ES2561094T3 - Productos de tejidos reticulados humanos o animales y sus métodos de fabricación y uso - Google Patents

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Abstract

Una bioprótesis degradable, que comprende: un material basado en colágeno reticulado que comprende la Reticulación A y la Reticulación B:**Fórmula** en el que: indica hebras de colágeno; R1 es**Fórmula** R2 es**Fórmula** R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -(CH2)n- y -CH2(O(CH2)n)m-OCH2-, n y m son independientemente un número entero de 1-6 y la cantidad de aminas libres (-NH2) en las hebras de colágeno está entre un 50 % y un 85 %.

Description

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DESCRIPCION
Productos de tejidos reticulados humanos o animales y sus metodos de fabricacion y uso Antecedentes de la invencion Campo de la invencion
Las realizaciones de la presente invencion se dirigen a controlar un proceso de reticulacion de colageno para crear productos reticulados con velocidades de degradacion adaptables para fines medicos. Las realizaciones adicionales se dirigen a productos tales como sustitutos de la piel y mallas quirurgicas fabricadas a partir de tales procesos y a metodos para usar tales productos en procedimientos medicos tales como tratar heridas cronicas, cicatrizado suplementario, soporte tisular y cirugia reconstructiva.
Descripcion de la tecnica relacionada
Muchos productos medicos se componen de materiales basados en tejidos humanos o animales. Los ejemplos de estos productos medicos incluyen, por ejemplo, valvulas cardiacas, injertos vasculares, protesis de vejiga urinaria, protesis de tendon, parches de hernia, mallas quirurgicas y sustitutos de la piel. Una ilustracion de un producto basado en un tejido humano o animal especifico es la protesis de valvula cardiaca. Las protesis de valvula cardiaca se fabrican normalmente a partir de valvulas aorticas porcinas o bien de pericardio bovino. Tales valvulas se fabrican normalmente pretratando el tejido con glutaraldehido u otros agentes de reticulacion y cosiendo el tejido en una aleacion metalica flexible o una endoprotesis vascular polimerica. Estos materiales de partida tisulares animales consisten principalmente en colageno, que proporciona a los tejidos su resistencia mecanica y su flexibilidad necesarias.
Los materiales basados en colageno, incluyendo el tejido completo, estan encontrando un uso aumentado en la fabricacion de dispositivos biomedicos, tales como implantes protesicos. El colageno es una proteina de origen natural con buena biocompatibilidad. Es el principal componente estructural de los vertebrados, formando fibras extracelulares o redes en practicamente cada tejido del cuerpo, incluyendo piel, hueso, cartilago y vasos sanguineos. Como un componente natural de la matriz extracelular, el colageno proporciona un buen medio fisiologico isotropico que promueve el crecimiento y la funcion de diferentes tipos celulares y facilita un rapido sobrecrecimiento del tejido hospedador en dispositivos medicos despues de la implantacion.
Basicamente pueden identificarse tres tipos de materiales basados en colageno, basandose en las diferencias en la pureza y la integridad de la red de haces de fibras de colageno inicialmente presentes en el material. El primer tipo incluye el tejido completo incluyendo sustancias distintas de colageno o celulas. Como resultado de usar el tejido completo, la composicion de origen natural y la fuerza y la estructura nativas de la red de haces de fibras de colageno se preservan. Los xenoinjertos de tejido completo se han usado en la construccion de protesis de valvulas cardiacas y en muchas otras protesis biomedicas. Sin embargo, la presencia de proteinas solubles, glucoproteinas, glucosaminoglucanos y componentes celulares en tales xenoinjertos de tejido completo pueden inducir una respuesta inmunologica del organismo hospedador al implante.
El segundo tipo de material basado en colageno incluye solamente la matriz de colageno sin las sustancias distintas de colageno. La estructura de origen natural de la red de haces de fibras de colageno se preserva de esta manera, pero la actividad antigenica de los materiales se reduce. Los materiales de colageno fibrosos obtenidos retirando las sustancias distintas de colageno antigenicas tendran generalmente propiedades mecanicas adecuadas.
El tercer tipo de material basado en colageno es colageno fibroso purificado. El colageno purificado se obtiene a partir del tejido completo dispersando o solubilizando en primer lugar el tejido completo por accion mecanica o bien enzimatica. La dispersion o la solucion de colageno se reconstituye despues por secado al aire, liofilizado o bien precipitado del colageno. De este modo puede obtenerse a partir del colageno diversas formas geometricas como laminas, tubos, esponjas o fibras. Los materiales resultantes, sin embargo, no tienen la resistencia mecanica de la estructura de colageno fibroso de origen natural.
Un problema principal en el uso de materiales basados en colageno para la implantacion y especialmente los xenoinjertos de tejido completo en los que el donante y el receptor son filogeneticamente distantes, es que estos materiales son propensos al rechazo agudo. Esto es una reaccion inmunologica rapida y violenta que da lugar a la destruccion del xenoinjerto. Para usar los materiales basados en colageno en dispositivos medicos fabricados, particularmente implantes bioprotesicos, su durabilidad y su rendimiento in vivo normalmente necesitan protegerse de una reaccion inmunologica aguda. Esto puede realizarse reticulando los materiales basados en colageno para suprimir la capacidad antigenica del material para prevenir la reaccion de rechazo agudo. Ademas, la reticulacion se usa para conservar o incluso mejorar las propiedades mecanicas y para potenciar la resistencia a la degradacion.
La reticulacion puede realizarse por medio de metodos fisicos, incluyendo, por ejemplo, radiacion UV y reticulacion deshidrotermica. Estos metodos dan como resultado una reticulacion directa pero generalmente de baja densidad.
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Se conocen varios metodos de reticulacion qmmica para materiales basados en colageno. Estos metodos implican la reaccion de un reactivo bifuncional con los grupos amina de los restos lisina o hidroxilisina en diferentes cadenas polipeptidicas o la activacion de grupos carboxilo de restos acido glutamico y aspartico seguido de la reaccion con un grupo amina de otra cadena polipeptidica para dar un enlace amina.
En comparacion con otros metodos conocidos, la reticulacion con glutaraldehido (GA) del colageno proporciona materiales con el mayor grado de reticulacion. Es actualmente el reactivo de reticulacion quimica mas frecuentemente usado para los materiales basados en colageno. El glutaraldehido es un dialdehido. El aldehido es capaz de interactuar quimicamente con grupos amino del colageno para formar enlaces quimicos. Este agente de reticulacion esta facilmente disponible, es barato y forma soluciones acuosas que pueden reticular eficazmente tejidos en un periodo relativamente corto. Usando reticulacion con GA, pueden lograrse resistencia aumentada a la biodegradacion, capacidad antigenica reducida y propiedades mecanicas mejoradas de los materiales basados en colageno. A pesar de la aceptacion del hospedador probada, la reticulacion de materiales basados en colageno usando GA ha demostrado tener caracteristicas citotoxicas, tanto in vitro como in vivo. Ademas, la reticulacion de materiales basados en colageno usando GA tiende a dar como resultado un endurecimiento del material y calcificacion.
La reticulacion tambien puede conseguirse con diisocianatos uniendo grupos amina en dos cadenas polipeptidicas adyacentes. En la primera etapa, se da la reaccion del grupo isocianato con un grupo amina (hidroxi)lisina, dando como resultado la formacion de un enlace urea. A partir de entonces se forma una reticulacion por la reaccion del segundo grupo isocianato con otro grupo amina. Los diisocianatos no muestran reacciones de condensacion como se observa en la reticulacion con GA. Ademas, no quedan reactivos residuales en el material. Una desventaja, sin embargo, es la toxicidad de los diisocianatos y la solubilidad en agua limitada de la mayoria de diisocianatos.
Otro metodo de reticulacion implica la formacion de una azida de acilo. El metodo de la azida de acilo implica la activacion de grupos carboxilo en la cadena polipeptidica. Los grupos activados forman reticulaciones reaccionando con los grupos amina del colageno de otra cadena. En primer lugar, los grupos carboxilo se esterifican reaccionando con un alcohol. Este ester se convierte despues en una hidrazida reaccionando con hidracina (H,N-NH2). Los grupos azida de acilo se forman reaccionando con una solucion acida de nitrito sodico. A bajas temperaturas y a valores de pH basicos, el grupo azida de acilo reacciona con un grupo amina primaria para dar enlaces amida. Esta reaccion multi-etapa da como resultado buenas propiedades del material; sin embargo, son necesarios tiempos de reaccion largos (por ejemplo, 7 dias). De forma alternativa, se ha desarrollado recientemente un metodo que no necesita una etapa de esterificacion o el uso de hidracina. En este metodo, un grupo carboxilo se convierte en un grupo azida de acilo en una unica etapa reaccionando con difenilfosforilazida (DPPA). Esto aumenta la velocidad de reaccion significativamente; sin embargo, la reaccion se lleva a cabo en un disolvente organico (por ejemplo, DMF), que es indeseable.
Ademas, pueden usarse carbodiimidas solubles en agua para activar los grupos carboxilo libres de los restos acido glutamico y aspartico en el colageno. La activacion de los grupos carboxilo con las carbodiimidas, tales como 1-etil- 3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida.HCl (EDC) da grupos O-acilisourea. Una reaccion de condensacion por ataque nucleofilico de un grupo amina libre de un resto de (hidroxi)lisina con urea como un grupo saliente da como resultado la formacion de una reticulacion amida. La O-acilisourea puede hidrolizarse tambien o redisponerse a una N-acilurea, que es mucho mas estable y no reaccionara para formar una reticulacion. Sin embargo, la adicion de N- hidrosuccinimida (NHS) previene esta redisposicion. En presencia de NHS, la O-acilisourea puede convertirse en un grupo carboxilo activado NHS, que tambien puede reaccionar con un grupo amina libre para formar una reticulacion. La adicion de NHS aumenta la velocidad de reaccion. Ademas, la reticulacion con EDC y NHS proporciona material de colageno con un alto grado de reticulacion; sin embargo, tambien da como resultado un material con una baja resistencia a la traccion.
Todavia otro metodo de reticulacion usa compuestos epoxi para reticular colageno. Vease, por ejemplo, los documentos de Patente de EEUU n.° 4.806.595 (Noishiki et al.), n.° 5.080.670 (Imamura et al.), n.° 5.880.242 (Hu et al.), n.° 6.117.979 (Hendriks et al) y n.° 7.918.899 (Girardot et al.). Los compuestos epoxi (es decir, los epoxidos) pueden someterse tanto a reacciones catalizadas por acidos y catalizadas por bases con un numero de grupos funcionales, incluyendo grupos amina y grupos acido carboxilico, en las condiciones apropiadas. Normalmente, la reticulacion del colageno con los epoxidos se lleva a cabo a un pH basico (por ejemplo, pH 8-10) con el resultado de que la reticulacion se da a traves de los grupos amino libres del colageno.
El objeto comun a todos estos metodos de reticulacion es “reticular completamente” el colageno (generalmente considerado como lograr reticulaciones entre al menos el 80 % de las moleculas de colageno) para crear productos con baja inmunogenicidad y una alta resistencia al ataque enzimatico por el cuerpo hospedador (y por lo tanto durabilidad a muy largo plazo). Sin embargo, se mantiene una necesidad de crear productos, especificamente materiales basados en colageno, que tengan gran durabilidad (definida como retention de alta resistencia despues del implante) pero cuyo fin sea degradarse durante la cicatrization de tal manera que se disuelvan completamente en esencia cuando el proceso de cicatrizado se complete.
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El documento US2006/159641 A describe un metodo para producir un tejido biologico reticulado que comprende tratar un tejido mientras que se controla la reticulacion para producir un tejido parcial o mmimamente reticulado y haciendo contactar el tejido con una solucion de bloqueo que comprende un agente de bloqueo.
El documento WO02/49687 A describe un tratamiento de un tejido con un agente de reticulacion, que incluye variar el pH desde un pH inicial de 1-3 hasta un pH final de 5-8 durante un tiempo de 30 min a 6 h.
El documento WO99/27979 A describe un metodo para preparar un tejido biologico fijado, que comprende reticular el tejido con glutaraldehido y poner en contacto simultanea o separadamente el material reticuladoo con un eter de poliglicidilo.
A pesar de la amplia diversidad de agentes de reticulacion disponibles, los perfiles de degradacion de los materiales de colageno protesicos actualmente en uso para la reconstruccion quirurgica general caen dentro de solamente dos categorias: 1) aquellos materiales de colageno protesicos que se bioreabsorben rapidamente cuando estan en uso o 2) aquellos materiales de colageno protesicos que duran mas de un ano en uso y, para todos los intentos y fines, no son bioreabsorbibles. Dentro de la categoria de los materiales rapidamente bioreabsorbidos, dominan dos clases de materiales de colageno bioprotesicos. El primero de tales materiales son materiales basados en colageno que no se han reticulado (por ejemplo colageno nativo). El segundo es colageno que esta completamente reticulado pero con reticulaciones que son hidrolizables, tales como reticulaciones basadas en ester. Generalmente, los materiales de colageno rapidamente bioreabsorbibles tienen una duracion funcional de 6 a 8 semanas en condiciones in vivo normales (tales como en una herida o un sitio quirurgico). El tiempo tomado para reabsorberse puede ser incluso menor en medios mas proteoliticos tales como en heridas cronicas tales como las ulceras de pie diabeticas. Durante la biodegradacion, estos materiales de colageno rapidamente bioreabsorbibles normalmente pierden resistencia prematuramente y otras caracteristicas funcionales importantes antes de que la herida cicatrice completamente, de esta manera comprometiendo el exito a largo plazo del procedimiento medico.
Las matrices de colageno extracelular no bioreabsorbibles son materiales reticulados por completo historicamente con reticulaciones no hidrolizables. Los ejemplos tipicos incluyen colageno que tiene reticulaciones basadas en aminas. La reticulacion basada en aminas proporciona un material que no es bioreabsorbible en el medio biologico in vivo. Los materiales de colageno extracelular completamente reticulados con reticulaciones no hidrolizables tienden a durar muchos anos, si no toda una vida, cuando se usa para la reparacion o la reconstruccion quirurgica. Como tales materiales retienen la resistencia durante el proceso de cicatrizado, su larga presencia puede ser problematica.
Sumario de la invencion
Dadas las limitaciones de los actuales biomateriales basados en colageno, ciertas realizaciones de la presente solicitud proporcionan metodos para sintetizar bioprotesis degradables (o individualmente una bioprotesis degradable), composiciones de bioprotesis degradables, productos fabricados a partir de las mismas y metodos para usar dichos productos y composiciones. Algunas realizaciones proporcionan un metodo para producir una bioprotesis degradable. En una realizacion, un metodo comprende proporcionar un material basado en colageno, exponer el material basado en colageno a una primera solucion tamponada con un pH entre 8,0 y 10,5 (o entre aproximadamente 8,0 a aproximadamente 10,5) durante un primer periodo de tiempo para proporcionar un material tratado basado en colageno, en el que la primera solucion tamponada comprende una concentracion de un primer agente de reticulacion, exponer el material tratado basado en colageno a una segunda solucion tamponada con un pH entre aproximadamente 3,0 y aproximadamente 5,5) durante un segundo periodo de tiempo para proporcionar un material basado en colageno reticulado adaptable, en el que la segunda solucion tamponada comprende una concentracion de un segundo agente de reticulacion y aislar el material basado en colageno reticulado adaptable para proporcionar una bioprotesis degradable. En algunas realizaciones, se proporciona una bioprotesis producida por el metodo anterior.
Otra realizacion de un metodo para producir una bioprotesis degradable comprende proporcionar un material basado en colageno y reticular de manera controlable el colageno de tal manera que solamente se entrecruce una porcion del colageno. En algunas realizaciones se proporciona una bioprotesis producida mediante el metodo anterior. A continuacion se describen otros metodos para producir una bioprotesis biodegradable.
En algunas realizaciones, se proporciona un material basado en colageno reticulado. En una realizacion, se proporciona un material basado en colageno reticulado que comprende la Reticulacion A y la Reticulacion B representados por
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en las que JVW indica hebras de colageno, R1 es
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R2 es
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y R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -(CH2V y -CH2(O(CH2)n)m-OCH2- donde n y m son independientemente un numero entero de 1-6 y la cantidad de aminas libres (-NH2) en las hebras de colageno esta entre un 50 % y un 85 % (o entre aproximadamente un 50 % y aproximadamente un 85 %). A continuation se describen otros metodos para producir una bioprotesis biodegradable.
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Algunas realizaciones proporcionan una bioprotesis que comprende un material basado en colageno reticulado que comprende la Reticulation A y la Reticulation B:
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en las que JVW indica hebras de colageno, R1 es
HO OH
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y R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -(CH2V y -CH(O(CH2)n)m-OCH2- donde n y m son independientemente un numero entero de 1-6 y la cantidad de aminas libres (-NH2) en las hebras de colageno esta entre un 50 % y un 85 % (o entre aproximadamente un 50 % y aproximadamente un 85 %).
Algunas realizaciones proporcionan una bioprotesis degradable que comprende un material adaptable basado en colageno reticulado. En una realization, un material basado en colageno comprende hebras de colageno que comprenden adicionalmente reticulaciones basadas en aminas y reticulaciones basadas en esteres y el material adaptable basado en colageno reticulado tiene una velocidad de degradation de entre un 0,2 % y un 1,0 % (o entre aproximadamente un 0,2 % y aproximadamente un 1,0 %) por hora cuando se somete a un ensayo de digestion con pronasa. A continuation se describen otros metodos para producir una bioprotesis biodegradable.
En otra realizacion, se proporciona una bioprotesis biodegradable que comprende un sustituto biologico de la piel que comprende colageno que esta reticulado entre un 20 % y un 80 % (o entre aproximadamente un 20 % y aproximadamente un 80 %).
Breve descripcion de los dibujos
La Figura 1 es un diagrama de flujo que representa una realizacion del metodo para sintetizar una bioprotesis adaptable basada en colageno reticulado.
La Figura 2 representa una realizacion del material basado en colageno reticulado producido usando el proceso descrito en el presente documento.
La Figura 3 es un diagrama que muestra la temperatura de contraction para los Ejemplos 1-7 y el colageno nativo.
La Figura 4 es un diagrama que muestra la resistencia a la digestion con proteasa de los Ejemplos 1-7 y del colageno nativo.
La Figura 5 es un diagrama de flujo que muestra las velocidades de degradacion (en % de perdida de masa por hora) de los Ejemplos 1-7 y del colageno nativo.
Descripcion detallada de ciertas realizaciones de la invencion
La presente divulgation se refiere a composiciones y metodos para sintetizar y usar tejido animal o humano basado en colageno reticulado adaptado para producir dispositivos bioprotesicos con velocidades de degradacion adaptadas.
Como se usa en el presente documento, la frase “material basado en colageno" se refiere a materiales que se han extirpado de tejido animal o humano, que pueden o pueden no estar reticulados. Dependiendo del nivel del procesamiento del tejido natural, los materiales basados en colageno pueden incluir colageno, tropocolageno, fibrillas de colageno o fibras de colageno. El colageno existe como una triple helice de cadenas de aminoacidos. Estas triples cadenas helicoidales, denominadas tropocolageno, se ensamblan adicionalmente para formar fibrillas de colageno. Estas fibrillas de colageno se ensamblan para formar fibras de colageno.
Como se usa en el presente documento, la frase “hebra de colageno" se refiere al tropocolageno, a las fibrillas de colageno y/o a las fibras de colageno. Las hebras de colageno tienen grupos colgantes amina (-NH2) y acido carboxilico (-COOH) que son reactivos. Estas aminas y grupos acido carboxilico se reticulan facilmente entre las hebras de colageno con diversos agentes de reticulation para formar estructuras con propiedades medias mejoradas. La reticulacion puede realizarse tomando ventaja de los grupos reactivos colgantes en la hebra de colageno.
Como se usa en el presente documento, la frase “tiempo de degradacion" se refiere a la cantidad de tiempo que toma un material basado en colageno para degradarse completamente o para degradarse hasta un grado tal que ya no sirva mas para el fin que se pretendia medicamente.
Como se usa en el presente documento, el termino “diepoxido" se refiere a un compuesto que tiene dos funcionalidades epoxido reactivas. Los epoxidos se han usado durante mucho tiempo como agentes de reticulacion para el colageno porque, cuando reaccionan completamente, la reticulacion de epoxido reduce la inmunogenicidad del colageno mientras que mejora las propiedades fisicas del material. Los diepoxidos utiles pueden incluir, pero no se limitan a, eter diglicidilico de glicol, eter diglicidilico de glicerol, eter diglicidilico de butanodiol, eter diglicidilico de resorcinol, eter diglicidilico de 1,6-hexanodiol, eter diglicidilico de etilenglicol, eter diglicidilico de dietilenglicol, eter diglicidilico de trietilenglicol, eter diglicidilico de polietilenglicol, eter diglicidilico de propilenglicol, eter diglicidilico de dipropilenglicol y eter diglicidilico de polibutadieno. Un ejemplo del diepoxido que puede usarse para reticular hebras de colageno es eter diglicidilico de 1,4-butanodiol (BDDGE).
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Como se usa en el presente documento, la frase “agente de reticulacion” puede referirse a diepoxidos o compuestos con tres o mas grupos funcionales epoxido. Los agentes de reticulacion utiles pueden incluir, pero no se limitan a, los diepoxidos anteriormente mencionados, eter triglicidilo de glicerol, eter poliglicidilo de sorbitol, eter poliglicidilo de poliglicerol, eter poliglicidilo de pentaeritritol, eter poliglicidilo de diglicerol, eter poliglicidilo de glicerol y eter poliglicidilo de trimetilolpropano.
Una necesidad sin cubrir en el area de la cicatrizacion de heridas, la cirugia general y la cirugia ortopedica es un material basado en colageno que pueda adaptarse para degradarse en intervalos, por ejemplo, mas de 8 semanas pero menos de 1 ano. Esta velocidad de degradacion adaptada puede hacer que se comporte como el ciclo de cicatrizacion de cada afeccion especifica. Los ejemplos de estas afecciones incluyen procedimientos tales como reparacion de hernias, cicatrizado de ulcera diabetica de pie y reparaciones de tendones ortopedicas por nombrar solo unas pocas. Las realizaciones de la presente invencion son objetivos hacia composiciones que tengan tiempos de degradacion adaptables.
Algunas realizaciones de la presente invencion se dirigen hacia el control de la relacion de los reticulaciones basadas en aminas a los reticulaciones basadas en esteres dentro de un material basado en colageno para proporcionar un material adaptable basado en colageno reticulado. Los inventores de la presente invencion han encontrado sorprendentemente que controlando el pH y el tiempo de reaccion durante la reticulacion de los materiales basados en colageno usando epoxidos, puede obtenerse un material adaptable basado en colageno reticulado. Sin desear quedar ligados a teoria alguna, los presentes inventores han descubierto que controlando el pH de la reaccion, la relacion de reticulacion basada en amina (Reticulacion A) al reticulacion basada en ester (Reticulacion B) en un material basado en colageno puede controlarse para producir una bioprotesis con una velocidad de degradacion controladamente adaptada. Como se ha mencionado previamente, los reticulaciones basadas en aminas forman enlaces estables. De esta manera, cuanto mayor sea la relacion de los reticulaciones basadas en aminas, menor sera la velocidad de degradacion de los materiales basados en colageno. De forma alternativa, los reticulaciones basadas en esteres se hidrolizan rapidamente in vivo. De esta manera, cuanto mayor sea la relacion de los reticulaciones basadas en esteres, mayor sera la velocidad de degradacion de los materiales basados en colageno. Manipulando la relacion de reticulaciones basadas en aminas y en esteres, la velocidad de degradacion puede ajustarse de forma adaptada a franjas de tiempo clinicamente relevantes.
En algunas realizaciones, se ha demostrado que el diepoxido BDDGE reticula completamente el colageno a una concentracion del 4 % en peso a volumen, un pH por debajo de 6 y un tiempo de reaccion de 160 horas. Como se usa en el presente documento, la frase “% en peso a volumen” o “% p/v” se refiere al peso de soluto (g) / volumen de solucion (ml) x 100. Se cree que a un pH bajo (por ejemplo, pH 3,0-5,5), la reticulacion se da principalmente a traves de una reaccion de carboxilatos en la hebra de colageno con epoxidos en el BDDGE. A pH bajo, se cree que los acidos carboxilicos de la hebra de colageno son mas nucleofilicos que los grupos amina de la hebra de colageno. A pH bajo, alguna cantidad de grupo acido carboxilico existe como un carboxilato (-RCOO®) que es en algun grado nucleofilico, mientras que el grupo amina principalmente se protona para formar un amonio primario (-R’NH3e), que no es nucleofilico. El carboxilato, por lo tanto, actua preferentemente como un nucleofilo en una reaccion con un agente de reticulacion epoxido. El grupo funcional resultante es un ester, formando de esta manera un reticulacion basada en ester (como se muestra a continuacion).
JWU indica una hebra de colageno
r
reticulacion basada en ester ___________A__________
A
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Reticulacion
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Los reticulaciones basadas en ester se hidrolizan facilmente y se biorreabsorben rapidamente. De esta manera, el tiempo de degradacion del colageno que se reticula completamente con reticulaciones basadas en esteres esta cerca del colageno nativo a alrededor de 8 semanas o menos. De esta manera, a pesar de la inmunogenicidad mejorada sobre el colageno nativo, la reticulacion a traves de estos grupos ester hace poco para ralentizar la velocidad de degradacion del colageno nativo. La velocidad de degradacion del colageno se mide por un % de perdida en la masa por unidad de tiempo medida en horas. Un experto en la materia tambien reconocera que cuando se lleva a cabo un reticulacion basada en diepoxido a un pH bajo, alguna cantidad de reticulaciones basadas en aminas se formara probablemente, asi como reticulaciones que se basan en la reaccion de tanto un carboxilato como una amina con un diepoxido (una hetero-reticulacion).
Tambien se sabe que reticular colageno a pH 9,2 con BDDGE durante 160 horas reticulara completamente el colageno. Se cree que esta reticulacion se da principalmente a traves de los grupos amina en las hebras de colageno, que a mayor pH existen en algun grado como aminas libres altamente nucleofilicas (-R'NH2). El grupo funcional resultante de la reaccion de una amina con un epoxido es una amina, de esta manera esto es un
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reticulacion basada en amina.
"" indica una hebra de colageno
reticulacion basada en amina ______A______
r
a
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Reticulacion
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Este reticulacion basada en amina da lugar a un material no reabsorbible con una velocidad de degradacion que excede un ano in vivo. Debido a que el reticulacion basada en amina es muy fuerte, no se degrada facilmente en condiciones in vivo tipicas. Un experto en la materia tambien reconocera que cuando se lleva a cabo un reticulacion basada en diepoxido a un pH alto, alguna cantidad de reticulaciones basadas en esteres se formara probablemente, asi como reticulaciones que se basan en la reaccion de tanto un carboxilato como una amina con un diepoxido (una hetero-reticulacion).
En algunas realizaciones, el tiempo de reaccion es lo suficientemente largo para asegurar la reticulacion sustancialmente completo de las hebras de colageno. La reticulacion sustancialmente completa de estas hebras de colageno puede ser importante para 1) instilar el material basado en colageno reticulado con buenas propiedades mecanicas y 2) reducir el numero de grupos funcionales epoxido sin reaccionar colgantes unidos al material basado en colageno reticulado y de esta manera disminuir la citotoxicidad. En algunas realizaciones, los tiempos de reaccion son suficientes para disminuir el numero de epoxidos colgantes hasta un grado tal que los materiales resultantes sean biocompatibles. De esta manera, las realizaciones de la estrategia actual dan como resultado un material reticulado que es altamente adaptable y biocompatible.
En algunas realizaciones, la relacion de Reticulacion A a Reticulacion B puede ajustarse controlando la cantidad de tiempo que un material basado en colageno se expone a una solucion tamponada de un diepoxido a un primer pH, despues controlando la cantidad de tiempo que el material tratado se expone a una segunda solucion tamponada de un diepoxido a un segundo pH.
Las realizaciones de la presente invencion proporcionan metodos para producir una bioprotesis degradable (por ejemplo, un implante o un dispositivo que se puede implantar, o un aposito para heridas aplicado topicamente) que comprende un material basado en colageno que se ha reticulado de forma controlada y se disena intencionadamente para degradarse durante un periodo prescrito de tiempo en el cuerpo, siendo tal tiempo generalmente menor de un ano. En algunas realizaciones, estos metodos tambien implican reticular parcialmente el material basado en colageno. Ventajosamente, estos metodos producen un material con una capacidad de prediccion y un grado repetidamente moderado de reticulacion, estabilidades de reticulacion variables y una resistencia moderada/adaptada hacia la digestion enzimatica despues de la implantacion.
Metodo para producir bioprotesis
Algunas realizaciones proporcionan un metodo para producir una bioprotesis degradable como se muestra en la Figura 1. La primera etapa 101 implica proporcionar un material basado en colageno. En algunas realizaciones, el tejido animal o humano se disecciona y se somete a un proceso de descelularizacion para dar como resultado un material basado en colageno. En algunas realizaciones, dependiendo del nivel de procesamiento del tejido natural, los materiales basados en colageno pueden ser colageno, tropocolageno, fibrillas de colageno o fibras de colageno. En algunas realizaciones el material basado en colageno se extirpa del pericardio de un animal o de un humano.
La etapa 102 implica exponer el material basado en colageno a una primera solucion tamponada que comprende un primer agente de reticulacion a un primer pH durante un primer periodo de tiempo para proporcionar un material tratado basado en colageno. En algunas realizaciones, el primer pH es suficientemente alto para dar como resultado reticulaciones que se basan en aminas principalmente. En algunas realizaciones, la primera solucion tamponada tiene un pH entre 8,0 y 10,5 (o aproximadamente 8,0 a aproximadamente 10,5). En algunas realizaciones, el pH de la primera solucion tamponada puede ser de 8,9 a 9,5 (o de aproximadamente 8,9 a aproximadamente 9,5), de 9,0 a 9,4 (o de aproximadamente 9,0 a aproximadamente 9,4) o de 9,1 a 9,3 (o de aproximadamente 9,1 a aproximadamente 9,3). En algunas realizaciones, el pH de la primera solucion tamponada puede ser 9,2 (o aproximadamente 9,2). La concentracion del primer agente de reticulacion en la primera solucion puede ser del 1 % al 10 % (o de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 10 %) (p/v), del 2 % al 8 % (o de aproximadamente el 2 % a aproximadamente el 8 %) (p/v), del 3 % al 7 % (o de aproximadamente el 3 % a aproximadamente el 7 %) (p/v) o del 4 % al 6 % (o de aproximadamente el 4 % a aproximadamente el 6 %) (p/v). En algunas realizaciones, la concentracion del primer agente de reticulacion en la primera solucion es el 4 % (o aproximadamente el 4 %) (p/v). El primer periodo de tiempo para la reaccion de reticulacion depende del nivel deseado de reticulacion y puede ser de 0,5 horas a 64 horas (o de aproximadamente 0,5 horas a aproximadamente 64 horas). En algunas realizaciones, el primer periodo de tiempo puede ser de 1 hora a 60 horas (o de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 60 horas), de 10 horas a 50 horas (o de aproximadamente 10 horas a aproximadamente 50 horas) o de 20 horas a 40
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horas (o de aproximadamente 20 horas a aproximadamente 40 horas). En algunas realizaciones el primer periodo de tiempo puede ser de 0,5 horas a 10 horas (o de aproximadamente 0,5 horas a aproximadamente 10 horas), de 10 horas a 20 horas (o de aproximadamente 10 horas a aproximadamente 20 horas), de 20 horas a 30 horas (o de aproximadamente 20 horas a aproximadamente 30 horas), de 30 horas a 40 horas (o de aproximadamente 30 horas a aproximadamente 40 horas), de 40 horas a 50 horas (o de aproximadamente 40 horas a aproximadamente 60 horas), de 50 horas a 60 horas (o de aproximadamente 50 horas a aproximadamente 60 horas) o de 60 horas a 64 horas (o de aproximadamente 60 horas a aproximadamente 64 horas). En algunas realizaciones, el material tratado basado en colageno comprende hebras de colageno parcialmente reticuladas y las reticulaciones son principalmente reticulaciones basadas en aminas.
La etapa 103 implica exponer el material tratado basado en colageno a una segunda solucion tamponada que comprende un segundo agente de reticulacion a un pH bajo durante un segundo periodo de tiempo para proporcionar un material adaptable basado en colageno reticulado. El pH de la segunda solucion tamponada es lo suficientemente bajo para dar como resultado reticulaciones que son principalmente basadas en esteres. En algunas realizaciones, el pH de la segunda solucion tamponada puede ser de 3,0 a 5,5 (o de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 5,5). En algunas realizaciones, el pH de la segunda solucion tamponada puede ser de 4,2 a 4,8 (o de aproximadamente 4,2 a aproximadamente 4,8), de 4,3 a 4,7 (o de aproximadamente 4,3 a aproximadamente 4,7) o de 4,4 a 4,6 (o de aproximadamente 4,4 a aproximadamente 4,6). En algunas realizaciones, el pH de la segunda solucion tamponada puede ser 4,5 (o aproximadamente 4,5). La concentration del segundo agente de reticulacion en la segunda solucion puede ser del 1 % al 10 % (o de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 10 %) (p/v), del 2 % al 8 % (o de aproximadamente el 2 % a aproximadamente el 8 %) (p/v), del 3 % al 7 % (o de
aproximadamente el 3 % a aproximadamente el 7 %) (p/v) o del 4 % al 6 % (o de aproximadamente el 4 % a
aproximadamente el 6 %) (p/v). En algunas realizaciones, la concentracion del primer agente de reticulacion en la primera solucion es el 4 % (o aproximadamente el 4 %) (p/v). El segundo periodo de tiempo para la reticulacion puede ser de 100 horas a 160 horas (o de aproximadamente 100 horas a aproximadamente 160 horas). En algunas realizaciones, el segundo periodo de tiempo para la reticulacion puede ser de 100 horas a 170 horas (o de aproximadamente 100 horas a aproximadamente 170 horas), de 110 horas a 160 horas (o de aproximadamente 110 horas a aproximadamente 160 horas), de 120 horas a 150 horas (o de aproximadamente 120 horas a
aproximadamente 150 horas) o de 130 horas a 140 horas (o de aproximadamente 130 horas a aproximadamente 140 horas). En algunas realizaciones, el segundo periodo de tiempo para la reticulacion puede ser de 100 horas a 110 horas (o de aproximadamente 100 horas a aproximadamente 110 horas), de 110 horas a 120 horas (o de aproximadamente 110 horas a aproximadamente 120 horas), de 120 horas a 130 horas (o de aproximadamente 120 horas a aproximadamente 130 horas), de 130 horas a 140 horas (o de aproximadamente 130 horas a
aproximadamente 140 horas), de 140 horas a 150 horas (o de aproximadamente 140 horas a aproximadamente 150 horas), de 150 horas a 160 horas (o de aproximadamente 150 horas a aproximadamente 160 horas) o de 160 horas a 170 horas (o de aproximadamente 160 horas a aproximadamente 170 horas). En algunas realizaciones, el segundo periodo de tiempo para la reticulacion puede realizarse durante un periodo que exceda 170 horas.
En algunas realizaciones, el segundo periodo de tiempo para la reticulacion es suficiente para reducir la cantidad de epoxidos colgantes hasta el punto en que el material ya no sea citotoxico.
En algunas realizaciones, el tiempo de exposition total a la primera y a la segunda soluciones tamponadas (el total del primer periodo de tiempo y el segundo periodo de tiempo) es tal que el material adaptable basado en colageno reticulado resultante se entrecruce sustancialmente por completo. En algunas realizaciones, el tiempo de exposicion total sera suficiente para producir un material que contenga una pequena cantidad suficiente de epoxidos libres colgantes de tal manera que el material sea biocompatible. En algunas realizaciones, la suma del primer periodo de tiempo y del segundo periodo de tiempo es de 100,5 horas a 110 horas (o de aproximadamente 100,5 horas a aproximadamente 110 horas), de 110 horas a 120 horas (o de aproximadamente 110 horas a aproximadamente 120 horas), de 120 horas a 130 horas (o de aproximadamente 120 horas a aproximadamente 130 horas), de 130 horas a 140 horas (o de aproximadamente 130 horas a aproximadamente 140 horas), de 140 horas a 150 horas (o de aproximadamente 140 horas a aproximadamente 150 horas) y/o de 150 horas a 160 horas (o de aproximadamente 150 horas a aproximadamente 160 horas). En algunas realizaciones, la suma del primer periodo de tiempo y del segundo periodo de tiempo es 160 horas (o aproximadamente 160 horas). En algunas realizaciones, la suma del primer y del segundo periodos de tiempo es mas largo de 160 horas.
De forma alternativa, el pH de las soluciones tamponadas y de los tiempos de reaction en las etapas 102 y 103 puede invertirse en algunas realizaciones. En algunas realizaciones, la etapa 102 se realiza antes de la etapa 103. En otras realizaciones, la etapa 102 puede seguir a la etapa 103. El material basado en colageno puede exponerse a una solucion de agente de reticulacion con un pH bajo primero y despues a una segunda solucion de agente de reticulacion con un segundo pH alto. En este caso, la primera solucion tamponada tiene un pH bajo, mientras que la segunda solucion tamponada tiene un pH alto.
Los agentes de reticulacion de las etapas 102 y 103 (el primer agente de reticulacion y el segundo agente de reticulacion) pueden ser un epoxido. En algunas realizaciones, el primer agente de reticulacion y el segundo agente de reticulacion pueden ser diepoxido. En algunas realizaciones, el primer y el segundo agentes de reticulacion se seleccionan independientemente del grupo que consiste en eter diglicidilico de glicol, eter diglicidilico de glicerol, eter
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triglicidilo de glicerol y eter diglicid^lico de butanodiol. En algunas realizaciones, el primer y el segundo agentes de reticulacion son el mismo. En algunas realizaciones, el primer y el segundo agentes de reticulacion son BDDGE. En algunas realizaciones, el primer y el segundo agentes de reticulacion usados en la presente invencion son solubles en agua, epoxis no polimericos tales como poliglicidileteres de poliol.
La etapa 104 implica aislar el material adaptable basado en colageno reticulado para proporcionar una bioprotesis degradable. El material adaptable basado en colageno reticulado comprende Reticulacion A y Reticulacion B. En algunas realizaciones, la relacion de Reticulacion A a Reticulacion B es de 90:10 a 10:90 (o de aproximadamente 90:10 a aproximadamente 10:90), de 80:20 a 20:80 (o de aproximadamente 80:20 a aproximadamente 20:80), de 70:30 a 30:70 (o de aproximadamente 70:30 a aproximadamente 30:70), de 60:40 a 40:60 (o de aproximadamente 60:40 a aproximadamente 40:60) o 1:1 (o aproximadamente 1:1). En algunas realizaciones, la concentracion del primer agente de reticulacion en la primera solucion puede ser del 1 % al 10 % (o de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 10 %) (p/v), del 2 % al 8 % (o de aproximadamente el 2 % a aproximadamente el 8 %) (p/v), del
3 % al 7 % (o de aproximadamente el 3 % a aproximadamente el 7 %) (p/v) o del 4 % al 6 % (o de aproximadamente el 4 % a aproximadamente el 6 %) (p/v) o el 4 % (o aproximadamente el 4 %). En algunas realizaciones, la concentracion del segundo agente de reticulacion en la segunda solucion puede ser del 1 % al 10 % (o de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 10 %) (p/v), del 2 % al 8 % (o de aproximadamente el 2 % a aproximadamente el 8 %) (p/v), del 3 % al 7 % (o de aproximadamente el 3 % a aproximadamente el 7 %) (p/v) o del
4 % al 6 % (o de aproximadamente el 4 % a aproximadamente el 6 %) (p/v) o el 4 % (o aproximadamente el 4 %).
En algunas realizaciones, la cantidad de aminas libres en el material basado en colageno reticulado varia del 50 % al 85 % (o de aproximadamente el 50 % a aproximadamente el 85 %), del 60 % al 75 % (o de aproximadamente el 60 % a aproximadamente el 75 %), del 65 % al 70 % (o de aproximadamente el 65 % a aproximadamente el 70 %) con respecto al numero de aminas libres en el material basado en colageno antes de exponerlo a ningun agente de reticulacion.
Algunas realizaciones proporcionan un metodo para producir una bioprotesis degradable que implica controlar la reticulacion para producir una bioprotesis degradable que se reticula parcialmente. En algunas realizaciones, para crear una bioprotesis degradable parcialmente reticulada, la reaccion de reticulacion puede ralentizarse. En algunas realizaciones, por ejemplo, la reaccion de reticulacion puede ralentizarse disminuyendo la concentracion del agente de reticulacion, tal como del 10 % hasta un 1 % en solucion (o de aproximadamente el 10 % a aproximadamente un 1 %). En algunas realizaciones, la concentracion del agente de reticulacion puede controlarse dentro del intervalo del
1 % al 2 % (o de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 2 %), del 2 % al 3 % (o de aproximadamente el
2 % a aproximadamente el 3 %), del 3 % al 4 % (o de aproximadamente el 3 % a aproximadamente el 4 %), del 4 % al 5 % (o de aproximadamente el 4 % a aproximadamente el 5 %), del 5 % al 6 % (o de aproximadamente el 5 % a aproximadamente el 6 %), del 6 % al 7 % (o de aproximadamente el 6 % a aproximadamente el 7 %), del 7 % al 8 % (o de aproximadamente el 7 % a aproximadamente el 8 %), del 8 % al 9 % (o de aproximadamente el 8 % a aproximadamente el 9 %) o del 9 % al 10 % (o de aproximadamente el 9 % a aproximadamente el 10 %).
En algunas realizaciones, el metodo comprende combinar un agente de reticulacion con el material basado en colageno en un medio acuoso a un pH basico o acido para reaccionar con una porcion predeterminada de los grupos amina o carboxilo del colageno para formar una bioprotesis degradable.
En algunas realizaciones, la reaccion de reticulacion puede ralentizarse reduciendo la acidez de un agente de reaccion de reticulacion que se pretende que reaccione con los grupos carboxilo del colageno o reduciendo la alcalinidad de un agente de reaccion de reticulacion que se pretende que reaccione con los grupos amina del colageno. En algunas realizaciones, la reaccion de reticulacion puede ralentizarse, por ejemplo, reduciendo la temperatura a la que tiene lugar la reaccion de reticulacion. En algunas realizaciones, la reaccion de reticulacion puede ralentizarse, por ejemplo, reduciendo la presion a la que tiene lugar la reaccion de reticulacion.
En algunas realizaciones, para crear una bioprotesis degradable parcialmente reticulada, se reduce la longitud del tiempo en que el material basado en colageno se expone al agente de reaccion de reticulacion. En algunas realizaciones, para crear una bioprotesis degradable parcialmente reticulada, el material basado en colageno se enmascara por medios quimicos o fisicos, permitiendo la exposicion de solamente parte del material basado en colageno al agente de reaccion de reticulacion. En algunas realizaciones, otra manera de crear una bioprotesis degradable parcialmente reticulada es exponer solamente una porcion o menos de todas las superficies del material basado en colageno al agente de reaccion de reticulacion.
Todos estos metodos anteriormente mencionados para ralentizar la reaccion de reticulacion o para acortar el tiempo de reaccion o para ralentizar, inhibir, limitar o prevenir la exposicion del material basado en colageno al agente de reaccion de reticulacion pueden usarse individualmente o en cualquier combinacion para lograr las propiedades optimas del material.
Por ejemplo, en algunas realizaciones, reducir la concentracion del agente de reticulacion del 5 % al 1 % en combinacion con reducir el pH del agente de reticulacion de 10 a 8,5, ralentizara sustancialmente la reaccion de reticulacion. En algunas realizaciones, exponer solamente una superficie o un lado del material basado en colageno al agente de reaccion de reticulacion puede ralentizar o inhibir la reaccion de reticulacion y de esta manera limitar la
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cantidad de colageno que se reticula.
Los detalles adicionales con respecto a los procesos de reticulacion y los materiales relevantes a esta divulgacion se describen en la Patente de Estados Unidos n.° 5.880.242, la totalidad de la cual se incorpora por la presente por referencia.
Las realizaciones de la presente invencion logran un grado predeterminado de reticulacion por el control preciso de la concentracion del agente de reticulacion, del pH del agente de reticulacion, de la longitud del tiempo en el que el material basado en colageno se expone al agente de reticulacion y de la temperatura a la que el material basado en colageno se expone al agente de reticulacion. Un grado preferido de reticulacion seria reticular solo aproximadamente un 50 % de los grupos amina o carboxilo libres que permitiria que la bioprotesis degradable retenga suficiente resistencia a la degradacion enzimatica prematura y que retenga suficiente fuerza para completar el papel terapeutico que se pretende, aunque permitiendo que el dispositivo bioprotesico se disuelva al final, de esta manera evitando un implante permanente.
Un metodo para formar, por ejemplo, un sustituto de la piel parcialmente reticulado comienza con un material basado en colageno tal como pericardio porcino que se ha lavado primero de material extrano. El material basado en colageno se trata con una solucion detergente generica para retirar el material celular animal, dejando atras principalmente la matriz extracelular que consiste casi enteramente en colageno de tipo 1. La matriz extracelular se monta despues en un marco y se impregna durante aproximadamente 50 a aproximadamente 150 horas en el agente de reaccion de reticulacion, tal como BDDGE, que se ha diluido a la concentracion deseada (que varia de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 10 %). Durante el proceso de reticulacion, la temperatura del agente de reaccion de reticulacion se mantiene a una temperatura establecida (que varia de aproximadamente -50 °C a aproximadamente 100 °C) o a diferentes temperaturas a intervalos preprogramados. Al completar la reaccion de reticulacion, la matriz extracelular se retira del agente de reaccion de reticulacion, se aclara exhaustivamente con agua para retirar el agente de reticulacion, despues se seca, se envasa, se esteriliza.
Material basado en colageno reticulado
Algunas realizaciones proporcionan un material basado en colageno reticulado que comprende Reticulacion A y Reticulacion B:
donde
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HO OH
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y R2 de la Reticulacion B se define adicionalmente como
HO OH
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R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -(CH2)n- y -(O(CH2)n)m-, donde n y m son independientemente un numero entero de 0-6 y la cantidad de aminas libres (-NH2) en las hebras de colageno esta entre un 50 % y un 85 % (o entre aproximadamente un 50 % y aproximadamente un 85 %), con respecto al numero de aminas libres en el material basado en colageno antes de cualquier reaccion.
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En algunas realizaciones, R3 y R4 son iguales. En algunas realizaciones, los R1 y R2 de anteriormente son iguales. En algunas realizaciones, la cantidad de aminas libres en el material basado en colageno reticulado varia del 60 % al 75 % (o de aproximadamente el 60 % a aproximadamente el 75 %) o del 65 % al 70 % (o de aproximadamente el 65 % a aproximadamente el 70 %) con respecto al numero de aminas libres en el material basado en colageno antes de exponerlo a cualquier agente de reticulacion. En algunas realizaciones, el material basado en colageno reticulado comprende adicionalmente grupos acido carboxilico libres. En algunas realizaciones, el material basado en colageno sin reaccionar tiene un primer porcentaje de grupos amina libres en sus hebras de colageno y el material basado en colageno reticulado tiene un segundo porcentaje de grupos amina libres, en el que el segundo porcentaje de grupos amina libres es menor que el primer porcentaje como se describe a continuacion. En algunas realizaciones, el material basado en colageno reticulado tiene un porcentaje de aminas que es inferior que aquel del colageno nativo.
En algunas realizaciones, los grupos amina libres del material adaptable basado en colageno reticulado pueden bloquearse usando un agente de bloqueo. Un agente de bloqueo es un resto reactivo mono-funcional capaz de formar un enlace covalente estable con un grupo amina o carboxilo libre en las proteinas, de esta manera bloqueando la reticulacion. Los agentes de bloqueo tipicos incluyen compuestos que contienen un grupo amina o un grupo acido carboxilico, para bloquear acidos carboxilicos libres y aminas libres respectivamente.
En algunas realizaciones, la relacion de Reticulacion A a Reticulacion B en el material basado en colageno reticulado varia de 100:1 a 1:100 (o de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 1:100). En algunas realizaciones, la relacion de Reticulacion A a Reticulacion B es de 90:10 a 10:90 (o de aproximadamente 90:10 a aproximadamente 10:90), de 80:20 a 20:80 (o de aproximadamente 80:20 a aproximadamente 20:80), de 70:30 a 30:70 (o de aproximadamente 70:30 a aproximadamente 30:70), de 60:40 a 40:60 (o de aproximadamente 60:40 a aproximadamente 40:60) o 1:1 (o aproximadamente 1:1).
Bioprotesis
Algunas realizaciones proporcionan una bioprotesis degradable sintetizada usando cualquiera de los metodos descritos anteriormente. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable comprende un material basado en colageno reticulado que comprende Reticulacion A y Reticulacion B:
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donde indica hebras de colageno; R1 de la Reticulacion A se define adicionalmente como
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y R2 de la Reticulacion B se define adicionalmente como
HO OH
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R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -(CH2)n- y -(O(CH2)n)m-, donde n y m son independientemente un numero entero de 0-6; y la cantidad de aminas libres (-NH2) en las hebras de colageno esta entre un 50 % y un 85 % (o entre aproximadamente un 50 % y aproximadamente un 85 %), con respecto al numero de aminas libres en el material basado en colageno antes de cualquier reaccion.
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En algunas realizaciones, R3 y R4 son iguales. En algunas realizaciones, los R1 y R2 de anteriormente son iguales. En algunas realizaciones, la cantidad de aminas libres en la bioprotesis degradable varia del 60 % al 75 % (o de aproximadamente el 60 % a aproximadamente el 75 %) o del 65 % al 70 % (o de aproximadamente el 65 % a aproximadamente el 70 %) con respecto al numero de aminas libres en el material basado en colageno antes de exponerlo a cualquier agente de reticulacion.
En algunas realizaciones, la relacion de Reticulacion A a Reticulacion B en la bioprotesis degradable varia de 100:1 a 1:100 (o de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 1:100). En algunas realizaciones, la relacion de Reticulacion A a Reticulacion B es de 90:10 a 10:90 (o de aproximadamente 90:10 a aproximadamente 10:90), de 80:20 a 20:80 (o de aproximadamente 80:20 a aproximadamente 20:80), de 70:30 a 30:70 (o de aproximadamente 70:30 a aproximadamente 30:70), de 60:40 a 40:60 (o de aproximadamente 60:40 a aproximadamente 40:60) o 1:1 (o aproximadamente 1:1).
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable comprende un material adaptable basado en colageno reticulado como se describe anteriormente, en el que el material adaptable basado en colageno reticulado comprende reticulaciones basadas en aminas y reticulaciones basadas en esteres en las relaciones descritas anteriormente. En algunas realizaciones, como se describe anteriormente, la bioprotesis degradable comprende adicionalmente aminas libres.
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable tiene una velocidad de degradacion de aproximadamente un 0,2 % a aproximadamente un 1,0 % por hora cuando se mide usando el ensayo de digestion de la pronasa descrito en la seccion de EJEMPLOS. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable tiene una velocidad de degradacion que varia de un 0,1 % a un 1,10 % (o de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 1,10 %) por hora, de un 0,3 % a un 1,0 % (o de aproximadamente un 0,3 % a aproximadamente un 1,0 %) por hora, de un 0,4 % a un 0,9 % (o de aproximadamente un 0,4 % a aproximadamente un 0,9 %) por hora, de un 0,5 % a un 0,8 % (o de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 0,8 %) por hora, de un 0,6 % a un 0,7 % (o de aproximadamente un 0,6 % a aproximadamente un 0,7 %) por hora, de un 0,2 % a un 0,3 % (o de aproximadamente un 0,2 % a aproximadamente un 0,3 %) por hora, de un 0,3 % a un 0,4 % (o de aproximadamente un 0,3 % a aproximadamente un 0,4 %) por hora, de un 0,4 % a un 0,5 % (o de aproximadamente un 0,4 % a aproximadamente un 0,5 %) por hora, de un 0,5 % a un 0,6 % (o de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 0,6 %) por hora, de un 0,4 % a un 0,7 % (o de aproximadamente un 0,6 % a aproximadamente un 0,7 %) por hora, de un 0,7 % a un 0,8 % (o de aproximadamente un 0,7 % a aproximadamente un 0,8 %) por hora, de un 0,8 % a un 0,9 % (o de aproximadamente un 0,8 % a aproximadamente un 0,9 %) por hora, de un 0,9 % a un 1,0 % (o de aproximadamente un 0,9 % a aproximadamente un 1,0 %) por hora o de un 1,0 % a un 1,1 % (o de aproximadamente un 1,0 % a aproximadamente un 1,1 % por hora). Se apreciara por un experto en la materia que los resultados de los ensayos de degradacion con pronasa, de degradacion basada en enzimas y de degradacion basada en proteasa tendran velocidades de degradacion variables dependiendo del tipo de ensayo usado y/o de las condiciones usadas durante el ensayo.
El calentamiento del colageno inducira una transicion estructural de la estructura de triple helice nativa a una cierta temperatura dependiente de la naturaleza y del grado de reticulacion. La introduccion de reticulaciones covalentes aumentara la estabilidad de la triple helice, aumentando de esta manera la temperatura de desnaturalizacion. La temperatura a la que la desnaturalizacion tiene lugar tambien se denomina temperatura de contraccion (Ts), ya que la contraccion es la manifestacion macroscopica de la transformacion de la estructura de triple helice nativa a la configuracion en espiral aleatoria. De esta manera, la Ts puede usarse para medir el nivel de reticulacion. En algunas realizaciones, la Ts de la bioprotesis degradable es mayor que la del colageno nativo. En algunas realizaciones, la Ts de la bioprotesis degradable esta por encima de 70 °C (o aproximadamente 70 °C). En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable tiene una Ts de por encima de 75 °C (o aproximadamente 75 °C), por encima de 77 °C (o aproximadamente 77 °C) o por encima de 78 °C (o aproximadamente 78 °C).
En algunas realizaciones, la cantidad de aminas libres se relaciona con las propiedades estructurales de la bioprotesis degradable. En algunas realizaciones, la cantidad de aminas libres en la bioprotesis degradable tiene los intervalos descritos anteriormente. En algunas realizaciones, la cantidad de aminas libres en la bioprotesis degradable es proporcional a la velocidad de degradacion de la bioprotesis degradable. En algunas realizaciones, la cantidad de aminas libres que quedan en la bioprotesis degradable es proporcional a la temperatura de contraccion o la temperatura de desnaturalizacion de la bioprotesis degradable.
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable como se describe en el presente documento se le da forma de una lamina flexible de cualquier forma y de 1 a 500 (o de aproximadamente 1 a aproximadamente 500) centimetros cuadrados para aplicarse al cuerpo. Por ejemplo, a una lamina flexible puede darse apropiadamente un tamano para colocarse sobre un sitio de tratamiento. En algunas realizaciones, la lamina flexible puede tratarse para incluir un agente antimicrobiano para ayudar a prevenir la infeccion en la lamina o en el sitio de tratamiento y/o para transportar un agente antimicrobiano al sitio de tratamiento para tratar una infeccion existente. En algunas realizaciones, los metodos descritos anteriormente pueden utilizarse para formar un sustituto de la piel parcialmente reticulado. El sustituto de la piel puede ser un tejido distinto de humano tal como tejido porcino. El sustituto de la piel puede procesarse de tal manera que el tejido porcino que contiene colageno solo esta parcialmente reticulado y por ejemplo, puede estar reticulado solamente un 20 %-80 % (o aproximadamente un 20 % a aproximadamente un
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80 %). En otra realizacion, el tejido que contiene colageno puede estar reticulado solamente un 40 %-60 % (o aproximadamente un 40 % a aproximadamente un 60 %). La reticulacion del tejido puede lograrse usando las tecnicas descritas en la Patente de Estados Unidos n.° 5.880.242, en combinacion con los metodos para lograr la reticulacion parcial como se describe anteriormente.
Una lista no limitante de pacientes en necesidad de una bioprotesis degradable incluye pacientes que padecen defectos del tejido. En algunas realizaciones, los pacientes en necesidad de una bioprotesis degradable padecen heridas que incluyen aquellas en necesidad de sustitutos de la piel para quemaduras y ulceras de la piel. Las bioprotesis degradables tambien pueden usarse en el tratamiento de ulceras diabeticas de pie, ulceras venosas de pierna, ulceras de presion, sitios de amputacion, en otros traumatismos de la piel o en el tratamiento de otras heridas o dolencias. Los pacientes en necesidad de una bioprotesis degradable tambien incluyen pacientes en necesidad de reparacion y suplementacion de tendones, ligamentos, fascia y duramadre. Las protesis degradables pueden usarse suplementando el tejido en procedimientos que incluyen, pero no se limitan a, reparacion del manguito rotador, reparacion del tendon de Aquiles, reparacion de tendon o de ligamento de pierna o de brazo (por ejemplo, rotura de ACL), reparacion del prolapso vaginal, cabestrillos de vejiga para la incontinencia urinaria, reconstruccion de mama despues de la cirugia, reparacion de hernias, refuerzo de grapas o lineas de sutura, reparacion de cirugia bariatrica, reconstruccion del suelo pelvico, reparacion de duramadre, reparacion de encias e injerto y reconstruccion de huesos. Ademas, un paciente en necesidad de una bioprotesis degradable tambien incluye uno en necesidad de reemplazamiento de tejidos u organos. En algunas realizaciones, el material adaptable basado en colageno reticulado descrito en el presente documento puede usarse para reemplazar tejidos u organos actuando como una matriz extracelular artificial. En una aplicacion tal, este material adaptable basado en colageno reticulado puede usarse para soportar el crecimiento celular y tisular. Brevemente, las celulas pueden tomarse de un paciente o de un hospedador viable y sembrarse en el material adaptable basado en colageno reticulado in vivo o bien ex vivo. Despues ya que los tejidos naturales del paciente invaden el material reticulado, se adapta para degradarse y dejar solamente tejidos y celulas de origen natural. Otros usos para los productos y los metodos descritos en el presente documento pueden ser para cirugia ortopedica y para reparacion de hernias, reconstruccion de mamas u otro tejido blando y reparacion uroginecologica.
Los sustitutos de la piel u otros materiales o productos fabricados a partir del procesamiento descrito anteriormente pueden usarse en el tratamiento de heridas cronicas topicas y quirurgicas o en procedimientos reconstructivos quirurgicos. Siempre que se use un tejido humano o animal (productos biologicos) para tratar heridas, la respuesta inmunologica normal del cuerpo es reconocer el tejido extrano y lanzar un ataque enzimatico para degradar/disolver el colageno del tejido tan rapidamente como sea posible. Hace tiempo se demostro que la reticulacion de las moleculas de colageno en el tejido biologico podria enmascarar el colageno extrano al cuerpo hospedador y proteger el colageno extrano del ataque enzimatico.
En algunas realizaciones, el tratamiento de un sitio de amputacion se realiza usando la bioprotesis degradable. Despues de la amputacion el munon quirurgicamente creado comunmente tiene problemas al cicatrizar debido a la presion y a la abrasion durante el proceso de cicatrizado asi como al adaptarse a las extremidades artificiales. En algunas realizaciones, la bioprotesis biodegradable puede usarse para ayudar en la cicatrizacion de estas heridas y protegerlas durante el proceso de cicatrizacion.
El manguito rotatorio es un grupo de musculos y sus tendones que actuan para estabilizar el hombro. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse para aumentar, reforzar o reemplazar manguitos rotatorios con desgarros o rupturas comunes. Los desgarros del manguito rotatorio son lesiones deportivas comunes y problemas degenerativos del hombro relacionados con la edad. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede funcionar como una barrera de adhesion; las adhesiones son un problema post-operatorio comun con las reparaciones de su estructura tendinosa. En algunas realizaciones, los desgarros o las rupturas comunes del tendon de Aquiles pueden aumentarse, reforzarse o reemplazarse con bioprotesis degradables. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede funcionar tambien como una barrera de adhesion. Las adhesiones son un problema comun con las reparaciones de este tendon debido a la accion de deslizamiento largo que requiere conforme el pie va a traves de su intervalo de movimiento normal. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse para aumentar, reforzar o reemplazar tendones y ligamentos de la pierna, a mano, el brazo o cualquier otra parte del cuerpo.
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable proporciona el material estructural adicional necesario y un material biologico que elimina la necesidad de materiales sinteticos permanentes que se dejan en el abdomen durante el tratamiento del prolapso vaginal. El prolapso de la cupula vaginal es un defecto que se da mucho en la vagina e implica una aproximacion quirurgica a traves de la vagina o del abdomen. La correction quirurgica de esta afeccion normalmente implica una tecnica llamada una suspension de la cupula vaginal, en la que el cirujano fija la vagina al tejido fuerte en la pelvis o a un hueso llamado el sacro, que se localiza en la base de la espina dorsal. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse para proporcionar soporte adicional para la suspension en el tratamiento del prolapso vaginal.
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse como un cabestrillo de vejiga (o un cabestrillo del fascia pubovaginal) en el tratamiento de la incontinencia urinaria. Durante este tipo de operation el urologo fija una
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pieza de fascia (material plano, resistente, parecido al tendon - aproximadamente 2,5 cm (1 pulgada) de anchura y 12,5 cm (5 pulgadas) de longitud) alrededor del cuello de la vejiga para mantener la orina dentro, incluso con estres. Los cabestrillos se fabrican comunmente con tejido humano del paciente o bien de un donante. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede reemplazar o aumentar el material del donante humano para este procedimiento. El cabestrillo suburetral se fabrica comunmente con una malla sintetica colocada bajo la uretra que actua como una hamaca, elevando y comprimiendo la uretra, previniendo fugas. En alguna realization, la bioprotesis degradable puede reemplazar o aumentar esta malla sintetica.
En algunas realizaciones, despues de una mastectomia o una lesion traumatica en la mama, la bioprotesis degradable puede usarse para reparar o reconstruir fibras de colageno estructurales, tendones y fascia que faltan durante los procedimientos de cirugia plastica.
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse para reforzar o reemplazar la reparation y la reconstruction quirurgica de la pared abdominal, llenar los huecos donde queda tejido insuficiente proporcionando un andamiaje para la remodelizacion biologica y promover el crecimiento durante la reparacion de hernias. La hernia resulta del fallo fisico de la estructura de fascia y muscular abdominal que permite la protrusion de los contenidos de la cavidad corporal. Las adhesiones son comunes en las hernias. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable, puede actuar tambien como una barrera de adhesion de forma post-operatoria.
Las lineas de sutura, especialmente en tejidos mas quebradizos tales como el tejido pulmonar, los materiales tendinosos debilitados o degenerativos, la cirugia cardiaca, el trasplante de organos por nombrar unos pocos requieren un aposito o un refuerzo de sutura para prevenir que la sutura o la grapa sea “alambre de queso” o corte a traves del tejido delgado o debilitado. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse como un apoyo para prevenir que corte a traves de la sutura o la grapa protegiendo el tejido nativo.
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse en lugar de o junto con suturas o grapas para proporcionar una reconstruccion estable de los fascia y el perimetro exteriores del estomago y durante la cirugia bariatrica. La cirugia bariatrica para reducir el volumen del estomago se realiza comunmente como un remedio para la obesidad.
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse para reconstruir y soportar el tejido conectivo nativo debilitado y danado durante la reconstruccion del suelo pelvico. La cirugia reconstructiva del suelo pelvico consiste en varios procedimientos para corregir una afeccion denominada prolapso de los organos pelvicos. Cuando los musculos del suelo pelvico se danan o se vuelven debiles - normalmente debido a un parto - normalmente son incapaces de soportar el peso de algunos o todos los organos pelvicos y abdominales. Si esto ocurre, uno o mas de los organos puede caer (prolapsar) por debajo de sus posiciones normales, provocando sintomas que incluyen incomodidad, dolor, presion e incontinencia urinaria. La meta de la reconstruccion del suelo pelvico es restaurar la estructura y la funcion normales de los organos pelvicos femeninos.
En algunas realizaciones, despues de la lesion traumatica o la cirugia cerebral, la bioprotesis degradable puede usarse para volver a sellar o parchear cualquier perforation y fuga debido al efecto de la duramadre. La duramadre, el fascia protector que cubre el cerebro es critico para mantener el fluido que rodea al cerebro.
En algunas realizaciones, durante el proceso de reparar los segmentos de hueso danados o enfermos, la bioprotesis degradable puede modelarse quirurgicamente para recrear segmentos que faltan o huecos o para el reemplazamiento de hueso danado a traves de toda la estructura esqueletica. El colageno en el hueso cortical puede recuperarse de material de fuente osea de animal o humana. El proceso de primero desmineralizar el hueso y despues reticular la estructura de colageno que queda puede dar como resultado un material que puede funcionar como un relleno de huecos de hueso semisolido.
En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede proporcionar una fuente alternativa de procedimientos de enfermedad del material de las encias. Como resultado de una enfermedad periodontal donde el tejido de las encias se ha perdido, el dentista o el periodontista puede insertar quirurgicamente un injerto de tejido blando, en el que el material sintetico o el tejido tomado de otro area de tu boca se usa para cubrir las raices expuestas de los dientes. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable puede usarse para reemplazar o suplementar otros materiales usados en el tratamiento de la enfermedad periodontal.
En algunas realizaciones, despues de identificar un paciente viable para los metodos de tratamiento anteriores, la siguiente etapa es identificar la velocidad a la que la bioprotesis degradable deberia degradarse para funcionar eficazmente. En algunas realizaciones, esta etapa implica determinar la velocidad de cicatrization de la herida o de otro defecto tisular. En algunas realizaciones, esta etapa implica determinar la velocidad a la que el crecimiento celular natural alcanzaria un nivel en el que la bioprotesis degradable ya no fuera necesaria.
Ventajosamente, el sustituto de la piel, la herida u otros productos de tratamiento de defectos tisulares fabricados a partir de los procesos descritos anteriormente pueden sincronizarse para degradarse con el proceso de cicatrizado de heridas. Por ejemplo, un sustituto de la piel producido usando los procesos descritos en el presente documento
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puede adaptarse para que empiece a degradarse a una velocidad mas o menos lenta, pero constante, que se sincroniza con el proceso de cicatrizacion y la reduccion del tamano de la herida, de tal manera que tras completarse la cicatrizacion de la herida, el producto bioprotesico reticulado se ha disuelto completamente, completandose tal proceso normalmente en 6-12 (o de aproximadamente 6 a aproximadamente 12) semanas. En algunas realizaciones, la velocidad de degradacion del sustituto de la piel es tal que el sustituto de la piel se degrada completamente dentro del intervalo de tiempo entre aproximadamente 8 semanas y aproximadamente 1 ano.
Otros ejemplos, tales como redes quirurgicas, se producen usando los procesos descritos en el presente documento y pueden adaptarse para resistir o limitar la degradacion y de esta manera retienen alta resistencia a la traccion, durante un periodo de tiempo tal como 1-3 (o de aproximadamente 1 a aproximadamente 3) meses o hasta un tiempo tal que el tejido que rodea o el nuevo haya cicatrizado lo suficiente para soportar el peso o absorber los estreses normales sin dano, despues de lo que el producto continua degradandose a una velocidad lenta pero constante hasta que se ha disuelto completamente, completandose tal proceso en un ano o aproximadamente un ano.
Dependiendo de la velocidad de cicatrizado de la herida, se selecciona entonces usar una bioprotesis degradable.
La etapa final implica implantar la bioprotesis degradable. En algunas realizaciones, esto implica colocar la bioprotesis degradable en, sobre o dentro del defecto tisular. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable se implanta quirurgicamente en el paciente en el area diana. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable se implanta quirurgicamente dentro de o sobre la herida. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable se fija dentro de o sobre la herida con puntos de sutura, pegamento, grapas u otros adhesivos. En algunas realizaciones, la bioprotesis degradable se siembra primero con celulas autologas u homologas antes de la implantacion.
En algunas realizaciones, se forma un material parcialmente reticulado o un material adaptable basado en colageno reticulado como se describe en el presente documento como una lamina flexible de cualquier forma y de 1 a 500 (o de aproximadamente 1 a aproximadamente 500) centimetros cuadrados para aplicarse al cuerpo. Por ejemplo, a una lamina flexible puede darse un tamano apropiadamente para colocarse sobre el sitio de tratamiento. En algunas realizaciones, la lamina flexible puede tratarse para incluir un agente antimicrobiano para ayudar a prevenir la infeccion en la lamina o en el sitio de tratamiento y/o para transportar un agente antimicrobiano en el sitio de tratamiento para tratar una infeccion existente.
En algunas realizaciones, el producto puede esterilizarse usando diversos metodos de esterilizacion, incluyendo oxido de etileno, gamma, vapor y haz de electrones. En algunas realizaciones, puede esterilizarse un sustituto biologico de la piel u otro producto de manera que minimice o prevenga la desnaturalizacion del colageno, tal como controlando el numero de ciclos, el tiempo, la temperatura y la dosis de la radiacion.
Ejemplos
Materiales y equipo:
Lo siguiente es una lista de materiales y equipo usados a traves de toda la seccion de EJEMPLOS: Perkin Elmer modelo DSC 4000, Calorimetro diferencial de barrido; Horno cientifico Boekel modelo 132000; Balanza analitica Mettler Toledo modelo AL54; Balanza Mettler Toledo New Classic ML; Calibrador, Mitutoyo Corp., 505-626 Dial Caliper; Liofilizador Labconco modelo Freezone 6 con bandeja secadora; Bisturi, Cuchilla esteril de acero inoxidable Bard-parker n.° 10; Tru-Punch Sklar, puncion para biopsia desechable; pH metro VWR SympHony SB70P; Agua destilada; Solucion de dodecil sulfato sodico al 0,1 %; Bano de ultrasonidos = Bransonic 2510; Pericardio equino; Solucion de NaCl al 0,9 %; Eter diglicidilico de 1,4-butanodiol; Tampon HEPES convencional; Tampon fosfato 0,1 M pH 4,5 (obtenido de Teknova; n.° de catalogo: P4000); Tampon de fijado pH 9,2.
Medicion del contenido de aminas libres
Ademas de los ensayos descritos a continuacion, tambien puede calcularse el contenido de aminas. En algunas realizaciones, el contenido de grupos amina libres del material adaptable basado en colageno reticulado, expresado como un porcentaje del material basado en colageno (%), puede determinarse usando un ensayo colorimetrico de acido 2,4,6-trinitrobencensulfonico (TNBS; solucion 1,0 M en agua, Fluka, Buchs, Suiza). A una mezcla de 2-4 miligramos (mg) de material adaptable basado en colageno reticulado puede anadirse una solucion de 1 ml de una solucion acuosa de NaHCb (pH 9,0; Aldrich, Bornem, Belgica) al 4 % (peso/volumen) y 1 ml de una solucion acuosa de TNBS al 0,5 % (peso/volumen) preparada recientemente. Despues de la reaccion durante 2 horas a 40 °C, pueden anadirse 3,0 Ml de HCl 6 M (Merck, Darmstadt, Alemania) y la temperatura puede elevarse a 60 °C. Cuando se logra la solubilizacion completa del material adaptable basado en colageno reticulado, la solucion resultante se diluye con 15 ml de agua desionizada y se midio la absorbancia en un espectrofotometro Hewlett-Packard HP8452A UV/VlS a una longitud de onda de 345 nm. Se prepara un control aplicando el mismo procedimiento salvo por que el HCl se anadio antes de la adicion del TNBS. El contenido de grupos amina libres se calcula usando un coeficiente de absorcion molar de 14600 l mol-1 cm-1 para trinitrofenil lisina [Wang C. L., et al., Biochim. Biophys. Acta, 544, 555567 (1978)].
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El contenido de grupos amina libres del material adaptable basado en colageno reticulado tambien puede determinarse usando un ensayo de ninhidrina. Lo siguiente describe los procedimientos generales para ensayar el contenido de aminas de un material basado en colageno. Brevemente, se recoge una muestra de 1-25 miligramos (mg) de material adaptable basado en colageno reticulado. Despues, se prepara una solucion de 1 ml de ninhidrina al 4 % (peso/volumen) en celosolva metilica. Despues se prepara un tampon citrato sodico 0,2 M disolviendo 1,05 g de monohidrato de acido citrico y 0,04 g de dihidrato de cloruro de estano en 11 ml de NaOH 1,0 N y anadiendo 14 ml de agua purificada. El pH del tampon citrato sodico se ajusta de 4,9 a 5,1 con HCl y/o NaOH. Despues, la solucion de ninhidrina al 4 % y el tampon citrato sodico se mezclan en una botella oscura para uso inmediato. Ahora se prepara una solucion de N-acetillisina (ALys) disolviendo 47,1 mg de ALys en 50 ml de agua purificada. La ALys se usa como una solucion patron para calibrar la absorbancia que se lee a 570 nm. Despues de que se grafique una curva patron, se ensayan las muestras de tejido seco. Cada solucion a leerse por absorbancia se prepara usando 1 ml de ninhidrina tamponada, 100 ml de agua purificada y el tejido o la muestra control. Las soluciones se calientan a 100 °C durante 20 minutos, se enfrian, despues se anaden 5 ml de alcohol isopropilico. La absorbancia se lee despues y la cantidad de moles de amina por gramo de muestra y control se calcula usando la siguiente ecuacion: A = mX +b donde, A = absorbancia, X = contenido de ALys en micromoles, m = la pendiente y b = la interseccion con y. El contenido de micromoles de amina libre en la muestra es entonces Xmuest = (Amuest - b) / m.
Propiedades mecanicas:
Las curvas de tension-deformacion de la bioprotesis degradable pueden tomarse usando medias uniaxiales usando un ensayador mecanico. Las barras de tension (40,0 mm x 4,0 mm x 1,4 mm) pueden cortarse usando un cuchillo con forma de mancuerna y puede hidratarse durante al menos una hora en PBS a temperatura ambiente. El grosor de las muestras puede medirse por triplicado usando un micrometro tipo resorte (Mitutoyo, Tokio, Japon). Se uso una longitud de calibre inicial de 10 mm y puede aplicarse una velocidad del cabezal de 5 mm/minuto hasta que se da la ruptura del especimen de ensayo. Puede aplicarse una precarga de 0,05 N para pre-estirar el especimen antes de la medida real. Pueden calcularse la resistencia a la tension, la elongacion en el alineamiento, la elongacion en la rotura, el modulo de tension bajo y el modulo de tension alto de la muestra a partir de cinco medidas independientes.
Preparacion de pericardio para formar material basado en colageno
Se adquirieron sacos pericardicos equinos frescos de Carnicos de Jerez S.A. de C.V. y se fletaron con aire en una solucion de NaCl al 0,9 % en hielo. Inmediatamente al recibirlos, todos los sacos se enjuagaron en fresco, con solucion de NaCl al 0,9 % fria, se desbridaron de grasa y de exceso de tejido fibroso y se ajustaron con un bisturi quirurgico para crear 8 parches similares de aproximadamente 10 cn x 15 cm. Todos los parches se descelularizaron mediante un proceso sometiendo a ultrasonidos durante 20 minutos en una solucion de Dodecil sulfato sodico (SDS) al 0,1 % seguido de tres aclarados separados en 500 ml de solucion de NaCl al 0,9 % para retirar el exceso de SDS. Se pretende que el proceso de descelularizacion retire cualquier exceso de materiales intracelulares. El tensioactivo anionico (SDS) usado en el proceso tambien ayuda a reducir las grasas y los aceites en exceso. El tratamiento de los parches resultantes produjo 8 parches pericardicos desbridados descelularizados. Uno de estos parches se reservo como un control para los experimentos de reticulacion.
Preparacion de soluciones de reticulacion:
A 1 l de agua desionizada se anadio carbonato potasico (6,5 gramos) y bicarbonato sodico (16,6 gramos). La solucion se mezclo hasta que se disolvieron todos los solidos. El pH de la solucion se midio usando un pH metro en el que el pH objetivo era 9,2 ± 0,2 anadiendo NaOH diluido o HCl diluido. Despues, a la solucion tamponada (tampon bicarbonato) se anadio BDDGE (40 g) para producir una solucion al 4 % en peso de BDDGE. Esta solucion se agito para dar una solucion homogenea de BDDGE a pH 9,2 ± 0,2.
A una solucion tamponada de fosfato (PBS, 0,5 l, pH 4,5 ± 0,2) se anadio BDDGE (20 g) para producir una solucion al 4 % en peso de BDDGE. Esta solucion se agito para producir una solucion homogenea de bDdGE a pH 4,5 ± 0,2.
EJEMPLO 1
A una solucion a pH bajo de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 4,5 ± 0,2, exceso) se anadio un parche pericardico descelularizado desbridado de aproximadamente 10 x 15 cm. El parche se mantuvo en la solucion de BDDGE/PBS durante 160 horas en cuyo tiempo el parche se aclaro con agua destilada exhaustivamente.
EJEMPLO 2
A una solucion a pH alto de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2, exceso) se anadio un parche pericardico descelularizado desbridado de aproximadamente 10 x 15 cm. El parche se mantuvo en la solucion de BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2 durante 8 horas, en cuyo tiempo se anadio a una solucion a pH bajo de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 4,5 ± 0,2, exceso). Despues de 152 horas, el parche se retiro de la solucion de BDDGE a pH bajo y se aclaro con agua destilada exhaustivamente.
5
10
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55
EJEMPLO 3
A una solucion a pH alto de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2, exceso) se anadio un parche pericardico descelularizado desbridado de aproximadamente 10 x 15 cm. El parche se mantuvo en la solucion de BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2 durante 24 horas, en cuyo tiempo se anadio a una solucion a pH bajo de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 4,5 ± 0,2, exceso). Despues de 136 horas, el parche se retiro de la solucion de BDDGE a pH bajo y se aclaro con agua destilada exhaustivamente.
EJEMPLO4
A una solucion a pH alto de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2, exceso) se anadio un parche pericardico descelularizado desbridado de aproximadamente 10 x 15 cm. El parche se mantuvo en la solucion de BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2 durante 36 horas, en cuyo tiempo se anadio a una solucion a pH bajo de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 4,5 ± 0,2, exceso). Despues de 124 horas, el parche se retiro de la solucion de BDDGE a pH bajo y se aclaro con agua destilada exhaustivamente.
EJEMPLO 5
A una solucion a pH alto de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2, exceso) se anadio un parche pericardico descelularizado desbridado de aproximadamente 10 x 15 cm. El parche se mantuvo en la solucion de BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2 durante 48 horas, en cuyo tiempo se anadio a una solucion a pH bajo de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 4,5 ± 0,2, exceso). Despues de 112 horas, el parche se retiro de la solucion de BDDGE a pH bajo y se aclaro con agua destilada exhaustivamente.
EJEMPLO 6
A una solucion a pH alto de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2, exceso) se anadio un parche pericardico descelularizado desbridado de aproximadamente 10 x 15 cm. El parche se mantuvo en la solucion de BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2 durante 64 horas, en cuyo tiempo se anadio a una solucion a pH bajo de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 4,5 ± 0,2, exceso). Despues de 96 horas, el parche se retiro de la solucion de BDDGE a pH bajo y se aclaro con agua destilada exhaustivamente.
EJEMPLO 7
A una solucion a pH alto de BDDGE (BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2, exceso) se anadio un parche pericardico descelularizado desbridado de aproximadamente 10 x 15 cm. El parche se mantuvo en la solucion de BDDGE al 4 % p/v, pH 9,2 ± 0,2 durante 160 horas, en cuyo tiempo el parche se retiro de la solucion de BDDGE a pH bajo y se aclaro con agua destilada exhaustivamente. La Figura 2 representa una lamina de material basado en colageno reticulado durante 160 horas a pH 9,2 con BDDGE. Cada uno de los materiales de colageno de los Ejemplos 1-6 es identico en apariencia al material de la Figura 2 cuando se vieron a simple vista.
Temperatura de contraccion (Ts):
Se cortaron tres muestras de 3 mm de diametro de cada uno de los materiales reticulados resultantes de los ejemplos 1-7 y el control usando un punzon de biopsia Skylar de 3 mm.
Cada muestra se sello en un portamuestras volatil Perkin Elmer DSC (0219-0062). Un porta vacio se ejecuta en paralelo con la muestra de ensayo en el Calorimetro Diferencial de Barrido (DSC). A traves de la comparacion del flujo de calor del porta vacio y del porta de ensayo, la temperatura pico de entalpia indica la temperatura de transicion o la temperatura de contraccion (Ts) de la muestra expresada en °C.
Las Ts de las muestras se comparan a aquella del control o no reticulada para determinar el nivel comparativo de la reticulacion de aminas presente. La Tabla 1 contiene los resultados de cada muestra, separados por cada numero de ejemplo. La Figura 3 contiene una representacion grafica de los resultados de la Tabla 1.
TABLA 1: Resultados de la temperatura de contraccion (°C)
n.° de muestra
1 2 3 Med SD
Ejemplo 1
69,63 70,90 69,71 70,08 0,58
Ejemplo 2
72,81 72,40 72,41 72,54 0,19
Ejemplo 3
73,91 74,09 74,19 74,06 0,12
Ejemplo 4
76,17 75,98 76,03 76,06 0,08
Ejemplo 5
78,31 78,54 78,53 78,46 0,11
Ejemplo 6
77,58 77,11 76,98 77,22 0,26
Ejemplo 7
77,26 77,30 78,21 77,59 0,44
Control
69,19 68,94 68,55 68,89 0,26
Ensayo de digestion con pronasa
Se cortaron tres muestras de 1 cm x 1 cm de cada uno de los ejemplos 1-7 y del control y se ensayaron para la 5 Digestion con Pronasa MF3-00X. Para el procedimiento MF3-00X cada muestra se coloco en un vial de centelleo de
vidrio de 5 ml con 4 ml de una solucion tamponada HEPES con 95 mg/100 ml de proteasa bacteriana derivada de
Streptomyces griseus.
Las muestras se incubaron a 45 °C durante 24 horas, se secaron con papel secante y se liofilizaron en el liofilizador
10 Labconco. Despues cada muestra se peso usando la balanza analitica Mettler Toledo. Todas las muestras se
volvieron a pesar usando la balanza analitica Mettler Toledo.
El porcentaje de degradacion se determino calculando el cambio en porcentaje en el peso antes y despues de 24 horas de exposition a la proteasa. La Tabla 2 contiene los resultados de cada muestra, separados por cada numero 15 de ejemplo. La Figura 4 contiene una representation grafica de los resultados de la Tabla 2.
TABLA 2: % de digestion de la proteasa despues de 24 horas de exposicion a la proteasa
n.° de muestra
1 2 3 % Med restante SD
Ejemplo 1
5,30/7,60 5,40/7,30 5,60/7,30 73,47 % 2,87
Ejemplo 2
7,80/10,10 8,30/10,50 10,60/13,20 78,86 % 1,26
Ejemplo 3
10,60/11,90 10,80/12,20 12,40/13,80 89,15% 0,55
Ejemplo 4
10,50/11,90 11,30/12,90 12,70/13,90 89,07 % 1,65
Ejemplo 5
14,30/14,80 15,70/16,00 19,80/20,50 97,11 % 0,72
Ejemplo 6
5,00/5,40 6,10/6,40 5,10/5,50 93,54 % 1,25
Ejemplo 7
11,50/12,00 12,10/12,60 12,60/12,90 96,51 % 0,83
Control
8,60/13,40 8,80/13,40 9,40/13,50 66,49 % 2,30
La velocidad de degradacion se calculo despues dividiendo el % de digestion despues de 24 horas para producir % 20 degradado / hora. La Tabla 3 muestra esos resultados. La Figura 5 contiene una representacion grafica de los resultados de la Tabla 3.
TABLA 3: Velocidad de degradacion en %/h
n.° de muestra
1 2 3 Med SD
Ejemplo 1
1,26 1,08 0,97 1,11 0,15
Ejemplo 2
0,95 0,87 0,82 0,88 0,06
Ejemplo 3
0,46 0,48 0,42 0,45 0,03
Ejemplo 4
0,49 0,52 0,36 0,46 0,08
Ejemplo 5
0,14 0,08 0,14 0,12 0,04
Ejemplo 6
0,31 0,20 0,30 0,27 0,06
Ejemplo 7
0,17 0,17 0,10 0,15 0,04
Control
1,49 1,43 1,27 1,40 0,12
25
El estudio demostro que un desplazamiento de pH de alto (9,2) a bajo (4,5) dentro de las primeras 64 horas de un proceso de reticulation con BDDGE al 4 % dio como resultado una matriz de colageno extracelular con valores de Ts progresivamente menores, menor resistencia a la proteasa y una velocidad de bioreabsorcion significativamente mas rapida.
El proceso de modulation de pH del proceso de reticulacion con BDDGE del material de matriz de colageno extracelular es un metodo factible para producir un dispositivo medico para la reparation quirurgica general con una velocidad de bioreabsorcion predeterminada controlada.

Claims (15)

  1. 5
    10
    15
    20
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    30
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    40
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    REIVINDICACIONES
    1. Una bioprotesis degradable, que comprende:
    un material basado en colageno reticulado que comprende la Reticulacion A y la Reticulacion B:
    imagen1
    en el que:
    lAAW indica hebras de colageno; R1 es
    HO OH
    imagen2
    R2 es
    HO OH
    imagen3
    R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -(CH2)n- y -CH2(O(CH2)n)m-OCH2-, n y m son independientemente un numero entero de 1-6 y
    la cantidad de aminas libres (-NH2) en las hebras de colageno esta entre un 50 % y un 85 %.
  2. 2. La bioprotesis degradable de la reivindicacion 1, en la que R3 y R4 son iguales.
  3. 3. La bioprotesis degradable de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la relacion de Reticulacion A a Reticulacion B es de 100:1 a 1:100.
  4. 4. La bioprotesis degradable de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el material derivado de colageno reticulado tiene una velocidad de degradacion del 0,2 % al 1,1 % por hora cuando se somete a un ensayo de digestion con pronasa.
  5. 5. La bioprotesis degradable de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que las hebras de colageno derivan de pericardio animal.
  6. 6. La bioprotesis degradable de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la protesis degradable tiene una temperatura de contraccion (Ts) por encima de 70 °C.
  7. 7. La bioprotesis degradable de la reivindicacion 6, en la que la temperatura de contraccion es proporcional a la cantidad de aminas libres en las hebras de colageno.
  8. 8. La bioprotesis degradable de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la velocidad de degradacion es proporcional a la cantidad de aminas libres en las hebras de colageno.
  9. 9. La bioprotesis degradable de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la bioprotesis degradable comprende una lamina flexible.
  10. 10. La bioprotesis degradable de la reivindicacion 9, en la que la lamina flexible esta entre 1 cm2 y 500 cm2.
  11. 11. La bioprotesis degradable de una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 10, en la que la lamina flexible se trata con un agente antimicrobiano.
    5
  12. 12. La bioprotesis degradable de la reivindicacion 2, en la que R3 y R4 son -CH2(O(CH2)n)m-OCH2-, m es 1 y n es 4.
  13. 13. La bioprotesis degradable de cualquiera de las reivindicaciones anteriores para uso en el tratamiento de un defecto tisular.
    10
  14. 14. La bioprotesis degradable de la reivindicacion 13, en la que el defecto tisular es una herida.
  15. 15. Un metodo para producir la bioprotesis degradable de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que comprende:
    15 proporcionar un material basado en colageno;
    exponer el material basado en colageno a una primera solucion tamponada con un pH entre aproximadamente 8,0 y aproximadamente 10,5 durante un primer periodo de tiempo para proporcionar un material basado en colageno tratado, en donde la primera solucion tamponada comprende una concentracion de un primer agente de reticulacion;
    20 exponer el material basado en colageno tratado a una segunda solucion tamponada con un pH entre
    aproximadamente 3,0 y aproximadamente 5,5 durante un segundo periodo de tiempo para proporcionar un material basado en colageno reticulado y adaptable, en donde la segunda solucion tamponada comprende una concentracion de un segundo agente de reticulacion; y
    aislar el material basado en colageno reticulado y adaptable para proporcionar una bioprotesis degradable.
    25
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2561094T3 (es) 2011-07-28 2016-02-24 Harbor Medtech, Inc. Productos de tejidos reticulados humanos o animales y sus métodos de fabricación y uso
EP3659633A1 (en) * 2013-02-06 2020-06-03 LifeCell Corporation Methods for localized modification of tissue products
WO2014160124A1 (en) * 2013-03-14 2014-10-02 Lifenet Health Crosslinked soft tissue graft and methods of use thereof
US10016528B2 (en) * 2013-09-09 2018-07-10 Eran Rosines Biologic prosthesis and methods of production and use
US12551509B2 (en) 2015-11-18 2026-02-17 Lucina Patent Holdco, Llc Acellular regenerative products and methods of their manufacture
CN105288734A (zh) * 2015-11-23 2016-02-03 四川大学 一种复合交联i型胶原膜及其制备方法
CN105497979B (zh) * 2015-12-24 2017-10-03 中国科学院遗传与发育生物学研究所 降解速率可控的引导神经再生的功能材料及其制备方法与应用
CN105802252B (zh) * 2016-04-29 2019-04-30 苏州景卓生物技术有限公司 一种胶原蛋白改性方法及使用所述方法制得的改性胶原蛋白
WO2017210109A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Lifecell Corporation Methods for localized modification of tissue products
CN108144128B (zh) * 2018-02-07 2021-11-05 陕西佰傲再生医学有限公司 一种多次交联乳房补片及其制备方法
CN110982487B (zh) * 2019-12-27 2021-05-25 北京林业大学 一种多重网络结构的无醛大豆蛋白胶黏剂及其制备方法
EP4142647A1 (en) 2020-05-01 2023-03-08 Harbor Medtech, Inc. Port-accessible multidirectional reinforced minimally invasive collagen device for soft tissue repair
EP4301426A1 (en) * 2021-03-02 2024-01-10 Harbor Medtech, Inc. Reinforced collagen device for soft tissue repair
CN116440328B (zh) * 2022-01-14 2024-10-29 爱美客技术发展股份有限公司 一种脱细胞生物组织材料降解周期的调节方法及其应用
US20250000506A1 (en) 2023-06-30 2025-01-02 Bioventus, Llc Implantable flexible tissue attachment device
CN117942420B (zh) * 2024-03-26 2024-06-18 上海威高医疗技术发展有限公司 一种以脱细胞基质材料为基材的可降解体内用压敏胶及其制备方法

Family Cites Families (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6238172A (ja) 1985-08-12 1987-02-19 株式会社 高研 抗血栓性医用材料の製造方法
JP2529112B2 (ja) 1987-08-31 1996-08-28 株式会社 高研 生体弁
US5800541A (en) 1988-11-21 1998-09-01 Collagen Corporation Collagen-synthetic polymer matrices prepared using a multiple step reaction
US5565519A (en) 1988-11-21 1996-10-15 Collagen Corporation Clear, chemically modified collagen-synthetic polymer conjugates for ophthalmic applications
US5550187A (en) 1988-11-21 1996-08-27 Collagen Corporation Method of preparing crosslinked biomaterial compositions for use in tissue augmentation
US5306500A (en) 1988-11-21 1994-04-26 Collagen Corporation Method of augmenting tissue with collagen-polymer conjugates
US5527856A (en) 1988-11-21 1996-06-18 Collagen Corporation Method of preparing crosslinked biomaterial compositions for use in tissue augmentation
US5304595A (en) 1988-11-21 1994-04-19 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
US5614587A (en) 1988-11-21 1997-03-25 Collagen Corporation Collagen-based bioadhesive compositions
US5936035A (en) 1988-11-21 1999-08-10 Cohesion Technologies, Inc. Biocompatible adhesive compositions
US5643464A (en) 1988-11-21 1997-07-01 Collagen Corporation Process for preparing a sterile, dry crosslinking agent
US5264214A (en) 1988-11-21 1993-11-23 Collagen Corporation Composition for bone repair
US5510418A (en) 1988-11-21 1996-04-23 Collagen Corporation Glycosaminoglycan-synthetic polymer conjugates
US5162430A (en) 1988-11-21 1992-11-10 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
US5475052A (en) 1988-11-21 1995-12-12 Collagen Corporation Collagen-synthetic polymer matrices prepared using a multiple step reaction
WO1992014419A1 (en) 1991-02-14 1992-09-03 Baxter International Inc. Pliable biological graft materials and their methods of manufacture
WO1994017841A1 (en) * 1993-02-01 1994-08-18 Baxter International Inc. Biological grafts having regionalized differences in cross-link density and their methods of manufacture
DK0612723T3 (da) 1993-02-20 1998-03-30 Hoechst Ag Substituerede benzoylguanidiner, fremgangsmåde til fremstilling, deres anvendelse som lægemiddel, som inhibitor af den cellulære Na+/H+-udbytning eller som diagnostikum samt lægemiddel med indhold deraf
US5827937A (en) 1995-07-17 1998-10-27 Q Med Ab Polysaccharide gel composition
JP2000506050A (ja) 1996-03-04 2000-05-23 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 生物学的組織を架橋するための非ポリマー性エポキシ化合物およびそれにより調製される生体補綴移植片
US6166184A (en) * 1997-08-18 2000-12-26 Medtronic Inc. Process for making a bioprosthetic device
US6117979A (en) 1997-08-18 2000-09-12 Medtronic, Inc. Process for making a bioprosthetic device and implants produced therefrom
US6652818B1 (en) 1998-11-13 2003-11-25 Regeneration Technologies, Inc. Implant sterilization apparatus
US6613278B1 (en) 1998-11-13 2003-09-02 Regeneration Technologies, Inc. Tissue pooling process
USD461248S1 (en) 2000-02-10 2002-08-06 Regeneration Technologies, Inc. Assembled bone implants
US20010031254A1 (en) 1998-11-13 2001-10-18 Bianchi John R. Assembled implant
US6482584B1 (en) 1998-11-13 2002-11-19 Regeneration Technologies, Inc. Cyclic implant perfusion cleaning and passivation process
US6008292A (en) * 1997-12-02 1999-12-28 Baxter International Inc. Method for inhibiting calcification of aldehyde-fixed bioprosthetic materials
US6156531A (en) 1998-07-20 2000-12-05 Sulzer Carbomedics Inc. Cross-linking tissue with a compound having a C8 to C40 aliphatic chain
US6254564B1 (en) 1998-09-10 2001-07-03 Percardia, Inc. Left ventricular conduit with blood vessel graft
US6947398B1 (en) 1998-11-13 2005-09-20 Lucent Technologies Inc. Addressing scheme for a multimedia mobile network
US6497726B1 (en) 2000-01-11 2002-12-24 Regeneration Technologies, Inc. Materials and methods for improved bone tendon bone transplantation
WO2000054821A1 (en) 1999-03-16 2000-09-21 Regeneration Technologies, Inc. Molded implants for orthopedic applications
AU4055900A (en) * 1999-03-31 2000-10-16 Gregory W. Stocks Joint prosthesis assembly and method for installing same
US20030023304A1 (en) 2000-01-11 2003-01-30 Carter Kevin C. Materials and methods for improved bone tendon bone transplantation
US6893462B2 (en) 2000-01-11 2005-05-17 Regeneration Technologies, Inc. Soft and calcified tissue implants
US20030097179A1 (en) 2000-01-11 2003-05-22 Carter Kevin C. Materials and methods for improved bone tendon bone transplantation
WO2001078798A1 (en) 2000-02-10 2001-10-25 Regeneration Technologies, Inc. Assembled implant
DE10010073B4 (de) 2000-02-28 2005-12-22 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Verankerung für implantierbare Herzklappenprothesen
US20020119437A1 (en) 2000-09-20 2002-08-29 Grooms Jamie M. Method of preparing and processing transplant tissue
DE10060660A1 (de) 2000-12-06 2002-06-20 Frey Rainer Verfahren zur Konservierung von biologischen Prothesen, konservierte biologische Prothese und Konservierungslösung
AUPR217300A0 (en) * 2000-12-20 2001-01-25 Ketharanathan, Vettivetpillai Method of creating biological and biosynthetic material for implantation
WO2003024496A1 (en) 2001-09-05 2003-03-27 Hans Biomed Corporation A process for preparing a biomaterial for tissue repair
US7918899B2 (en) * 2002-01-25 2011-04-05 Biomedical Design, Inc. Variably crosslinked tissue
JP4512370B2 (ja) 2002-01-25 2010-07-28 バイオメディカル デザイン インコーポレイテッド 耐石灰化固定
US6989437B2 (en) 2002-04-10 2006-01-24 Keraplast Technologies, Ltd. Methods for producing, films comprising, and methods for using heterogeneous crosslinked protein networks
US7001987B2 (en) 2002-04-22 2006-02-21 Keraplast Technologies, Ltd. Hydrogel with controllable mechanical, chemical, and biological properties and method for making same
US20040120910A1 (en) 2002-04-10 2004-06-24 Dyke Mark Van Methods for producing, films comprising, and methods for using heterogeneous crosslinked protein networks
US6914126B2 (en) 2002-04-10 2005-07-05 Keraplast Technologies, Ltd. Methods for producing, films comprising, and methods for using heterogenous crosslinked protein networks
US6761735B2 (en) 2002-04-25 2004-07-13 Medtronic, Inc. Heart valve fixation process and apparatus
US20030229394A1 (en) 2002-06-06 2003-12-11 Ogle Matthew F. Processed tissue for medical device formation
US20040062793A1 (en) 2002-07-05 2004-04-01 Dyke Mark Van Tissue defect dressings comprising proteinaceous networks
WO2005034852A2 (en) 2003-08-26 2005-04-21 Gel-Del Technologies, Inc. Protein biomaterials and biocoacervates and methods of making and using thereof
ATE430593T1 (de) 2003-10-28 2009-05-15 Medtronic Inc Verfahren zur herstellung von vernetzten materialien und bioprothetischen vorrichtungen
EP1796693A2 (en) 2004-08-26 2007-06-20 Chandrashekhar P. Pathak Implantable tissue compositions and method
NZ556610A (en) 2004-12-24 2010-11-26 Celxcel Pty Ltd An implantable biomaterial and a method of producing same
US20060217804A1 (en) 2005-03-25 2006-09-28 Dove Jeffrey S Treatment of bioprosthetic tissues to mitigate post implantation calcification
US7579381B2 (en) 2005-03-25 2009-08-25 Edwards Lifesciences Corporation Treatment of bioprosthetic tissues to mitigate post implantation calcification
KR20080031735A (ko) 2005-06-10 2008-04-10 셀진 코포레이션 인간 태반 콜라겐 조성물, 그의 제조 방법, 그의 사용 방법및 상기 조성물을 포함하는 키트
US20070014831A1 (en) 2005-07-12 2007-01-18 Hsing-Wen Sung Biodegradable occlusive device with moisture memory
JP5208752B2 (ja) * 2005-10-18 2013-06-12 オーガノジェネシス・インコーポレイテッド 抗菌性コラーゲン構築物
US8211168B2 (en) * 2006-02-21 2012-07-03 Cook Biotech Incorporated Graft material, stent graft and method
US7896915B2 (en) 2007-04-13 2011-03-01 Jenavalve Technology, Inc. Medical device for treating a heart valve insufficiency
EP2152743A2 (en) 2007-05-23 2010-02-17 Allergan, Inc. Cross-linked collagen and uses thereof
US11890371B2 (en) 2007-12-26 2024-02-06 Petvivo Holdings, Inc. Biocompatible protein-based particles and methods thereof
KR101027630B1 (ko) 2008-06-18 2011-04-07 주식회사 제네웰 연골 재생용 다공성 히알루론산-콜라겐 천연 고분자 지지체의 제조방법
US20110207671A1 (en) 2008-08-22 2011-08-25 Fibrogen, Inc. Method for producing double-crosslinked collagen
WO2010053918A1 (en) 2008-11-05 2010-05-14 Hancock Jaffe Laboratories, Inc. Composite containing collagen and elastin as a dermal expander and tissue filler
US10016534B2 (en) 2008-11-17 2018-07-10 Gel-Del Technologies, Inc. Protein biomaterial and biocoacervate vessel graft systems and methods of making and using thereof
US9211361B2 (en) 2010-03-15 2015-12-15 Kemal Schankereli Thin collagen tissue for medical device applications
US8722854B2 (en) 2010-12-23 2014-05-13 Medskin Solutions Dr. Suwelack Ag Degradation-stabilised, biocompatible collagen matrices
ES2561094T3 (es) 2011-07-28 2016-02-24 Harbor Medtech, Inc. Productos de tejidos reticulados humanos o animales y sus métodos de fabricación y uso

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