ES2607086T3 - Métodos y composiciones para la inmunoterapia de enfermedades neuronales - Google Patents

Métodos y composiciones para la inmunoterapia de enfermedades neuronales Download PDF

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Robert A. Lazarus
Weiru Wang
Ryan J. Watts
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Abstract

Un anticuerpo aislado, o un fragmento del mismo, que se une a BACE1, anticuerpo que reduce o inhibe la actividad del polipéptido BACE1, comprendiendo dicho anticuerpo: una secuencia de HVR-H1 de SEQ ID NO: 22 o 23, una secuencia de HVR-H2 de SEQ ID NO: 24 y una secuencia de HVR-H3 de SEQ ID NO: 25; y una secuencia de HVR-L1 de SEQ ID NO: 7 o SEQ ID NO: 8; una secuencia de HVR-L2 de SEQ ID NO: 9 o SEQ ID NO: 10; y una secuencia de HVR-L3 seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID NO: 11-16.

Description

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niveles de Aβ1-40 en ratones de tipo silvestre. Se examinaron los niveles de Aβ1-40 en ratones BACE1+/+ frente a ratones BACE1-/-. Los ratones recibieron una sola dosis de anticuerpo IgG de control o anticuerpo YW412.8.31 anti-BACE como se describe en el Ejemplo 4. La Figura 16A muestra los resultados de estudios genéticos que examinan la contribución de BACE1 a la producción de Aβ1-40 en ratones. Los niveles de Aβ1-40 observados en ratones con desactivación de BACE1 (BACE1-/-) proporcionan un control de cómo los inhibidores específicos de BACE1 alteran la producción de Aβ1-40 en ratones de tipo silvestre. La Figura 16B muestra los efectos de la dosificación de IgG de control o anti-BACE1 YW412.8.31 (50 mg/kg) sobre la producción de Aβ1-40 en el plasma y el SNC (corteza) de 24 o 48 horas después de la dosificación. Se administró una sola dosis de anticuerpo IgG de control o anti-BACE1 (50 mg/kg) mediante inyección i.v. a ratones C57B1/6. De 24 o 48 horas más tarde, se recogieron muestras de plasma y cerebro para analizar el Aβ1-40. El Aβ1-40 del plasma se redujo en un 35 % (a las 24 h) y el Aβ1-40 cortical en 20 %. Los valores representados son la media (± ETM) *p <0,01; ** p < 0,001. Las Figuras 17A-17B proporcionan resultados de los experimentos realizados con el anticuerpo anti-BACE1 YW412.8.31 in vivo descritos en el Ejemplo 4. La Figura 17A muestra gráficas de los niveles de Aβ1-40 observados en el plasma y el hipocampo de los ratones tratados con el anticuerpo anti-BACE1 YW412.8.31 a dos concentraciones diferentes en comparación con el tratamiento con vehículo de control. La Figura 17B es una gráfica de farmacocinética individual frente a las lecturas farmacodinámicas, que indica que existe una relación PK/PD en este modelo de ratón para el anticuerpo anti-BACE1 YW412.8.31. Las Figuras 18A y 18B muestran una comparación de experimentos en los que ratones transgénicos hAPP recibieron el anticuerpo anti-BACE1 YW412.8.31 sistémicamente (Panel A, el mismo experimento que se describe en la Figura 17A vuelto a representar a modo comparativo) o mediante la infusión continua de i.c.v. (Panel B). En la Figura 18A, los animales recibieron vehículo o anticuerpo anti-BACE1 (30 o 100 mg/kg) mediante inyección i.p. (3 dosis cada 4 días). 2 horas después de la última dosis, se recogieron muestras de plasma y de cerebro para analizar Aβ1-40 y Aβ1-42. Se redujeron los niveles de Aβ1-40 y Aβ1-42 en plasma hasta niveles de control de 30 % de anticuerpo anti-BACE tanto a 30 como a 100 mg/kg. Los niveles de Aβ1-40 y Aβ1-42 del hipocampo se redujeron (13-22 %) por la alta dosis de anti-BACE1 (100 mg/kg), y los niveles de Aβ1-40 y Aβ142 corticales mostraron una tendencia hacia la reducción (12-18 %). En la Figura 18B, se suministraron anticuerpo IgG de control o anticuerpo anti-BACE1 por infusión i.c.v. unilateral durante 7 días. Se observaron reducciones constantes en Aβ1-40 y Aβ1-42 a ambas dosis en la corteza (15-23 %) y en el hipocampo (15-20 %). El panel C muestra los niveles de anticuerpo anti-BACE1 en el cerebro tras la administración sistémica frente a la administración i.c.v. Los valores representados son la media (± ETM) *p < 0,05; ** p < 0,001 Las Figuras 19A y 19B muestran el análisis PK de una sola dosis de anti-BACE1 YW412.8.31 (1 o 10 mg/kg) administrada mediante inyección i.v. a ratones BALB/C (Figura 19A). Se analizó la PK del suero a los 21 días después de la dosis. Se usaron dos ensayos de PK separados: un ensayo para detectar todos los anti-BACE1 del suero (mAb total), y un ensayo para detectar solamente el anti-BACE1 no unido en el suero (mAb libre). El análisis PK de una sola dosis en ratones BACE1+/+, BACE1+/-y BACE1-/-confirma la no linealidad observada en el estudio inicial, e indica que la eliminación potenciada está, en efecto, mediada por la diana (Figura 19B). Las Figuras 20A y 20B muestran el análisis PK de macacos cangrejeros que han recibido anticuerpo IgG de control o anticuerpo anti-BACE1 YW412.8.31 (30 mg/kg) mediante la administración i.v. Se midieron las concentraciones totales de de anticuerpos anti-BACE1 o de control en suero de mono (Figura 20A) y muestras de LCR (Figura 20B) usando anticuerpo policlonal IgG anti-humano de cabra adsorbido en mono (Bethyl, Montgomery, TX) como se describe en el Ejemplo 5. Las Figuras 21A-21D son los resultados de los experimentos descritos en el Ejemplo 5, en el que los macacos cangrejeros recibieron anticuerpo IgG de control o anti-BACE1 YW412.8.31 mediante la administración i.v. Las líneas sombreadas muestran los datos de los animales individuales, y las líneas continuas muestran las medias de los grupos. Se tomaron muestras de plasma y de LCR 7 días, 2 días y justo antes de la dosificación para fijar un valor medio de los niveles basales de Aβ1-40 en cada mono individual. Se midieron los niveles de Aβ1-40 en plasma (Figura 21A) y de Aβ1-40 del LCR (Figura 21B) en diversos momentos. También se muestra la variabilidad a través de los animales en el nivel basal de Aβ1-40 en plasma (Figura 21C) y LCR (Figura 21D). Las Figuras 22A y 22B muestran la producción de Αβ tras la administración sistémica de YW412.8.31 en ratones de tipo silvestre. La Figura 22A es una gráfica que muestra la producción de Aβ1-40 después de una sola dosis de IgG de control o YW412.8.31 (100 mg/kg) administrada por inyección i.p. a ratones C57B1/6J. 4 horas más tarde, se recogieron muestras de plasma y de cerebro para analizar Aβ1-40. El Aβ1-40 en plasma se redujo en un 48 %, pero el Aβ1-40 del cerebro anterior no se redujo en este paradigma. La Figura 22B es una gráfica que muestra la producción de Aβ1-40 tras la administración de IgG de control o de YW412.8.31 (30 o 100 mg/kg) mediante 3 inyecciones i.p., con 4 días de diferencia. 4 horas después de la última dosis, se recogieron muestras de plasma y de cerebro para analizar el Aβ1-40. El Aβ1-40 en plasma se reduce en 50-53 %, mientras que el Aβ1-40 del cerebro anterior no se reduce mediante la dosificación a 30 mg/kg, pero se reduce en un 42 % cuando se dosifica a 100 mg/kg. Los valores representados son la media (± ETM) *p < 0,0001. Las Figuras 23A-23C muestran las secuencias de aminoácidos de cadena ligera del clon YW412.8.31 y las formas de afinidad madurada de YW412.8.31. Las Figuras 23A-23C representan las alineaciones de las secuencias de cadena ligera completas. Las secuencias de HVR para cada clon se indican por las regiones de los recuadros, indicando el primer recuadro HVR-L1 (SEQ ID NO: 7 -Figura 23A), indicando el segundo recuadro HVR-L2 (SEQ ID NO: 9 y 58-64 -Figura 23B), e indicando el tercer recuadro HVR-L3 (SEQ ID NO: 12 y 66-67 -Figura 23C). Las Figuras 24A-24C muestran las secuencias de aminoácidos de cadena pesada del clon YW412.8.31 y las formas de afinidad madurada de YW412.8.31. Las Figuras 24A-24C representan las alineaciones de las
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secuencias de cadena pesada completas. Las secuencias de HVR para cada clon se indican por las regiones de los recuadros, indicando el primer recuadro HVR-H1 (SEQ ID NO: 24 y 71-73 -Figura 24A), indicando el segundo recuadro HVR-H2 (SEQ ID NO: 24 y 74-78 -Figura 24B) e indicando el tercer recuadro HVR-H3 (SEQ ID NO: 25 y 79 -Figura 24C). Las Figuras 25A y B representan gráficas que muestran la inhibición de BACE1 con clones YW412.8.31 y de afinidad madurada en un ensayo HTRF como se describe en el Ejemplo 6. Se ensayó la capacidad de los clones YW412.8.31.3S; YW412.8.31.9S; YW412.8.31.25S; YW412.8.31.58S; YW412.8.31.53; YW412.8.31.69; YW412.8.31.77; YW412.8.31.81S y YW412.8.31.89S para inhibir la actividad proteasa de BACE1.
Descripción detallada de realizaciones de la invención
I. DEFINICIONES
Un "marco conservado aceptor humano" para los fines del presente documento es un marco conservado que comprende la secuencia de aminoácidos de un marco conservado de dominio variable de cadena ligera (VL) o marco conservado de dominio variable de cadena pesada (VH) derivado de un marco conservado de inmunoglobulina humano o un marco conservado consenso humano, como se define a continuación. Un marco conservado aceptor humano "derivado de" un marco conservado de inmunoglobulina humano o un marco conservado consenso humano puede comprender la misma secuencia de aminoácidos del mismo, o puede contener cambios en la secuencia de aminoácidos. En algunas realizaciones, el número de cambios de aminoácidos es de 10
o menos, 9 o menos, 8 o menos, 7 o menos, 6 o menos, 5 o menos, 4 o menos, 3 o menos, o 2 o menos. En algunas realizaciones, el marco conservado aceptor humano de VL es idéntico en la secuencia a la secuencia del marco conservado de inmunoglobulina humano de VL o la secuencia del marco conservado consenso humano.
La "afinidad" se refiere a la fuerza de la suma total de interacciones no covalentes entre un único sitio de unión de una molécula (por ejemplo, un anticuerpo) y su pareja de unión (por ejemplo, un antígeno). A no ser que se indique lo contrario, como se usa en el presente documento, "afinidad de unión" se refiere a la afinidad de unión intrínseca que refleja una interacción 1:1 entre miembros de un par de unión (por ejemplo, anticuerpo y antígeno). La afinidad de una molécula X por su pareja Y puede representarse, en general, por la constante de disociación (Kd). La afinidad puede medirse mediante métodos habituales conocidos en la técnica, incluyendo los descritos en el presente documento. A continuación, se describen realizaciones ilustrativas y de ejemplo específicas para medir la afinidad de unión.
Un anticuerpo de "afinidad madurada" se refiere a un anticuerpo con una o más modificaciones en una o más regiones hipervariables (HVR), en comparación con un anticuerpo parental que no posee dichas modificaciones, dando lugar dichas modificaciones a una mejora en la afinidad del anticuerpo por el antígeno.
Las expresiones "anticuerpo anti-beta-secretasa", "anticuerpo anti-BACE1", "un anticuerpo que se une a betasecretasa" y "un anticuerpo que se une a BACE1" se refieren a un anticuerpo que es capaz de unirse a BACE1 con suficiente afinidad de manera que el anticuerpo es útil como agente de diagnóstico y/o terapéutico en la dirección de BACE1. En una realización, el grado de unión de un anticuerpo anti-BACE1 a una proteína no BACE1, no relacionada, es inferior al aproximadamente 10 % de la unión del anticuerpo a BACE1 medida, por ejemplo, mediante un radioinmunoensayo (RIA). En ciertas realizaciones, un anticuerpo que se une a BACE1 tiene una constante de disociación (Kd) ≤ 1 μΜ, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0,1 nM, ≤ 0,01 nM o ≤ 0,001 nM (por ejemplo, 10-8 M o inferior, por ejemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por ejemplo, de 10-9 M a 10-13 M). En ciertas realizaciones, un anticuerpo anti-BACE1 se une a un epítopo de BACE1 que se conserva entre los BACE1 de diferentes especies e isoformas.
El término "anticuerpo" se usa en el presente documento en el sentido más amplio y engloba diversas estructuras de anticuerpos, incluyendo, pero sin limitación, anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) y fragmentos de anticuerpos, siempre que presenten la actividad de unión al antígeno deseada.
Un "fragmento de anticuerpo" se refiere a una molécula que no es un anticuerpo intacto que comprende una parte de un anticuerpo intacto que se une el antígeno al que se une el anticuerpo intacto. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, pero sin limitación, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo monocatenarias (por ejemplo, scFv); y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.
Un "anticuerpo que se une al mismo epítopo" como anticuerpo de referencia se refiere a un anticuerpo que bloquea la unión del anticuerpo de referencia a su antígeno en un ensayo de competición en un 50 % o más, y por el contrario, el anticuerpo de referencia bloquea la unión del anticuerpo a su antígeno en un ensayo de competición en un 50 % o más. En el presente documento, se proporciona ensayo de competición ilustrativo.
El término anticuerpo "quimérico" se refiere a un anticuerpo en el que una parte de la cadena pesada y/o ligera se deriva de una fuente o especie, mientras que el resto de la cadena pesada y/o ligera se deriva de una fuente o
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Un anticuerpo "humanizado" se refiere a un anticuerpo quimérico que comprende restos de aminoácidos de HVR no humanas y restos de aminoácidos de FR humanos. En ciertas realizaciones, un anticuerpo humanizado comprenderá esencialmente la totalidad de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables, en los que todas o esencialmente todas las HVR (por ejemplo, CDR) corresponden a las de un anticuerpo no humano, y todos o esencialmente todos los FR corresponden a los de un anticuerpo humano. Un anticuerpo humanizado puede comprender opcionalmente al menos una parte de una región constante de anticuerpo derivado de un anticuerpo humano. Una "forma humanizada" de un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo no humano, se refiere a un anticuerpo que ha sido sometido a humanización.
La expresión "región hipervariable" o "HVR", cuando se usa en el presente documento, se refiere cada una de las regiones de un dominio variable de anticuerpo que son de secuencia hipervariable y/o forman bucles estructuralmente definidos (“bucles hipervariables”). En general, los anticuerpos de cuatro cadenas nativos comprenden seis HVR; tres en VH (H1, H2, H3), y tres en VL (L1, L2, L3). Las HVR, en general, comprenden restos de aminoácidos de los bucles hipervariables y/o de las "regiones determinantes de la complementariedad" (CDR), siendo estas últimas de mayor variabilidad de secuencia y/o que participan en el reconocimiento del antígeno. Los bucles hipervariables ilustrativos se producen en los restos de aminoácidos 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) y 96-101 (H3). (Chothia y Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Las CDR ilustrativas (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3) se producen en los restos de aminoácidos 24-34 de L1, 50-56 de L2, 89-97 de L3, 31-35B de H1, 50-65 de H2 y 95-102 de H3. (Kabat et al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). Con la excepción de CDR1 en VH, las CDR, en general, comprenden los restos de aminoácidos que forman los bucles hipervariables. Las CDR también comprenden "restos determinantes de la especificidad", o "SDR", que son los restos que entran en contacto con el antígeno. Los SDR están contenidos dentro de las regiones CDR denominadas de forma abreviada CDR o a-CDR. Las a-CDR ilustrativas (a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2 y a-CDR-H3) se producen en los restos de aminoácidos 31-34 de L1, 50-55 de L2, 89-96 de L3, 31-35B de H1, 50-58 de H2 y 95-102 de H3. (Véase Almagro y Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)). A menos que se indique lo contrario, los restos de HVR y otros restos del dominio variable (por ejemplo, los restos de FR) se numeran en el presente documento de acuerdo con Kabat et al., supra.
Un "inmunoconjugado" es un anticuerpo conjugado a una o más moléculas heterólogas, incluyendo, pero sin limitación, un agente citotóxico.
Un "individuo" o "sujeto" es un mamífero. Los mamíferos incluyen, pero sin limitación, animales domesticados (por ejemplo, vacas, ovejas, gatos, perros y caballos), primates (por ejemplo, seres humanos y primates no humanos tales como monos), conejos y roedores (por ejemplo, ratones y ratas). En ciertas realizaciones, el individuo o sujeto es un ser humano.
Un anticuerpo "aislado" es aquel que se ha separado de un componente de su entorno natural. En algunas realizaciones, un anticuerpo está purificado hasta más del 95 % o 99 % de pureza determinada mediante, por ejemplo, electroforesis (por ejemplo, SDS-PAGE, enfoque isoeléctrico (IEF), electroforesis capilar) o cromatografía (por ejemplo, HPLC de intercambio iónico o HPLC de fase inversa). Para consultar una revisión de los métodos para la evaluación de la pureza de los anticuerpos, véase, por ejemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007).
Un ácido nucleico "aislado" se refiere a una molécula de ácido nucleico que se ha separado de un componente de su entorno natural. Un ácido nucleico aislado incluye una molécula de ácido nucleico contenida en células que contienen normalmente la molécula de ácido nucleico, pero la molécula de ácido nucleico está presente extracromosómicamente o en una ubicación cromosómica que es diferente de su ubicación cromosómica natural.
"Ácido nucleico aislado que codifica un anticuerpo anti-BACE1" se refiere a una o más moléculas de ácido nucleico que codifican cadenas pesadas y ligeras de anticuerpo (o fragmentos de las mismas), incluyendo dicha/s molécula/s de ácido nucleico en un único vector o vectores separados, y dicha/s molécula/s de ácido nucleico presente/s en una
o más ubicaciones de una célula hospedadora.
La expresión "anticuerpo monoclonal", como se usa en el presente documento, se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos esencialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos y/o se unen al mismo epítopo, excepto por posibles variantes de anticuerpos, por ejemplo, que contienen mutaciones de origen natural o que se producen durante la producción de un preparado de anticuerpo monoclonal, estando, en general, dichas variantes presentes en cantidades menores. En contraste con los preparados de anticuerpos policlonales, que normalmente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal de un preparado de anticuerpo monoclonal se dirige contra un único determinante en un antígeno. Por lo tanto, el adjetivo "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo como el obtenido de una población esencialmente homogénea de anticuerpos, y no debe interpretarse como que requiere la producción del anticuerpo mediante cualquier método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que se van a usar de acuerdo con la presente invención se pueden preparar mediante una variedad de técnicas, incluyendo, pero sin limitación, el método del hibridoma, métodos de ADN recombinante, métodos de presentación
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en fagos y métodos que utilizan animales transgénicos que contienen la totalidad o parte de los locus de inmunoglobulina humana, estando dichos métodos y otros métodos ilustrativos de fabricación de anticuerpos monoclonales descritos en el presente documento.
Un "anticuerpo desnudo" se refiere a un anticuerpo que no está conjugado a una fracción heteróloga (por ejemplo, una fracción citotóxica) o un radiomarcador. El anticuerpo desnudo puede estar presente en una formulación farmacéutica.
"Los anticuerpos nativos" se refieren a moléculas de inmunoglobulina de origen natural con estructuras variables. Por ejemplo, los anticuerpos IgG nativos son glicoproteínas heterotetraméricas de aproximadamente 150.000 Da, compuestas de dos cadenas ligeras idénticas y dos cadenas pesadas idénticas que son enlaces de disulfuro. Desde el extremo N-a C-terminal, cada cadena pesada tiene una región variable (VH), también denominada dominio pesado variable o dominio variable de cadena pesada, seguida de tres dominios constantes (CH1, CH2 y CH3). Del mismo modo, a partir del extremo N-a C-terminal, cada cadena ligera tiene una región variable (VL), también denominada dominio variable ligero o dominio variable de cadena ligera, seguida de un dominio ligero constante (CL). La cadena ligera de un anticuerpo se puede asignar a uno de dos tipos, denominados kappa (κ) y lambda (λ), basándose en la secuencia de aminoácidos de su dominio constante.
El término "prospecto" se usa para referirse a las instrucciones incluidas habitualmente en envases comerciales de productos terapéuticos, que contienen información sobre las indicaciones, el uso, las dosis, la administración, la terapia de combinación, contraindicaciones y/o advertencias sobre el uso de dichos productos terapéuticos.
"Porcentaje (%) de identidad de secuencia de aminoácidos" con respecto a una secuencia de polipéptido de referencia se define como el porcentaje de restos de aminoácidos de una secuencia candidata que son idénticos a los restos de aminoácidos de la secuencia polipeptídica de referencia, después de alinear las secuencias e introducir huecos, si es necesario, para conseguir el máximo de porcentaje de identidad de secuencia, y sin considerar ninguna sustitución conservativa como parte de la identidad de secuencia. La alineación con el fin de determinar el porcentaje de identidad de secuencia de aminoácidos puede conseguirse de diversas maneras que están dentro del alcance de la técnica, por ejemplo, usando software informáticos disponibles para el público, tales como los software BLAST, BLAST-2, ALIGN o Megalign (DNASTAR). Los expertos en la materia pueden determinar los parámetros apropiados para la alineación de secuencias, incluyendo cualquier algoritmo necesario para conseguir el máximo alineamiento sobre la longitud completa de las secuencias que se comparan. Para los fines del presente documento, sin embargo, los valores % de identidad de secuencia de aminoácidos se generan usando el programa informático de comparación de secuencias ALIGN-2. El programa informático de comparación de secuencias ALIGN-2 es propiedad de Genentech, Inc., y el código fuente se ha presentado con la documentación de usuario en la Oficina de Derechos de Autor de EE.UU., Washington DC, 20559, donde se encuentra registrado bajo derechos de autor de EE.UU. n.º TXU510087. El programa ALIGN-2 está disponible para el público en Genentech, Inc., South San Francisco, California, o puede compilarse a partir del código fuente. El programa ALIGN-2 debería compilarse para su uso en un sistema operativo UNIX, incluyendo UNIX V4.0D digital. Todos los parámetros de comparación de secuencias son fijados por el programa ALIGN-2 y no varían.
En situaciones en las que se usa ALIGN-2 para las comparaciones de secuencias de aminoácidos, el % de identidad de secuencia de aminoácidos de una secuencia de aminoácidos dada A con respecto a, con, o contra una secuencia de aminoácidos dada B (que, como alternativa, puede expresarse como una secuencia de aminoácidos dada A que tiene o comprende un determinado % de identidad de secuencia de aminoácidos con respecto a, con o contra una secuencia de aminoácidos dada B) se calcula de la siguiente manera:
100 veces la fracción X/Y
donde X es el número de restos de aminoácidos identificados como coincidencias idénticas por el programa de alineación de secuencias ALIGN-2 en la alineación del programa de A y B, y donde Y es el número total de restos de aminoácidos de B. Se apreciará que, cuando la longitud de la secuencia de aminoácidos A no es igual a la longitud de la secuencia de aminoácidos B, el % de identidad de secuencia de aminoácidos de A con respecto a B no será igual a % de identidad de secuencia de aminoácidos de B con respecto a A. a menos que se indique específicamente otra cosa, todos los valores de % de identidad de secuencia de aminoácidos usados en el presente documento se obtienen como se describe en el párrafo inmediatamente anterior usando el programa informático ALIGN-2.
La expresión "formulación farmacéutica" se refiere a un preparado que está en una forma que permite que la actividad biológica de un principio activo contenido en el mismo sea eficaz, y que no contiene componentes adicionales que sean inaceptablemente tóxico para un sujeto al que se administraría la formulación.
Un "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un ingrediente de una formulación farmacéutica, distinto de un principio activo, que no es tóxico par un sujeto. Un vehículo farmacéuticamente aceptable incluye, pero sin limitación, un tampón, un excipiente, un estabilizante o un conservante.
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de las mismas, e incluyen, pero sin limitación, dolor crónico (incluyendo dolor nociceptivo (dolor causado por una lesión en tejidos del cuerpo, incluyendo el dolor relacionado con el cáncer), dolor neuropático (dolor causado por anomalías en los nervios, la médula espinal o el cerebro) y el dolor psicógeno (total o mayormente relacionado con un trastorno psicológico), dolor de cabeza, migraña, neuropatía, y los síntomas y síndromes que suelen acompañar a dichos trastornos neuropáticos tales como vértigo o nauseas. Las amiloidosis son un grupo de enfermedades y trastornos asociados con los depósitos proteicos extracelulares del SNC, incluyendo, pero sin limitación, la amiloidosis secundaria, amiloidosis relacionada con la edad, enfermedad de Alzheimer (EA), deterioro cognitivo leve (MCI), demencia con cuerpos de Lewy, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (tipo holandés); el complejo de Parkinson-demencia de Guam, angiopatía amiloide cerebral, enfermedad de Huntington, parálisis supranuclear progresiva, esclerosis múltiple; enfermedad de Creutzfeld Jacob, enfermedad de Parkinson, encefalopatía espongiforme transmisible, demencia relacionada con el VIH, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), miositis con cuerpos de inclusión (IBM) y enfermedades oculares relacionadas con la deposición de amiloide-beta (es decir, degeneración macular, neuropatía óptica relacionadas con drusas y cataratas). Los cánceres del SNC se caracterizan por la proliferación aberrante de una o más células del SNC (es decir, una célula neuronal), e incluyen, pero sin limitación, glioma, glioblastoma multiforme, meningioma, astrocitoma, neuroma acústico, condroma, oligodendroglioma, meduloblastomas, ganglioglioma, schwannoma, neurofibroma, neuroblastoma, y tumores extradurales, intramedulares o intradurales. Las enfermedades o los trastornos oculares son enfermedades o trastornos del ojo, lo que para los fines del presente documento se considera un órgano del SNC sometido a la barrera hematoencefálica. Las enfermedades o los trastornos oculares incluyen, pero sin limitación, trastornos de la esclerótica, de la córnea, del iris y del cuerpo ciliar (es decir, escleritis, queratitis, úlcera corneal, abrasión corneal, ceguera de la nieve, ojo de arco, queratopatía punteada superficial de Thygeson, neovascularización corneal, distrofia de Fuchs, queratocono, queratoconjuntivitis seca, iritis y uveítis), trastornos del cristalino (es decir, cataratas), trastornos de la coroides y la retina (es decir, desprendimiento de retina, retinosquisis, retinopatía hipertensiva, retinopatía diabética, retinopatía, retinopatía del prematuro, degeneración macular relacionada con la edad, degeneración macular (húmeda o seca), membrana epirretiniana, retinitis pigmentosa y edema macular), glaucoma, flotadores, trastornos del nervio óptico y las vías visuales (es decir, neuropatía óptica hereditaria de Leber y drusas del disco óptico), trastornos de los músculos oculares/acomodación del movimiento binocular/refracción (es decir, estrabismo, oftalmoparesia, oftalmoplejía progresiva externa, esotropía, exotropía, hipermetropía, miopía, astigmatismo, anisometropía, presbicia y oftalmoplejía), trastornos de la visión y ceguera (es decir, ambliopía, amaurosis congénita de Lever, escotoma, daltonismo, acromatopsia, nictalopia, ceguera, oncocercosis y microoptalmia/coloboma), enrojecimiento de los ojos, pupila de Argyll Robertson, queratomicosis, xeroftalmia y andaniridia. Las infecciones virales o microbianas del SNC incluyen, pero sin limitación, infecciones por virus (es decir, gripe, VIH, virus de la polio, rubéola), bacterias (es decir, Neisseria sp., Streptococcus sp., Pseudomonas sp., Proteus sp., E. coli, S. aureus, Pneumococcus sp., Meningococcus sp., Haemophilus sp. y Mycobacterium tuberculosis) y otros microorganismos tales como hongos (es decir, levaduras, Cryptococcus neoformans), parásitos (es decir, Toxoplasma gondii) o amebas que producen fisiopatologías del SNC incluyendo, pero sin limitación, meningitis, encefalitis, mielitis, vasculitis y absceso, que pueden ser agudas o crónicas. La inflamación del SNC es la inflamación que se produce por una lesión en el SNC, que puede ser una lesión física (es decir, debido a un accidente, cirugía, traumatismo cerebral, lesión de la médula espinal, conmoción cerebral) o una lesión debida a o en relación con una o más otras enfermedades o trastornos del SNC (es decir, absceso, cáncer, infección viral o microbiana). La isquemia del SNC, como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo de trastornos relacionados con el flujo de sangre o el comportamiento vascular aberrante en el cerebro, o las causas de los mismos, e incluye, pero sin limitación, isquemia cerebral focal, isquemia cerebral global, apoplejía (es decir, hemorragia subaracnoidea y hemorragia intracerebral) y aneurisma. Las enfermedades neurodegenerativas son un grupo de enfermedades y trastornos asociados con la pérdida de función o la muerte de células neuronales en el SNC, e incluyen, pero sin limitación, adrenoleucodistrofia, enfermedad de Alexander, enfermedad de Alper, esclerosis lateral amiotrófica, ataxia telangiectasia, enfermedad de Batten, síndrome de cockayne, degeneración corticobasal, degeneración causada por o asociada con una amiloidosis, ataxia de Friedreich, degeneración del lóbulo frontotemporal, enfermedad de Kennedy, atrofia de múltiples sistemas, esclerosis múltiple, esclerosis lateral primaria, parálisis supranuclear progresiva, atrofia muscular espinal, mielitis transversa, enfermedad de Refsum, y ataxia espinocerebelosa. Las enfermedades y los trastornos de convulsiones del SNC implican la conducción eléctrica inapropiada y/o anómala en el SNC, e incluyen, pero sin limitación, epilepsia (es decir, crisis de ausencia, convulsiones atónicas, epilepsia rolándica benigna, ausencia infantil, convulsiones clónicas, convulsiones parciales complejas, epilepsia del lóbulo frontal, convulsiones febriles, espasmos infantiles, epilepsia mioclónica juvenil, epilepsia de ausencia juvenil, síndrome de Lennox-Gastaut, síndrome de Landau-Kleffner, síndrome de Dravet, síndrome DE Otahara, síndrome de West, convulsiones mioclónicas, trastornos mitocondriales, epilepsias mioclónicas progresivas, convulsiones psicógenas, epilepsia refleja, síndrome de Rasmussen, convulsiones parciales simples, ataques generalizados secundarios, epilepsia del lóbulo temporal, convulsiones toniclónicas, ataques tónicos, ataques psicomotores, epilepsia límbica, convulsiones de inicio parcial, convulsiones de inicio generalizado, estado de mal epiléptico, epilepsia abdominal, convulsiones acinéticas, convulsiones autonómicas, mioclonía bilateral masiva, epilepsia catamenial, ataques de gota, convulsiones emocionales, convulsiones focales, convulsiones gelásticas, crisis epiléptica jacksoniana, enfermedad de Lafora, convulsiones motoras, convulsiones multifocales, convulsiones nocturnas, convulsiones por fotofobia, pseudo convulsiones, convulsiones sensoriales, convulsiones sutiles, convulsiones selváticas, convulsiones por abstinencia y ataques reflejos visuales). Los trastornos del comportamiento son los trastornos del SNC caracterizados por un comportamiento aberrante por parte del sujeto afectado, e incluyen, pero sin limitación, trastornos del sueño (por ejemplo, insomnio, parasomnias,
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terrores nocturnos, trastornos del sueño del ritmo circadiano y narcolepsia), trastornos del estado de ánimo (por ejemplo, depresión, depresión suicida, ansiedad, trastornos afectivos crónicos, fobias, ataques de pánico, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno por déficit de atención con hiperactividad (TDAH), trastorno por déficit de atención (ADD), síndrome de fatiga crónica, agorafobia, trastorno de estrés postraumático, trastorno bipolar), trastornos de la alimentación (es decir, anorexia o bulimia), psicosis, trastornos de comportamiento de desarrollo (es decir, autismo, síndrome de Rett, síndrome de Aspberger), trastornos de personalidad y trastornos psicóticos (es decir, esquizofrenia, trastorno delirante y similares). Las enfermedades de almacenamiento lisosomal son trastornos metabólicos que, en algunos casos, están asociados con el SNC o tienen síntomas específicos del SNC; dichos trastornos incluyen, pero sin limitación, enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Gaucher, enfermedad de Fabry, mucopolisacaridosis (tipos I, II, III, IV, V, VI y VII), enfermedad de almacenamiento de glucógeno, gangliosidosis GM1, leucodistrofia metacromática, enfermedad de Farber, leucodistrofia de Canavan y lipofuscinosis ceroides neuronales de tipo 1 y 2, enfermedad de Niemann-Pick, enfermedad de Pompe y enfermedad de Krabbe.
II. COMPOSICIONES Y MÉTODOS
En un aspecto, la invención se basa, en parte, en anticuerpos que se unen a BACE1 y reducen y/o inhiben la actividad de BACE1. En ciertas realizaciones, se proporcionan anticuerpos que se unen al sitio activo o a un exositio de BACE1.
A. Ejemplos de anticuerpos Anti-BACE1
En un aspecto, la divulgación se refiere a un anticuerpo anti-BACE1 que comprende al menos uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis HVR seleccionadas entre (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, 23, 26, 28, 45, 68, 71, 72, 73 o 120; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24, 29, 46, 69, 74, 75, 76, 77, 78 o 121; (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, 30, 47, 70, 79 o 122; (d) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, 8, 17, 35 o 42; (e) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9, 10, 18, 36-39, 41, 43, 56, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 o 118; y (f) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11-16, 19, 40, 44, 57, 65, 66, 67 o 119.
En un aspecto, la divulgación se refiere a un anticuerpo que comprende al menos uno, al menos dos o las tres secuencias de HVR de VH seleccionadas entre (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, 23, 26, 28, 45, 68, 71-73 o 120; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24, 29, 46, 69, 74-78 o 121; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, 30, 47, 70, 79 o 122.
En un aspecto, el anticuerpo comprende HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 22 o SEQ ID NO: 23 o SEQ ID NO: 28 o SEQ ID NO: 71 o SEQ ID NO: 72 o SEQ ID NO: 73. En otro aspecto, el anticuerpo comprende HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 24 o SEQ ID NO: 29 o SEQ ID NO: 74 o SEQ ID NO: 75 o SEQ ID NO: 76 o SEQ ID NO: 77 o SEQ ID NO: 78. En una realización adicional, el anticuerpo comprende HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 25 o SEQ ID NO: 30 o SEQ ID NO: 79. En un aspecto, el anticuerpo comprende HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 28. En otro aspecto, el anticuerpo comprende HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 29. En un aspecto adicional, el anticuerpo comprende HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 30.
En otro aspecto, el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; o el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; y
(c)
HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25. En un aspecto adicional, el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 28; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 29; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 30. En un aspecto adicional, el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 74; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 o el anticuerpo comprende
(a)
HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 75; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 o el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 71;
(b)
HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 o el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 72; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; y
(c)
HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; o el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 76; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; o el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; (b) HVR-H2
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que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 77; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 79; o el anticuerpo comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 73; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 78; y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25.
En otro aspecto, la divulgación se refiere a un anticuerpo que comprende al menos uno, al menos dos o las tres secuencias de HVR DE VL seleccionadas entre (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, 8, 17, 35 y 42; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9, 10, 18, 36-39, 41, 43, 56, 58-64 o 118; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11-16, 19, 40, 44, 57, 65-67 o 119.
En un aspecto, el anticuerpo comprende HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7 o SEQ ID NO: 8. En otra realización, el anticuerpo comprende HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 9 o SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 58 o SEQ ID NO: 59 o SEQ ID NO: 60 o SEQ ID NO: 61 o SEQ ID NO: 62
o SEQ ID NO: 63 o SEQ ID NO: 64. En un aspecto adicional, el anticuerpo comprende HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 o SEQ ID NO: 12 o SEQ ID NO: 13 o SEQ ID NO: 14 o SEQ ID NO: 15 o SEQ ID NO: 16 o SEQ ID NO: 65 o SEQ ID NO: 66 o SEQ ID NO: 67. En otro aspecto, el anticuerpo comprende HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 35. En otro aspecto, el anticuerpo comprende HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 36-39. En un aspecto adicional, el anticuerpo comprende HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 40.
En otro aspecto, el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID 15 NO: 13; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15. En una realización adicional, el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 35; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 36; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 40; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 35; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 37; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 40; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 35; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 38; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 40; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 35; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 39; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 40.
En otro aspecto, el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 58; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 65; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 35 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 59; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 66; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID 40 NO: 67; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 60; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 61; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 65; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 59; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 66; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1
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que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 62; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 63; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID 50 NO: 12; o el anticuerpo comprende (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 64; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12.
En otro aspecto, un anticuerpo de la divulgación comprende (a) un dominio VH que comprende al menos uno, al menos dos o las tres secuencias de HVR de VH seleccionadas entre (i) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos seleccionadas entre SEQ ID NO: 22, 23, 26, 28, 45, 68, 71-73 o 120 (ii) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos seleccionadas entre SEQ ID NO: 24, 29, 46, 69, 74-78 o 121 e (iii) HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 25, 30, 47, 70, 79 o 122; y (b) un dominio VL que comprende al menos uno, al menos dos o las tres secuencias de HVR de VL seleccionadas entre (i) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos seleccionadas entre SEQ ID NO: 7, 8, 17, 35 o 42, (ii) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos seleccionadas entre SEQ ID NO: 9, 10, 18, 36-39, 41, 43, 56, 58-64 o 118, y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos seleccionadas entre SEQ ID NO: 11-16, 19, 40, 44, 57, 65-67 o 119.
En otro aspecto, la divulgación se refiere a un anticuerpo que comprende (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25; (d) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; (e) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9; y (f) HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 12.
En ciertos aspectos, el anticuerpo comprende al menos una secuencia seleccionada entre HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, en las que HVR-H1 comprende la secuencia de aminoácidos GFX30FX31X32X33X34IH (SEQ ID NO: 45), en la que X30 = N o T; X31 = S, L o Y; X32 = G o Y; X33 = Y o S; y X34 = A, G o S; en las que HVR-H2 comprende la secuencia de aminoácidos X35X36ISPX37X38GX39TX40YADSVKG (SEQ ID NO: 46), en la que X35 = A o G; X36 = W o S; X37 = A o Y; X38 = G o S; X39 = S o Y; y X40 = D o S; y en las que HVR-H3 comprende la secuencia X41PX42X43X44X45X46 X47MDY (SEQ ID NO: 47), en la que X41 = Q o G; X42 = T o F; X43 = H o S; X44 = Y o P; X45 = Y o W; X46 = Y o V, y en la que X47 incluye opcionalmente la secuencia YAKGYKA (SEQ ID NO: 48).
En ciertos aspectos, el anticuerpo comprende al menos una secuencia seleccionada entre HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3, en las que HVR-H1 comprende la secuencia de aminoácidos GX71X72X73X74X75X76X77IH (SEQ ID NO: 120), en la que X71 = F o Y; X72 = F, N o T; X73 = F o Y; X74 = L, Q, I, S o Y; X75 = G o Y; X76 = Y o S; y X77 = A, G o S; HVR-H2 comprende la secuencia de aminoácidos X78X79ISPX80X82GX82X83X84YADSVKG (SEQ ID NO: 121), en la que X78 = A
o G; X79 = W o S; X80 = A, S, Q o Y; X81 = G o S; X82 = S, K, L o Y; X83 = T o Y; y X84 = D o S; y HVR-H3 comprende la secuencia de aminoácidos X85PX86X87X88X89X90X91MDY (SEQ ID NO: 122), en la que X85 = Q o G; X86 = T o F; X87 = H, Y o S; X88 = Y o P; X89 = Y o W; X90 = Y o V, y en la que X91 incluye opcionalmente la secuencia YAKGYKA (SEQ ID NO: 48).
En cierto aspecto, el anticuerpo comprende al menos una secuencia seleccionada entre HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, en las que HVR-L1 comprende la secuencia de aminoácidos RASQX17VX18X19X20X21A (SEQ ID NO: 42), en la que X17 = S, D o V; X18 = S o A; X19 = S, T o N; X20 = A o S; X21 = V o L, en las que HVR-L2 comprende la secuencia de aminoácidos X22ASX23LYS (SEQ ID NO: 43), en la que X22 = S, W, Y o L; X23 = F, S o W, y en las que HVR-L3 comprende la secuencia de aminoácidos QQX24X25X26X27X28X29T (SEQ ID NO: 44), en la que X24 = S, F, G, D o Y; X25 = Y, P, S o A; X26= Y, T o N; X27 = T, Y, D o S; X28 = P o L; y X29= F, P o T.
En cierto aspecto, el anticuerpo comprende al menos una secuencia seleccionada del grupo de HVR-L1, HVR-L2 y HVR-L3, en las que HVR-L1 comprende la secuencia de aminoácidos RASQX17VX18X19X20X21A (SEQ ID NO: 42), en la que X17 = S, D o V; X18 = S o A; X19 = S, T o N; X20 = A o S; X21 = V o L, en las que HVR-L2 comprende la secuencia de aminoácidos X62ASX63X64YX65 (SEQ ID NO: 118), en la que X62 = S, W, Y, F o L; X63 = F, S, Y o W; X64 = L o R; X65 = S, P, R, K o W, y HVR-L3 comprende la secuencia de aminoácidos QQX66X67X68X69X70X71T (SEQ ID NO: 119), en la que X66 = S, F, G, D o Y; X67 = Y, P, S o A; X68 = Y, T o N; X69 = T, Y, D o S; X70 = P, Q, S, K o L; y X71 = F, P o T.
En cierto aspecto, el anticuerpo comprende al menos una secuencia seleccionada entre HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, en las que HVR-L1 comprende la secuencia de aminoácidos RASQX1VX2X3X4X5A (SEQ ID NO: 17), en la que X1 = D o V; X2 = S o A; X3 = T o N; X4 = S o A; X5 = V o L, en las que HVR-L2 comprende la secuencia de aminoácidos X6ASFLYS (SEQ ID NO: 18), en la que X6 = S o L, y en las que la HVR-L3 comprende la secuencia de aminoácidos QQX7X8X9X10X11X12T (SEQ ID NO: 19), en la que X7 = S, F, G, D o Y; X8= Y, P, S o A; X9= T o N; X10 = T, Y, D o S; X1 = P o L; X12= P o T.
En cierto aspecto, el anticuerpo comprende al menos una secuencia seleccionada entre HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3, en las que HVR-L1 comprende la secuencia de aminoácidos RASQX1VX2X3X4X5A (SEQ ID NO: 17), en la que X = D
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Las posibles combinaciones de las sustituciones anteriores están abarcadas por las secuencias consenso de SEQ ID NO: 42-47 y 118-122 como se ha descrito anteriormente.
En cualquiera de los aspectos anteriores, un anticuerpo anti-BACE1 está humanizado. En un aspecto, un anticuerpo anti-BACE1 comprende HVR como las de cualquiera de los aspectos anteriores, y comprende además un marco conservado humano aceptor, por ejemplo, un marco conservado de inmunoglobulina humana o un marco conservado consenso humano. En otro aspecto, un anticuerpo anti-BACE1 comprende HVR como las de cualquiera de los aspectos anteriores, y comprende además una VH o VL que comprende una secuencia de FR1, FR2, FR3 o FR4 de SEQ ID NO: 1-6, 20, 21, 27, 31-34, 80-98 y 99-117.
En otro aspecto, un anticuerpo anti-BACE1 comprende una secuencia del dominio variable de cadena pesada (VH) que tiene una identidad de secuencia del al menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % con la secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 20, 21, 27 y 80-98. En ciertas realizaciones, una secuencia de VH que tiene una identidad del al menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservativas), inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia, pero un anticuerpo anti-BACE1 que comprende dicha secuencia conserva la capacidad para unirse a BACE1 y/o inhibir o reducir la actividad de BACE1. En ciertos aspectos, se ha sustituido, insertado y/o eliminado un total de 1 a 10 aminoácidos en SEQ ID NO: 20, 21, 27 y 80
98. En ciertas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones tienen lugar fuera de la HVR (es decir, en los FR). Opcionalmente, el anticuerpo anti-BACE1 comprende la secuencia de VH de SEQ ID NO: 20, 21, 27 o 8098, incluyendo las modificaciones posteriores a la traducción de dicha secuencia. En una determinada realización, la VH comprende una, dos o tres HVR seleccionadas entre: (a) HVR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22, 23, 26, 28, 45, 68, 71, 72, 73 o 120, (b) HVR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 24, 29, 46, 69, 74, 75, 76, 77, 78 o 121, y (c) HVR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, 30, 47, 70, 79 o 122.
En un aspecto, la divulgación se refiere a un anticuerpo anti-BACE1 que comprende al menos una, dos, tres, cuatro, cinco o seis HVR seleccionadas entre la (a) HVR-H1 que comprende una secuencia de aminoácidos de las Figuras 1(B), 2(B) y 24(A); (b) HVR-H2 que comprende una secuencia de aminoácidos de las Figuras 1(B), 2(B) y 24(B); (c) HVR-H3 que comprende una secuencia de aminoácidos de las Figuras 1(B), 2(B) y 24(C); (d) HVR-L1 que comprende una secuencia de aminoácidos de las Figuras 1(A), 2(A) y 23(A); (e) HVR-L2 que comprende una secuencia de aminoácidos de las Figuras 1(A), 2(A) y 23(B); y (f) HVR-L3 que comprende una secuencia de aminoácidos de las Figuras 1(A) y 2(A) y 23(C).
En otro aspecto, se desvela un anticuerpo anti-BACE1, anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena ligera (VL) que tiene una identidad de secuencia del al menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % con la secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID NO: 1-6, 31-34 y 99-117. En ciertos aspectos, una secuencia de VL que tiene una identidad del al menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % contiene sustituciones (por ejemplo, sustituciones conservativas), inserciones o eliminaciones con respecto a la secuencia de referencia, pero un anticuerpo anti-BACE1 que comprende dicha secuencia conserva la capacidad para unirse a BACE1 y/o inhibir o reducir la actividad de BACE1. En ciertos aspectos, se ha sustituido, insertado y/o eliminado un total de 1 a 10 aminoácidos de SEQ ID NO: 1-6, 31-34 y 99
117. En ciertas realizaciones, las sustituciones, inserciones o eliminaciones tienen lugar en regiones fuera de HVR (es decir, en los FR). Opcionalmente, el anticuerpo anti-BACE1 comprende la secuencia de VL de SEQ ID NO: 1-6, 31-34 o 99-117, incluyendo las modificaciones posteriores a la traducción de dicha secuencia. En un aspecto particular, la VL comprende una, dos o tres HVR seleccionadas entre (a) HVR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, 8, 17, 35 o 42; (b) HVR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9, 10, 18, 36-39, 41, 43 y 56, 58-64 o 118; y (c) HVR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11-16, 19, 40, 44, 57, 65, 66, 67 o 119.
En otro aspecto, se devela un anticuerpo anti-BACE, anticuerpo que comprende una VH como la de cualquiera de los aspectos desvelados anteriormente, y una VL como la de cualquiera de los aspectos desvelados anteriormente. En un aspecto, el anticuerpo comprende las secuencias de VH y VL de SEQ ID NO: 21 y SEQ ID NO: 2, respectivamente, incluyendo las modificaciones posteriores a la traducción de dichas secuencias.
En un aspecto adicional, la divulgación se refiere a un anticuerpo que se une al mismo epítopo que un anticuerpo anti-BACE1 proporcionado en el presente documento. Por ejemplo, en ciertos aspectos, se desvela un anticuerpo que se une al mismo epítopo que un anticuerpo anti-BACE1 que comprende una secuencia de VH seleccionada entre SEQ ID NO: 20, 21, 27 y 80-98 y una secuencia de VL seleccionada entre SEQ ID NO: 1-6, 31-34 y 99-117. En ciertos aspectos, se desvela un anticuerpo que se une al mismo epítopo que un anticuerpo anti-BACE1 que comprende las secuencias de VH y VL de SEQ ID NO: 21 y SEQ ID NO: 2, respectivamente.
En ciertos aspectos, se desvela un anticuerpo que se une a un epítopo en BACE1 que comprende al menos uno, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco, al menos seis, al menos siete, al menos ocho, al menos nueve aminoácidos que corresponde a los aminoácidos 314 SER, 316 GLU, 317 LYS, 318 PHE, 319 PRO, 327
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incubación puede continuar durante un período más largo (por ejemplo, 65 horas) para asegurar que se alcance el equilibrio. Tras ello, se transfieren las mezclas a la placa de captura para su incubación a temperatura ambiente (por ejemplo, durante una hora). Después, se retira la solución y se lava la placa ocho veces con polisorbato 20 al 0,1 % (TWEEN-20®) en PBS. Cuando las placas se han secado, se añaden 150 l/pocillo de agente de centelleo (MICROSCINT-20TM; Packard), y se cuentan las placas en un contador gamma TOPCOUNTTM (Packard) durante diez minutos. Se seleccionan las concentraciones de cada Fab, que dan menos de o igual al 20 % de la unión máxima para su uso en ensayos de unión competitiva.
De acuerdo con otra realización, la Kd se mide usando ensayos de resonancia de plasmón superficial usando un BIACORE®-2000 o un BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) a 25 ºC con microplacas de CM5 con antígeno inmovilizado a ~10 unidades de respuesta (UR). En resumen, se activan microplacas biosensoras de dextrano carboximetilado (CM5, BIACORE Inc.) con clorhidrato de N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS) de acuerdo con las instrucciones del proveedor. El antígeno se diluye con acetato sódico 10 mM, pH 4,8, a 5 g/ml (~0,2 M) antes de inyección a un caudal de 5 l/minuto para conseguir aproximadamente 10 unidades de respuesta (UR) de proteína acoplada. Después de la inyección del antígeno, se inyecta etanolamina 1 M para bloquear los grupos sin reaccionar. Para las mediciones cinéticas, se inyectan diluciones en serie dobles de Fab (0,78 nM a 500 nM) en PBS con tensioactivo de polisorbato 20 al 0,05% (TWEEN20TM) (PBST) a 25 ºC a un caudal de aproximadamente 25 l/min. Se calculan las velocidades de asociación (kon) y las velocidades de disociación (koff) usando un modelo de unión de Langmuir uno a uno sencillo (software de evaluación BIACORE® versión 3.2) mediante el ajuste simultáneo del sensograma de asociación y disociación. La constante de disociación en equilibrio (Kd) se calcula como el cociente de koff/kon. Véase, por ejemplo, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). Si la velocidad de disociación es superior a 106 M-1 s-1 por el ensayo de resonancia de plasmón superficial anterior, entonces la velocidad de asociación puede determinarse usando una técnica de desactivación de la fluorescencia que mide el aumento o la reducción de la intensidad de emisión de fluorescencia (excitación = 295 nm; emisión = 340 nm, paso de banda de 16 nm) a 25 ºC de un anticuerpo anti-antígeno 20 nM (forma Fab) en PBS, pH 7,2, en presencia de concentraciones crecientes de antígeno medido en un espectrómetro, tal como una espectrofotómetro dotado de detención de flujo (Aviv Instruments) o un espectrofotómetro SLM-AMINCOTM serie 8000 (ThermoSpectronic) con una cubeta agitada
2. Fragmentos de anticuerpo
En ciertas realizaciones, un anticuerpo proporcionado en el presente documento es un fragmento de anticuerpo. Los fragmentos de anticuerpos incluyen, pero sin limitación, fragmentos Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv y scFv, y otros fragmentos descritos a continuación. Para una revisión de los fragmentos de anticuerpos, véase Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003). Para una revisión de los fragmentos scFv, véase, por ejemplo, Pluckthun, en “The Pharmacology of Monoclonal Antibodies”, vol. 113, Rosenburg y Moore eds., (Springer-Verlag, Nueva York), pág. 269-315 (1994); véanse también el documento WO 93/16185; y las patentes de EE.UU. n.º 5.571.894 y 5.587.458. Para una descripción de fragmentos Fab y F(ab')2 que comprenden restos de epítopos de unión al receptor de salvamento y que tienen una mayor semivida in vivo, véase la patente de EE.UU. n.º 5.869.046.
Los diacuerpos son fragmentos de anticuerpos con dos sitios de unión al antígeno que pueden ser bivalentes o biespecíficos. Véase, por ejemplo, el documento EP 404.097; el documento WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); y Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 90: 6444-6448 (1993).
Los anticuerpos de un solo dominio son fragmentos de anticuerpos que comprenden la totalidad o una parte del dominio variable de cadena pesada, o la totalidad o una parte del dominio variable de cadena ligera de un anticuerpo. En determinadas realizaciones, un anticuerpo de un solo dominio es un anticuerpo de un solo dominio humano (Domantis, Inc., Waltham, MA; véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. n.º 6.248.516 B1).
Los fragmentos de anticuerpo se pueden preparar mediante diversas técnicas, incluyendo, pero sin limitación, la digestión proteolítica de un anticuerpo intacto, así como la producción por células hospedadoras recombinantes (por ejemplo, E. coli o fago), como se describe en el presente documento.
3. Anticuerpos quiméricos y humanizados
En ciertas realizaciones, un anticuerpo proporcionado en el presente documento es un anticuerpo quimérico. Ciertos anticuerpos quiméricos se describen, por ejemplo, en la patente de EE.UU. n.º 4.816.567; y en Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 81:6851-6855 (1984)). En un ejemplo, un anticuerpo quimérico comprende una región variable no humana (por ejemplo, una región variable derivada de un ratón, rata, hámster, conejo o primate no humano, tal como un mono) y una región constante humana. En un ejemplo adicional, un anticuerpo quimérico es un anticuerpo de "clase conmutada", en el que la clase o subclase se ha modificado con respecto a la del anticuerpo parental. Los anticuerpos quiméricos incluyen fragmentos de unión al antígeno de los mismos.
En ciertas realizaciones, un anticuerpo quimérico es un anticuerpo humanizado. Por lo general, un anticuerpo no humano se humaniza para reducir la inmunogenicidad hacia los seres humanos, al tiempo que conservar la especificidad y afinidad del anticuerpo no humano parental. En general, un anticuerpo humanizado comprende uno o
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más dominios variables en los que las HVR, por ejemplo, las CDR, (o partes de las mismas) se derivan de un anticuerpo no humano, y los FR (o partes de los mismos) se derivan de secuencias de anticuerpos humanos. Un anticuerpo humanizado opcionalmente también comprenderá al menos una parte de una región constante humana. En algunas realizaciones, algunos restos de FR de un anticuerpo humanizado están sustituidos con los restos correspondientes de un anticuerpo no humano, (por ejemplo, el anticuerpo del que se derivan los restos de HVR), por ejemplo, para restablecer o mejorar la especificidad o afinidad del anticuerpo.
Los anticuerpos humanizados y los métodos para su fabricación se revisan, por ejemplo, en Almagro y Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008), y se describen además, por ejemplo, en Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 86:10029-10033 (1989); las patentes de EE.UU. n.º 5.821.337; 7.527.791; 6.982.321 y 7.087.409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (que describe el injerto de SDR (a-CDR)); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (que describe "la restauración"); Dall'Acqua et al., Methods 36:4360 (2005) (que describe la "combinación de FR"); y Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) y Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (que describe la metodología de "selección guiada" para la combinación de FR).
Las regiones marco conservadas humanas que pueden usarse para la humanización incluyen, pero sin limitación: regiones marco conservadas seleccionadas usando el método de "mejor ajuste" (véase, por ejemplo, Sims et al. J. Immunol. 151: 2296 (1993)); regiones marco conservadas derivadas de la secuencia consenso de los anticuerpos humanos de un determinado subgrupo de regiones variables de cadena ligera o pesada (véase, por ejemplo, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 89:4285 (1992); y Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993); regiones marco conservadas maduras (mutadas somáticamente) humanas o regiones marco conservadas de línea germinal humana (véase, por ejemplo, Almagro y Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); y regiones marco conservadas derivadas del rastreo de bibliotecas de FR (véase, por ejemplo, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) y Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)).
4. Anticuerpos humanos
En ciertas realizaciones, un anticuerpo proporcionado en el presente documento es un anticuerpo humano. Los anticuerpos humanos pueden producirse usando varias técnicas conocidas en la materia. Los anticuerpos humanos se describen, en general, en van Dijk y van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) y Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).
Los anticuerpos humanos se pueden preparar mediante la administración de un inmunógeno a un animal transgénico que ha sido modificado para producir anticuerpos humanos intactos o anticuerpos intactos con regiones variables humanas en respuesta a la exposición al antígeno. Dichos animales normalmente contienen todos o una parte de los locus de inmunoglobulina humana, que sustituyen los locus endógenos de inmunoglobulina, o que están presentes de forma extracromosómica o integrados aleatoriamente en los cromosomas del animal. En dichos ratones transgénicos, los locus de inmunoglobulina endógenos, en general, se han inactivado. Para una revisión de los métodos de obtención de anticuerpos humanos a partir de animales transgénicos, véase Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005). Váans también, por ejemplo, las patentes de EE.UU. n.º 6.075.181 y 6.150.584, que describen la tecnología XENOMOUSE™; la patente de EE.UU. n.º 5.770.429, que describe la tecnología HUMAB®; la patente de EE.UU. n.º 7.041.870, que describe la tecnología K-M MOUSE® y la publicación de solicitud de patente de EE.UU. n.º 2007/0061900, que describe la tecnología VELOCIMOUSE®). Las regiones variables humanas de anticuerpos intactos generados por dichos animales se pueden modificar adicionalmente, por ejemplo, mediante la combinación con una región constante humana diferente.
Los anticuerpos humanos también se pueden fabricar mediante métodos basados en el hibridoma. Se han descrito líneas celulares de mieloma humano y de heteromieloma de ratón-ser humano para la producción de anticuerpos monoclonales humanos. (Véase, por ejemplo, Kozbor J. Immunol, 133: 3001 (1984); Brodeur et al., “Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications”, pág. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1987); y Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)). Los anticuerpos humanos generados mediante la tecnología del hibridoma de linfocitos B humanos también se describen en Li et al., Pro. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 103:3557-3562 (2006). Los métodos adicionales incluyen los descritos, por ejemplo, en la Patente de EE.UU. n.º 7.18.826 (que describe la producción de anticuerpos IgM monoclonales humanos a partir de líneas celulares de hibridoma) y Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) (que describe hibridomas humanos-humanos). La tecnología del hibridoma humano (tecnología del trioma) también se describe en Vollmers y Brandlein, “Histology and Histopathology”, 20(3):927-937 (2005) y en Vollmers y Brandlein, “Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology”, 27(3):185-91 (2005).
Los anticuerpos humanos también se pueden generar mediante el aislamiento de secuencias de dominio variable de clones de Fv seleccionadas de bibliotecas de presentación en fagos derivadas de seres humanos. Dichas secuencias de dominio variable se pueden combinar después con un dominio constante humano deseado. A continuación, se describen las técnicas de selección de anticuerpos humanos a partir de bibliotecas de anticuerpos.
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5. Anticuerpos derivados de bibliotecas
Los anticuerpos de la invención pueden aislarse mediante el rastreo de bibliotecas combinatorias de anticuerpos con la actividad o actividades deseadas. Por ejemplo, se conoce una variedad de métodos en la técnica para generar bibliotecas de presentación en fagos y explorar dichas bibliotecas de anticuerpos que poseen las características de unión deseadas. Dichos métodos se revisan, por ejemplo, en Hoogenboom et al. en “Methods in Molecular Biology” 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N. J., 2001) y se describen además, por ejemplo, en McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks y Bradbury, en “Methods in Molecular Biology” 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N. J., 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 101(34): 12467-12472 (2004); y Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119132(2004).
En ciertos métodos de presentación en fagos, se clonan repertorios de genes de VH y VL por separado mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y se recombinan aleatoriamente en bibliotecas de fagos, que se pueden explorar en busca del fago de unión al antígeno como se describe en Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). Los fagos suelen mostrar fragmentos de anticuerpos, ya sea como fragmentos Fv monocatenarios (scFv) o como fragmentos Fab. Las bibliotecas de fuentes inmunizadas proporcionan anticuerpos de alta afinidad por el inmunógeno sin la necesidad de construir hibridomas. Como alternativa, el repertorio no tratado previamente puede clonarse (por ejemplo, de ser humano) para proporcionar una única fuente de anticuerpos contra una amplia selección de no autoantígenos y también autoantígenos sin ninguna inmunización como se describe por Griffiths et al, EMBO J 12: 725-734 (1993). Por último, también se pueden fabricar bibliotecas no tratadas previamente de manera sintética mediante la clonación de segmentos de genes V no reordenados a partir de células madre, y el uso de cebadores de PCR que contengan la secuencia aleatoria para codificar las regiones CDR3 altamente variables y para realizar el reordenamiento in vitro, según lo descrito por Hoogenboom y Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992). Las publicaciones de patentes que describen las bibliotecas de fagos de anticuerpos humanos incluyen, por ejemplo: la patente de EE.UU. n.º 5.750.373, y la publicación de patente de EE.UU. n.º 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 y 2009/0002360.
En el presente documento, los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos aislados a partir de bibliotecas de anticuerpos humanos se consideran anticuerpos humanos o fragmentos de anticuerpos humanos.
6. Anticuerpos multiespecíficos
En ciertas realizaciones, un anticuerpo proporcionado en el presente documento es un anticuerpo multiespecífico, por ejemplo, un anticuerpo biespecífico. Los anticuerpos multiespecíficos son anticuerpos monoclonales que tienen especificidades de unión por al menos dos sitios diferentes. En ciertas realizaciones, una de las especificidades de unión es por BACE1 y la otra es por cualquier otro antígeno. En ciertas realizaciones, los anticuerpos biespecíficos pueden unirse a dos epítopos diferentes de BACE1. Los anticuerpos biespecíficos también se pueden usar para localizar agentes citotóxicos en células que expresan BACE1. Los anticuerpos biespecíficos pueden prepararse como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpos.
Las técnicas de fabricación de anticuerpos multiespecíficos incluyen, pero sin limitación, la coexpresión recombinante de dos pares de cadena pesada-cadena ligera de inmunoglobulina que tienen diferentes especificidades (véase Milstein y Cuello, Nature 305: 537 (1983)), el documento WO 93/08829, y Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)), y la ingeniería de "botón en ojal" (véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. n.º 5.731.168). Los anticuerpos multiespecíficos también se pueden fabricar mediante los efectos de dirección electrostáticos de ingeniería para la fabricación de moléculas heterodiméricas de Fc de anticuerpos (documento WO 2009/089004A1); la reticulación de dos o más anticuerpos o fragmentos (véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. n.º 4.676.980, y Brennan et al, Science, 229: 81 (1985)); usando cremalleras de leucina para producir anticuerpos biespecíficos (véase, por ejemplo, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)); usando la tecnología de "diacuerpo" para preparar fragmentos de anticuerpo biespecífico (véase, por ejemplo, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 90:6444-6448 (1993)); y usando dímeros de Fv monocatenarios (sFv) (véase, por ejemplo Gruber et al, J. Immunol, 152: 5368 (1994)); y preparando anticuerpos triespecíficos como se describe, por ejemplo, en Tutt et al. J. Immunol. 147:60 (1991).
También se incluye en el presente documento el diseño de anticuerpos con tres o más sitios de unión al antígeno funcionales, incluyendo los "anticuerpos pulpo" (véase, por ejemplo, el documento US 2006/0025576A1).
El anticuerpo o fragmento del presente documento también incluye un "Fab de acción doble" o un "DAF" que comprende un sitio de unión al antígeno que se une a BACE1, así como otro antígeno diferente (véase, el documento US 2008/0069820, por ejemplo).
7. Variantes de anticuerpo
En ciertas realizaciones, se contemplan variantes de secuencias de aminoácidos de los anticuerpos proporcionados en el presente documento. Por ejemplo, puede ser deseable mejorar la afinidad de unión y/o otras propiedades 5 biológicas del anticuerpo. Las variantes de secuencias de aminoácidos de un anticuerpo se pueden preparar mediante la introducción de modificaciones apropiadas en la secuencia de nucleótidos que codifica el anticuerpo o mediante síntesis de péptidos. Dichas modificaciones incluyen, por ejemplo, eliminaciones de y/o inserciones en y/o sustituciones de restos de las secuencias de aminoácidos del anticuerpo. Se puede realizar cualquier combinación de eliminación, inserción y sustitución para obtenerse la construcción final, siempre que la construcción final posea
10 las características deseadas, por ejemplo, la unión al antígeno.
a) Variantes de sustitución, inserción y eliminación
En ciertas realizaciones, se desvelan variantes de anticuerpo que tienen una o más sustituciones de aminoácidos.
15 Los sitios de interés para la mutagénesis de sustitución incluyen las HVR y los FR. Las sustituciones conservativas se muestran en la Tabla 1 con el encabezamiento de "sustituciones conservativas". Más cambios sustanciales se proporcionan en la Tabla 1 con el encabezamiento de "sustituciones ilustrativas", y como se describe posteriormente en referencia a las clases de cadenas laterales de aminoácidos. Se pueden introducir sustituciones de aminoácidos en un anticuerpo de interés y explorarse los productos en busca de una actividad deseada, por ejemplo, la
20 conservación/mejora de la unión al antígeno, reducción de la inmunogenicidad, o mejora de ADCC o CDC.
TABLA 1
Resto original
Sustituciones ilustrativas Sustituciones preferidas
Ala (A)
Val; Leu; Ile Val
Arg (R)
Lys; Gln; Asn Lys
Asn(N)
Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln
Asp (D)
Glu; Asn Glu
Cys (C)
Ser; Ala Ser
Gln (Q)
Asn; Glu Asn
Glu (E)
Asp; Gln Asp
Gly (G)
Ala Ala
His (H)
Asn; Gln; Lys; Arg Arg
Ile (I)
Leu; Val; Met; Ala; Phe; Norleucina Leu
Leu (L)
Norleucina; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile
Lys (K)
Arg; Gln; Asn Arg
Met (M)
Leu; Phe; Ile Leu
Phe (F)
Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Pro (P)
Ala Ala
Ser (S)
Thr Thr
Thr (T)
Val; Ser Ser
Trp (W)
Tyr; Phe Tyr
Tyr (Y)
Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Val (V)
Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Norleucina Leu
Los aminoácidos se pueden agrupar de acuerdo con las propiedades comunes de la cadena lateral: 25
(1)
hidrófobos: norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2)
hidrófilos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3)
ácidos: Asp, Glu;
(4) básicos: His, Lys, Arg; 30 (5) restos que influyen en la orientación de la cadena: Gly, Pro;
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(6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.
Las sustituciones no conservativas implicarán el intercambio de un miembro de una de estas clases por otra clase. Un tipo de variante de sustitución implica la sustitución de uno o más restos de la región hipervariable de un anticuerpo parental (por ejemplo, un anticuerpo humanizado o humano). En general, la/s variante/s resultante/s seleccionada/s para el estudio adicional tendrán modificaciones (por ejemplo, mejoras) en ciertas propiedades biológicas (por ejemplo, aumento de la afinidad, reducción de la inmunogenicidad) en relación con el anticuerpo parental y/o tendrán ciertas propiedades biológicas esencialmente conservadas del anticuerpo parental. Una variante de sustitución ilustrativa es un anticuerpo de afinidad madurada, que puede generarse convenientemente, por ejemplo, usando técnicas de maduración de afinidad basadas en la presentación en fagos tales como las descritas en el presente documento. En resumen, se mutan uno o más restos de HVR y se presentan las variantes de anticuerpos en fagos y se rastrean para determinar una actividad biológica en particular (por ejemplo, afinidad de unión).
Se pueden realizar modificaciones (por ejemplo, sustituciones) en las HVR, por ejemplo, para mejorar la afinidad del anticuerpo. Dichas modificaciones se pueden realizar en "puntos calientes" de las HVR, es decir, restos codificados por codones que sufren mutación con una alta frecuencia durante el proceso de maduración somática (véase, por ejemplo, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207: 179-196 (2008)) y/o SDR (a-CDR), analizándose la variante de VH o VL resultante para determinar la afinidad de unión. La maduración de afinidad mediante la construcción y la reselección a partir de bibliotecas secundarias se ha descrito, por ejemplo, en Hoogenboom et al. en “Methods in Molecular Biology” 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). En algunas realizaciones de maduración de afinidad, se introduce diversidad en los genes variables seleccionados para la maduración mediante cualquiera de una variedad de métodos (por ejemplo, PCR propensa a errores, intercambio de cadenas o mutagénesis dirigida por oligonucleótidos). A continuación, se crea una biblioteca secundaria. La biblioteca se rastrea luego para identificar cualquier variante de anticuerpo con la afinidad deseada. Otro método de introducción de diversidad implica metodologías dirigidas a las HVR, en las que se aleatorizan varios restos de HVR (por ejemplo, 4-6 restos a la vez). Los restos de las HVR que participan en la unión al antígeno pueden identificarse específicamente, por ejemplo, usando mutagénesis de barrido con alanina o modelización. Las dianas suelen ser, en particular, CDR-H3 y CDR-L3.
En ciertas realizaciones, se pueden producir sustituciones, inserciones o eliminaciones en una o más HVR siempre y cuando dichas modificaciones no reduzcan esencialmente la capacidad del anticuerpo para unirse al antígeno. Por ejemplo, se pueden realizar modificaciones conservadores (por ejemplo, sustituciones conservativas conforme a lo dispuesto en el presente documento) que no reduzcan esencialmente la afinidad de unión en la HVR. Dichas modificaciones pueden estar fuera de los "puntos calientes" de las HVR o SDR. En ciertas realizaciones de la variante de las secuencias de VH y VL proporcionadas anteriormente, cada HVR bien no está modificada o contiene no más de una, dos o tres sustituciones de aminoácidos.
Un método útil de identificación de restos o regiones de un anticuerpo que pueden ser dianas de la mutagénesis se denomina "mutagénesis de barrido con alanina" como se describe por Cunningham y Wells (1989) Science, 244: 1081-1085. En dicho método, un resto o grupo de restos diana (ejemplo, restos cargados tales como Arg, Asp, His, Lys y Glu), se identifica y se sustituye con un aminoácido neutro o cargado negativamente (por ejemplo, alanina o polialanina) para determinar si la interacción del anticuerpo con el antígeno se ve afectada. Se pueden introducir otras sustituciones en las posiciones de aminoácidos que demuestran sensibilidad funcional a las sustituciones iniciales. Como alternativa, o además, una estructura cristalina de un complejo de antígeno-anticuerpo para identificar puntos de contacto entre el anticuerpo y el antígeno. Dichos restos de contacto y restos vecinos pueden ser la diana o eliminarse como candidatos para la sustitución. Las variantes se pueden explorar para determinar si contienen las propiedades deseadas.
Las inserciones en las secuencias de aminoácidos incluyen fusiones amino-y/o carboxi-terminales que varían en longitud desde un resto a polipéptidos que contienen cien o más restos, así como inserciones intrasecuencia de uno
o varios restos de aminoácidos. Los ejemplos de inserciones terminales incluyen un anticuerpo con un resto de metionilo N-terminal. Otras variantes de inserción de la molécula de anticuerpo incluyen la fusión al extremo N-o Cterminal del anticuerpo a una enzima, (por ejemplo, para ADEPT) o un polipéptido que aumente la semivida en suero del anticuerpo.
b) Variantes de glicosilación
En ciertas realizaciones, un anticuerpo proporcionado en el presente documento es modifica para aumentar o disminuir el grado en que el anticuerpo es glicosilado. La adición o eliminación de sitios de glicosilación en un anticuerpo de puede realizar convenientemente modificando la secuencia de aminoácidos de modo que se creen o se eliminen uno o más sitios de glicosilación.
Cuando el anticuerpo comprende una región Fc, se puede modificar el hidrato de carbono unido a la misma. Los anticuerpos nativos producidos por células de mamífero normalmente comprenden un oligosacárido ramificado, biantenario, que, en general, está unido por un enlace en N con Asn297 del dominio CH2 de la región Fc. Véase, por
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ejemplo, Wright et al., TIBTECH 15: 26-32 (1997). El oligosacárido puede incluir diversos hidratos de carbono, por ejemplo, manosa, N-acetil-glucosamina (GlcNAc), galactosa y ácido siálico, así como una fucosa unida a un GlcNAc en el "tallo" de la estructura de oligosacárido biantenario. En algunas realizaciones, se pueden realizar modificaciones del oligosacárido en un anticuerpo de la invención para crear variantes de anticuerpos con ciertas propiedades mejoradas.
En una realización, se proporcionan variantes de anticuerpos que tienen una estructura de hidrato de carbono que carece de fucosa unida (directa o indirectamente) a una región Fc. Por ejemplo, la cantidad de fucosa en dicho anticuerpo puede ser del 1 % al 80 %, del 1 % al 65 %, del 5 % al 65 % o del 20 % al 40 %. La cantidad de fucosa se determina mediante el cálculo de la cantidad media de fucosa dentro de la cadena de azúcar en Asn297, con respecto a la suma de todas las glicoestructuras unidas a Asn297 (por ejemplo, estructuras complejas, híbridas y ricas en manosa), medida mediante espectrometría de masas MALDI-TOF, como se describe en el documento WO 2008/077546, por ejemplo. Asn297 se refiere al resto de asparagina situado en torno a la posición 297 de la región Fc (numeración Eu de restos de la región Fc); sin embargo, Asn297 también puede ser situado en torno a ± 3 aminoácidos cadena arriba o cadena abajo de la posición 297, es decir, entre las posiciones 294 y 300, debido a variaciones de la secuencia de menor importancia en los anticuerpos. Dichas variantes de fucosilación pueden tener una mejor función de ADCC. Véase, por ejemplo, la publicación de patente de EE.UU. n.º US 2003/0157108 (Presta, L.); documento US 2004/0093621 (Kyowa Co., Ltd). Los ejemplos de publicaciones relacionadas con las variantes de anticuerpos "desfucosiladas" o “deficientes en fucosa" incluyen: documento US 2003/0157108; documento WO 2000/61739;documento WO 2001/29246; documento US 2003/0115614; documento US 2002/0164328; documento US 2004/0093621; documento US 2004/0132140; documento US 2004/0110704; documento US 2004/0110282; documento US 2004/0109865; documento WO 2003/085119; documento WO 2003/084570; documento WO 2005/035586; documento WO 2005/035778; documento WO2005/053742; documento WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Los ejemplos de líneas celulares capaces de producir anticuerpos desfucosilados incluyen células CHO Lec3 deficientes en fucosilación de proteínas (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); solicitud de patente de EE.UU. n.º US 2003/0157108 A1, Presta, L; y documento WO 2004/056312 A1, Adams et al., especialmente en el Ejemplo 11), y líneas celulares desactivadas, tales como el gen alfa-1,6-fucosiltransferasa, FUT8, células CHO desactivadas (véase, por ejemplo, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); y el documento WO2003/085107).
También se proporcionan variantes de anticuerpos con oligosacáridos bisectados, por ejemplo, en los que un oligosacárido biantenario unido a la región Fc del anticuerpo está biseccionado por GlcNAc. Dichas variantes de anticuerpo pueden tener reducción de la fucosilación y/o mejora de la función ADCC. Los ejemplos de dichas variantes de anticuerpos se describen, por ejemplo, en el documento WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al); Patente de EE.UU. n.º 6.602.684 (Umana et al.); y documento US 2005/0123546 (Umana et al.). También se proporcionan variantes de anticuerpos con al menos un resto de galactosa en el oligosacárido unido a la región Fc. Dichas variantes de anticuerpo pueden tener una mejora de la función CDC. Dichas variantes de anticuerpos se describen, por ejemplo, en el documento WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); patente de EE.UU. n.º 6.602.684 (Umana et al.); y documento US 2005/0123546 (Umana et al.).
c) Variantes de la región Fc
En ciertas realizaciones, se pueden introducir una o más modificaciones de aminoácidos en la región Fc de un anticuerpo proporcionado en el presente documento, generando de este modo una variante de la región Fc. La variante de la región Fc puede comprender una secuencia de la región Fc humana (por ejemplo, una región Fc de IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4) que comprende una modificación de aminoácidos, (por ejemplo, una sustitución) en una o más posiciones de aminoácidos.
En ciertas realizaciones, la invención contempla una variante de anticuerpo que posee algunas, pero no todas, las funciones efectoras, que la convierten en un candidato deseable para aplicaciones en las que la semivida del anticuerpo in vivo es importante, siendo, sin embargo, ciertas funciones efectoras (tales como el complemento y ADCC) innecesarias o perjudiciales. Se pueden realizar ensayos de citotoxicidad in vitro y/o in vivo para confirmar la reducción/el agotamiento de actividades de CDC y/o ADCC. Por ejemplo, se pueden realizar ensayos de unión al receptor de Fc (FcR) para garantizar que el anticuerpo carezca de la unión a FcγR (por lo tanto, que carezca probablemente de actividad de ADCC), pero que conserve la capacidad de unión a FcRn. Las células primarias para mediar DAC, las células, NK, solo expresan FcγRIII, mientras que los monocitos expresan FcγRI, FcγRII y FcγRIII. La expresión de FcR en células hematopoyéticas se resume en la Tabla 3, en la página 464, de Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991). Los ejemplos no limitantes de ensayos in vitro para evaluar la actividad ADCC de una molécula de interés se describen en la patente de EE.UU. n.º 5.500.362 (véase, por ejemplo Hellstrom, I. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 83: 7059-7063 (1986)) y Hellstrom, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 82:1499-1502 (1985); documento 5.821.337 (véase Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)). Como alternativa, se pueden emplear métodos de ensayos no radiactivos (véase, por ejemplo, el ensayo de citotoxicidad no radiactivo ACTI™ para la citometría de flujo (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; y el ensayo de citotoxicidad no radiactivo CytoTox 96® (Promega, Madison, WI). Las células efectoras útiles para dichos ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y linfocitos citolíticos naturales (NK). Como alternativa,
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embrionario humano (293 o células 293 como se describe, por ejemplo, en Graham et al, J. Gen Virol 36:59 (1977)); células de riñón de hámster recién nacido (BHK); células de Sertoli de ratón (células TM4 según lo descrito, por ejemplo, en Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); células de riñón de mono (CV1); células de riñón de mono verde africano (VERO-76); células humanas de carcinoma de cuello uterino (HeLa); células de riñón canino (MDCK; células de hígado de rata búfalo (BRL 3A); células de pulmón humano (W138); células de hígado humano (Hep G2); tumor mamario de ratón (MMT 060562); células TRI, como las descritas, por ejemplo, en Mather et al., Annals N. Y. Acad. Sci. 383: 44-68 (1982); células MRC 5; y células FS4. Otras líneas de células hospedadoras de mamífero útiles incluyen células de ovario de hámster chino (CHO), incluyendo células CHO DHFR-(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 77:4216 (1980)); y líneas de células de mieloma tales como Y0, NS0 y Sp2/0. Para una revisión de ciertas líneas de células hospedadoras de mamífero adecuadas para la producción de anticuerpos, véase, por ejemplo, Yazaki y Wu, “Methods in Molecular Biology”, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pág. 255-268 (2003).
C. Ensayos
Los anticuerpos anti-BACE1 proporcionados en el presente documento se pueden identificar, examinar para o caracterizar por sus propiedades físico/químicas y/o actividades biológicas mediante diversos ensayos conocidos en la técnica.
1. Ensayos de unión y otros ensayos
En un aspecto, se ensayó un anticuerpo de la invención para determinar su actividad de unión al antígeno, por ejemplo, mediante métodos conocidos tales como ELISA, transferencia Western, etc.
En otro aspecto, se pueden usar ensayos de competición para identificar un anticuerpo que compite con cualquiera de los anticuerpos o Fab descritos en el presente documento, por ejemplo, YW412.8, YW412.8.31, YW412.8.30, YW412.8.2, YW412.8.29, YW412.8.51, Fab12, LC6, LC9, LC10 para la unión a BACE1. En ciertas realizaciones, dicho anticuerpo competitivo se une al mismo epítopo (por ejemplo, un epítopo lineal o conformacional) que es unido por cualquiera de los anticuerpos o Fab descritos en el presente documento, por ejemplo, YW412.8, YW412.8.31, YW412.8.30, YW412.8.2, YW412.8.29, YW412.8.51, Fab12, LC6, LC9, LC10. En Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols" en Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ), se proporcionan métodos ilustrativos detallados para la cartografía de un epítopo al que se une un anticuerpo.
En un ensayo de competición ilustrativo, se incuba BACE1 inmovilizado en una solución que comprende un primer anticuerpo marcado que se une a BACE1 (por ejemplo, YW412.8, YW412.8.31, YW412.8.30, YW412.8.2, YW412.8.29, YW412.8.51, Fab12, LC6, LC9, LC10) y un segundo anticuerpo no marcado que se está ensayando para determinar su capacidad para competir con el primer anticuerpo para la unión a BACE1. El segundo anticuerpo puede estar presente en un sobrenadante de hibridoma. Como control, se incuba BACE1 inmovilizado en una solución que comprende el primer anticuerpo marcado, pero no el segundo anticuerpo sin marcar. Después de la incubación en condiciones permisivas para la unión del primer anticuerpo a BACE1, se retira el exceso de anticuerpo no unido, y se mide la cantidad de marcador asociado con BACE1 inmovilizado. Si la cantidad de marcador asociado con BACE1 inmovilizado se reduce esencialmente en la muestra de ensayo con respecto a la muestra de control, entonces indica que el segundo anticuerpo está compitiendo con el primer anticuerpo por la unión a BACE1. Véase Harlow y Lane (1988) “Antibodies: A Laboratory Manual”, capítulo14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
2. Ensayos de actividad
En un aspecto, se proporcionan ensayos para la identificación de los anticuerpos anti-BACE1 del mismo que tienen actividad biológica. La actividad biológica puede incluir, por ejemplo, la inhibición o reducción de la actividad de la aspartil proteasa de BACE1; o la inhibición o reducción de la escisión de APP por BACE1; o la inhibición o reducción de la producción Αβ. También se proporcionan anticuerpos que tienen dicha actividad biológica in vivo y/o in vitro.
En ciertas realizaciones, un anticuerpo de la invención se ensaya para determinar dicha actividad biológica. Por ejemplo, la actividad proteasa de BACE1 se puede ensayar en un ensayo HTRF de fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo o un ensayo electroforético capilar microfluídico (MCE), como se describe en detalle en el Ejemplo 1 y 2(B), usando péptidos sustrato sintéticos.
En resumen, ensayo de fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo (HTRF) se puede usar para medir la actividad aspartil proteasa de BACE1 con el uso de un péptido de escisión de la proteína precursora amiloide BACE1. Por ejemplo, se combina el péptido Bi27 (Biotina-KTEEISEVNLDAEFRHDSGYEVHHQKL (SEQ ID NO: 53), American Peptide Company)) con BACE1 previamente incubadas con un anticuerpo anti-BACE en tampón de reacción con BACE (acetato de sodio 50 mM, pH 4,4 y CHAPS al 0,1 %) en una placa de 384 pocillos (Proxiplate™, Perkin-Elmer). Se incuba la mezcla de reacción proteolítica a temperatura ambiente durante 75 minutos y se inactivó mediante la adición de 5 l de mezcla de detección de HTRF que contiene estreptavidina-D2 2 nM y 150 nM de un anticuerpo anti-amiloide-beta marcado con criptato de europio en tampón de detección (Tris 200 mM, pH 8,0, EDTA
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P.D. et al. Acta. Cryst. D66:213-221 (2010)), usando las funciones diana de probabilidad máxima, para lograr un factor R final del 0,221 y un Rlibre de 0,274. En la Tabla 5, se muestran las estadísticas de perfeccionamiento de la estructura.
TABLA 5 -Estadística de los datos cristalográficos
Recogida de datos
Grupo espacial
P21
Unidad de celda
a = 46,1 Å, b = 75,5 Å, c = 112,0 Å, a = 90 º b = 99,8 º g = 90 º
Resolución
30 -2,8 Å
Número total de reflexiones
64.939
Integridad
97,9 % (84,4 %)2
Redundancia
3,5 (2,5)
I/
10.8(2.0)
Rsim1
0,112 (0,366)
Perfeccionamiento
Intervalo de resolución
30-2,8 Å
Rcrist3/Rlibre4
0,221/0,274
Tamaño del conjunto de ensayos de R libre
5 % de las reflexiones observadas
Átomos no de hidrógeno
6.324
Moléculas de agua
94
B medio, global
37,3
Proteína
37,6
Agua
29,7
Longitudes de los enlaces r.m.s.d
0,003 Å
Ángulos de r.m.s.d.
0,705 º
1Rsim = |Ihi -Ih|/Ihi, donde Ihi es la intensidad a escala de la observación relacionada con la simetría ith de la reflexión h e Ih es el valor medio. 2Los valores entre paréntesis son de la cubierta de resolución más alta, que es (1,97-1,90 Å).3Rcrist = h|Foh -Fch|/hFoh, donde Foh y Fch son las amplitudes de los factores de estructura calculadas para la reflexión h. 4El valor de Rlibre se calcula para las reflexiones seleccionadas aleatoriamente al 5 %, no incluidas en el perfeccionamiento.
5 El cristal fue difractado, y se perfeccionó la estructura a una resolución de 2,8 Å. La estructura general de BACE1 en el complejo se asemeja en gran medida a su forma libre (Hong et al., Science 290:150-153 (2000)), que se puede alinear con RMSD de 0,63 Å en las posiciones de los átomos de Cα del 96 % (373/385) de los residuos. El Fab YW412.8.31 cubre una superficie de ~840 Å2 en la superficie molecular de BACE1, y no se une en la proximidad del
10 sitio activo. El epítopo comprende elementos estructurales denotados por Hong et al. (Science 290:150-153 (2000)) como bucle C (aminoácidos 315-318 de BACE1 de longitud completa), D (aminoácidos 331-335 de BACE1 de longitud completa) y F (aminoácidos 370-381 de BACE1 de longitud completa), que se sitúan cerca en el espacio tridimensional. Además, la parte de BACE1 de y de la proximidad del sitio de unión a YW412.8.31 adoptó un cambio conformacional, dando lugar a una puntuación complementaria de la forma de 0,71, de acuerdo con una unión
15 fuerte. Se cree que el cambio conformacional inducido por el anticuerpo contribuye a la inhibición alostérica de la actividad secretasa.
El Fab unido a un exositio distal al sitio activo de BACE1 para la proteína precursora amiloide, que se superpone parcialmente con el exositio previamente identificado como el sitio de unión para un panel de péptidos de unión a 20 BACE1 (Kornacker et al., Biochemistry 44:11567-11572 (2005) (Figura 14). Tanto las cadenas pesadas como ligeras participan en la interacción (Figura 15). A diferencia de la forma libre, en la que la región del epítopo de BACE1 es más dinámica según lo indicado por factores de alta temperatura, la estructura unida al anticuerpo se estabiliza en una confirmación única, que deforma los sitios P6 y P7 (Turner et al., Biochemistry 44:105-112 (2005)) de la
secretasa. Junto a estos sitios, los aminoácidos 218-231 (AGFPLNQSEVLASV (SEQ ID NO: 126) de SEQ ID NO: 49 (restos 157-170 en Lin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 97:1456-1460 (2000) (la numeración de los aminoácidos comienza en el dominio maduro de la proteasa de BACE1)), que adoptan una estructura α-helicoidal en el complejo unido al sustrato, se convierten en un bucle aleatorio en el complejo de anticuerpo, lo que afecta negativamente a la 5 escisión proteolítica de APP, quizás evitando que APP alcance la hendidura catalítica de BACE1 de una manera competente catalítica. El epítopo estructural incluye los restos de aminoácidos de BACE1 que contienen uno o másátomos situados a 4 Å de distancia de cualquier parte del Fab YW412.8.31 en la estructura cristalina. Los restos de la cadena ligera de Fab pertenecen a la cadena L, y los restos de la cadena pesada de Fab pertenecen a la cadena H de la Tabla 6 que figura a continuación. La numeración de los restos de aminoácidos de BACE1 se basa en la
10 secuencia de longitud completa de BACE1 (SEQ ID NO: 49). La numeración de los restos de aminoácidos de Fab se basa en el esquema de numeración de Kabat (Kabat et al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991).
TABLA 6 -Restos ubicados en la superficie de contacto de la unión de YW412.8.31-BACE1
Restos de BACE1
Restos de Fab
314 SER
H 26 GLY
316 GLU
H 27 PHE
317 LYS
H 28THR
318 PHE
H 30 LEU
319 PRO
H 31 GLY
327 GLN
H 32 TYR
328 LEU
H 53 ALA
329 VAL
H 58 ASP
330 CYS
H 94 ARG
331 TRP
H 96 PRO
332 GLN
H 97 PHE
333 ALA
H 98 SER
335 THR
H 99 PRO
337 PRO
H100TRP
340 ILE
375 THR
L 49 TYR
378 ASP
L 53 PHE
380 CYS
L 55 TYR
426 PHE
L 56 SER
L 94 TYR
15 Las interacciones atómicas detalladas están en forma de contactos de van der Waals de las interacciones polares. Las interacciones polares incluyen enlaces de hidrógeno y puentes de sal. La Tabla 7 que figura a continuación incluye una lista de las interacciones polares por parejas entre BACE1 y el Fab YW412.8.31. Los restos de la cadena ligera de Fab pertenecen a la cadena L, y los restos de la cadena pesada de Fab pertenecen a la cadena H.
20 La numeración de los restos de aminoácidos de BACE1 se basa en la secuencia de longitud completa de BACE1 (SEQ ID NO: 49). La numeración de los restos de aminoácidos de Fab se basa en el esquema de numeración de Kabat.
TABLA 7 -Interacciones polares por parejas entre BACE1 y el Fab YW412.8.31
Restos de BACE1 ---restos de Fab
314 SER---H 98 SER
317 LYS---H 58 ASP
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012064836A1 (en) 2010-11-10 2012-05-18 Genentech, Inc. Methods and compositions for neural disease immunotherapy
CN103852579B (zh) * 2012-12-05 2018-02-23 姚钧 一种人体血清Aβ的定量检测方法
WO2016061504A2 (en) * 2014-10-17 2016-04-21 The University Of Chicago Recombinant antibodies that recongnize the c-terminal domains of ebola virus nucleoprotein
JP6859259B2 (ja) * 2014-11-19 2021-04-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＢＡＣＥｌに対する抗体及び神経疾患免疫療法のためのその使用
WO2016081640A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use
EP3101424B1 (en) * 2015-06-04 2023-01-04 Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG Diagnosis of a neuroautoimmune disease
WO2017013599A1 (en) * 2015-07-21 2017-01-26 Bioarctic Neuroscience Ab Method for treatment of traumatic brain injury targeting aggregated peptides
WO2017158064A1 (en) * 2016-03-15 2017-09-21 Astrazeneca Ab Combination of a bace inhibitor and an antibody or antigen-binding fragment for the treatment of a disorder associated with the accumulation of amyloid beta
CN106084057A (zh) * 2016-06-13 2016-11-09 东北师范大学 Bace1剪切型高效价抗体的制备及应用
CN107475260B (zh) * 2017-09-08 2020-12-04 东北师范大学 抑制大脑中Aβ累积的BACE1亚型的功能研发及应用
CN107523579A (zh) * 2017-09-08 2017-12-29 东北师范大学 促进大脑中Aβ累积的BACE1亚型的功能研发及应用
CA3080120C (en) 2017-10-27 2023-11-21 New York University Anti-galectin-9 antibodies and uses thereof
WO2019094608A1 (en) * 2017-11-08 2019-05-16 Denali Therapeutics Inc. Anti-bace1 antibodies and methods of use thereof
US10350226B1 (en) 2018-06-27 2019-07-16 Joshua O. Atiba Therapy and prevention of prion protein complex infections
US12350278B2 (en) 2018-06-27 2025-07-08 Joshua O. Atiba Therapy and prevention of prion protein complex infections in non-human animals
AR117453A1 (es) 2018-12-20 2021-08-04 Genentech Inc Fc de anticuerpos modificados y métodos para utilizarlas
JP7581238B2 (ja) * 2019-05-01 2024-11-12 ニューヨーク・ユニバーシティ 抗ガレクチン９抗体およびその使用
JP2025523630A (ja) 2022-07-04 2025-07-23 ブイアイビー ブイゼットダブリュ 血液－脳脊髄液関門通過抗体
AU2024243709A1 (en) 2023-04-03 2025-11-06 Katholieke Universiteit Leuven Blood-brain barrier crossing antibodies

Family Cites Families (159)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5268164A (en) 1990-04-23 1993-12-07 Alkermes, Inc. Increasing blood-brain barrier permeability with permeabilizer peptides
US5112596A (en) 1990-04-23 1992-05-12 Alkermes, Inc. Method for increasing blood-brain barrier permeability by administering a bradykinin agonist of blood-brain barrier permeability
US5200339A (en) 1990-08-17 1993-04-06 Abraham Carmela R Proteases causing abnormal degradation of amyloid β-protein precursor
HUT69771A (en) 1990-08-17 1995-09-28 Univ Boston Proteases causing abnormal degradation of amyloid beta-proteine precursors
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
CA2095633C (en) 1990-12-03 2003-02-04 Lisa J. Garrard Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
FI941572A7 (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenete lmä
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
CA2372813A1 (en) 1992-02-06 1993-08-19 L.L. Houston Biosynthetic binding protein for cancer marker
ATE191853T1 (de) 1992-07-27 2000-05-15 Us Health Zielgerichte liposome zur blut-hirne schranke
DK0752248T3 (da) 1992-11-13 2000-11-13 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimæriske og radioaktivt mærkede antistoffer mod humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantig
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
JPH11507538A (ja) 1995-06-07 1999-07-06 アテナ ニューロサイエンシズ インコーポレイティド β−セクレターゼ、β−セクレターゼに対する抗体、及びβ−セクレターゼ阻害を検出するためのアッセイ
US6329163B1 (en) 1995-06-07 2001-12-11 Elan Pharmaceuticals, Inc. Assays for detecting β-secretase inhibition
US5744346A (en) 1995-06-07 1998-04-28 Athena Neurosciences, Inc. β-secretase
US6221645B1 (en) 1995-06-07 2001-04-24 Elan Pharmaceuticals, Inc. β-secretase antibody
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
AU1684097A (en) 1996-12-11 1998-07-03 Athena Neurosciences, Inc. Beta-secretase isolated from human 293 cells
GB9701684D0 (en) 1997-01-28 1997-03-19 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
DK1034298T3 (da) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanisering af murint antistof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
DK1071700T3 (da) 1998-04-20 2010-06-07 Glycart Biotechnology Ag Glykosylerings-modifikation af antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellulær cytotoksicitet
US6699671B1 (en) 1998-09-24 2004-03-02 Pharmacia & Upjohn Company Alzheimer's disease secretase, APP substrates therefor, and uses therefor
US7115410B1 (en) 1999-02-10 2006-10-03 Elan Pharmaceuticals, Inc. β-secretase enzyme compositions and methods
US7456007B1 (en) 1998-12-31 2008-11-25 Elan Pharmaceuticals, Inc. β-secretase enzyme compositions and methods
PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2011-08-31 Genentech Inc Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
GB2364059B (en) 1999-02-10 2004-01-14 Elan Pharm Inc Beta-Secretase enzyme compositions and methods
WO2000058479A1 (en) 1999-03-26 2000-10-05 Amgen Inc. Beta secretase genes and polypeptides
CA2704600C (en) 1999-04-09 2016-10-25 Kyowa Kirin Co., Ltd. A method for producing antibodies with increased adcc activity
CA2374610A1 (en) 1999-06-28 2001-01-04 Jordan J. N. Tang Catalytically active recombinant memapsin and methods of use thereof
ES2248127T3 (es) 1999-10-04 2006-03-16 Medicago Inc. Metodo para regular la transcripcion de genes foraneos en presencia de nigtrogeno.
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
EP1229125A4 (en) 1999-10-19 2005-06-01 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING A POLYPEPTIDE
GB9924957D0 (en) 1999-10-21 1999-12-22 Smithkline Beecham Plc Novel treatment
US7514408B1 (en) 1999-12-02 2009-04-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. β-secretase enzyme compositions and methods
EP1240319A1 (en) 1999-12-15 2002-09-18 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
AU767394C (en) 1999-12-29 2005-04-21 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
JP2003531588A (ja) 2000-04-11 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 多価抗体とその用途
CA2410898A1 (en) 2000-07-19 2002-01-24 Pharmacia & Upjohn Company Substrates and assays for .beta.-secretase activity
US6514221B2 (en) 2000-07-27 2003-02-04 Brigham And Women's Hospital, Inc. Blood-brain barrier opening
WO2002025276A1 (en) * 2000-09-22 2002-03-28 Wyeth Crystal structure of bace and uses thereof
CA2953239A1 (en) 2000-10-06 2002-04-18 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Antibody composition-producing cell
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US20020157122A1 (en) * 2000-10-27 2002-10-24 Wong Philip C. Beta-secretase transgenic organisms, anti-beta-secretase antibodies, and methods of use thereof
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20030083299A1 (en) 2000-11-04 2003-05-01 Ferguson Ian A. Non-invasive delivery of polypeptides through the blood-brain barrier
CA2430013C (en) 2000-11-30 2011-11-22 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
US7601528B1 (en) 2000-12-23 2009-10-13 Elan Pharmaceuticals, Inc. Crystallization and structure determination of glycosylated human beta secretase, an enzyme implicated in alzheimer's disease
US7217556B1 (en) 2000-12-23 2007-05-15 Pfizer Inc Crystallization and structure determination of glycosylated human beta secretase, an enzyme implicated in Alzheimer's disease
WO2002053594A2 (en) 2000-12-28 2002-07-11 Oklahoma Medical Research Foundation Inhibitors of memapsin 2 and use thereof
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
US7384773B1 (en) 2001-05-10 2008-06-10 Pfizer Inc Crystal of HIV protease-cleaved human beta secretase and method for crystallization thereof
CA2448142A1 (en) 2001-05-22 2002-11-28 Merck & Co., Inc. Beta-secretase substrates and uses thereof
NZ571596A (en) 2001-08-03 2010-11-26 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
JP4547152B2 (ja) 2001-10-23 2010-09-22 オクラホマ メディカル リサーチ ファウンデーション β−セクレターゼ阻害剤および使用方法
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20030224512A1 (en) 2002-05-31 2003-12-04 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of beta-site APP-cleaving enzyme expression
EP1500400A4 (en) 2002-04-09 2006-10-11 Kyowa Hakko Kogyo Kk MEDICAMENT WITH ANTIBODY COMPOSITION
EP1498490A4 (en) 2002-04-09 2006-11-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION
ATE503829T1 (de) 2002-04-09 2011-04-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins
CA2481658A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Method of enhancing of binding activity of antibody composition to fcy receptor iiia
CA2481925A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia
BR0309145A (pt) 2002-04-09 2005-02-01 Kyowa Hakko Kogyo Kk Células das quais o genoma é modificado
US7166454B1 (en) 2002-05-24 2007-01-23 Schering Corporation Codon-optimized β-secretase and methods of refolding and processing
CA2488441C (en) 2002-06-03 2015-01-27 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP2305710A3 (en) * 2002-06-03 2013-05-29 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7314726B2 (en) 2002-10-15 2008-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Beta secretase exosite binding peptides and methods for identifying beta secretase modulators
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
JP4995423B2 (ja) 2002-12-03 2012-08-08 ブランシェット・ロックフェラー・ニューロサイエンスィズ・インスティテュート 物質を血液−脳関門を渡って輸送するための人工低密度リポタンパク質キャリア
TWI335821B (en) 2002-12-16 2011-01-11 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
WO2004065416A2 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
JP4739192B2 (ja) 2003-05-02 2011-08-03 イーラン ファーマスーティカルズ、インコーポレイテッド Ｂａｃｅのグリコシル化変異体
SG128680A1 (en) * 2003-07-22 2007-01-30 Crucell Holland Bv Binding molecules against sars-coronavirus and uses thereof
US20050106667A1 (en) * 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US7758859B2 (en) * 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20070185042A1 (en) 2003-08-08 2007-08-09 The Brigham And Women's Hospital, Inc. President And Fellows Of Harvard College Sirna based methods for treating alzheimer's disease
JPWO2005035586A1 (ja) 2003-10-08 2007-11-22 協和醗酵工業株式会社 融合蛋白質組成物
JPWO2005035778A1 (ja) 2003-10-09 2006-12-21 協和醗酵工業株式会社 α１，６−フコシルトランスフェラーゼの機能を抑制するＲＮＡを用いた抗体組成物の製造法
US20070149763A1 (en) 2003-10-15 2007-06-28 Bristol-Myers Squibb Company Beta secretase exosite binding peptides and methods for identifying beta secretase modulators
US9296820B2 (en) 2003-11-05 2016-03-29 Roche Glycart Ag Polynucleotides encoding anti-CD20 antigen binding molecules with increased Fc receptor binding affinity and effector function
WO2005045021A1 (en) * 2003-11-06 2005-05-19 Exonhit Therapeutics Sa Bace455, an alternative splice variant of the human beta-secretase
EP2478912B1 (en) 2003-11-06 2016-08-31 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates with anti-HER2 or anti-CD22 antibodies and their use in therapy
WO2005049802A2 (en) * 2003-11-14 2005-06-02 Massachusetts Institute Of Technology Anti-hydroxylase antibodies and uses thereof
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
EP1740615B1 (en) 2004-03-31 2014-11-05 Genentech, Inc. Humanized anti-tgf-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
PT1737891E (pt) 2004-04-13 2013-04-16 Hoffmann La Roche Anticorpos anti p-selectina
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
DK1791565T3 (en) 2004-09-23 2016-08-01 Genentech Inc Cysteingensplejsede antibodies and conjugates
US20080220445A1 (en) 2004-10-01 2008-09-11 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method of Screening Transmembrane Enzyme Inhibitory Substance
US20060147451A1 (en) * 2004-10-04 2006-07-06 Genentech, Inc. Modulators of hepatocyte growth factor activator
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
CA2618508A1 (en) 2005-08-10 2007-02-22 Oklahoma Medical Research Foundation Truncated memapsin 2 for use for treating alzheimer's disease
ES2577292T3 (es) 2005-11-07 2016-07-14 Genentech, Inc. Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso
UA96139C2 (uk) * 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитіло до нейропіліну-1 (nrp1)
EP1973951A2 (en) 2005-12-02 2008-10-01 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
BRPI0706840A2 (pt) * 2006-01-05 2011-04-05 Genentech Inc anticorpos anti- ephb4 isolado polinucleotìdeo, vetor, célula hospedeira, método para produção de um anticorpo anti ephb4, método para produção de um imunoconjugado anti ephb4, método para a detecção de ephb4, método para diagnosticar um distúrbio composição, método para inibir a angiogênese, método para tratar um cáncer, tumor e/ou distúrbio da proliferação celular e uso de um anticorpo
SI1976884T1 (sl) * 2006-01-20 2013-04-30 Genetech, Inc. Anti-efrinB2 protitelesa in postopki uporabe le teh
TW200812616A (en) 2006-05-09 2008-03-16 Genentech Inc Binding polypeptides with optimized scaffolds
EP2032606B1 (en) 2006-05-30 2013-11-27 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
BRPI0717638A2 (pt) 2006-10-27 2013-11-12 Genentech Inc Anticorpors e imunoconjugados e usos para os mesmos
US20100047232A1 (en) * 2006-11-14 2010-02-25 Jasvinder Atwal Modulators of neuronal regeneration
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
MX2009008430A (es) * 2007-02-09 2009-10-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-robo4 y sus usos.
JP5394246B2 (ja) * 2007-03-30 2014-01-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及びイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
WO2008129023A2 (en) 2007-04-19 2008-10-30 Vib Vzw Oligonucleotide compositions for the treatment of alzheimer's disease
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
JP6157046B2 (ja) 2008-01-07 2017-07-05 アムジェン インコーポレイテッド 静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を用いた抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための方法
ES2447844T3 (es) 2008-04-03 2014-03-13 Vib Vzw Anticuerpos de dominio individual capaces de modular la actividad BACE1
WO2009155609A1 (en) * 2008-06-20 2009-12-23 Oklahoma Medical Research Foundation IMMUNOGENIC MEMAPSIN 2 β-SECRETASE PEPTIDES AND METHODS OF USE
TW201019959A (en) * 2008-08-19 2010-06-01 Regeneron Pharma Human antibodies to human RANKL
US8790642B2 (en) * 2008-08-29 2014-07-29 Genentech, Inc. Cross-reactive and bispecific anti-IL-17A/F antibodies
US20100233156A1 (en) 2009-03-09 2010-09-16 Georgetown University Treating Central Nervous System Injury with Beta and Gamma Secretase Inhibitors
WO2010146058A1 (en) * 2009-06-15 2010-12-23 Vib Vzw Bace1 inhibitory antibodies
WO2012064836A1 (en) 2010-11-10 2012-05-18 Genentech, Inc. Methods and compositions for neural disease immunotherapy
CA2818173C (en) 2010-11-30 2022-05-03 Genentech, Inc. Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor
RU2013150331A (ru) 2011-04-20 2015-05-27 Рош Гликарт Аг СПОСОБ И УСТРОЙСТВА ДЛЯ рН-ЗАВИСИМОГО ПРОХОЖДЕНИЯ ГЕМАТОЭНЦЕФАЛИЧЕСКОГО БАРЬЕРА
WO2013177062A2 (en) 2012-05-21 2013-11-28 Genentech, Inc. Methods for improving safety of blood-brain barrier transport

Also Published As

Publication number Publication date
JP6163429B2 (ja) 2017-07-12
IL226106A0 (en) 2013-06-27
ZA201302980B (en) 2014-07-30
US9453079B2 (en) 2016-09-27
US8772457B2 (en) 2014-07-08
EP2638070B1 (en) 2016-10-19
SG190682A1 (en) 2013-07-31
CO6690815A2 (es) 2013-06-17
EP3176184B1 (en) 2020-02-19
PH12013500933A1 (en) 2017-08-23
WO2012064836A1 (en) 2012-05-18
JP2014502150A (ja) 2014-01-30
CN103228674A (zh) 2013-07-31
MX346500B (es) 2017-03-22
WO2012064836A9 (en) 2012-07-05
JP2017137312A (ja) 2017-08-10
EP2638070A1 (en) 2013-09-18
ECSP13012673A (es) 2013-08-30
KR20130133205A (ko) 2013-12-06
EP3176184A1 (en) 2017-06-07
TW201300417A (zh) 2013-01-01
MA34722B1 (fr) 2013-12-03
PE20140238A1 (es) 2014-03-07
US9879094B2 (en) 2018-01-30
US20120148599A1 (en) 2012-06-14
US20140286963A1 (en) 2014-09-25
EA201390669A1 (ru) 2013-11-29
CL2013001290A1 (es) 2013-11-15
AR083819A1 (es) 2013-03-27
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AU2011326564A1 (en) 2013-05-09
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