ES2582473T3 - Derivados de 5-(3-aminofenil)-5-alquil-5,6-dihidro-2H-[1,4]oxazin-3-amina para el tratamiento de trastornos en que está implicada la beta-secretasa - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula (I)**Fórmula** o un tautómero o una forma estereoisomérica del mismo, en el que R1 es fluoro, fluorometilo, difluorometilo o trifluorometilo; R2 es hidrógeno o trifluorometilo; o R1 y R2 forman un radical divalente >=CF2; R3 es hidrógeno, alquilo C1-3, ciclopropilo, mono- o polihaloalquilo C1-3; R4 es hidrógeno o fluoro; Ar es homoarilo o heteroarilo; en el que homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquil C1-3-oxi, mono- y polihaloalquilo C1-3, mono- y polihaloalquil C1-3-oxi; heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, pirazilo, piridazilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquinilo C2-3, alquil C1-3-oxi, mono- y polihaloalquilo C1-3, mono- y polihaloalquil C1-3-oxi, y alquil C1-3- oxialquil C1-3-oxi; o una sal de adición del mismo.

Description

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DESCRIPCION

Derivados de 5-(3-aminofenil)-5-alquil-5,6-dihidro-2H-[1,4]oxazin-3-amina para el tratamiento de trastornos en que esta implicada la beta-secretasa

Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a derivados novedosos de 5-(3-aminofenil)-5-alquil-5,6-dihidro-2H-[1,4]oxazin-3- amina como inhibidores de beta-secretasa, tambien conocida como enzima de escision de amiloide en sitio beta, BACE, BACE1, Asp2, o memapsina 2. La invencion tambien se refiere a composiciones farmaceuticas que comprenden dichos compuestos, a procesos para preparar dichos compuestos y composiciones, y a dichos compuestos y composiciones para su uso en la prevencion y tratamiento de trastornos en que esta implicada la beta-secretasa, tales como enfermedad de Alzheimer (AD), alteracion cognitiva leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatfa amiloide cerebral, demencia multi-infarto, smdrome de Down, demencia asociada con apoplejfa, demencia asociada con enfermedad de Parkinson y demencia asociada con beta-amiloide.

Antecedentes de la invencion

La enfermedad de Alzheimer (AD) es una enfermedad neurodegenerativa asociada con el envejecimiento. Los pacientes con AD padecen deficits cognitivos y perdida de memoria, asf como problemas conductuales tales como ansiedad. Mas del 90 % de los afectados con Ad tienen una forma esporadica del trastorno, mientras que menos del 10 % de los casos son familiares o hereditarios. En los Estados Unidos, aproximadamente 1 de cada 10 personas a la edad de 65 tienen AD, mientras que, a la edad de 85, 1 de cada dos individuos esta afectado con AD. La esperanza de vida promedio desde el diagnostico inicial es de 7-10 anos, y los pacientes con AD requieren cuidados intensivos en un centro de vida asistida, que es muy costoso, o por miembros de la familia. Con la cantidad creciente de ancianos en la poblacion, la AD es una creciente preocupacion medica. Las terapias actualmente disponibles para AD simplemente tratan los smtomas de la enfermedad e incluyen inhibidores de acetilcolinesterasa para mejorar las propiedades cognitivas, asf como ansiolfticos y antipsicoticos para controlar los problemas conductuales asociados con esta dolencia.

Las caractensticas patologicas distintivas en el cerebro de pacientes con AD son ovillos neurofibrilares que se generan por hiperfosforilacion de la protema tau y placas amiloides plaques que se forman por agregacion del peptido beta-amiloide 1-42 (Abeta 1-42). Abeta 1-42 forma oligomeros y despues fibrillas, y finalmente placas amiloides. Se cree que los oligomeros y fibrillas son especialmente neurotoxicos y pueden causear la mayor parte del dano neurologico asociado con AD. Los agentes que evitan la formacion de Abeta 1-42 tienen el potencial de ser agentes modificadores de enfermedad para el tratamiento de AD. Abeta 1-42 se genera a partir de la protema precursora amiloide (APP), compuesta por 770 aminoacidos. El extremo N-terminal de Abeta 1-42 se escinde por la beta-secretasa (BACE), y despues la gamma-secretasa escinde el extremo C-terminal. Ademas de Abeta 1-42, la gamma-secretasa tambien libera Abeta 1-40 que es el producto predominante de escision, asf como Abeta 1-38 y Abeta 1-43. Estas formas Abeta tambien pueden agregarse para formar oligomeros y fibrillas. Por tanto, se esperana que inhibidores de BACE evitaran la formacion de Abeta 1-42, asf como Abeta 1-40, Abeta 1-38 y Abeta 1-43 y senan agentes terapeuticos potenciales en el tratamiento de AD.

El documento WO-2011/009943 (Novartis) describe derivados no sustituidos y 2-sustituidos de oxazina y su uso como inhibidores de BACE para el tratamiento de trastornos neurologicos. El documento WO-2011/020806 (Hoffmann-LaRoche) describe derivados 2,6-no sustituidos de 3-amino-5-fenil-5,6-dihidro-2H-[1,4]oxazina que tienen propiedades inhibidoras de BACE1 y/o BACE2.

Sumario de la invencion

La presente invencion se refiere a derivados de 5,6-dihidro-2H-[1,4]oxazin-3-ilamina de Formula (I)

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y los tautomeros y las formas estereoisomericas de los mismos, donde

R1 es fluoro, fluorometilo, difluorometilo o trifluorometilo;

R2 es hidrogeno o trifluorometilo; o R1 y R2 forman un radical divalente =CF2;

R3 es hidrogeno, alquilo C1-3, ciclopropilo, mono- o polihaloalquilo C1-3;

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R4 es hidrogeno o fluoro;

Ar es homoarilo o heteroarilo;

donde homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquil C1-3-oxi, mono-y polihaloalquilo C1-3, mono-y polihaloalquil C1-3-oxi; heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, pirazilo, piridazilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquinilo C2-3, alquil C1-3-oxi, mono- y polihaloalquilo C1-3, mono- y polihaloalquil C1-3-oxi, y alquil C1-3- oxialquil C1-3-oxi; y las sales de adicion de los mismos.

Es ilustrativa de la invencion una composicion farmaceutica que comprende un vehmulo farmaceuticamente aceptable y cualquiera de los compuestos descritos anteriormente. Una ilustracion de la invencion es una composicion farmaceutica preparada mezclando cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un vehmulo farmaceuticamente aceptable. Es ilustrativo de la invencion un proceso para preparar una composicion farmaceutica que comprende mezclar cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un vehmulo farmaceuticamente aceptable.

Tambien se describen metodo de tratamiento de un trastorno mediado por la enzima beta-secretasa, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapeuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o composiciones farmaceuticas descritas anteriormente.

Tambien se describen metodos de inhibicion de la enzima beta-secretasa, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapeuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o composiciones farmaceuticas descritas anteriormente.

Tambien se describe un metodo de tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, alteracion cognitiva leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatia amiloide cerebral, demencia multi-infarto, smdrome de Down, demencia asociada con apoplejfa, demencia asociada con enfermedad de Parkinson y demencia asociada con beta-amiloide, preferiblemente enfermedad de Alzheimer, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad terapeuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o composiciones farmaceuticas descritas anteriormente.

Otro ejemplo de la invencion es cualquiera de los compuestos descritos anteriormente para su uso en el tratamiento de: (a) enfermedad de Alzheimer, (b) alteracion cognitiva leve, (c) senilidad, (d) demencia, (e) demencia con cuerpos de Lewy, (f) smdrome de Down, (g) demencia asociada con apoplejfa, (h) demencia asociada con enfermedad de Parkinson y (i) demencia asociada con beta-amiloide, en un sujeto que lo necesita.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion se refiere a compuestos de formula (I) como se ha definido anteriormente en este documento, y sales farmaceuticamente aceptables y solvatos de los mismos. Los compuestos de formula (I) son inhibidores de la enzima beta-secretasa (tambien conocida como enzima de escision en sitio beta, BACE, BACE1 , Asp2 o memapsina 2), y son utiles en el tratamiento de enfermedad de Alzheimer, alteracion cognitiva leve, senilidad, demencia, demencia asociada con apoplejfa, demencia con cuerpos de Lewy, smdrome de Down, demencia asociada con enfermedad de Parkinson y demencia asociada con beta-amiloide, preferiblemente enfermedad de Alzheimer, alteracion cognitiva leve o demencia, mas preferiblemente enfermedad de Alzheimer.

En una realizacion de la invencion,

R1 es fluoro, difluorometilo o trifluorometilo;

R2 es hidrogeno o trifluorometilo; o R1 y R2forman un radical divalente =CF2;

R es alquilo C1-3, ciclopropilo, mono- o polihaloalquilo C1-3;

R4 es hidrogeno o fluoro;

Ar es heteroarilo;

donde heteroarilo es piridilo o pirimidilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquinilo C2-3, alquil C1-3-oxi, mono- y polihaloalquilo C1-3, mono- y polihaloalquil C1-3-oxi, y alquil C1-3-oxi-alquil C1-3-oxi; y las sales de adicion y los solvatos de los mismos.

En otra realizacion,

R1 es fluoro, difluorometilo o trifluorometilo, y R2 es hidrogeno; o R1 es fluoro y R2 es trifluorometilo; o R y R forman un radical divalente =CF2;

R es metilo o ciclopropilo;

R4 es hidrogeno o fluoro;

Ar es heteroarilo;

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donde heteroarilo es piridilo sustituido con metoxi, o pirimidilo; y las sales de adicion y los solvatos de los mismos

En otra realizacion, el atomo de carbono sustituido con R3tiene la configuracion R.

En otra realizacion, el compuesto de formula (I) se selecciona entre

(5R,6S)-5-ciclopropil-6-fluoro-5-{3-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-

amina;

(5R,6R)-6-fluoro-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina,

('5R/)-6-(difluorometilideno)-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

(5R,6R*)-6-(difluorometil)-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

(5R,6R)-6-fluoro-5-[2-fluoro-5-(pirimidin-2-ilamino)fenil]-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

(5R,6R)-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-5-metil-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

(5R,6R)-5-[2-fluoro-5-(pirimidin-2-ilamino)fenil]-5-metil-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

(5R,6R)-6-fluoro-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipirazin-2-il)amino]fenil}-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina; y

(5R,6R)-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipirazin-2-il)amino]fenil}-5-metil-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina.

Definiciones

"Halo" indicara fluoro, cloro y bromo; "alquilo C1-3" indicara un grupo alquilo saturado lineal o ramificado que tiene 1, 2 o 3 atomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo y 2-propilo; "alquil Ci-3-oxi" indicara un radical eter donde alquilo C1-3 es como se ha definido anteriormente; "mono- y polihaloalquilo C1.3" indicara alquilo C1.3 como se ha definido anteriormente, sustituido con 1, 2, 3 o cuando sea posible con mas atomos halo como se ha definido anteriormente; "mono- y polihaloalquil Ci-3-oxi" indicara un radical eter donde mono- y polihaloalquilo C1-3 es como se ha definido anteriormente; "cicloalquilo C3-6" indicara ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo; "cicloalcanodiilo C3-6" indicara un radical bivalente tal como ciclopropanodiilo, ciclobutanodiilo, ciclopentanodiilo y ciclohexanodiilo.

El termino "sujeto", como se usa en este documento, se refiere a un animal, preferiblemente un mairnfero, mucho mas preferiblemente un ser humano, que es o ha sido objeto de tratamiento, observacion o experimento.

La expresion "cantidad terapeuticamente eficaz", como se usa en este documento, significa esa cantidad de compuesto activo o agente farmaceutico que provoca la respuesta biologica o medica en un sistema tisular, animal o ser humano que se espera por un investigador, veterinario, doctor en medicina u otro clmico, que incluye alivio de los smtomas de la enfermedad o trastorno que se esta tratando.

Como se usa en este documento, el termino "composicion" pretende abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, asf como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.

Anteriormente en este documento y a partir de ahora en este documento, la expresion "compuesto de formula (I)" pretende incluir las sales de adicion, los solvatos y los estereoisomeros del mismo.

Las expresiones "estereoisomeros" o "formas estereoqmmicamente isomericas" anteriormente en este documento o a partir de ahora en este documento se usan de forma intercambiable.

La invencion incluye todos los estereoisomeros del compuesto de Formula (I) como un estereoisomero puro o como una mezcla de dos o mas estereoisomeros.

Los enantiomeros son estereoisomeros que son imagenes especulares no superponibles entre sf. Una mezcla 1:1 de un par de enantiomeros es un racemato o mezcla racemica. Los diastereomeros (o diaestereoisomeros) son estereoisomeros que no son enantiomeros, es decir, no estan relacionados como imagenes especulares. Si un compuesto contiene un doble enlace, los sustituyentes pueden estar en la configuracion E o la Z. Si un compuesto contiene un grupo cicloalquilo disustituido, los sustituyentes pueden estar en la configuracion cis o trans. Por lo tanto, la invencion incluye enantiomeros, diastereomeros, racematos, isomeros E, isomeros Z, isomeros cis, isomeros trans y mezclas de los mismos.

La configuracion absoluta es especifica de acuerdo con el sistema de Cahn-Ingold-Prelog. La configuracion en un atomo asimetrico se especifica por R o S. Compuestos resueltos cuya configuracion absoluta no es conocida pueden denominarse por (+) o (-) dependiendo de la direccion en que rotan el plano de luz polarizada.

Cuando se identifica un estereoisomero espedfico, esto significa que dicho estereoisomero esta sustancialmente libre, es decir, asociado con menos del 50 %, preferiblemente menos del 20 %, mas preferiblemente menos del 10 %, incluso mas preferiblemente menos del 5 %, en particular menos del 2 % y mucho mas preferiblemente menos del 1 %, de los otros isomeros. Por tanto, cuando un compuesto de formula (I) se especifica, por ejemplo, como (R), esto significa que el compuesto esta sustancialmente libre del isomero (S); cuando un compuesto de formula (I) se

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especifica, por ejemplo, como E, esto significa que el compuesto esta sustancialmente libre del isomero Z; cuando un compuesto de formula (I) se especifica, por ejemplo, como cis, esto significa que el compuesto esta sustancialmente libre del isomero trans.

Los compuestos de Formula (I) co-existen en un equilibrio dinamico con los tautomeros de Formula (I-a).

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Para su uso en medicina, las sales de los compuestos de esta invencion se refieren a "sales farmaceuticamente aceptables" no toxicas. Otras sales pueden ser utiles, sin embargo, en la preparacion de compuestos de acuerdo con esta invencion o de sus sales farmaceuticamente aceptables. Las sales farmaceuticamente aceptables adecuadas de los compuestos incluyen sales de adicion de acidos que pueden formarse, por ejemplo, mezclando una solucion del compuesto con una solucion de un acido farmaceuticamente aceptable tal como acido clorhudrico, acido sulfurico, acido fumarico, acido maleico, acido succmico, acido acetico, acido benzoico, acido citrico, acido tartarico, acido carbonico o acido fosforico. Ademas, cuando los compuestos de la invencion portan un resto acido, las sales farmaceuticamente aceptables adecuadas de los mismos pueden incluir sales de metales alcalinos, por ejemplo, sales de sodio o potasio; sales de metales alcalino-terreos, por ejemplo, sales de calcio o magnesio; y sales formadas con ligandos organicos adecuados, por ejemplo, sales de amonio cuaternario.

Acidos representativos que pueden usarse en la preparacion de sales farmaceuticamente aceptables incluyen, aunque sin limitacion, los siguientes: acido acetico, acido 2,2-dicloroacetico, aminoacidos acilados, acido adfpico, acido algmico, acido ascorbico, acido L-aspartico, acido bencenosulfonico, acido benzoico, acido 4- acetamidobenzoico, acido (+)-alcanforico, acido alcanforsulfonico, acido caprico, acido caproico, acido capnlico, acido cinamico, acido cftrico, acido ciclamico, acido etano-1,2-disulfonico, acido etanosulfonico, acido 2-hidroxi- etanosulfonico, acido formico, acido fumarico, acido galactarico, acido gentfsico, acido glucoheptonico, acido D- gluconico, acido D-glucuronico, acido L-glutamico, acido beta-oxo-glutarico, acido glicolico, acido hipurico, acido bromhudrico, acido clorlmdrico, acido (+)-L-lactico, acido (±)-DL-lactico, acido lactobionico, acido maleico, acido (-)-L- malico, acido malonico, acido (±)-DL-mandelico, acido metanosulfonico, acido naftaleno-2-sulfonico, acido naftaleno- 1,5-disulfonico, acido 1-hidroxi-2-naftoico, acido nicotmico, acido mtrico, acido oleico, acido orotico, acido oxalico, acido palmftico, acido pamoico, acido fosforico, acido L-piroglutamico, acido salicilico, acido 4-amino-salidlico, acido sebacico, acido estearico, acido succmico, acido sulfurico, acido tanico, acido (+)-L-tartarico, acido tiocianico, acido p-toluenosulfonico, acido trifluorometilsulfonico, y acido undecilenico. Bases representativas que pueden usarse en la preparacion de sales farmaceuticamente aceptables incluyen, aunque sin limitacion, las siguientes: amoniaco, L- arginina, benetamina, benzatina, hidroxido de calcio, colina, dimetiletanolamina, dietanolamina, dietilamina, 2- (dietilamino)-etanol, etanolamina, etilendiamina, W-metil-glucamina, hidrabamina, 1H-imidazol, L-lisina, hidroxido de magnesio, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperazina, hidroxido potasico, 1-(2-hidroxietil)-pirrolidina, amina secundaria, hidroxido sodico, trietanolamina, trometamina e hidroxido de zinc.

Los nombres de los compuestos de la presente invencion se generaron de acuerdo con las normas de nomenclatura convenidas por el Chemical Abstracts Service (CAS) usando el software de Advanced Chemical Development, Inc. (ACD/producto de marca version 10.01; Compilacion 15494, 1 de diciembre de 2006) o de acuerdo con las normas de nomenclatura convenidas por la International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) usando el software de Advanced Chemical Development, Inc. (ACD/producto de marca version 10.01.0.14105, octubre de 2006). En caso de formas tautomericas, se genero el nombre de la forma tautomerica representada de la estructura. La otra forma tautomerica no representada tambien se incluye dentro del alcance de la presente invencion.

Preparacion de los compuestos

Procedimiento experimental 1

Los compuestos finales de acuerdo con la Formula (I), pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto intermedio de Formula (II) con un compuesto de Formula (III) de acuerdo con el esquema de reaccion (1), una reaccion que se realiza en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, isopropanol o 1,4- dioxano, en presencia de un acido adecuado tal como, por ejemplo, H2SO4 o HCl, en condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 100 °C, por ejemplo, durante 16 horas. Esta conversion tambien puede realizarse en presencia de un catalizador de Pd-complejo tal como, por ejemplo, tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) [CAS 51364-51-3] en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, 1,4-dioxano, etanol o mezclas de disolventes inertes, en presencia de una base adecuadatal como, por

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ejemplo, K3PO4, Na2CO3 o CS2CO3 acuoso y un ligando adecuado tal como, por ejemplo, 1,1'-bis(difenilfosfino)- ferroceno [CAS 12150-46-8], en condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 160 °C bajo radiacion microondas hasta completarse la reaccion, por ejemplo, 1 hora. En el esquema de reaccion (1), todas las variables se definen como en la Formula (I) y W es halo.

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Esquema de reaccion 1

Procedimiento experimental 2

Los compuestos finales de acuerdo con la Formula (I-b) donde R3 es difluorometilo y R4 es un hidrogeno, pueden prepararse por hidrogenacion catalttica de un compuesto intermedio de Formula (I-a) de acuerdo con el esquema de reaccion (2). Dicha conversion puede realizarse por tratamiento del compuesto intermedio de Formula (I-a) con hidrogeno en presencia de un catalizador adecuado tal como, por ejemplo, paladio sobre carbono, un veneno adecuado de catalizadores tal como, por ejemplo, tiofeno, en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, acetato de etilo. La mezcla se agita en atmosfera de hidrogeno, a una temperatura adecuada, tipicamente temperatura ambiente, a una presion adecuada tal como, por ejemplo, presion atmosferica, por ejemplo, durante 16 horas. En el esquema de reaccion (2), todas las variables se definen como en la Formula (I).

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Procedimiento experimental 3

Los compuestos intermedios de Formula (II-a) y (II-b) pueden prepararse, en lmeas generales, siguiendo las etapas de reaccion mostradas en el siguiente esquema de reaccion (3).

imagen5

A: conversion de tioamida en amidina 5 B: conversion de amida en tioamida (tionacion)

C: ciclacion

D: acoplamiento de tipo Buchwald-Hartwig (cuando W es halo)

E: reduccion de nitro en amino (cuando R° es H)

F: conversion de bromo en amina (cuando R6 es H)

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Los derivados amidina en el esquema anterior de reaccion pueden prepararse convenientemente a partir de los correspondientes derivados tioamida siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de conversion de tioamida en amidina (etapa de reaccion A). Dicha conversion puede realizarse convenientemente por tratamiento de dichas tioamidas con una fuente de amoniaco tal como, por ejemplo, cloruro de amonio o amoniaco acuoso, en un 15 disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, agua o metanol y similares, en condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 60 °C, por ejemplo, durante 6 horas.

Como alternativa, pueden prepararse compuestos intermedios de Formula (II-a) donde R6 es hidrogeno en el esquema anterior de reaccion (3) a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (II-b) 20 mediante un procedimiento de acoplamiento del tipo catalizado con cobre (etapa de reaccion F). Dicho acoplamiento puede realizarse por tratamiento de dichos compuestos intermedios de Formula (II-b) con azida sodica en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, DMSO, en presencia de una mezcla de bases adecuadas tales como, por ejemplo, dimetiletilendiamina y Na2CO3, y un catalizador de cobre tal como, Cul, en condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 110 °C, hasta completarse la

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reaccion, por ejemplo 1 hora.

Los derivados de tioamida en el esquema anterior de reaccion (3) pueden prepararse a partir de derivados amida siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de tionacion (etapa de reaccion B). Dicha conversion puede realizarse convenientemente por tratamiento de dichas amidas con un agente de tionacion tal como, por ejemplo, pentasulfuro de fosforo o 2,4-disulfuro de 2,4-bis-(4-metoxi-fenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano [reactivo de Lawesson, CAS 19172-47-5], en un disolvente inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano o 1,4-dioxano y similares, en condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 50 °C, por ejemplo, durante 50 minutos.

Los derivados amida en el esquema anterior de reaccion (3) pueden prepararse a partir de los derivados beta- aminoalcohol de Formula (VIII) y compuestos intermedios de Formula (VlI) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de ciclacion (etapa de reaccion C). Dicha ciclacion puede realizarse convenientemente por tratamiento de dichos beta-aminoalcoholes con un compuesto intermedio de Formula (VII) en presencia de una base, tal como terc- butoxido de potasio, o una mezcla de bases tal como terc-butoxido de potasio/W,W-diisopropiletilamina en un disolvente inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano y similares, a -80 °C a l0o °C, preferiblemente -15 °C a 25 °C durante 30 minutos a 100 horas, preferiblemente 1 hora a 24 horas.

Adicionalmente, pueden prepararse compuestos intermedios de Formula (IV-a) y (VI-a) en el esquema anterior de reaccion (3) a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (IV-b) y (VI-b) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de acoplamiento tipo Buchwald-Hartwig (etapa de reaccion D). Dicho acoplamiento puede realizarse por tratamiento de compuestos intermedios de Formula (IV-b) y (VI-b) con un compuesto intermedio de Formula (V) en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, etanol o mezclas de disolventes inertes tales como, por ejemplo, 1,2-dimetoxietano/agua/etanol, en presencia de una base adecuada tal como, por ejemplo, K3PO4 o Cs2CO3 acuoso, un catalizador de Pd-complejo tal como, por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]-dicloropaladio (II) [CAS 72287-26-4] o diacetato de trans- bis(diciclohexilamina)paladio [DAPCy, CAS 628339-96-8] en condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 80 °C, por ejemplo, durante 20 horas o, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 130 °C, por ejemplo, durante 10 minutos bajo radiacion microondas.

Adicionalmente, pueden prepararse compuestos intermedios de Formula (IV-a) y (VI-a) en el esquema anterior de reaccion (3), donde R6 = H, a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (IV-c) y (VI-c) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de reduccion de nitro en amino (etapa de reaccion E). Dicha reduccion puede realizarse convenientemente siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de hidrogenacion catalftica. Por ejemplo, dicha reduccion puede realizarse agitando los reactivos en atmosfera de hidrogeno y en presencia de un catalizador apropiado tal como, por ejemplo, paladio sobre carbon, platino sobre carbon, mquel Raney y catalizadores similares. Son disolventes adecuados, por ejemplo, agua, alcanoles, por ejemplo, metanol, etanol y similares, esteres, por ejemplo, acetato de etilo y similares. Para potenciar la velocidad de dicha reaccion de reduccion, puede ser ventajoso elevar la temperatura y/o la presion de la mezcla de reaccion. Puede evitarse la hidrogenacion adicional indeseada de ciertos grupos funcionales en los reactivos y los productos de reaccion mediante la adicion de un veneno de catalizador tal como, por ejemplo, tiofeno y similares, a la mezcla de reaccion.

Los compuestos intermedios de Formula (VII), (VIII-a), (VIII-b) y (VIII-c) pueden prepararse, en lmeas generales, siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de tipo Strecker descritos en la bibliograffa, seguidos de transformaciones qmmicas convencionales del grupo ciano.

Procedimiento experimental 4

Los compuestos intermedios de Formula (IX-a), (IX-b) y (IX-c) pueden prepararse, en lmeas generales, siguiendo las etapas de reaccion mostradas en el siguiente esquema de reaccion (4).

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G: fluoracion H: cloracion I: trifluorometilacion J: reduccion K: ciclacion

Pueden prepararse compuestos intermedios de Formula (IX-a) y (IX-b) en el esquema anterior de reaccion (4) a partir de un compuesto intermedio de Formula (X-a) y (X-b) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de fluoracion (etapa de reaccion G). Dicha conversion puede realizarse por tratamiento de los compuestos intermedios de Formula (X-a) y (X-b) en presencia de un agente de fluoracion tal como, por ejemplo, trifluoruro de dietilaminoazufre (DAST) en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, diclorometano. La mezcla de reaccion se agita a temperatura adecuada, por ejemplo 0 °C durante el tiempo necesario para conseguir que se completa la reaccion, por ejemplo 20-40 minutos.

Puede prepararse el compuesto intermedio de Formula (IX-c) en el esquema anterior de reaccion (4) a partir de compuestos intermedios de Formula (X-a) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de cloracion (etapa de reaccion H). Dicha conversion puede realizarse por tratamiento del compuesto intermedio de Formula (X-a) con un agente adecuado de cloracion tal como, por ejemplo, cloruro de tionilo, en presencia de una base tal como, por ejemplo, piridina en un disolvente inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, diclorometano. La mezcla de reaccion se agita a temperatura adecuada, por ejemplo 0 °C durante el tiempo necesario para conseguir que se complete la reaccion, por ejemplo, 30-60 minutos.

Pueden prepararse compuestos intermedios de Formula (X-a) del esquema anterior de reaccion (4) a partir de compuestos intermedios de Formula (XI) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de trifluorometilacion (etapa de reaccion I). Dicha conversion puede realizarse por tratamiento del compuesto intermedio de Formula (XI) en presencia de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF), con un agente de trifluorometilacion tal como, por ejemplo, (trifluorometil)trimetilsilano, en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano. La mezcla de reaccion se agita a temperatura adecuada, por ejemplo, temperatura ambiente durante el tiempo necesario para conseguir que se complete la reaccion, por ejemplo, dos horas.

Pueden prepararse compuestos intermedios de Formula (X-b) en el esquema anterior de reaccion (4) a partir de compuestos intermedios de Formula (XI) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de reduccion (etapa de reaccion J). Dicha conversion puede realizarse por tratamiento del compuesto intermedio de Formula (XI) con un agente reductortal como, por ejemplo, hidruro de diisobutilaluminio, en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano. La mezcla de reaccion se agita a temperatura adecuada, tipicamente de -78 °C a temperatura ambiente durante el tiempo necesario para conseguir que se complete la reaccion, por ejemplo, dos horas.

Pueden prepararse compuestos intermedios de Formula (XI) en el esquema anterior de reaccion (4) a partir de compuestos intermedios de Formula (XII) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de ciclacion en dos etapas (etapa de reaccion K). Dicha conversion puede realizarse por, en primer lugar, tratamiento de los compuestos

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intermedios de Formula (XII) con un compuesto intermedio de Formula (VII) tal como, por ejemplo, cloruro de cloroacetilo en presencia de una base tal como, por ejemplo, NaOH, en una mezcla adecuada de disolventes inertes tal como, por ejemplo, agua y 1,4-dioxano o agua y THF. El pH de la mezcla de reaccion se ajusta a hasta un valor adecuado de pH, por ejemplo, 10-11, mediante la adicion de una base adecuada tal como, por ejemplo, NaOH. La mezcla de reaccion se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo, de 0 °C a 25 °C durante el tiempo necesario para conseguir que se complete la reaccion, por ejemplo, 1-4 horas. El residuo en bruto obtenido puede ciclarse posteriormente para proporcionar el intermedio (XI) mediante la adicion de una base adecuada tal como, por ejemplo, K2CO3, Cs2CO3, W,A/-diisopropiletilamina o NaHCO3, en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, acetonitrilo o DMF. La mezcla de reaccion se agita en condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 25 °C a 80 °C durante 2-24 horas o, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 140 °C durante 15-30 minutos bajo radiacion microondas. Esta conversion tambien puede realizarse en ausencia de una base en un disolvente adecuado inerte a la reaccion tal como, por ejemplo, acetonitrilo o DMF, a una temperatura adecuada, tipicamente de 40 °C a 110 °C, durante un periodo de, por ejemplo, 24-48 horas.

Procedimiento experimental 5

Los compuestos intermedios de Formula (XIII) y (XIV) pueden prepararse, en lmeas generales, a partir de compuestos intermedios de Formula (IX-c) siguiendo procedimientos conocidos en la tecnica de deshalogenacion reductora (etapa de reaccion L). Dicha conversion puede realizarse por tratamiento del intermedio de Formula (IX-c) con un reactivo adecuado de zinc tal como, por ejemplo, polvo de zinc o el par de zinc cobre en un disolvente adecuado tal como acido acetico, a una temperatura adecuada, tfpicamente de temperatura ambiente a 80 °C, durante el tiempo necesario para conseguir que se complete la reaccion, por ejemplo, 1-16 horas. Esta conversion produce una mezcla de los compuestos intermedios de Formula (XIII) y (XIV) en diferente relacion dependiendo de las condiciones de reaccion y los reactivos.

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Composiciones farmaceuticas

La presente invencion tambien proporciona composiciones para prevenir o tratar enfermedades en que la inhibicion de la beta-secretasa es beneficiosa, tales como enfermedad de Alzheimer (AD), alteracion cognitiva leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, smdrome de Down, demencia asociada con apoplejfa, demencia asociada con enfermedad de Parkinson y demencia asociada con beta-amiloide. Dichas composiciones comprenden una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con la formula (I) y un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable.

Cuando es posible administrar el ingrediente activo en solitario, es preferible presentarlo como una composicion farmaceutica. Por consiguiente, la presente invencion proporciona adicionalmente una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de acuerdo con la presente invencion, junto con un vehfculo o diluyente farmaceuticamente aceptable. El vehfculo o diluyente debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composicion y no perjudicial para los destinatarios de la misma.

Las composiciones farmaceuticas de esta invencion pueden prepararse por cualquier metodo bien conocido en la tecnica de farmacia. Una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto particular, en forma de base o forma de sal de adicion, como ingrediente activo, se combina en mezcla mtima con un vehfculo farmaceuticamente aceptable, que puede adoptar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para su administracion. Estas composiciones farmaceuticas estan, de forma deseable, en forma unitaria de dosificacion adecuada, preferiblemente, para administracion sistemica tal como administracion oral, percutanea o parenteral; o administracion topica tal como mediante inhalacion, un vaporizador nasal, colirio o mediante una crema, gel, champu o similares. Por ejemplo, en la preparacion de las composiciones en forma oral de dosificacion, puede emplearse cualquiera de los medios farmaceuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el case de preparaciones lfquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o vehfculos solidos tales como almidones, azucares, caolm, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el case de polvos, pfldoras, capsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y capsulas representan la forma oral monodosis mas ventajosa, en cuyo caso obviamente se emplean vehfculos farmaceuticos solidos. Para composiciones parenterales, el vehfculo habitualmente comprendera agua esteril, al menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad. Pueden

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prepararse soluciones inyectables, por ejemplo, en que el vetuculo comprende solucion salina, solucion de glucosa o una mezcla de solucion salina y solucion de glucosa. Tambien pueden prepararse suspensiones inyectables en cuyo caso pueden emplearse vehfculos Kquidos apropiados, agentes de suspension y similares. En las composiciones adecuadas para administracion percutanea, el vetnculo comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetracion y/o un agente humectable adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones minoritarias, que son aditivos que no causan ningun efecto perjudicial significativo sobre la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administracion a la piel y/o pueden ser de ayuda para preparar las composiciones deseadas. Estas composiciones pueden administrarse de diversas formas, por ejemplo, como un parche transdermico, como una aplicacion topica o como una pomada.

Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmaceuticas mencionadas anteriormente en forma monodosis por facilidad de administracion y uniformidad de dosificacion. Forma monodosis, como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones en este documento, se refiere a unidades ffsicamente concretas adecuadas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado en asociacion con el vetuculo farmaceutico necesario. Ejemplos de dichas formas monodosis son comprimidos (incluyendo comprimidos ranurados o recubiertos), capsulas, pfldoras, paquetes de polvo, obleas, soluciones o suspensiones inyectables, cucharaditas, cucharadas y similares, y multiples segregados de los mismos.

La dosificacion exacta y la frecuencia de administracion depende del compuesto particular de formula (I) usado, la afeccion particular que se esta tratando, la gravedad de la afeccion que se esta tratando, la edad, peso, sexo, grado del trastorno y estado ffsico general del paciente particular, asf como otra medicacion que pueda estar tomando el individuo, como saben bien los expertos en la materia. Ademas, es evidente que dicha cantidad diaria eficaz puede disminuirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluacion del medico que prescribe los compuestos de la presente invencion.

Dependiendo del modo de administracion, la composicion farmaceutica comprendera del 0,05 al 99 % en peso, preferiblemente del 0,1 al 70 % en peso, mas preferiblemente del 0,1 al 50 % en peso del ingrediente activo y, del 1 al 99,95 % en peso, preferiblemente del 30 al 99,9 % en peso, mas preferiblemente del 50 al 99,9 % en peso de un vetuculo farmaceuticamente aceptable, estando basados todos los porcentajes en el peso total de la composicion.

Los presentes compuestos pueden usarse para administracion sistemica tal como administracion oral, percutanea o parenteral; o administracion topica tal como mediante inhalacion, un vaporizador nasal, colirio o mediante una crema, gel, champu o similares. Los compuestos preferiblemente se administran por via oral. La dosificacion exacta y la frecuencia de administracion depende del compuesto particular de acuerdo con formula (I) usado, la afeccion particular que se esta tratando, la gravedad de la afeccion que se esta tratando, la edad, peso, sexo, grado del trastorno y estado ffsico general del paciente particular, asf como otra medicacion que pueda estar tomando el individuo, como saben bien los expertos en la materia. Ademas, es evidente que dicha cantidad diaria eficaz puede disminuirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluacion del medico que prescribe los compuestos de la presente invencion.

La cantidad de un compuesto de Formula (I) que puede combinarse con un material de vetuculo para producir una forma monodosis variara dependiendo de la enfermedad tratada, la especie de mamffero, y el modo particular de administracion. Sin embargo, como grna general, monodosis adecuadas para los compuestos de la presente invencion pueden contener, por ejemplo, preferiblemente entre 0,1 mg a aproximadamente 1000 mg del compuesto activo. Una monodosis preferida es entre 1 mg a aproximadamente 500 mg. Una monodosis mas preferida es entre 1 mg a aproximadamente 300 mg. Una monodosis incluso mas preferida es entre 1 mg a aproximadamente 100 mg. Dichas monodosis pueden administrarse mas de una vez al dfa, por ejemplo, 2, 3, 4, 5 o 6 veces al dfa, pero preferiblemente 1 o 2 times al dfa, de modo que la dosificacion total para un adulto de 70 kg este en el intervalo de 0,001 a aproximadamente 15 mg por kg de peso del sujeto por administracion. Una dosificacion preferida es de 0,01 a aproximadamente 1,5 mg por kg de peso del sujeto por administracion, y dicha terapia puede prolongarse durante varias semanas o meses y, en algunos casos, anos. Se entendera, sin embargo, que el nivel espedfico de dosis para cualquier paciente particular dependera de una diversidad de factores, incluyendo la actividad del compuesto espedfico empleado; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del individual que se esta tratando; el tiempo y via de administracion; la tasa de excrecion; otros farmacos que se hayan administrado previamente; y la gravedad de la enfermedad particular que esta experimentando terapia, como saben bien los expertos en el area.

Una dosificacion tfpica puede ser un comprimido de 1 mg a aproximadamente 100 mg o de 1 mg a aproximadamente 300 mg tomado una vez al dfa o multiples veces al dfa, o una capsula o comprimido de liberacion en el tiempo tomado una vez al dfa y que contiene un contenido proporcionalmente mayor de ingrediente activo. El efecto de liberacion en el tiempo puede obtenerse mediante materiales de capsula que se disuelven a diferentes valores de pH, mediante capsulas que se liberan lentamente por presion osmotica, o mediante cualquier otro medio de liberacion controlada.

Puede ser necesario usar dosificaciones fuera de estos intervalos en algunos casos, como sera evidente para los expertos en la materia. Ademas, se aprecia que el clmico medico que esta tratando conocera el modo y el momento

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de comenzar, interrumpir, ajustar, o terminar la terapia junto con la respuesta del paciente individual.

Para las composiciones, metodos y kits proporcionados anteriormente, un experto en la materia entendera que los compuestos preferidos para su uso en cada uno seran aquellos compuestos que se han indicado como preferidos anteriormente. Compuestos aun mas preferidos para las composiciones, metodos y kits son aquellos compuestos proporcionados en los siguientes Ejemplos no limitantes.

Parte experimental

A partir de ahora en este documento, el termino "p.f." significa punto de fusion, "ac." significa acuoso, "m. r." significa mezcla de reaccion, "t.a." significa temperatura ambiente, "DIPEA" significa N,N-diisopropiletilamina, "DIPE" significa eter diisopropilico, "THF" significa tetrahidrofurano, "DMF" significa dimetilformamida, "DCM" significa diclorometano, "EtOH" significa etanol "EtOAc" significa acetato de etilo, "AcOH" significa acido acetico, "iPrOH" significa isopropanol, "iPrNH2" significa isopropilamina, "MeCN" significa acetonitrilo, "MeOH" significa metanol, "Pd(OAc)2" significa (Il)diacetato de paladio, "rac." significa racemico, "sat." significa saturado, "SFC" significa cromatograffa de fluidos supercnticos, "SFC-MS" significa cromatograffa de fluidos supercnticos/espectrometna de masas, "LC-MS" significa cromatograffa Kquida/espectrometna de masas, "GCMS" significa cromatograffa de gases/espectrometna de masas, "HPLC" significa cromatograffa Kquida de alto rendimiento, "RP" significa fase inversa, "UPLC" significa cromatograffa Kquida de ultra-alto rendimiento, "Rt" significa tiempo de retencion (en minutos), "[M+H]+" significa la masa protonada de la base libre del compuesto, "DAST" significa trifluoruro de dietilaminoazufre, "DMTMM" significa cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolinio, "HATU" significa hexafluorofosfato de 0-(7- azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio, "Xantphos" significa (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-

diil)bis[difenilfosfina], "TBAT" significa trifenildifluorosilicato de tetrabutilamonio, "TFA" significa acido trifuoroacetico, "Et2O" significa eter diefflico, "DMSO" significa dimetilsulfoxido, "MeCN" significa acetonitrilo.

Para intermedios clave, asf como algunos compuestos finales, la configuracion absoluta de centro quirales (indicada como R y/o S) se establecieron mediante comparacion con muestras de configuracion conocida, o el uso de tecnicas analfficas adecuadas para la determinacion de la configuracion absoluta, tal como VCD (dicrofsmo circular vibracional) o cristalograffa de rayos X. Cuando la configuracion absoluta en un centro quiral es desconocida, se denomina arbitrariamente R*.

A. Preparacion de los intermedios

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Se anadio isopropoxido de titanio(IV) (202 ml, 658 mmol) a una mezcla agitada de 2-(3-bromo-fenil)-2-oxo-acetato de etilo [(CAS 62123-80-2), 80 g, 329 mmol] y (S)-2-metil-2-propanosulfinamida (47,9 g, 395 mmol) en n-heptano (740 ml). La mezcla se agito a 80 °C durante 4 horas. La mezcla se enfrio hasta temperatura ambiente, y se anadio agua. La mezcla resultante se filtro sobre un cojm de tierra de diatomeas y se aclaro con n-heptano. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y se concentro al vacfo. El residuo se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de sflice; eluyente: n-heptano/EtOAc 100/0 a 50/50). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vacfo para producir intermedio 1 (91 g, rendimiento del 74 %).

Ejemplo A2

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Se anadio bromuro de ciclopropilmagnesio (1 M, 300 ml, 300 mmol) gota a gota a una solucion agitada de intermedio 1 (91 g, 243 mmol) en DCM (1500 ml) a -40 °C. La mezcla se agito a esta temperatura durante 30 min, y despues la reaccion se interrumpio mediante la adicion de una solucion sat. ac. de NH4Cl, seguida de agua. La mezcla se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron al vado para producir intermedio 2 (100 g, rendimiento del 99 %), que se uso tal cual en la siguiente etapa.

Ejemplo A3

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Se anadio una solucion ac. 1 M de NaOH (750 ml, 750 mmol) a una solucion de intermedio 2 en bruto (100 g, 240 mmol) en MeOH (400 ml). La mezcla resultante se agito a reflujo durante 4 horas. La mezcla se enfrio hasta t.a., y despues se repartio entre agua y EtOAc. La capa acuosa se separo y se neutralizo mediante la adicion de una solucion ac. 1 M de HCl (750 ml), y despues se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron al vado. El residuo se trituro con DIPE/MeCN, y los solidos resultantes se retiraron por filtracion y se secaron al vado para producir intermedio 3 (37 g, rendimiento del 41 %).

ao: +37,59 ° (589 nm, c 0,564 % p/v, MeOH, 20 °C). La configuracion absoluta se determino por difraccion de rayos X.

Ejemplo A4

Preparacion de intermedio 4.

Sal de acido clorddrico

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Se agito intermedio 3 (37 g, 99 mmol) en solucion 4 M de HCl en dioxano (74 ml) y 1,4-dioxano (75 ml) a temperatura ambiente durante 30 min. A la suspension resultante, se le anadio DIPE, y el precipitado se retiro por filtracion y se seco al vado para producir intermedio 4 (28 g, rendimiento del 92 %).

ao: -68,89 ° (589 nm, c 0,646 % p/v, MeOH, 20 °C)

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Se anadio una solucion ac. 1 M de NaOH (182,6 ml, 182,6 mmol) a una solucion de intermedio 4 (28 g, 91,3 mmol), y la mezcla se enfrio en un bano de hielo. A esta mezcla, se le anadio una solucion de cloruro de cloroacetilo (21,8 ml, 274 mmol) en THF (280 ml) gota a gota a 15 °C durante una hora, anadiendo simultaneamente una solucion ac. al 25 % de NaOH para mantener el pH a aproximadamente 10-11. Despues de completarse la reaccion, se anadio solucion conc. ac. de HCl cuidadosamente a la mezcla de reaccion hasta pH 2. La mezcla se concentro parcialmente al vado, y el precipitado resultante se retiro por filtracion, se lavo con DIPE, y se seco al vado para dar intermedio

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aD: -6,49 ° (589 nm, c 0,5855 % p/v, MeOH, 20 °C)

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Se disolvieron intermedio 5 (0,7 g, 2,02 mmol) y NaHCO3 (0,34 g, 4,04 mmol) en DMF (17 ml), y la mezcla de reaccion se agito a 80 °C durante 2 horas. La mezcla se concentro parcialmente a presion reducida, se enfrio hasta t.a. y despues se filtro sobre tierra de diatomeas. El filtrado se concentro al vado, y el residuo se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de sflice; eluyente: n-heptano/EtOAc 100/0 a 50/50). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 6 (0,54 g, rendimiento del 86 %).

aD: -15,68 ° (589 nm, c 0,37 % p/v, MeOH, 20 °C)

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A una solucion de intermedio 6 (4,2 g, 13,54 mmol) en THF (55 ml) se le anadio TBAT (0,73 g, 1,35 mmol). Despues, se anadio (trifluorometil)trimetilsilano (4,0 ml, 27 mmol) gota a gota, y la m.r. se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se inactivo con NaCl acuoso, se extrajo con EtOAc, la fase organica se separo, se seco (MgSO4) y se concentro al vado. El aceite resultante se purifico por cromatograffa en columna (gel de sflice; eluyente: DCM/EtOAc 100/0 a 0/100). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 7 (3 g, rendimiento del 58 %) as una mezcla de isomeros cis y trans, que se uso tal cual en la siguiente etapa.

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Se disolvio intermedio 7 (3 g, 7,9 mmol) en DCM (20 ml) y se anadio DAST (1,16 ml, 9,5 mmol) gota a gota a t.a. La mezcla de reaccion se agito a t.a. durante 1 hora y despues la m.r. se concentro a presion reducida. El residuo se repartio entre DCM y una solucion ac. sat. de NaHCO3. La capa organica se separo y la capa acuosa se extrajo con DCM. Las capas organicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron, y el disolvente se evaporo al vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: n-heptano/EtOAc 100/0 a 0/100). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 8 (2 g, rendimiento del 66 %) como una mezcla de isomeros cis y trans, que se uso tal cual en la siguiente etapa.

Ejemplo A9

Preparacion de intermedio 9.

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Se anadio P2S5 (1,16 g, 5,23 mmol) a una solucion de intermedio 8 (2 g, 5,23 mmol) en THF (43 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a 70 °C durante 3 horas. Despues, la mezcla se enfrio hasta temperatura ambiente, se retiro por filtracion y el disolvente organico se evaporo al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: n-heptano/DCM 80/100 a 0/100). Las fracciones deseadas se recogieron y se evaporaron al vado para producir intermedio 9 (1,6 g, rendimiento del 77 %) como una mezcla de isomeros cis y trans.

Ejemplo A10

Preparacion de intermedio 10 y 11.

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Se anadio intermedio 9 (4,2 g, 10,55 mmol) a una mezcla de amoniaco 7 N en MeOH (16 ml) y una solucion ac. de NH4OH (40 ml), y la mezcla de reaccion se agito a 140 °C durante 1 hora bajo radiacion microondas. Despues, el disolvente se evaporo y el residuo se disolvio en DCM, se seco (MgSO4), se filtro, y el disolvente se evaporo al vado. El residuo se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de sflice; eluyente: n-heptano/EtOAc 100/0 a 50/50). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 10 (2,44 g, rendimiento del 61 %) e intermedio 11 (0,7 g, rendimiento del 17 %).

Ejemplo A11

Preparacion de intermedio 12.

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Se combino intermedio 10 (2,44 g, 6,4 mmol) con NaN3 (1,04 g, 16 mmol), Cul (1,52 g, 8,0 mmol) y Na2CO3 (1,357 g, 12,8 mmol) en DMSO (92 ml) y la reaccion se desgasifico. Despues de eso, se anadio W,W-dimetiletilendiamina (1,2 ml, 11,2 mmol) y la mezcla se calento a 110 °C hasta completarse la reaccion, aproximadamente 6 horas. La mezcla de reaccion se vertio en DCM. Se anadio hidroxido de amonio (28 % en agua) y la capa organica se separo y se lavo tres veces con solucion de hidroxido de amonio. Despues, la capa organica se seco (Mg2SO4), se filtro y se concentro al vado para producir intermedio 12 (2 g, rendimiento del 98 %).

Ejemplo A12

Preparacion de intermedio 13.

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Se anadio cianuro de trimetilsililo (30,7 ml, 230 mmol) a una solucion agitada de 5-bromo-2-fluoroacetofenona (25 g, 115 mmol) y NH4Cl (18,5 g, 345 mmol) en NH3/MeOH (150 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 3 dfas. Despues, el disolvente se evaporo al vado y el residuo se recogio en EtOAc (80 ml). El solido se filtro y el

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filtrado se evaporo al vado para producir intermedio 13 (27,9 g, rendimiento cuant.) que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.

Ejemplo A13

Preparacion de intermedio 14.

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Se disolvio intermedio 13 (27 g, 111 mmol) en HCl (37 % en H2O) (130 ml) y acido acetico (130 ml) y la mezcla se calento a reflujo durante 16 horas. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentro al vado. Se anadio agua y la capa acuosa se extrajo con EtOAc. La capa acuosa se basifico con solucion ac. de NaOH (25 %) a pH 7. La capa acuosa se concentro parcialmente al vado. La mezcla se enfrio en un bano de hielo y el precipitado se retiro por filtracion, se lavo con agua y despues Et2O y se seco al vado para producir intermedio 14 (18 g, rendimiento del 62 %) en forma de un solido blanco.

Ejemplo A14

Preparacion de intermedio 15.

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Una mezcla de intermedio 14 (15 g, 57,2 mmol) en una solucion de H2SO4 al 10 % en metanol (330 ml) se calento a reflujo durante 48 h. La m.r. se concentro al vado. Se anadio agua y la solucion se basifico a pH 8 con solucion sat. ac. de NHCO3. La capa acuosa entonces se extrajo con EtOAc. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y se concentro al vado para producir intermedio 15 (15 g, rendimiento del 95 %).

imagen22

Se separo intermedio 15 (10 g) en los correspondientes enantiomeros por SFC preparativa en (Chiralpak® Daicel AD 30 x 250 mm). Fase movil (CO2, MeOH con iPrNH2 al 0,2 %) para producir intermedio 16 (4,2 g, rendimiento del 42 %).

ao: -10,1 ° (365 nm, c 0,762 % p/v, MeOH, 20 °C).

Ejemplo A16

Preparacion de intermedio 17.

imagen23

Se anadio THF (150 ml) a una solucion de intermedio 16 (40 g, 145 mmol) en NaOH (1 M en H2O, 360 ml). La mezcla se agito durante 4 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentro al vado para producir intermedio 17 (42 g) en forma de un solido blanco, que se uso tal cual en la siguiente etapa de reaccion.

Ejemplo A17

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Preparacion de intermedio 18.

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A una solucion enfriada de intermedio 17 (41,3 g, 145 mmol) en H2O (150 ml), se le anadio una solucion de cloruro de cloroacetilo (24 ml, 304,5 mmol) en 1,4-dioxano (75 ml) gota a gota. Simultaneamente, se anadio NaOH (5 M en H2O, 29 ml) para ajustar el pH a 10-11. La capa organica se separo, y la capa acuosa se extrajo con Et2O. Despues, la capa acuosa se acidifico con HCl (6 M, en H2O) hasta pH 2. El solido blanco precipitado se recogio por filtracion, se lavo con H2O y se seco para producir intermedio 18 (42 g, rendimiento del 86 %).

Ejemplo A18

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Se disolvieron intermedio 18 (42 g, 124 mmol) y NaHCO3 (20,8 g, 248 mmol) en DMF (1000 ml), y la mezcla de reaccion se agito a 80 °C durante 3 horas. La mezcla se concentro parcialmente a presion reducida, se enfrio hasta t.a. y despues se filtro sobre tierra de diatomeas. El filtrado se concentro al vado, y el residuo se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: MeOH/DCM 0/100 a 5/95). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 19 (36 g, rendimiento del 96 %).

Ejemplo A19

imagen26

Una solucion de intermedio 19 (10 g, 21,5 mmol) en THF (105 ml) se enfrio hasta -78 °C en atmosfera de N2. Despues, se anadio lentamente hidruro de diisobutilaluminio (43 ml, 43 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 2 horas dejando que se calentara lentamente hasta temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se enfrio hasta 0 °C y se inactivo mediante adicion lenta de solucion acuosa 1 N de HCl. La mezcla entonces se extrajo con EtOAc, las capas organicas se separaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vado para producir intermedio 20 (6,6 g, rendimiento cuant., mezcla de diaestereoisomeros 80/20) que se uso tal cual en la siguiente etapa de reaccion.

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Se disolvio intermedio 20 (6,3 g, 20,7 mmol) en DCM (84 ml) y la reaccion se enfrio hasta 0 °C. Despues se anadio

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DAST (3 ml, 24,9 mmol) gota a gota. Despues de 20 min a 0 °C, la mezcla de reaccion se inactivo con solucion ac. sat. de NaHCO3 y se extrajo con DCM. Las capas organicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron, y el disolvente se evaporo al vado. El producto en bruto se suspendio en DIPE, se retiro por filtracion y se seco al vado a 60 °C para producir intermedio 21 (4,2 g, rendimiento del 66 %, mezcla de diaestereoisomeros 80/20).

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Se sintetizo intermedio 22 siguiendo el mismo enfoque descrito en el Ejemplo A9. Partiendo de intermedio 21 (4,2 g, 13,7 mmol) se obtuvo intermedio 22 (3 g, rendimiento del 68 %, mezcla de diaestereoisomeros 60/40).

Ejemplo A22

Preparacion de intermedio 23 y 24.

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Se disolvio intermedio 22 (6 g, 18,6 mmol) en amoniaco 7 N en MeOH (300 ml) y la mezcla de reaccion se agito a 60 °C durante 18 horas. El disolvente se evaporo y se anadio amoniaco 7 N adicional en MeOH (300 ml) y la mezcla se agito a 60 °C durante 18 horas adicionales. Despues, el disolvente se evaporo y el producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna (gel de sflice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 10/90). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 23 (3,7 g, rendimiento del 65 %) e intermedio 24 (0,6 g, rendimiento del 11 %).

Ejemplo A23

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Se combino intermedio 23 (1,6 g, 5,24 mmol) con NaN3 (0,85 g, 13 mmol), Cul (1,25 g, 6,5 mmol) y Na2CO3 (1,1 g, 10,5 mmol) en DMSO (75 ml) y la reaccion se desgasifico. Despues de eso, se anadio W,W-dimetiletilendiamina (1 ml, 9,1 mmol) y la mezcla se calento a 110 °C hasta completarse la reaccion, aproximadamente 4 horas. La mezcla de reaccion se vertio en DCM. Se anadio hidroxido de amonio (28 % en agua) y la capa organica se separo y se lavo tres veces con hidroxido de amonio. Despues, la capa organica se seco (Mg2SO4), se filtro y se concentro al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna (gel de silice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 10/90). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 25 (0,3 g, rendimiento del 24 %).

Ejemplo A24

Preparacion de intermedio 26.

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A una solucion de intermedio 19 (11,6 g, 38,5 mmol) en THF (117 ml) se le anadio TBAT (2,08 g, 3,85 mmol). Despues, se anadio (trifluorometil)trimetilsilano (12,5 ml, 84,6 mmol) gota a gota, y la m.r. se agito a temperatura ambiente durante 20 minutos. La mezcla se inactivo con NaCl acuoso y se extrajo con EtOAc. Las capas organicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vado para producir intermedio 26 (14 g, rendimiento del 98 %) como una mezcla de isomeros cis y trans, que se uso tal cual en la siguiente etapa.

imagen32

Se disolvio intermedio 26 (14 g, 37,6 mmol) en DCM (600 ml) y se enfrio hasta 0 °C y despues se anadio cloruro de tionilo (11,2 ml, 150 mmol) gota a gota. La mezcla de reaccion se agito durante 30 min a 0 °C y despues se anadio piridina (18,2 ml, 225,7 mmol). Despues de 30 minutos, la reaccion se hidrolizo con una solucion acuosa 1 N de HCl y despues se extrajo con DCM. Las capas organicas se separaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vacfo. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 2/98). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 27 (6 g, rendimiento del 41 %, mezcla de diaestereoisomeros).

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Se agitaron intermedio 27 (7 g, 17,9 mmol) y par de zinc cobre (8,55 g, 66,3 mmol) en acido acetico (420 ml) a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reaccion se filtro, se lavo con DCM y se concentro al vado. Se anadieron solucion de hidroxido de amonio (28 % en agua) y DCM y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante una hora. La capa organica se separo y la capa acuosa se extrajo con DCM. Las capas organicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron al vado para producir intermedio 28 (6 g, rendimiento del 99 %) en forma de un polvo blanco.

Ejemplo A27

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Se anadio P2S5 (5,95 g, 26,8 mmol) a una solucion de intermedio 28 (6 g, 17,9 mmol) en THF (145 ml) a temperature ambiente. La mezcla se agito a 70 °C durante 90 minutos. Despues, la mezcla se enfrio hasta temperatura ambiente, se retiro por filtracion y el disolvente organico se evaporo al vado para producir intermedio 29 (5,9 g), que se uso tal cual en la siguiente etapa.

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Se sintetizo intermedio 30 siguiendo el mismo enfoque descrito en el Ejemplo A22. Partiendo de intermedio 29 (5,9 g, 16,8 mmol) se obtuvo intermedio 30 (4,04 g, rendimiento del 72 %).

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Se sintetizo intermedio 31 siguiendo el mismo enfoque descrito en el Ejemplo A23. Partiendo de intermedio 30 (3,6 g, 10,7 mmol) se obtuvo intermedio 31 (1,52 g, rendimiento del 52%).

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A una solucion de intermedio 27 (3 g, 7,68 mmol) en acido acetico (136 ml), se le anadio zinc (1,26 g, 19,2 mmol). La mezcla de reaccion despues se agito a 80 °C durante 3 horas, despues de eso la reaccion se filtro en caliente y se concentro al vado. El residuo se disolvio en DCM y se lavo con solucion de hidroxido de amonio. La fase organica se separo, se seco (MgSO4) y el disolvente se concentro al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna (gel de sflice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 3/97). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 32 (2,7 g, rendimiento del 99 %).

Ejemplo A31

Preparacion de intermedio 33.

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Se anadio reactivo de Lawesson (6,82 g, 16,85 mmol) a una solucion de intermedio 32 (6 g, 16,85 mmol) disuelto en THF (68 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a 60 °C durante 4 horas. Despues, la mezcla se enfrio hasta temperatura ambiente, se retiro por filtracion y el disolvente organico se evaporo al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: heptanos/DCM 100/0 a 50/50). Las fracciones deseadas se recogieron y se evaporaron al vado para producir intermedio 33 (6 g, rendimiento del 96 %) en forma de un aceite amarillento.

Ejemplo A32

Preparacion de intermedio 34 e intermedio 35.

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Se disolvio intermedio 33 (6 g, 16,1 mmol) en amoniaco 7 N en MeOH (97 ml) y la mezcla de reaccion se agito a 80 °C durante 24 horas. Despues, el disolvente se evaporo y el producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna (gel de sflice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 2/98). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir intermedio 34 (3,4 g, rendimiento del 59 %) e intermedio 35 (0,75 g, rendimiento del 13 %).

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Se combino intermedio 34 (3,4 g, 9,6 mmol) con NaN3 (1,56 g, 24 mmol), Cul (2,28 g, 12 mmol) y Na2CO3 (2,03 g, 19,1 mmol) en DMSO (137 ml) y la reaccion se desgasifico. Despues de eso, se anadio W,W-dimetiletilendiamina (1,8 ml, 16,8 mmol) y la mezcla se calento a 110 °C hasta completarse la reaccion, aproximadamente 1 hora. La mezcla de reaccion se retiro por filtracion y la torta de filtro se lavo con EtOAc. Se anadieron agua y EtOAc al filtrado y la mezcla se acidifico mediante la adicion de HCl (1 M en H2O). La capa organica entonces se separo y la capa acuosa se lavo con EtOAc. Despues, la capa acuosa se basifico con una solucion ac. de amoniaco y se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas organicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vado para producir intermedio 36 (2,5 g, rendimiento del 90 %).

ao: -94,91 ° (0589 nm, c 0,393 % p/v, MeOH, 20 °C)

B. Preparacion de los compuestos finales

Ejemplo B1

Preparacion de compuesto 1: (5R,6S)-5-ciclopropil-6-fluoro-5-(3-r(3-metoxipiridin-2-il)amino1fenil}-6-(trifluorometil)- 5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina

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Se disolvio intermedio 12 (0,07 g, 0,221 mmol) en isopropanol (5 ml) y se anadieron 2-bromo-3-metoxipiridina (0,083 g, 0,441 mmol) y acido sulfurico (0,108 g, 1,1 mmol). La mezcla se agito durante 40 horas a 80 °C. La mezcla se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. Se anadieron DCM y solucion sat. ac. de NaHCO3. Las capas organicas se separaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de sflice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 10/90). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado. El residuo entonces se disolvio en DIPE y se convirtio en la sal HCl mediante la adicion de HCl en isopropanol. El solido resultante se filtro y se seco al vado para producir compuesto 1 (0,025 g, rendimiento del 25 %) en forma de sal clorddrica.

Ejemplo B2

Preparacion de compuesto 2: f5R6ffl-6-fluoro-5-(2-fluoro-5-r(3-metoxipiridin-2-il)aminolfenil}-5-metil-5,6-dihidro-2H- 1,4-oxazin-3-amina

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Se disolvio intermedio 25 (0,3 g, 1,24 mmol) en isopropanol (15 ml) y se anadieron 2-bromo-3-metoxipiridina (0,467 g, 2,49 mmol) y acido sulfurico (0,61 g, 6,22 mmol). La mezcla se agito durante 40 horas a 80 °C. La mezcla se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. Se anadieron DCM y solucion sat. ac. de NaHCO3. Las capas organicas se separaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vado. El producto en bruto se purifico por HPLC preparativa en (RP Vydac Denali® C18 - 10 pm, 200 g, 5 cm). Fase movil (solucion al 0,25 % de NH4HCO3 en agua, CH3CN) para producir compuesto 2 (0,044 g, rendimiento del 10 %).

Ejemplo B3

Preparacion de compuesto 3: f5ffl-6-(difluorometilideno)-5-(2-fluoro-5-r(3-metoxi-piridin-2-il)aminolfenil}-5-metil-5,6- dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina

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Se disolvio intermedio 31 (0,35 g, 1,29 mmol) en isopropanol (15 ml) y se anadieron 2-bromo-3-metoxipiridina (0,485 g, 2,58 mmol) y acido sulfurico (0,34 ml, 6,45 mmol). La mezcla se agito durante 72 horas a 80 °C. La mezcla se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. Se anadieron DCM y solucion sat. ac. de NaHCO3. Las capas organicas se separaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de sflice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 2/98). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado. El residuo se suspendio en DIPE/heptanos, se filtro y se seco a alto vado para producir compuesto 3 (0,279 g, rendimiento del 57 %) en forma de un polvo blanco.

Ejemplo B4

Preparacion de compuesto 4: (5R,6R*)-6-(difluorometil)-5-12-fluoro-5-r(3-metoxi-piridin-2-il)aminolfenil}-5-metil-5,6- dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina

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Se disolvio compuesto 3 (0,228 g, 0,603 mmol) en EtOAc (4 ml) y se anadieron paladio sobre carbono (10 %) (0,064 g, 0,06 mmol) y tiofeno (solucion al 0,4% en THF, 0,8 ml, 0,041 mmol). La mezcla se hidrogeno a t.a. y presion atmosferica durante 16 horas. El catalizador se retiro por filtracion y los disolventes se evaporaron al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 2/98). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado. El residuo se suspendio en DIPE/heptanos, se filtro y se seco a alto vado para producir compuesto 4 (0,074 g, rendimiento del 32 %).

Ejemplo B5

Preparacion de compuesto 5: f5R6ffl-6-fluoro-5-r2-fluoro-5-(pirimidin-2-ilamino)fenill-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4- oxazin-3-amina

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Se disolvio intermedio 25 (0,048 g, 0,199 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml) y se anadieron 2-bromopirimidina (0,032 g, 0,199 mmol) y solucion 4 M de HCl en dioxano (0,1 ml, 0,4 mmol). La mezcla se agito durante 16 horas a 100 °C. La mezcla se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. Se anadieron DCM y solucion sat. ac. de NaHCO3. Las capas organicas se separaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 5/95). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron al vado para producir compuesto 5 (0,013 g, rendimiento del 20 %).

Ejemplo B6

Preparacion de compuesto 6: f5R6ffl-5-(2-fluoro-5-r(3-metoxipiridin-2-il)aminolfeniff-5-metil-6-(trifluorometil)-5,6- dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina

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Se disolvio intermedio 36 (0,1 g, 0,343 mmol) en isopropanol (4 ml) y se anadieron 2-bromo-3-metoxipiridina (0,129 g, 0,687 mmol) y acido sulfurico (0,09 ml, 1,72 mmol). La mezcla se agito durante 40 horas a 80 °C. La mezcla se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. Se anadieron DCM y solucion sat. ac. de NaHCO3. Las capas organicas se separaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de sflice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 5/95) para producir compuesto 6 (0,013 g, rendimiento del 20 %).

Ejemplo B7

Preparacion de compuesto 7: f5R,6R)-5-r2-fluoro-5-(pirimidin-2-ilamino)fenill-5-metil-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H- 1,4-oxazin-3-amina

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Se disolvio intermedio 36 (0,1 g, 0,343 mmol) en 1,4-dioxano (3,4 ml) y se anadieron 2-bromopirimidina (0,055 g, 0,343 mmol) y solucion 4 M de HCl en dioxano (0,17 ml, 0,69 mmol). La mezcla se agito durante 16 horas a 100 °C. La mezcla se dejo enfriar hasta temperatura ambiente. Se anadieron DCM y solucion sat. ac. de NaHCO3. Las capas organicas se separaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 5/95). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron. Este producto en bruto se purifico por HPLC preparativa en (Chiralpal Diacel AS 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, MeOH con iPrNH2 al 0,2 %) para producir compuesto 7 (0,036 g, rendimiento del 28 %).

Ejemplo B8

Preparacion de compuesto 8: (5R6ffl-6-fluoro-5-(2-fluoro-5-r(3-metoxipirazin-2-il)aminolfenil}-5-metil-5,6-dihidro- 2H-1,4-oxazin-3-amina

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Se disolvio intermedio 25 (0,15 g, 0,622 mmol) en 1,4-dioxano (6 ml). Se anadieron 2-yodo-3-metoxipirazina (0,12 g, 0,508 mmol), carbonato de cesio (0,405 g, 1,244 mmol, 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (0,052 g, 0,093 mmol) y tris(dibencilidenoacetona) dipaladio (0) (0,028 g, 0,031 mmol). El tubo de reaccion se cerro hermeticamente y la mezcla se agito a 160 °C durante 1 hora bajo radiacion microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se diluyo con DCM y se filtro sobre dicalite. El filtrado se concentro al vado. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 5/95). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron. Este producto en bruto se purifico adicionalmente por HPLC preparativa en (Chiralpal Diacel AS 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, MeOH con iPrNH2 al 0,2 %) para producir compuesto 8 (0,010 g, rendimiento del 5 %).

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Se disolvieron intermedio 25 (0,30 g, 1,244 mmol) y 2-bromonicotinonitrilo (455 mg, 2,487 mmol) en 1,4-dioxano (12,5 ml), despues se anadio una solucion 4 M de HCl en dioxano (0,933 ml, 3,731 mmol) gota a gota. La mezcla de reaccion se agito durante 16 horas a 120 °C. Despues se anadio una solucion sat. ac. de NaHCO3, seguida de DCM. Las fases se separaron y la capa organica se concentro a presion reducida. El aceite resultante se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 5/95). Las fracciones deseadas se recogieron y se purificaron adicionalmente por SFC preparativa en (Chiralcel Diacel DE 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, iProH con iPrNH2 al 0,2 %), para producir compuesto 9 (0,006 g, 1 %)

Ejemplo B10

Preparacion de compuesto 10:

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Se disolvio intermedio 25 (0,482 g, 2 mmol) en iPrOH (24 ml), despues se anadieron 2,3-dibromopiridina (0,948 g, 4 mmol) y acido sulfurico (0,533 ml, 10 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 4 d^as a 80 °C. La reaccion se dejo enfriar, despues se anadieron DCM y una solucion sat. ac. de NaHCO3. Las fases se separaron y la capa organica se seco y se concentro a presion reducida. El aceite resultante se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de sflice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 10/90). Las fracciones deseadas se recogieron y se purificaron adicionalmente por SFC preparativa (Chiralpak Daicel AS 20 microhm 500 g). Fase movil (CO2, iPrOH con iPrNH2 al 0,2 %), para producir compuesto 10 (0,135 g, 17 %).

imagen51

Se disolvio intermedio 36 (0,358 g, 1,229 mmol) en 1,4-dioxano (14,7 ml). Se anadieron 2-bromo-3-cianopiridina (0,191 g, 1,045 mmol), carbonato de cesio (0,800 g, 2,458 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (0,104 g, 0,184 mmol) y la mezcla se agito en atmosfera de argon durante unos pocos minutos. Despues se anadio tris(dibencilideno-acetona)dipaladio(0) (0,056 g, 0,062 mmol). El tubo de reaccion se cerro hermeticamente y la mezcla se agito a 160 °C durante 1 hora bajo radiacion microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se diluyo con DCM y se filtro sobre dicalite. El filtrado se concentro al vacfo. El producto en bruto se purifico por cromatograffa en columna ultrarrapida (gel de silice; eluyente: solucion 7 M de amoniaco en metanol/DCM 0/100 a 5/95). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron. Este producto en bruto se purifico adicionalmente por SFC preparativa en (Chiralpal Diacel AS 20 x 250 mm). Fase movil (CO2, MeOH con iPrNH2 al 0,2 %) para producir compuesto 11 (0,052 g, rendimiento 11 %).

Los compuestos 1 a 11 en las tablas 1-5 enumeran los compuestos que se prepararon por analogfa a uno de los Ejemplos anteriores. En caso de que no se mdice forma salina, el compuesto se obtuvo como una base libre. "N.° Ej." se refiere al numero de Ejemplo de acuerdo con el protocolo con que se sintetizo el compuesto. "N.° Co." significa numero de compuesto.

Tabla 1:

imagen52

X,^ *X3

At

N.° Co.

N.° Ej. Xi,X2, x3,x4 —L-Ar estereoquimica

1

B1 X1=X2=X3=X4=CH C5(R);Ca(S)

Diastereoisomero individual

, X) Enantiomero puro

N N H

Tabla 2:

imagen53

Xfv *X3

At

N.° Co.

N.° Ej. Xi,X2, x3,x4 —L-Ar estereoquimica

2

B2 Xi=CF X2=X3=X4=CH "°r) H C5(R);Ca(R) Diastereoisomero individual Enantiomero puro

5

B5 Xi=CF X2=X3=X4=CH N N H C5(R);Ca(R) Diastereoisomero individual Enantiomero puro

9

B9 Xi=CF X2=X3=X4=CH N N H C5(R);Ca(R) Diastereoisomero individual Enantiomero puro

10

B10 Xi=CF X2=X3=X4=CH :rD N N H C5(R);Ca(R) Diastereoisomero individual Enantiomero puro

Tabla 3:

F

imagen54

*X3

N.° Co.

N.° Ej. Xi,X2, x3,x4 —L-Ar estereoquimica

3

B3 Xi=CF X2=X3=X4=CH "Y) H C5(R) Enantiomero puro

Tabla 4:

imagen55

N.° Co.

N.° Ej. Xi,X2, x3,x4 —L-Ar estereoquimica

4

B4 Xi=CF X2=X3=X4=CH "°D H C5(R);Ca(R*) Diastereoisomero individual Enantiomero puro

5

10

15

20

25

30

35

40

Tabla 5:

imagen56

N.° Co.

N.° Ej. Xi,X2, x3,x4 — L-Ar estereoquimica

6

B6 X-fCF X2= X3= X4=CH /O- n C5(R);Ca(R) Diastereoisomero individual Enantiomero puro

'N H N

7

B7 X-fCF X2=X3=X4=CH ''N H N C5(R);Ca(R) Diastereoisomero individual Enantiomero puro

11

B11 Xi=CF X2=X3=X4=CH V n C5(R);Ca(R) Diastereoisomero individual Enantiomero puro

''N' H ■V

C. Parte analitica

LCMS

Para la caracterizacion (LC)MS de los compuestos de la presente invencion, se usaron los siguientes metodos. Procedimiento general:

La medicion LC se realizo usando un sistema Acquity UPLC (Waters) que comprende una bomba binaria, un organizador de muestras, un calentador de columna (ajustado a 55 °C), un detector de serie de diodo (DAD) y una columna especificada en los siguientes metodos respectivos. El flujo procedente de la columna se dividio en un espectrometro MS. El detecto MS se configuro con una fuente de ionizacion por electronebulizacion. Los espectros de masas se adquirieron por exploracion de 100 a 1000 en 0,18 segundos usando un tiempo de residencia de 0,02 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue 3,5 kV y la temperatura de la fuente se mantuvo a 140 °C. Se uso nitrogeno como gas nebulizador. La adquisicion de datos se realizo con un sistema de datos Waters-Micromass MassLynx-Openlynx.

Metodo 1:

Se realizo UPLC (cromatograffa lfquida de ultra-alto rendimiento) en fase inversa en una columna C18 de etilsiloxano/silice hnbrida (BEH) unida (1,7 pm, 2,1 x 50 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 ml/min. Se usaron dos fases moviles (fase movil A: acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase movil B: acetonitrilo) para ejecutar una condicion de gradiente de 95 % de Ay 5 % de B a 5 % de Ay 95 % de B en 1,3 minutos y se mantuvo durante 0,2 minutos. Se uso un volumen de inyeccion de 0,5 pl.

El voltaje de cono fue 10 V para el modo de ionizacion positiva y 20 V para el modo de ionizacion negativa.

Metodo 2:

Se realizo UPLC (cromatograffa lfquida de ultra-alto rendimiento) en fase inversa en una columna C18 de etilsiloxano/sflice hforida (BEH) unida (1,7 pm, 2,1 x 50 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 ml/min. Se usaron dos fases moviles (acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase movil B: acetonitrilo) para ejecutar una condicion de gradiente de 95 % de Ay 5 % de B a 5 % de Ay 95 % de B en 1,3 minutos y se mantuvo durante 0,3 minutos. Se uso un volumen de inyeccion de 0,5 pl.

El voltaje de cono fue 10 V para el modo de ionizacion positiva y 20 V para el modo de ionizacion negativa.

Metodo 3:

Se realizo UPLC (cromatograffa Ifquida de ultra-alto rendimiento) en fase inversa en una columna C18 de etilsiloxano^lice tnbrida (BEH) unida (1,7 pm, 2,1 x 50 mm; Waters Acquity) con un caudal de 0,8 ml/min. Se usaron dos fases moviles (acetato de amonio 10 mM en H2O/acetonitrilo 95/5; fase movil B: acetonitrilo) para ejecutar una 5 condicion de gradiente de 95 % de Ay 5 % de B a 5 % de Ay 95 % de B en 1,3 minutos y se mantuvo durante 0,3 minutos. Se uso un volumen de inyeccion de 0,5 pl.

El voltaje de cono fue 10 V para el modo de ionizacion positiva y 20 V para el modo de ionizacion negativa.

10 Puntos de fusion

Los valores son valores maximos o intervalos de fusion, y se obtiene con incertidumbres experimentales que estan habitualmente asociadas con este metodo analttico.

15 DSC823e (indicado por DSC en la Tabla 6)

Para varios compuestos, los puntos de fusion se determinaron con un DSC823e (Mettler-Toledo). Los puntos de fusion se midieron con un gradiente de temperatura de 30 °C/minuto. La temperatura maxima fue 400 °C.

20 Tabla 6: Datos analiticos - Rt significa tiempo de retencion (en minutos), [M+H]+ significa la masa protonada del

compuesto, metodo se refiere al metodo usado para (LC)MS.

o o o z

Rt TM+H1+ Metodo Punto de fusion

1

1,10 425 2 n.d.

2

0,81 349 2 n.d.

3

0,90 379 2 b.r.

4

0,78 381 2 136,93°C

5

0,67 320 1 n.d.

6

0,94 399 2 n.d.

7

0,8 370 2 n.d.

8

0,82 350 3 n.d.

9

0,81 344 1 n.d.

10

0,90 398 2 n.d.

11

0,87 394 3 n.d.

n.d. significa no determinado, a. significa intervalo ancho

Rotaciones opticas

25

Las rotaciones opticas se midieron en un polanmetro Perkin-Elmer 341 con una lampa de sodio y se presentaron del siguiente modo: [a]A4°C (c g/100 ml, disolvente).

Jabja_7l Datos analiticos - Valores de rotacion optica para compuestos enantiomericamente puros

N.° Co.

aD(°) Longitud de onda (nm) Concentracion % p/v Disolvente Temp. (° C)

3

-163,16 589 0,456 DMF 20

4

+ 196,03 365 0,1765 DMF 20

6

+9,12 365 0,57 DMF 20

30

RMN

Para varios compuestos, se registraron los espectros de RMN de 1H en un espectrometro Bruker DPX-360, en un Bruker DPX-400 o en un Bruker Avance 600 con secuencias normales de impulso, funcionando a 360 MHz, 400 35 MHz y 600 MHz respectivamente, usando CLOROFORMO-d (cloroformo deuterado, CDCh) o DMSO-d6 (DMSO deuterado, dimetil-d6 sulfoxido) como disolventes. Los desplazamientos qrnmicos (6) se presentan en partes por millon (ppm) respecto a tetrametilsilano (TMS), que se uso como patron interno.

Tabla 8:

N.° Co.

Resultado de RMN

4

'H RMN (360 MHz, DMSO-ds) d ppm 1,52 (s, 3 H) 3,87 (s, 3 H) 3,90 - 4,04 (m, 1 H) 4,06 - 4,21 (m, 2 H) 5,43 -5,75 (m, 1 H) 5,77 (br. s., 2 H) 6,73 (dd, J=7,7, 5,1 Hz, 1 H) 6,99 (dd, J=11,7, 8,8 Hz, 1 H) 7,19 (d, J=7,0 Hz, 1 H) 7,71 (d, J=4,0 Hz, 1 H) 7,85 (ddd, J=8,2, 3,7, 3,5 Hz, 1 H) 7,91 (dd, J=7,0, 2,6 Hz, 1 H) 8,04 (s, 1H)

5

‘H RMN (360 MHz, CDCl3-d): 6 1,62 (t, J=1,8 Hz, 3 H) 3,24-3,85 (m, 2 H) 3,95 - 4,28 (m, 2 H) 5,93 - 6,14 (m, 1 H) 6,68 (t, J=4,76 Hz, 1 H) 7,02 (dd, J=11,53, 8,96 Hz, 1 H) 7,32 (dd, J=6,95, 2,93 Hz, 1 H) 7,63 - 7,74 (m, 2 H) 8,37 (d, J=4,76 Hz, 2 H)

6

’H RmN (360 MHz, CDCla-d): 6 1,67 (s, 3 H) 3,90 (s, 3 H) 4,22 (s, 2 H) 4,65 (c, J=8,40 Hz, 1 H) 6,68 (dd, J=8,05, 5,12 Hz, 1 H) 6,91 - 7,04 (m, 2 H) 7,08 (s, 1 H) 7,65 (dd, J=6,59, 2,93 Hz, 1 H) 7,80 (dd, J=5,12, 1,10

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Hz, 1 H) 8,07 -8,17 (m, 1 H)

7

'H RmN (360 MHz,, CDCla-d): 6 1,68 (s, 3 H) 4,22 (s, 4 H) 4,63 (c, J=8,05 Hz, 1 H) 6,70 (t, J=4,76 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=11,34, 8,78 Hz, 1 H) 7,22 (s, 1 H) 7,70 (dd, J=6,59, 2,93 Hz, 1 H) 7,89 (dt, J=8,78, 3,66 Hz, 1 H) 8,40 (d, J=4,76 Hz, 2 H)

8

‘H rMn (360 MHz, , CDCla-d): 6 1,65 (t, J=1,83 Hz, 3 H) 3,97-4,30 (m, 5 H) 5,95 - 6,17 (m, 1 H) 6,95 - 7,10 (m, 2 H) 7,39 (dd, J=6,95, 2,93 Hz, 1 H) 7,46 (d, J=2,93 Hz, 1 H) 7,64 (d, J=3,29 Hz, 1 H) 7,86 (ddd, J=8,78, 4,03, 2,93 Hz, 1 H)

9

’H RMN (360 MHz, CDCl3-d): d 1,21 (d, J=6,22 Hz, 3 H) 3,98-4,30 (m, 2 H) 5,91 - 6,15 (m, 1 H) 6,78 (dd, J=7,68, 4,76 Hz, 1 H) 6,95 - 7,11 (m, 2 H) 7,31 (dd, J=6,77, 2,74 Hz, 1 H) 7,64-7,72 (m, 1 H) 7,75 - 7,83 (m, 1 H) 8,33 (dd, J=5,12, 1,83 Hz, 1 H)

10

lH RMN (360 MHz, CDCl3-d): d 1,66 (t, J=1,65 Hz, 3 H) 3,97-4,30 (m, 2 H) 5,94 - 6,16 (m, 1 H) 6,62 (dd, J=7,68, 4,76 Hz, 1 H) 6,93 (s, 1 H) 7,04 (dd, J=11,34, 8,78 Hz, 1 H) 7,32 (dd, J=6,95, 2,93 Hz, 1 H) 7,65 - 7,78 (m, 2 H) 8,10 (dd, J=4,76, 1,46 Hz, 1 H)

11

1H rMn (360 MHz, CDCl3-d): d ppm 1,67 (s, 3 H) 4,14 - 4,34 (m, 4 H) 4,65 (d, J=8,42 Hz, 1 H) 6,78 (dd, J=7,50, 4,94 Hz, 1 H) 6,98 - 7,08 (m, 2 H) 7,71 (dd, J=6,59, 2,93 Hz, 1 H) 7,78 (dd, J=7,68, 1,83 Hz, 1 H) 7,94 (ddd, J=8,78, 4,03, 2,93 Hz, 1 H) 8,37 (dd, J=5,12, 1,83 Hz, 1 H)

D. Ejemplos farmacologicos

Los compuestos proporcionados en la presente invencion son inhibidores de la enzima 1 de escision de APP en sitio beta (BACE1). Se cree que la inhibicion de BACE1, una proteasa aspartica, es relevante para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer (AD). Se cree que la produccion y acumulacion de peptidos beta-amiloides (Abeta) a partir de la protema precursora de beta-amiloide (ApP) desempena un papel clave en la aparicion y progresion de AD. Abeta se produce a partir de la protema precursora amiloide (APP) por escision secuencial en los extremos N- y C- terminales del dominio Abeta por la beta-secretasa y gamma-secretasa, respectivamente.

Se espera que los compuestos de Formula (I) tengan su efecto sustancialmente en BACE1 en virtud de su capacidad de inhibir la actividad enzimatica. El comportamiento de dichos inhibidores ensayado usando un ensayo bioqmmico basado en transferencia de energfa de resonancia de fluorescencia (FRET) y un ensayo celular aLisa en celulas SKNBE2 descritos a continuacion y que son adecuados para la identificacion de dichos compuestos, y mas particularmente los compuestos de acuerdo con la Formula (I), se muestran en la Tabla 9 y Tabla 10.

Ensayo bioqu^mico basado en FRET

Este ensayo es un ensayo basado en ensayo de transferencia de energfa de resonancia de fluorescencia (FRET). El sustrato para este ensayo es un APP derivado del peptido de 13 aminoacidos que contiene la mutacion "Sueca" Lys- Met/Asn-Leu del sitio de escision de beta-secretasa de la protema precursora amiloide (APP). Este sustrato tambien contiene dos fluoroforos: acido (7-metoxicumarin-4-il)acetico (Mca) es un donante fluorescente con longitud de onda de excitacion a 320 nm y emision a 405 nm y 2,4-dinitrofenilo (Dnp) es un aceptor desactivador patentado. Se ha seleccionado la distancia entre esos dos grupos de modo que, tras excitacion con luz, la energfa de fluorescencia del donante se inactive significativamente por el aceptor, a traves de transferencia de energfa de resonancia. Tras la escision por BACE1, el fluoroforo Mca se separa del grupo inactivador Dnp, restaurando la produccion completa de fluorescencia del donante. El aumento en la fluorescencia esta linealmente relacionado con la tasa de proteolisis.

En resumen, en un formato de 384 pocillos se incuba protema BACE1 recombinante en una concentracion final de 1 |jg/ml durante 120 minutos a temperatura ambiente con sustrato 10 pm en tampon de incubacion (tampon citrato 40 mM pH 5,0, PEG al 0,04 %, DMSO al 4 %) en ausencia o presencia de compuesto. A continuacion, se mide directamente la cantidad de proteolisis por medicion de la fluorescencia a T = 0y T=120 (excitacion a 320 nm y emision a 405 nm). Los resultados se expresan en RFU (unidades entre T120 y T0.

Se ajusta una curva de mejor ajuste por un metodo de suma minima a la concentracion de compuesto. A partir de esto puede obtenerse causa un 50 % de inhibicion de la actividad).

LC = Mediana de los valores de control bajo = Control bajo: Reaccion sin enzima HC= Mediana de los valores de control alto = Control alto: Reaccion con enzima %Efecto = 100-[(muestra-LC)/(HC-LC)*100]

%Control = (muestra/HC)*100 %Controlmin = (muestra-LC)/(HC-LC)*100

Los siguientes compuestos ejemplificados se ensayaron esencialmente como se ha descrito anteriormente y mostraron la siguiente actividad:

relativas de fluorescencia), como la diferencia

de cuadrados al grafico de %Controlmin frente un valor de CI50 (concentracion inhibidora que

5

10

15

20

25

30

35

Tabla 9:

N.° Co.

Ensayo bioqmmico basado en FRET PCI50

1

7,58

2

6,79

3

6,12

4

7,23

5

5,71

6

6,86

N.° Co.

Ensayo bioqmmico basado en FRET PCI50

7

5,43

8

6,51

9

6,65

10

n.t.

11

n.t.

Ensayo celular aLisa en celulas SKNBE2

En dos ensayos aLisa se cuantificaron los niveles de Abeta total y Abeta 1-42 producidos y secretados en el medio de celulas de neuroblastoma humano SKNBE2. El ensayo se basa en el neuroblastoma humano SKNBE2 que expresa la protema precursora amiloide de tipo silvestre (hAPP695). Los compuestos se diluyen y anaden a estas celulas, se incuban durante 18 horas y despues se toman mediciones de Abeta 1-42 y Abeta total. Se miden Abeta total y Abeta 1-42 por aLisa de tipo sandwich. aLisa es un ensayo de tipo sandwich que usa anticuerpo biotinilado AbN/25 unido a perlas recubiertas con estreptavidina y anticuerpo Ab4G8 o cAb42/26 conjugado con perlas aceptoras para la deteccion de Abeta total y Abeta 1-42 respectivamente. En presencia de Abeta total o Abeta 1-42, las perlas quedan en cercana proximidad. La excitacion de las perlas donantes provoca la liberacion de moleculas de oxfgeno singlete que desencadenan una cascada de transferencia de energfa en las perlas aceptoras, provocando emision de luz. La emision de luz se mide despues de 1 hora de incubacion (excitacion a 650 nm y emision a 615 nm).

Se ajusta una curva de mejor ajuste por un metodo de suma minima de cuadrados al grafico de %Controlmin frente a la concentracion de compuesto. A partir de esto puede obtenerse un valor de CI50 (concentracion inhibidora que causa un 50 % de inhibicion de la actividad).

LC = Mediana de los valores de control bajo

= Control bajo: celulas preincubadas sin compuesto, sin Ab biotinilado en el aLisa HC= Mediana de los valores de control alto

= Control alto: celulas preincubadas sin compuesto %Efecto = 100-[(muestra-LC)/(HC-LC)*100]

%Control = (muestra/HC)*100 %Controlmin = (muestra-LC)/(HC-LC)*100

Los siguientes compuestos ejemplificados se ensayaron esencialmente como se ha descrito anteriormente y mostraron la siguiente actividad:

Tabla 10:

d 0 0 z.

Ensayo celular aLisa en celulas SKNBE2 Abeta 42 PIC50 Ensayo celular aLisa en celulas SKNBE2 Abeta total PIC50

1

7,22 7,27

2

7,62 7,71

3

6,98 7,05

4

8,04 7,98

5

5,9 5,96

6

7,67 7,68

7

6,12 6,08

8

6,89 6,86

9

6,89 7,06

10

n.t. n.t.

11

n.t. n.t.

n.t. significa no ensayado

Claims (8)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   55

   60

   REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de Formula (I)

   imagen1

   o un tautomero o una forma estereoisomerica del mismo, en el que

   R1 es fluoro, fluorometilo, difluorometilo o trifluorometilo;

   R2 es hidrogeno o trifluorometilo; o R1 y R2forman un radical divalente =CF2;

   3

   R es hidrogeno, alquilo C1-3, ciclopropilo, mono- o polihaloalquilo C1-3;

   R4 es hidrogeno o fluoro;

   Ar es homoarilo o heteroarilo;

   en el que homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquil Ci-3-oxi, mono- y polihaloalquilo C1-3, mono- y polihaloalquil Ci-3-oxi; heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, pirazilo, piridazilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquinilo C2-3, alquil Ci-3-oxi, mono- y polihaloalquilo C1-3, mono- y polihaloalquil Ci-3-oxi, y alquil C1-3- oxialquil Ci-3-oxi; o una sal de adicion del mismo.
2. 2. El compuesto de la reivindicacion 1, en el que R1 es fluoro, difluorometilo o trifluorometilo;

   R2 es hidrogeno o trifluorometilo; o R1 y R2forman un radical divalente =CF2;

   R3 es alquilo C1.3, ciclopropilo, mono- o polihaloalquilo C1-3;

   R4 es hidrogeno o fluoro;

   Ar es heteroarilo;

   en el que heteroarilo es piridilo o pirimidilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquinilo C2-3, alquil C1-3-oxi, mono- y polihaloalquilo C1-3, mono- y polihaloalquil C1-3-oxi, y alquil C1-3-oxialquil C1-3-oxi; o una sal de adicion del mismo.
3. 3. El compuesto de la reivindicacion 1, en el que

   R1 es fluoro, difluorometilo o trifluorometilo, y R2 es hidrogeno; o R1 es fluoro y R2 es trifluorometilo; o R y R forman un radical divalente =CF2;

   R es metilo o ciclopropilo;

   R4 es hidrogeno o fluoro;

   Ar es heteroarilo;

   en el que heteroarilo es piridilo sustituido con metoxi, o pirimidilo; o una sal de adicion del mismo.
4. 4. El compuesto de la reivindicacion 1, en el que el atomo de carbono sustituido con R3tiene la configuracion R.
5. 5. El compuesto de la reivindicacion 1 seleccionado entre

   (5R,6S)-5-ciclopropil-6-fluoro-5-{3-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-

   amina;

   (5R,6R)-6-fluoro-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina,

   (5R)-6-(difluorometilideno)-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenilo-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

   (5R,6R*)-6-(difluorometil)-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

   (5R,6R)-6-fluoro-5-[2-fluoro-5-(pirimidin-2-ilamino)fenil]-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

   (5R,6R)-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipiridin-2-il)amino]fenil}-5-metil-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

   (5R,6R)-5-[2-fluoro-5-(pirimidin-2-ilamino)fenil]-5-metil-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina;

   (5R,6R)-6-fluoro-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipirazin-2-il)amino]fenil}-5-metil-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina; y

   (5R,6R)-5-{2-fluoro-5-[(3-metoxipirazin-2-il)amino]fenil}-5-metil-6-(trifluorometil)-5,6-dihidro-2H-1,4-oxazin-3-amina.
6. 6. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto como se

   define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un vehnculo farmaceuticamente aceptable.
7. 7. Un proceso para preparar una composicion farmaceutica como se define en la reivindicacion 6, caracterizado porque se mezcla de forma mtima un vehfculo farmaceuticamente aceptable con una cantidad terapeuticamente

   5 eficaz de un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
8. 8. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en el tratamiento o prevencion de enfermedad de Alzheimer (AD), alteracion cognitiva leve, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatfa amiloide cerebral, demencia multi-infarto, smdrome de Down, demencia asociada con apoplejfa,

   10 demencia asociada con enfermedad de Parkinson o demencia asociada con beta-amiloide.