vertebrado no humano.
12. Una composicion como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o para su uso de acuerdo con la reivindicacion 11, para su aplicacion por inhalacion.
13. Un oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en el tratamiento de un sujeto humano o animal vertebrado no humano por la administracion en una superficie mucosa del mismo de una cantidad eficaz de un farmaco macromolecular que tiene un peso molecular por encima de 2000 Da, en el que dicho oligoguluronato u oligogalacturonato se administra con dicho farmaco macromolecular.
14. El oligoguluronato u oligogalacturonato fisiologicamente tolerable para su uso de acuerdo con la reivindicacion 13, en que dicho farmaco macromolecular es como se define en la reivindicacion 8 o la reivindicacion 9.