ES2575676T3 - Composición de colirio - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende: - al menos 2-amino-9-[[(1S,2R)-1,2-bis(hidroximetil)ciclopropil]metil]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona al 0,1 % p/v; y - al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina,

Description

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DESCRIPCION

Composicion de colirio Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a una composicion de colirio y al uso de la misma para el diagnostico y tratamiento de infecciones oculares en animales.

Antecedentes de la invencion

El diagnostico de infecciones oculares en animales puede ser problematico. Por ejemplo, el diagnostico del herpesvirus felino 1 (FHV-1) se basa tipicamente en signos clmicos y en la presencia de ADN vmco confirmada por PCR. Sin embargo, el diagnostico se complica por la aparicion de resultados de PCR falsos negativos y por el hecho de que un resultado de PCR positivo puede reflejar tambien una diseminacion vmca de nivel bajo o incluso una infeccion latente. Por lo tanto, a menudo, es imposible demostrar que los signos clmicos observados estan ligados de hecho a la presencia de ADN de FHV-1. Un diagnostico preciso y rapido es clave para garantizar un tratamiento eficaz y para evitar la sobremedicacion.

Se conocen diferentes compuestos antivmcos para el tratamiento de infecciones por herpesvirus. El compuesto 2-amino- 9-[[(1S,2R)-1,2-bis(hidroximetil)ciclopropil]metil]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (tambien conocido como "A-5021") es un inhibidor potente de la replicacion del herpesvirus (Neyts et al., Antiviral Research 2001, 49, 115-120; Iwayama et al., Antimicr. Agents Chemother. 1998; 42, 1666-1670). Por ejemplo, se ha informado de que A-5021 es un agente antivmco potente y selectivo contra virus del herpes simple de tipo 1 (VHS-1), virus del herpes simple de tipo 2 (VHS-2) y varicela-zoster (VZV) in vivo. Sin embargo, el uso medico y veterinario de A-5021 se ve obstaculizado por su poca solubilidad. La solubilizacion de A-5021 a concentraciones farmacologicamente activas es fuertemente dependiente del pH y obtener una solucion estable que comprende mas de 1 mg/ml de A-5021 (o soluciones de A-5021 al 0,1 % p/v) requiere normalmente valores de pH por debajo de 4 o bien por encima de 10. Se ha informado de composiciones de colirio que tiene un valor de pH de aproximadamente 7 y que comprenden mas de 1 mg/ml de A-5021 por Itahashi et al. (Cornea 2008, 27, 334-338), pero estas composiciones tiene una mala estabilidad y por tanto no se pueden usar en la practica. Por lo tanto, la preparacion de formulaciones farmaceuticas estables de A-5021 solubilizado no es sencilla.

El documento JP2004026695 A divulga una preparacion basada en agua para colirios que comprende A-5021 al 0,1 % en peso , poli(alcohol vimlico) y tampon de acido borico.

Existe la necesidad de obtener procedimientos mejorados de diagnostico de infecciones vmcas y de composiciones que traten de forma eficaz infecciones herpeticas (oculares), que mitiguen al menos uno de los problemas mencionados anteriormente.

Sumario de la invencion

La presente invencion describe un procedimiento para solubilizar A-5021 en condiciones isotonicas y de pH neutro en concentraciones de entre 1-10 mg/ml (0,1 -1 % p/v), permitiendo el uso de A-5021 en formulaciones lfquidas estables tales como colirios. Dichos colirios son particularmente utiles en el tratamiento y diagnostico de infecciones oculares en animales.

En un primer aspecto, la presente invencion proporciona composiciones que comprenden A-5021 a una concentracion de al menos el 0,1 % p/v que son estables. Mas en particular, las composiciones son estables porque el A-5021 no precipita, mas en particular no se observa ninguna precipitacion en el plazo de 1-48 h, preferentemente en el plazo de 1 semana, mas preferentemente en el plazo de 1 mes y lo mas preferentemente en el plazo de 3 meses o mas despues de la fabricacion de la composicion.

Las composiciones de la invencion comprenden:

- A-5021 al menos al 0,1 % p/v; y

al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina.

En modos de realizacion particulares, la composicion es una solucion acuosa. En determinados modos de realizacion, la composicion es una solucion oftalmica. En modos de realizacion particulares, la ciclodextrina usada en las composiciones de la invencion es hidroxipropil beta-ciclodextrina. En determinados modos de realizacion, la composicion comprende ademas tiomersal al menos al 0,008 % p/v.

En otro aspecto, la presente invencion proporciona composiciones como se describe anteriormente, para su uso como una composicion diagnostica y/o terapeutica.

En determinados modos de realizacion, las composiciones son para su uso en un procedimiento para el tratamiento de una infeccion herpetica ocular. En modos de realizacion particulares, la infeccion ocular que se va a tratar es una

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infeccion ocular de un animal de comparMa. En determinados modos de realizacion, dicho animal de comparMa es un felino. En modos de realizacion particulares, la infeccion ocular que se va a tratar usando las composiciones de la presente invencion es una infeccion ocular de un felino. En modos de realizacion particulares, los procedimientos de tratamiento concebidos comprenden aplicar la composicion de la invencion sobre el ojo dos o tres veces al dfa durante al menos siete dfas.

En determinados modos de realizacion, dichas composiciones de la presente invencion se conciben para su uso en un procedimiento de diagnostico de una infeccion herpetica ocular. En modos de realizacion particulares, la infeccion ocular es una infeccion ocular en un animal de comparMa. En modos de realizacion particulares, el animal de comparMa es un felino. En modos de realizacion particulares, dichos procedimientos de diagnostico concebidos comprenden aplicar la composicion de la invencion sobre el ojo dos o tres veces al dfa durante de uno a siete dfas y determinar si los smtomas clmicos de la infeccion ocular han disminuido o no, con lo que una disminucion en los smtomas clmicos es indicativa del hecho de que la infeccion ocular es una infeccion herpetica ocular.

En otro aspecto, la presente invencion proporciona procedimientos para preparar soluciones oftalmicas estables que comprenden A-5021. Mas en particular, el procedimiento comprende las etapas de:

a) proporcionar una solucion que comprende al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina;

b) anadir A-5021 a dicha solucion;

c) solubilizar el A-5021 anadido en la etapa b);

d) repetir las etapas b) y c) hasta que se obtiene una concentracion de A-5021 en dicha solucion de al menos 1 mg/ml;

e) opcionalmente, anadir al menos 0,08 mg/ml de tiomersal.

En modos de realizacion particulares, dicha ciclodextrina en la etapa a) es hidroxipropil beta-ciclodextrina. Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion se describira con respecto a los modos de realizacion particulares pero la invencion no esta limitada a los mismos sino solo por las reivindicaciones. Cualquier signo de referencia en las reivindicaciones no se debe interpretar como limitante del alcance de las mismas.

Como se usa en el presente documento, las formas del singular “uno", “una" y “el/la" incluyen ambos referentes singular y plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.

Los terminos "que comprende", "comprende" y "compuesta de" como se usan en el presente documento son sinonimos de "que incluye", "incluye" o "que contiene", "contiene" y son inclusivos o abiertos y no excluyen miembros, elementos o etapas de procedimiento no enumerados, adicionales. Los terminos "que comprende", "comprende" y "compuesta de" cuando se refieren a componentes, elementos o etapas de procedimiento enumerados tambien incluyen modos de realizacion que "consisten en" dichos componentes, elementos o etapas del procedimiento enumerados.

Ademas, los terminos primero, segundo, tercero y similares en la descripcion y en las reivindicaciones, se usan para distinguir entre elementos similares y no necesariamente para describir un orden secuencial o cronologico, a menos que se especifique. Se ha de entender que los terminos usados de este modo son intercambiables en circunstancias apropiadas y que los modos de realizacion de la invencion descritos en el presente documento pueden funcionar en otras secuencias que las descritas o ilustradas en el presente documento.

Los valores como se usan en el presente documento cuando se refieren a un valor medible tal como un parametro, una cantidad, una duracion temporal y similares, se pretende que engloben variaciones de +/-10% o menos, preferentemente +/-5 % o menos, mas preferentemente +/- 1 % o menos y aun mas preferentemente +/-0,1 % o menos de y desde el valor especificado, en la medida en que dichas variaciones sean apropiadas para realizarse en la invencion divulgada. Se debe entender que cada valor como se usa en el presente documento se divulga por sf mismo, ademas espedfica y preferentemente.

La enumeracion de intervalos numericos por criterios de valoracion incluye todos los numeros y las fracciones subsumidas dentro de los intervalos respectivos, asf como los criterios de valoracion enumerados.

A menos que se defina de otro modo, todos los terminos usados para divulgar la invencion, incluyendo terminos tecnicos y cientfficos, tienen el significado que se entiende comunmente por un experto en la tecnica a la que pertenece la presente invencion. Por medio de grna adicional, se incluyen definiciones para los terminos usados en la descripcion para apreciar mejor la ensenanza de la presente invencion. Los terminos o definiciones usados en el presente documento se proporcionan exclusivamente para ayudar en la comprension de la invencion.

El termino "p/v" como se usa en el presente documento se refiere a peso/volumen. Si se establece que una solucion

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comprende un determinado compuesto en una concentracion de x % p/v, esto quiere decir que 1 l de esa solucion comprende 10 g de ese compuesto.

El termino "sulfo", por s^ solo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo -SO3H o a una sal del mismo.

La presente invencion proporciona composiciones Kquidas que comprenden el compuesto A-5021 (es decir, 2-amino-9-[[(1S,2R)-1,2-bis(hidroximetil)ciclopropil]metil]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona), que se representa por la formula (I):

imagen1

A diferencia de otros analogos de nucleosidos, el compuesto A-5021 es escasamente soluble en agua. Aunque dadas las similitudes estructurales entre A-5021 y el farmaco anti-herpes conocido penciclovir (es decir, 2-amino-9-[4-hidroxi-3-(hidroximetil)butil]-3H-purin-6-ona) parece probable que se pueda formular como una formulacion de hidrato de sal de sodio, una formulacion tal es altamente alcalina y por lo tanto no compatible con aplicaciones en las que se requiere una composicion fisiologica.

Por tanto, las aplicaciones particulares de A-5021 se han obstaculizado por la incapacidad para obtener concentraciones suficientemente altas del ingrediente activo en una composicion liquida fisiologicamente compatible.

Por ejemplo, una formulacion de colirio adecuada tendria un pH neutro (es decir, un pH de 7) o proximo a un pH neutro. Los autores de la presente invencion han descubierto ahora que solo ciclodextrinas tales como hidroxipropil beta-ciclodextrina (Kleptose® HPB) son adecuadas para las formulaciones Kquidas fisiologicas de A-5021, ya que solo el uso de dichos agentes da como resultado una solucion al de 0,1 % a 1 % p/v, que se tolera bien por ojos sanos e infectados con herpesvirus (vease el ejemplo a1). Ademas, la formulacion debe ser estable, teniendo en cuenta el uso repetido con un intervalo de varias horas, preferentemente durante varios dias o semanas, sin la formacion de precipitacion en la composicion.

En consecuencia, en un primer aspecto, la presente invencion proporciona composiciones que comprenden:

- A-5021 al menos al 0,1 % p/v; y

- al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina.

La provision del ingrediente activo en concentraciones del 0,1 % p/v o mas en una solucion fisiologicamente tolerada permite la formulacion del mismo en formas diferentes tales como soluciones acuosas (que se pueden aplicar como pulverizaciones o gotas), geles acuosos, etc.

En modos de realizacion particulares, la composicion es una solucion oftalmica.

En modos de realizacion particulares, la composicion comprende ademas uno o mas disolventes, por ejemplo, agua. En determinados modos de realizacion, la composicion es una solucion acuosa. El termino "acuoso" como se usa en el presente documento quiere decir que mas del 50 por ciento por volumen del disolvente es agua.

En modos de realizacion particulares, la composicion de acuerdo con la presente invencion consiste en un disolvente, A-5021 al menos al 0,1 % p/v y al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina. En determinados modos de realizacion, la composicion de acuerdo con la presente invencion consiste en A-5021 al menos al 0,1 % p/v y al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina.

La concentracion de A-5021 del 0,1 % p/v garantiza el efecto terapeutico suficiente mmimo de la composicion para el tratamiento de las infecciones por herpesvirus en animales de compama u otras especies animales mas grandes que los roedores. Sin embargo, en modos de realizacion particulares, una concentracion mayor de A-5021 puede dar lugar a un efecto terapeutico potenciado de la composicion. En consecuencia, en determinados modos de realizacion, la

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composition comprende A-5021 al menos al 0,10 %, 0,15 %, 0,2 %, 0,25 %, 0,3 %, 0,35 %, 0,4 %, 0,45 %, 0,5 %, 0,55 %, 0,6 %, 0,65 %, 0,7 %, 0,75 %, 0,8 %, 0,85, 0,9 %, 0,95 % o 1 % (los porcentajes son % p/v).

El uso de una ciclodextrina permite obtener formulaciones estables que comprenden una concentration de A-5021 de al menos 0,1 % p/v, por ejemplo 0,2 % p/v o 0,5 % p/v, que se tolera bien cuando se usa en aplicaciones que requieren soluciones fisiologicamente tolerables tales como aplicaciones a los ojos y/o heridas. Una concentracion de ciclodextrina mayor permite tipicamente obtener una concentracion mayor de A-5021. En modos de realization particulares, la composicion comprende ciclodextrina al menos al 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 99 % (los porcentajes son % p/v).

La ciclodextrina puede comprender una o mas de una beta-ciclodextrina, una gamma-ciclodextrina o una alfa-ciclodextrina. En determinados modos de realizacion, la ciclodextrina comprende una beta-ciclodextrina. En otros modos de realizacion, la ciclodextrina comprende una ciclodextrina modificada o sustituida. Por ejemplo, la ciclodextrina puede comprender uno o mas sustituyentes seleccionados a partir de hidroxipropilo (por ejemplo 2-hidroxipropilo), sulfobutilo y metilo. En determinados modos de realizacion, la ciclodextrina es una hidroxipropil (beta)ciclodextrina (por ejemplo Kleptose® HPB), mas en particular 2-hidroxipropil (beta)ciclodextrina. La hidroxipropil beta-ciclodextrina incrementa significativamente la solubilidad de A-5021 y se tolera bien cuando se aplica en los ojos. En modos de realizacion particulares, la ciclodextrina comprende una metil-ciclodextrina, por ejemplo una beta-ciclodextrina metilada al azar. En determinados modos de realizacion, la ciclodextrina es una sulfobutileter ciclodextrina, por ejemplo una sulfobutileter beta-ciclodextrina (por ejemplo Captisol®).

En modos de realizacion particulares, las composiciones de acuerdo con la presente invention comprenden uno o mas conservantes. De hecho, las formulaciones farmaceuticas multidosis comprenden tipicamente conservantes para permitir su uso durante multiples dosificaciones diarias y/o varios dias despues de la abertura del envase. Sin embargo, dichos conservantes no deben comprometer la tolerabilidad fisiologica de la composicion asegurando mientras la estabilidad de la composicion a lo largo de un periodo de tiempo prolongado.

Los autores de la invencion descubrieron que Tiomersal es el mas eficaz en pruebas de eficacia de conservantes mientras no induzca efectos adversos. En consecuencia, en modos de realizacion particulares, la composicion de acuerdo con la presente invencion comprende ademas Tiomersal (es decir (2-carboxilatofenil)sulfanil-etilmercurato de sodio; tambien conocido como timerosal), que se representa por el compuesto de formula (II):

imagen2

Los autores de la invencion han descubierto que una concentracion de Tiomersal del 0,005 % p/v o mas (por ejemplo 0,008 %, 0,01 % o 0,02 % p/v) es particularmente eficaz para conservation antimicrobiana (vease el ejemplo a1). En consecuencia, en modos de realizacion particulares, la composicion de acuerdo con la presente invencion comprende Tiomersal al menos al 0,005, 0,008, 0,01, 0,015 o 0,02 % p/v. En modos de realizacion particulares, la composicion comprende Tiomersal al menos al 0,01 % p/v y A-5021 al menos al 0.2 % p/v. La concentracion autorizada maxima de Tiomersal esta regulada en diversos paises. Por lo tanto, la concentracion de Tiomersal es preferentemente no superior al 0,02 % p/v, tal como al 0,01, 0,015, 0,018 o 0,02 % p/v.

Para permitir el uso de las composiciones de acuerdo con la presente invencion en aplicaciones que requieren una tolerabilidad fisiologica estricta, tales como en aplicaciones oftalmicas, el pH de la composicion debe estar dentro del intervalo de bienestar ocular. En consecuencia, el pH de las composiciones de la presente invencion varia preferentemente entre 5 y 8,5, en particular entre 6 y 8, mas en particular entre 6,4 y 7,8, lo mas en particular entre 6,6 y 7,4. En modos de realizacion particulares, las composiciones de acuerdo con la presente invencion tambien pueden comprender uno o mas agentes tamponadores, tales como un tampon fosfato como fosfato de sodio. En determinados modos de realizacion, las composiciones de acuerdo con la presente invencion pueden comprender ademas uno o mas agentes de ajuste de pH, tales como hidroxido de sodio, acido clorhidrico o combinaciones de los mismos.

Se ha descubierto por los autores de la presente invencion que el uso de la ciclodextrina no requiere el uso de agentes solubilizantes con un pH elevado.

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Ademas, la tolerabilidad fisiologica de las composiciones de la presente invencion implica una discrepancia mmima con la presion osmotica local. En modos de realizacion particulares, en los que las composiciones son para uso oftalmico, las composiciones tienen preferentemente una presion osmotica u osmolaridad (casi) isotonica con las lagrimas (es decir, aproximadamente 300 mOsm/l), preferentemente entre 200 y 400 mOsm/l. En determinados modos de realizacion, las composiciones de acuerdo con la presente invencion pueden comprender ademas uno o mas agentes de ajuste de la tonicidad, por ejemplo seleccionados del grupo que consiste en dextrosa, glicerina, manitol, cloruro de potasio, cloruro de sodio y tampones fosfato. Se pueden usar agentes de ajuste de la tonicidad para modificar la presion osmotica u osmolaridad de una composicion.

El experto entendera ademas que las composiciones de la presente invencion son preferentemente esteriles y desprovistas de partmulas exogenas.

Por tanto, como se indica anteriormente, las composiciones de la presente invencion pueden comprender, ademas del ingrediente activo A-5021 y ciclodextrina, uno o mas conservantes y/o agentes tamponadores. En modos de realizacion particulares, las composiciones de la presente invencion consisten esencialmente en el ingrediente activo y ciclodextrina y una solucion acuosa tal como un tampon. En modos de realizacion particulares, las composiciones no comprenden un agente solubilizante con un pH elevado.

Los autores de la invencion han descubierto que las composiciones de acuerdo con la presente invencion son particularmente utiles para el tratamiento y el diagnostico de infecciones herpeticas. En consecuencia, en otro aspecto, la presente invencion proporciona una composicion como se describe anteriormente en el presente documento para su uso en medicina, mas en particular para su uso como una composicion terapeutica y/o diagnostica.

En modos de realizacion particulares, la presente invencion proporciona una composicion como se describe anteriormente en el presente documento para su uso en un procedimiento para el tratamiento de una infeccion herpetica. En determinados modos de realizacion, la infeccion herpetica es una infeccion herpetica ocular. Se han observado infecciones por herpesvirus oculares en diversos animales incluyendo gatos (por ejemplo, los ejemplos b1, b2 y b3 a continuacion), perros (por ejemplo Ledbetter et al., Veterinary Microbiology 2009, 138, 98-105) y caballos (por ejemplo Kershaw et al., Virus Research 2001, 80, 93-99). En consecuencia, en modos de realizacion particulares, la infeccion es una infeccion en un animal, por ejemplo, seleccionado de un felino, un canino y un equino.

En modos de realizacion particulares, dichas composiciones se conciben para el tratamiento de una infeccion en un animal de comparfta, mas en particular un felino e incluso mas en particular un gato. Por tanto, en modos de realizacion particulares, la infeccion es una infeccion por herpesvirus felino. Los autores de la presente invencion han descubierto que las composiciones de la presente invencion tratan de forma muy eficaz infecciones herpeticas en animales de comparMa tales como felinos, por ejemplo, gatos.

Ademas, los autores de la invencion han descubierto que el tratamiento de infecciones oculares herpeticas usando las composiciones de acuerdo con la presente invencion es particularmente exitoso cuando la composicion se aplica sobre el ojo (afectado) dos o tres veces al dfa. La frecuencia de aplicacion optima puede depender de factores tales como la gravedad de la infeccion y la concentracion de A-502l en la composicion. En modos de realizacion particulares, las composiciones que comprenden A-5021 aproximadamente al 0,5 % p/v se aplican dos veces al dfa. En determinados modos de realizacion, las composiciones con concentraciones menores, por ejemplo aproximadamente al 0,2 % p/v, se aplican tres veces al dfa. En modos de realizacion particulares, la composicion se aplica sobre el ojo (afectado) dos o tres veces al dfa, durante al menos una, dos, tres o cuatro semanas. En determinados modos de realizacion, el tratamiento se continua 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o mas dfas despues de la desaparicion de los smtomas clmicos.

Las composiciones de acuerdo con la invencion, para su uso en el tratamiento de infecciones oculares tfpicamente se aplican directamente al ojo, mas en particular sobre la cornea. Sin embargo, tambien se conciben otros medios de aplicacion, tales como inyeccion intraocular.

El herpesvirus felino es una de las enfermedades infecciosas mas comunes en gatos. En consecuencia, la presente invencion proporciona formulaciones terapeuticas para su uso en el tratamiento de infecciones oculares de gatos. En modos de realizacion particulares, el regimen de tratamiento es como se describe anteriormente. Por tanto, en modos de realizacion particulares, el regimen de tratamiento de una composicion que comprende A-5021 al 0,1 al 1 % p/v, es de dos o tres aplicaciones al dfa. Tfpicamente, las infecciones oculares se caracterizan por uno o mas smtomas tales como secrecion ocular, conjuntivitis, queratitis, ulceras dendnticas, ulceras geograficas, secuestro corneal, edema corneal, vascularizacion, ceguera, conjuntivitis eosinofila, queratitis eosinofila, queratitis estromal, uveftis y xeroftalmia. Los smtomas oculares estan precedidos normalmente por antecedentes de signos respiratorios. Ademas, los autores de la presente invencion han descubierto que las composiciones de la presente invencion son excepcionalmente bien toleradas por animales que padecen smtomas clmicos de infecciones oculares que incrementan la sensibilidad en el ojo, tales como la presencia de la secrecion ocular, conjuntivitis, queratitis, ulceras dendnticas, ulceras geograficas, secuestro corneal, edema corneal, vascularizacion, ceguera, conjuntivitis eosinofila, queratitis eosinofila, queratitis estromal, uveftis, xeroftalmia u otros smtomas clmicos. Por tanto, en modos de realizacion particulares, las composiciones de la presente invencion son para su uso en el tratamiento de infecciones oculares caracterizadas por uno o mas de los smtomas descritos anteriormente.

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En modos de realizacion particulares, las composiciones de la presente invencion se usan en el tratamiento de infecciones oculares que se ha diagnosticado que son infecciones por herpesvirus. Por ejemplo, las ulceras dendnticas y geograficas (queratitis ulcerosa felina) se consideran una manifestacion cKnica patognomonica de HVF-1. Por tanto, en modos de realizacion particulares, las composiciones se usan para el tratamiento de una infeccion ocular en un felino que padece una ulcera dendntica o geografica.

Adicionalmente, como se describe anteriormente, es posible determinar la presencia de una infeccion por herpes virologicamente. Por tanto, en modos de realizacion particulares, las composiciones se usan para el tratamiento de una infeccion ocular en un felino que se ha diagnosticado como infectado con un herpesvirus felino 1 (HVF-1).

De acuerdo con lo anterior, la presente invencion proporciona el uso de las composiciones como se describen en el presente documento anteriormente para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de una infeccion ocular, mas en particular una infeccion herpetica ocular, como se describe en el presente documento. De forma similar, la presente invencion proporciona procedimientos de tratamiento de una infeccion ocular, que comprenden la aplicacion de una composicion como se describe en el presente documento anteriormente en el ojo (infectado), mas en particular dos o tres veces al dfa, como se describe en el presente documento anteriormente.

Se ha observado que el tratamiento de infecciones por herpesvirus oculares con las composiciones de acuerdo con la presente invencion da lugar a mejora significativa de los smtomas clmicos en el plazo de una semana e incluso despues de uno o dos dfas. En vista de esta sorprendente eficacia, las composiciones de acuerdo con la presente invencion son adicionalmente adecuadas en procedimientos de diagnostico de infecciones oculares, mas en particular de infecciones oculares felinas. Mas en particular, los autores de la invencion han descubierto que las composiciones de acuerdo con la presente invencion se pueden usar como una herramienta de diagnostico para confirmar o excluir el herpesvirus felino-1 (HVF-1) como la causa de infecciones oculares en felinos.

De hecho, las infecciones por herpesvirus oculares tipicamente dan como resultado una variedad de diferentes y a menudo inespedficas manifestaciones clmicas entre las que estan secrecion ocular, conjuntivitis, queratitis, secuestro corneal, conjuntivitis eosinofila, queratitis eosinofila, queratitis estromal, uveitis y xeroftalmia. En el caso de enfermedad ocular felina, otros patogenos vmcos, bacterianos y fungicos pueden provocar una enfermedad clmica similar. Mas espedficamente, se ha descrito que el calicivirus felino, virus de la inmunodeficiencia felina, virus de la leucemia felina, Chlamydophila felis, Mycoplasma spp. (M. felis y M. gatae) e incluso enfermedades mediadas por el sistema inmunitario estan en el origen de una o mas de estas manifestaciones oculares clmicas.

En consecuencia, el diagnostico clmico de HVF-1 representa un reto y a menudo se necesita confirmacion de laboratorio. Sin embargo, la mayona de las tecnicas virologicas para para detectar el HVF-1 son relativamente insensibles y son menudo una fuente de resultados falsos negativos y falsos positivos. La reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) en la actualidad se considera el procedimiento mas sensible de detectar ADN de HVF-1 en tejidos oculares. Sin embargo, los resultados de la prueba de PCR parecen inconsistentes, lo que da lugar a que muchos oftalmologos veterinarios abandonen la realizacion de pruebas de PCR como un medio de diagnostico, basandose mejor en la anamnesis y en el cuadro clmico inicial.

Debido a que A-5021 es un farmaco anti-herpes altamente espedfico que es ineficaz frente a infecciones bacterianas y fungicas y en virus distintos de herpesvirus (tales como HVF-1) que pueden provocar smtomas similares (tales como calicivirus felino, virus de la leucemia felina y virus de la inmunodeficiencia felina), una respuesta rapida tras el tratamiento con una composicion de acuerdo con la presente invencion permite su uso como diagnostico, mas en particular como agente terapeutico de diagnostico. Por tanto, en el caso de infecciones oculares en felinos de etiologfa desconocida, la respuesta al tratamiento con una composicion de acuerdo con la presente invencion permite realizar un diagnostico de primera eleccion de la infeccion ocular, mas en particular hace posible diagnosticar las infecciones como herpeticas o no herpeticas.

En consecuencia, la presente invencion proporciona ademas composiciones como se describe anteriormente en el presente documento, para su uso en un procedimiento de diagnostico de una infeccion ocular, mas en particular en una infeccion ocular en un animal de comparna. Mas en particular, los procedimientos de diagnostico concebidos en este contexto comprenden las etapas de a) administrar la composicion de la invencion en una formulacion y la dosificacion como se describe anteriormente y b) determinar dentro de un periodo especificado si han mejorado o no los smtomas clfnicos, por lo que la mejora de los smtomas clmicos es una indicacion de la presencia de una infeccion por herpesvirus. En otros modos de realizacion particulares, los procedimientos de la presente invencion comprenden administrar una composicion de acuerdo con la invencion diariamente y determinar en el plazo de 1 a 7 dfas, tal como en el plazo de 1-2 dfas, en el plazo de 2-4 dfas o en el plazo de 5-7 dfas, si existe una mejora de los smtomas clmicos de la infeccion. En modos de realizacion particulares, en vista de la eficacia del tratamiento, los procedimientos comprenden determinar si hay una mejora en el plazo de 1-4 o incluso en 1-2 dfas.

En otro aspecto, la presente invencion proporciona procedimientos para preparar una formulacion soluble y estable de A-5021 de al menos 1 mg/ml. De hecho, como se detalla anteriormente, los autores de la presente invencion han identificado formas de obtener soluciones estables de concentracion incrementada de este ingrediente activo, que sean compatibles con la administracion directa en el ojo y/o en el tejido herido. Mas en particular, las composiciones de la presente invencion son estables porque no precipitan, lo que permite el uso repetido del mismo lote durante un

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periodo de varios dfas hasta varias semanas.

Mas en particular, los procedimientos de la presente invencion comprenden las etapas de:

a) proporcionar una solucion que comprende al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina, por ejemplo hidroxipropil beta-ciclodextrina;

b) anadir A-5021 a dicha solucion;

c) solubilizar el A-5021 anadido en la etapa b);

d) repetir las etapas b) y c) hasta que se obtiene una concentracion de A-5021 en dicha solucion de al menos 1 mg/ml;

e) opcionalmente, anadir al menos 0,08 mg/ml de tiomersal.

En modos de realizacion particulares, la solucion proporcionada en la etapa a) es una solucion acuosa. Se entendera que repetir las etapas (b) y (c) solo es necesario si la concentracion de 1 mg/ml todavfa no se ha conseguido despues de la primera realizacion de las etapas (b) y (c). En modos de realizacion particulares, el A-5021 se anade en multiples etapas, tal como en 2-5 etapas.

La etapa de solubilizar el A-5021 se garantiza tfpicamente por mezclado, tal como usando un vortice. En modos de realizacion particulares, la etapa c) comprende el calentamiento de la mezcla obtenida en la etapa b), preferentemente a una temperatura de entre 45 y 60 °C. Se entendera por la persona experta en la tecnica, sin embargo, que esta etapa se puede producir sin requerir ninguna accion particular, en especial cuando se anaden cantidades limitadas del ingrediente activo.

Como se indica anteriormente, se ha descubierto por los autores de la presente invencion que el uso de la ciclodextrina no requiere el uso de agentes solubilizantes con un pH elevado. Por tanto, en modos de realizacion particulares, los procedimientos de la invencion no comprenden la adicion de un disolvente que tiene un pH por encima de 7,9.

Los siguientes ejemplos no limitantes ilustran la presente invencion.

Ejemplos

Los ejemplos siguientes se proporcionan con el fin de ilustrar la presente invencion y de ningun modo se quiere decir que limiten y de ningun modo se debe interpretar que limiten el alcance de la presente invencion.

a) Solubilizacion de A-5021 a concentraciones farmacologicamente activas

Ejemplo a1 - Pruebas de solubilizacion

Para determinar la solubilidad de A-5021 (es decir, 2-amino-9-[[(1S,2R)-1,2-bis(hidroximetil)ciclopropil]metil] -1,9-dihidro-6H-purin-6-ona), se realizo una primera serie de 33 experimentos en suspension. Dentro de estos experimentos, se considero un conjunto de 33 sistemas diferentes (es decir, que vanan en tampones, codisolventes, agentes solubilizantes). Se usaron los seis tampones siguientes: tampon de HCl (pH 2), tampon fosfato (pH 6,8 y 7,4), tampon de tris(hidroximetil)aminoetano (pH 9), carbonato/bicarbonato de sodio (pH 10,8) y dihidrogenofosfato de potasio (pH 12). Como codisolventes, se usaron dimetilsulfoxido (DMSO), dimetilacetamida (DMA), N-metilpirrolidona (NMP), etanol (EtOH) y propilenglicol con concentraciones variables. Los agentes solubilizantes usados fueron propilenglicol, glicerina, solutol HS 15, polisorbato 80, beta-ciclodextrina, hidroxipropil beta-ciclodextrina (Kleptose® HPB), cremofor EL, cremofor RH 60, polietilenglicol (PEG) 300, PEG 400 y sulfobutileter beta-ciclodextrina (por ejemplo Captisol®). La solubilidad se determino por filtracion de las suspensiones despues de 24 horas del tiempo de equilibrio. La concentracion de A-5021 en los filtrados se analizo por cromatograffa lfquida de alto rendimiento (HPLC), a partir de la que se calculo la solubilidad correspondiente.

Se descubrio que la adicion de un codisolvente organico a las soluciones tamponadas a pH 12 no mejora la solubilidad. Sin embargo, la adicion de agentes solubilizantes tales como hidroxipropil-(3-ciclodextrina), Captisol® y propilenglicol (usado a una concentracion de hasta el 80 % v/v) a sistemas de tampon con un pH por encima de 11, mejoro la solubilidad. La solubilidad mas alta de A-5021 (8,64 mg/ml) se obtuvo en propilenglicol al 80 % (v/v) en tampon al 20 % (v/v) (pH 11,3).

En base a estos resultados, un numero total de 10 determinaciones de solubilidad adicionales se llevaron a cabo teniendo en cuenta diferentes valores de pH para seguir la influencia del pH sobre el perfil de solubilidad de A-5021. Se tomaron en consideracion dos sistemas de tampon diferentes, codisolventes y agentes solubilizantes con atencion sobre los sistemas que dieron los mejores resultados segun se informo anteriormente. La solubilidad se determino de nuevo por filtracion de las suspensiones despues de 24 h del tiempo de equilibrio. La concentracion de A-5021 en los filtrados se analizo por HPLC, a partir de lo que se calculo la solubilidad correspondiente. En general, no se encontraron valores de solubilidad mayores que los ya informados. Usando un pH acido (es decir, pH 2,8) frente al pH de 11,3 aplicado previamente la solubilidad a temperatura ambiente de A-5021 disminuye ligeramente de 8,64 mg/ml a

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

8,5 mg/ml. Un sistema tamponado de pH proximo al neutro (propilenglicol al 80 % v/v y tampon fosfato al 20 % v/v a pH 7,4), que es de interes para desarrollar soluciones oftalmicas (que permitan la aplicacion topica de A-5021 en ojos infectados por herpesvirus) permite solubilizar A-5021 a 8,18 mg/ml. Cuando se usa hidroxipropil beta-ciclodextrina (HPBC) como un agente solubilizante en lugar de propilenglicol, la solubilidad de A-5021 disminuye en comparacion con los sistemas tamponados con propilenglicol. Usando un tampon de HCl al 60 % v/v y HPBc al 40 % p/v, la solubilidad de A-5021 es de 6,76 mg/ml y 4,91 mg/ml a pH 2,2 y pH 7, respectivamente. La disminucion adicional en solubilidad de A-5021 Captisol® se observa cuando se usa como agente solubilizante Captisol® (Captisol® al 30 % p/v y tampon al 70 % v/v). Al incrementar adicionalmente la cantidad de propilenglicol hasta el 5,7-33,34 % v/v en un sistema que ya contiene HPBC al 33,33-40 % p/v/v y tampon al 3,34-54,3 % v/v, se observo una disminucion en la solubilidad de A-5021 (a pH 7,0-7,4 se observa una solubilidad de 3,28-4,05 mg/ml de A-5021).

En base a los resultados indicados anteriormente y para poder formular A-5021 a concentraciones farmacologicamente activas (preferentemente de aproximadamente 0,5 mg/ml), se considero investigar agentes solubilizantes adicionales y/o mantener una cantidad alta de propilenglicol a pH neutro. En total, se sometieron a prueba 28 candidatos a vehfculos para solubilizar A-5021 a 5 mg/ml a pH neutro: propilenglicol a una concentracion que vana del 20 % al 80 % p/v, glicofurol a una concentracion que vana del 5 % al 50 % p/v, glicerol a una concentracion que vana del 15 % al 50 % p/v, glicerol al 15 % p/v + glicofurol al 15 % p/v, propilenglicol al 25 % p/v + glicofurol al 25 % p/v, propilenglicol (intervalo: 15 % - 60 % p/v) + glicerol (intervalo: 5 % -15 % p/v), Kleptose® HpB al 25 % p/v + propilenglicol al 25 %, cremofor RH 40, cremofor EL, solutol HS 15, Kleptose® HPB al 40-50 %, migliol 812N, parafina lfquida, polivinilpirrolidona K12.

Solo cuatro vehfculos permitieron solubilizar A-5021 a la concentracion de 5 mg/ml (0,5 % p/v) a pH cerca del neutro (el pH vario de 6,98-7,11). Estos vehfculos son (% p/v en agua):

(i) propilenglicol al 80 % p/v;

(ii) Kleptose® HPB al 50 % p/v;

(iii) propilenglicol al 60 % p/v + glicerol al 15 % p/v;

(iv) propilenglicol al 60 % p/v + glicerol al 10 % p/v.

La presion osmotica de las formulaciones/soluciones que conteman propilenglicol mostro hipertonicidad (osmolalidad alta, no fisiologica). Se observaron valores entre 6925 mOsm y 11725 mOsm, lo que indica la necesidad de someter a prueba la tolerancia local.

Cuando se sometio a prueba en ojos de conejos, ratones y gatos sanos, la tolerancia local de las soluciones que comprenden polietilenglicol era buena. Sin embargo, cuando las formulaciones oftalmicas que comprenden propilenglicol se instilaron en ojos de ratones y gatos infectados con herpesvirus, se observo intolerancia grave. Las manifestaciones clmicas observadas de intolerancia local inmediatamente despues de la administracion incluyeron lo siguiente: cerrado de ojos (gatos y ratones), vocalizacion (gatos y ratones), babeo (gatos), zarpadas (gatos), rascado de ojos (gatos) y sacudida de cabeza (gatos y ratones). La gravedad de las observaciones variaba de leve a grave. Las observaciones fueron similares para animales tratados con vehfculos (i), (iii) o (iv) (las soluciones basadas en propilenglicol retenidas con o sin glicerol que no contienen A-5021 y las soluciones basadas en propilenglicol retenidas con o sin glicerol que contienen A-5021) que indican que la intolerancia no estaba ligada directamente con la presencia de A-5021. Por tanto, Kleptose® HPB (hidroxipropil beta-ciclodextrina) es el unico agente solubilizante adecuado para la preparacion de soluciones oftalmicas con A-5021 que comprenden A-5021 entre el 0,1 % y el 1 % p/v, por ejemplo del 0,2 % al 0,5 % p/v. El pH de la solucion de Kleptose® HPB que contiene del 0,2 % al 0,5 % p/v vana de 6,0-8,0 con una presion osmotica de aproximadamente 350 mOsm.

Como solucion multi-uso para la aplicacion oftalmica en ojos enfermos de herpes, se ha de someter a prueba la formulacion en Kleptose® HPB para determinar la eficacia de la conservacion antimicrobiana. Para este fin, una serie de nueve formulaciones basadas en Kleptose® HPB se sometieron a prueba con conservantes antimicrobianos diferentes:

- sin conservante;

- cloruro de benzalconio (BAK) al 0,01 %;

- BAK al 0,02 %;

- BAK al 0,01 % + acido etilendiaminatetraacetico (EDTA) al 0,01 %;

- tiomersal al 0,008 %

- tiomersal al 0,01 %;

- tiomersal al 0,02 %;

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

- alcohol bendlico al 1,5 %;

- para-hidroxibenzoato de metilo al 0,15 % (PHBM) + parahidroxibenzoato de propilo al 0,05 % (PHBP).

Se llevaron a cabo pruebas de eficacia de conservante (criterios de eficacia basada en los de la Farmacopea europea). Las formulaciones se expusieron a S. aureus, P. aeruginosa, C. albicans, A. brasiliensis (es decir, levaduras, moho y bacterias) y se sometieron a prueba en puntos temporales diferentes despues de la exposicion (6 horas, 24 horas, 7 dfas, 14 d^as y 28 dfas). La formulacion basada en Kleptose® HPB de A-5021 sin conservante no cumplfa con los criterios A o B de la Farmacopea europea justificando la inclusion de un conservante antimicrobiano. Las formulaciones basadas en Kleptose® HPB de A-5021 con BAK al 0,01 % - 0,02 % o alcohol bendlico al 1,5 % o PHBM al 0,15 % + PHBP al 0,05 % no cumplfan con los criterios A o B. La formulacion basada en Kleptose® HPB y A-5021 con BAK al 0,01 % + EDTA al 0,01 % no cumplfa con los criterios A o B. Por tanto, de las nueve formulaciones sometidas a prueba, se descubrio que solo las tres formulaciones que comprenden tiomersal (al 0,008 % p/v, 0,01 % p/v y 0,02 % p/v) eran suficientemente eficaces para las soluciones basadas en Kleptose® HPB de A-5021 (al 0,2 % y al 0,5 % p/v). La concentracion alta de Kleptose® HPB (es decir, hidroxilpropil-beta-ciclodextrina) puede ser responsable de la inhibicion de los otros conservantes.

En conclusion, las siguientes formulaciones de A-5021 se mantienen puesto que estas formulaciones son compatibles con la instilacion ocular topica como producto oftalmico para el tratamiento de la enfermedad ocular relacionada con el herpes en animales de compama: 0,2 -0,5 % p/v de A-5021 en Kleptose® HPB al 20 % - 50 % p/v usando tiomersal del 0,008 % al 0,02 % p/v como conservante antimicrobiano (llenado del volumen con agua).

Ejemplo a2 - formulacion de A-5021 al 0,5 % p/v (formulacion A)

Se solubilizo un total de 5 mg/ml de A-5021 en una solucion de Kleptose® HPB al 50 % p/v en agua, despues de agitacion y calentamiento a una temperatura de entre 45 y 60 °C. Despues de esto, no se observo cristalizacion varios dfas despues del almacenamiento a temperatura ambiente y almacenamiento entre 2 °C y 8 °C. La formulacion tiene una presion osmotica de 350 mOsm y un pH de 7,03.

Se afadio tiomersal a una concentracion del 0,01 % p/v como un conservante. Se realizo una prueba de eficacia de conservante de acuerdo con el procedimiento general de la Farmacopea europea. La toma de muestras se realizo 6 horas, 7 dfas, 14 dfas y 28 dfas despues de la exposicion. Se observo una reduccion de 3,2 log-10 en el contenido de S. aureus y una reduccion de 1,5 log-10 en el contenido de P. aeruginosa 6 horas despues de la exposicion. Despues de esto, no se recupero nada de S. aureus ni de P. aeruginosa. No se recupero nada de C. albicans o de A. brasiliensis en ninguno de los puntos de muestreo (7 dfas, 14 dfas y 28 dfas despues de la exposicion).

Se evaluo la estabilidad de la composicion que comprende A-5021 al 0,5 % p/v y tiomersal al 0,01 % p/v en Kleptose® HPB al 50 % p/v por medio de una prueba de estabilidad acelerada, en la que se almaceno la composicion 3 meses a 40 °C con humedad relativa del 75 %. No se noto ninguna disminucion con respecto al contenido de A-5021 teorico. No se observo ninguna aparicion de productos de degradacion por encima del valor umbral fijado al 0,3 %. El contenido en tiomersal se considero como aceptable con respecto a variaciones analfticas y del procedimiento de fabricacion.

Ejemplo a3 - formulacion de A-5021 al 0.2 % p/v (formulacion B)

Se solubilizo un total de 2 mg/ml de A-5021 en Kleptose® HPB al 20 % p/v (llenado del volumen con agua) despues de agitacion y calentamiento a una temperatura entre 45 y 55 °C. Se afadio tiomersal a una concentracion de 0.01 % p/v. La formulacion tuvo un pH de 6,4. Se realizo una prueba de eficacia de conservante de acuerdo con el procedimiento general de la Farmacopea europea. Se observo una reduccion de 2,1 log-10 en el contenido de S. aureus 6 horas despues de la exposicion. No se recupero nada de S. aureus despues de esto (la ultima muestra se realizo 7 dfas despues de la exposicion). Se observo una reduccion de 1,7 log-10 en el contenido de P. aeruginosa 6 horas despues de la exposicion. No se recupero nada de P. aeruginosa despues de esto (la ultima muestra se realizo 7 dfas despues de la exposicion). No se recupero nada de C. albicans o de A. brasiliensis 7 dfas, 14 dfas y 28 dfas despues de la exposicion. La prueba de eficacia de conservante se detuvo a los siete dfas despues de la exposicion, dado que ya se demostro la eficacia terapeutica de la composicion a los 7 dfas.

Se evaluo la estabilidad de la solucion de A-5021 al 0,2 % p/v en Kleptose® HPB al 20 % p/v y Tiomersal al 0,01 % p/v por medio de una prueba de estabilidad acelerada, en la que se almaceno la composicion durante 1 mes a 40 °C con humedad relativa del 75 %. No se noto ninguna disminucion con respecto al contenido de A-5021 teorico. No se observo ninguna aparicion de productos de degradacion por encima del valor umbral fijado al 0,3 %.

b) Tratamiento de infecciones herpeticas

Las soluciones oftalmicas de formulacion A y B como se describe anteriormente se usaron para el tratamiento de varios gatos con signos clmicos inducidos por una infeccion por HVF-1 aguda.

Ejemplo b1 - tratamiento tres veces al dia con formulacion de A-5021 al 0,5 % p/v

Un gato macho Chartreux de 15 afos de edad con antecedentes de enfermedad ocular de HVF-1 (recidiva) se llevo al

oftalmologo veterinario tras una nueva fase de infeccion herpetica aguda. El ojo derecho estaba afectado y se observaron diferentes ulceras dendrfticas (usando tincion con fluorescema y visualizacion con azul cobalto). El gato se trato tres veces al dfa con la composicion de la formulacion A como se describe anteriormente. Despues de 10 d^as de tratamiento, el gato con el ojo afectado se llevo de nuevo al oftalmologo veterinario. El ojo derecho estaba 5 completamente abierto. Aunque la prueba de fluorescema mostro dos ramificaciones epiteliales restantes pequenas, las ulceras estaban casi completamente curadas. Ademas, el tratamiento estaba se soporto extremadamente bien, ya que el tratamiento no provoco dolor, malestar o irritacion. El tratamiento se continuo durante 10 dfas, despues de esto, el gato se curo completamente.

Ejemplo b2 - tratamiento tres veces al dia con formulacion de A-5021 al 0,2 % p/v

10 Una camada de dos gatitos europeos de pelo corto de 5 semanas de edad (una gatita hembra y un gatito macho) estaba afectada por HVF-1. El HVF-1 es una enfermedad tfpica en gatitos neonatales que da lugar a enfermedad respiratoria, fiebre, estornudos o tos, secrecion nasal y a menudo simblefaron (es decir, adhesion parcial o completa de la conjuntiva palpebral del parpado a la conjuntiva bulbar del globo ocular). Cuando eran neonatos, toda la camada de gatitos estaba afectada en cierta medida.

15 Los dos gatitos se llevaron al oftalmologo veterinario y se confirmo por PCR (reaccion en cadena de la polimerasa) que eran positivos para HVF-1 en muestras de hisopados nasales. El ojo izquierdo del gatito macho mostraba signos de conjuntivitis espectacular inducida por HVF-1. Tambien se sospecho de ulcera dendrftica, pero fue diffcil de confirmar debido a la hinchazon de la conjuntiva.

La gatita hembra estaba aun mas gravemente afectada y tuvo edema corneal en el ojo izquierdo y un simblefaron 20 grave en el ojo derecho, cubriendo la membrana nictitante todo el ojo derecho. Ambos gatitos se trataron tres veces al dfa con la solucion oftalmica de formulacion B como se describio anteriormente. Despues de siete dfas de instilaciones oculares, el gatito macho se curo completamente y la gatita hembra dejo de presentar infeccion como se demostro por los resultados de PCR negativos para HVF-1 (muestras de hisopados conjuntivales).

Ejemplo b3 - tratamiento dos veces al dia con formulacion de A-5021 al 0,2 % p/v

25 Un gatito europeo de pelo corto macho de 6 semanas de edad se llevo al oftalmologo veterinario con smtomas respiratorios. El ojo izquierdo se mantema cerrado y estaba presente edema corneal, asf como pequenos vasos sangumeos que formabas un pequeno granuloma corneal. Al gatito se le diagnostico infeccion por herpesvirus. El gatito se trato dos veces al dfa con la formulacion oftalmica B como se describe anteriormente y su afeccion mejoro en los 7 dfas de tratamiento: el ojo izquierdo estaba mas abierto, el granuloma corneal disminuyo y los vasos sangumeos 30 se retrajeron. Quedo algun edema residual. El tratamiento se continuo a la misma frecuencia de tratamiento dos veces al dfa, hasta que el gatito se curo completamente.

c) Diagnostico y tratamiento de infecciones herpeticas.

Ejemplo cl

Un gato europeo de pelo corto macho de 1 ano de edad se llevo al oftalmologo veterinario con los siguientes signos 35 clmicos: estornudos y conjuntivitis grave del ojo derecho. Al gato se le diagnostico queratitis intersticial. No se observo ninguna ulcera corneal o dendrftica, por lo tanto no se pudo realizar un diagnostico clmico de HVF-1 definitivo. No obstante, se supuso que HVF-1 estaba en el origen y se tomaron muestras de hisopados conjuntivales para el analisis por PCR de hVF-1. El gato dio negativo en las pruebas por PCR de HVF-1. Por lo tanto, no se pudo realizar un diagnostico virologico de HVF-1. Se inicio el tratamiento con la formulacion oftalmica A como se describe 40 anteriormente; no se administro conjuntamente ningun otro tratamiento ni corticoesteroides. Se observo una mejora marcada en la primera semana de tratamiento. Despues de dos semanas de tratamiento, la cornea era claramente visible asf como la camara anterior del ojo. La reaccion inflamatoria observada en la consulta original estaba en regresion. Por tanto, un diagnostico de enfermedad por HVF-1 se podna basar en el tratamiento exitoso con solucion oftalmica de A-5021 con una mejora marcada en la primera semana de tratamiento. Esto se confirmo por el tratamiento 45 exitoso continuado y la mejora clmica observada 16 dfas despues del inicio del tratamiento. 103 dfas despues del tratamiento, el gato se examino de nuevo y se descubrio que la cornea estaba calmada y que no mostraba ninguna secuela.

Ejemplo c2

Un gato europeo de pelo corto hembra de 4 anos de edad se llevo al oftalmologo veterinario con los siguientes signos 50 clmicos: cierre de ojo derecho con presencia de multiples vasos corneales intersticiales. Al gato se le diagnostico queratitis intersticial con una reaccion principalmente vascular. Sin embargo, no se observaron ulceras corneales o dendrfticas en este gato adulto, por lo tanto no se pudo realizar un diagnostico clmico de HVF-1 definitivo. Se tomaron muestras de hisopados conjuntivales para el analisis con PCR de VHF-1. El gato dio negativo en pruebas por PCR de HVF-1. Por lo tanto, no se pudo realizar un diagnostico virologico de HVF-1. Se inicio el tratamiento preliminar con la 55 formulacion oftalmica A como se describe anteriormente; no se administro conjuntamente ningun otro tratamiento ni corticoesteroides. Se observo una mejora marcada en la primera semana de tratamiento. Despues de tres semanas de tratamiento, el gato estaba significativamente mejor, el ojo estaba mucho mas claro y los vasos corneales remitieron en

gran medida. Por tanto, un diagnostico de enfermedad HVF-1 se baso en el tratamiento exitoso con solucion oftalmica de A-5021 con una mejora marcada en la primera semana de tratamiento. El diagnostico se confirmo por el tratamiento exitoso continuado y la mejora clmica observada 21 dfas despues del inicio del tratamiento.

Ejemplo c3

5 Se tomaron muestras de un total de 20 gatos de campo de diferentes razas y edades, con una variedad de manifestaciones oculares para las que se asumio que hVF-1 era la causa subyacente (como por la opinion de un Diplomado del Colegio Europeo de Oftalmologfa Veterinaria), (se tomaron muestras de hisopados oculares para el analisis por PCR de HVF-1) y se trataron con diferentes formulaciones de A-5021 (a la concentracion del 0,2% y 0,5 %). El tratamiento se administro por via topica como instilaciones de colirio en los ojos afectados a una frecuencia 10 de 2 o 3 veces al dfa. Se obtuvieron resultados de PCR positivos para HVF-1 en el 60 % de estos casos (12 de 20 gatos), se obtuvieron resultados negativos para HVF-1 en el 25 % de los casos y para el 15 % de los casos no estaban disponibles resultados de PCR (debido a, por ejemplo, fallo en la extraccion de ADn). De los casos negativos por PCR de HVF-1, todos los gatos respondieron rapidamente al tratamiento con mejora clmica significativa ya observada en la primera semana de tratamiento (falsos negativos basados en PCR). Por el contrario, un gato que se descubrio que era 15 positivo por PCR para ADN de HVF-1 no respondio al tratamiento (falso positivo basado en PCR y en diagnostico clmico).

Por tanto, el farmaco anti-herpes espedfico A-5021 se formulo como producto oftalmico y es un agente terapeutico de diagnostico rapido para ojos enfermos de herpes.

Claims (19)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   REIVINDICACIONES

   1. Una composicion que comprende:

   - al menos 2-amino-9-[[(1S,2R)-1,2-bis(hidroximetil)cidopropil]metil]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona al 0,1 % p/v; y

   - al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina,
2. 2. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende al menos el 30 % p/v de una ciclodextrina.
3. 3. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende al menos el 50 % p/v de una ciclodextrina.
4. 4. La composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que es una solucion acuosa.
5. 5. La composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que dicha composicion es una

   solucion oftalmica.
6. 6. La composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que dicha ciclodextrina es hidroxipropil beta-ciclodextrina.
7. 7. La composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende ademas tiomersal al menos al 0,008 %.
8. 8. Una composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su uso como una composicion diagnostica o terapeutica.
9. 9. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 8, para su uso en un procedimiento para el tratamiento de una infeccion herpetica ocular.
10. 10. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 9, en la que dicha infeccion ocular es una infeccion ocular de un animal de comparMa.
11. 11. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 10, en la que dicho animal de comparMa es un felino.
12. 12. La composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en la que dicho procedimiento

    comprende aplicar dicha composicion sobre el ojo dos o tres veces al dfa durante al menos siete dfas.
13. 13. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 8, para su uso en un procedimiento de diagnostico de una infeccion herpetica ocular.
14. 14. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 12 o 13, en la que dicha infeccion ocular es una infeccion ocular en un animal de comparMa.
15. 15. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 14, en la que dicho animal de comparMa es un felino.
16. 16. Un procedimiento para preparar una solucion oftalmica, que comprende las etapas de:

    a) proporcionar una solucion que comprende al menos el 20 % p/v de una ciclodextrina;

    b) anadir 2-amino-9-[[(1S,2R)-1,2-bis(hidroximetil)ciclopropil]metil]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona a dicha solucion;

    c) solubilizar la 2-amino-9-[[(1S,2R)-1,2-bis(hidroximetil)ciclopropil]metil]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona anadida en la etapa b);

    d) repetir las etapas b) y c) hasta que se obtiene una concentracion de 2-amino-9-[[(1S,2R)-1,2 -bis(hidroximetil)ciclopropil]metil]-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona en dicha solucion de al menos 1 mg/ml;

    e) opcionalmente, anadir al menos 0,008 mg/ml de tiomersal.
17. 17. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 16, en el que la etapa a) comprende proporcionar una solucion que comprende al menos el 30 % p/v de una ciclodextrina.
18. 18. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 16, en el que la etapa a) comprende proporcionar una solucion que comprende al menos el 50 % p/v de una ciclodextrina.
19. 19. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, en el que dicha ciclodextrina es hidroxipropil beta-ciclodextrina.