ES2585652T3 - Enzima proteasa y usos de la misma - Google Patents

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Abstract

Molécula aislada de ácidos nucleicos que comprende una secuencia polinucleótida que codifica una enzima serina proteasa seleccionada de entre el grupo que consiste en: (a) una molécula de ácidos nucleicos codificante de un polipéptido que presenta una actividad de serina proteasa y que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en SEC ID nº 18, (b) una molécula de ácidos nucleicos codificante de un polipéptido que presenta una actividad de serina 0 proteasa y una identidad de por lo menos 85% respecto a la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº 18, (c) una molécula de ácidos nucleicos que comprende la secuencia codificante de la secuencia de nucleótidos descrita en SEC ID nº 17, (d) una molécula de ácidos nucleicos que comprende la secuencia codificante de la secuencia polinucleótida incluida en pALK3094 depositada en Escherichia coli RF8791 con el número de acceso DSM 24410, (e) una molécula de ácidos nucleicos, la secuencia codificante de la cual difiere de la secuencia codificante de una molécula de ácidos nucleicos según cualquiera de entre (c) a (d) debido a la degeneración del código genético, y (f) una molécula de ácidos nucleicos que comprende una secuencia polinucleótida que se hibrida bajo condiciones restrictivas con una molécula de ácidos nucleicos de SEC ID nº 17.

Description

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La figura 8 (8A, 8B, 8C y 8D) describe el rendimiento de eliminación de manchas de la proteasa recombinante de Malbranchea ALKO412 sobre una mancha de sangre/leche/tinta (Art. 117, CO+PES, nº de serie 11-08, nuevo lote, EMPA) a una temperatura de entre 10ºC y 50ºC, pH aprox. de 8, 60 min. en presencia de detergente líquido comercial con una concentración de 5 g/l. Se utilizó Savinase® 16L y Savinase® Ultra 16L a título comparativo.
La figura 8A describe el rendimiento de eliminación de manchas a 10ºC (dosis enzimática calculada como proteína).
La figura 8B describe el rendimiento de eliminación de manchas a 20ºC (dosis enzimática calculada como proteína).
La figura 8C describe el rendimiento de eliminación de manchas a 30ºC (dosis enzimática calculada como proteína).
La figura 8D describe el rendimiento de eliminación de manchas a 50ºC (dosis enzimática calculada como proteína).
La figura 9 (9A, 9B, 9C, 9D, 9E, 9F, 9G y 9H) muestra el rendimiento de la proteasa recombinante de Malbranchea ALKO4122 con diferentes manchas en ensayos de Launder-O-meter en presencia de detergente líquido comercial con una concentración de 5 g/l a 30ºC y a 60ºC, durante 60 min., pH aprox. de 8. Se utilizó la preparación comercial Savinase® Ultra 16L a título comparativo.
La figura 9A muestra el rendimiento sobre hierba, algodón, Art. 164 (nº de serie 23-03), EMPA a 30ºC.
La figura 9B muestra el rendimiento sobre hierba, algodón, Art. 164 (nº de serie 23-03), EMPA a 60ºC.
La figura 9C muestra el rendimiento sobre sangre/leche/tinta, algodón, Art. 116 (nº de serie 18-16), EMPA a 30ºC.
La figura 9D muestra el rendimiento sobre sangre/leche/tinta, algodón, Art. 116 (nº de serie 18-16), EMPA, a 60ºC.
La figura 9E muestra el rendimiento sobre sangre/leche/tinta, CO+PES, Art. 117 (nº de serie 11-08, nuevo lote), EMPA, a 30ºC.
La figura 9F muestra el rendimiento sobre sangre/leche/tinta, CO+PES, Art. 117 (nº de serie 11-08, nuevo lote), EMPA, a 60ºC.
La figura 9G muestra el rendimiento sobre sangre/leche/tinta, CO+PES, Art. 117 (nº de serie 10-07, lote antiguo), EMPA a 30ºC.
La figura 9H muestra el rendimiento sobre sangre/leche/tinta, CO+PES, Art. 117 (nº de serie 10-07, lote antiguo), EMPA a 60ºC.
La figura 10 (10A y 10B) muestra el rendimiento de la proteasa en presencia de detergente en polvo.
La figura 10A describe el rendimiento de la proteasa recombinante de Malbranchea ALKO4122 sobre sangre/leche/tinta, CO+PES, Art. 117 (nº de serie 11-08), EMPA en presencia de detergente en polvo tradicional comercial (descrito en el Ejemplo 8), 5 g/l a 50ºC, durante 60 min., pH aprox. de 10,5. Se utilizó Savinase® Ultra 16L a título comparativo.
La figura 10B describe el rendimiento de la proteasa recombinante de Malbranchea ALKO4122 sobre sangre/leche/tinta, CO+PES, Art. 117 (nº de serie 11-08), EMPA en presencia de detergente en polvo, Art. 601, EMPA, 5 g/l a 50ºC, durante 60 min., pH aprox. de 10. Se utilizó Savinase® Ultra 16L a título comparativo.
La figura 11 (11A y 11B) muestra la estabilidad de la proteasa durante el almacenamiento a 37ºC.
La figura 11A muestra la estabilidad de la proteasa recombinante de Malbranchea ALKO4122 durante el almacenamiento a 37ºC, al conservarla/estabilizarla con Proxel LV o propilenglicol (PG).
La figura 11B muestra la estabilidad de la proteasa recombinante Fe_RF6318 (documento WO 2010/125174A1) durante el almacenamiento a 37ºC al conservarla/estabilizarla con Proxel LV o propilenglicol.
La figura 12 (12A y 12B) muestra la estabilidad de la proteasa en detergente.
La figura 12A muestra la estabilidad de la proteasa recombinante de Malbranchea ALKO4122 en detergente de
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identidad de por lo menos 66% respecto a la secuencia de aminoácidos de la proteasa madura de Malbranchea ALKO4122 tal como se define en SEC ID nº 18. Las enzimas preferidas muestran una identidad de por lo menos 66%, preferentemente de por lo menos 70%, más preferentemente de por lo menos 75% y todavía más preferentemente de por lo menos 80%. Todavía más preferentemente, las secuencias de aminoácidos muestran una identidad de por lo menos 85% o de por lo menos 90% o 95%, más preferentemente de por lo menos 98%, todavía más preferentemente de 99% respecto a la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº 18. Convenientemente, las identidad de las enzimas se comparan utilizando las regiones de secuencia maduras correspondientes.
La serina proteasa de la presente invención puede obtenerse de Malbranchea, preferentemente de Malbranchea cinnamomea (Lib.) Oorschot de Hoog (sinónimo de Malbranchea pulchella var. sulfurea (Miehe) Cooney y R. Emers.), que es un miembro de EC3.4.21. Según la forma de realización particularmente preferente de la enzima serina proteasa de la invención puede obtenerse de la cepa Malbranchea ALKO4122 depositada con el número de acceso CBS 128533 o de la cepa Malbranchea ALKO4178 depositada con el número de acceso CBS 128564. La proteasa de Malbranchea ALKO4178 es esencialmente idéntica a la proteasa de la cepa Malbranchea ALKO4122.
El término "identidad" se refiere en la presente memoria a la identidad entre dos secuencias de aminoácidos comparadas entre sí dentro de la región de secuencia correspondiente que presenta aproximadamente el mismo número de aminoácidos. Por ejemplo, puede compararse la identidad de una secuencia de longitud completa o madura de las dos secuencias de aminoácidos. Las secuencias de aminoácidos de las dos moléculas que deben compararse pueden diferir en una o más posiciones, las cuales, sin embargo, no alteran la función o la estructura biológica de las moléculas. Dicha variación puede producirse naturalmente debido a diferentes organismos huésped
o mutaciones en la secuencia de aminoácidos o pueden producirse mediante mutagénesis específica. La variación puede resultar de la deleción, sustitución, inserción, adición o combinación de una o más posiciones en la secuencia de aminoácidos. La identidad de las secuencias se mide mediante la utilización de la alineación de ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/) con los parámetros por defecto (matriz de peso de proteína: Gonnet; apertura de hueco: 10, extensión de hueco: 0,20, distancias de hueco: 5).
Una forma de realización preferente de la invención es una enzima serina proteasa madura fúngica que presenta una actividad de serina proteasa y una secuencia de aminoácidos de la proteasa de Malbranchea ALKO4122 tal como se define en SEC ID nº 18. La enzima madura no presenta la secuencia de señal o prepéptido y la prosecuencia o propéptido. La serina proteasa madura de la invención incluye los aminoácidos Ala121 a Arg401 de la proteasa de longitud completa caracterizada en SEC ID nº 14. De esta manera, dentro del alcance de la invención también se encuentra la enzima proteasa de Malbranchea ALKO4122 de longitud completa que presenta SEC ID nº 14 que incluye la secuencia de señal (prepéptido) y el propéptido, así como la forma proenzima que no presenta la secuencia de señal (prepéptido), que de esta manera presenta la secuencia SEC ID nº 16.
La presente invención se refiere a una enzima serina proteasa fúngica, la forma madura del cual presenta una masa molecular o un peso molecular de entre 20 y 35 kDa, preferentemente de entre 25 y 33 kDa, más preferentemente de entre 28 y 30 kDa. El PM más preferente es la masa molecular predicha de 29 kDa para el polipéptido maduro obtenido mediante la utilización de la herramienta Compute pI/MW en el servidor ExPAS (Gasteiger et al., 2003).
La enzima de la invención resulta eficaz para degradar material proteico en un amplio intervalo de temperaturas. La serina proteasa fúngica presenta un óptimo de temperatura en el intervalo de entre 30ºC y 80ºC (por lo menos aproximadamente 10% de la actividad máxima), preferentemente de entre 40ºC y 80ºC (por lo menos aproximadamente 20% de la actividad máxima) y más preferentemente de entre 50ºC y 80ºC (por lo menos aproximadamente 40% de la actividad máxima), todavía más preferentemente de entre 60ºC y 80ºC (por lo menos aproximadamente 65% de la actividad máxima), observándose la actividad máxima a 70ºC, medida a pH 8,5 utilizando un tiempo de reacción de 30 min. y caseína como sustrato, tal como se indica en el Ejemplo 5.
La enzima presenta un óptimo de pH comprendido en el intervalo de entre 6 y por lo menos 10 a 50ºC utilizando un tiempo de reacción de 30 min. y caseína como sustrato, tal como se indica en el Ejemplo 5. En particular, el óptimo de pH es de entre 6 y 10 (por lo menos aproximadamente 60% de la actividad máxima) y más preferentemente de entre 9 y 10 (por lo menos aproximadamente 70% de la actividad máxima) y más preferentemente de aproximadamente 10.
La serina proteasa, convenientemente la serina proteasa fúngica de la invención, presenta un "buen rendimiento en presencia de detergente", es decir, es capaz de degradar o eliminar las manchas o material proteico en presencia de detergente en intervalos de temperatura bajos, concretamente en intervalos de temperatura más bajos que los presentes productos comerciales de subtilisina, por ejemplo el producto enzimático comercial Savinase® o Savinase®Ultra 16L (Novozymes A/S, Dinamarca). En presencia de un detergente, la enzima de la invención funciona bien entre 5ºC y 60ºC, preferentemente a 50ºC o menos. La enzima también funciona a temperaturas de 40ºC o menos, o a 30ºC o menos.
Según una forma de realización preferida de la invención, la enzima serina proteasa fúngica se encuentra codificada por una secuencia polinucleótida aislada que se hibrida bajo condiciones restrictivas con una secuencia polinucleótida o de sonda incluida en el plásmido pALK3092 que comprende la secuencia de nucleótidos SEC ID nº
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filamentoso del género Trichoderma o Aspergillus, tales como las cepas de tipo T. reesei o A. niger, A. oryzae, A. sojae, A. awamori o A. japonicus. Según la forma de realización más preferente de la invención, la enzima serina proteasa fúngica es producida en T. reesei.
Se proporciona un procedimiento para producir un polipéptido que presenta una actividad de serina proteasa, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de cultivar la célula huésped natural o recombinante portador del vector de expresión recombinante para una serina proteasa de la invención bajo condiciones adecuadas y aislar opcionalmente dicha enzima. El medio de producción puede ser un medio adecuado para cultivar el organismo huésped y que contiene inductores para la expresión eficiente. Los medios adecuados son bien conocidos en la literatura.
Se proporciona un polipéptido que presenta una actividad de serina proteasa, estando codificado dicho polipéptido por la molécula de ácidos nucleicos de la invención y que puede obtenerse mediante el procedimiento indicado anteriormente.
Además, se proporciona un procedimiento para obtener una preparación de enzima que comprende un polipéptido, la cual presenta una actividad de serina proteasa, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de cultivar una célula huésped que porta el vector de expresión de la invención y recuperar el polipéptido a partir de las células o separar las células del medio de cultivo y obtener el sobrenadante que presenta una actividad de serina proteasa.
Además, se proporciona una preparación de enzima que comprende la enzima serina proteasa caracterizada anteriormente. La preparación o composición de enzima presenta una actividad de serina proteasa y puede obtenerse mediante el procedimiento según la invención.
Se encuentra comprendida dentro de la invención una preparación de enzima así como una composición que comprende la serina proteasa de la invención.
La preparación o composición de enzima (por ejemplo una formulación de detergente) que contiene la enzima proteasa de la invención puede comprender además otras enzimas seleccionadas de entre el grupo que consisten de proteasas (otras proteasas diferentes de las de la invención), amilasas, lipasas, celulasas, cutinasas, pectinasas, mananasas, xilanasas y oxidasas, tales como una lacasa o peroxidasa con o sin un mediador. Se espera que estas enzimas incrementen el comportamiento de las serina proteasas de la invención, por ejemplo eliminando los carbohidratos y aceites o grasas presentes en el material que debe manipularse. Dichas enzimas pueden ser enzimas naturales o recombinantes producidas por la cepa huésped o pueden añadirse al sobrenadante de cultivo tras el procedimiento de producción.
Dicha preparación o composición de enzima puede comprender además uno o más aditivos adecuados seleccionados de entre el grupo que consiste en surfactantes o agentes activos en superficie, tampones, agentes anticorrosión, estabilizadores, agentes blanqueadores, mediadores, mejoradores de detergente, agentes cáusticos, abrasivos y conservantes, abrillantadores ópticos, agentes anti-redeposición, tintes, pigmentos, perfumes, etc.
Los surfactantes resultan útiles para emulsionar grasas y humectar superficies. El surfactante puede ser no iónico, incluendo semipolar y/o aniónico y/o catiónico y/o zwiteriónico.
Pueden añadirse tampones a la preparación o composición de enzima para modificar el pH o afectar el comportamiento o estabilidad de los demás ingredientes.
Entre los estabilizadores adecuados se incluyen polioles, tales como propilenglicol o glicerol, un azúcar o alcohol de azúcar, ácido láctico, ácido bórico, o derivados de ácido bórico, péptidos, etc.
Se utiliza agente blanqueador para oxidar y degradar los compuestos orgánicos. Son ejemplos de sistemas blanqueadores químicos adecuados, las fuentes de H2O2, tales como perborato o percarbonato con o sin activadores de blanqueamiento formadores de perácido, tales como tetraacetiletilendiamina, o alternativamente, peroxiácidos, por ejemplo de tipo amida, imida o sulfona. Los oxidantes químicos pueden sustituirse parcial o completamente mediante la utilización de enzimas oxidantes, tales como lacasas o peroxidasas. Muchas lacasas no funcionan eficazmente en ausencia de mediadores.
Entre los mejoradores o agentes acomplejantes se incluyen sustancias, tales como zeolita, difosfato, trifosfato, carbonato, citrato, etc. La preparación de enzima puede comprender además uno o más polímeros, tales como carboximetilcelulosa, poli(etilenglicol), poli(alcohol vinílico), poli(vinilpirrolidona), etc. Además, pueden añadirse suavizantes, agentes cáusticos, conservantes para evitar el deterioro de otros ingredientes, abrasivos y sustancias modificadoras de las propiedades espumantes y de viscosidad.
Según una forma de realización preferente de la invención, dicha preparación o composición de enzima que comprende dicha enzima se encuentra en forma de líquido, polvos, granulado o tabletas. Según una forma de realización preferente de la invención, dicha composición es una formulación de detergente en forma de líquido,
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2712915A1 (en) * 2012-10-01 2014-04-02 The Procter and Gamble Company Methods of treating a surface and compositions for use therein
WO2015158719A1 (en) * 2014-04-15 2015-10-22 Aalborg Universitet Composition and method for degradation of keratinaceous materials
TWI848913B (zh) 2017-06-30 2024-07-21 美商泰華施公司 清洗膜之方法
GB2569611B (en) * 2017-12-21 2020-02-19 Cordina Ltd Improvements in hair-curling devices
BR112021003603A2 (pt) * 2018-08-27 2021-05-18 Basf Se uso de polímeros, e, método para remover sujeira sensível a tensoativo ou enzima de têxteis.
EP3636735B1 (en) * 2018-10-12 2024-03-27 AB Enzymes Oy Protease enzyme variants and uses thereof
KR102764795B1 (ko) * 2021-09-07 2025-02-13 농업회사법인 유한회사 영인바이오 쓴맛이 감소된 여주즙의 제조방법 및 이에 따라 제조된 여주즙
CN118614622B (zh) * 2024-08-08 2024-11-15 山东大树达孚特膳食品有限公司 利用罗汉参深层发酵工艺制备的多肽保健食品及其制备方法

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3652399A (en) 1969-04-30 1972-03-28 Takeda Chemical Industries Ltd Alkali protease
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
DK563986A (da) 1986-11-25 1988-06-17 Novo Industri As Fremstilling af en lav-temperatur-aktiv protease
DK564086A (da) 1986-11-25 1988-06-17 Novo Industri As Enzymatisk detergent-additiv
JP2731407B2 (ja) 1987-04-03 1998-03-25 アムジエン・インコーポレーテツド 新規なプロテアーゼ酵素
DK571587D0 (da) 1987-11-02 1987-11-02 Novo Industri As Enzymatisk detergentsammensaetning
US5288627A (en) 1988-01-07 1994-02-22 Novo Nordisk A/S Endoprotease from Fusarium oxysporumDSM 2672 for use in detergents
DE68924654T2 (de) 1988-01-07 1996-04-04 Novonordisk As Spezifische Protease.
JPH0241398A (ja) 1988-07-20 1990-02-09 Novo Ind As 安定化酵素液体洗剤組成物
US5089163A (en) * 1989-01-30 1992-02-18 Lever Brothers Company, Division Of Conopco, Inc. Enzymatic liquid detergent composition
DK316989D0 (da) 1989-06-26 1989-06-26 Novo Nordisk As Enzymer
DK204290D0 (da) 1990-08-24 1990-08-24 Novo Nordisk As Enzymatisk detergentkomposition og fremgangsmaade til enzymstabilisering
DK223790D0 (da) 1990-09-18 1990-09-18 Novo Nordisk As Proteaseholdig detergentkomposition
DK73791D0 (da) 1991-04-22 1991-04-22 Novo Nordisk As Detergentadditiv
CA2069147A1 (en) 1991-05-22 1992-11-23 Kazuaki Kitano Dna and its use
US5962765A (en) 1991-08-08 1999-10-05 Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. Molecular cloning of a complimentary DNA sequence encoding a cuticle degrading protease produced by entomopathogenic fungi
DK52393D0 (es) 1993-05-05 1993-05-05 Novo Nordisk As
CA2161975C (en) * 1994-03-21 2000-02-01 Jeanne A. O'brien Stable enzyme-containing aqueous laundry prespotting composition
PT763115E (pt) 1994-06-03 2001-03-30 Novo Nordisk Biotech Inc Lacases purificadas de scytalidium e acidos nucleicos que as codificam
US5770418A (en) 1994-06-24 1998-06-23 Novo Nordisk A/S Purified polyporus laccases and nucleic acids encoding same
IL116275A0 (en) 1994-12-08 1996-03-31 Invest Y De Estudios Avanzados Methods for obtaining strains of trichoderma spp. and strains obtained thereby
US6682924B1 (en) 1995-05-05 2004-01-27 Novozymes A/S Protease variants and compositions
WO1997002753A1 (en) 1995-07-12 1997-01-30 Novo Nordisk A/S Cleaning-in-place with a solution containing a protease and a lipase
US6008029A (en) 1995-08-25 1999-12-28 Novo Nordisk Biotech Inc. Purified coprinus laccases and nucleic acids encoding the same
AR005601A1 (es) 1996-01-29 1999-06-23 Novozymes As Proceso para la remocion o blanqueo de suciedad o manchas presentes en telas celulosicas y proceso para el lavado de telas celulosicas manchadas o sucias y composicion detergente
EP0932667B1 (en) 1996-11-04 2008-10-01 Novozymes A/S Subtilase variants and compositions
BR9811248B1 (pt) 1997-08-29 2011-10-04 variante de enzima subtilase derivada de uma subtilase originária selecionada a partir do sub-grupo i-s1 ou do sub-grupo i-s2, dita variante tendo melhorado desempenho de lavagem em detergentes em comparação com a subtilase originária, sequência de dna isolada, vetor de expressão, célula hospedeira microbiana, processo para produzir uma variante, composição, uso de uma variante de subtilase.
RU2252254C2 (ru) * 1997-10-23 2005-05-20 Джененкор Интернэшнл, Инк. Вариант субтилизина bacillus (варианты), кодирующая его днк, экспрессирующий вектор и очищающая композиция
WO1999064555A1 (en) * 1998-06-05 1999-12-16 The Procter & Gamble Company Granular, powder, and tablet detergent compositions containing gasified particulate matter
KR100618495B1 (ko) 1998-10-06 2006-08-31 마크 아론 에말파브 섬유상의 진균성 숙주 영역에서의 형질전환 시스템:크리소스포륨속에서
ES2329874T3 (es) 2000-07-22 2009-12-02 Genencor International, Inc. Estabilizacion de enzimas.
ES2171136B1 (es) 2000-12-01 2003-10-16 Newbiotechnic Sa Enzima con actividad proteolitica construccion de adn que comprende una secuencia de adn que codifica dicha enzima y sus aplicaciones.
FR2852949B1 (fr) 2003-03-28 2008-08-29 Biovitis Procede de reduction de la matiere organique contenue dans des effluents agroalimentaires et industriels comportant une phase de biodigestion par des champignons filamenteux
CN1187443C (zh) * 2003-05-21 2005-02-02 云南大学 真菌碱性丝氨酸蛋白酶及其制备方法和应用
US7985569B2 (en) * 2003-11-19 2011-07-26 Danisco Us Inc. Cellulomonas 69B4 serine protease variants
EP2363460A3 (en) 2004-12-30 2011-12-28 Genencor International, Inc. Acid fungal proteases
JP4549386B2 (ja) 2005-03-22 2010-09-22 ソデックス株式会社 新規プロテアーゼ、該プロテアーゼを生産する微生物、及びこれらの利用
EP1941025B1 (en) * 2005-10-17 2011-06-29 Novozymes A/S Use of fungal mutants for expression of antibodies
BRPI0712113A2 (pt) 2006-06-05 2012-01-31 Procter & Gamble estabilização de enzimas
SG175602A1 (en) 2006-07-05 2011-11-28 Catalyst Biosciences Inc Protease screening methods and proteases identified thereby
EP2139979B1 (en) 2007-03-27 2015-02-25 Novozymes A/S Stable enzyme solutions and method of manufacturing
KR101271731B1 (ko) 2007-10-15 2013-06-04 삼성테크윈 주식회사 감시카메라 및 그의 촬영방법
KR20100108413A (ko) 2008-01-29 2010-10-06 다니스코 유에스 인크. 바실러스 및 스트렙토마이세스 종 내 스트렙토마이세스 서브틸리신 억제제 (ｓｓｉ) 단백질의 발현
EP2352831B1 (en) 2008-09-30 2015-03-25 Novozymes Inc. Methods for producing polypeptides in enzyme-deficient mutants of fusarium venenatum
CN101487002A (zh) * 2009-03-02 2009-07-22 华南理工大学 碱性蛋白酶
FI121711B (fi) 2009-04-30 2011-03-15 Ab Enzymes Oy Sieniperäinen seriiniproteaasi ja sen käyttö
FI121712B (fi) 2009-04-30 2011-03-15 Ab Enzymes Oy Uusi sieniperäinen proteaasi ja sen käyttö
FI121851B (fi) 2009-07-08 2011-05-13 Ab Enzymes Oy Sieniperäinen proteaasi ja sen käyttö
FI123942B (fi) 2010-10-29 2013-12-31 Ab Enzymes Oy Sieniperäisen seriiniproteaasin variantteja

Also Published As

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