ES2614816T3 - Método para la detección de mutaciones KRAS - Google Patents

Método para la detección de mutaciones KRAS Download PDF

Info

Publication number
ES2614816T3
ES2614816T3 ES12813839.3T ES12813839T ES2614816T3 ES 2614816 T3 ES2614816 T3 ES 2614816T3 ES 12813839 T ES12813839 T ES 12813839T ES 2614816 T3 ES2614816 T3 ES 2614816T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
seq
amplification
primers
arms
gly12cys
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES12813839.3T
Other languages
English (en)
Inventor
Maria Luisa Villahermosa Jaen
Juan Moscoso Del Prado
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genomica SA
Original Assignee
Genomica SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genomica SA filed Critical Genomica SA
Application granted granted Critical
Publication of ES2614816T3 publication Critical patent/ES2614816T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/5753—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer of the stomach or small intestine

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Un metodo para detectar una o mas mutaciones KRAS seleccionadas de Gly12Ser, Gly12Arg, Gly12Cys, Gly12Asp, Gly12Ala, Gly12Val, Gly13Asp, Gln61His yGln61Leu en una muestra de ensayo que comprende acido nucleico, comprendiendo dicho metodo someter la muestra a amplificacion con una mezcla que comprende uno o mas cebadores ARMS seleccionados de SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO. 16, SEQ ID NO: 17 y SEQ ID NO: 18, respectivamente, comprendiendo ademas la mezcla de amplificacion uno o mas cebadores de amplificacion.

Description

imagen1
imagen2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Sumario de la invención
El problema que se resuelve con la presente invención es proporcionar un método alternativo a los inconvenientes existentes en el estado de la técnica, para la detección de una cualquiera de las 9 mutaciones KRAS Gly12Ser, Gly12Arg, Gly12Cys, Gly12Asp, Gly12Ala, Gly12Val, Gly13Asp, Gln61His y Gln61Leu, presentes en una muestra, resolviéndose la falta de especificidad de los métodos de la técnica anterior. El método descrito en el presente documento permite detectar específicamente cualquiera de las mutaciones KRAS mencionadas presentes en una muestra, al tiempo que proporciona unos valores de sensibilidad iguales o superiores a los de los métodos del estado de la técnica.
La solución que se aplica en los diferentes métodos y aspectos de la invención descritos en el presente documento se basa en la amplificación ARMS (sistema de mutación refractario a la amplificación, método para detectar mutaciones puntuales basado en el principio de sensibilización específica de alelo de amplificación por PCR) de una
o más de las 9 mutaciones KRAS Gly12Ser, Gly12Arg, Gly12Cys, Gly12Asp, Gly12Ala, Gly12Val, Gly13Asp, Gln61His y Gln61Leu presentes en una muestra, con uno o más cebadores ARMS del grupo que consiste en SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 y SEQ ID NO: 18, como cebadores de mutaciones KRAS Gly12Ser, Gly12Arg, Gly12Cys, Gly12Asp, Gly12Ala, Gly12Val, Gly13Asp, Gln61His y Gln61Leu, respectivamente.
Los cebadores ARMS comprenden una secuencia específica de diana 3’ seleccionada de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, y SEQ ID NO:9, respectivamente, comprendiendo además cada cebador una secuencia etiqueta 5’ no específica de diana de 17 a 30 nucleótidos que se utiliza para detección.
Los correspondientes cebadores ARMS específicos para las 9 mutaciones KRAS Gly12Ser, Gly12Arg, Gly12Cys, Gly12Asp, Gly12Ala, Gly12Val, Gly13Asp, Gln61His y Gln61Leu se pueden describir tal como se indica en la tabla 1.
Tabla 1
5’ etiqueta1-CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGCGCTA 3’, 5’ etiqueta2-CGTCAAGGCACTCTTGCCTACGACACG 3’, 5’ etiqueta3-CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGATT 3’, 5’ etiqueta4-CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCCGA 3’, 5’ etiqueta5-CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGCAGATGC 3’, 5’ etiqueta6-CGTCAAGGCACTCTTGCCTACGGCAA 3’ 5’ etiqueta7-CTGAATATAAACTTGTGGTAGTTGGAGCTGGGGA 3’ 5’ etiqueta8-TGGTCCCTCATTGCACTGTACTCCACA 3’ 5’ etiqueta9-GATATTCTCGACACAGCAGTTCT 3’.
La etiqueta1, etiqueta2, etiqueta3, etiqueta4, etiqueta5, etiqueta6, etiqueta7, etiqueta8 y etiqueta9, que se localizan en la posición 5’ de los cebadores ARMS, representan las secuencias de nucleótido no específicas de diana, siendo todas diferentes entre sí. Asimismo, las secuencias específicas de diana 3’ se designan de acuerdo con el método de amplificación ARMS.
A lo largo de toda la presente memoria descriptiva de patente, estos cebadores de amplificación específicos de mutación designados de acuerdo con el método de amplificación ARMS, se denominarán “cebadores ARMS”. Adicionalmente, el cebador o cebadores que se combinan con cebadores ARMS para la amplificación de ADN diana, que también reciben el nombre de cebadores comunes, se denominarán “cebadores de amplificación”. Estos últimos pueden ser directos o inversos, dependiendo de si los cebadores ARMS son inversos o directos, respectivamente.
La diferencia entre los cebadores ARMS de la presente invención y los del documento WO 2010/048691 es la longitud del fragmento específico de diana 3’, complementario de la secuencia diana de la mutación KRAS que se ha de detectar. Según esto, los cebadores ARMS de la presente invención presentan fragmentos específicos de diana 3’ de las siguientes longitudes: 34 nt (SEQ ID NO: 16), 31 nt (SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14), 30 nt (SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 12), 27 nt (SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO:17), 26 nt (SEQ ID NO: 15), y 23 nt (SEQ ID NO: 18). En cambio, todos los fragmentos específicos de diana 3’ de los cebadores ARMS del documento WO 2010/048691 tienen una longitud de 19 a 21 nt, la mayoría de ellos una longitud de 20 nt.
La amplificación con cebadores ARMS de la presente invención permite aplicar unas condiciones de ciclo térmico que comprenden una “temperatura de hibridación” en el intervalo de 60 a 64 ºC, preferiblemente de 62 ºC, que es más alta que la “temperatura de hibridación” de 54 ºC del documento WO 2010/048691. La amplificación a esta temperatura de amplificación más alta potencia la especificidad de detección, ya que cada cebador se hibridará solamente con su secuencia diana. En cambio, a temperaturas de hibridación más bajas es inevitable la unión no específica de los cebadores a diferentes mutaciones Los datos de especificidad de los cebadores de la presente invención están comprendidos todos ellos entre 98,5 y 100 %.
4
imagen3
imagen4
imagen5
imagen6
imagen7
Preferiblemente, de acuerdo con los diferentes aspectos de la invención, se utiliza un cebador de amplificación que comprende SEQ ID NO: 19, siendo lo más preferible, utilizar un cebador que consiste en la secuencia SEQ ID NO: 19 en combinación con uno o más cebadores ARMS de SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 13 y SEQ ID NO: 16.
5 Asimismo, preferiblemente se utiliza un cebador de amplificación que comprende la SEQ ID NO: 20, siendo lo más preferible un cebador que consiste en la secuencia SEQ ID NO: 20 en combinación con uno o dos de los cebadores ARMS SEQ ID NO: 12 y SEQ ID NO: 14.
Asimismo, preferiblemente, se utiliza un cebador de amplificación que comprende la SEQ ID NO: 21, siendo lo más
10 preferible un cebador que consiste en la secuencia SEQ ID NO: 21 en combinación con uno o dos de los cebadores ARMS SEQ ID NO: 11 y SEQ ID NO: 15.
Asimismo, se utiliza un cebador de amplificación que comprende la SEQ ID NO: 22, siendo lo más preferible un cebador que consiste en la secuencia SEQ ID NO: 22 en combinación con un cebador de SEQ ID NO: 17.
15 Además, se utiliza un cebador de amplificación que comprende SEQ ID NO: 23, siendo lo más preferible, un cebador que consiste en la secuencia SEQ ID NO: 23 en combinación con el cebador ARMS de SEQ ID NO: 18.
En un aspecto preferible, cualquier sonda específica para la detección de cualquiera de las mutaciones KRAS
20 Gly12Ser, Gly12Arg, Gly12Cys, Gly12Asp, Gly12Ala, Gly12Val, Gly13Asp, Gln61His y Gln61Leu tiene una longitud de 17 a 39 nucleótidos, siendo la región que se hibrida específicamente con el correspondiente producto ARMS en la región correspondiente a etiqueta1, etiqueta2, etiqueta3, etiqueta4, etiqueta5, etiqueta6, etiqueta7, etiqueta8 o etiqueta9 de entre 17 y 30 nucleótidos. Cada sonda puede comprender nucleótidos adicionales, tanto en el extremo 5’ y/o como el extremo 3’, hasta la longitud total comprendida entre 17 y 39 nucleótidos.
25 Preferiblemente, Las sondas específicas para la detección de mutaciones KRAS Gly12Ser, Gly12Arg, Gly12Cys, Gly12Asp, Gly12Ala, Gly12Val, Gly13Asp, Gln61His y Gln61Leu comprenden las secuencias de nucleótido de SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 y SEQ ID NO: 31 y SEQ ID NO: 32, respectivamente.
30 En la Tabla 2 se presentan las sondas más preferibles para cada una de las mutaciones KRAS.
Mutación KRAS
Secuencia de sonda Nombre de sonda SEQ ID NO:
Gly12Ser
GCTTGCCCCGGGGAAGGATAATTAATTAAT S-34 A7.2 33
Gly12Ser
CCCCGGGGAAGGATAATTAATTAAT S-34 A7.4 34
Gly12Arg
TTCGCCGGGTTACCCGGGAATATTGAGGCTGCAGC S-34 C13.2 35
Gly12Arg
CGGGTTACCCGGGAATATTGAGGCTGCAGC S-34 C13.4 36
Gly12Cys
GGCTAGCTAGCCGCGGTAGCTGAAT S-34 T18.5 37
Gly12Cys
CGAGGCCTTGGCCGGCTAGCTAGCCGCGGTAGCTGAAT S-34 T18.6 38
Gly12Cys
CGAGGCCTTGGCCGGCTAGCTAGCCGCGGTAG S-34T18.7 39
Gly12Cys
CCTTGGCCGGCTAGCTAGCCGCGGTAGCTGAAT S-34 T18.8 40
Gly12Cys
CCTTGGCCGGCTAGCTAGCCGCGGTAG S-34 T18.9 41
Gly12Asp
GCTTGCCCCGGGGCGGTATTTGGGCAACCTG S-34 A7.6 42
Gly12Asp
CCCCGGGGCGGTATTTGGGCAACCTG S-34 A7.7 43
Gly12Ala
GAATCCATGTGATGACTTG S-35 C3 44
Gly12Ala
GAATCCATGTGATGACTTGACTTG S-35 C4 45
Gly12Ala
CGGGTTACCCGGGAGTCTCGAATCCATGTGATGACTTG S-35 C5 46
Gly12Ala
CGGGTTACCCGGGGAATCCATGTGATGACTTG S-35 C6 47
Gly12Val
TCAGGCGGCCAGGATGGAGCTGAAT S-34 C13.5 48
Gly12Val
CGGGTTACCCGGGTCAGGCGGCCAGGATGGAG S-34 C13.7 49
Gly13Asp
CCGAGACGTTCGACACTGCCTGAAT S-38 A2 50
Gln61His
CGGGTTACCCGGGTTAGGCTCTGAACTCGGCGT S-61 H3 51
Gln61His Gln61Leu Gln61Leu
CGGGTTACCCGGGAGTCTCTTAGGCTCTGAACTCGGCGT CGGGTTACCCGGGGGCCACTTACCGGGATCCA CGGGTTACCCGGGAGTCTCGGCCACTTACCGGGATCCA S-61 H4 S-61 L1 S-61 L2 52 53 54
10
imagen8
imagen9
imagen10
imagen11
imagen12
imagen13
imagen14

Claims (1)

  1. imagen1
    imagen2
ES12813839.3T 2011-12-23 2012-12-20 Método para la detección de mutaciones KRAS Active ES2614816T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11382397.5A EP2607495A1 (en) 2011-12-23 2011-12-23 Method for detection of KRAS mutations
EP11382397 2011-12-23
PCT/EP2012/076350 WO2013092839A1 (en) 2011-12-23 2012-12-20 Method for detection of kras mutations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2614816T3 true ES2614816T3 (es) 2017-06-02

Family

ID=47557082

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES12813839.3T Active ES2614816T3 (es) 2011-12-23 2012-12-20 Método para la detección de mutaciones KRAS

Country Status (6)

Country Link
US (1) US10023904B2 (es)
EP (2) EP2607495A1 (es)
BR (1) BR112014014843A2 (es)
CA (1) CA2860241A1 (es)
ES (1) ES2614816T3 (es)
WO (1) WO2013092839A1 (es)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2625288T3 (es) 2011-04-15 2017-07-19 The Johns Hopkins University Sistema de secuenciación segura
DK2890814T3 (da) * 2012-08-30 2019-12-16 Gen Probe Inc Flerfaset nukleinsyreamplificering
AU2013338393C1 (en) 2012-10-29 2024-07-25 The Johns Hopkins University Papanicolaou test for ovarian and endometrial cancers
US11286531B2 (en) 2015-08-11 2022-03-29 The Johns Hopkins University Assaying ovarian cyst fluid
IL319255A (en) 2017-08-07 2025-04-01 Univ Johns Hopkins Methods and materials for cancer assessment and treatment
GB201801255D0 (en) * 2018-01-25 2018-03-14 Univ Nottingham Detection of mutant nucleic acid sequences
CN108220444A (zh) * 2018-02-28 2018-06-29 无锡禾盛医疗器械有限公司 一种kras基因突变检测的引物探针组合及其应用
JP2023513606A (ja) 2020-02-14 2023-03-31 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 核酸を評価するための方法および材料

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE61148B1 (en) 1988-03-10 1994-10-05 Ici Plc Method of detecting nucleotide sequences
GB9715034D0 (en) 1997-07-18 1997-09-24 Zeneca Ltd Assay
GB9902971D0 (en) * 1999-02-11 1999-03-31 Zeneca Ltd Assay
US6506594B1 (en) * 1999-03-19 2003-01-14 Cornell Res Foundation Inc Detection of nucleic acid sequence differences using the ligase detection reaction with addressable arrays
US7560542B2 (en) * 1999-05-07 2009-07-14 Monsanto Technology Llc Nucleic acid molecule SEQ ID NO. 68811 and other molecules associated with plants
WO2006061994A1 (ja) * 2004-12-08 2006-06-15 Takeshi Yamamoto 遺伝子配列検査法
WO2010048691A1 (en) * 2008-10-28 2010-05-06 British Columbia Cancer Agency Branch Multiplex genotyping assay for detecting mutations in k-ras
EP3249053A1 (en) * 2009-03-27 2017-11-29 Life Technologies Corporation Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants

Also Published As

Publication number Publication date
CA2860241A1 (en) 2013-06-27
BR112014014843A2 (pt) 2018-09-18
US20160068893A1 (en) 2016-03-10
US10023904B2 (en) 2018-07-17
EP2607495A1 (en) 2013-06-26
EP2794919A1 (en) 2014-10-29
WO2013092839A1 (en) 2013-06-27
EP2794919B1 (en) 2016-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2614816T3 (es) Método para la detección de mutaciones KRAS
Hoffmann et al. Riems influenza a typing array (RITA): An RT-qPCR-based low density array for subtyping avian and mammalian influenza a viruses
ES2690753T3 (es) Aumento de la confianza en las identificaciones de alelos con el recuento molecular
JP7332733B2 (ja) 次世代シークエンシングのための高分子量ｄｎａサンプル追跡タグ
ES2385828T3 (es) Sondas, bibliotecas y kits para análisis de mezclas de ácidos nucleicos y procedimientos para construirlos
ES2963242T3 (es) Conjunto de sondas para analizar una muestra de ADN y método para utilizar el mismo
CN103937896B (zh) 一种snp分型方法及试剂盒
Rajalakshmi DIFFERENT TYPES OF PCR TECHNIQUES AND ITS APPLICATIONS.
Kretschy et al. Comparison of the sequence-dependent fluorescence of the cyanine dyes Cy3, Cy5, DyLight DY547 and DyLight DY647 on single-stranded DNA
WO2018184531A1 (zh) 腹泻相关病原体多重rt-pcr联合基因芯片检测试剂盒
JP2016537990A5 (es)
ES2664335T3 (es) Método para detectar ADN de Helicobacter pylori en una muestra de heces
ES2672122T3 (es) Método para la detección de un ácido nucleico diana
CN104328190A (zh) 一种定量检测混合型样品物种组成的pcr产物熔点分析法
Chen et al. High-throughput sex identification by melting curve analysis in blue-breasted quail and chicken
US20180187273A1 (en) Universal Priming Mixture for Amplification of Influenza Viral Gene Segments for Diagnostic Applications
Margulis et al. Rapid and sensitive detection of repetitive nucleic acid sequences using magnetically modulated biosensors
Alvarez et al. A broad spectrum, one-step reverse-transcription PCR amplification of the neuraminidase gene from multiple subtypes of influenza A virus
Miura et al. Post-bisulfite adaptor tagging for PCR-free whole-genome bisulfite sequencing
Nie et al. A simple and rapid method for fish sex identification based on recombinase-aided amplification and its use in Cynoglossus semilaevis
WO2019133727A1 (en) Universal influenza virus probe set for enrichment of any influenza virus nucleic acid
Luo et al. Quantitatively profiling genome-wide patterns of histone modifications in Arabidopsis thaliana using ChIP-seq
Connolly et al. Rapid DNA detection by beacon-assisted detection amplification
Kwon et al. Rapid subtyping and pathotyping of avian influenza virus using chip-based RT-PCR
CN110546273A (zh) 通过衔接子序列定量ngs dna