ES2598159T3 - Un método de producción de un dispositivo aplicable a tejidos biológicos, particularmente un parche para tratar tejidos dañados, y un dispositivo obtenido por dicho método - Google Patents

Abstract

Una estructura de parche que comprende: - una capa de soporte que consiste en un material de polímero sintético biocompatible con una estructura no tejida microporosa; - una capa de fibrina con una estructura nanofibrilar reticulada; en la que dicha capa de fibrina está enraizada en la capa de soporte.

Description

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DESCRIPCION

Un metodo de produccion de un dispositivo aplicable a tejidos biologicos, particularmente un parche para tratar tejidos danados, y un dispositivo obtenido por dicho metodo

Campo de la invencion

[0001] La presente invencion se refiere a un dispositivo para facilitar el crecimiento celular in vitro o in vivo, particularmente para tratar tejidos necroticos o danados tambien por medio de su administracion local de principios activos, con cinetica controlada, y particularmente de factores de crecimiento capaces de inducir la revascularizacion de tejido.

Breve idea general de la tecnica conocida

[0002] Se siente la necesidad en el campo medico de tratar tejidos danados, tales como heridas de tejido debidas a ulceras diabeticas, o paredes cardiacas con las secuelas de infarto, induciendo el recrecimiento de tejido.

[0003] Los materiales que son eficaces para este fin son capaces de proporcionan matrices extracelulares adecuadas para el crecimiento y la migracion de componentes celulares, permitiendo la formacion de tejidos biologicos. El interes se esta centrando particularmente en polimeros naturales que pueden ser reabsorbidos por el entorno biologico en el que se insertan, tales como la fibrina, una proteina que participa en procesos biologicos tales como la coagulacion de la sangre, que experimenta un proceso de degradacion natural llamado fibrinolisis, que permite que sea reabsorbida.

[0004] La recuperacion funcional de tales tejidos danados tambien esta favorecida por la administracion de diversos principios activos, por ejemplo, antibioticos, agentes antiinflamatorios o moleculas bioactivas particulares, conocidos como factores de crecimiento. Los factores de crecimiento proangiogenicos son particularmente importantes debido a que son capaces de contribuir a la regeneracion de tejidos blandos, induciendo a su revascularizacion. Algunos de los muy conocidos entre estos factores son VEGF (factores de crecimiento endotelial vascular), bFGF (factores de crecimiento de fibroblastos basicos) y peptido 20 del extremo N de proadrenomedulina (PAMP), y son adecuados para tratar las secuelas de isquemia cardiaca y ulceras diabeticas cronicas.

[0005] Otros factores de crecimiento pueden contribuir a la reparacion de tejidos especificos. Por ejemplo, TGF-p1 (factor de crecimiento transformante-p1) y, aqui otra vez, bFGF, ayudan a regenerar cartilago articular promoviendo la proliferacion de condrocitos y la formacion de matriz extracelular.

[0006] Los factores de crecimiento pueden administrarse localmente en forma de una solucion, pero en este caso son facilmente separados del tejido y/o rapidamente degradados, que da lugar a una drastica reduccion en su eficacia terapeutica, que demanda su administracion con cinetica controlable.

[0007] Una matriz nanofibrilar, tal como aquella de fibrina, proporciona un medio ideal capaz de estabilizar (es decir, retener y liberar progresivamente) factores de crecimiento, ademas de otros agentes terapeuticos, tales como agentes antibacterianos y antiinflamatorios. La fibrina se produce naturalmente como una masa blanda, gelatinosa y amorfa, sin embargo, que significa que no tiene las caracteristicas mecanicas y estructurales, por ejemplo modulo elastico y resistencia a la traccion, necesarias para hacerla facilmente manejable y capaz de resistir a los esfuerzos dinamicos de numerosos entornos fisiologicos.

[0008] Para la recuperacion funcional de tejidos danados por diversos tipos de trastornos, por consiguiente, se siente una necesidad de medios biocompatibles para mantener los tejidos en contacto con matrices nanofibrilares capaces de soportar los procesos celulares que facilitan la regeneracion, ventajosamente en forma de parches para aplicar a dichos tejidos. Asimismo, se siente una necesidad de un parche capaz de retener agentes terapeuticos utiles para dicho proceso de regeneracion de tejido y liberarlos gradualmente en los tejidos que estan tratandose.

[0009] Actualmente hay estructuras conocidas, tales como aquellas descritas en los documentos US 6.762.336 o en WO2008/019128, cuyo uso esta limitado al tratamiento hemostatico de heridas.

[0010] Algunas de las estructuras descritas en dichos documentos comprenden capas adyacentes alternas de trombina y fibrinogeno para poner en contacto con el tejido danado, sirviendo una capa de polimero de medio de soporte. Algunas realizaciones de las estructuras descritas implican la interposicion de una capa de un material de union biocompatible, o la adicion de principios activos a una de las capas. Las vendas anteriormente mencionadas se preparan a bajas temperaturas (0-4 °C) y la deposicion de cada capa va seguida de una etapa de congelacion profunda (a -80 °C); en estas condiciones, la trombina no promueve la formacion de fibrina a partir del fibrinogeno. La fibrina no esta, por consiguiente, contenida en las vendas, se forma solo despues de que la venda se haya aplicado a la herida, realizando asi una funcion exquisitamente hemostatica.

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[0011] Ademas de dejar de garantizar una adhesion suficiente para mantener la estructura junta durante el tiempo de aplicacion predecible, o para garantizar su estabilidad en un contexto dinamico tal como aquel de una pared cardiaca, en el que tienen lugar los intensos ciclos de estres/deformacion, el usar este enfoque para combinar las dos capas complica considerablemente el proceso de fabricacion de la estructura y tambien limita su utilidad a su funcion hemostatica.

[0012] El documento US 2006/0204783 describe una composicion para el recubrimiento de un dispositivo medico, comprendiendo dicha composicion una pluralidad de nanoestructuras (silicio, niquel o nanofibras de TiO2) dispersas en una matriz (estando la fibrina tambien enumerada entre los muchos posibles materiales). Dicha composicion se aplica (en forma de un polvo o pasta) a dispositivos medicos de diversos tipos de manera que constituya un recubrimiento nanoestructurado.

[0013] El objetivo de la presente invencion es, por tanto, un metodo para la fabricacion de una estructura biocompatible que permita la aplicacion estable a un tejido biologico de una matriz extracelular adecuada para facilitar el crecimiento y la migracion de componentes celulares con efectos terapeuticos sobre dicho tejido.

[0014] Es otro objetivo de la presente invencion producir una estructura tal, y particularmente un dispositivo capaz de liberar principios activos dentro de dicho tejido con cinetica predeterminada.

[0015] Es un objetivo particular de la presente invencion producir una estructura tal de manera que permita la liberacion de factores de crecimiento, y particularmente de factores de crecimiento proangiogenicos, dentro de un tejido danado con una velocidad de liberacion controlada con el fin de promover la recuperacion de dichos tejidos, por ejemplo, por medio de un proceso de revascularizacion o angiogenesis terapeutica.

[0016] Es otro objetivo de la presente invencion producir un dispositivo, y un parche en particular, que tiene una estructura adecuada para su uso en la cirugia de reconstruccion de tejidos u organos, y particularmente una estructura adecuada para la cirugia reconstructiva cardiaca, o adecuado en cualquier caso para la reparacion de tejidos vulnerables a deformaciones considerables. Es otro objetivo de la presente invencion un metodo para la fabricacion de dicha estructura biocompatible que implica tiempos y costes limitados.

Sumario de la invencion

[0017] Los objetivos enumerados anteriormente, ademas de otros, se logran por una estructura de parche para un tejido biologico que comprende:

- una capa de soporte que consiste en un material de polimero sintetico biocompatible, teniendo dicha capa de soporte una estructura no tejida microporosa;

- una capa de interaccion biologica que consiste en una malla de nanofibras de fibrina, estando esta capa de interaccion biologica enraizada a la primera capa y dispuesta, cuando esta en uso, en contacto con el tejido,

La principal caracteristica de la estructura es que el enraizamiento de la malla de nanofibra al material de polimero biocompatible se logra aplicando fibrinogeno al polimero biocompatible y dispersando preventivamente la trombina en el polimero biocompatible.

[0018] En otras palabras, el dispositivo que forma el objetivo de la presente invencion es fibrina nanofibrilar reticulada soportada por y enraizada a una tela no tejida microporosa hecha de un material de polimero sintetico biocompatible. Asi, en lugar de una fibrina que esta normalmente en forma de una masa blanda, gelatinosa y amorfa, la fibrina en este caso no es hemostatica y su consistencia, forma y resistencia mecanica se derivan del soporte al que esta enraizado. La fibrina soportada segun la invencion necesita mucho mas tiempo para experimentar fibrinolisis que una fibrina que carece de cualquier soporte (es decir, varios dias en vez de algunas horas).

[0019] En la capa de interaccion biologica esta disperso ventajosamente un principio activo, en particular un factor de crecimiento para tratar dano tisular (producido por traumatismo, quemaduras, ulceras diabeticas, ulceras de decubito, etc.), estando dicha capa de interaccion biologica disenada para retener el principio activo y liberar dicho principio activo dentro del tejido.

[0020] Dicho dispositivo es util para facilitar el crecimiento celular in vitro o in vivo de tejidos biologicos, por ejemplo.

[0021] Tambien es un objetivo de la invencion un metodo de produccion de la estructura de parche anteriormente dicha disenada para ser aplicada a un tejido biologico, comprendiendo la estructura de parche:

- una capa de soporte que comprende un material de polimero biocompatible;

- una capa de interaccion biologica que comprende una malla de nanofibras de fibrina, siendo la malla de nanofibra preparada directamente sobre la capa de soporte a partir de un precursor, fibrinogeno;

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implicando dicho metodo las siguientes etapas:

- la preparacion de una superficie de apoyo para la capa de soporte;

- la preparacion de una primera solucion que contiene el material de polimero biocompatible y una segunda

solucion que contiene trombina, un agente disenado para facilitar la formacion de la capa de interaccion biologica a partir del precursor;

- la distribucion simultanea de la primera solucion y de la segunda solucion sobre la superficie de apoyo, la distribucion simultanea para crear in situ una mezcla de la primera solucion con la segunda solucion de manera que la capa de soporte se forme mediante precipitacion directamente sobre la superficie de apoyo, y de manera que la capa de soporte consista en el material de polimero biocompatible y se impregne con trombina;

- la aplicacion del fibrinogeno sobre la capa de soporte, siendo el fibrinogeno modificado por la trombina

contenida dentro de la capa de soporte para formar una capa de fibrina firmemente unida a la capa de soporte;

- la etapa de aplicacion en la que el precursor se aplica a la capa de soporte se lleva a cabo poniendo la capa de

soporte en contacto con una tercera solucion que contiene el precursor y manteniendo dicho contacto durante un tiempo dado y a una temperatura dada.

[0022] En otras palabras, el material de polimero biocompatible forma la capa de soporte y contiene - especialmente proximal a la superficie expuesta, sobre el lado opuesto de la superficie de apoyo - una dispersion de trombina, el agente que facilita la formacion de la malla de nanofibras de fibrina. Cuando el fibrinogeno, el precursor de la malla de nanofibras, se pone en contacto con dicho agente en condiciones adecuadas de tiempo y temperatura, la malla de nanofibras empieza a desarrollarse, anclarse firmemente (o enraizarse a, o entrelazarse, o interconectarse con) el material de polimero de la capa de soporte. La dispersion del agente en la capa de soporte crea las condiciones correctas para consolidar la malla de nanofibras con dicho soporte y asi obtener, al final del proceso, una capa de interaccion biologica firmemente unida a la capa de soporte (en otras palabras, la capa de fibrina se forma directamente dentro de la capa de soporte y llegara a enraizarse, al menos superficialmente, dentro del espesor del soporte).

[0023] La segunda solucion consiste en un liquido que no es un disolvente para el material de polimero biocompatible y el polimero biocompatible llega a depositarse sobre la superficie de apoyo debido al efecto de dicho liquido no disolvente durante la mezcla in situ de la primera solucion con la segunda solucion. Dicho metodo - implementado preferentemente mezclando las dos soluciones in situ sobre una superficie de apoyo proporcionada por un husillo que gira y/o que se desliza a lo largo del eje de rotacion - permite la rapida preparacion de la capa de soporte impregnada con el agente disenado para facilitar la formacion de la malla de nanofibras. La capa de soporte resultante tiene la estructura de un material de tela no tejida microporosa, mecanicamente resistente.

Descripcion detallada de la invencion

[0024] La fibrina es un polimero de origen natural que participa en numerosos procesos de reparacion biologica, y en la coagulacion de la sangre en particular, y es reabsorbida por medio de un proceso conocido como fibrinolisis. Habiendo formado desde el interior la capa de soporte, la fibrina contenida en el dispositivo segun la invencion llega a organizarse en una estructura nanofibrilar reticulada que proporciona una matriz extracelular adecuada para el crecimiento y la migracion de componentes celulares, permitiendo la formacion de tejidos biologicos. Por consiguiente, proporciona un sustrato adecuado para el tratamiento regenerativo de tejidos danados y tambien para el cultivo celular in vitro. Debe observarse que, debido a que la fibrina contenida en el dispositivo segun la invencion ya esta reticulada, no tiene una funcion hemostatica cuando esta en contacto con el tejido biologico danado; sirve en su lugar de matriz extracelular tridimensional y vehiculo para la liberacion controlada de principios farmacologicamente activos.

[0025] Las nanofibras tienen preferentemente una dimension transversal en el intervalo de 50 nanometros a 300 nanometros, y particularmente en el intervalo de 100 nanometros a 200 nanometros. Ademas de proporcionar una matriz extracelular ideal para facilitar procesos celulares utiles para la regeneracion de tejido, la estructura nanofibrilar permite la incorporacion de sustancias tales como principios activos, y factores de crecimiento en particular, restringiendo su movilidad en la capa de interaccion biologica de manera que su difusion o migracion y posterior liberacion dentro del tejido a regenerar tenga lugar gradualmente, con cineticas mas lentas que son, por consiguiente, mas facilmente controlables segun la dimension, y el diametro en particular, de las nanofibras.

[0026] La estructura nanofibrilar reticulada se logra en condiciones de procesamiento especificas, es decir, tratando el fibrinogeno con una enzima especifica (trombina) en condiciones de temperatura especificas (aproximadamente 37 °C) y durante un tiempo predeterminado (al menos 6 horas). Esto permite el control completo con respecto a las condiciones que conducen a la formacion de la fibrina a partir de fibrinogeno. La reticulacion entre las macromoleculas de fibrina se hace posible por una enzima particular, llamada el factor XIII, o el factor estabilizador de fibrina.

[0027] Junto con el fibrinogeno, la tercera solucion contiene una cantidad de factor XIII en una concentracion en el intervalo de 5 a 60 unidades internacionales por mililitro, y preferentemente en el intervalo de 5 a 30 unidades internacionales por mililitro.

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[0028] En particular, el fibrinogeno puede usarse mezclado con un inhibidor de la fibrinolisis para prolongar la vida util del parche, y particularmente para prolongar el tiempo de administracion de los principios activos.

[0029] Junto con el fibrinogeno y el factor XIII, la tercera solucion contiene preferentemente una cantidad de aprotinina en una concentracion en el intervalo de 1000 a 5000 UIC (unidades de inactivacion de calidogenasa) por mililitro, y preferentemente entre 2000 y 4000 UIC por mililitro.

[0030] El fibrinogeno y la trombina son preferentemente de origen humano, o pueden obtenerse de otros mamiferos.

[0031] La trombina esta preferentemente contenida en la segunda solucion en concentraciones en el intervalo de 10 a 500 unidades internacionales por mililitro, y en particular en el intervalo de 15 a 50 unidades internacionales por mililitro.

[0032] Junto con la trombina, la segunda solucion contiene una cantidad de cloruro de calcio en una concentracion en el intervalo de 5 a 30 nM, y en particular entre 10 y 20 nM.

[0033] La etapa de aplicacion en que el precursor se aplica a la capa de soporte puede completarse ventajosamente segun un metodo elegido de entre los siguientes:

- rociar la capa de soporte con una solucion que contiene el precursor;

- quitar la capa de soporte consolidada de la superficie de apoyo y sumergir la capa de soporte en el precursor, mantenido a una temperatura predeterminada. En el caso de fibrina en particular, el metodo de inmersion, preferentemente realizado a una temperatura proxima a 37 °C, por ejemplo en el intervalo de 32 a 42 °C o, mejor todavia, entre 35 y 39 °C, permite obtener capas de interaccion biologica particularmente uniformes.

[0034] El fibrinogeno esta ventajosamente contenido en la solucion acuosa en una concentracion en el intervalo de 10 mg/ml a 50 mg/ml; en particular, tiene una concentracion en el intervalo de 15 mg/ml a 25 mg/ml.

[0035] Durante la etapa de distribucion simultanea, hay ventajosamente una etapa en la que la concentracion varia para una de las sustancias, elegida de entre:

- el material de polimero biocompatible en la primera solucion;

- el agente previsto para facilitar la formacion de la capa de interaccion biologica a partir del precursor; o

- ambas de las sustancias anteriores.

[0036] En particular, la concentracion del agente previsto para facilitar la formacion de la malla de nanofibras aumenta desde un nivel minimo (por ejemplo, 0 UI/ml) hasta un nivel maximo (por ejemplo, 10-50 UI/ml) durante la etapa en la que la primera solucion y la segunda solucion se distribuyen simultaneamente. El agente se concentra asi en las areas mas proximales a la superficie de la capa de soporte, en las que tiene lugar la interaccion con el fibrinogeno. Esto permite que sea contenida la cantidad de trombina usada. El mismo objetivo tambien se logra por la eleccion del material sintetico usado en la preparacion de la capa de soporte, a traves de la que el agente muestra una tendencia limitada para la difusion molecular. Esto es el caso, por ejemplo, de trombina en relacion con materiales preparados a partir de poliuretanos aromaticos y siliconas.

[0037] Por medio del metodo segun la invencion es posible producir una estructura de parche preferentemente para la administracion de un principio activo en un tejido biologico, por ejemplo, para administrar un factor de crecimiento en un tejido danado para facilitar la recuperacion del ultimo; en este caso, durante la preparacion de la capa de interaccion biologica, el precursor se usa en una mezcla o en una solucion junto con el principio activo, es decir, contiene el principio activo.

[0038] En particular, el principio activo es un factor de crecimiento proangiogenico disenado para inducir la revascularizacion del tejido danado, tal como un factor de crecimiento proangiogenico elegido de entre:

- VEGF (factores de crecimiento endotelial vascular);

- bFGF (factores de crecimiento de fibroblastos basicos);

- PAMP (peptido 20 del extremo N de proadrenomedulina); o

- una combinacion de los factores de crecimiento anteriores.

[0039] Alternativamente, el factor de crecimiento puede ser una relaxina, o uno o mas principios activos derivados de un lisado de plaquetas (PDGF), o una combinacion de relaxina y dichos principios activos.

[0040] Alternativamente, el factor de crecimiento puede ser un factor de crecimiento similar a la insulina, IGF-1 o IGF-2, o el factor de crecimiento epidermico (EGF), o un factor de crecimiento transformante TGF-p, osteogenina, HBGF-1, HBGF-2.

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[0041] Ademas, la estructura segun la invencion puede incluir una combinacion de factores de crecimiento elegidos de entre aquellos enumerados anteriormente, ademas de sus derivados biologicamente activos, mezclados con otros y/o con dichos factores de crecimiento.

[0042] Ademas de un factor de crecimiento, el principio activo puede ser oxido nitrico o un agente con propiedades antimicrobianas y/o antibioticas, y/o antisepticas, y/o antivirales, y/o analgesicas, y/o antiinflamatorias, o vitaminas.

[0043] Segun una realizacion particular de la invencion, la estructura de parche puede comprender nanoparticulas, y particularmente nanoparticulas de polimero cargadas con un principio activo, y disenadas para liberar dicho principio activo dentro del tejido durante un periodo de tiempo predeterminado. Esto permite el cronometrar la administracion controlada del principio activo para que se prolongue mas alla del limite impuesto por la degradacion de la estructura de parche en el entorno biologico.

[0044] Las nanoparticulas pueden dispersarse dentro del espesor de la capa de soporte y/o dentro de la malla de nanofibras de la capa de interaccion biologica. En el caso anterior, se anaden a la primera solucion que contiene el material de polimero biocompatible; en el ultimo caso, se anaden a la tercera solucion, que contiene el precursor de la malla de nanofibras.

[0045] Dichas nanoparticulas pueden elegirse de entre:

- poliesteres biodegradables, y particularmente:

- acido polilactico (PLA);

- acido poliglicolico (PGA);

- copolimeros que contienen acido polilactico y acido poliglicolico (PLGA);

- policaprolactona (PCL) lineal o ramificada y/o sus copolimeros.

[0046] El material de polimero biocompatible puede incluir un polimero sintetico, tal como un polimero sintetico elegido de entre:

- acido poliglicolico (PGA), acido polilactico y sus copolimeros;

- polihidroxibutirato (PHB);

- polidioxanona;

- poliaminoacidos;

- polietilenglicol (PEG);

- un poliuretano (PU) aromatico o alifatico, preferentemente un poli(eter)uretano (PEtU); un poli(ester)uretano (PEsU) aromatico o alifatico; o sus copolimeros y/o mezclas;

- una silicona, preferentemente polidimetilsiloxano (PDMS) terminado con diacetoxisililo;

- una combinacion de los polimeros anteriores, y preferentemente un copolimero.

[0047] Si el parche segun la invencion esta previsto para tejidos caracterizados por rigidez y fortaleza, sin embargo, tales como hueso o ligamentos, entonces el material de la capa de soporte puede elegirse, por ejemplo, de: acido poliglicolico (PGA), acido polilactico y sus copolimeros; polihidroxibutirato (PHB), polidioxanona; poliaminoacidos, copolimeros de bloque de polietilenglicol/acido polilactico (PELA); copolimeros de bloque de acido poli(D,L-lactico-co-glicolico) (PLGA) - polietilenglicol (PEG) - acido poli(D,L-lactico-co-glicolico) (PLGA) [PLGA-PEG- PLGA]; copolimeros de bloque de acido polilactico (PLA) - polietilenglicol (PEG) - acido polilactico (PLA) [PLA-PEG- PLA].

[0048] Si el parche segun la invencion esta previsto para tejidos caracterizados sin embargo por elasticidad (tal como el sistema cardiovascular o epidermis, por ejemplo), entonces como material para la capa de soporte, la eleccion puede hacerse de entre los polimeros que pertenecen a la clase de los elastomeros, tales como: poli(eter)uretano (PEtU) aromatico o alifatico, poli(ester)uretano (PEsU) aromatico o alifatico, o sus copolimeros y/o mezclas; siliconas y sus copolimeros y/o mezclas; policaprolactona (PCL) lineal o ramificada y/o sus copolimeros y/o mezclas. En este ultimo caso, el componente elastomerico da a la estructura segun la invencion las caracteristicas de resistencia mecanica y elasticidad necesarias para aplicaciones sobre tejidos que tienen ciertas caracteristicas elasticas. En realidad, esta eleccion de material para la capa de soporte da lugar a estructuras con un modulo de elasticidad que se parece al de una proporcion de tejidos biologicos; en particular, el modulo de elasticidad se encuentra en el intervalo de 0,3 MPa a 1,5 MPa, que son valores similares a aquellos caracteristicos del miocardio humano.

[0049] En cuanto a la biodegradabilidad del soporte, esta puede modularse usando combinaciones de los materiales enumerados anteriormente, segun metodos conocidos para una persona experta en la materia, dependiendo de las necesidades del tejido a tratar y los principios activos a liberar.

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[0050] En realidad, muchos poliuretanos tienen una biodegradabilidad distintivamente alta: esta propiedad puede mitigarse por medio de su copolimerizacion con siliconas, obteniendose copolimeros que son todavia degradables in vivo, pero con cinetica mas lenta, con el fin de prolongar el tiempo que el parche queda en el tejido.

[0051] En particular, una combinacion tal de poliuretano y silicona comprende de 15 a 40 partes en peso de silicona, y en particular de 25 a 35 partes en peso de silicona.

Breve descripcion de los dibujos

[0052] Caracteristicas adicionales de la presente invencion emergen mas claramente de la siguiente descripcion de sus realizaciones, dadas aqui como un ejemplo, con referencia a los dibujos adjuntos, en los que:

- La figura 1 muestra esquematicamente las capas del dispositivo segun la invencion;

- la figura 2 muestra esquematicamente una "maquina de pulverizacion" para su uso en una etapa en el proceso para la fabricacion del dispositivo segun la invencion;

- la figura 3 muestra esquematicamente la capa de soporte 11 de la estructura segun la invencion, en la que la porcion superficial de su espesor esta impregnada con trombina;

- la figura 4 muestra para comparacion una imagen del parche 10 (que muestra la superficie expuesta de la capa de interaccion biologica 12 que consiste en fibrina; dicha superficie expuesta tiene una tincion uniforme intensa debido al tratamiento con tincion con rojo Ponceau, por el que la fibrina tiene una afinidad particular) y una imagen de la capa de soporte 11, que no contiene fibrina (usada como referencia: aparece blanca debido a que es incapaz de retener la tincion);

- la figura 5 muestra una prueba de calidad del desprendimiento de la fibrina de la capa de soporte segun la invencion;

- la figuras 6 y 7 son dos imagenes de SEM de la superficie de la capa de fibrina que se forman sobre una capa de soporte segun la invencion, con dos niveles diferentes de aumentos;

- la figura 8 muestra diagramas de la liberacion de factores de crecimiento VEGF y bFGF de dos estructuras de parche segun la invencion, obtenidos usando dos concentraciones diferentes de fibrinogeno;

- la figura 9 es una representacion esquematica de un dispositivo segun la invencion, en el que se insertan nanoparticulas.

Descripcion de realizaciones preferidas

[0053] Con referencia a la figura 1, se describe un dispositivo segun la invencion que consiste en un parche 10, dentro de la estructura del cual son reconocibles los siguientes:

- una capa de soporte 11 hecha de un polimero sintetico, en particular con una combinacion de polieteruretano (PEtU) y polidimetilsiloxano (PDMS) terminado con diacetoxisililo (funcionalidad tetraacetoxi);

- una capa de interaccion biologica 12, que consiste en una malla de fibrina nanofibrilar tridimensional, es decir, que consiste en fibras con un diametro inferior a 1 p, y en particular de fibras de aproximadamente 100 nanometros de diametro. Dicha malla es adecuada para retener y liberar gradualmente factores de crecimiento y otros agentes terapeuticos.

[0054] La capa 11 del parche 10 proporciona soporte para la matriz nanofibrilar de la capa 12 y puede obtenerse por medio de la tecnica de inversion de fase por pulverizacion, que es mediante precipitacion del polimero sintetico de una solucion del mismo en un disolvente organico mezclando con un liquido que no es un disolvente para el polimero (normalmente agua). Dicho metodo puede llevarse a cabo usando, por ejemplo, la maquina de pulverizacion 20 esquematicamente ilustrada en la figura 2 y descrita en el documento PCT WO2004/054775. Comprende un husillo 21 que proporciona una superficie de apoyo para la capa de soporte; el husillo 21 puede girar alrededor de un eje 22 y deslizarse en la direccion indicada por la flecha 37. La maquina de pulverizacion 20 tambien comprende dos pistolas de pulverizacion 23 y 24, hidraulicamente conectadas por medio de tuberias correspondientes 25 y 26 a dos bombas 27 y 28 que suministran respectivamente una primera y una segunda solucion. Por medio de tuberias 29 y 30 adicionales respectivas, las pistolas de pulverizacion 23 y 24 pueden recibir aire comprimido de un compresor 31 para crear flujos 32 y 33 respectivos de liquido nebulizado hacia el husillo 21.

[0055] La pistola de pulverizacion 23 se suministra con soluciones que contienen un polimero biocompatible, siendo dicho suministro extraido secuencialmente de los tanques 34, cada uno de los cuales contiene una solucion con una concentracion diferente de polimero biocompatible, y en este caso especifico un sistema de PEtU-PMDS en un disolvente organico, por ejemplo, una mezcla 1:1 en volumen/volumen de tetrahidrofurano y 1,4-dioxano. La concentracion del polimero biocompatible varia ventajosamente durante el transcurso del proceso, segun los detalles dados a continuacion. El polimero biocompatible puede obtenerse a partir de la reaccion de PEtU aromatico de calidad medica (por ejemplo, Estane® 5714, Lubrizol Advanced Materials, Inc., Cleveland, OH, EE.UU.) y PDEM terminado con diacetoxisililo (funcionalidad tetraacetoxi) (por ejemplo, United Chemical Technologies, Inc, Bristol, PA, EE.UU.); la proporcion de PMDS es preferentemente aproximadamente el 30 % en peso/volumen del polimero total.

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[0056] La pistola de pulverizacion 24 se suministra con agua destilada y posteriormente con soluciones acuosas que contienen trombina y cloruro de calcio, siendo dicho suministro extrafdo secuencialmente de los tanques 36, cada uno de los cuales contiene una solucion con una concentracion diferente de trombina.

[0057] La formacion de la capa de soporte 11 del parche 10 se completa disponiendo el husillo 21 en rotacion alrededor del eje 20 e imponiendo encima un movimiento de traslacion alternativo en la direccion 37, y operando simultaneamente las pistolas de pulverizacion 23 y 24 para suministrar los lfquidos anteriormente mencionados, segun las etapas enumeradas en la Tabla 1.

[0058] La duracion de las etapas de pulverizacion para las soluciones individuales se expresa en terminos del numero de ciclos hacia delante y hacia detras del husillo 21. La presencia en el flujo 33 de una sustancia que no es un disolvente para el polfmero contenido en el flujo 32 induce la precipitacion del polfmero sobre la superficie giratoria del husillo 21, sobre la que se forma la capa de soporte 11. Para facilitar dicha precipitacion, o inversion de fase, hacia el final de la aplicacion (en la etapa III en el ejemplo en el presente documento), la solucion 32 puede contener agua, como se muestra en la figura 2; una unidad extractora 35 saca el exceso de disolventes durante el proceso de pulverizacion.

Tabla 1

Etapa

Duracion, numero de ciclos Pistola de pulverizacion 23 Pistola de pulverizacion 24 Caudal ml/min

I

800 2,5 % de PU-PDMS agua destilada 1,5

II

250 1 % de PU-PDMS agua destilada 1,5

III

400 1 % de PU-PDMS agua dest. + 17 % de agua solucion acuosa de trombina 1,5

IV

200 - solucion acuosa de trombina 1

[0059] La Tabla 1 tambien muestra los caudales globales de los dos flujos 32 y 33 adoptados en una maquina experimental.

[0060] Como se muestra esquematicamente en la figura 3, la presencia de la trombina en las etapas III y IV significa que la capa de soporte 11 tiene un area 13, proximal a la superficie expuesta, que se impregna con trombina, que esta, por consiguiente, disponible para interaccionar con el fibrinogeno contenido en la solucion acuosa con el que la capa 11 se pone en contacto, preferentemente despues de su eliminacion de la superficie del husillo 21, posiblemente reduciendola para obtener piezas convenientemente dimensionadas. La concentracion de fibrinogeno esta preferentemente en el intervalo de 10 mg/ml a 30 mg/ml, y en particular esta cerca de 20 mg/ml. Dicha concentracion asegura las ventajas descritas mas adelante con respecto a un parche obtenido a partir de 10 mg/ml de soluciones de fibrinogeno.

[0061] La solucion acuosa tambien puede contener principios activos para incorporar en la matriz fibrilar de la capa de interaccion biologica 12. En particular, para tratar tejidos danados que requieren revascularizacion, tal como tejidos afectados por ulceras y paredes cardfacas con las secuelas de isquemia, la capa 12 puede impregnarse con principios activos tales como VEGF y bFGF, normalmente en una concentracion de 200 ng/ml, y posiblemente tambien PAMP (proadrenomedulina) y/o relaxina. El fibrinogeno llega a polimerizarse y forma fibrina, bajo condiciones normales, completando la reaccion despues de una incubacion de varias horas a 37 °C. Una etapa para establecer la estructura 10 asf obtenida puede implementarse por inmersion en una solucion fisiologica, mientras que se espera el uso terapeutico de la estructura.

[0062] La Tabla 2 resumen varios ejemplos de concentraciones adecuadas de los componentes de la solucion acuosa usada para formar la capa de fibrina 12 unida a la capa de soporte 11. En particular, son distinguibles dos grupos, (a) y (b), de los ejemplos de parches segun la invencion, obtenidos usando concentraciones de fibrinogeno correspondientes a 10 mg/ml y 20 mg/ml, mientras que todas las otras condiciones siguen iguales.

[0063] La trombina contenida en el area superficial 13 de la capa de soporte 11 permite una adhesion estable de la fibrina formada in situ debido a la interaccion del fibrinogeno con la trombina con la que se impregna el area superficial 13 de la capa de soporte 11. Esto se ha confirmado por analisis morfologicos en muestras de productos obtenidos segun el procedimiento anteriormente descrito, usando la maquina de pulverizacion 20 (vease la figura 4).

Tabla 2

Grupo

Fibrinogeno Trombina Heparina VEGF bFGF

mg/ml UI/ml pg/ml ng/ml ng/ml

a)

10 25 5 200 200

b)

20 25 5 200 200

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

[0064] Con referenda a la figura 5, la integracion de la capa de fibrina 12 sobre la superficie de la capa de soporte 11 tambien se ha confirmado por una prueba de pelado manual: bajo la capa de fibrina 12, levantada con la ayuda de pinzas 42, hay evidencia de la presencia de material sintetico 41, que demuestra que la cohesion entre la fibrina y el polimero sintetico es al menos tan buena como la cohesion interna de la capa 11 de PEtU/PMDS en las condiciones operativas adoptadas para producir el parche 10.

Las Figuras 6 y 7 son imagenes de la superficie nanofibrilar de la capa de interaccion biologica 12 sobre el parche 10, obtenida por medio de un microscopio electronico de barrido (SEM, Jeol 5600, Jeol Italia) despues de metalizar con oro-paladio por medio de un dispositivo de pulverizacion cationica (recubridora por pulverizacion cationica S150B, Edwards). Las micrografias de SEM se corresponden con aumentos de 1.000 y 10.000. Usando un proceso analitico basado en ordenador, estas imagenes permiten determinar el diametro medio de las fibras 51 de la malla de fibrina. Hay evidencia de la estructura tridimensional de fibrina reticulada de la capa de interaccion biologica 12, que consiste en nanofibras orientadas al azar 51. En particular, las nanofibras 51 obtenidas en las condiciones usadas para el grupo (a) en la Tabla 2 tienen un diametro medio de 165 nanometros, mientras que aquellas obtenidas en las condiciones usadas para el grupo (b), con dos veces la concentracion de fibrinogeno en la solucion acuosa, tienen un diametro medio mas estrecho, es decir, 131 nanometros.

[0065] Como se muestra en el diagrama en la figura 8, la estructura segun la invencion, en la realizacion (b), obtenida usando una concentracion de 20 mg/ml de fibrinogeno, completa la liberacion de los factores de crecimiento bFGF y VEGF en aproximadamente 1 semana. Esto es un tiempo de administracion considerablemente mas largo que el que puede obtenerse con la fibrina natural, en cuyo caso la liberacion del bFGF se completa en aproximadamente 3 dias. Esto es probablemente atribuible a un mayor grado de reticulacion de la fibrina logrado usando el metodo segun la invencion, que es suficiente para retardar la difusion de los factores de crecimiento desde el interior hasta el exterior de la matriz.

[0066] La tasa de liberacion V de ambos tipos de factor de crecimiento tambien depende de la concentracion de fibrinogeno F; en particular, disminuye cuando la concentracion va de 10 mg/ml a 20 mg/ml. En el primer caso, casi todo el VEGF y bFGF se libera en cuatro dias, mientras que en el ultimo caso los porcentajes de los dos factores liberados durante el mismo intervalo de tiempo disminuye a aproximadamente el 80 % y 70 %. La observacion bajo el microscopio electronico de barrido muestra que el diametro de las nanofibras 51 disminuye considerablemente cuando la concentracion de fibrinogeno aumenta de 10 mg/ml a 20 mg/ml. Esto puede explicarse por un aumento en las tasas de rotura del peptido de fibrina, facilitado por la mayor concentracion de fibrinogeno, que acelera la produccion de monomeros de fibrina.

[0067] Como es deducible si las curvas 71,73 se comparan con las curvas 72,74, ademas, bFGF se libera con cinetica mas lenta que VEGF. Esto confirma hallazgos en estudios previos realizados en fibrina: la velocidad mas lenta de liberacion de bFGF puede explicarse por una union mas estable del bFGF a la malla de fibrina que en el caso de VEGF. Los dos factores de crecimiento tienen diferentes funciones complementarias en la induccion de la angiogenesis: VEGF tiene efecto como iniciador del proceso de formacion de vasos sanguineos, mientras que bFGF contribuye al desarrollo posterior de los vasos, y, por tanto, demanda tiempos de aplicacion mas largos. Una velocidad de liberacion diferenciada, como se muestra en la figura 8, es, por consiguiente una condicion que favorece el efecto sinergico de los dos factores de crecimiento.

[0068] La tasa de liberacion de los factores de crecimiento puede determinarse repitiendo el enzimoinmunoanalisis de adsorcion, o prueba de ELISA (Quantikine®, &D Systems Europe, Abingdon, RU), a intervalos regulares en un medio de cultivo especificamente preparado.

[0069] La actividad biologica de los factores de crecimiento liberados por el parche segun la invencion se indica por datos en la proliferacion in vitro de HUVEC (celulas endoteliales de la vena umbilical humana), comparando los resultados obtenidos disponiendo bFGF en un medio de cultivo por medio de un parche segun la invencion con los resultados obtenidos anadiendo los factores de crecimiento en su estado libre. Las observaciones han mostrado una actividad biologica que sigue sin cambiar con el tiempo.

[0070] Las pruebas mecanicas realizadas segun ASTM D412-98a en muestras rectangulares con la estructura del parche 10 permitieron expresar sus propiedades mecanicas como se muestra en la Tabla 3. Estos resultados se refieren a un incremento constante de la carga hasta la rotura, y a muestras de prueba mantenidas humedas durante toda la prueba con el fin de estimular sus condiciones de uso.

[0071] Primero de todo, no hubo diferencias sustanciales cuando las propiedades mecanicas se midieron aplicando la tension en diferentes direcciones, es decir, los materiales tienen un comportamiento sustancialmente isotropico.

Tabla 3

E (MPa) oy (MPa) £y (%) Omax (MPa) £max (%)

0°

0,6177±0,07 0,3544±0,012 145,533±24,1 0,5547±0,14 299,3±51,59

45°

0,653±0,04 0,364±0,077 145,33±26,3 0,46±0,19 231,866±55,7

CD O o

0,5947±0,1 0,3743±0,05 159,067±18,67 0,6623±0,09 338,4±31,4

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

[0072] Ademas, la estructura fue distintiva en su capacidad para resistir a altas deformaciones sin deterioro. El modulo elastico E fue casi 0,6 MPa, y la resistencia al estiramiento oy y el alargamiento correspondiente fueron respectivamente aproximadamente 0,36 MPa y el 150 %. Las mediciones se obtuvieron usando la instrumentacion resumida en la Tabla 4.

Tabla 4

Cantidad

Tipo de instrumento Modelo del instrumento

Espesor

Micrometro intervalo 293 - IP65, s ± 0,001 mm, RS Components S.p.A.

Longitud y anchura

Precision de calibre £ ± 0,03 mm RS components S.p.A.

Propiedades de traccion (1)

Maquina de prueba de la traccion H10kT, Tinius Olsen, R&D Srl, con celdas de carga de100 N.

(1) Modulo elastico de Young E, resistencia al estiramiento oY, porcentaje de alargamiento en el punto de fluencia sY, resistencia a la rotura omax, porcentaje de alargamiento a la rotura smax.

[0073] Las pruebas en la respuesta inmunitaria inducida por el parche segun la invencion no identificaron expresion significativa de marcadores genicos de la respuesta inflamatoria en monocitos sometidos a tiempos de incubacion variables, por comparacion con hallazgos en materiales de referencia tales como polietileno de baja densidad (LDPE).

[0074] Con referencia a la figura 9, el parche 90 segun la invencion puede contener nanoparticulas 91, y particularmente nanoesferas, hechas, por ejemplo, con poliesteres biodegradables tales como acido polilactico (PLA), acido poliglicolico (PGA) y sus copolimeros; policaprolactona (PCL) lineal o ramificada y sus copolimeros. Estas nanoparticulas pueden asociarse a los principios activos, y en particular pueden cargarse con los factores de crecimiento anteriormente mencionados para prolongar la administracion controlada de dichos componentes mas alla de los limites impuestos por la degradacion de la estructura de parche en el entorno biologico en el que se pone.

[0075] La descripcion anterior de una realizacion especifica es suficiente para ilustrar la invencion desde el punto de vista conceptual de manera que otros, usando la tecnica conocida, puedan modificar y/o adaptar dicha realizacion especifica a diversas aplicaciones sin investigacion adicional y sin apartarse del alcance de la invencion, con la condicion de que cualquiera de tales adaptaciones y modificaciones deba considerarse equivalente a la realizacion descrita en el presente documento. Los medios y materiales usados para implementar las diversas funciones descritas puede variar en la naturaleza sin apartarse del alcance de la invencion. Claramente, las expresiones o terminologia usada en el presente documento no son limitantes y se usan simplemente para fines descriptivos.

[0076] En otras palabras, la invencion como se ha descrito anteriormente se refiere a:

1. Un dispositivo, que tiene preferentemente una forma plana, tal como un parche, y que comprende:

- una capa de soporte que consiste en un material de polimero sintetico biocompatible con una estructura no tejida microporosa;

- una capa de fibrina con una estructura nanofibrilar reticulada;

en el que dicha capa de fibrina esta enraizada en (es decir, sus fibras se insertan dentro de) la capa de soporte.

2. Un dispositivo como en el punto 1, en el que al menos un principio activo se dispersa en la capa de fibrina.

3. Un dispositivo como en el punto 2, en el que dicho principio activo se elige de entre:

- una sustancia con propiedades antimicrobianas y/o antibioticas, y/o antisepticas y/o antivirales, y/o analgesicas, y/o antiinflamatorias, y vitaminas;

- oxido nitrico;

- un factor de crecimiento proangiogenico adecuado para inducir la revascularizacion de un tejido danado;

- VEGF (factores de crecimiento endotelial vascular);

- bFGF (factores de crecimiento de fibroblastos basicos);

- PAMP (proadrenomedulina);

- una relaxina;

- un factor de crecimiento derivado de un lisado de plaquetas;

- un factor de crecimiento similar a la insulina, particularmente IGF1 y/o IGF2;

- EGF, factor de crecimiento epidermico;

- un factor de crecimiento transformante, TGF-p;

- osteogenina;

- un factor de crecimiento de tejido oseo;

- un factor de crecimiento de colageno;

- una citocina;

- un interferon;

5

10

15

20

25

30

35

40

45

- una hormona;

- un factor de crecimiento de union a heparina HBGF-1 y/o HBGF-2;

- un derivado biologicamente activo de uno o mas de los factores de crecimiento enumerados anteriormente;

- cualquier combinacion de dichos factores de crecimiento y/o dichos derivados.

4. Un dispositivo segun cualquiera de los puntos 1-3, en el que la capa de soporte de dicho dispositivo consiste en un polimero biocompatible elegido de entre:

- poliuretanos o sus copolimeros y/o mezclas; siliconas y sus copolimeros y/o mezclas;

- policaprolactona (PCL) lineal o ramificada y/o sus copolimeros y/o mezclas; acido poliglicolico (PGA), acido polilactico y sus copolimeros;

- polihidroxibutirato (PHB);

- polidioxanona;

- poliaminoacidos;

- copolimeros de bloque de polietilenglicol/acido polilactico (PELA);

- copolimeros de bloque de acido poli(D,L-lactico-co-glicolico) (PLGA) - polietilenglicol (PEG) - acido poli(D,L- lactico-co-glicolico) (PLGA) [PLGA-PEG-PLGA];

- copolimeros de bloque de acido polilactico (PLA) - polietilenglicol (PEG) - acido polilactico (PLA) [PLA-PEG- PLA];

- una combinacion de los polimeros enumerados anteriormente.

5. Un dispositivo como en el punto 4, en el que dicho poliuretano (PU) es un poli(eter)uretano (PEtU) aromatico o alifatico, o un poli(ester)uretano (PEsU) aromatico o alifatico, o sus copolimeros y/o mezclas, y dicha silicona es un polidimetilsiloxano (PDMS) terminado con diacetoxisililo.

6. Un dispositivo como en el punto 5, en el que dicho material elastomerico es un copolimero que comprende de 15 a 40 partes en peso de silicona.

7. Un dispositivo como en cualquiera de los puntos 1 -6 para uso medico.

8. Un dispositivo como en el punto 7, usado en el tratamiento de tejidos biologicos danados y/o necroticos.

9. Un dispositivo como en el punto 7 para su uso en cirugia cardiaca reconstructiva o en el tratamiento de ulceras diabeticas, o en el tratamiento de quemaduras.

10. Un dispositivo como en el punto 7 para su uso en ingenieria de tejidos.

11. Un proceso para la fabricacion de un dispositivo segun cualquiera de los puntos 1-6, comprendiendo dicho proceso las siguientes etapas:

(i) la preparacion de la capa de soporte por medio de la tecnica de inversion de fase por pulverizacion, en el que una solucion que contiene trombina se pulveriza durante al menos una etapa de pulverizacion;

(ii) el tratamiento de la capa de soporte obtenida de la etapa (i) con una solucion que contiene fibrinogeno y factor XIII, y posiblemente tambien uno o mas principios activos;

(iii) incubacion en condiciones adecuadas para la formacion de fibrina nanofibrilar reticulada.

12. Un proceso segun el punto 9, en el que la incubacion se realiza a 32-42 °C durante al menos seis horas.

13. Un proceso segun los puntos 9-10, en el que la etapa (ii) se completa sumergiendo la capa de soporte en una solucion que contiene fibrinogeno a una concentracion en el intervalo de 10 a 50 mg/ml, factor XIII a una concentracion en el intervalo de 5 a 60 unidades internacionales por mililitro, y posiblemente uno o mas principios activos.

14. Uso del dispositivo segun cualquiera de los puntos 1-6 para cultivos celulares in vitro.

Claims (14)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   55

   60

   65

   REIVINDICACIONES

   1. Una estructura de parche que comprende:

   - una capa de soporte que consiste en un material de polfmero sintetico biocompatible con una estructura no tejida microporosa;

   - una capa de fibrina con una estructura nanofibrilar reticulada;

   en la que dicha capa de fibrina esta enraizada en la capa de soporte.
2. 2. Un parche segun la reivindicacion 1, en el que al menos un principio activo esta disperso en la capa de fibrina.
3. 3. Un parche segun la reivindicacion 1, que comprende nanopartfculas, y particularmente nanopartfculas de polfmero cargadas con un principio activo, y disenadas para liberar dicho principio activo dentro del tejido durante un periodo de tiempo predeterminado, en el que dichas nanopartfculas pueden dispersarse dentro del espesor de la capa de soporte y/o dentro de la capa de fibrina.
4. 4. Un parche segun una cualquiera de las reivindicaciones 2-3, en el que dicho principio activo se elige de entre:

   - una sustancia con propiedades antimicrobianas y/o antibioticas, y/o antisepticas y/o antivirales, y/o analgesicas, y/o antiinflamatorias, y vitaminas;

   - oxido nftrico;

   - un factor de crecimiento proangiogenico adecuado para inducir la revascularizacion de un tejido danado;

   - VEGF (factores de crecimiento endotelial vascular);

   - bFGF (factores de crecimiento de fibroblastos basicos);

   - PAMP (proadrenomedulina);

   - una relaxina;

   - un factor de crecimiento derivado de lisado de plaquetas;

   - un factor de crecimiento similar a la insulina, particularmente IGF1 y/o IGF2;

   - EGF, factor de crecimiento epidermico;

   - un factor de crecimiento transformante, TGF-p;

   - osteogenina;

   - un factor de crecimiento de tejido oseo;

   - un factor de crecimiento de colageno;

   - una citocina;

   - un interferon;

   - una hormona;

   - un factor de crecimiento de union a heparina HBGF-1 y/o HBGF-2;

   - cualquier combinacion de dichos factores de crecimiento.
5. 5. Un parche segun cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la capa de soporte de dicho dispositivo consiste en un polfmero biocompatible elegido de entre:

   - poliuretanos o sus copolfmeros y/o mezclas;

   - siliconas y sus copolfmeros y/o mezclas;

   - policaprolactona (PCL) lineal o ramificada y/o sus copolfmeros y/o mezclas; acido poliglicolico (PGA), acido polilactico y sus copolfmeros;

   - polihidroxibutirato (PHB);

   - polidioxanona;

   - poliaminoacidos;

   - copolfmeros de bloque de polietilenglicol/acido polilactico (PELA);

   - copolfmeros de bloque de acido poli(D,L-lactico-co-glicolico) (PLGA) - polietilenglicol (PEG)

   - acido poli(D,L-lactico-co-glicolico) (PlGa) [PLGA-PEG-PLGA];

   - copolfmeros de bloque de acido polilactico (PLA) - polietilenglicol (PEG) - acido polilactico (PLA) [PLA-PEG- PLA];

   - una combinacion de los polfmeros enumerados anteriormente.
6. 6. Un parche segun la reivindicacion 5, en el que dicho poliuretano (PU) es un poli(eter)uretano (PEtU) aromatico o alifatico, o un poli(ester)uretano (PEsU) aromatico o alifatico, o sus copolfmeros y/o mezclas, y dicha silicona es un polidimetilsiloxano (PDMS) terminado con diacetoxisililo.
7. 7. Un parche segun la reivindicacion 6, en el que dicho material elastomerico es un copolfmero que comprende de 15 a 40 partes en peso de silicona.
8. 8. Un parche segun cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para uso medico.
9. 9. Un parche segun la reivindicacion 8, usado en el tratamiento de tejidos biologicos danados y/o necroticos.
10. 10. Un parche segun la reivindicacion 8 para su uso en cirugia cardiaca reconstructiva o en el tratamiento de ulceras diabeticas, o en el tratamiento de quemaduras.
11. 11. Un parche segun la reivindicacion 8 para su uso en ingenieria de tejidos.

    5
12. 12. Un proceso para la fabricacion de un parche segun cualquiera de las reivindicaciones 1-7, comprendiendo dicho proceso las siguientes etapas:

    (i) la preparacion de la capa de soporte por medio de tecnica de inversion de fase por pulverizacion, en el que 10 una solucion que contiene trombina se pulveriza durante al menos una etapa de pulverizacion;

    (ii) el tratamiento de la capa de soporte obtenida de la etapa (i) con una solucion que contiene fibrinogeno y factor XIII, y posiblemente tambien uno o mas principios activos;

    (iii) incubacion en condiciones adecuadas para la formacion de fibrina nanofibrilar reticulada.

    15 13. Un proceso segun la reivindicacion 12, en el que la solucion de trombina esta en concentraciones en el intervalo

    de 10 a 500 unidades internacionales por mililitro.
13. 14. Un proceso segun una cualquiera de las reivindicaciones 12-13, en el que la etapa (ii) se completa sumergiendo la capa de soporte en una solucion que contiene fibrinogeno a una concentracion en el intervalo de 10 a 50 mg/ml,

    20 factor XIII a una concentracion en el intervalo de 5 a 60 unidades internacionales por mililitro, y posiblemente uno o mas principios activos.
14. 15. Uso del parche segun cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para cultivos celulares in vitro.