ES2563638T3 - Xilosa-isomerasa procariótica para la construcción de levaduras fermentadoras de xilosa - Google Patents

Xilosa-isomerasa procariótica para la construcción de levaduras fermentadoras de xilosa Download PDF

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Abstract

Uso de una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ácidos nucleicos que codifica una xilosa-isomerasa (XI) procariótica y que es al menos un 95% idéntica, preferiblemente un 99% idéntica con la secuencia de ácidos nucleicos según la SEQ ID NO. 2, o que es al menos un 95% idéntica, preferiblemente un 99% idéntica con la secuencia de ácidos nucleicos según la SEQ ID NO. 3, para la transformación de una célula, para la expresión recombinante y la preparación de la xilosa-isomerasa y/o para la conversión de xilosa en xilulosa por parte de la célula, en donde la xilosa-isomerasa (XI) procede de Clostridium phytofermentans y comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95% idéntica, preferiblemente un 99% idéntica con la secuencia de aminoácidos según la SEQ ID NO. 1.

Description

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30 s, 52-62ºC re-asociación/unión de los oligonucleótidos al ADN
50 s, 72ºC síntesis/alargamiento de ADN
3. 1x 7 min, 72ºC síntesis/alargamiento de ADN
Después de la primera etapa de desnaturalización, se añadió la polimerasa (“PCR de arranque en caliente”). El número de las etapas de síntesis, la temperatura de re-asociación y el tiempo de alargamiento se adaptaron a las temperaturas de fusión específicas de los oligonucleótidos utilizados o bien al tamaño del producto a esperar. Los productos de la PCR se examinaron mediante electroforesis en gel de agarosa y a continuación se purificaron.
-Purificación de ADN de productos de la PCR
La purificación de los productos de la PCR tuvo lugar con un kit “QIAquick PCR Purification ” de la razón social Qiagen según los datos del fabricante.
-Separación por electroforesis en gel de fragmentos de ADN
La separación de fragmentos de ADN con un tamaño de 0,15-20 kb tuvo lugar en geles de agarosa al 0,5-1% con 0,5 μg/ml de bromuro de etidio. Como tampón de gel y de desarrollo se utilizó tampón 1xTAE (Tris 40 mM, ácido acético 40 mM, EDTA 2 mM) (Maniatis et al., 1982). Como patrón de magnitud servía un ADN del fago lambda cortado con las endonucleasas de restricción EcoRI y HindIII. Las muestras de ADN se mezclaron, antes de aplicación, con 1/10 volumen de marcador azul (tampón 1xTAE, glicerol al 10%, azul bromofenol al 0,004%) y después de la separación se hicieron visibles mediante radiación con luz UV (254 nm).
-Aislamiento de fragmentos de ADN de geles de agarosa
El fragmento de ADN deseado se cortó del gel de agarosa TAE bajo luz UV de onda larga (366 nm) y se aisló con el kit “QIAquick Gel Extraction” de la razón social Qiagen según los datos del fabricante.
5. Modificación enzimática de ADN
Restricción de ADN
La disociación específica para la secuencia del ADN con endonucleasas de restricción se llevó a cabo bajo las condiciones de incubación aconsejadas por el fabricante durante 1 hora con 2 -5 U de enzima por μg de ADN.
6. Análisis de los metabolitos
En diferentes momentos se tomaron muestras y se separaron por centrifugación a 4ºC durante 15 min a 13000 rpm y del sobrenadante se tomaron 450 μl. La precipitación de proteínas se llevó a cabo con ácido sulfosalicílico al 50%. 1/10 del volumen de ácido sulfosalicílico se añadió a las muestras, se mezcló y se separó por centrifugación durante 20 min a 13000 rpm a 4ºC. El sobrenadante se recogió y después de una dilución ulterior con agua se podían emplear las muestras para la medición. Como patrones servían muestras con D-glucosa, D-xilosa, xilitol, acetato, glicerol y etanol que se emplearon en concentraciones de 0,05% p/v, 0,1% p/v, 0,5% p/v, 1,0% p/v y 2,0% p/v.
Las concentraciones de azúcar, así como la concentración de etanol se midieron mediante BioLC (Dionex). Se utilizó en la medición el automuestreador “AS50”, el horno de columna “TCC-100”, el detector RI “RI-101” (Shodex) y la bomba de gradiente “GS50”.
La medición de las muestras se llevó a cabo con la columna VA 300/7.7 Nucleogel Sugar 810 H (Macherey Nagel). La columna se eluyó a una temperatura de 65ºC con H2SO4 5 mM como eluyente y un caudal de 0,6 ml min-1. La evaluación de los datos tuvo lugar con el programa Chromeleon versión 6.50™ (versión 6.50, Dionex).
7. Medición de actividades enzimáticas en S. cerevisiae
-Preparación de extractos en bruto
Cultivos de 50 ml de células de levadura se hicieron crecer hasta la fase exponencial en medio mínimo sintético con glucosa al 2%. Las células se recolectaron, se lavaron dos veces en tampón Tris-HCl (pH 7,5) y se disgregaron con ayuda de perlas de vidrio (Ø = 0,45 mm) durante 8 min en un aparato Vibrax (Janke & Kunkel, Vibrax-VXR) a 4ºC. Los fragmentos de células se separaron mediante centrifugación durante 10 min a 13000 rpm. A continuación, se retiró el sobrenadante y se completó con tampón Tris-HCl frío (pH 7,5) hasta 2 ml y se empleó como extracto bruto para la determinación de proteínas y para la medición de las actividades enzimáticas o bien inhibición de xilitol.
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Con el fin de someter a ensayo el gen xilosa-isomerasa optimizado en codones en la cepa MKY09, el gen hubo de sub-clonarse en un vector de levadura. Para ello, el ORF de XI optimizado en codones se amplificó con cebadores y se clonó en el vector p426HXT7-6HIS linearizado (véase “realización del rastreo”). La secuencia del plásmido p426H7-opt.XI-Clos obtenido se verificó a través de análisis de restricción. Para el ensayo de la funcionalidad de la isomerasa utilizada en codones, el plásmido p426H7-opt.XI-Clos se transformó en la cepa MKY09. Cepas de levaduras recombinantes mostraron en placas con medio con contenido en xilosa un buen desarrollo (Fig. 5). Siguieron caracterizaciones adicionales de las XI nativas y optimizadas en codones de C. phytofermentans.
Ejemplo 3: Caracterización de la xilosa-isomerasa procariótica funcional
A) Comportamiento en el crecimiento y conversión en xilosa
El crecimiento de la cepa MKY09 con la xilosa-isomerasa nativa y la optimizada en codones de C. phytofermentans se examinó en un ensayo de crecimiento en medio con contenido en xilosa bajo condiciones aerobias. Como comparación servía el vector p426HXT7-6HIS vacio.
Las cepas se cultivaron en medio SC con glucosa al 0,1% y xilosa al 1,4% y se inocularon con una DO600 nm = 0,2 en 50 ml de medio SC con glucosa al 0,1% y xilosa al 1,4%. La incubación tuvo lugar en matraces de agitación bajo condiciones aerobias a 30ºC. Se tomaron varias muestras para la determinación de la densidad óptica así como para la determinación de la composición del metabolito.
Las curvas de crecimiento demostraron que las levaduras recombinantes crecían todas en glucosa hasta una DO 600 de 2,5 (Tabla 2). Después de otras 50 h, la cepa de levaduras que contenía la xilosa-isomerasa nativa de C. phytofermentans, empezó a crecer sobre xilosa y alcanzó una DO 600 final de 3,5 con una tasa de crecimiento máxima de 0,0058 h-1 sobre medio con contenido en xilosa. La cepa de levadura con la xilosa-isomerasa optimizada en codones alcanzó asimismo una DO 600 final de 3,5. La tasa de crecimiento máxima ascendió a 0,0072 h-1 . Transformantes de levadura con el vector p426HXT7-6HIS vacio no presentaron crecimiento alguno sobre xilosa y comenzaron a morir ya después de 150 h.
Las levaduras recombinantes que contenían la xilosa-isomerasa nativa de C. phytofermentans o bien la xilosaisomerasa optimizada en codones se convirtieron en 312 horas sobre 2,6 g de xilosa (Fig. 6).
Tabla 2. Determinación de la tasa de crecimiento máxima sobre xilosa (µ)
MKY09 tasa de crecimiento máx. transformada con plásmido
p426H7-XI-Clos 0,0058 p426H7-opt.XI-Clos 0,0072
Con el ensayo pudo demostrarse que la introducción de la xilosa-isomerasa nativa así como de la optimizada en codones de C. phytofermentans posibilita a las cepas de S. cerevisiae recombinantes el crecimiento sobre D-xilosa así como su conversión. Mediante la optimización en codones de la xilosa-isomerasa pudo alcanzarse una tasa de crecimiento mayor.
B) Medición de la actividad de xilosa-isomerasa
Se llevaron a cabo ensayos enzimáticos directamente después de la preparación del extracto bruto. La actividad XI se llevó a cabo a 30ºC en una mezcla de reacción (Tris-HCl 100 mM, pH 7,5; MgCl2 10 mM, NADH 0,23 mM; sorbitol-deshidrogenasa 2 U) con diferentes concentraciones de extracto bruto. La reacción se inició con xilosa 6,25500 mM.
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Como comparación servía la xilosa-isomerasa de Piromyces sp.E2 y el vector p426HXT7-6HIS vacio. El valor Ki determinado de la xilosa-isomerasa de Piromyces sp.E2 ascendió a 4,67 ± 1,77 mM.
A partir de los valores Ki determinados se desprende que la xilosa-isomerasa de C. phytofermentans es inhibida de manera significativamente en menor medida por parte de xilitol que la xilosa-isomerasa de Piromyces sp.E2.
E) Ejemplos de vectores para la xilosa-isomerasa
El plásmido de partida para la construcción de p426H7-opt.XI-Clos era el plásmido p426HXT7-6HIS. En el caso del vector se trata de un plásmido de expresión de 2 μ que posee un marcador URA3.
Otros vectores de expresión posibles son los de la serie pRS303X, p3RS305X y p3RS306X. En este caso se trata de vectores integrativos que poseen un marcador de antibióticos dominante. Datos más precisos de estos vectores se encuentran Taxis y Knop (2006).
Referencias Amore, R., Wilhelm, M. y Hollenberg, C. P. (1989)
The fermentation of xylose -an analysis of the expression of Bacillus and Actinoplanes xylose isomerase genes in yeast. Appl. Microbiol. Biotechnol. 30:351-357 Banerjee, S., Archana, A. y Satyanarayana, T. (1994)
Xylose metabolism in a thermophilic mould Malbranchea pulchella var. sulfurea TMD 8. Curr. Microbiol. 29:349-352 Birnboim, H.C. y J. Doly (1979)
A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucl. Acids Res. 7: 1513-1523 Dower, W.J., Miller, J.F.y Ragsdale, C.W. (1988)
High efficiency transformation of E. coli by high voltage electroporation. Nucl. Acids Res. 16: 6127-6145 Eliasson, A., Christensson, C., Wahlbom, C.F. y Hahn-Hägerdal, B. (2000)
Anaerobic xylose fermentation by recombinant Saccharomyces cerevisiae carrying XYL1, XYL2 and XKS1 in mineral medium chemostat cultures. Appl. Environ. Microbiol. 66: 3381-3386 Gárdonyi, M. y Hahn-Hägerdahl, B. (2003)
The Streptomyces rubigniosus xylose isomerase is misfolded when expressed in Saccharomyces cerevisiae. Enzym. Microb. Technol. 32, 252-259 Gietz, R.D. y Woods, R.A. (1994)
High efficiency transformation in yeast. En: Molecular Genetics of Yeast: Practical Approaches, J.A. Johnston (Ed.). Oxford University Press págs. 121-134
Hahn-Hägerdal, B., Wahlborn, C.F., Gárdonyi, M., van Zyl, W., Otero, R.R.C. y Jönsson, L.J. (2001)
18
imagen15
Appl Environ Microbiol. sep.1987; 53(9):1996-2000
Schaaff-Gerstenschläger, I. y Miosga, T. (1997)
The pentose phosphate pathway. En: Yeast Sugar Metabolism: Biochemistry, Genetics, Biotechnology, and Applications. Zimmermann, F.K. und Entian K.-D (Ed.), Capítulo 15.Technomic, Lancaster, PA
5 Taxis, C. y Knop, M. (2006) System of centromeric, episomal, and integrative vectors based on drug resistance markers for Saccharomyces cerevisiae.
BioTechniques 40, No. 1 Tomoyeda, M. y Horitsu, H. (1964)
10 Pentose metabolism in Candida utilis Parte I: Xylose isomerase. Agric. Biol. Chem. 28:139-143.
Vongsuvanglert, V. y Tani, Y. (1988)
Purification and characterisation of xylose isomerase of a methanol yeast, Candida boidinii, which is involved in sorbitol production from glucose. 15 Agric. Biol. Chem. 52:1818-1824. Yamanaka, K. (1969)
Inhibition of D-xylose isomerase by pentitols and D-lyxose. Arch. Biochem. Biophys. 131, 502-506.
Zimmermann, F. K. (1975)
20 Procedures used in the induction of mitotic recombination and mutation in the yeast Saccharomyces cerevisiae. Mutation Res. 31:71-81.
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Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0822937D0 (en) 2008-12-16 2009-01-21 Terranol As Microorganism
JP5843229B2 (ja) 2009-12-22 2016-01-13 株式会社豊田中央研究所 キシロースイソメラーゼ及びその利用
EP2576804B1 (en) * 2010-05-28 2016-12-14 Codexis, Inc. Pentose fermentation by a recombinant microorganism
WO2012009272A2 (en) * 2010-07-14 2012-01-19 Codexis, Inc. Pentose fermentation by a recombinant microorganism
WO2012068537A2 (en) * 2010-11-19 2012-05-24 Qteros, Inc. New biocatalysts and primers for production of chemicals
FR2968313B1 (fr) 2010-12-03 2014-10-10 Lesaffre & Cie Procede de preparation d'une levure industrielle, levure industrielle et application a la production d'ethanol a partir d'au moins un pentose
CN103597084A (zh) * 2011-02-07 2014-02-19 加利福尼亚大学董事会 增强的纤维糊精代谢
JP2014522634A (ja) * 2011-06-17 2014-09-08 ビュータマックス・アドバンスド・バイオフューエルズ・エルエルシー イソブタノール発酵の原料としてのリグノセルロース加水分解物
EP2626423A1 (en) * 2012-02-07 2013-08-14 Clariant Produkte (Deutschland) GmbH Pentose-fermenting microorganism
FR2991339B1 (fr) 2012-06-01 2016-02-19 Lesaffre & Cie Souches de levure aptes a metaboliser le xylose et resistantes a au moins un inhibiteur de fermentation, procede d'obtention et utilisation
DK2877576T3 (da) 2012-07-24 2019-08-12 Bp Corp North America Inc Xyloseisomeraser og anvendelser deraf
CA2902149C (en) * 2013-02-22 2022-07-26 Technische Universiteit Delft Recombinant micro-organism for use in method with increased product yield
JP6027559B2 (ja) 2013-03-28 2016-11-16 株式会社豊田中央研究所 キシロースイソメラーゼ活性を有するタンパク質及びその利用
FR3017623B1 (fr) 2014-02-17 2018-08-10 Lesaffre Et Compagnie Souche fermentant les pentoses a propagation optimisee
WO2016012429A1 (en) 2014-07-24 2016-01-28 Dsm Ip Assets B.V. Yeast cell with improved pentose transport
FR3035405B1 (fr) 2015-04-27 2019-04-19 Lesaffre Et Compagnie Souche de levure presentant une capacite amelioree a fermenter le xylose en presence d'acide acetique
FR3036709B1 (fr) 2015-05-29 2019-06-07 Lesaffre Et Compagnie Propagation de levures simultanee a la saccharification
CN122256151A (zh) 2015-07-13 2026-06-23 玛拉可再生能源公司 增强木糖的微藻代谢
WO2017158189A1 (en) 2016-03-18 2017-09-21 Lallemand Hungary Liquidity Management Llc Regulation of the ras/camp/pka signaling pathway in yeasts
WO2017164388A1 (ja) * 2016-03-25 2017-09-28 国立研究開発法人産業技術総合研究所 変異型キシロース代謝酵素とその利用
FR3055634B1 (fr) 2016-09-08 2021-03-05 Lesaffre & Cie Utilisation de mcm7 pour obtenir des souches de levure resistantes a l'acide acetique
FR3055635B1 (fr) 2016-09-08 2024-06-14 Lesaffre & Cie Utilisation de qtl pour conferer a des souches de levure une resistance a l'acide acetique
FR3062134B1 (fr) 2017-01-24 2023-07-21 Lesaffre & Cie Obtention de souches de levure performantes pour la metabolisation de l'arabinose
WO2019175636A1 (en) * 2018-03-15 2019-09-19 Petiva Private Limited Nucleic acid encoding an isomerase and uses thereof
CN112004930A (zh) 2018-03-27 2020-11-27 巴斯夫欧洲公司 木糖代谢酵母

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6333181B1 (en) * 1997-04-07 2001-12-25 University Of Florida Research Foundation, Inc. Ethanol production from lignocellulose
SE9901298D0 (sv) * 1999-04-09 1999-04-09 Forskarpatent I Syd Ab Xylose isomerase with improved kinetic properties
EP1468093B2 (en) * 2002-01-23 2018-01-24 DSM IP Assets B.V. Fermentation of pentose sugars
EP1863901A1 (en) * 2005-03-11 2007-12-12 Forskarpatent i Syd AB Arabinose- and xylose-fermenting saccharomyces cerevisiae strains
US7682811B2 (en) * 2006-01-27 2010-03-23 University Of Massachusetts Systems and methods for producing biofuels and related materials
EP2511285A3 (en) * 2007-05-09 2012-11-28 Mascoma Corporation Gene knockout mesophilic and thermophilic organisms, and methods of use thereof

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