ES2580002T3 - Formulación de anticuerpo contra CD40 y procedimientos - Google Patents

Abstract

Una formulación farmacéutica líquida adecuada para administración parenteral, que comprende un anticuerpo agonista de CD40 y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que la formulación está a pH 5,5, en la que el anticuerpo consiste en el anticuerpo 21.4.1, y en la que el vehículo farmacéuticamente aceptable comprende acetato de sodio, cloruro de sodio y polisorbato 80.

Description

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(SEQ ID NO: 4) de los anticuerpos 3.1.1 y 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1LL4M-L83V son iguales. El anticuerpo 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V también se denomina "3.1.1H3L2" para reflejar que el anticuerpo comprende tres sustituciones de aminoácidos en la cadena pesada y dos sustituciones de aminoácidos en la cadena ligera con respecto al anticuerpo 3.1.1.

5 Por lo tanto, los anticuerpos divulgados se pueden modificar por sustitución, adición o deleción de uno a diez, uno a cinco, o uno a tres residuos de aminoácidos, por ejemplo, en una CDR o región estructural. Los anticuerpos ejemplares y procedimientos de producción de los mismos se describen en detalle en la solicitud provisional de EE. UU. n.º 60/348.980, presentada el 9 de noviembre de 2001, y la solicitud internacional PCT n.º PCT/US02/36107 (WO 03/040170), presentada el 8 de noviembre de 2002. Los hibridomas 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1 y 21.4.1 se

10 depositaron de acuerdo con el Tratado de Budapest, en la American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20.110-2209, el 6 de agosto de 2001. Los hibridomas 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.29.1 y 24.2.1 se depositaron en la ATCC el 16 de julio de 2002. A los hibridomas se les han asignado los siguientes números de depósito:

Hibridoma N.º de depósito

3.1.1 (LN 15848) PTA-3600

7.1.2 (LN 15849) PTA-3601

10.8.3 (LN 15850) PTA-3602

15.1.1 (LN 15851) PTA-3603

21.4.1 (LN 15853) PTA-3605

21.2.1

(LN 15874) PTA-4549

22.1.1

(LN 15875) PTA-4550

23.5.1

(LN 15855) PTA-4548

23.25.1 (LN 15876) PTA-4551

23.28.1 (LN 15877) PTA-4552

23.29.1

(LN 15878) PTA-4553

24.2.1

(LN 15879) PTA-4554

15 Las secuencias de estos anticuerpos son conocidas, y se describen en el documento WO 03/040170. Por conveniencia, se muestran a continuación las secuencias de aminoácidos de las cadenas pesadas y ligeras de dos de estos anticuerpos:

Anticuerpo 3.1.1:

3.1.1: Secuencia de proteína de cadena pesada

Variable (SEQ ID NO: 1): Constante (SEQ ID NO: 2):

3.1.1: Secuencia de proteína de cadena ligera

Variable (SEQ ID NO: 3): Constante (SEQ ID NO: 4):

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3.1.1H-A78T-V88A-V97A: Secuencia de proteína de cadena pesada

Variable (SEQ ID NO: 9): Constante (SEQ ID NO: 2):

3.1.1 L-L4M-L83V: Secuencia de proteína de cadena ligera

Variable (SEQ ID NO: 10): Constante (SEQ ID NO: 4):

Anticuerpo 21.4.1:

21.4.1: Secuencia de proteína de cadena pesada

Variable (SEQ ID NO: 5): Constante (SEQ ID NO: 6):

21.4.1: Secuencia de proteína de cadena ligera

Variable (SEQ ID NO: 7): Constante (SEQ ID NO: 8):

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Cuando se administra en combinación con un inhibidor de la replicación del ADN, por ejemplo, cisplatino, el anticuerpo se puede administrar antes, durante o después de la administración del inhibidor.

En un aspecto, la invención se refiere a una solución acuosa para inyección intravenosa, con el pH de aproximadamente 5,0 a 6,0, preferentemente pH de aproximadamente 5,5. Dicha solución se puede formular con acetato de sodio (trihidrato), ácido acético (glacial), polisorbato 80, cloruro de sodio y agua. Es preferente que la solución de anticuerpo se almacene a temperaturas de refrigeración de entre 2 ºC y 8 ºC, y no se congele.

También se divulgan procedimientos de tratamiento de un tumor en un paciente en necesidad de dicho tratamiento, que comprenden administrar a dicho paciente una combinación de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo agonista de CD40 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la replicación del ADN, por ejemplo, un derivado de platino. De acuerdo con la presente divulgación, un anticuerpo agonista de CD40 funciona en combinación sinérgica con el compuesto de derivado de platino, especialmente cisplatino, de modo que el efecto antitumoral de la combinación es mayor que el que podría predecirse a partir de la administración de cada compuesto solo.

Los derivados de platino son un grupo bien conocido de compuestos que muestran su actividad antitumoral interfiriendo con la replicación del ADN. De acuerdo con la presente divulgación, los derivados de platino se seleccionan del grupo que consiste en cisplatino (cis-diaminodicloroplatino, véase el índice de Merck), carboplatino y oxaliplatino.

La invención se describirá con referencia a los siguientes ejemplos.

Ejemplos

Ejemplo 1: Efectos del anticuerpo sobre células del ganglio linfático de pacientes con cáncer

Se examinaron los efectos de un anticuerpo humano anti-CD40 (21.4.1) sobre células del ganglio linfático obtenidas de pacientes con cáncer estimulados con células tumorales autólogas.

Se recogieron células y tumores de ganglios linfáticos de pacientes con carcinoma de células renales, cáncer de pulmón no microcítico, carcinoma de células de transición de vejiga, cáncer de colon, cáncer de próstata y cáncer de cabeza y cuello. Las células de ganglios linfáticos se colocaron en cultivo junto con tumores tratados con colagenasa irradiados (recuperados del mismo paciente) en presencia o ausencia de 21.4.1 (1 g/ml; 6,7 nM). Se evaluó la proliferación usando 3H-timidina 96 horas después. Se evaluó el número de células productoras de INFγ por ELISPOT, después de la reestimulación.

El anticuerpo potenció el número de linfocitos T positivos para IFNγ+ en cultivos de células de ganglios linfáticos estimuladas con antígeno tumoral. Además, la proliferación de estas células de ganglios linfáticos en respuesta al antígeno tumoral se potenció 3-4 veces.

El anticuerpo potenció la capacidad de proliferación y de producción de citocinas de las células de ganglios linfáticos obtenidas de pacientes con cáncer cuando se estimularon con el antígeno tumoral.

Ejemplo 2: Unión del anticuerpo al receptor Fc

Se examinó la unión de un anticuerpo anti-CD40 (21.4.1) a los receptores Fc en leucocitos humanos y de macaco de Java.

Estudios de citometría de flujo indicaron que se expresaban los tipos de FcR FcγRII (CD32) y FcγRIII (CD16) así como niveles muy bajos de FcγRI (CD64), en leucocitos humanos. Se determinó la unión de 21.4.1 a los receptores Fc (FcR) en leucocitos de sangre periférica humana o de macaco de Java usando 125 I-21.4.1 y un mAb de control de IgG1 humana. Se aislaron leucocitos humanos procedentes de donantes normales o leucocitos de macaco de Java a partir de sangre completa usando gel de plasma y se lavaron a fondo para permitir la disociación de las inmunoglobulinas séricas unidas al receptor. Se usó centrifugación a través de un colchón de sacarosa para separar anticuerpos de unidos a células y libres. Los estudios se realizaron a 4 ºC en presencia de azida de sodio para evitar la internalización del receptor.

Se sometió a prueba 21.4.1 para determinar la unión específica a FcR usando el anticuerpo compatible con el isotipo de IgG2 humana no marcado en exceso como competidor. La unión específica de 125 I-21.4.1 a FcR en leucocitos humanos (n = 5 donantes) fue de -1,08,5 %, y la unión específica a FcR en leucocitos de macaco de Java (n = 4) fue de un 1513 %. La adición de un exceso de 500 veces de 21.4.1 no marcado, que bloquearía cualquier unión específica de 125I-21.4.1 a receptores CD40 de leucocitos, así como FcR, demostró una unión específica de un 49 % y un 67 % de 125I-21.4.1 a receptores CD40 de leucocitos humanos y de macaco de Java, respectivamente (el % de unión específica a CD40 se calculó restando el % de unión a FcR del % total de unión específica). Como control, 125 I-IgG1 demostró consistentemente unión específica a leucocitos humanos y de macaco de Java. La unión específica del anticuerpo de control IgG1 a FcR en leucocitos humanos y de macaco de Java representó un 56 % y un 51 % de la radioactividad unida total, respectivamente.

Estos estudios indican que el anticuerpo muestra unión específica mínima a receptores Fc en leucocitos humanos y

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Claims (1)

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